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一种用于快速直扩PCR检测的病毒保存液

热词	pcr 保存病毒核酸
专利类型	发明公开	法律事件	公开; 实质审查; 撤回;
专利有效性	无效专利	当前状态	撤回
申请号	CN202110678032.7	申请日	2021-06-18
公开(公告)号	CN113278682A	公开(公告)日	2021-08-20
申请人	扬州万禾生物科技有限公司;	申请人类型	企业
发明人	张珉艳;	第一发明人	张珉艳
权利人	扬州万禾生物科技有限公司	权利人类型	企业
当前权利人	扬州万禾生物科技有限公司	当前权利人类型	企业
省份	当前专利权人所在省份：江苏省	城市	当前专利权人所在城市：江苏省扬州市
具体地址	当前专利权人所在详细地址：江苏省扬州市邗江区司徒庙路526号	邮编	当前专利权人邮编：225009
主IPC国际分类	C12Q1/6806	所有IPC国际分类	C12Q1/6806 ; C12Q1/70 ; C12R1/93
专利引用数量	0	专利被引用数量	0
专利权利要求数量	4	专利文献类型	A
专利代理机构	安徽思沃达知识产权代理有限公司	专利代理人	赵瑜;
摘要	本发明涉及一种用于快速直扩PCR检测的病毒保存液，主要包含以下主要成分：溶液缓冲剂0.02‑2％(w/v)；PCR反应增强剂0.01‑0.1％(w/v)；表面活性剂 0.01‑0.1％(w/v)。本保存液可以有效的裂解病毒粒子，保存病毒核酸片段，抑制核酸酶活性，并且不影响PCR反应，可用于快速直扩PCR检测。
权利要求	1.一种用于快速直扩PCR检测的病毒保存液，其特征在于：主要由溶液缓冲剂0.05‑2％(w/v)；PCR反应增强剂0.01‑0.1％(w/v)；表面活性剂0.01‑0.1％(w/v)组成。 2.根据权利要求1所述的一种用于快速直扩PCR检测的病毒保存液，其特征在于：溶液缓冲剂为三羟甲基氨基甲烷1‑2％(w/v)、乙二胺四乙酸二钠盐0.05‑0.1％(w/v)、氯化钠 0.5‑2％(w/v)。 3.根据权利要求1所述的一种用于快速直扩PCR检测的病毒保存液，其特征在于：PCR反应增强剂为牛血清白蛋白0.01‑0.05％(w/v)、明胶0.01‑0.05％(w/v)、硫酸铵0.01‑0.1％(w/v)、海藻糖0.01‑0.1％(w/v)、环糊精0.01‑0.1％(w/v)中一种或几种组合。 4.根据权利要求1所述的一种用于快速直扩PCR检测的病毒保存液，其特征在于：表面活性剂为十二烷基硫酸钠0.01‑0.1％(w/v)、曲拉通X‑1000.01‑0.1％(w/v)中一种。
说明书全文	一种用于快速直扩PCR检测的病毒保存液技术领域 [0001] 本发明涉及生物医药技术邻域，具体涉及一种用于快速直扩PCR检测的病毒保存液。背景技术 [0002] 目前对于SARS‑CoV‑2感染，最主要的检测方法是核酸检测。临床大多采用实时荧光RT‑PCR技术或反转录‑聚合酶链式反应，采用的样本为感染者的鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液及粪便等，将这些样本采集后，放入病毒保存液中进行保存与运输。 [0003] 目前传统的核酸检测需要取样后进行核酸提取。虽然市面上已开发了多种基于磁珠提取核酸的仪器，一次性可以进行96样本的核酸提取，但至少需要15‑30分钟时间，不利于大规模快速筛查。因此，检验机构需要免核酸提取，可以快速直扩PCR检测的病毒保存液。常规的非灭活型病毒保存液，如Hank 's液或PBS，虽然也可进行PCR直扩反应，但由于含有一些PCR抑制成分等原因，其最低检测拷贝数较高，导致检测灵敏度低，容易出现“假阴性”，将“弱阳性”样本漏检。 [0004] 本发明涉及的一种用于快速直扩PCR检测的病毒保存液，含有PCR增强剂成分，无需核酸提取，可以直接以取样后的保存液为模板进行荧光定量PCR 反应。检测灵敏度可达200拷贝，可用于快速核酸检测。发明内容 [0005] 由此可见，本发明提供一种用于快速直扩PCR检测的病毒保存液，采集样本后可无需核酸提取，直接进行荧光定向PCR反应。 [0006] 本发明保存液包括：溶液缓冲剂0.05‑2％(w/v)；PCR反应增强剂0.01‑0.1％(w/v)；表面活性剂0.01‑0.1％(w/v)。 [0007] 上述技术方案中，进一步阐述：溶液缓冲剂为三羟甲基氨基甲烷1‑2％ (w/v)、乙二胺四乙酸二钠盐0.05‑0.1％(w/v)、氯化钠0.5‑2％(w/v)。 [0008] 上述技术方案中，进一步阐述：PCR反应增强剂为牛血清白蛋白 0.01‑0.05％(w/v)、明胶0.01‑0.05％(w/v)、硫酸铵0.01‑0.1％(w/v)、海藻糖0.01‑0.1％(w/v)、环糊精0.01‑0.1％(w/v)中一种或几种组合。 [0009] 上述技术方案中，进一步阐述：表面活性剂为十二烷基硫酸钠 0.01‑0.1％(w/v)、曲拉通X‑1000.01‑0.1％(w/v)中一种。 [0010] 本发明的保存液能够在取样后，直接以保存液为模板进行荧光定量PCR 反应。检测灵敏度可达200拷贝，可用于快速核酸检测。本保存液兼容市场主流的核酸检测试剂盒。附图说明 [0011] 图1实施例1病毒保存液组和实施例2病毒保存液组的qRT‑PCR效果。分别设置4种‑1 ‑2 ‑3 ‑4稀释梯度(从左到右分别是10 、10 、10 、10 )和两个重复。具体实施方式 [0012] 应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。 [0013] 实施例1 [0014] 保存液的制备：称取三羟甲基氨基甲烷12g，乙二胺四乙酸二钠盐 0.8g，氯化钠1g，曲拉通X‑100 1mL，牛血清白蛋白0.1g,明胶0.2g，硫酸铵 1g，溶于1L蒸馏水，配制完成后，将溶液通过0.25μm的滤膜除菌。 [0015] 实施例2 [0016] 保存液的制备：称取三羟甲基氨基甲烷12g，乙二胺四乙酸二钠盐 0.8g，氯化钠2g，十二烷基硫酸钠0.1g，牛血清白蛋白0.1g,环糊精1g，硫酸铵1g，溶于1L蒸馏水，配制完成后，将溶液通过0.25μm的滤膜除菌。 [0017] 实施例3 [0018] 直扩效果检测：SARS‑COV‑2假病毒分别用实施例1病毒保存液和实施例2病毒保存‑1 ‑2 ‑3 ‑4液进行梯度稀释(10 、10 、10 、10 )。随后按照圣湘 2019nCOV快检试剂盒说明书，各取20μL以上两种直扩型病毒保存液作为模板，总体系共50μL。两组样品同时进行荧光PCR检测。如图1所示，结果显示实施例1病毒保存液组(红线)CT值略低于实施例2病毒保存液组(黑线)，绿线为试剂盒自带阳性对照(未稀释)，因此CT值低于两种保存液，可作为参考值，黄线为阴性对照，无CT值。因此两种直扩型病毒保存液对圣湘快检试剂盒PCR扩增均没有抑制反应，且实验结果符合圣湘快检试剂盒说明书对于结果判定的标准。

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