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一种用于检测毛发中毒品的 试剂盒及其检测方法

热词	毒品 met dna3 毛发 dna1 试剂 dna2 偶联裂解发光
专利类型	发明公开	法律事件	公开; 实质审查; 驳回;
专利有效性	无效专利	当前状态	驳回
申请号	CN202011543524.7	申请日	2020-12-24
公开(公告)号	CN112748240A	公开(公告)日	2021-05-04
申请人	南京北成光生物科技有限公司;	申请人类型	企业
发明人	曹丹; 成舜;	第一发明人	曹丹
权利人	南京北成光生物科技有限公司	权利人类型	企业
当前权利人	南京北成光生物科技有限公司	当前权利人类型	企业
省份	当前专利权人所在省份：江苏省	城市	当前专利权人所在城市：江苏省南京市
具体地址	当前专利权人所在详细地址：江苏省南京市江北新区药谷大道11号生命科技岛07栋3层	邮编	当前专利权人邮编：210000
主IPC国际分类	G01N33/53	所有IPC国际分类	G01N33/53 ; G01N33/58 ; G01N21/76 ; G01N21/27
专利引用数量	6	专利被引用数量	2
专利权利要求数量	3	专利文献类型	A
专利代理机构	南京瑞华腾知识产权代理事务所	专利代理人	钱丽;
摘要	本发明公开了一种用于检测毛发中毒品的试剂盒，包括裂解液、检测试剂；其中裂解液包括PH在7‑9的10mM PBS缓冲液、20mM DTT以及100ug/mL的蛋白酶K；所述检测试剂包括DNA1‑Met 抗原偶联物、DNA2‑Met 抗体偶联物、DNA3以及氧化石墨烯结合抗氧化剂；本发明检测方法包括：S1：试剂配制；S2：预处理；S3：反应一；S4：反应二；S5：检测。本发明试剂盒操作简单，针对毛发进行毒品检测，在5分钟左右出检测报告，一次性可检验一种或多种毒品，适合筛选。
权利要求	1.一种用于检测毛发中毒品的试剂盒，其特征在于：包括裂解液、检测试剂；其中裂解液包括PH在7‑9的10mM PBS缓冲液、20mM DTT以及100ug/mL的蛋白酶K；所述检测试剂包括DNA1‑Met抗原偶联物、DNA2‑Met抗体偶联物、DNA3以及氧化石墨烯结合抗氧化剂；所述DNA1‑Met抗原偶联物的序列如下： SEQ ID NO.1：5’‑ACGCTGAGTTATCAACGACTTTTTTTATCACATCAGGCTCTAGCGTATGCTATTG‑NH2C7‑3’；所述DNA2‑Met抗体偶联物的序列如下： SEQ ID NO.2：5’‑NH2C6‑TACGTCCAGAACTTTACCAAACCACACCCTTTTTTTGTCGTTGGCTGAGATTC‑3’；所述DNA3的序列如下： SEQ ID NO.3：5’‑AE‑NH2C6‑CGATCTCAGCAACTCAGCAGCG‑3’。 2.一种根据权利要求1所述的检测毛发中毒品的方法，其特征在于：按照先后顺序包括以下步骤： S1：试剂配制：将将20mM DTT以及100ug/mL的蛋白酶K混合入PH在7‑9的10mM PBS缓冲液中，混合均匀后得到裂解液待用，将DNA1‑Met抗原偶联物、DNA2‑Met抗体偶联物、DNA3以及氧化石墨烯结合抗氧化剂混合，得到检测试剂，然后将检测试剂分装为200μL每管，进行冻干待用； S2：预处理：称取20mg头发，剪成3‑5mm的小段，得待测头发样品； S3：反应一：将上述步骤中得到的待测头发样品装入到试管中，然后向试管中加入2ml裂解液，常温静置5min，待用； S4：反应二：取上述步骤中200μL裂解液加入到装载检测试剂的反应管中，37℃下温育 5min； S5：检测：向上述步骤反应管中加入化学发光底物，混合均匀，然后取200μL加入到化学发光仪中进行检测，得检测结果。 3.根据权利要求2所述的一种检测毛发中毒品的检测方法，其特征在于：所述化学发光底物为过氧化氢和氢氧化钠。
说明书全文	一种用于检测毛发中毒品的试剂盒及其检测方法技术领域 [0001] 本发明属于毒品检测技术领域，具体涉及一种用于检测毛发中毒品的试剂盒及其检测方法。背景技术 [0002] 目前针对吸毒人员快速排查的生物检测样本主要有尿液、唾液和毛发。与尿液和唾液相比，毛发检材具有性质稳定、取材方便、易于保存、检出时限长、适用范围广、污染机会少等优势。毒品在毛发中的代谢较慢，检测窗口期长可达到半年，对取样过程便于监督，可防止检材被掺假或调换。毛发中痕量毒品快速检测技术主要有酶联免疫(ELISA)、胶体金、时间分辨荧光免疫层析和量子点免疫层析技术。上述技术无法时间快速检测(小于10分钟)、特异性强、灵敏度高(达到0.2ng/mg)、可追溯时间长的要求。 [0003] 为解决上述技术的不足，我司研发均相发光检测技术。利用邻位触及原理实现均相免疫检测，同时使用DNA辅助蛋白检测的方法，将对于大分子蛋白的检测转换为对核酸的检测，结合各种成熟的核酸放大策略，大大提高了检测的灵敏度。在光电检测方面，本项目采用独特的测量模块，由光子计数探测器与计数单元组成。采用智能控制，样本与试剂温育结束后通过PMT自动捕获、放大光量子，进行信号转换与标准曲线法分析，得到样本中待检物的浓度数据，最快5分钟内出第一个检测结果，可连续批量加样，批量出结果。 [0004] 相对于现有毒品检测手段，本项目在准确性、快速出结果(最快5分钟出结果)、高通量、降低成本(大幅降低综合费用50％以上)、可现场操作等方面具备较大创新性，解决了毒品检测行业定性落后、手动操作繁琐、检测费用高这三个痛点，契合毒品检测的需求。 [0005] 本发明所述的毒品包括但不仅限于中06‑单乙酰吗啡、吗啡、可待因、MAMP、AMP、MDMA、MDA、MDEA、可卡因、苯甲酰爱康宁、氯胺酮、去甲氯胺酮、9‑四氢大麻酚、大麻二酚和大麻酚等。发明内容 [0006] 本发明的目的在于提供一种用于检测毛发中毒品的试剂盒及其检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。 [0007] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于检测毛发中毒品的试剂盒，包括裂解液、检测试剂； [0008] 其中裂解液包括PH在7‑9的10mM PBS缓冲液、20mM DTT以及100ug/mL的蛋白酶K； [0009] 所述检测试剂包括DNA1‑Met抗原偶联物、DNA2‑Met抗体偶联物、DNA3以及氧化石墨烯结合抗氧化剂(GO‑AOD)； [0010] 所述DNA1‑Met抗原偶联物的序列如下： [0011] SEQ ID NO.1：5’‑ACGCTGAGTTATCAACGACTTTTTTTATCACATCAGGCTCTAGCGTATGCTATTG‑NH2C7‑3’； [0012] 所述DNA2‑Met抗体偶联物的序列如下： [0013] SEQ ID NO.2：5’‑NH2C6‑TACGTCCAGAACTTTACCAAACCACACCCTTTTTTTGTCGTTGGCTGAGATTC‑3’； [0014] 所述DNA3的序列如下： [0015] SEQ ID NO.3：5’‑AE‑NH2C6‑CGATCTCAGCAACTCAGCAGCG‑3’。 [0016] 一种根据权利要求1所述的检测毛发中毒品的方法，按照先后顺序包括以下步骤： [0017] S1：试剂配制：将将20mM DTT以及100ug/mL的蛋白酶K混合入PH在7‑9的10mM PBS缓冲液中，混合均匀后得到裂解液待用，将DNA1‑Met抗原偶联物、DNA2‑Met抗体偶联物、DNA3以及氧化石墨烯结合抗氧化剂混合，其优选的浓度为1nM、10nM、0.1μM和20μg/ml，得到检测试剂，然后将检测试剂分装为200μL每管，进行冻干待用； [0018] S2：预处理：称取20mg头发，剪成3‑5mm的小段，得待测头发样品； [0019] S3：反应一：将上述步骤中得到的待测头发样品装入到试管中，然后向试管中加入2ml裂解液，常温静置5min，待用； [0020] S4：反应二：取上述步骤中200μL裂解液加入到装载检测试剂的反应管中，37℃下温育5min； [0021] S5：检测：向上述步骤反应管中加入化学发光底物，混合均匀，然后取200μL加入到化学发光仪中进行检测，得检测结果。 [0022] 优选的是，所述化学发光底物为过氧化氢和氢氧化钠。 [0023] 本发明的技术效果和优点： [0024] 1、本发明试剂盒操作简单，相较于质谱方法大大节约时间和成本； [0025] 2、采用化学发光技术，灵敏度远高于普通的胶体金和Elisa； [0026] 3、试剂为冻干状态，利于保存和运输； [0027] 4、针对毛发进行毒品检测，在5分钟左右出检测报告； [0028] 5、一次性可检验一种或多种毒品，适合筛选。附图说明 [0029] 图1为本发明的检测原理示意图； [0030] 图2为本发明的DNA1、DNA2与DNA3结合示意图。具体实施方式 [0031] 下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。 [0032] 实施例1： [0033] 毛发中甲基苯丙胺(MET)的检测： [0034] 一种用于检测毛发中毒品的试剂盒，包括裂解液、检测试剂； [0035] 其中裂解液包括PH在7‑9的10mM PBS缓冲液、20mM DTT以及100ug/mL的蛋白酶K； [0036] 检测试剂包括DNA1‑Met抗原偶联物、DNA2‑Met抗体偶联物、DNA3以及氧化石墨烯结合抗氧化剂(GO‑AOD)； [0037] DNA1‑Met抗原偶联物的序列如下： [0038] SEQ ID NO.1：5’‑ACGCTGAGTTATCAACGACTTTTTTTATCACATCAGGCTCTAGCGTATGCTATTG‑NH2C7‑3’； [0039] DNA2‑Met抗体偶联物的序列如下： [0040] SEQ ID NO.2：5’‑NH2C6‑TACGTCCAGAACTTTACCAAACCACACCCTTTTTTTGTCGTTGGCTGAGATTC‑3’； [0041] DNA3的序列如下： [0042] SEQ ID NO.3：5’‑AE‑NH2C6‑CGATCTCAGCAACTCAGCAGCG‑3’。 [0043] 一种根据权利要求1的检测毛发中毒品的方法，按照先后顺序包括以下步骤： [0044] S1：试剂配制：将将20mM DTT以及100ug/mL的蛋白酶K混合入PH在7‑9的10mM PBS缓冲液中，混合均匀后得到裂解液待用，将DNA1‑Met抗原偶联物、DNA2‑Met抗体偶联物、DNA3以及氧化石墨烯结合抗氧化剂混合，其优选的浓度为1nM、10nM、0.1μM和20μg/ml，得到检测试剂，然后将检测试剂分装为200μL每管，进行冻干待用； [0045] S2：预处理：称取20mg头发，剪成3‑5mm的小段，得待测头发样品； [0046] S3：反应一：将上述步骤中得到的待测头发样品装入到试管中，然后向试管中加入2ml裂解液，常温静置5min，待用； [0047] S4：反应二：取上述步骤中200μL裂解液加入到装载检测试剂的反应管中，37℃下温育5min； [0048] S5：检测：向上述步骤反应管中加入化学发光底物，通过HSCL‑10000化学发光仪加入200μL化学发光底物，并立即通过光电倍增管(PMT)检测该溶液的化学发光信号，检测时间3s，根据记录的化学发光值(RLU)，判断样本中是否含有甲基苯丙胺。 [0049] 具体的，化学发光底物为过氧化氢和氢氧化钠。 [0050] 实施例2： [0051] 毛发中吗啡(MOP)、可卡因(COC)、氯胺酮(KET)、大麻(THC)的检测： [0052] 一种用于检测毛发中毒品的试剂盒，包括裂解液、检测试剂； [0053] 其中裂解液包括PH在7‑9的10mM PBS缓冲液、20mM DTT以及100ug/mL的蛋白酶K； [0054] 检测试剂包括DNA1‑Met抗原偶联物、DNA2‑Met抗体偶联物、DNA3以及氧化石墨烯结合抗氧化剂(GO‑AOD)； [0055] DNA1‑Met抗原偶联物的序列如下： [0056] SEQ ID NO.1：5’‑ACGCTGAGTTATCAACGACTTTTTTTATCACATCAGGCTCTAGCGTATGCTATTG‑NH2C7‑3’； [0057] DNA2‑Met抗体偶联物的序列如下： [0058] SEQ ID NO.2：5’‑NH2C6‑TACGTCCAGAACTTTACCAAACCACACCCTTTTTTTGTCGTTGGCTGAGATTC‑3’； [0059] DNA3的序列如下： [0060] SEQ ID NO.3：5’‑AE‑NH2C6‑CGATCTCAGCAACTCAGCAGCG‑3’。 [0061] 一种根据权利要求1的检测毛发中毒品的方法，按照先后顺序包括以下步骤： [0062] S1：试剂配制：将将20mM DTT以及100ug/mL的蛋白酶K混合入PH在7‑9的10mM PBS缓冲液中，混合均匀后得到裂解液待用，将DNA1‑Met抗原偶联物、DNA2‑Met抗体偶联物、DNA3以及氧化石墨烯结合抗氧化剂混合，其优选的浓度为1nM、10nM、0.1μM和20μg/ml，得到检测试剂，然后将检测试剂分装为200μL每管，进行冻干待用； [0063] S2：预处理：称取20mg头发，剪成3‑5mm的小段，得待测头发样品； [0064] S3：反应一：将上述步骤中得到的待测头发样品装入到试管中，然后向试管中加入2ml裂解液，常温静置5min，待用； [0065] S4：反应二：取上述步骤中200μL裂解液加入到装载检测试剂的反应管中，37℃下温育5min； [0066] S5：检测：向上述步骤反应管中加入化学发光底物，通过HSCL‑10000化学发光仪加入200μL化学发光底物，并立即通过光电倍增管(PMT)检测该溶液的化学发光信号，检测时间3s，根据记录的化学发光值(RLU)，判断样本中是否含有以上毒品中的至少一种。 [0067] 具体的，化学发光底物为过氧化氢和氢氧化钠。 [0068] 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

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