来自鱼孵化液的化妆品组合物,其产生方法和其用于改善皮肤的美容外观的用途

申请号 CN201380067448.9 申请日 2013-12-19 公开(公告)号 CN105007990A 公开(公告)日 2015-10-28
申请人 阿克生物科技公司; 发明人 汉斯·克里斯蒂安·莱伦;
摘要 本 发明 涉及获得或可获取自鱼孵化液的 化妆品 组合物,产生所述组合物的方法和它们在对 皮肤 的各种美容中的用途,尤其用于减少或 预防 哺乳动物 的皮肤中的皱纹、细线、色素沉着过度、松弛、干燥皮肤、脱屑和/或经表皮 水 分丧失的美容外观或出现。
权利要求

1.减少或预防哺乳动物皮肤中皱纹、细线、色素沉着过度、松弛、干燥皮肤、脱屑和/或经表皮分丧失的美容外观或出现的方法,所述方法包括施用化妆品组合物至所述动物,其中所述组合物通过包括至少下述步骤的方法获得或可获得:
a)使鱼卵悬浮在最小体积的水中,其中所述卵不是鲑科卵;
b)诱导所述卵的同步快速孵化,优选地使得对于多于80%的胚胎在小于6小时内完成孵化;
c)任选地过滤孵化的卵,以获得孵化液;和
d)过滤b)或c)的孵化液,以获得组合物,其中过滤孵化液的步骤包括至少下述步骤:
(i)使用孔径大小为至少5μm的过滤器过滤孵化液,和收集滤液;
(ii)使用孔径大小为0.30-0.60μm的过滤器过滤来自步骤(i)的滤液,和收集滤液;
(iii)通过使用排阻尺寸小于15kDa的过滤器进行渗滤,用药学上可接受的缓冲液替换来自步骤(ii)的滤液中的水;
(iv)使用孔径大小为0.15-0.30μm的过滤器过滤来自步骤(iii)的溶液,和收集滤液;和
(v)从来自步骤(iv)的滤液制备所述化妆品组合物。
2.权利要求1所述的方法,其中所述方法用于减少或预防皱纹和/或松弛的美容外观或出现。
3.权利要求1或2所述的方法,其中:
a)步骤(i)中所述过滤器的孔径大小是5-15μm,其中优选地该孔径大小是7μm;
b)步骤(ii)中过滤器的孔径大小是0.35-0.55μm,其中优选地该孔径大小是
0.45μm;和/或
c)步骤(v)中过滤器的孔径大小是0.22μm。
4.权利要求1至3任一项所述的方法,其中卵来自选自下述任何总目的鱼,所述总目选自由下述组成的列表:骨舌总目(Osteoglossomorpha)、海鲢总目(Elopomorpha)、鲱形总目(Clupeomorpha)、骨鳔总目(Ostariophysi)、原棘鳍总目(Protacanthopterygii)(不包括来自鲑科的鱼)、巨口鱼总目(Stenopterygii)、圆鳞总目(Cyclosquamata)、灯笼鱼总目(Scopelomorpha)、月鱼总目(Lampridiomorpha)、须鳂总目(Polymyxiomorpha)、副棘鳍总目(Paracanthopterygii)和棘鳍总目(Acanthopterygii)。
5.权利要求4所述的方法,其中所述鱼来自下述任何目,所述目选自由下述组成的列表:骨舌鱼目(Osteoglossiformes)、月眼鱼目(Hiodontiformes)、海鲢目(Elopiformes)、北梭鱼目(Albuliformes)、棘背鱼目(Notacanthiformes)、鳗形目(Anguilliformes)、囊咽鱼目(Saccopharyngiformes)、鲱形目(Clupeiformes)、鼠鱚目(Gonorynchiformes)、鲤目(Cypriniformes)、脂鲤目(Characiformes)、电鳗目(Gymnotiformes)、鲇形目(Siluriformes)、水珍鱼目(Argentiniformes)、鲑目(Salmoniformes)(不包括来自鲑科的鱼)、狗鱼目(Esociformes)、胡瓜鱼目(Osmeriformes)、辫鱼目(Ateleopodiformes)、巨口鱼目(Stomiiformes)、仙女鱼目(Aulopiformes)、灯笼鱼目(Myctophiformes)、月鱼目(Lampriformes)、须鰃目(Polymixiiformes)、鲑鲈目(Percopsiformes)、蟾鱼目(Batrachoidiformes)、鮟鱇目(Lophiiformes)、鳕形目(Gadiformes)、鼬鱼目(Ophidiiformes)、鲻形目(Mugiliformes)、汉鱼目(Atheriniformes)、颌针鱼目(Beloniformes)、鲸口鱼目(Cetomimiformes)、鳉形目(Cyprinodontiformes)、奇鲷目(Stephanoberyciformes)、金眼鲷目(Beryciformes)、海鲂目(Zeiformes)、喉盘鱼目(Gobiesociformes)、刺鱼目(Gasterosteiformes)、海龙目(Syngnathiformes)、合鳃鱼目(Synbranchiformes)、鲀形目(Tetraodontiformes)、鲽形目(Pleuronectiformes)、鲉形目(Scorpaeniformes)、鲈形目(Perciformes)和鲟形目(Acipenseriformes)。
6.权利要求5所述的方法,其中鱼来自下述任何科,所述科选自由下述组成的列表:鲤科(Cyprinidae)、慈鲷科(Cichlidae)、巨鲶科(Pangasiidae)、石首鱼科(Sciaenidae)、鮨科(Serranidae)、鲹科(Carangidae)、鲷科(Sparidae)、花鲈科(Lateolabracidae)、狼鲈科(Moronidae)、鲻科(Mugilidae)、尖吻鲈科(Latidae)、塘鳢科(Eleotridae)和鲟科(Acipenseridae)。
7.权利要求6所述的方法,其中鱼是下述物种,所述物种选自由下述组成的列表:
草鱼(Ctenopharyngodon idella)、银鲤(Hypophthalmichthys molitrix)、卡特拉鱼(Catla catla)、鲤鱼(Cyprinus carpio)、胖头鱼(Hypophthalmichthys nobilis)、鲫鱼(Carassius carassius)、尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus niloticus)、鲶鱼(Pangasius pangasius)、露斯塔野鲮(Labeo rohita)、大黄鱼(Larimichthys crocea)、巨石斑鱼(Epinephelus tauvina)、鰤鱼(Seriola quinqueradiata)、金头鲷(Sparus aurata)、日本真鲈(Lateolabrax japonicus)、欧洲黑鲈(Dicentrarchus labrax)、银鲷(Chrysophrys auratus)、乌鲻(Mugil cephalus)、澳洲鱼(Lates calcarifer)、笋壳鱼(Oxyeleotris marmorata)、莫桑比克口孵非鲫(Oreochromis mossambicus)、西伯利亚鲟(Acipenser baerii)和多瑙河鲟鱼(Acipenser gueldenstaedtii)。
8.权利要求1至7任一项所述的方法,其中所述皮肤是老化的皮肤。
9.权利要求1至8任一项所述的方法,其中所述动物的皮肤是湿润的。
10.权利要求1至8任一项所述的方法,其中所述化妆品组合物用于局部施用至皮肤。
11.如权利要求1至7任一项所述的化妆品组合物,其用于减少或预防哺乳动物皮肤的皱纹、细线、色素沉着过度、松弛、干燥皮肤、脱屑和/或经表皮水分丧失的美容外观或出现,优选地其中所述皮肤如权利要求8中限定,所述皮肤的美容外观如权利要求9中限定和/或所述施用如权利要求10中限定。
12.如权利要求1至7任一项所述的化妆品组合物在制备用于减少或预防哺乳动物皮肤的皱纹、细线、色素沉着过度、松弛、干燥皮肤、脱屑和/或经表皮水分丧失的美容外观或出现的药物中的用途,优选地其中所述皮肤如权利要求8中限定,所述皮肤的美容外观如权利要求9中限定和/或所述施用如权利要求10中限定。
13.制备化妆品组合物的方法,其包括至少下述步骤:
a)使鱼卵悬浮在最小体积的水中,其中所述卵不是鲑科卵;
b)诱导所述卵的同步快速孵化,优选地使得对于多于80%的胚胎在小于6小时内完成孵化;
c)过滤孵化的卵,以获得孵化液;和
d)过滤c)的孵化液,以获得组合物,其中过滤孵化液的步骤包括至少下述步骤:
(i)使用孔径大小为至少5μm的过滤器过滤孵化液,和收集滤液;
(ii)使用孔径大小为0.30-0.60μm的过滤器过滤来自步骤(i)的滤液,和收集滤液;
(iii)通过使用排阻尺寸小于15kDa的过滤器进行渗滤,用药学上可接受的缓冲液交换来自步骤(ii)的滤液中的水;
(iv)使用孔径大小为0.15-0.30μm的过滤器过滤来自步骤(iii)的溶液,和收集滤液;和
(v)从来自步骤(iv)的滤液制备所述化妆品组合物。
14.如权利要求1-7或13任一项所述的方法,其中对于多于95%的胚胎,孵化在小于
2小时内完成。
15.权利要求1至12任一项所述的方法、用途或化妆品组合物,其中所述化妆品组合物被涂布、浸渍或化学结合在产品、材料或设备上。
16.可获自权利要求1至7、13或14任一项所述的方法的化妆品组合物。
17.涂布、浸渍或化学结合有权利要求16所述的组合物的产品、材料或设备。

说明书全文

来自鱼孵化液的化妆品组合物,其产生方法和其用于改善

皮肤的美容外观的用途

[0001] 本发明涉及制备组合物的方法,所述组合物包括多肽或多肽部分,其源自鱼孵化液,和其在对皮肤的各种应用中的用途。尤其,组合物用于改变,优选地改善老化皮肤的美容外观。
[0002] 皮肤是身体更容易受伤害的器官之一。皮肤持续直接或间接与外界刺激相互作用,并且频繁暴露于,和受环境试剂的影响。事实上,皮肤可视为与外界的第一接触点。该持续暴露可导致对皮肤不愉快的和/或有害的物理和可见的改变,尤其对皮肤的美容外观。尽管这样的改变可不威胁个体的健康,但是这样的改变可能是身体上不舒服或视觉上讨厌的。的确,因为皮肤是可见的,皮肤外观的改变可导致心理压。所以持续需要和要求有效的治疗,以维持、恢复或改善皮肤病况,和尤其恢复年轻的皮肤外观。
[0003] 皮肤形成身体的最大器官,占人体重的约12-16%。其起到许多关键的作用,作为外界和身体内受控的环境之间的屏障和调节影响。
[0004] 皮肤由3层,即表皮、真皮和下皮层组成。表皮是皮肤的最上上皮层。其用作物理屏障,防止从身体的丧失,和防止物质和生物体进入身体。其厚度根据身体的位点而改变。
[0005] 表皮由复层鳞状的上皮细胞组成,即其由扁平细胞层组成。皮肤、头发和指甲是质化的,意思是它们具有由称为角蛋白的蛋白质组成的死的、硬化的疏水表面。表皮是不可渗透的,原因是其与角质细胞关联的细胞外脂质的含量,尤其在表皮的中层(透明层)。粘膜(例如食道粘膜、口腔咽腔粘膜、生殖器官粘膜和其他的粘膜)主要是非角质化的和潮湿的。表皮具有三种主要类型的细胞,即角质细胞(皮肤细胞)、黑色素细胞(产色素细胞)和朗格汉斯细胞(免疫细胞)。默克尔细胞是第四较不流行的表皮细胞。
[0006] 随着角质细胞它们向外移动,与角蛋白的积聚一起角质细胞成熟的和分化。它们最终脱落或擦掉。它们形成四个或五个不同的层,其从最外至最深是(i)角质层(表皮角质层),其具有没细胞核的死、干燥的硬细胞,(ii)颗粒层(粒层),其具有包含嗜性颗粒的细胞并且向外通过薄的透明层与角质层分开,(iii)棘层(尖头、刺状或棘细胞层),其中随着它们向上移动细胞逐渐变成扁平的和(iv)基底层(基层),其具有柱状(高的)再生细胞。
[0007] 就在表皮之下是基底膜,位于表皮和真皮之间的结构专用结构。
[0008] 真皮是皮肤的纤维结缔组织或支持层。主要纤维是相互编织的胶原纤维和弹性蛋白。
[0009] 下皮层是就在真皮和表皮下方的脂肪层。其也称为皮下组织,下皮组织或膜。下皮层由脂肪细胞(脂细胞)、神经和血管组成。
[0010] 新上皮皮肤细胞在皮肤的下层、颗粒层中产生。随着时间的推移,细胞迁移至皮肤的表面并且变得更加酸性的。在它们30天的旅程期间,它们死亡并且充满角蛋白。角蛋白和相关的脂质是重要的,因为它们保护皮肤避免外侧成分。
[0011] 许多因素可使得皮肤的美容外观劣化,包括疾病、损伤、环境因素、年龄、激素水平、药物、外部施加的或摄入的物质、遗传情况或这些和其他因素的组合。年龄相关的皮肤的美容外观劣化是普遍因素,尤其光老化,即光致皮肤老化(Dermatoheliosis)。该劣化可见于皮肤的不规则或异常,其可出现为,例如干燥皮肤、皱纹、细线、增加松弛(下垂)或改变色素沉着。
[0012] 光老化是用于表征慢性UVA和UVB暴露诱导的改变的术语。处理代谢压力的生物功能和能力的劣化是老化过程的一个主要结果。老化是复杂的渐进过程,其也导致皮肤的功能和美学改变。
[0013] 光老化是因为将皮肤持续、长期暴露于约245-290nm紫外(UV)辐射的皮肤老化过程,所述紫外(UV)辐射可以来自自然光或合成光。光老化因此也称为UVA和UVB射线造成的皮肤老化,尤其是面部、朵、颈和手的老化。
[0014] 干燥和/或脱屑皮肤是一种最常见的老化皮肤的信号。尽管某些个体更容易遭受干燥和/或脱屑皮肤,燥和/或脱屑皮肤的外观可影响任何人,无论年龄、性别或皮肤类型。
[0015] 当皮肤外层(具有透明层的角质层)缺水,即经表皮水分丧失(TEWL)时出现干燥皮肤。当该层充分湿润时,使得通过皮肤的水分丧失最小化并且有助于抵抗刺激物、过敏原和细菌。但是,当角质层干燥时,其保护功能降低。这使得更多的水分丧失,使得皮肤更容易遭受环境因素的影响。
[0016] 理想上,角质层的水含量为10%至30%。该水分赋予皮肤其柔软、平滑和柔性质地,即与年轻的皮肤外观关联的特征。水分来自大气、皮肤的下层和汗液。通过皮肤腺产生的油和通过皮肤细胞产生的脂肪物质用作天然保湿剂,允许角质层密封在水中。
[0017] 身体持续从皮肤表面通过蒸发丧失水分(TEWL)。在正常情况下,丧失速度缓慢,和水充分被替换。当水分丧失超过水分替换,并且角质层的水含量下降低于10%时,出现干燥皮肤的特征性信号和症状。
[0018] 非常需要改善或根除干燥和/或脱屑皮肤,从而改善皮肤的美容外观的保湿剂。尽管许多保湿剂是本领域已知的,仍需要有效且温和的天然产物。
[0019] 展示非期望的或过度色素沉着,即色素沉着过度,例如雀斑的表皮细胞是老化皮肤的另一常见信号。传统剥离可用于去除对皮肤的美容外观有害的表皮细胞。
[0020] 剥离去除表皮的外层显示下方更新的皮肤细胞。剥离可通过物理手段(即皮肤的磨损)或通过化学手段实现。化学去角质剂包括擦洗剂,其包含水杨酸、乙醇酸、水果酶、柠檬酸或苹果酸并且可通过皮肤科医生以高浓度施用,或在非处方产物中以低浓度施用。化学剥离可涉及使用包含α羟基酸(AHAs)或β羟基酸(BHAs)的产物,或用于使在细胞连接处将细胞保持在一起的胶样物质松弛的酶,允许它们容易去除。该类型的剥离被推荐用于人们治疗痤疮。
[0021] 剥离的最大劣势是用于实现剥离的一些产物和方法的昂贵价格。剥离将导致皮肤的一些初始泛红。接近化学剥离结束时,霜冻皮肤,皮肤表面的颜色从亮白色变化为灰色。
[0022] 因此,需要减少皮肤的色素沉着过度比剥离对皮肤更温和的有效方法。
[0023] 因此,仍需要适于促进美学皮肤外观的产物和疗法。换句话说,需要改善皮肤的美容外观的产物和方法。尤其,需要恢复老化皮肤的年轻的外观和/或抵抗老化皮肤的信号的产物和方法。
[0024] 现在已经令人吃惊地发现包括出现在鱼孵化液中的分子即多肽或多肽部分的组合物显著有效改善皮肤的美容外观,尤其减少与老化皮肤相关的物理信号或症状。
[0025] 通常称为孵化酶的各种酶促进来自卵生脊椎动物生物体,例如鱼、两栖动物、和爬行动物的胚胎的孵化,所述酶能够部分或完全降解蛋壳的蛋白质部分。所有脊椎动物的卵母细胞具有特征性细胞外包膜,称为卵黄包膜,蛋壳或绒膜(本文可替换使用),其通过各种多肽的交联形成。具有不同特异性的蛋白酶作用在绒膜上,软化腐蚀和/或分解(即降解)蛋壳并且利于胚胎的释放。因此,在孵化过程期间从卵释放的流体和/或孵化胚胎的流体(即孵化液)包括大量的多肽和多肽部分,即降解产物。
[0026] 包括源自鲑科孵化液的蛋白质和多肽部分的组合物令人吃惊地发现对皮肤的美容外观具有显著作用。尽管不希望被理论限制,实施例表明包括鲑科孵化液多肽和多肽部分的组合物能够恢复年轻的皮肤外观。来自其他鱼的孵化液包含功能上与来自鲑科的孵化液中出现的多肽相同的多肽。认为本文限定的组合物中多肽和多肽部分的组合(认为其包括至少50个不同的多肽或多肽部分)可与皮肤的真皮和表皮中出现的不同类型的蛋白质相互作用。相信多肽和多肽部分的组合可协同作用并且这些相互作用可至少部分,负责组合物对皮肤的美容/美学外观的作用。
[0027] 因此,最宽泛地,本发明可涉及提供包括源自鱼孵化液的多肽和多肽部分的组合物,其中组合物不是获得或可获得自鲑科孵化液。尤其组合物用于促进美学皮肤外观或用于促进美学皮肤外观的方法中。换句话说,如本文所描述的组合物用于改善皮肤的美容外观,或用于改善皮肤的美容外观的方法。在尤其优选的方面中,本发明可视为提供包括源自鱼孵化液,不包括鲑科孵化液的多肽和多肽部分的组合物,如本文所描述,用于恢复老化皮肤的年轻的外观和/或抵抗老化皮肤的信号或用于恢复老化皮肤的年轻的外观和/或抵抗老化皮肤的信号的方法。上面提到的组合物本文也称为“孵化液提取物”。除了多肽和多肽部分,所述提取物可包括天然非蛋白质材料。
[0028] 从下面的公开内容可见包括源自鱼孵化液的多肽和多肽部分的组合物,其不是获得或可获得(即起源)自鲑科孵化液,如本文所描述,可提供为化妆品组合物,其包括一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂。
[0029] 因此,在一个方面中,本发明提供从鱼孵化液制备如本文所描述的化妆品组合物的方法,其中所述孵化液不是鲑科孵化液,所述方法包括至少下述步骤:
[0030] a)使鱼卵悬浮在最小体积的水(例如等于或小于卵的体积)中,其中所述卵不是鲑科卵;
[0031] b)诱导所述卵的同步快速孵化(优选地使得对于大于80%的胚胎在小于6小时内完成孵化);
[0032] c)任选地过滤孵化的卵,以获得孵化液;和
[0033] d)过滤b)或c)的孵化液,以获得组合物,其中过滤孵化液的步骤包括至少下述步骤:
[0034] (i)使用过滤器过滤孵化液,和收集滤液,所述过滤器的孔径大小为至少5μm,优选地5-15μm,和尤其优选地孔径大小为7μm;
[0035] (ii)使用过滤器过滤来自步骤(i)的滤液,和收集滤液,所述过滤器的孔径大小为0.30-0.60μm,优选地孔径大小为0.35-0.55μm,尤其优选地0.40-0.50μm,最优选地0.45μm;
[0036] (iii)用药学上或美容可接受的缓冲液交换来自步骤(ii)的滤液中的水;
[0037] (iv)使用过滤器过滤获得自步骤(iii)的溶液和收集滤液,所述过滤器的径大小为0.15-0.30μm,优选地孔径大小为0.22μm;和
[0038] (v)从来自步骤(iv)的滤液制备所述化妆品组合物。
[0039] 如本文所提及,“孵化液”是在孵化过程期间从卵释放的流体并且可以为粗、稀释的或过滤形式。粗孵化液指未稀释的、未处理的流体。稀释孵化液指在孵化期间或之后可能已经与其他流体混合的孵化液。
[0040] 本发明也提供了通过本文所述的方法获得或可获得的化妆品组合物。
[0041] 交换滤液中水的步骤可使用本领域已知的任何适当的方法进行,例如渗滤或透析。在尤其优选的实施方式中,该步骤使用渗滤使用过滤器进行,所述过滤器的排阻尺寸小于15kDa,优选地10kDa或更小,例如9、8、7、6、5、4、3kDa或更小。
[0042] 渗滤使用超滤膜,以从溶液去除例如盐或其他有害的或非期望的微溶质或作为交换溶液的溶剂,例如缓冲液的方式。小分子与溶液分开,而将更大的分子保留在截留物质(不穿过过滤器的材料)中。微溶质和溶剂,例如水,一般容易冲洗通过膜。通常约3体积的渗滤溶剂(例如磷酸缓冲生理盐水)消除95%的微溶质。因此,来自步骤(ii)的上述滤液初始通过渗滤处理和这导致截留物质的浓度与穿过膜的溶液(其包含孵化液的可溶性杂质/有害的组分)成比例。然后用药学上可接受的缓冲液稀释截留物质,例如0.5mM磷酸钠和1mM氯化钠、磷酸缓冲盐溶液等。如果需要,稀释截留物质可进行重复轮的渗滤。典型地,在步骤(iv)之前,稀释截留物质使得来自步骤(iv)的滤液的酶活性为3000-5000mU/L,优选地3000-4000mU/L和最优选地约3400mU/L。可通过滤液切割因子Xa显色底物(CH3OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA-AcOH,Sigma aldrich产品编号:F3301-25MG)的能力测量滤液的酶活性。在渗滤步骤之前,孵化液可包括10至150,000mU/L范围的酶活性。一单位(1U)可定义为每分钟催化1μmol的底物转化需要的酶量。
[0043] 孵化液中存在的酶切割因子Xa显色底物(Sigma-Aldrich),产生黄色产物,其可使用波长为405nm的分光技术分析方便地测量。典型的试验包括添加100μl获取自上述方法步骤(iii)的孵化液溶液至600μl底物溶液,其包括10μl因子Xa显色底物(milli-q或蒸馏水中10mg/ml),70μl 0.2M Tris-HCl pH 8.5和520μl dH2O。便利地,吸光度的改变可测量5-20分钟(或对于低酶活性的样品多达一小时),通常10分钟。结果乘以适当的系数,例如10(对于10分钟试验),以获得每1ml样品的酶活性。其他适当的和等同的底物可用于确定孵化液的活性。
[0044] 如上述,在一些实施方式中使卵孵化的步骤同步可能是有利的,以使获得的孵化液的量最大化,尤其孵化液中期望的多肽或其部分的量最大化,用于纯化。同步的孵化可通本领域已知的任何适当的方法实现。例如,可使用光控制,例如将卵从光(其抑制孵化)转移至没有光的条件下,使一些卵同步。控制卵的温度,例如孵化卵的溶液的温度,孵化环境的脱,例如孵化卵的溶液的脱氧(Oppen-Berntsen等1990,Aquacultrue,86,417-430页),增加孵化环境中二氧化的量,和用电刺激卵可也用于产生同步的孵化。在一些实施方式中,同步的孵化可使用信息素实现,例如能够影响,即刺激,胚胎发育和孵化的肽信息素。如上述,卵可悬浮在最小体积的水中,其可等于卵的体积或更少,例如对于每1ml的卵,可使用≤1、0.75、0.5、0.25ml的悬浮液体,例如0.5至1ml。在优选的实施方式中,所述卵的同步快速孵化使得对于大于80%的胚胎在小于6小时内完成孵化。在尤其优选的实施方式中,孵化在小于5、4、3或2小时,比如0.5-6小时,1-5小时,1.5-4小时,2-3小时,例如1-2小时内完成。此外,在一些实施方式中,对于大于85%、90%或95%的胚胎,例如大于90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%的胚胎,孵化在上述时间内完成。
[0045] 在一些实施方式中,稀释孵化液可能是有利的,利于随后纯化步骤,例如降低孵化液的粘度。因此,方法可包括稀释孵化液的进一步步骤然后步骤(d)。优选地滤液可可被稀释的倍数为:至少0.1、0.2、0.5、0.75、1.0、1.5、2、3、4、5、10、15、20、50、100、1000、5000或10000。
[0046] 制备上述化妆品组合物的方法产生富集的制品,其优选地基本上不含源自来源材料或用于分离程序的材料的任何污染组分,例如粗孵化液中包含的多肽或多肽部分之外的组分。在优选的实施方式中,通过制备方法的过程,与开始孵化液相比,组合物可富集至多肽和多肽部分大于30、40、50或60%,例如>70、80或90%的纯度的程度,纯度以w/w(干重)计,即90%的纯度指丢失90%的开始材料(污染组分)。但是,可使用具有更低纯度,例如保留大于40、50、60、70、80或90%的开始材料的组合物。
[0047] 尽管滤液本身可形成化妆品组合物,任选地获得或可获得自上述方法的产物(步骤(iv)的滤液)可被稀释(或浓缩)至适当的浓度,以产生化妆品组合物和/或然后其在步骤(v)中用于本发明的方法和用途。因此,方法可包括稀释(或浓缩)组合物的进一步步骤。优选地,滤液可被稀释(或浓缩)的倍数为至少1.5、2、3、4、5、10、15、20、50、100、
1000、5000或10000。尤其优选地,终组合物包括0.5-10%,例如0.5-5%,优选地0.5-3%(例如1或3%)的步骤(iv)的滤液。在尤其优选的实施方式中,稀释或浓缩来自上述方法步骤(iii)的溶液,以实现酶活性为1000-10000mU/L的溶液,如通过上述方法测量。优选地,溶液,和所以来自步骤(iv)的滤液包括的活性为2000-10000、3000-9000、3000-7000、
3000-6000、3000-5000或3000-4000mU/L。最优选地溶液包括的活性为约3400mU/L。
[0048] 任选地,一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂可添加至获得或可获得自上述方法的产物。因此,方法可包括在步骤(v)期间,添加一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂至组合物或将组合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂结合的进一步步骤。可选的或另外制备方法步骤包括改变或修饰溶剂,例如pH,离子浓度等。
[0049] 其他药学上可接受的组分或成分可添加至获得或可获得自上述方法的产物,例如在步骤(v)期间。一个或多个其他组分可以是活性组分,即对皮肤有作用,优选地也用于促进美学皮肤外观或改善皮肤的美容外观,例如在本文所述的美容标志中的组分。因此,可选地或另外,方法可包括在步骤(v)中将一种或多种药学上可接受的活性组分添加至组合物或将组合物与一种或多种药学上可接受的活性组分组合的进一步步骤。药学上可接受的活性组分可包括矿物质、维生素、酶、蛋白质、肽、基酸、脂质、抗氧化剂、多糖、适合作为防晒剂的物质、化学去角质剂、其提取物和混合物,如下面更详细描述。
[0050] 获得或可获得自上述方法的化妆品组合物适合用于本发明的方法,如本文其他地方描述。尤其,化妆品组合物用于改善哺乳动物中的皮肤的美容外观。
[0051] 本发明也提供了改善哺乳动物的皮肤的美容外观的方法,其中如上定义的化妆品组合物施用至所述动物。
[0052] 本发明的进一步方面是如上定义的化妆品组合物在制造用于改善哺乳动物的皮肤的美容外观的药物中的用途。
[0053] 如本文提及的,“多肽”是优选地大于50、100、150、200或250个残基和/或小于500、400、300、200或100个残基或其中选择范围的分子。如本文所提及,“部分”优选地包括其所源自序列的至少30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、
190、200、210、220、230、240或更多个氨基酸。所述部分可获得自序列的中心或氮末端或C末端部分。
[0054] 如本文所定义的组合物可获得自任何鱼卵,不包括鲑科卵,即本发明的组合物不获得或可获得自鲑科卵,例如来自斑鳟(Salmo)和大麻哈鱼(Oncorhynchus)亚科,比如大西洋鲑鱼(Salmo salar)或太平洋鲑鱼(Oncorhynchus masou)的卵。一般而言,在母体和鱼卵中几乎未经历或未经历其他胚胎发育的产卵鱼因此表示有用的孵化液来源,从其中本发明的化妆品组合物可通过本文所述的方法获得或可获得。因此,可提供作为开始材料的卵,用于本发明方法的适当的鱼包括真骨鱼(Teleostei)下纲的任何鱼,其是辐鳍鱼(Actinopterygii)纲的三个下纲之一,不包括来自鲑(Salmondiae)科的鱼。因此,鱼可选自任何总目的鱼,所述总目选自由下组成的列表:骨舌总目(Osteoglossomorpha)、海鲢总目(Elopomorpha)、鲱形总目(Clupeomorpha)、骨鳔总目(Ostariophysi)、原棘鳍总目(Protacanthopterygii)(不包括来自鲑科的鱼)、巨口鱼总目(Stenopterygii)、圆鳞总目(Cyclosquamata)、灯笼鱼总目(Scopelomorpha)、月鱼总目(Lampridiomorpha)、须鳂总目(Polymyxiomorpha)、副棘鳍总目(Paracanthopterygii)和棘鳍总目(Acanthopterygii)。
[0055] 在一些实施方式中,鱼可选自任何目的鱼,所述目选自由下组成的列表:骨舌鱼目(Osteoglossiformes)、月眼鱼目(Hiodontiformes)、海鲢目(Elopiformes)、北梭鱼目(Albuliformes)、棘背鱼目(Notacanthiformes)、鳗形目(Anguilliformes)、囊咽鱼目(Saccopharyngiformes)、鲱形目(Clupeiformes)、鼠鱚目(Gonorynchiformes)、鲤目(Cypriniformes)、脂鲤目(Characiformes)、电鳗目(Gymnotiformes)、鲇形目(Siluriformes)、水珍鱼目(Argentiniformes)、鲑目(Salmoniformes)(不包括来自鲑科的鱼)、狗鱼目(Esociformes)、胡瓜鱼目(Osmeriformes)、辫鱼目(Ateleopodiformes)、巨口鱼目(Stomiiformes)、仙女鱼目(Aulopiformes)、灯笼鱼目(Myctophiformes)、月鱼目(Lampriformes)、须鰃目(Polymixiiformes)、鲑鲈目(Percopsiformes)、蟾鱼目(Batrachoidiformes)、鮟鱇目(Lophiiformes)、鳕形目(Gadiformes)、鼬鱼目(Ophidiiformes)、鲻形目(Mugiliformes)、汉鱼目(Atheriniformes)、颌针鱼目(Beloniformes)、鲸口鱼目(Cetomimiformes)、鳉形目(Cyprinodontiformes)、奇鲷目(Stephanoberyciformes)、金眼鲷目(Beryciformes)、海鲂目(Zeiformes)、喉盘鱼目(Gobiesociformes)、刺鱼目(Gasterosteiformes)、海龙目(Syngnathiformes)、合鳃鱼目(Synbranchiformes)、鲀形目(Tetraodontiformes)、鲽形目(Pleuronectiformes)、鲉形目(Scorpaeniformes)、鲈形目(Perciformes)和鲟形目(Acipenseriformes)。
[0056] 在优选的实施方式中,鱼可选自任何目的鱼,所述目选自由下组成的列表:鲑目(Salmoniformes)(不包括来自鲑科的鱼)、鲤目(Cypriniformes)、鲈形目(Perciformes)、鲇形目(Siluriformes)、鲻形目(Mugiliformes)和鲟形目(Acipenseriformes)。
[0057] 在尤其优选的实施方式中,鱼可选自任何科的鱼,所述科选自由下组成的列表:鲤科(Cyprinidae)、慈鲷科(Cichlidae)、巨鲶科(Pangasiidae)、石首鱼科(Sciaenidae)、鮨科(Serranidae)、鲹科(Carangidae)、鲷科(Sparidae)、花鲈科(Lateolabracidae)、狼鲈科(Moronidae)、鲻科(Mugilidae)、尖吻鲈科(Latidae)、塘鳢科(Eleotridae)和鲟科(Acipenseridae)。
[0058] 因此,在一些实施方式中,鱼可以是多骨舌鱼、月目鱼、金眼鱼、海鲢、大海鲢、北梭鱼、海蜥鱼、针鳗、鲈鳗、囊咽鱼、宽咽鱼、鲱鱼、凤尾鱼、遮目鱼、倒刺鱼、鲢鱼、斑鱼、金鱼、泥鳅、鲦鱼、波鱼、脂鲤科鱼、铅笔鱼、斧头鱼、水虎鱼、脂鲤、电鳗、长刀鱼、鲶鱼、桶眼鱼、平头鱼、梭子鱼、香鱼、南乳鱼、辫鱼、钻光鱼、海斧头鱼、龙头鱼、刺尾鱼、灯鱼、皇带鱼、月鱼、带鱼、须鳂、洞穴鱼、鲑鲈、蟾鱼、华脐鱼、鳕鱼、隐鱼、银龙鱼、胭脂鱼、银河鱼、彩虹鱼、飞鱼、奇鳍鱼、胎生鱼、鳉鱼、大鳞鲷、尖牙鱼、松球鱼、海鲂、喉盘鱼、棘鱼、尖嘴鱼、海马、黄鳝、豚鱼、河豚鱼、比目鱼、鱿鱼、大头鱼、攀鲈鱼、鲈鱼、丽鱼、虾虎鱼、丝足鱼、马鲛鱼、河鲈鱼、scat、牙鳕或隆头鱼。
[0059] 在尤其优选的实施方式中,鱼可以是选自下述的任何种:草鱼(Ctenopharyngodon idella)、银鲤(Hypophthalmichthys molitrix)、卡特拉鱼(Catla catla)、鲤鱼(Cyprinus carpio)、胖头鱼(Hypophthalmichthys nobilis)、鲫鱼(Carassius carassius)、尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus niloticus)、鲶鱼(Pangasius pangasius)、露斯塔野鲮(Labeo rohita)、大黄鱼(Larimichthys crocea)、巨石斑鱼(Epinephelus tauvina)、鰤鱼(Seriola quinqueradiata)、金头鲷(Sparus aurata)、日本真鲈(Lateolabrax japonicus)、欧洲黑鲈(Dicentrarchus labrax)、银鲷(Chrysophrys auratus)、乌鲻(Mugil cephalus)、澳洲鱼(Lates calcarifer)、笋壳鱼(Oxyeleotris marmorata)、莫桑比克口孵非鲫(Oreochromis mossambicus)、日本稻鱼(Orzyias latipes)、斑马鱼(Danio rerio)、西伯利亚鲟(Acipenser baerii)和多瑙河鲟鱼(Acipenser
gueldenstaedtii)。
[0060] 在一些实施方式中,化妆品组合物可获得自来自大于一种类型卵的孵化液,即来自大于一种类型的鱼的卵。例如,来自两种或更多种类型的卵的孵化液可用于本文所述的方法,以获得本发明的化妆品组合物。因此,本发明的方法可包括将从一种或多种鱼孵化的卵收集的孵化液组合的步骤,例如在过滤之前或之后。因此,来自本文所述的鱼的卵可视为开始材料的天然生物变种。
[0061] 本文所述的化妆品组合物在体内使用,如本文所讨论。
[0062] “药学上可接受的”或“生理学上可接受的”或“美容可接受的”意思是成分必须适于化妆品施用和组合物。成分也必须与组合物中的其他成分兼容以及对于接受者生理学上可接受的。
[0063] 活性成分,即通过上述方法获取的用于施用的组合物可适当修饰用在化妆品组合物中。例如根据本发明使用的组合物可对降解稳定,例如通过使用适当的添加剂,比如盐或非电解质、乙酸酯、SDS、EDTA、柠檬酸酯或乙酸酯缓冲液、甘露醇、甘氨酸、HSA或聚山梨醇酯。
[0064] 通过本文所述的方法获得的组合物可作为单一活性成分存在于用于美容用途的组合物中,或可结合其他成分,尤其其他活性成分,例如加强美容作用(如上述)或制造对消费者更有吸引力的组合物。在一些实施方式中,可组合通过本发明的方法获得源自不同孵化液来源的的组合物。
[0065] 如上述,本文所述的组合物展示用于改善皮肤的美容外观,尤其老化皮肤,例如光老化皮肤的美容外观的特性。
[0066] 本文所述的组合物也可包括杂质,例如在从上述天然来源之一植被上述组合物之后。在如本文所描述的组合物中,源自鱼孵化液的各种多肽或多肽部分可存在(以组合)的范围为根据上述方法制备的化妆品组合物的0.0001至50%w/w。优选地,源自鱼孵化液的所述多肽或多肽部分存在(以组合)的范围是化妆品组合物的0.0001至10%w/w(或至多10-40%),例如根据上述方法制备的化妆品组合物的0.0001至5%、0.0001至3%、
0.0001至2%、0.0001至1%、0.0001至0.5%、0.0001至0.1%w/w(例如,如果在终步骤中稀释,0.01至0.1%w/w或0.0001至0.001w/w)。因此,源自鱼孵化液的个体多肽或多肽-6
部分可存在的范围是化妆品组合物的1x10 至10%w/w。在一些实施方式中,源自鱼孵化-6
液的所述个体多肽或多肽部分可存在的范围是化妆品组合物的1x10 至5%w/w,例如化妆-6 -6 -6 -6 -6 -6
品组合物的1x10 至4%、1x10 至3%、1x10 至2%、1x10 至1%、1x10 至0.5%、1x10-6
至0.1%或1x10 至0.01%w/w,如在步骤(iv)之后未进一步稀释,或如果在步骤(v)中稀释,降低的倍数为,例如10-200,例如30-100。
[0067] 化妆品组合物中源自鱼孵化液的多肽或多肽部分的比例可相对于组合物中的其他溶质,即不包括溶剂,例如水定义。因此,组合的所述多肽或多肽部分可存在的范围是组合物的干重的1-100%w/w。在一些实施方式中,组合的多肽或多肽部分可存在的范围是组合物的干重的1-90%w/w,例如组合物的干重的5-80%、10-70%、20-60%、30-50%w/w。在其他实施方式中,组合的多肽或多肽部分可存在的范围是组合物的干重的1-40%、2-39%、3-38%、4-37%w/w等。因此,个体多肽或多肽部分可存在的范围是组合物的干重的0.0001至50%w/w,例如组合物的干重的0.0001至40%、0.001至30%、0.01至25%w/w。如本文所描述组合物可在步骤(v)中被稀释用于根据本发明的用途。
[0068] 尽管本发明涉及用于改善皮肤的美容外观的方法,但是这可包括治疗不适、异常或病况,但是在所有情况下治疗本质上是美容的。
[0069] 如本文所提及,“美容”旨在指不治愈、治疗或预防疾病或不适的处理,而是用作护肤产品或修饰或改善皮肤的外观,例如皮肤的色泽、质地或湿度。
[0070] 本文所述处理的基础是本文公开的化妆品组合物的皮肤抗老化作用。这些作用已经显示在本文提供的实施例中。
[0071] 因此考虑基于化妆品组合物抗老化特性的治疗。
[0072] 本发明因此提供了改善哺乳动物的皮肤外观的美容方法,其中如前文所描述的化妆品组合物施用至所述动物。
[0073] 在尤其优选的实施方式中,皮肤是老化的皮肤。
[0074] “老化的皮肤”指显示一个或多个老化信号或症状的皮肤,即皱纹、细线、色素沉着过度、松弛(下垂)、干燥皮肤、脱屑或经表皮水分丧失(TEWL)的外观。尤其,“老化的皮肤”相对于正常最佳的皮肤确定,即健康的、含水的、正常着色和非老化的皮肤。就此而言,老化的皮肤不需要与受试者的年龄相关并且可以是过早老化的,例如通过慢性暴露与日光(光损伤)。因此,“正常最佳皮肤”的相关参数可测定为从许多相同或类似年龄的受试者至所讨论受试者,例如没有接收慢性暴露于日光的受试者的上述老化信号的平均测量。可选地,“正常最佳皮肤”的相关参数可从比讨论的受试者更年轻的受试者获取的测量。换句话说,本文所述的组合物可用于相对于更年长受试者的皮肤,恢复年轻的皮肤外观。
[0075] 因此,本发明提供了用于治疗哺乳动物中光致皮肤老化的美容方法,其中如前文所描述的化妆品组合物施用至所述动物,优选地,其中所述组合物是局部施用的。
[0076] 可选地认为,本发明提供了如前文所描述的化妆品组合物用于治疗哺乳动物中光致皮肤老化的用途,优选地,其中所述化妆品组合物施用至所述动物的皮肤。在具体的实施方式中,组合物是局部施用。
[0077] 在尤其优选的实施方式中,改善皮肤的美容外观(例如老化的或光损伤的皮肤)涉及减少或预防皱纹、细线、色素沉着过度、松弛、干燥皮肤、脱屑和/或经表皮水分丧失的美容外观或出现。可改善这些参数的一个或多个。优选地,减少细线和/或皱纹。
[0078] 减少或预防例如老化皮肤或光致皮肤老化的信号或症状的美容外观或出现可意思是减少信号或症状的数量和/或严重程度。例如,可减少细线和皱纹的数量和/或可减少或最小化皱纹或细线的尺寸,例如深度。此外,减少或预防可涉及停止或减少新信号或症状出现的速度。
[0079] 如本文提及的,“干燥皮肤”指缺少水分或皮脂的表皮,通常特征在于细线的图案、脱屑和发痒和/或灼烧感觉。干燥皮肤可由于本身的条件(例如由于年龄)出现或可能是皮肤不适或病况的症状,比如太阳损伤。
[0080] 就此而言,减少干燥皮肤、脱屑、细线或经表皮水分丧失可通过上述组合物的增湿作用实现。
[0081] 因此,本发明可涉及提供使哺乳动物的皮肤增湿的美容方法,其中如本文所定义的化妆品组合物施用至所述动物。
[0082] 可选地认为,本发明提供了如本文所描述的化妆品组合物,用于使哺乳动物的皮肤增湿。(组合物可以可选地用于制备用于该目的的美容药物。)
[0083] 如本文提及的“增湿”指防止水分从皮肤丧失(例如TEWL)的保湿剂以及当施用至皮肤时吸引和保持水分的保湿剂(湿润剂)和润肤剂(其改善缺陷脱皮)。
[0084] 如上述,这样的增湿特性有利于改善皮肤的美容外观。在尤其优选的实施方式中,皮肤是面部、耳朵、颈、手或头皮的皮肤。
[0085] “皱纹”是皮肤的折痕、脊线或皱褶。皮肤皱纹通常由于老化过程而出现。就此而言,真皮包括皮肤的许多结构要素,其包括赋予皮肤强度的胶原蛋白、赋予皮肤充盈的糖胺聚糖,和赋予皮肤其弹性或弹力的弹性蛋白纤维。
[0086] 随着皮肤老化,皮肤层变薄并且皮肤也产生更少的胶原。而且,提供弹性的弹性蛋白纤维磨损。皮肤骨架中的这些改变造成皮肤的皱纹和松弛。皮肤-表皮结合的网状脊变平,使得皮肤更加易碎并且使得皮肤容易撕裂。该过程通过减少与真皮的接触面积也减少了表皮可用的养分数量,也干扰了皮肤的正常修复过程。
[0087] 在皮下层,脂肪细胞随着年龄而变小。这导致更显著的皱纹和下垂(松弛),因为脂肪细胞不能“填充”来自其他层的损伤。
[0088] 暴露于UVA和UVB辐射,即日光,造成胶原蛋白以比仅仅以年龄老化更高的速度降解。日光破坏胶原纤维并且造成异常弹性蛋白的积聚。当该太阳诱导的弹性蛋白积聚时,大量产生基质金属蛋白酶(MMP)。通常,金属蛋白酶通过制造和重新形成胶原蛋白而重建太阳损伤的皮肤。但是,该过程不总是起作用并且一些金属蛋白酶实际上降解胶原蛋白。这导致形成紊乱的胶原纤维,称为太阳伤疤。该有缺陷的重建/再生过程的重复使得出现皱纹和皮肤松弛。
[0089] 在进一步优选的方面中,待美容治疗或预防的皮肤病况是色素沉着病况、不适或异常。
[0090] 皮肤的色素沉着不适或异常,即色素沉着过度,可由于年龄而出现或可源自由于例如太阳损伤的过早老化。改变的色素沉着可源自局部过多的黑色素细胞或黑素细胞活性的增加,或二者。色素沉着不适包括雀斑、太阳斑或衰老性着色斑(太阳雀斑)和其他瑕疵比如褐黄斑。
[0091] 如本文所提及,“改善”皮肤的美容外观相对于正常的最佳皮肤确定,即健康的、含水的、正常着色和非老化的皮肤。因此,就老化的皮肤而言,一个或多个老化的信号或症状可如实施例中描述测量,并且与年龄或生理学上更年轻的相同信号比较,优选地当改善是减少老化的一个或多个信号或症状。
[0092] 在优选的方面中,通过局部施用至皮肤而实现美容用途。
[0093] 如本文所使用,“治疗”指相对于对皮肤不遭受所述病况或不适和不进行所述治疗的所述个体的身体不同部分的症状或影响,或在不进行所述治疗的相应的正常个体中,一个或多个美容症状的或所述病况或不适的影响的减少、缓解或消除,优选地至正常水平,例如干燥皮肤的存在或程度、色素沉着的程度或面积等。
[0094] “预防”或“减少”指绝对的预防或减少或缓解症状或影响出现的程度或时机(例如延迟)。例如特点在于干燥、异常色素沉着,起皱皮肤的病况可通过在出现这些病况之前经常施用本文所述的化妆品组合物而预防。
[0095] 根据本发明的治疗或预防的美容方法可有利地结合一种或多种活性成分施用,所述活性成分有效治疗或预防不适或病况和/或实现,例如保湿。因此,本文所述的化妆品组合物可另外包含一种或多种这样的活性成分。
[0096] 根据本发明又进一步方面,我们提供了如本文定义的组合物和任选地一种或多种另外的活性成分,作为组合的制剂用于同时、分开或顺序用于人或哺乳动物疗法,如本文所描述。
[0097] 本文所述的组合物可以以常规的方式,与一种或多种生理学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂,根据技术本领域熟知的使用容易可用的成分一起配制。组合物可提供为水基、甘油基、醇(至多20%)基、丙烯酸酯基油/水乳液、黄原酸胶基油/水乳液或水/油乳液,例如,pH 3.5-11,优选地pH 5.5-9。
[0098] 因此,组合物可并入,任选地与作为组合制剂的其他活性物质,以及一种或多种常规的载体、稀释剂和/或赋形剂一起,产生常规的盖仑制剂比如粉末、小袋、扁囊剂、酏剂、悬液(注入流体)、乳液、溶液、糖浆剂、气溶胶(作为固体或在液体媒介中)、药膏、无菌包装的粉末等。组合物可通过使用冷冻干燥、过度冷却或Permazyme来稳定。这样的组合物形成本发明的组合物(即根据步骤(v)制备)。
[0099] 适当的赋形剂,载体或稀释剂是乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、金合欢树胶、磷酸、碳酸钙、钙乳糖、玉米淀粉、aglinates、黄蓍胶、明胶、酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷、纤维素、水糖浆剂、水、水/乙醇、水/乙二醇、水/聚乙烯、乙二醇、丙二醇、甲基纤维素、甲基羟苯甲酸盐、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、矿物质油或脂肪物质比如硬脂或其适当的混合物。也可使用用于获得持续释放制剂的试剂,比如聚缩乙烯、缩甲基纤维素、醋酸纤维素邻苯二甲酸酯,或聚醋酸乙烯酯。
[0100] 组合物可另外包括润滑剂、湿润剂、乳化剂、增粘剂、成粒剂、崩解剂、粘合剂、渗透活性剂、悬浮剂、防腐剂甜味剂味剂、吸附增强剂(例如表面渗透剂、例如胆盐、卵磷脂、表面活性剂脂肪酸、螯合剂)、褐变剂、有机溶剂、抗氧化剂、稳定剂、润肤剂、聚硅氧烷、α-羟基酸、缓和剂、抗发泡剂、增湿剂、维生素、香味剂、离子或非离子增稠剂、表面活性剂、填料、离子或非离子增稠剂、螯合剂、聚合物、推进剂、碱化或酸化试剂、遮光剂着色剂和脂肪化合物等。下面更详细描述一些这样的组合物。
[0101] 化妆品组合物中的其他活性成分或组分可选自下述任何一种或多种:矿物质、维生素、酶、蛋白质、肽、氨基酸、脂质、多糖、适合作为防晒剂的物质、化学去角质剂、提取物、皮肤调节剂、抗氧化剂和其混合物。
[0102] 本发明的组合物可包括的蛋白质的例子包括胶原蛋白和/或其衍生物(例如如上定义的其部分),能够促进细胞生长的蛋白质或肽、糖蛋白1、糖蛋白2和层粘连蛋白。
[0103] 本发明的组合物可提供的酶包括但不限于下述任何一种或多种:水果酶(例如菠萝蛋白酶)、超氧化物歧化酶、过氧化物酶、透明质酸酶和粘多糖。
[0104] 肽可选自但不限于下述任何一种或多种:D,L-肌肽、D-肌肽、L-肌肽、鹅肌肽和基肽(五肽衍生物)。
[0105] 氨基酸可选自但不限于下述任何一种或多种:L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-半胱氨酸、L-胱氨酸、甘氨酸、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、和L-缬氨酸和其衍生物包括如表1中限定的非天然存在的氨基酸。尤其优选的作为抗氧化剂的氨基酸可选自下述任何一种或多种:甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、组氨酸、酪氨酸和色氨酸。
[0106] 表1
[0107]非常规氨基酸 编码 非常规氨基酸 编码
α-氨基丁酸 Abu L-N-甲基丙氨酸 Nmala
α-氨基-α-甲基丁酸 Mgabu L-N-甲基精氨酸 Nmarg
氨基环丙烷- Cpro L-N-甲基天冬酰胺 Nmasn
羧酸 L-N-甲基天冬氨酸 Nmasp
氨基异丁酸 Aib L-N-甲基半胱氨酸 Nmcys
氨基降片基- Norb L-N-甲基谷氨酸 Nmgln
羧酸 L-N-甲基谷氨酸 Nmglu
环己基丙氨酸 Chexa L-N-甲基组氨酸 Nmhis
环戊基丙氨酸 Cpen L-N-甲基异亮氨酸 Nmile
D-丙氨酸 Dal L-N-甲基亮氨酸 Nmleu
D-精氨酸 Darg L-N-甲基赖氨酸 Nmlys
D-天冬氨酸 Dasp L-N-甲基甲硫氨酸 Nmmet
D-半胱氨酸 Dcys L-N-甲基正亮氨酸 Nmnle
D-谷氨酰胺 Dgln L-N-甲基正缬氨酸 Nmnva
D-谷氨酸 Dglu L-N-甲基鸟氨酸 Nmorn
D-组氨酸 Dhis L-N-甲基苯基丙氨酸 Nmphe
D-异亮氨酸 Dile L-N-甲基脯氨酸 Nmpro
D-亮氨酸 Dleu L-N-甲基丝氨酸 Nmser
D-赖氨酸 Dlys L-N-甲基苏氨酸 Nmthr
[0108]D-甲硫氨酸 Dmet L-N-甲基色氨酸 Nmtrp
D-鸟氨酸 Dorn L-N-甲基酪氨酸 Nmtyr
D-苯丙氨酸 Dphe L-N-甲基缬氨酸 Nmval
D-脯氨酸 Dpro L-N-甲基乙基甘氨酸 Nmetg
D-丝氨酸 Dser L-N-甲基-叔丁基甘氨酸 Nmtbug
D-苏氨酸 Dthr L-正亮氨酸 Nle
D-色氨酸 Dtrp L-正缬氨酸 Nva
D-酪氨酸 Dtyr α-甲基-氨基异丁酸 Maib
D-缬氨酸 Dval α-甲基-γ-氨基丁酸 Mgabu
D-α-甲基丙氨酸 Dmala α-甲基环己基丙氨酸 Mchexa
D-α-甲基精氨酸 Dmarg α-甲基环戊基丙氨酸 Mcpen
D-α-甲基天冬酰胺 Dmasn α-甲基-α-基丙氨酸 Manap
D-α-甲基天冬氨酸 Dmasp α-甲基青霉胺 Mpen
D-α-甲基半胱氨酸 Dmcys N-(4-氨基丁基)甘氨酸 Nglu
D-α-甲基谷氨酸 Dmgln N-(2-氨乙基)甘氨酸 Naeg
D-α-甲基组氨酸 Dmhis N-(3-氨基丙基)甘氨酸 Norn
D-α-甲基异亮氨酸 Dmile N-氨基-α-甲基丁酸 Nmaabu
D-α-甲基亮氨酸 Dmleu α-萘基丙氨酸 Anap
D-α-甲基赖氨酸 Dmlys N-苄基甘氨酸 Nphe
D-α-甲基甲硫氨酸 Dmmet N-(2-氨基甲酰基乙基)甘氨酸 Ngln
D-α-甲基鸟氨酸 Dmorn N-(氨基甲酰基甲基)甘氨酸 Nasn
D-α-甲基苯基丙氨酸 Dmphe N-(2-羧乙基)甘氨酸 Nglu
D-α-甲基脯氨酸 Dmpro N-(羧甲基)甘氨酸 Nasp
D-α-甲基丝氨酸 Dmser N-环丁基甘氨酸 Ncbut
D-α-甲基苏氨酸 Dmthr N-环庚基甘氨酸 Nchep
[0109]D-α-甲基色氨酸 Dmtrp N-环己基甘氨酸 Nchex
D-α-甲基酪氨酸 Dmty N-环癸基甘氨酸 Ncdec
D-α-甲基缬氨酸 Dmval N-环十二烷基甘氨酸 Ncdod
D-N-甲基丙氨酸 Dnmala N-环辛基甘氨酸 Ncoct
D-N-甲基精氨酸 Dnmarg N-环丙基甘氨酸 Ncpro
D-N-甲基天冬酰胺 Dnmasn N-环十一烷基甘氨酸 Ncund
D-N-甲基天冬氨酸 Dnmasp N-(2,2-二苯基乙基)甘氨酸 Nbhm
D-N-甲基半胱氨酸 Dnmcys N-(3,3-二苯基丙基)甘氨酸 Nbhe
D-N-甲基谷氨酸 Dnmgln N-(3-胍基丙基)甘氨酸 Narg
D-N-甲基谷氨酸 Dnmglu N-(1-羟乙基)甘氨酸 Nthr
D-N-甲基组氨酸 Dnmhis N-(羟乙基))甘氨酸 Nser
D-N-甲基异亮氨酸 Dnmile N-(咪唑基乙基))甘氨酸 Nhis
D-N-甲基亮氨酸 Dnmleu N-(3-吲哚基乙基)甘氨酸 Nhtrp
D-N-甲基赖氨酸 Dnmlys N-甲基-γ-氨基丁酸 Nmgabu
N-甲基环己基丙氨酸 Nmchexa D-N-甲基甲硫氨酸 Dnmmet
D-N-甲基鸟氨酸 Dnmorn N-甲基环戊基丙氨酸 Nmcpen
N-甲基甘氨酸 Nala D-N-甲基苯基丙氨酸 Dnmphe
N-甲基氨基异丁酸 Nmaib D-N-甲基脯氨酸 Dnmpro
N-(1-甲基丙基)甘氨酸 Nile D-N-甲基丝氨酸 Dnmser
N-(2-甲基丙基)甘氨酸 Nleu D-N-甲基苏氨酸 Dnmthr
D-N-甲基色氨酸 Dnmtrp N-(1-甲基乙基)甘氨酸 Nval
D-N-甲基酪氨酸 Dnmtyr N-甲基a-萘基丙氨酸 Nmanap
D-N-甲基缬氨酸 Dnmval N-甲基青霉胺 Nmpen
γ-氨基丁酸 Gabu N-(p-羟苯基)甘氨酸 Nhtyr
L-叔丁基甘氨酸 Tbug N-(硫代甲基)甘氨酸 Ncys
[0110]L-乙基甘氨酸 Etg 青霉胺 Pen
L-同苯基丙氨酸 Hphe L-α-甲基丙氨酸 Mala
L-α-甲基精氨酸 Marg L-α-甲基天冬酰胺 Masn
L-α-甲基天冬氨酸 Masp L-α-甲基-叔丁基甘氨酸 Mtbug
L-α-甲基半胱氨酸 Mcys L-甲基乙基甘氨酸 Metg
L-α-甲基谷氨酸 Mgln L-α-甲基谷氨酸 Mglu
L-α-甲基组氨酸 Mhis L-α-甲基同苯基丙氨酸 Mhphe
L-α-甲基异亮氨酸 Mile N-(2-甲基硫代乙基)甘氨酸 Nmet
L-α-甲基亮氨酸 Mleu L-α-甲基赖氨酸 Mlys
L-α-甲基甲硫氨酸 Mmet L-α-甲基正亮氨酸 Mnle
L-α-甲基正缬氨酸 Mnva L-α-甲基鸟氨酸 Morn
L-α-甲基苯基丙氨酸 Mphe L-α-甲基脯氨酸 Mpro
L-α-甲基丝氨酸 Mser L-α-甲基苏氨酸 Mthr
L-α-甲基色氨酸 Mtrp L-α-甲基酪氨酸 Mtyr
L-α-甲基缬氨酸 Mval L-N-甲基同苯基丙氨酸 Nmhphe
N-(N-(2,2-二苯基乙基) Nnbhm N-(N-(3,3-二苯基丙基) Nnbhe
氨基甲酰基甲基)甘氨酸 氨基甲酰基甲基)甘氨酸
1-羧基-1-(2,2-二苯基- Nmbc L-O-甲基丝氨酸 Omser
乙基氨基)环丙烷 L-O-甲基高丝氨酸 Omhser
[0111] 化妆品组合物可包括一种或多种脂质,其包括脂肪、油、蜡等。适当的极性油是例如来自下述的那些:卵磷脂和脂肪酸甘油三酯,即饱和的和/或不饱和的,分支的和/或未分支的链烷羧酸的甘油三酯,链长度为8至24,尤其12至18个碳原子。可例如有利地从下述选择脂肪酸甘油三酯:合成的、半合成的和天然油,比如例如橄榄油葵花籽油大豆油花生油菜籽油杏仁油棕榈油椰子油蓖麻油、麦胚油、葡萄籽油、蓟籽油、月见草油澳洲坚果油等。
[0112] 可选地或另外油可选自挥发性油、非挥发性油或其混合物。非挥发性油包括满足下述至少一个定义的油:(a)在25℃和一个大气压下展示大于0.2mmHg蒸汽压的油;(b)在一个气压下沸点为至少300℃的油。挥发性油包括不是如上定义的“非挥发性”的材料。
[0113] 非挥发性油可选自非挥发性硅油、非挥发性油和其混合物。适当的非挥发性硅油包括线性聚甲基硅氧烷和,优选地,非挥发性硅油是高分子量二甲聚硅氧烷。商业上可得的线性聚甲基硅氧烷的例子包括来自Dow Corning公司的DC 200流体20Cst、DC 200流体100Cst、DC 200流体350Cst。
[0114] 适当的非挥发性烃油包括双甘油或三甘油的分支的酯或酯或1,2,3,4丁三醇或赤藓糖醇、二赤藓糖醇或三赤藓糖醇。优选地,非挥发性烃油包括赤糖醇基三乙基己酸酯(作为Salacos E-38从Nisshin Oilio可获得)和聚甘油基-2三异硬脂酸酯(作为Cosmol43V从Nisshin Oilio可获得),二乙基己基碳酸酯(作为Tegosoft DEC从Degussa可获得),二辛醚(作为Cetiol OE从Cognis AG可获得),二辛基碳酸酯(作为Cetiol CC从Cognis AG可获得),异壬酸异壬酯(作为Lanol 99从Seppic可获得),十三基新戊酸酯(作为Ceraphyl 55从International Speciality Products提供),或其混合物。
[0115] 挥发性油可选自官能化的和非官能化的挥发性硅油二者、挥发性烃油和其混合物。用于本发明的挥发性油可以是饱和的或不饱和的,具有直链或支链或环结构或具有这些特征的任何一种或多种。
[0116] 挥发性烃油的例子包括聚癸烷比如异十二烷和异癸烷(例如,可获得自Presperse Inc.的Permethyl-99A)和C7-C15异链石蜡(比如可获得自ExxonChemicals的Isopar系列)。
[0117] 挥发性硅油可选自环戊硅氧烷、环己硅氧烷或其混合物。商业上可得的挥发性环硅油的例子包括来自Dow Corning Corp.的DC 244、DC 245、DC 344和DC 345;来自Momentive Performance Materials的SF-1204和SF-1202聚硅氧烷流体;来自General Electric Co.的GE 7207和7158);和,来自SWS Silicones Corp的SWS-03314。
[0118] 线性挥发性硅油可以是线性聚甲基硅氧烷。商业上可得的线性聚甲基硅氧烷的例子包括来自Dow Corning Corp的DC 200流体,5Cst。
[0119] 本发明的化妆品组合物可进一步包括选自下述的一种或多种多糖,但不限于下述任何一种或多种:阴离子多糖(例如藻酸、果胶、黄原酸胶、透明质酸、硫酸软骨素、阿拉伯树胶、刺梧桐胶、黄蓍树胶、羧甲基-几丁质、纤维素树胶、糖胺聚糖)、阳离子多糖(例如脱乙酰甲壳质、乙酰化脱乙酰甲壳质、阳离子瓜耳树胶、阳离子羟乙基纤维素(HEC))、非离子多糖(例如淀粉、糊精、瓜耳树胶、纤维素醚比如羟乙基纤维素、甲基纤维素和硝化纤维素)、两性多糖(例如缩甲基甲壳质、N-羟基-二羧乙基-脱乙酰甲壳质、改性的马铃薯淀粉)和疏水的多糖(例如十六烷基羟乙基纤维素、聚季铵盐24)。
[0120] 化妆品组合物可进一步包括适合作为防晒剂的物质比如有机遮光剂,例如肉桂衍生物。有机遮光剂活性物可选自亲水有机遮光剂、疏水的有机遮光剂或其混合物。遮光剂的适当例子可见CTFA国际美容成分词典和手册(International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook),第7版2卷,1672页,Wenning和Mc Ewen编辑(化妆品、化妆用品和香料联合有限公司,Washington,D.C.1997)。
[0121] 有机遮光剂可选自烷基β,β-二苯基丙烯酸酯衍生物、α-氰基β,β-二苯基丙烯酸酯衍生物、邻氨基苯甲酸酯衍生物、二苯酮衍生物、樟脑衍生物、二苯甲酰甲烷衍生物、对氨基苯甲酸衍生物、水杨酸衍生物、三嗪衍生物、或其混合物。例如疏水的有机遮光剂可选自4-(1,1-二甲基乙基)-4'-甲氧基二苯甲酰甲烷;4-异丙基二苯甲酰甲烷;4-(1,1-二甲基乙基)-4'-甲氧基二苯甲酰甲烷、2-乙基己基-2-氰基-3,3-二苯基丙烯酸酯,或其混合物。
[0122] 商业上可得的4-(1,1-二甲基乙基)-4'-甲氧基二苯甲酰甲烷,也称为丁基甲氧基二苯甲酰甲烷或阿伏苯宗的例子,包括来自Givaudan Roure S.A.的Parsol TM 1789和来自Merck&Co.,Inc的Eusolex TM 9020。商业上可得的4-异丙基二苯甲酰甲烷,也称为异丙基二苯甲酰甲烷的例子包括来自Merck&Co.,Inc的Eusolex TM 8020。商业上可得的2-乙基己基-2-氰基-3,3-二苯基丙烯酸酯,也称为奥克立林的例子包括来自BASF的Uvinul N539SG;和来自Rona/Merck的Eusolex OCR。
[0123] 在一些实施方式中,亲水有机遮光剂可以是2-苯基苯并咪唑-5-磺酸。商业上可得的2-苯基苯并咪唑-5-磺酸,也称为PBSA的例子包括来自Rona/Merck的Eusolex 232。
[0124] 肉桂衍生物遮光剂的适当例子可见CTFA国际美容成分词典和手册,第7版2卷,1672页,Wenning和Mc Ewen编辑(化妆品、化妆用品和香料联合有限公司,Washington,D.C.1997)。肉桂衍生物可选自2-乙基己基-p-甲氧基肉桂酸酯、二乙醇胺甲氧基肉桂酸酯、2-乙氧基乙基-p-甲氧基肉桂酸酯,或其混合物。例如,肉桂衍生物可以是2-乙基己基-p-甲氧基肉桂酸酯。
[0125] 化妆品组合物可包含化学去角质剂选自但不限于下述任何一种或多种:α羟基酸(AHAs)、β羟基酸(BHAs)或聚羟基酸,比如水杨酸、乙醇酸、柠檬酸和苹果酸。
[0126] 可并入化妆品组合物的提取物包括但不限于植物提取物,其可包括酚类化合物比如例如类黄酮(例如,糖基芸香甙、阿魏酸、咖啡酸)、亚糠基葡萄糖醇、丁基化羟基甲苯、丁基化羟基苯甲醚,、去甲二氢愈创木树脂酸、去甲二氢愈创木酸、三氢氧苯丁酮和其衍生物。在本发明的组合物中使用的具体植物提取物包括芦荟提取物、人参提取物和马尾提取物。
[0127] 通过用亲水溶剂(尤其,水、乙醇、乙二醇,或其任何混合物)提取人参的根获得人参提取物。提取物包含皂苷、甾醇、碳水化合物、果胶、维生素、矿物质和脂质。
[0128] 通过用亲水溶剂(例如,水、乙醇、乙二醇,或其任何混合物)提取马尾草的整个植株而获取马尾提取物。提取物包含硅酸盐、黄酮、皂苷、咖啡酸和阿魏酸。
[0129] 化妆品组合物可进一步包括皮肤调节剂。皮肤调节剂可选自保湿剂、去角质剂、润肤剂或其混合物。保湿剂包括多元醇比如丙三醇、丙二醇、双丙甘醇、聚丙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇、羟丙基山梨糖醇、己二醇、1,3-丁二醇、1,2,6-己三醇、乙氧基化甘油、丙氧基化丙三醇或其混合物。
[0130] 本发明的组合物中可提供的抗氧化剂的例子包括但不限于氨基酸、维生素、矿物质、类胡萝卜素、肽、硫醇、亚砜亚胺化合物、螯合剂、不饱和脂肪酸、酚类化合物、植物提取物、芪类、尿酸、甘露糖、绿原酸、咪唑类(例如咪唑丙烯酸)、亚糠基山梨糖醇、辅酶、泛醌、质体醌、植物甾醇和其衍生物(例如盐、酯、醚、糖、核苷、核苷、肽和/或脂质衍生物),上面描述了其中的一些。
[0131] 维生素可选自但不限于下述任何一种或多种:维生素A和其衍生物(例如类维生素A或视黄醇或它们的衍生物比如视黄基棕榈酸酯或视黄基丙酸盐)、生物素、叶酸、泛酸钙、烟酰胺、吡哆醇HCl、吡哆HCl、核黄素、硫胺素HCl、胸苷、维生素B12、维生素B3(例如烟酰胺)、维生素B5(例如泛醇)、维生素C和其衍生物(例如,抗坏血酸基棕榈酸酯、抗坏血酸基磷酸镁、抗坏血酸基乙酸酯)、生育酚和衍生物(例如维生素E乙酸酯)。
[0132] 矿物质可选自但不限于任何一种或多种盐:钼酸盐(例如(NH4)OMo7O24)(例如AlCl3)、钙(例如CaCl2)、钴(例如CoCl2)、铬(例如CrK(SO4))、(例如CuSO4)、(例如Fe(NO3)3、FeSO4)、(例如KCl)、镁(例如MgCl2)、锰(例如MnCI2、MnSO4)、磷酸盐(例如Na2HPO4、NaH2PO4)、碳酸盐(例如NaHCO3)、硅酸盐(例如Na2SiO3)、钠(例如NaCl)、酸盐(例如NH4VO3)、镍(例如NiCl2)、(例如SnCl2)、锌(例如,ZnO、ZnSO4)、硒(例如硒代甲硫氨酸、依布硒啉、H2SeO3、Na2SeO3)、硫酸盐硝酸盐。
[0133] 类胡萝卜素可选自但不限于下述任何一种或多种:胡萝卜素,例如α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、ψ-番茄红素、茄红素等和其衍生物。
[0134] 硫醇可选自但不限于下述任何一种或多种:金硫葡糖,丙基硫脲嘧啶、硫氧还蛋白、硫辛酸、谷胱甘肽、半胱氨酸、胱氨酸、胱胺和它们的糖基、N-乙酰基、甲基、乙基、丙基、戊基、丁基和月桂基、棕榈酰基、油烯基、γ-亚油基、胆甾醇基和甘油基酯和其盐、二月桂基硫代二丙酸酯、二硬脂酰基硫代二丙酸酯、硫代二丙酸酯和其衍生物。
[0135] 亚砜亚胺化合物可选自但不限于下述任何一种或多种:高半胱氨酸亚砜亚胺、丁胱砜、五-、六-、七胱亚砜亚胺,其可包括在组合物中,使得它们以非常低的剂量提供(例如pmol至μmol/kg)。
[0136] 螯合剂可选自但不限于下述任何一种或多种:去铁铁蛋白、去铁胺、乳铁蛋白、α-羟基脂肪酸、棕榈酸、肌醇六磷酸、α-羟基酸(例如柠檬酸、乳酸、苹果酸)、腐植酸、胆酸、胆提取物、胆红素、胆绿素、EDTA、EGTA和其衍生物。
[0137] 不饱和脂肪酸可选自但不限于下述任何一种或多种:γ-亚麻酸、亚麻油酸、油酸和其衍生物。
[0138] 芪类和其衍生物包括,例如,芪氧化物和反式芪氧化物。
[0139] 各种另外任选的活性成分可并入本发明的化妆品组合物。这些另外成分的非限制性例子包括另外的护肤活性物比如法尼醇、没药醇、植烷三醇、尿素、胍(例如氨基胍);己脒定化合物、其盐或衍生物;糖胺;自晒黑试剂(例如二羟基丙酮);结构试剂;亲水凝胶剂;抗痤疮药物(间苯二酚、水杨酸等);皮肤抚慰剂和愈合试剂比如尿囊素等;和试剂适于美学目的比如香精油、香料、皮肤感觉剂、遮光剂、芳族化合物(例如丁香油、薄荷醇、樟脑、桉叶油和定子香酚)。可配制本文所述的组合物以便在通过本领域熟知的技术施用至身体之后提供快速、持续或延迟释放的活性成分。
[0140] 组合物可以为任何适当的给药形式,以使得递送或靶向具体的细胞或组织,例如作为乳液或在脂质体、类脂质体、微球、纳米颗粒等中,利用其活性成分可被吸收、吸附、并入或结合。这可有效将产物转化成不溶解的形式。这些具体的形式可克服稳定性(例如降解)和递送问题。
[0141] 溶液、悬液、凝胶和乳液的使用是优选的,例如活性成分可携带在水、气体、水基液体、油、凝胶、乳液、水包油或油包水乳液、分散体或其混合物中。
[0142] 乳化剂可选自非离子乳化剂、阴离子乳化剂、阳离子乳化剂、两性离子乳化剂、两性乳化剂或其混合物。乳化剂是本领域已知的。见,例如,McCutcheon's,去污剂和乳化剂(Detergents and Emulsifiers),North American Edition(1986),由Allured Publishing Corporation公开。
[0143] 当美容可接受的载体是聚硅氧烷包水乳液时,乳化剂优选地选自聚氧化烯共聚物、聚甘油基共聚物或其混合物。聚氧化烯共聚物,也称为聚硅氧烷聚醚,详细描述在US4,268,499中。商业上可得的聚氧化烯共聚物的例子包括来自Dow Corning Corp.的
DC5225C或DC2-5185C(PEG/PPG-18/18二甲硅油,其作为与环戊硅氧烷的掺混物可获得);
和,来自Shin-Etsu Inc的KF6017或KF6028(PEG-9二甲硅油)。商业上可得的聚甘油基乳化剂的例子包括来自Shin-Etsu Inc的KF6100和KF6104。
[0144] 组合物优选地用于局部(即至皮肤)施用。
[0145] 局部组合物包括凝胶、乳剂、药膏、喷雾、洗液、药膏、药棒、肥皂、粉末、薄膜、气溶胶、液滴、泡沫、溶液、乳液、悬液、分散体例如非离子膜泡分散体、奶和现有技术任何其他常规的化妆品形式。
[0146] 药膏、凝胶和乳剂可,例如,与水性或油性基质一起配制,添加适当的增厚和/或凝胶剂。洗液可与水性或油性基质一起配制,并且一般而言,也包含一个或多个乳化、分散、悬浮、增厚或着色剂。可在任何适当的粉末基的帮助下形成粉末。液滴和溶液可与水性或非水性基一起配制,也包括一个或多个分散、溶解或悬浮剂。气溶胶喷雾便利地使用适当的推进剂从加压包装递送。
[0147] 在一些实施方式中,本文所述的化妆品组合物可经已经施加、浸渍或化学结合多肽或组合物的产物、设备或材料局部施用至皮肤。为了该目的,绷带,膏药(例如粘合贴片),纱布,外科胶带花棉签或其他吸收材料,例如粉扑、起绒布或海绵,或支持基质可涂布,浸渍或化学结合如本文所描述的组合物。例如,许多组合物可施用至皮肤,其使用在现有技术中充分描述的皮肤贴片,例如US 2008/0038300、US 2009/0043236、WO 2005/067499和WO 2009/085302,其通过引用并入本文。在一些实施方式中,包括如本文所描述的组合物的材料可为设备的形式,其可,例如被待治疗的受试者穿着。例如,如本文所描述的组合物可施用、浸渍或化学结合在形成所有或部分尿片、手套,袜子等的材料或支持基质上。
[0148] 化妆品组合物可与施用的说明书一起包括在容器、包装或分配器中。
[0149] 因此,本发明的进一步方面包括提供涂布、浸渍或化学结合如本文所描述的组合物的产物、材料或设备。本发明也涉及这样的产物、材料或设备用于如本文所描述的用途。优选地,所述产物是绷带、石膏(例如粘合贴片)、纱布、外科胶带或棉花棉签或所述设备是尿片、手套或袜子。
[0150] 本文所述的组合物中,可取决于组合物的来源(即上述方法的开始材料)、施用的模式、治疗的过程、患者的年龄和体重、美容指示、待治疗的身体或身体区域并且可根据选择而改变或调整。但是,一般而言,根据本发明的方法在步骤(iv)之后制备的组合物在步骤(v)中被稀释至0.001、0.005、0.01或0.1至50%,例如0.005-40%,例如0.1至25%,比如0.1或0.5至5,例如1-5%(w/w或v/v),以提供用于施用,尤其用于局部施用的终制剂,例如步骤(iv)之后1%或3%的组合物溶液。
[0151] 当另外的组分添加至通过上述方法制备的组合物时,例如如本文所描述的另外的增湿剂,另外的组分可存在的量为0.0001、0.0005、0.001或0.01至50%,例如0.0005-40%,例如0.01至25%,比如0.1或0.5至5,例如1-5%(w/w的用于施用,尤其用于局部施用的终制剂)。当局部施用时,组合物的有效的单个剂量的范围是0.0001-100mg/
2 2 2
cm/天(组合物中的总蛋白质),例如0.1-100mg/cm/天,优选地0.0001-10mg/cm/天,例
2
如0.1-10mg/cm/天,这取决于待治疗的哺乳动物,作为单个剂量服用。
[0152] 优选地采用液体溶液、乳剂或悬液用于局部施用。
[0153] 可施加或施用组合物的动物限于哺乳动物。优选地哺乳动物是灵长类,家养动物、牲畜和实验室动物。因此优选的哺乳动物包括小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、猫、狗、猴子、猪、母牛、山羊、绵羊和马。尤其优选地,组合物施加,或施用至人。
[0154] 仅仅通过图解的方式给出下述实施例,其中参考的图如下:
[0155] 图1显示用本发明的孵化液组合物治疗的受试者的治疗之前、治疗2周之后和12周之后照片(基线)。在2和12周之后各种老化皮肤的信号的减少是明显。提供的值指示对于35名参与者的平均改变。
[0156] 图2显示图1中受试者的特写照片,强调用本发明的孵化液组合物治疗2和12周之后细线和皱纹的减少。
[0157] 图3显示用本发明的孵化液组合物在治疗之前(基线)和治疗12周之后受试者的特写照片。圆圈区域显示治疗12周之后皱纹的明显减少。
[0158] 图4显示条状图,其描绘基于在面部两侧的触觉/视觉临床分级,认为具有改善的各种老化信号的受试者的百分数。
[0159] 图5显示用水、5%乙醇酸、1mU/ml菠萝蛋白酶或1%孵化液组合物治疗12小时,重构的人表皮的扫描电子显微照片(x400、x5000和x15000放大率)。
[0160] 图6显示用水、5%乙醇酸、1mU/ml菠萝蛋白酶或1%孵化液组合物治疗48小时,重构的人表皮的扫描电子显微照片(x400、x5000和x15000放大率)。
[0161] 图7显示未治疗的或用5%乙醇酸、1mU/ml菠萝蛋白酶或1%孵化液组合物治疗12或24小时的重构的人表皮的切片的光学显微照片。箭头(A)显示细胞增殖和分化和箭头(B)显示致密颗粒层和更高浓度的层状颗粒剂。
[0162] 图8显示(A)用考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE凝胶和(B)用抗源自鲑鱼孵化液的化妆品组合物主要组分的抗体染色的(A)中凝胶的蛋白质印迹。泳道1,鲑鱼孵化液;泳道2,青鳉孵化液;和泳道3,斑马鱼孵化液。
[0163] 实施例1:制备组合物
[0164] 由鲑鱼孵化液制备组合物。为了改善孵化液的蛋白质浓度,鲑鱼卵转移至最小体积的水中然后孵化。可通过升高(室)温,或通过脱氧诱导高度同步的孵化
(Oppen-Berntsen等1990,Aquacultrue,86,417-430页),其产生小体积的高度浓缩的粗多肽和多肽部分的制剂。对于大于95%的胚胎,孵化应在2小时内完成。
[0165] 使用7μm孔径大小的标准过滤器过滤孵化液,以去除在随后过滤步骤中可能堵塞过滤器的材料。该滤液,处理的孵化液,可被冷冻数年而不明显降解,然后被融解并且用于进一步蛋白质纯化。该事实大大简化了产生用于纯化孵化液组合物的开始材料。
[0166] 处理的孵化液使用0.45μm孔径大小的过滤器进行过滤并且收集滤液。然后用排阻尺寸为8kDa的过滤器透析过滤滤液,用缓冲液替换孵化液的水。在该情况下,缓冲液包含0.5mM磷酸和1mM NaCl,但是其他缓冲液是同样合适的。例如,包含毫摩尔Tris(例如10mM),pH大概中性或稍碱性(pH 7.5-8.5),包含5mM NaCl的磷酸缓冲盐溶液或缓冲液是合适的。收集来自渗滤步骤的截留物质并且通过添加缓冲液稀释,从而滤液的酶活性,如上定义的,等于3400mU/升。
[0167] 最后,通过孔径大小为0.22μm的过滤器滤液进行过滤并且收集终滤液。该滤液富集的粗孵化液中出现的多肽和多肽部分的制剂。
[0168] 实施例2:孵化液组合物对老化皮肤的体内作用
[0169] 如实施例1中描述制备孵化液组合物。组合物制备为1%和3%的皮肤洗剂[v/v](每单位体积的洗剂组合物的总体积),试验两个活性皮肤洗液,并且与不包括活性组分,即孵化液组合物的对照皮肤洗剂比较。皮肤洗剂是水包油(O/W)乳液。油相表示9%的总组合物并且用氢化卵磷脂乳化。
[0170] 进行双盲、安慰剂对照临床试验,以评估具有温和至中等光损伤,即老化的面部皮肤的女性中局部皮肤治疗的效力和耐受。该试验的持续时间是12周,在基线、2周、6周和12周访问。使用视觉分级、仪器、数字VISIA CR照片和受试者自评估问卷评估效力。
[0171] 受试者数量
[0172] 一百零一(101)名女性受试者完成了参与研究(对于三个治疗,N>30,即一个安慰剂和包括不同浓度的孵化液组分的两个组合物)。
[0173] 受试者群体和鉴定
[0174] 受试者是年龄40至65的健康女性并且分配三位数,其当结合临床研究数使用使,唯一鉴定研究中的每个受试者。在整个研究中保留该数字,以保持实验的匿名性。
[0175] 合格标准
[0176] 纳入标准
[0177] 1.女性,年龄40至65,纳入,通过健康和合格问卷确定其是大体良好健康。
[0178] 2.根据研究的持续时间的研究要求自愿配合和参与并且立即报告任何不良症状[0179] 3.对应3-7分改良的Griffith分级表,面部上临床确定温和至中等光损伤(细线、皱纹、色素沉着过度、松弛和粗糙度)。
[0180] 4.不含可能损害测试位点的评估或通过研究参与增加对受试者的健康风险的任何疾病状态或物理面部皮肤病况(例如遗传过敏性皮炎、湿疹、牛皮癣、脂溢性皮炎)。
[0181] 5.研究期间,自愿避免延长时间的太阳暴露和都使用日晒床。应采用额外护理,以穿着防护服,包括太阳镜,和避免10AM至4PM的太阳暴露。
[0182] 6.研究期间,自愿继续使用所有的常规品牌的彩妆系列、清洁剂、化妆水(如果适用)和卸妆水。个体必须避免使用指定的测试材料之外的任何抗老化产物或亮肤产品。
[0183] 7.每次规定的临床范围之前至少20分钟,自愿去除所有的化妆品。面部或眼部不使用其他局部产品直到研究访问结束。如果到达的受试者还未去除所有的化妆品,她需要在临床时去除残留的化妆品并且在程序之前等待至少20分钟。
[0184] 8.采用激素替代疗法或激素用于避孕的个体必须是稳定方案至少一个月然后开始研究并且她们必须自愿继续并且在研究期间不改变该药物。在研究开始时未采用HRT或激素的个体在研究过程期间必须自愿不开始使用。
[0185] 9.根据研究要求自愿配合和参与并且立即报告任何不良症状。
[0186] 排除标准
[0187] 1.具有对任何个人护理产品不耐受或过敏历史的个体。
[0188] 2.在研究登记之前小于30天,已经使用任何处方或OTC亮肤产品的个体。
[0189] 3.具有检查人员视为不适于参与的皮肤病况和/或疾病的个体。
[0190] 4.哺乳的、怀孕的或打算研究期间怀孕的个体。
[0191] 5.在研究登记之前小于30天,已经常规使用任何抗老化、抗皱、局部抗氧化剂的个体。
[0192] 6.在研究开始6个月内已经使用酶面部皮肤治疗的个体。
[0193] 7.在研究开始3个月内使用或 或其他局部类视黄醇,或过去6月内已经服用Accutane
或口服类维生素A。
[0194] 8.在研究开始30天内,面部常规使用包含α-、β-或聚羟基酸(包括水杨酸和Lachydrin)的产品、视黄醇或视黄醇衍生物或其他‘抗老化’产品。
[0195] 9.在治疗的3月内或研究期间已经接收面部磨皮术或化学剥离治疗的个体。
[0196] 10.治疗6个月内或研究期间治疗区域已经接收光RF,或其他设备治疗的个体。
[0197] 11.治疗的9个月内或研究期间,在治疗区域用注射或注入的材料已经接受Botox、胶原蛋白、脂肪注射或其他加强方法的个体。
[0198] 12.在开始该试验之前12个月内,已经进行表面重修程序、面部提升或眼睛或眼脸外科手术的个体。
[0199] 13.依据研究人员的观点,面部具有可能干扰研究结果的之前存在的和/或休眠皮肤病学病况(例如白癜风、遗传过敏性皮炎、牛皮癣、酒渣鼻、湿疹、脂溢性皮炎、严重的脱皮等)或医学条件/疾病的个体。
[0200] 14.具有免疫抑制剂/免疫缺陷不适(包括(HIV感染或AIDS)历史或目前使用免疫抑制药物治疗的个体。
[0201] 15.参与任何其他临床应用研究的个体(碎片研究是可接受的)。
[0202] 16.具有未控制的疾病比如糖尿病、高血压、甲状腺功能亢进症或甲状腺功能减退症的个体。具有多种健康病况的一些个体排除参与,即使病况通过膳食、药物等被控制。
[0203] 17.在纳入研究之间的28天内已经参与任何临床试验的个体。
[0204] 基于医学历史和研究前的面试和检查,根据研究人员的判断和指定,允许个体研究。
[0205] 研究设计
[0206] 进行双盲、安慰剂对照临床试验,以评估具有温和至中等光损伤,即老化的面部皮肤的女性中局部皮肤治疗的效力。该试验的持续时间是12周,在基线、2周、6周和12周,按规定访问。使用视觉分级、工具、数字VISIA CR照片和受试者自评估问卷评估效力。
[0207] 每组N>30的三个组完成了研究。受试者接受活性皮肤治疗,即上述孵化液组合物,或媒介对照(水)施加至面部12周。根据预定的随机化,将受试者随机分成3组。
[0208]
[0209]
[0210] 效力和耐受性评估
[0211] 专家临床打分员评估面部右侧和左侧的下面显示的参数。使用改良的Griffith表,其中0=无,1-3=温和,4-6=中等和7-9=严重。当需要更好描述皮肤条件时使用半点。
[0212] ·细线
[0213] ·皱纹
[0214] ·色素沉着过度
[0215] ·松弛
[0216] ·钝的/不光滑(清晰度)
[0217] ·触觉粗糙度
[0218] 专家临床打分员评估面部右侧和左侧的下面显示的参数。使用四点表,其中0=无,2=中等,3=中等和4=严重。当需要更好描述皮肤条件时使用半点。
[0219] ·红斑
[0220] ·干燥/脱屑
[0221] ·发热/刺痛感觉
[0222] ·发痒
[0223] ·紧致/干燥感觉
[0224] 数字VISIA CR摄影
[0225] 在面部的右侧和左侧进行VISIA-CR成像。使受试者成像使得她们的头发在后面,摘掉首饰,闭眼,受试者在画面的中央并且具有自然的面部表情。
[0226] 经表皮水分丧失(TEWL)
[0227] 在工具测量之前,使受试者在临床的环境条件下平衡至少20分钟。在研究访问期间,每小时记录环境条件。在此期间,对受试者分级,完成问卷和/或进行VISIA CR成像。
[0228] Tewameter用于在所有访问期间进行经表皮水分丧失(TEWL)测量。在从眼角向下延伸的线的交叉处并且水平横跨鼻子底部的右侧脸颊和左侧脸颊进行测量。
[0229] 利用开放腔室系统,Tewameter测量TEWL。放置在皮肤表面上的手持探针在表面上方两个点对相对湿度取样,使得从测量的湿度梯度计算水分丧失速度。
[0230] Cutometer MPA 580
[0231] 所有的受试者在所有的访问时进行Cutometer测量。Cutometer用于评估皮肤的粘弹性特性(即延展性和弹性)。工具施加真空至皮肤的小取样并且通过光技术测量皮肤的弹性响应(皮肤移动进入和离开开口)。
[0232] 为了该研究,使用2mm探针,施加300mbar的真空并且进行两个循环的抽吸和释放。循环时间是开5秒和关10秒。
[0233] 在从眼角向下延伸的线的交叉处并且水平横跨鼻子底部的右侧脸颊和左侧脸颊,或颚附近的备选区域进行测量。
[0234] 皮肤评估和自评估问卷
[0235] 受试者完成皮肤自评估问卷,包含描述受试者如何感受她们面部皮肤外观的问题和在面部右侧和左侧条件的问题。
[0236] 结果
[0237] 细线
[0238] 在2周用包括一种活性组合物的皮肤洗剂的受试者显示与安慰剂(4.58%)相比,细线的减少(例如百分数改变为5.59%(1%溶液)和5.65%(3%溶液))。在6周细线的减少继续(例如14.34%(1%溶液),14.86%(3%溶液)和8.98%(安慰剂))和12周(例如23.43%(1%溶液),25.99%(3%溶液)和14.68%(安慰剂))。图1和2显示具
有28%细线减少的受试者。
[0239] 皱纹
[0240] 在2周用包括一种活性组合物的皮肤洗剂的受试者显示与安慰剂(0.70%)相比皱纹的减少(例如百分数改变为2.15%(1%溶液)和1.75%(3%溶液))。在6周皱纹的减少继续(例如6.13%(1%溶液),7.32%(3%溶液)和3.70%(安慰剂))和12周(例如14.72%(1%溶液),15.15%(3%溶液)和9.57%(安慰剂))。图1显示具有12.5%
皱纹减少的受试者。图3显示具有26.32%皱纹减少的受试者。
[0241] 色素沉着过度
[0242] 在2周用包括一种活性组合物的皮肤洗剂的受试者显示与安慰剂(0.40%)相比色素沉着过度的减少(例如百分数改变为2.11%(1%溶液)和2.68%(3%溶液))。在6周色素沉着过度的减少继续(例如5.61%(1%溶液),7.91%(3%溶液)和3.16%(安慰剂))和12周(例如10.53%(1%溶液),15.35%(3%溶液)和5.73%(安慰剂))。图1显示12周之后具有15%老年斑色素沉着减少的受试者。
[0243] 松弛
[0244] 在2周用包括一种活性组合物的皮肤洗剂的受试者显示与安慰剂(0.87%)相比松弛的减少(例如百分数改变为2.64%(1%溶液)和1.62%(3%溶液))。在6周松弛的减少继续(例如6.33%(1%溶液)和6.61%(3%溶液),2.51%(安慰剂))和12周(例如10.55%(1%溶液)和11.33%(3%溶液),5.18%(安慰剂))。图1显示12周之后具
有7.69%松弛(下垂)减少的受试者。
[0245] 钝的/不光滑(清晰度)
[0246] 在2周用包括一种活性组合物的皮肤洗剂的受试者显示与安慰剂(10.67%)相比皮肤清晰度的改善(例如百分数改变为12.95%(1%溶液)和16.00%(3%溶液))。在6周改善继续(例如29.26%(1%溶液),28.50%(3%溶液)和19.07%(安慰剂))和12周(例如37.17%(1%溶液),39.18%(3%溶液)和26.72%(安慰剂))。图1显示具有
33.33%钝度减少的受试者。
[0247] 触觉粗糙度
[0248] 在2周用包括一种活性组合物的皮肤洗剂的受试者显示与安慰剂(13.38%)相比皮肤触觉粗糙度的减少(例如百分数改变为16.51%(1%溶液)和20.24%(3%溶液))。在6周改善继续(例如24.77%(1%溶液),26.65%(3%溶液)和16.79%(安慰剂)),
但是在12周没有进一步减少(例如26.61%(1%溶液),29.19%(3%溶液),和15.79%(安慰剂))。图1显示具有12.5%触觉粗糙度减少的受试者。
[0249] 干燥/脱屑
[0250] 在2周用包括一种活性组合物的皮肤洗剂的受试者显示与安慰剂(64.71%)相比皮肤干燥/脱屑的减少(例如百分数改变为72.09%(1%溶液)和100.00%(3%溶液))。但是,在6周(例如86.05%(1%溶液),84.62%(3%溶液)和100.00%(安慰剂)),和
12周与安慰剂(例如90.70%(1%溶液),100.00%(3%溶液)和89.47%(安慰剂))相
比,没有进一步减少。
[0251] TEWL
[0252] 尽管在2周用包括一种活性组合物的皮肤洗剂的受试者显示与安慰剂(17.26%)相比TEWL的减少,但是这与安慰剂(例如百分数改变为15.35%(1%溶液)和14.53%(3%溶液))不是显著不同。但是,在6周(例如29.46%(1%溶液),26.66%(3%溶液)和22.96%(安慰剂)),和12周进一步减少大于安慰剂(例如37.46%(1%溶液),40.04%(3%溶液),和34.21%(安慰剂))的。
[0253] 延展性
[0254] 尽管在2周用包括一种活性组合物的皮肤洗剂的受试者显示与安慰剂(10.82%)相比皮肤延展性的改善,但是这与安慰剂(例如百分数改变为16.18%(1%溶液)和17.21%(3%溶液))的不是显著不同。在6周三个治疗(例如18.04%(1%溶液),17.18%(3%溶液)和19.90%(安慰剂))之间没有明显不同,但是在12周对于用包括活性组分的组合物治疗的皮肤具有进一步改善,其大于安慰剂(例如31.84%(1%溶液),33.57%(3%溶液),和16.48%(安慰剂))的。
[0255] 在研究开始(基线)和治疗12周之后进行的在面部两侧的触觉/视觉临床分级的比较显示所有的受试者显示在用本发明的孵化液组合物它们皮肤的钝度和粗糙度的改善并且大部分受试者显示细线(97%的受试者)、皱纹(91%的受试者)、色素沉着过度(87%的受试者)和下垂(80%的受试者)的改善(图4)。
[0256] 问卷揭示从使用的6周,安慰剂和包括本发明的孵化液组合物的化妆品组合物之间关于总体外观、总体感觉、平滑度、柔软度、清晰度和弹性描述的平均分出现统计学上显著差异。
[0257] 因此,从上面的结果显而易见,与安慰剂相比,孵化液提取物组合物表明了对老化的皮肤每个方面的作用。
[0258] 实施例3:相对于已知的美容皮肤治疗,孵化液组合物对重构的人表皮作用的比较体外研究
[0259] 体外重构的人表皮由化学限定培养基中在惰性聚碳酸酯过滤器上气液界面处培养的正常人角质细胞培养组成。该体外模型组织学上与体内人表皮的类似。
[0260] 重构的人表皮(SkinEthic)在角质层侧暴露于200μl的下述一种溶液12小时、24小时或48小时:
[0261] 1%孵化液组合物;
[0262] 5%乙醇酸(AHA);
[0263] 1mU/ml菠萝蛋白酶(水果酶);或
[0264] dH2O(对照)。
[0265] 在暴露之后,培养物在4℃下固定在PBS的4%(w/v)低聚甲醛中并且通过扫描电子或光学显微镜分析。
[0266] 处理的重构人表皮12小时之后的扫描电子显微照片的评估(图5)显示5%乙醇酸溶液产生损伤的角质层和皮肤腐蚀。用菠萝蛋白酶处理通过消化细胞的包膜造成脱皮。相反,用本发明的孵化液组合物处理使得通过避免完整的角质细胞脱皮,因为仅仅细胞结合位点已经被降解。因此,孵化液溶液提供了温和的皮肤微剥离。
[0267] 在暴露48小时之后,重构的人表皮的扫描电子显微照片(图6)显示乙醇酸导致更严重的破坏的皮肤,其中细胞包膜已经破碎并且细胞骨架清晰可见。尽管用菠萝蛋白酶处理产生更平滑的皮肤表面,但是仍存在粗糙的碎片。但是,用本发明的孵化液组合物处理产生比对照(即未处理的)皮肤超光滑的皮肤表面。因此,孵化液组合物可视为提供皮肤平滑作用。
[0268] 重构的人表皮的切片的光学显微镜(图7)显示暴露于乙醇酸24小时导致活细胞的破坏,包括来自基底层的表皮干细胞。在用乙醇酸处理之后仅仅剩下的是很少的致密核(其中染色质已经不可逆的致密)和无核的细胞。暴露于菠萝蛋白酶24小时导致对基底层和棘层的最小改变。相反,在暴露于本发明的孵化液组合物24小时之后,重构的皮肤显示明显的细胞增殖和分化(见图7的箭头A)。在暴露于孵化液组合物48小时之后,皮肤显示明显的致密颗粒层和更高浓度的层状颗粒剂(见图7的箭头B)。因此本发明的孵化液组合物具有皮肤修复作用并且产生皮肤屏障功能的改善。
[0269] 实施例4:非鲑科孵化液的分析
[0270] 分析来自非鲑科鱼物种的孵化液,以确定其是否包含与源自鲑科孵化液的化妆品组合物中出现的多肽等同的多肽。
[0271] 温育抗实施例1-3中描述的孵化液组合物组要多肽组分的抗体。抗体用于确定来自青鳉(Oryzias latipes)和斑马鱼(Danio rerio)的孵化液中是否存在类似的多肽。
[0272] 根据实施例1中描述的方法获得鲑鱼孵化液。
[0273] 从Bergen大学的生物学系的斑马鱼实验室获得来自青鳉和斑马鱼的孵化液。就此而言,从其中已经孵化约100个胚胎水中获得斑马鱼孵化液的样品(30mL)。从其中已经孵化约14个胚胎的水中获得青鳉孵化液的样品(14mL)。来自水族馆的水用作空白对照。
[0274] 在分析之前,通过冷冻干燥48小时浓缩样品(约10倍)。在A280nm的分光光度计中测量浓缩的样品的蛋白质浓度。样品的吸光度是:鲑鱼A280=5.6;青鳉A280=1.6;和斑马鱼A280=0.1。
[0275] 通过SDS-PAGE分析浓缩的多肽样品。通过考马斯亮蓝对所得凝胶染色或使用抗鲑鱼孵化液组合物的主要组分的上述的抗体通过蛋白质印迹分析。
[0276] 图8A中考马斯亮蓝染色的凝胶对于青鳉样品显示数个清晰的带(泳道2),其与鲑鱼样品(泳道1)中观察的相当。在空白样品(未显示)或斑马鱼样品(泳道3)中没有观察到可见的带。但是,在斑马鱼样品中没有可见的带可解释为斑马鱼样品中相对低浓度的蛋白。类似地,鲑鱼样品中出现另外的带可解释为鲑鱼样品中高浓度的蛋白,其意思是甚至更低的丰富蛋白质是可见的。
[0277] 图8B显示表明抗体与鲑鱼样品中单个带特异性反应和与青鳉样品和斑马鱼样品二者中蛋白质交叉反应的蛋白质印迹。再一次,带的强度的差异可解释为这些样品中不同浓度的蛋白质。
[0278] 鲑鱼样品中鉴定的多肽是约25kDa(泳道1)。青鳉样品中交叉活性多肽是约35kDa(泳道2)和斑马鱼样品(泳道3)中为约27kDa。通过抗体在空白样品(未显示)中
没有检测到多肽。尽管不希望被理论限制,但是来自鲑鱼、青鳉和斑马鱼的多肽的尺寸可归因于物种间变化并且对于不同物种间功能上等同的多肽的尺寸不同不是不同寻常的,例如,由于不同的翻译后修饰,比如糖基化。
[0279] 这些结果指示来自每个物种的孵化液包含类似组的多肽并且非鲑科鱼物种包含结构上与实施例1-3中描述的化妆品组合物中多肽类似的多肽。可预期非鲑科孵化液中的多肽具有如源自鲑鱼孵化液的化妆品组合物多肽相同的功能特性。因此,来自非鲑科鱼的孵化液是本文所述的方法适当的开始材料并且预期产生根据本发明有效的化妆品组合物。
QQ群二维码
意见反馈