血细胞裂解组合物及其用途
| 热词 | 血细胞 裂解 血红蛋白 血红 细胞 化物 样品 血氧 蛋白 tergitol | ||
| 专利类型 | 发明公开 | 法律事件 | 公开; 实质审查; |
| 专利有效性 | 实质审查 | 当前状态 | 实质审查 |
| 申请号 | CN202210686800.8 | 申请日 | 2022-06-16 |
| 公开(公告)号 | CN115480065A | 公开(公告)日 | 2022-12-16 |
| 申请人 | 仪器实验室公司; | 申请人类型 | 企业 |
| 发明人 | M.埃多西; H.严; E.麦克道尔; P.V.A.帕米迪; | 第一发明人 | M.埃多西 |
| 权利人 | 仪器实验室公司 | 权利人类型 | 企业 |
| 当前权利人 | 仪器实验室公司 | 当前权利人类型 | 企业 |
| 省份 | 当前专利权人所在省份： | 城市 | 当前专利权人所在城市： |
| 具体地址 | 当前专利权人所在详细地址：美国马萨诸塞州 | 邮编 | 当前专利权人邮编： |
| 主IPC国际分类 | G01N33/72 | 所有IPC国际分类 | G01N33/72 ; G01N21/31 |
| 专利引用数量 | 0 | 专利被引用数量 | 0 |
| 专利权利要求数量 | 22 | 专利文献类型 | A |
| 专利代理机构 | 北京市柳沈律师事务所 | 专利代理人 | 易方方; |
| 摘要 | 示例性血细胞裂解组合物包括浓度在约2.5％至约20％重量/体积(w/v)范围内的缓冲剂和仲醇乙 氧 基化物。仲醇乙氧基化物可包括TergitolTMTMN‑100X或Tergitol TM 15‑S‑9。该组合物可以配置为溶解血液样品中至少90％的血细胞。 | ||
| 权利要求 | 1.一种血细胞裂解组合物，其包含： |
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| 说明书全文 | 血细胞裂解组合物及其用途技术领域[0003] 发明概述 [0005] 仲醇乙氧基化物可以包括以下中的至少一种：TergitolTM 15‑S‑12型、TergitolTM TM TM TM TM15‑S‑30型、Tergitol 15‑S‑5型、Tergitol 15‑S‑7型、Tergitol 15‑S‑9型、Tergitol TM TM TM NP‑10型、Tergitol NP‑4型、Tergitol NP‑40型的乙氧基化壬基酚、Tergitol NP‑7型TM 的钠(3,9‑二乙基十三烷‑6‑磺酸盐)、Tergitol 8型的钠(2‑乙基己基硫酸盐)、TM TM TM Tergitol NP‑9型、Tergitol TMN‑100X，TEOS Tergitol 的钠(7‑乙基‑2‑甲基十一烷TM TM 基‑4‑基)硫酸盐、Tergitol TMN‑10或Tergitol TMN‑6。仲醇乙氧基化物可以是TM TM Tergitol TMN‑100X或Tergitol 15‑S‑9。 [0006] 缓冲剂可以包括3‑(N‑吗啡啉)丙磺酸(MOPS)、磷酸盐缓冲剂(PBS)、4‑(2‑羟乙基)‑1‑哌嗪乙磺酸(HEPES)、2‑[[1,3‑二羟基‑2‑(羟甲基)丙‑2‑基]氨基]乙磺酸(TES)、2,2‑双(羟甲基)‑2,2',2"‑次氮基三乙醇或2‑双(2‑羟乙基)氨基‑2‑(羟甲基)‑1,3‑丙二醇(Bis‑Tris)中的至少一种。 [0007] 血细胞裂解组合物可以包括生物杀灭剂。生物杀灭剂可包括5‑氯‑2‑甲基‑4‑异噻唑啉‑3‑酮(CMIT)、2‑甲基‑4‑异噻唑啉‑3‑酮(MIT)、Proclin 300、1,2‑苯并异噻唑啉‑3‑酮(BIT)、十二烷基胍盐酸盐(DGH)、庆大霉素、左氧氟沙星、粘菌素、辛基异噻唑啉酮(OIT)或阿米卡星中的至少一种。生物杀灭剂可以包括CMIT和MIT。CMIT和MIT的比可以约为3:1(CMIT:MIT)。CMIT:MIT在血细胞裂解组合物中的浓度可以为1％(w/v)。 [0008] 血细胞裂解组合物可以具有约6至约8的pH。仲醇乙氧基化物可以以约5％至约18％(w/v)范围内的浓度存在。仲醇乙氧基化物可以以约9％至约14％(w/v)的浓度存在。仲醇乙氧基化物可以是可生物降解的。血细胞裂解组合物可以配置为在少于2秒的时间内裂解样品中至少90％的血细胞。仲醇乙氧基化物可具有约75毫米(mm)至约125mm的5分钟(0.1重量％的活性物质)泡沫高度。仲醇乙氧基化物可具有约40mm至约75mm的5分钟(0.1重量％活性物)泡沫高度。 [0009] 用于确定血液样品中血红蛋白水平的示例性方法包括(i)将血细胞裂解组合物与血液样品混合，从而溶解血液样品中的一个或多个细胞，和(ii)在血液样品中确定血红蛋白水平。示例性方法可以单独或组合包括一个或多个以下的特征。 [0011] 制备血液溶解组合物的示例性方法包括将缓冲剂与仲醇乙氧基化物以约2.5％至约20％重量/体积(w/v)的浓度范围混合。示例性方法可以单独或组合包括一个或多个以下的特征。 [0012] 仲醇乙氧基化物可具有约40mm至约75mm的5分钟(0.1重量％的活性物质)泡沫高TM TM度。仲醇乙氧基化物可以是或包括Tergitol TMN‑100X或Tergitol 15‑S‑9。 [0013] 示例性血细胞裂解组合物包括(i)缓冲剂，和(ii)仲醇乙氧基化物，其为或包含TM TMTergitol TMN‑100X或Tergitol 15‑S‑9。血细胞裂解组合物可以单独或组合包括一个或多个以下的特征。 [0014] 仲醇乙氧基化物的浓度可以在约9％至约14％(w/v)的范围内。该组合物可以配置为在少于2秒的时间内溶解样品中至少90％的细胞。 附图说明[0017] 图1A是显示用于对血液样品进行CO‑血氧仪测量的示例光学系统的框图。 [0018] 图1B是显示使用示例光学系统获得的吸光度测量值的图表。 [0019] 图2是比较仲醇乙氧基化物血细胞裂解组合物与对照血细胞裂解组合物的总血红蛋白(tHb)测量值的条形图。 [0020] 图3是显示两个示例仲醇乙氧基化物血细胞裂解组合物相对于对照血细胞裂解组合物的总血红蛋白(tHb)测量值的点图。 [0021] 图4是显示两个示例仲醇乙氧基化物血细胞裂解组合物相对于对照血细胞裂解组合物的氧合血红蛋白(O2Hb)测量值的点图。 [0022] 图5是显示两个示例仲醇乙氧基化物血细胞裂解组合物相对于对照血细胞裂解组合物的碳氧血红蛋白(COHb)测量值的点图。 [0023] 图6是显示两个示例仲醇乙氧基化物血细胞裂解组合物相对于对照血细胞裂解组合物的高铁血红蛋白(MetHb)测量值的点图。 [0024] 图7是显示两个示例性仲醇乙氧基化物血细胞裂解组合物相对于对照血细胞裂解组合物的脱氧血红蛋白(HHb)测量值的点图。 [0025] 发明详述 [0026] CO‑血氧仪是测量血液样品中不同血红蛋白浓度和血红蛋白氧饱和度的设备。血液样品的氧饱和度或“sO2”对应于血液样品中与氧结合的功能性血红蛋白的比例。 [0027] 示例性CO‑血氧仪包括光学系统，该光学系统配置为基于血液样品中血红蛋白形式的光学吸光度来测量不同形式的血红蛋白和氧饱和度。例如，CO‑血氧仪可以配置为测量以下一种或多种的光学吸光度：功能性血红蛋白种类，其包括携氧氧合血红蛋白(O2Hb)和脱氧血红蛋白(HHb)，或功能失调的血红蛋白衍生物，如碳氧血红蛋白(COHb)、高铁血红蛋白(MetHb)、硫血红蛋白(SHb)和氰高铁血红蛋白(CNmetHb)。本文所述类型的示例性CO‑血氧仪还可以配置为同时测量血液样品中的胎儿血红蛋白、成人血红蛋白和胆红素浓度。胆红素是血红蛋白降解副产物，如下所述。 [0028] CO‑血氧饱和度测量可用于诊断各种医疗病况，包括但不限于贫血、疑似一氧化碳中毒或其他非呼吸性缺氧病症、血液病症、循环系统问题和肺部疾病。CO‑血氧饱和度测量可取决于光学系统中光散射的准确测量。在这方面，全血细胞样品在光学系统中可比裂解的血细胞样品散射更多的光。因此，在使用这些样品获得CO‑血氧饱和度光谱测量之前裂解血液样品可能是有益的。裂解的血液样品可减少光散射，这可以产生更准确和精确的CO‑血氧饱和度测量。 [0029] 因此，本文所述的示例系统和过程包括在获得CO‑血氧测定光谱测量之前将血细胞裂解组合物与全血样品混合。血细胞裂解组合物裂解血液样品。裂解包括破坏全血细胞的细胞膜，从而从全血细胞中释放裂解物，包括血红蛋白。本文所述的任何一种或多种示例性血细胞裂解组合物(统称为“血细胞裂解组合物”)可用于在CO‑血氧测定或其他过程的背景下裂解全血样品。 [0030] 如前所述，在CO‑血氧测定期间，裂解的血液样品产生的光散射可能比全血少，这可能会导致更准确的CO‑血氧测定测量。示例性血细胞裂解组合物包括一种或多种表面活性剂、一种或多种缓冲溶液(“缓冲剂”)、生物杀灭剂和DI(去离子)水。表面活性剂包括通过破坏细胞膜以释放裂解物来裂解细胞的化合物。例如，可以经由脂肪醇和环氧乙烷的反应来合成表面活性剂。可用于裂解全血样品的示例性表面活性剂包括醇乙氧基化物。示例性醇乙氧基化物具有化学式R(OC2H4)nOH。这里，R是指连接的氢或烃侧链，n是指环氧乙烷(OC2H4)的单元数量。 [0031] 示例性血细胞裂解组合物在缓冲剂中包括非离子表面活性剂，如仲醇乙氧基化物，该缓冲剂其中具有防腐剂，可能有DI水和生物杀灭剂。当血细胞裂解组合物在进行CO‑血氧测定之前与全血混合时，仲醇乙氧基化物起到裂解血液样品的作用。仲醇乙氧基化物TM可包括11至15个环氧乙烷单元，其可以在商品名Tergitol 下商业化。该商品名下的示例仲TM TM 醇乙氧基化物包括但不限于Tergitol 15‑S‑12型、Tergitol Type 15‑S‑30型、TM TM TM TM Tergitol 15‑S‑5型、Tergitol 15‑S‑7型、Tergitol 15‑S‑9型、Tergitol NP‑10型、TM TM TM Tergitol NP‑4型、Tergitol NP‑40型的乙氧基化壬基酚、Tergitol NP‑7型的硫酸钠(3,TM TM 9‑二乙基十三烷‑6‑磺酸盐)、Tergitol 8型的硫酸钠(2‑乙基己基硫酸盐)、Tergitol NP‑TM TM 9型、Tergitol TMN‑100X、TEOS Tergitol 的硫酸钠(7‑乙基‑2‑甲基十一烷‑4‑基)、TM TM Tergitol TMN‑10或Tergitol TMN‑6。可包含在血细胞裂解组合物中的仲醇乙氧基化物TM TM TM 的其他示例包括但不限于ECOSURF ，例如ECOSURF EH‑9和ECOSURF SA‑9。 [0032] 可以代表可以是示例性血细胞裂解组合物的一部分的非离子表面活性剂的示例性仲醇乙氧基化物的化学结构包括但不限于以下： [0033] (1)TergitolTM NP‑10，其中z＝10，且化学结构如下， [0034] [0035] (2)TergitolTM 15‑S‑7，其中x＝7和TergitolTM 15‑S‑9，其中x＝9，且化学结构如下， [0036] [0037] (3)TergitolTM TMN‑6，其中n＝6和TergitolTM TMN‑10，其中n＝10，且化学结构如下， [0038] [0039] (4)TergitolTM TMN‑100X，其可以包括TergitolTM TMN‑10与TergitolTM TMN‑6的比为70:30。 [0040] 在一些实施方式中，包含本文所述的表面活性剂的示例性血细胞裂解组合物可包括以下一种或多种浓度的一种或多种仲醇乙氧基化物：约2.0％或2.5％至约20％重量每体积(w/v)之间、5％至18％(w/v)之间、9％至14％(w/v)之间、9％至11％(w/v)之间、9％至10％(w/v)、9.0％至9.5％(w/v)之间、10％至12％(w/v)之间、10％至11％(w/v)之间、 10.0％至10.5％(w/v)之间、11％至13％(w/v)之间、11％至12％(w/v)之间、11.0％至 11.5％(w/v)之间、12％至14％(w/v)之间、12％至13％(w/v)之间、12.0％至12.5％(w/v)之间、13％至14％(w/v)之间或13.0％至13.5％(w/v)之间。 [0041] 用于裂解的表面活性剂，包括本文所述的仲醇乙氧基化物，可降低液体血液样品中的表面张力并在空气混入血液样品时诱导血液样品中的泡沫形成。泡沫不利于光吸收度测量，因为它会导致额外的光散射。在一些实施方式中，用于在CO‑血氧测定中进行细胞裂解的表面活性剂可以减少或最小化泡沫形成和/或产生在光谱测量之前快速消散的泡沫。用于裂解的示例性表面活性剂可以包括仲醇乙氧基化物，当在25℃(摄氏度)下用1％活性物质测量时，其表面张力在20至40达因/cm(厘米)之间。用于裂解的示例性表面活性剂可以包括仲醇乙氧基化物，其在0.1重量％的活性物质的水基溶液中具有小于110mm(毫米)的测量泡沫高度。例如，在将表面活性剂添加到水基溶液中五分钟后，可以进行泡沫高度的标准测量。仲醇乙氧基化物产生的泡沫高度可以例如使用Ross‑Miles方法测量。在示例实施方式中，表面活性剂具有从约75毫米(mm)至约125mm的5分钟(0.1重量％的活性物质)泡沫高度。在示例性实施方式中，表面活性剂具有约40mm至约75mm的5分钟(0.1重量％的活性物质)泡沫高度。 [0042] 在CO‑血氧测定的背景下，浊度是当光线穿过血液样品时光学系统所经历的光散射量的量度。光学透明度可以是血液样品的浊度的函数，例如，血液样品散射的光越少，与血液样品相关的光学透明度就越大。在一些实施方式中，本文所述的示例性血细胞裂解组合物在1至3秒内裂解全血样品中90％至100％的细胞，以在CO‑血氧测定期间减少散射效应TM TM并提高靶光学清晰度。在这方面，含有与Tergitol 15‑S‑9和/或Tergitol TMN‑100X具有相似结构的仲醇乙氧基化物的表面活性剂可用于在1至3秒内溶解至少90％的血细胞。 [0043] 在一些实施方式中，除前述那些之外的非离子表面活性剂可用于在CO‑血氧测定环境或其他地方进行血细胞裂解。例如，辛基苯酚乙氧基化物可以是用于裂解血液样品，如全血样品的血细胞裂解组合物的一部分。辛基苯酚乙氧基化物的示例包括辛基苯酚的环氧乙烷加合物。Triton X‑100是示例性辛基苯酚乙氧基化物，其可用于裂解血液样品。Triton X‑100具有以下化学结构， [0044] [0045] 在一些实施方式中，示例性血细胞裂解组合物可以包括除表面活性剂之外的缓冲剂。示例性缓冲剂包括通过使用弱酸及其盐或弱碱及其盐中和少量添加的酸或碱来抵抗pH变化的水溶液。可用于本文所述的血细胞裂解组合物的缓冲液的示例包括但不限于以下：3‑(N‑吗啡啉)丙磺酸(MOPS)、磷酸盐缓冲剂(PBS)、4‑(2‑羟乙基)‑1‑哌嗪乙磺酸(HEPES)、 2‑[[1,3‑二羟基‑2‑(羟甲基)丙‑2‑基]氨基]乙磺酸(TES)、2,2‑双(羟甲基)‑2,2',2"‑次氮基三乙醇或2‑双(2‑羟乙基)氨基‑2‑(羟甲基)‑1,3‑丙二醇(Bis‑Tris)。在一些实施方式中，缓冲剂可以包括3‑(N‑吗啡啉)丙磺酸(MOPS)。在一些实施方式中，缓冲剂将血细胞裂解组合物的pH维持在6和8之间。在一些实施方式中，选择缓冲剂以减少pH对血红蛋白的光谱变化在CO‑血氧测定测量上的影响，例如，pH的变化可以改变吸收光谱和MetHb或其他物质的测量。 [0046] 在一些实施方式中，本文所述的示例性血细胞裂解组合物可包括生物杀灭剂。示例性生物杀灭剂包括旨在破坏、遏止可能存在于血细胞裂解组合物中的任何有害生物体、使其无害或对可能存在于血细胞裂解组合物中的任何有害生物体施加控制作用的化合物。可用于血细胞裂解组合物的生物杀灭剂的示例包括但不限于以下：5‑氯‑2‑甲基‑4‑异噻唑啉‑3‑酮(CMIT)、2‑甲基‑4‑异噻唑啉‑3‑酮(MIT),CMIT:MIT的比约为3:1，商品名为TM Proclin 300、1,2‑苯并异噻唑啉‑3‑酮(BIT)、十二烷基胍盐酸盐(DGH),庆大霉素、左氧氟沙星、粘菌素、辛基异噻唑啉酮(OIT)或阿米卡星。在一些实施方式中，CMIT:MIT生物杀灭剂在血细胞裂解组合物中的浓度可以为1％重量每体积(w/v)。 [0047] CO‑血氧仪可能是在护理点(POC)位点或中心实验室进行测量的系统的一部分。贫血、血液病症、循环系统问题和肺部疾病会影响血氧饱和度水平，如果不治疗，可能会导致器官损伤或死亡。CO‑血氧仪可用于POC位点和/或中心实验室，以确定血液样品中血红蛋白、总血红蛋白或功能性或功能失调性血红蛋白的氧饱和度，这可能是此类病症的证据。本文所述的血细胞裂解组合物可用于通过减少来自红细胞的散射效应和通过缓冲裂解的血液样品以减少或最小化pH对CO‑血氧仪进行的光谱测量的影响来改进CO‑血氧测定测量。在这方面，在一些实施方式中，CO‑血氧仪系统除了进行CO‑血氧饱和度和/或胆红素测量外，+ + 2+ ‑还可以测量血液样品的pH、pO2、pCO2、Na、K、Ca 、Cl、葡萄糖、乳酸和/或血细胞比容。 [0048] 图1A显示了示例性CO‑血氧仪系统5。CO‑血氧仪系统5包括配置为照亮血液样品并确定血液样品的光谱吸收度的光学吸收系统。由CO‑血氧仪系统5分析的血液样品可以是使用本文所述的一种或多种血细胞裂解组合物裂解的全血样品。更具体地，在示例CO‑血氧仪5中，引入血细胞裂解组合物和血液样品到光学池7中的混合腔室中——例如，通过混合阀。 血液样品和血细胞裂解组合物的移动通过由螺线管同时驱动的混合腔室使血液样品和裂解组合物同时混合和裂解红细胞。所得混合物构成裂解的血液样品，可用于通过CO‑血氧仪获得光学吸光度测量值，减少或消除由红细胞引起的散射效应。 [0049] CO‑血氧仪5还包括广谱白光发光二极管(LED)光源10以照亮混合/光学腔室中的裂解血，以及具有高信噪比的氖灯11，其可以是用作光学吸光度测量的波长参考。示例性CO‑血氧仪5还包括高分辨率光谱仪12，其具有全息衍射光栅14和包含在室13中的电荷耦合装置(CCD)19。CCD 19包括集成电路，该集成电路可包括电容器阵列以提供高信噪比数字成像。CCD19与计算系统17通信。该通信可以是有线或无线的并且由虚线18表示。计算系统17配置为进行计算分析以解析由CO‑血氧仪检测到的样品光谱，如下所述。 [0050] 在CO‑血氧仪5中，裂解的血液样品在光学池7中被光源10发出的光4照亮。光4从镜子20a、20b通过含有裂解血液样品的光学池7反射到光谱仪12。在一些实施方式中，光学池7包括两个平行板光学窗口8，两个平行板光学窗口8由路径长度9隔开，光4通过该路径长度向光谱仪12传递。由穿过裂解血液样品的光组成的波长在光谱仪12中由全息衍射光栅14分离。引导这些成分并撞击CCD 19。CCD 19基于入射光产生电荷，该电荷是被电子设备读取并变成落在CCD 19上的光模式的数字副本。 [0051] 光源10可以是可控的——例如，通过计算系统17——在如480nm(纳米)至650nm的波长范围内照射裂解的血液样品。光谱仪12可测量不同波长的通过裂解血液样品的光。在不同或不同波长范围内进行测量使CO‑血氧仪5能够区分不同血红蛋白类型或衍生物的吸光光谱。在一个示例中，血液样品的组分，例如血红蛋白衍生物的吸光度包括通过考虑反射、散射或其他物理现象的物理吸光过程引起的通过该组分的透射辐射功率的衰减。根据测量的光谱值，血液样品中血红蛋白或血红蛋白衍生物的噪声校正吸光度可使用以下等式确定： [0052] Abs＝log10[IB/IS]。 [0053] 在前面的等式中，IB是指过程控制溶液(PCS)B的暗校正强度光谱。PCS‑B是无色溶液，用于为CO‑血氧测定过程提供零浓度参考。在上述等式中，IS是指血红蛋白或血红蛋白衍生物的暗校正强度光谱。 [0054] 关于血液样品中不同血红蛋白或血红蛋白衍生物的吸光度的数据从光谱仪12发送到计算系统18，在计算系统18中可以分析、处理该数据，并在图形用户界面(GUI)中将数据呈现给用户。例如，可以收集血红蛋白和/或血红蛋白相关产品的吸光度光谱并将其存储在计算机存储器中。计算系统17可以使用该数据来确定血液样品中血红蛋白和/或血红蛋白相关产物的浓度。基于该信息，可以获得如总血红蛋白(tHb)的测量值，其可以指血液样品中血红蛋白的总浓度。 [0055] 参考图1B，计算系统17还可以生成GUI 25。GUI 25绘制裂解的血液样品中不同血红蛋白和/或血红蛋白相关产物的各种不同波长的光(x轴)的光学吸光度(y轴)。在GUI 25中，不同的血红蛋白和/或血红蛋白相关产物包括O2Hb 21、HHb 22、COHb 23、MetHb 24和胆红素25。 [0056] 如前所述，氧饱和度或“sO2”对应于血液样品中氧饱和血红蛋白相对于总功能性血红蛋白的比例。sO2可以预测可用于组织灌注的氧气量。在一些实施方式中，计算系统可以使用基于CO‑血氧饱和度测量值的O2Hb和HHb浓度来确定血液样品中血红蛋白的氧饱和度。确定血液样品中氧饱和度的等式如下： [0057] sO2＝100x[O2Hb/(O2Hb+HHb)]％。 [0058] CO‑血氧仪5和计算系统17可以配置以确定裂解血液样品中胆红素的量。在这方面，胆红素是黄色化合物，其发生在脊椎动物血红素蛋白(“heme”)的正常分解代谢途径中。这种分解代谢可能是身体清除因老化或异常红细胞破坏而产生的废物的必要过程。为了测量胆红素，可将其由CO‑血氧仪5测定的吸光度与基于Beer Lambert定律的预定义标准进行比较。在这点上，计算系统可以使用以下等式来确定血液样品中胆红素的吸光度： [0059] A＝log10(IB/IS)＝εCL [0060] 上述，A是与裂解血液样品对光的吸光度相对应的值，IB和IS如上所述，C是含有裂解的血液样品的溶液的浓度，ε是摩尔消光系数，L是光传播的路径长度。总胆红素可报告为血浆等效浓度。在这点上，当分析全血时，计算系统可以进行血细胞比容校正，以调整来自红细胞的稀释效应，从而获得血浆等效浓度。可以使用以下等式进行血细胞比容校正： [0061] Bilip＝Bilib/(1‑Hct) [0062] 上面，Bilip对应于血浆相中总胆红素的浓度，Bilib对应于全血中总胆红素的浓度，Hct表示以分数表示的血细胞比容。Hct是通过将总血红蛋白克每分升(g/dL)乘以常数0.03来确定的。常数0.03基于红细胞中血红蛋白的平均浓度的示例。 [0063] 本文所述的血细胞裂解组合物可用于本文未具体描述的光学临床化学或免疫测定，并与图1A中所示的仪器以外的仪器一起使用。下面描述的是使用可包括在示例性血细胞裂解组合物中的表面活性剂进行的实验。 [0064] 在第一个示例中，表面活性剂靶向满足以下标准：在测试浓度下，表面活性剂在1至2秒或更短的时间内溶解100％的血细胞；表面活性剂与血细胞裂解组合物中使用的缓冲剂和其他化学品相容；表面活性剂不会干扰预期的吸光度测量值；表面活性剂不与血液血红蛋白化学相互作用；表面活性剂不与胆红素化学相互作用；表面活性剂具有相对较低的起泡度；表面活性剂符合CO‑血氧分析仪的既定产品要求；表面活性剂环保。上述示例标准不旨在限制为为其他血细胞裂解组合物选择其他表面活性剂。 [0065] 根据上述标准筛选了多种表面活性剂。仲醇乙氧基化物TergitolTM TMN‑100X(以TM下简称仲醇乙氧基化物1)和Tergitol 15‑S‑9型(以下简称仲醇乙氧基化物2)均经测定满足上述标准。如上所述，每种血细胞裂解组合物的组合物包括在缓冲剂中的仲醇乙氧基化物以及防腐剂。 [0066] 下面的表1显示了血细胞裂解组合物在裂解期间与用于仲醇乙氧基化物1、仲醇乙氧基化物2和Triton‑X100的水混合5分钟后的表面张力和泡沫高度。Triton‑X100是对照(或参考)表面活性剂，其与仲醇乙氧基化物表面活性剂进行比较。如图所示，仲醇乙氧基化物1和仲醇乙氧基化物2的泡沫高度随着时间的推移比表面活性剂Triton X‑100的泡沫高度降低得更快。类似的泡沫高度和快速的泡沫消散可能是仲醇乙氧基化物的优势，因为发泡会导致可能干扰或不利地影响CO‑血氧饱和度测量值的光学散射。在下表1中，“重量％的活性物质”是指表面张力，它是表面活性剂的性质，表明/涉及材料作为表面活性剂的有效性。 [0067] 表1 [0068] [0069] 下面的表2显示了示例性血细胞裂解组合物的组组分。在示例性测试程序中，仲醇乙氧基化物1和仲醇乙氧基化物2以9％至14％的浓度包含在关于下表2描述的示例性血细胞裂解组合物中，并在本文所述类型的CO‑血氧饱和度系统中进行测试。 [0070] 3‑(N‑吗啡啉)丙磺酸(MOPS)、磷酸盐缓冲剂(PBS)、4‑(2‑羟乙基)‑1‑哌嗪乙磺酸(HEPES)、2‑[[1,3‑二羟基‑2‑(羟甲基)丙‑2‑基]氨基]乙磺酸(TES)、2,2‑双(羟甲基)‑2,2',2"‑次氮基三乙醇或2‑双(2‑羟乙基)氨基‑2‑(羟甲基)‑1,3‑丙二醇(Bis‑Tris)[0071] 表2 [0072]化学品 重量％ MOPS(3‑吗啡啉‑1‑磺酸) 3‑5％ NaOH，2N 4‑8％ TM ProClin 300 1‑2％ 仲醇乙氧基化物1或仲醇乙氧基化物2 9‑14％ 去离子水 71‑83％ [0073] 表2的血细胞裂解组合物，包括仲醇乙氧基化物1或仲醇乙氧基化物2，符合上述标准。例如，与包括仲醇乙氧基化物1或仲醇乙氧基化物2的血细胞裂解组合物混合的全血样品在1至2秒后表现出约100％的全血细胞裂解(例如90％或更大的裂解)。进一步，校准溶液和在多个波长获得的裂解血液样品的吸收光谱基本上不受任一测试表面活性剂的影响。 [0074] 图2是比较与包括仲醇乙氧基化物1 28的血细胞裂解组合物或包含仲醇乙氧基化物2 26的血细胞裂解组合物混合的血液样品和与包括Triton X‑100 27的对照血细胞裂解组合物混合的血液样品的总血红蛋白(tHb)浓度的条形图。y轴代表“δ(tHb‑Avr Ref tHb)偏差”，它是指使用每种测试血细胞裂解组合物(26和28)获得的总血红蛋白浓度与总血红蛋白浓度的平均值之间的差异，如使用Triton X‑100 27获得的虚线29所示。虚线30和31显示了基于Triton X‑100 27的血细胞裂解组合物的平均29周围可接受的偏差的分析范围(+0.5至‑0.5)。包括仲醇乙氧基化物1 26或仲醇乙氧基化物2 28的血细胞裂解组合物表明了总tHb浓度范围为7至21g/dL，这与包括Triton X‑100 27的血细胞裂解组合物相似，只有很小的负偏差。示例数据表明，考虑到裂解的速度和完整性、对样品光谱的影响相对较小或没有影响、以及tHb测量值的准确性和精密度，在血细胞裂解组合物中仲醇乙氧基化物1和仲醇乙氧基化物2的表现可能与Triton X‑100 27一样好或更好。 [0075] 下述实验一式三份进行。一些实验在所示的不同日期(“12‑20”或“01‑08”)进行。 [0076] 图3是比较与包括仲醇乙氧基化物1 28或仲醇乙氧基化物2 26的测试血细胞裂解组合物混合的血液样品和与包括Triton X‑100 27的对照血细胞裂解组合物混合的血液样品的总血红蛋白(tHb)浓度的点图。y轴代表“δ(tHb‑参照)”，它是指使用测试血细胞裂解组合物获得的总血红蛋白值与包括Triton X‑100 27对照血细胞裂解组合物获得的总血红蛋白值之间的差异。x轴代表“Avg.tHbcal对照(g/dL)”是指使用对照血细胞裂解组合物27获得的以g/dL为单位的平均总血红蛋白值。共同绘制总血红蛋白值，该总血红蛋白值是使用包括仲醇乙氧基化物1 28、仲醇乙氧基化物2 26、和包括Triton X‑100 27的对照血细胞裂解组合物的测试血细胞裂解组合物来获得的。数据表明在总血红蛋白的所有水平上至少部分重叠。 [0077] 在这方面，图3显示了来自不同类型样品的tHb样品测量值，其根据tHb值(g/dL)聚集。图3中所示的tHb簇包括(i)低tHb和脂血样品34；(ii)正常tHb、所有COHb水平、所有HHbTM TM水平和所有MetHb水平，以及Intralipid 样品35；(iii)Intralipid 样品36；高tHb样品 37；和高tHb样品38。虚线32和33显示了测试血细胞裂解组合物可接受偏差的分析范围。数据表明，考虑到裂解的速度和完整性、对样品光谱的影响相对较小或没有影响、以及tHb测量值的准确性和精密度，在使用CO‑血氧饱和度测量确定总血红蛋白时仲醇乙氧基化物1和仲醇乙氧基化物2的表现可能与包括Triton X‑100 27对照血细胞裂解组合物一样好或更好。 [0078] 图4是比较与本文所述类型的包括仲醇乙氧基化物1 28或仲醇乙氧基化物2 26的测试血细胞裂解组合物混合的血样和与包括Triton X‑100 27的对照血细胞裂解组合物混合的血样的氧合血红蛋白(O2Hb)浓度的点图。y轴表示“δ(％O2Hb‑参照)”，它是指使用每种测试血细胞裂解组合物获得的氧合血红蛋白与包括Triton X‑100 27的对照血液细胞裂解组合物的差异。x轴代表“Avg对照O2Hb(％)”，它是指使用包括Triton X‑100 27的对照血细胞裂解组合物获得的氧合血红蛋白值的百分比平均值。共同绘制使用包括仲醇乙氧基化物1 28、仲醇乙氧基化物2 26和对照裂解组合物27的血细胞裂解组合物获得的氧合血红蛋白的值，以说明所有水平的氧合血红蛋白的重叠。 [0079] 在这方面，图4的图显示了来自根据O2Hb值(g/dL)聚集的样品的O2Hb样品测量值。所示的O2Hb簇包括：60％脱氧Hb样品(HHb)41；30％HHb样品42；20％MetHb和20％COHb样品TM 43；5‑10％MetHb样品44；5‑10％COHb样品45；0％Intralipid 样品46；和所有LD(脂血症)、TM 1％COHb、0.5‑1％Intralipid 和0‑1％MetHb样品47。虚线39和40显示了测试血细胞裂解组合物可接受偏差的分析范围。数据表明，考虑到裂解的速度和完整性、对样品光谱的影响相对较小或没有影响、以及O2Hb测量值的准确性和精密度，在使用CO‑血氧饱和度测量确定氧合血红蛋白时，仲醇乙氧基化物1和仲醇乙氧基化物2的表现可能与包括Triton X‑100 27对照血细胞裂解组合物一样好或更好。 [0080] 图5是比较(i)与包括仲醇乙氧基化物1 28或仲醇乙氧基化物2 26的测试血细胞裂解组合物混合的血液样品的功能失调的血红蛋白碳氧血红蛋白(COHb)浓度与(ii)与包括Triton X‑100 27对照血细胞裂解组合物混合的血液样品的点图。y轴代表“δ(COHb‑参照)”，它是指使用每种测试血细胞裂解组合物获得的碳氧血红蛋白与使用包括Triton X‑100的对照细胞裂解组合物获得的碳氧血红蛋白之间的差异。x轴代表“Avg对照COHb(％)”，它是指使用血细胞裂解组合物27获得的碳氧血红蛋白值的百分比平均值。使用包括仲醇乙氧基化物1 28、仲醇乙氧基化物2 26的血细胞裂解组合物获得的碳氧血红蛋白值，并且共同绘制对照细胞裂解组合物27并且证明在所有水平的碳氧血红蛋白的重叠。 [0081] 在这方面，图5的图显示了根据COHb值(g/dL)聚集的COHb样品测量值。图5中显示TM的COHb簇包括：所有LD(脂血症)、tHb、Intralipid 、HHb和MetHb样品50；5％COHb样品51； 10％COHb样品52；和20％COHb样品53。虚线48和49显示了测试血细胞裂解组合物可接受偏差的分析范围。数据表明，考虑到裂解的速度和完整性、对样品光谱没有影响、以及COHb测量值的准确性和精密度，仲醇乙氧基化物1和仲醇乙氧基化物2的表现可能与包含Triton X‑100 27的对照血细胞裂解组合物一样好或更好。 [0082] 图6是比较与包括仲醇乙氧基化物1 28或仲醇乙氧基化物2 26的血细胞裂解组合物混合的血液样品和与包括Triton X‑100 27的对照血细胞裂解组合物混合的血液样品的功能失调的血红蛋白高铁血红蛋白(MetHb)的浓度的点图。y轴代表“δ(MetHb‑参照)”，它是指使用每种血细胞裂解组合物获得的高铁血红蛋白与包括Triton X‑100的对照血细胞裂解组合物获得的高铁血红蛋白之间的差异。x轴代表“Avg对照MetHb(％)”，它是指使用对照血细胞裂解组合物27获得的高铁血红蛋白值的百分比平均值。共同绘制使用包括仲醇乙氧基化物1 28、仲醇乙氧基化物2 26以及对照血细胞裂解组合物27的血细胞裂解组合物获得的高铁血红蛋白值并表明在所有高铁血红蛋白水平上的重叠。 [0083] 图6显示了来自根据MetHb值(g/dL)聚集的供体的测量值。在图6中显示的MetHb簇TM包括：所有LD(脂血症供体)、tHb、COHb、Intralipid 、HHb和0％MetHb样品56；5％MetHb样品 57；10％MetHb样品58；和20％MetHb样品59。虚线54和55显示了测试血细胞裂解组合物可接受偏差的分析范围。数据表明，考虑到裂解的速度和完整性、对样品光谱的影响相对较小或没有影响、以及MetHb测量值的准确性和精密度，仲醇乙氧基化物1和仲醇乙氧基化物2的表现可能与在血细胞裂解组合物中用于确定CO‑血氧饱和度测量值中的高铁血红蛋白的参照一样好或更好。 [0084] 图7是比较与包括仲醇乙氧基化物1 28或仲醇乙氧基化物2 26的血细胞裂解组合物混合的血液样品和与包括Triton X‑100 27的对照血细胞裂解组合物混合的血液样品中的脱氧血红蛋白(HHb)浓度的点图。y轴代表“δ(HHb‑参照)”，它是指使用每种血细胞裂解组合物获得的脱氧血红蛋白与包括Triton X‑100的对照血细胞裂解组合物获得的脱氧血红蛋白之间的差异。x轴代表“Avg对照HHb(％)”，它是指使用对照血细胞裂解组合物27获得的脱氧血红蛋白值的百分比平均值。共同绘制使用包括仲醇乙氧基化物1 28、仲醇乙氧基化物2 26以及包括Triton X‑100 27的对照血细胞裂解组合物获得的脱氧血红蛋白值。这些值的图表明了所有水平的脱氧血红蛋白的重叠。 [0085] 在这方面，图7显示了根据HHb值(g/dL)聚集的样品的HHb测量值。图7中显示的HHbTM簇包括：所有LD(脂血症供体)、tHb、COHb、Intralipid 、MetHb和0％HHb样品62；30％HHb样品63；和60％HHb样品64。虚线60和61显示了含有仲醇乙氧基化物1和仲醇乙氧基化物2的血细胞裂解组合物可接受偏差的分析范围。数据显示，考虑到裂解的速度和完整性、对样品光谱的影响相对较小或没有影响、以及HHb测量值的准确性和精密度，仲醇乙氧基化物1和仲醇乙氧基化物2的表现可能与在血细胞裂解组合物中用于确定基于CO‑血氧饱和度测量值的脱氧血红蛋白的参照一样好或更好。 [0086] 因此，血细胞裂解组合物在可接受的预定参考范围内产生tHb、O2Hb、COHb、MetHb和HHb的结果。 [0087] 在另一个实施例中，Multi‑4(“M4”)是3级对照材料，其用于获得人CO‑血氧饱和度血细胞裂解测量值的测定中。下表3显示，对于进行的每个实施例3级Multi‑4测定(L1、L2和L3)，仲醇乙氧基化物1(表中的“1”)和仲醇乙氧基化物2(表中的“2”)示例性血细胞裂解组合物在指定的参考范围(“范围”)内产生tHb、O2Hb、COHb、MetHb和HHb的结果，这些结果与使用包括Triton‑X‑100的对照(“Ctrl”)血细胞裂解组合物产生的值相当。显示了可接受的结果范围，对于每个种类L1至L3的M4，“min”指的是最小可接受结果，“max”指的是的最大可接受结果。还显示了每个仲醇乙氧基化物相对于对照平均值的平均值(“ave”)、标准偏差(“SD”)和δ平均值(“δ”)。数据表明，考虑到裂解的速度和完整性、对样品光谱的影响相对较小或没有影响、以及tHb、O2Hb、COHb、MetHb和HHb测量值的准确性和精密度，仲醇乙氧基化物1和仲醇乙氧基化物2的表现可能与在使用CO‑血氧饱和度测量确定氧合血红蛋白时的对照血细胞裂解组合物一样好或更好。 [0088] 表3 [0089] [0090] 参考下表4，当用于测量高度混浊的样品的总血红蛋白(tHb)时，包括仲醇乙氧基化物1或仲醇乙氧基化物2的血细胞裂解组合物也提供了与包括Triton X‑100的对照血细胞裂解组合物非常相似(δ|<0.1)的结果。此类样品包括天然存在的混浊样品。在下表中，“LD”是指脂血症供体(患者)样品标识(ID)，如所示(1‑6)，这些样品包括高达1％的TMIntralipid‑20 。下表4显示仲醇乙氧基化物血细胞裂解组合物1和2产生的tHb值接近在使用CO‑血氧饱和度测量确定氧合血红蛋白产生的tHb值或在其标准偏差内。表4中的数据表明，当在血细胞裂解组合物中确定基于高血脂血液样品CO‑血氧饱和度测量的总血红蛋白时，仲醇乙氧基化物1和仲醇乙氧基化物2的表现与Triton X‑100一样好或更好。 [0091] 表4 [0092] [0093] 本文所述的血细胞裂解组合物可具有一个或多个以下优点。如上所述，血细胞裂解组合物可以满足一个或多个以下的靶阈值：血细胞裂解组合物裂解血细胞的效率和速度；血细胞裂解组合物在预期光学测量中表现出的干扰程度；血细胞裂解组合物在血液血红蛋白化学中表现出的干扰程度；血细胞裂解组合物对胆红素化学表现出的干扰程度；以及在光学测量中引起散射的发泡程度。 [0094] 本文所述的血细胞裂解组合物、其中含有的表面活性剂或两者都可以是可生物降解的。 [0095] 血细胞裂解组合物和其中含有的表面活性剂已针对CO血氧饱和度测量系统进行了描述。然而，其中含有的血细胞裂解组合物和表面活性剂可以以任何合适的含量使用，并且不限于在CO‑血氧饱和度测量的情况下使用。 [0097] 本说明书中描述的CO‑血氧饱和度测量系统的至少一部分及其各种修改可以至少部分地由一台或多台计算机，如计算系统17使用一个或多个计算机程序配置或控制，该计算机程序有形地包含在一个或多个信息载体中，如在一个或多个非暂时性机器可读存储介质中。计算机程序可以以任何形式的编程语言编写，包括编译或解释语言，并且可以以任何形式进行，包括作为独立程序或作为模块、部分、子程序或其他在计算环境中适合使用的单元。计算机程序可以在一台计算机或一个位点的多台计算机上进行，或分布在多个位点并通过网络相互连接。 [0098] 与配置或控制本文描述的测试系统相关的动作可以由一个或多个可编程处理器进行，该处理器进行一个或多个计算机程序以控制或进行本文描述的所有或一些操作。全部或部分测试系统和过程可由专用逻辑电路配置或控制，如FPGA(现场可编程门阵列)和/或ASIC(专用集成电路)或位于仪器硬件的嵌入式微处理器。 [0099] 适合于进行计算机程序的处理器包括，例如，通用和专用微处理器，以及任何类型的数字计算机的任何一个或多个处理器。通常，处理器将从只读存储区或随机存取存储区或两者接收指令和数据。计算机的元件包括一个或多个用于进行指令的处理器和一个或多个用于存储指令和数据的存储区域设备。通常，计算机还将包括或可操作地耦合以从一个或多个机器可读存储介质接收数据或向其传输数据或两者，如用于存储数据的大容量存储设备，如磁性、磁光磁盘或光盘。适用于体现计算机程序指令和数据的非暂时性机器可读存储介质，包括所有形式的非易失性存储区域，包括例如半导体存储区域设备，如EPROM(可擦除可编程只读存储器)、EEPROM(电可擦可编程只读存储器)和闪存存储区设备；磁盘，如内部硬盘或可移动磁盘；磁光盘；和CD‑ROM(光盘只读存储器)和DVD‑ROM(数字多功能光盘只读存储器)。 [0100] 所描述的不同实施方式的元素可以组合以形成之前未具体阐述的其他实施方式。可以将元素排除在前面描述的系统之外，而不会对它们的操作或系统的一般操作产生不利影响。此外，各种单独的元件可以组合成一个或多个单独的元件以进行本说明书中描述的功能。 [0101] 本说明书中未具体描述的其他实施方式也在所附权利要求的范围内。 [0102] 本申请中提及的商标表示于下述组合物中(以出现先后为序)： [0103] [0104] |
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