一种改进的Trizol提取DNA方法
| 热词 | dna 震荡 trizol 提取 解吸 ep 离心 放入 溶液 缓冲 | ||
| 专利类型 | 发明公开 | 法律事件 | 公开; 实质审查; 撤回; |
| 专利有效性 | 无效专利 | 当前状态 | 撤回 |
| 申请号 | CN201811143794.1 | 申请日 | 2018-09-29 |
| 公开(公告)号 | CN109295047A | 公开(公告)日 | 2019-02-01 |
| 申请人 | 江苏齐耀生物科技有限公司; | 申请人类型 | 企业 |
| 发明人 | 柏锦程; 张振; | 第一发明人 | 柏锦程 |
| 权利人 | 江苏齐耀生物科技有限公司 | 权利人类型 | 企业 |
| 当前权利人 | 江苏齐耀生物科技有限公司 | 当前权利人类型 | 企业 |
| 省份 | 当前专利权人所在省份：江苏省 | 城市 | 当前专利权人所在城市：江苏省镇江市 |
| 具体地址 | 当前专利权人所在详细地址：江苏省镇江市句容市宝华镇仙林东路9号双创大厦1012 | 邮编 | 当前专利权人邮编：212400 |
| 主IPC国际分类 | C12N15/10 | 所有IPC国际分类 | C12N15/10 |
| 专利引用数量 | 2 | 专利被引用数量 | 0 |
| 专利权利要求数量 | 3 | 专利文献类型 | A |
| 专利代理机构 | 南京利丰知识产权代理事务所 | 专利代理人 | 任立; |
| 摘要 | 本 发明 专利 公布了一种改进的Trizol提取DNA方法，所需 试剂 和材料包括： 磁珠 、Trizol、氯仿、纯 乙醇 、氢 氧 化钠溶液、裂解缓冲液、清洗缓冲液、 解吸 缓冲液，所需设备包括：EP管、 真空 干燥箱、磁分离架、震荡机、离心机，DNA提取方法包括：去除 水 相、DNA 吸附 磁珠、DNA解吸磁珠。本发明对传统Trizol法进行改进，改进后的Trizol法与普通Trizol法相比，操作简便、提取DNA纯度高、节约时间、提取浓度大，一种操作简便、节约时间、提取效率高、提取 质量 好、提取量大、提取范围广的改进的Trizol提取DNA方法。 | ||
| 权利要求 | 1.一种改进的Trizol提取DNA方法，其特征在于：所需试剂和材料包括：磁珠、Trizol、氯仿、纯乙醇、氢氧化钠溶液、裂解缓冲液、清洗缓冲液、解吸缓冲液，所需设备包括：EP管、真空干燥箱、磁分离架、震荡机、离心机，所述氢氧化钠溶液浓度为3mol/L；所述解吸缓冲液根据DNA的不同进行制备，进而营造出利于DNA解吸的环境。 |
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| 说明书全文 | 一种改进的Trizol提取DNA方法技术领域[0001] 本发明涉及DNA提取领域，尤其涉及改进的Trizol提取DNA方法。 背景技术[0002] 随着现代科技的不断发展，DNA的相关技术也在不断进步，DNA的许多研究已不仅仅局限于生物科技和医疗领域，DNA的检查早已在法医学中得到应用，并成为法庭审判的主要证据。 [0003] 在现在的案件侦破中，由于科技的发展，犯案手段也越来越隐匿，加上对证据的要求越来越严谨，使得侦破难度加大，但人体的生物特征不会轻易改变，因此从犯罪现场取得DNA样本，并进行DNA提取，以作为指证罪犯的证据，已成为现在案件侦破中必不可少的一部分，且对犯人进行DNA提取，并建立DNA库，可快速发现有前科的嫌疑人，加快案件的侦破。 [0004] DNA不仅在案件侦破过程中发挥着重要作用，在生物科技和医疗领域亦有着不可替代的地位，通过对DNA进行分析和研究，可深入探索生物体的各项性状，发现生物的各项特征，甚至一些人们以前未发现的生物本能，对生物的诸多行为做出解释并加以利用，可提前发现会引起不正常病变的DNA并提前做出应对措施，甚至可利用其他生物的DNA来弥补人体缺陷，使得医疗水平得到提高，人们身体健康得到保障，能够得到更加健康的生活。 [0005] DNA在生物科技、医疗以及案件侦破中都有着重要作用，但无论是在何种领域发挥着怎样的作用，都必须要经过提取才能进行后续工作，因此，DNA的提取与分离就成为了一项重要环节，目前的DNA提取方法主要分为物理方法、化学方法以及生物方法，但这些方法的传统措施已逐渐不能满足DNA在相关领域的应用需要，传统方法已逐渐被后来出现的磁珠法所替代，磁珠法是利用磁珠在一定条件下对DNA具有极强的吸附能力，但在一定条件下又会发生强烈的解吸的特点，先改变条件使得DNA吸附在磁珠表面，然后再转移磁珠并改变条件是DNA与磁珠发生强烈的解吸，进而获得DNA，但对于磁珠法的具体措施仍未出现统一认可的方案，仍需不断完善。 发明内容[0006] 本发明的目的是解决DNA提取过程中提取步骤复杂、提取过程花费时间长、提取的DNA质量差且提取量少的问题，提供一种操作简便、节约时间、提取效率高、提取质量好、提取量大、提取范围广的改进的Trizol提取DNA方法。 [0007] 本发明所采用的技术方案：一种改进的Trizol提取DNA方法，所需试剂和材料包括：磁珠、Trizol、氯仿、纯乙醇、氢氧化钠溶液、裂解缓冲液、清洗缓冲液、解吸缓冲液，所需设备包括：EP管、真空干燥箱、磁分离架、震荡机、离心机，所述氢氧化钠溶液浓度为3mol/L；所述解吸缓冲液根据DNA的不同进行制备，进而营造出利于DNA解吸的环境；所述真空干燥箱用于对磁珠进行干燥处理，去除其表面液体；所述磁分离架用于进行磁珠与溶液的分离； 所述震荡机为漩涡震荡机，用于进行溶液震荡，以便充分混合与反应；所述离心机主要进行溶液的离心处理。 [0008] 本发明一种改进的Trizol提取DNA方法具体实施如下： [0009] (一)去除水相：将待提取DNA的样本放入EP管，并将Trizol加入EP管中，将EP管放入震荡机充分震荡8分钟，使溶液充分混合，然后加入氯仿再震荡20s，之后室温下静置5分钟，再将EP管放入离心机中，在1300倍重力、5℃的条件下进行10分钟离心，离心后溶液出现分层，分层的上层为水相层，将水相层去除，保留剩余层； [0010] (二)DNA吸附磁珠：向步骤(一)保存剩余层的EP管中加入摩尔浓度为3mol/L的氢氧化钠，并混合均匀静置5分钟，再计入冰的纯乙醇，然后放入离心机中以1300倍重力的离心力离心处理3分钟，并在室温下静置使DNA发生沉淀，然后向溶液中计入裂解缓冲液，混合均匀后再加入磁珠，并将溶液放入震荡机进行充分震荡，在静置5分钟后放入磁分离架，去除上清液，保留磁珠，则DNA便吸附在磁珠表面； [0011] (三)DNA解吸磁珠：向装有步骤(二)所得磁珠的EP管中加入清洗缓冲液，然后在震荡机中震荡，再利用磁分离架进行分离去除上清液，并再重复加入清洗缓冲液、震荡、去除上清液两次，将磁珠放入干燥箱真空干燥5小时，再取出并加入解吸缓冲液，并用震荡机进行充分震荡，震荡完成后放入磁分离架进行磁分离，保留上清液，DNA解吸结束，同时即可完成DNA的提取。 [0012] 所述步骤(一)待提取DNA的样本为预先制备的，在其制备过程中根据样本来源的不同，采取不同的工艺进行制备，以便进行后续的DNA提取工作。 [0013] 本发明的有益效果：(1)本发明对传统Trizol法进行改进，改进后的Trizol法与普通Trizol法相比，DNA的提取纯度更高，浓度也更大；(2)改进后的Trizol法可对任何含有DNA的物质进行提取，提取范围广；(3)简化了操作步骤，使得提取过程节约时间、操作简便、提取效率高。附图说明 [0014] 图1是本发明方法步骤的流程示意图。具体实施方式： [0015] 下面结合附图与具体实例对本发明进行详细说明。 [0016] 本发明结合实例进行说明，所需试剂和材料包括：磁珠、Trizol、氯仿、纯乙醇、氢氧化钠溶液、裂解缓冲液、清洗缓冲液、解吸缓冲液，所需设备包括：EP管、真空干燥箱、磁分离架、震荡机、离心机，所述氢氧化钠溶液浓度为3mol/L；所述真空干燥箱用于对磁珠进行干燥处理，去除其表面液体；所述磁分离架用于进行磁珠与溶液的分离；所述震荡机为漩涡震荡机，用于进行溶液震荡，以便充分混合与反应；所述离心机主要进行溶液的离心处理。 [0017] 本发明一种改进的Trizol提取DNA方法具体实施如下： [0018] (一)去除水相：将待提取DNA的样本放入EP管，并将Trizol加入EP管中，将EP管放入震荡机充分震荡8分钟，使溶液充分混合，然后加入氯仿再震荡20s，之后室温下静置5分钟，再将EP管放入离心机中，在1300倍重力、5℃的条件下进行10分钟离心，离心后溶液出现分层，分层的上层为水相层，将水相层去除，保留剩余层； [0019] (二)DNA吸附磁珠：向步骤(一)保存剩余层的EP管中加入摩尔浓度为3mol/L的氢氧化钠，并混合均匀静置5分钟，再计入冰的纯乙醇，然后放入离心机中以1300倍重力的离心力离心处理3分钟，并在室温下静置使DNA发生沉淀，然后向溶液中计入裂解缓冲液，混合均匀后再加入磁珠，并将溶液放入震荡机进行充分震荡，在静置5分钟后放入磁分离架，去除上清液，保留磁珠，则DNA便吸附在磁珠表面； [0020] (三)DNA解吸磁珠：向装有步骤(二)所得磁珠的EP管中加入清洗缓冲液，然后在震荡机中震荡，再利用磁分离架进行分离去除上清液，并再重复加入清洗缓冲液、震荡、去除上清液两次，将磁珠放入干燥箱真空干燥5小时，再取出并加入解吸缓冲液，并用震荡机进行充分震荡，震荡完成后放入磁分离架进行磁分离，保留上清液，DNA解吸结束，同时即可完成DNA的提取。 [0021] 所述步骤(一)待提取DNA的样本为预先制备的，在其制备过程中根据样本来源的不同，采取不同的工艺进行制备，以便进行后续的DNA提取工作。 |
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