一种具有广谱杀菌作用的复方杀菌剂
阅读：825发布：2020-05-11
专利汇可以提供一种具有广谱杀菌作用的复方杀菌剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种具有抑菌或杀菌活性的复方 杀菌剂 。其成分组成及各成分的重量百分比含量分别为：芳樟醇40％-50％，松油醇18％-25％，香叶醇8％-15％，β-环柠檬 醛 2％-4％，橙花醇2.5％-5％，月桂烯1-3％，罗勒烯1-3％，紫罗兰 酮 3-6％，2H-β-紫罗兰酮5-8％。抗菌抑菌药敏试验表明，这种基于天然精油成分人工配制的杀菌剂具有对细菌和 真菌 的广谱性抑制作用。杀菌剂具有对细菌(大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等)和真菌(白色念珠菌、申克孢子丝菌、红色毛癣菌、酿酒 酵母 等)的抑菌杀菌作用，特别对人畜共患菌效果明显。这种杀菌剂可以应用于人畜共患菌感染和其它消杀产品的开发。，下面是一种具有广谱杀菌作用的复方杀菌剂专利的具体信息内容。
1.一种复方杀菌剂，由包括下述组分的原料制成：芳樟醇，松油醇，香叶醇，β-环柠檬醛，橙花醇，月桂烯，罗勒烯，紫罗兰酮，2H-β-紫罗兰酮。
2.根据权利要求1所述的复方杀菌剂，其特征在于：所述复方杀菌剂中，各成分的重量百分比含量分别为：芳樟醇40％-50％，松油醇18％-25％，香叶醇8％-15％，β-环柠檬醛
2％-4％，橙花醇2.5％-5％，月桂烯1-3％，罗勒烯1-3％，紫罗兰酮3-6％，2H-β-紫罗兰酮5-
8％。
3.权利要求1或2所述的复方杀菌剂在抑制和杀灭细菌和真菌中的应用。
4.权利要求1或2所述的复方杀菌剂在制备抑制和杀灭细菌和真菌产品中的应用。
5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：所述细菌为：表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。
6.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：所述真菌为：白色念珠菌、酿酒酵母、红色毛癣菌和申克孢子丝菌。
7.一种用于消杀人畜共患菌及人畜致病菌的试剂，所述试剂为权利要求1或2所述的复方杀菌剂，或含有权利要求1或2所述的复方杀菌剂。
一种具有广谱杀菌作用的复方杀菌剂
技术领域
[0001] 本发明属于日用化学产品制造领域，具体涉及一种具有广谱杀菌作用的复方杀菌剂。
背景技术
[0002] 由于微生物的变异、人类生活环境的改变以及某些宿主自身变化等因素的影响,细菌、真菌和病毒等病原微生物所致的感染性疾病迄今仍在严重威胁着人类的健康,其中有些难以彻底控制。据统计,全世界每年死于微生物感染的患者约有1600万人,约占死亡患者总数的1/3。细菌和真菌在自然界中无处不在，其中大部分对人类直接或间接有益，但也有少数种属对环境、人类和动物有害。近年来，随着人们生活水平的提高，宠物等伴侣动物逐渐走入人们的生活当中，数量大幅增加，在给人类带来欢乐的同时也带来人畜共患病的威胁。据有关资料统计，目前全世界已证实的200余种动物传染病中，有半数以上可以传染给人类，包括细菌病、真菌病、病毒病、立克次氏体病、原虫病和寄生虫病等几类，已知在我国存在并流行的人畜共患病中已证实的约有90种。随着宠物事业的发展，宠物与人类的关系日益密切，人畜共患病严重威胁到人类的身体健康及社会公共卫生状况。目前，用于临床的抗生素及化学合成抗菌药物虽然不少,但耐药菌株日趋增多,且由于易引起过敏或不良反应较大等原因，某些药物在临床应用受到限制，同时有些抗细菌感染的抗生素不能有效抑制真菌。自1987年以来，近三十年的时间里，没有发现新的抗生素种类问世。为了对抗微生物感染，人类急需寻找一种高效低毒的杀菌剂。
[0003] 化学药剂可以抑制或杀死微生物，因而被用于微生物生长的控制。依作用性质可将化学药剂分为杀菌剂和抑菌剂。杀菌剂是能破坏细菌代谢机能并有致死作用的化学药剂。抑菌剂并不破坏细菌的原生质，而只是阻抑新细胞物质的合成，使细菌不能增殖，如磺胺类及抗生素等。杀菌剂主要用于抑制或杀灭物体表面、器械、排泄物和周围环境中的微生物。抑菌剂常用于机体表面，如皮肤、黏膜、伤口等处防止感染，也有的用于食品、饮料、药品的防腐作用。
[0004] 理想的化学杀菌剂和抑菌剂应当具有作用快、效力高、对组织损伤小、穿透性强但腐蚀小、配制方便且稳定和价格低廉等特点。但真正完全符合上述要求的化学药剂很少。近10多年的研究表明，部分植物精油具有强烈的抑制或杀死细菌和真菌等微生物的特性。植物精油属于天然、绿色、无残留物质，具有来源广泛、抗菌谱广、作用迅速、不易产生耐药性等特点。植物精油可作为一种有待开发的新型杀菌物质进行研究。但是天然精油在生产上成本高，无法在消杀产品中应用。我们通过研究植物精油发现其部分成分具有抑菌杀菌的作用，因此发明了一种具有广谱杀菌作用的复方杀菌剂。
发明内容
[0005] 本发明的目的是提供一种复方杀菌剂。
[0007] 所述复方杀菌剂中，各成分的重量百分比含量分别为：芳樟醇40％-50％，松油醇18％-25％，香叶醇8％-15％，β-环柠檬醛2％-4％，橙花醇2.5％-5％，月桂烯1-3％，罗勒烯
1-3％，紫罗兰酮3-6％，2H-β-紫罗兰酮5-8％。
1-3％，紫罗兰酮3-6％，2H-β-紫罗兰酮5-8％。
[0008] 具体地，所述复方杀菌剂，其成分组成及各成分的重量百分比含量分别为：芳樟醇45％，松油醇18％，香叶醇8％，β-环柠檬醛3％，橙花醇3％，月桂烯1％，罗勒烯1％，紫罗兰酮4％，2H-β-紫罗兰酮6％。
[0009] 上述复方杀菌剂在抑制和杀灭细菌和真菌中的应用或其在制备抑制和杀灭细菌和真菌产品中的应用也属于本发明的保护范围。
[0010] 所述细菌具体可为：表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌，优选为表皮葡萄球菌和枯草芽孢杆菌。
[0012] 本发明还提供一种用于消杀人畜共患菌及人或动物感染的其它致病菌的试剂，所述试剂为上述杀菌剂或含有上述杀菌剂。
[0013] 本发明根据精油中的有效杀菌成分，配制了一种复方杀菌剂。试验表明这种杀菌剂具有广谱杀菌和抑菌功效，对细菌(大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等)和真菌(白色念珠菌、申克孢子丝菌、红色毛癣菌、酿酒酵母等)具有显著的抑菌杀菌作用，特别对人畜共患菌(申克孢子丝菌、红色毛癣菌和白色念珠菌等)效果明显。这种杀菌剂可用于消杀品和人畜共患试剂的开发应用。附图说明
[0014] 图1为本发明的复方杀菌剂对八种菌的抑菌圈示意图。A大肠杆菌；B枯草芽孢杆菌；C金黄色葡萄球菌；D表皮葡萄球菌；E白色念珠菌；F酿酒酵母；G申克孢子丝菌；H红色毛癣菌。氨苄青霉素起始浓度为100mg/ml；两性霉素B起始浓度为100mg/ml；(1:60)代表稀释60倍；(1:5)代表稀释5倍；(1:2000)代表稀释2000倍；(0)代表未经稀释；滤纸片直径为6mm；
抑菌圈直径7-9mm为低敏感；10-15mm为中敏感；>15mm为高度敏感；<6mm为不敏感。
抑菌圈直径7-9mm为低敏感；10-15mm为中敏感；>15mm为高度敏感；<6mm为不敏感。
[0015] 图2为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌和酿酒酵母被本发明复方杀菌剂处理后，在波长600nm时的吸光度值。**代表极显著；*代表显著；“Amp”代表氨苄青霉素；“Amphotericin b”代表两性霉素B。
[0016] 图3为本发明的复方杀菌剂对申克孢子丝菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)图。其中A为DMSO处理；B为0.005％复方杀菌剂处理；C为0.025％复方杀菌剂处理；D为0.05％复方杀菌剂处理；E为0.1％复方杀菌剂处理；F为0.125％复方杀菌剂处理；G为0.25％复方杀菌剂处理；H为0.4％复方杀菌剂处理。
[0017] 图4为本发明的复方杀菌剂对红色毛癣菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)图。其中A为DMSO处理；B为0.005％复方杀菌剂处理；C为0.025％复方杀菌剂处理；D为0.05％复方杀菌剂处理；E为0.1％复方杀菌剂处理；F为0.125％复方杀菌剂处理；G为
0.25％复方杀菌剂处理；H为0.4％复方杀菌剂处理。
0.25％复方杀菌剂处理；H为0.4％复方杀菌剂处理。
具体实施方式
[0018] 下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。
[0019] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、生物材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0020] 实施例1、复方杀菌剂的抑菌活性研究
[0021] 步骤1、复方杀菌剂的配方
[0022] 我们根据植物精油的主要成分配制了系列复方杀菌剂。经过抗菌抑菌药敏试验，我们确定了最佳的复方杀菌剂配方。
[0023] 所述复方杀菌剂由下述重量百分含量的成分组成：芳樟醇40％-50％，松油醇18％-25％，香叶醇8％-15％，β-环柠檬醛2％-4％，橙花醇2.5％-5％，月桂烯1-3％，罗勒烯
1-3％，紫罗兰酮3-6％，2H-β-紫罗兰酮5-8％。具体成分组成如表1所示。
1-3％，紫罗兰酮3-6％，2H-β-紫罗兰酮5-8％。具体成分组成如表1所示。
[0024] 表1复方杀菌剂的成分组成
[0025]
[0026]
[0027] 步骤2、复方杀菌剂的抑菌活性测定
[0028] 2.1培养基的制备
[0029] 细菌培养采用LB培养基：配制每升培养基，应该在950ml去离子水中加入：胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，摇动容器直至溶质溶解。用1mol/L NaOH调pH至7.0，定容到1000ml。分装后于121℃高压蒸汽灭菌20min。固体培养基：在液体培养基的基础上加入15g琼脂粉，分装后121℃高压蒸汽灭菌20min。
[0030] 真菌培养采用YPD培养基：溶解酵母提取物10g，蛋白胨20g于900ml水中,如制平板需加入20g琼脂粉。分装后于高压蒸汽121℃下灭菌20min，用时在加入100ml配制好的20％葡萄糖溶液。
[0031] 底层琼脂：将配好的相应菌的固体培养基融化，倒入无菌的10cm平板中，每个平板约20～25ml，待其凝固备用。
[0033] 含药琼脂平板制备：根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解的琼脂内，并在45～50℃水浴中平衡琼脂，充分混匀倾倒灭菌平皿内，琼脂厚度3～4mm。通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。
[0034] 2.2菌悬液制备
[0035] 将储存在4℃冰箱中的细菌，用固体斜面培养基进行活化，将活化后的菌种转移到营养液体培养基中进行进一步的培养，将菌液稀释并校正至0.5麦氏标准浓度，此时菌液的8
浓度约为1.5×10CFU/mL备用。
浓度约为1.5×10CFU/mL备用。
[0036] 2.3复方杀菌剂的制备
[0037] 芳樟醇45％，松油醇18％，香叶醇8％，β-环柠檬醛3％，橙花醇3％，月桂烯1％，罗勒烯1％，紫罗兰酮4％，2H-β-紫罗兰酮6％。
[0038] 复方杀菌剂是由几种不同的化学试剂根据天然精油成分复合调制而成(杀菌剂为2.3中制备的复方杀菌剂)。
[0039] 用DMSO(二甲基亚砜)溶液做阴性对照，抗生素(氨苄青霉素、两性霉素B)做阳性对照。
[0040] 2.4抑菌活性的测定
[0041] 采用滤纸片琼脂平板扩散法：取直径为6mm的圆形小滤纸片，分别向小滤纸片中央滴加6μl的复方杀菌剂和对照溶液(DMSO为阴性对照、抗生素为阳性对照)，静止几分钟待滤纸片完全润湿后，等间距放入制备好的带菌平板上。采用十字交叉法以游标卡尺测量抑菌圈直径，每个处理三次重复。抑菌圈示意图如图1所示，具体数值如表2所示。
[0042] 表2复方杀菌剂对供试菌的抑菌圈直径大小(mm)
[0043]
[0044] 氨苄青霉素起始浓度为100mg/ml；两性霉素B起始浓度为100mg/ml；(1:60)代表稀释60倍；(1:5)代表稀释5倍；(1:2000)代表稀释2000倍；(0)代表未经稀释；“-”代表没有以其做对照；滤纸片直径为6mm；抑菌圈直径7-9mm为低敏感；10-15mm为中敏感；>15mm为高度敏感；<6mm为不敏感。
[0045] 结果显示：从细菌的抑菌圈直径大小，可以发现表皮葡萄球菌对杀菌剂高度敏感，枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌对杀菌剂中度敏感，大肠杆菌对杀菌剂低度敏感。从真菌的抑菌圈直径大小可以发现，白色念珠菌、酿酒酵母、和红色毛癣菌对杀菌剂高度敏感，申克孢子丝菌对杀菌剂中度敏感。
[0046] 步骤4、复方杀菌剂的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度测定
[0047] 4.1最低抑菌浓度(MIC)的测定
[0048] (1)实验原理
[0049] 细菌在一定的PH值和温度条件下，可以在营养肉汤中生长并使其变浑浊。若在其中同时加入抑菌试剂，则抑菌试剂可以抑制细菌的生长，使营养肉汤保持澄清透明。
[0050] (2)方法
[0051] 在一定范围内，菌的悬液中菌浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。所以在600nm下通过全波长酶标仪分析在不同浓度(0.4％、0.25％、0.125％、0.1％、0.05％、0.025％、0.005％μl/ml)处理下菌的光密度，以此来作为菌浓度生长的标准，进一步确定最低抑菌浓度(MIC)。
[0052] 4.2最低杀菌浓度(MBC)
[0053] 测定最低杀菌浓度的方法是，利用测定最低抑菌浓度(MIC)以上各试验管培养物，分别吸取0.1ml，移种在不含药物的琼脂培养基上，经孵育过夜，分别菌落计数，其菌落数少于5个的药物浓度即为MBC。
[0054] 图2为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌和酿酒酵母被本发明复方杀菌剂处理后，在波长600nm时的吸光度值。**代表极显著；*代表显著；“Amp”代表氨苄青霉素；“Amphotericin b”代表两性霉素B。
[0055] 由于申克孢子丝菌和红色毛癣菌液体培养基培养困难，所以对这两种菌我们采用了含药琼脂平板法。将已倍比稀释的不同浓度的复方杀菌剂分别加入已加热溶解的琼脂内，并在45～50℃水浴中平衡琼脂，充分混匀倾倒灭菌平皿内，琼脂厚度3～4mm。通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。通过菌落计数确定MIC、MBC值。如图3、图4所示。
[0056] 表3为复方杀菌剂最低抑菌(MIC)和最低杀菌(MBC)浓度。
[0057] 表3复方杀菌剂的最低抑菌(MIC)和最低杀菌(MBC)浓度
[0058]
[0059] /代表少量菌生长
[0060] 结果显示：由图2、图3、图4、表3可知复方杀菌剂对不同供试菌的MIC、MBC是不同的，但是均有抑菌效果。复方杀菌剂对红色毛癣菌的抑制效果最好MIC、MBC为0.025％和0.05％。其次是申克孢子丝菌MIC、MBC为0.10％和0.125％。而枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、酿酒酵母的抑制效果与申克孢子丝菌的MBC有差别他们均为0.25％。对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑菌效果一般，MIC为0.125％。复方杀菌剂对大肠杆菌的抑菌效果最差。
MIC结果与抑菌圈结果基本一致。
MIC结果与抑菌圈结果基本一致。
[0061] 综上，本发明保护的复方杀菌剂具有对细菌、真菌的广谱性抑制作用，对多种细菌和真菌具有抑菌杀菌效果，特别是针对白色念珠菌、申克孢子丝菌和红色毛癣菌等人畜共患病的致病菌。所以，该杀菌剂可以应用于人畜共患菌感染和其它消杀产品的开发。
[0062] 对比例
[0063] 分别配制以下组合物，采用滤纸片琼脂平板扩散法测定抑菌圈直径，其结果如表4所示：
[0064] a.2.3中制备的复方杀菌剂：芳樟醇45％，松油醇18％，香叶醇8％，β-环柠檬醛3％，橙花醇3％，月桂烯1％，罗勒烯1％，紫罗兰酮4％，2H-β-紫罗兰酮6％。
[0065] b.组分1：芳樟醇45％，松油醇18％，香叶醇8％，β-环柠檬醛3％，橙花醇3％，罗勒烯2％，紫罗兰酮4％，2H-β-紫罗兰酮6％。
[0066] c.组分2：芳樟醇45％，松油醇24％，β-环柠檬醛3％，橙花醇3％，月桂烯1％，罗勒烯1％，紫罗兰酮4％，2H-β-紫罗兰酮6％。
[0067] 表4复方杀菌剂、组分1和组分2对供试菌的抑菌圈直径大小(mm)
[0068]
[0069] 滤纸片直径为6mm；抑菌圈直径7-9mm为低敏感；10-15mm为中敏感；>15mm为高度敏感；<6mm为不敏感。
[0070] 由表4可知：当本发明的复方杀菌剂少了月桂烯，罗勒烯的含量改为2％，再研究其抑菌效果，与组分1相比，本发明的复方杀菌剂的抑菌效果更好。与本发明的复方杀菌剂相比，少了香叶醇，松油醇的含量改为24％，再研究其抑菌效果，与组分2相比，本发明的复方杀菌剂的抑菌效果更好。由此，我们可以看出本发明的复方杀菌剂的组分缺一不可。
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