一种食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型及其建立方法 |
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| 申请号 | CN201710725806.0 | 申请日 | 2017-08-22 | 公开(公告)号 | CN107374767A | 公开(公告)日 | 2017-11-24 |
| 申请人 | 云南省第一人民医院; | 发明人 | 吕梁; 刘兴利; 宋巍; 杨维新; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种食蟹猴缺血性脑卒中 疾病 模型及其建立方法，其中，通过在食蟹猴右侧大脑中动脉M1段远端置入堵塞物，使其闭塞大脑中动脉主干及不多于2支的豆纹动脉。本发明的食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型的建立方法能够和血管解剖走行很好的匹配，从而精确 定位 ，同时，能够很好控制栓塞的程度，制作的缺血性脑卒中疾病模型更加稳定、可控，脑卒中疾病模型的脑梗死面积适中，动物能够长期存活且具备典型的右侧大脑中动脉闭塞所引起的症状；该法对动物的创伤程度较小，经股动脉穿刺 插管 ，避免了颈部血管的创伤引起的脑缺血性改变，能够满足脑卒中临床研究的相关需求。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型的建立方法，其中，通过在食蟹猴右侧大脑中动脉M1段远端置入堵塞物，使其闭塞大脑中动脉主干及不多于2支的豆纹动脉。 |
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| 说明书全文 | 一种食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型及其建立方法技术领域[0001] 本发明涉及动物疾病模型的建立方法，具体涉及一种食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型及其建立方法。 背景技术[0002] 目前，对啮齿类动物(大鼠、小鼠等)脑缺血模型的研究较多，灵长类动物(猴)脑缺血模型的研究较少，但是啮齿类动物模型在解剖、对缺血反应上都与人类存在一定的区别，需要进一步的利用灵长类动物模型进行研究以便进一步证实。灵长类动物缺血性脑卒中疾病模型的建立方法主要有以下几种：1、光化学法，通过光化学反应诱导局部脑缺血灶，这种疾病模型建立方法中，实验动物活率高且重复性好，但是需要在对动物进行开颅，对动物创伤较大，且仅能诱发皮层梗死，而不是完整的大脑动脉供血区，缺血区快速进展到血管源性水肿阶段，与人类脑卒中的病理过程存在一定的差别。2、自体血栓栓塞法，通过自体血栓注入，模拟血栓栓塞，与疾病的发生机制最为接近，但注入的栓子可能通过血液循环引起二次栓塞或在栓塞过程中栓子自溶，造成栓塞的不可控性，栓子注入过程中可能引起栓子逆流，导致异位栓塞，使得栓塞模型的复杂化。3、血管内气囊栓塞法，该法属于介入栓塞的一种，弥补了光化学法对血管不可逆的破坏和自体血栓栓塞法可控性差的缺点，但栓塞程度却不易控制，容易造成栓塞不全或充气过度引起血管破裂。且目前球囊栓塞的导管质地较硬，不能随意弯曲，无法很好的与血管解剖走行相匹配，在实际应用中，也不是理想的脑缺血动物模型建立方法。 [0003] 传统方法制备的动物模型稳定性较差，梗死面积过大或过小如图1、2所示，图1所示的动物模型梗死面积3过大，基底节区4明显受累，导致脑水肿、脑疝、颅高压，动物的死亡率极高。图2所示的动物模型，梗死面积3太小，基底节区4虽然不受累，实验动物能够长期存活，但却不足以引起脑卒中相关症状，无法满足临床研究的需求。 [0004] 综上所述，传统的动物缺血性脑卒中疾病模型的建立方法，存在着与人类脑卒中病理过程差别大，模型复杂程度高，血栓的栓塞程度不易控制，梗死面积不稳定等缺点。临床症状明显的动物往往因为梗死面积太大无法长期存活，而能够长期存活的动物往往梗死面积又过小不具备典型的临床症状，无法满足临床研究的需求。 发明内容[0005] 本发明的目的在于提供一种食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型及其建立方法以及用于构建食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型的系统，用以解决现有技术存在的问题。 [0006] 为实现上述目的，本发明提供一种食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型的建立方法，其中，通过在食蟹猴右侧大脑中动脉M1段远端置入堵塞物，使其闭塞大脑中动脉主干及不多于2支的豆纹动脉。 [0007] 优选的，在动物试验中，所述堵塞物为弹簧圈。 [0008] 优选的，其中，所述弹簧圈闭塞所述食蟹猴右侧大脑中动脉M1段远端的时间为2小时，获得食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型。 [0009] 优选的，其中，所述弹簧圈的置入过程包括以下步骤： [0010] 步骤A：将食蟹猴的右侧腹股沟备皮消毒； [0011] 步骤B：采用动脉穿刺针穿刺股动脉，置入动脉鞘； [0012] 步骤C：通过所述动脉鞘插入导管，所述导管内具有导丝，在所述导丝的引导下，将所述导管引至右侧颈内动脉； [0013] 步骤D：通过DSA造影确定所述导管位于右侧颈内动脉，将所述导丝从所述导管中退出； [0014] 步骤E：将微导管以及位于所述微导管内的微导丝沿着所述导管引至右侧大脑中动脉M1段； [0015] 步骤F：通过DSA造影确定所述微导管引至右侧大脑中动脉M1段，将所述微导丝退出； [0016] 步骤G：将所述弹簧圈通过所述微导管引入到右侧大脑中动脉M1段远端。 [0017] 优选的，其中，所采用的食蟹猴为中年食蟹猴。 [0018] 优选的，其中，所述弹簧圈引至右侧大脑中动脉M1段远端中外1/3处，使得豆纹动脉的栓塞数量为2支。 [0019] 本发明还提供食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型，其由上述所述的方法获得。 [0021] 本发明具有如下优点： [0022] 本发明的食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型动物的建立方法能够和血管解剖走行很好的匹配，从而精确定位，同时能够很好控制栓塞的程度，制作的缺血性脑卒中疾病动物模型更加稳定、可控，模型梗死面积适中，动物能够长期存活，且具备典型的右侧大脑中动脉闭塞所引起的症状；并且该法对动物的创伤程度较小，经股动脉穿刺插管，避免了颈部血管的创伤引起的脑缺血性改变，能够满足临床脑卒中研究的相关需求。附图说明 [0023] 图1为传统方法一实施例制备的食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型动物的脑部磁共振扫描图。 [0024] 图2为传统方法另一实施例制备的食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型动物脑部磁共振扫描图。 [0025] 图3为本发明一实施例制备的食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型中导管、导丝在动物血管中穿行的整体示意图。 [0026] 图4为本发明一实施例制备的食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型中弹簧圈栓塞的具体位点示意图。 [0027] 图5为本发明的弹簧圈置入食蟹猴右侧大脑中动脉M1段远端DSA造影图。 [0028] 图6为本发明一实施例的食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型动物脑部磁共振扫描图。 具体实施方式[0029] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。 [0030] 本发明的1个实施方式提供了食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型动物的建立方法，如图3所示，其中，通过在食蟹猴右侧大脑中动脉23M1段远端置入堵塞物13，使其闭塞豆纹动脉数24不多于2支，从而避免食蟹猴大脑基底节区梗死造成梗死面积过大，动物存活率低的缺陷。 [0031] 上述实施方式的1个具体示例中，本发明提供了食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型构建方法，其中，在动物试验中，堵塞物为弹簧圈，当然可以根据需要采用其他的类似弹簧圈的堵塞物。本发明中，所采用的弹簧圈为钛合金材质制备而成。 [0032] 适于本发明的方法脏器为大脑。 [0034] 为了与人类脑卒中更为接近，需要闭塞的动脉为大脑中动脉，需要通过弹簧圈13闭塞食蟹猴右侧大脑中动脉23M1段远端的时间为2小时，弹簧圈13位于右侧大脑中动脉23M1段远端中外1/3处，闭塞豆纹动脉24的数量为2支，这样的栓塞时间及栓塞位置避免了基底节区梗死引起大面积脑水肿脑疝导致动物死亡或梗死面积过小缺乏典型的临床症状。 [0035] 本发明食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型的建立方法中，如图3至图5所示，将弹簧圈13置入食蟹猴右侧大脑中动脉23M1段远端的过程包括以下步骤： [0036] 步骤A：将食蟹猴的右侧腹股沟备皮消毒； [0037] 步骤B：采用动脉穿刺针穿刺股动脉21，置入动脉鞘11，动脉鞘11优选4F动脉鞘； [0038] 步骤C：通过动脉鞘插入导管14，导管14内具有导丝，在导丝的引导下，将导管引至右侧颈内动脉22； [0039] 步骤D：通过DSA造影确定导管14位于右侧颈内动脉22，将导丝从导管14中退出，本步骤中，通过DSA造影确定导管14位于右侧颈内动脉22的位置； [0040] 步骤E：将微导管以及位于微导管内的微导丝沿着导管14引至右侧大脑中动脉23M1段； [0041] 步骤F：通过DSA造影确定微导管引至右侧大脑中动脉23M1段，将微导丝退出； [0042] 步骤G：将弹簧圈13通过微导管引入到右侧大脑中动脉23M1段远端，使得弹簧圈13闭塞豆纹动脉的数量不多于2支，并保持弹簧圈闭塞右侧大脑中动脉23以及豆纹动脉的时间为2小时，本发明通过改变弹簧圈的压缩程度来把控血管栓塞的致密程度，达到使得右侧大脑中动脉以及不多于2支豆纹动脉完全闭塞。其中，所采用的食蟹猴为中年食蟹猴，获得食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型动物。 [0043] 本发明的建立方法的步骤G中，通过调节弹簧圈的长度来控制在右侧大脑中动脉M1段远端形成栓塞，弹簧圈的长度被压缩的越短，致密性越高，直至使得动脉血管完全闭塞，通过弹簧圈可以很好的控制栓塞的程度。本发明的食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型的建立方法中，通过导管、导丝、微导管以及微丝的作用，使其能够与血管走行相匹配，弹簧圈定位更加准确，能够很好的控制血管栓塞的程度，制作的食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型更加稳定、可控，并且该方法对动物的创伤程度小，经股动脉穿刺插管，避免了颈部血管的创伤引起的脑缺血性改变。 [0044] 本发明还提供了用于构建食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型的系统，其包括利用堵塞物、将堵塞物送达至动脉器具以及血管造影装置作为必要成分。本发明中，堵塞物采用弹簧圈，血管造影装置为DSA造影机。将堵塞物送达至动脉器具包括动脉鞘、导管、导丝、微导管以及微导丝等。 [0045] 本发明通过血管内弹簧圈栓塞法，制备能长期存活并且具有典型行为学改变的食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型动物，建立了一种稳定的与人类脑卒中的病理过程更接近的灵长类脑卒中疾病模型，能满足临床脑卒中研究的相关需求。 [0046] 本发明的动物疾病模型的构建方法通过精准地把控血管内弹簧圈栓塞的位点、栓塞的程度及栓塞的时间来控制栓塞的面积，使得制备的食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型梗死面积适中，能引起典型的大脑中动脉闭塞的行为学改变，同时规避了基底节区的梗死，大大降低大面积脑水肿及脑疝的出现，使得动物能够长期存活。并且在整个栓塞过程中未使用肝素，尽可能的使模型的制备过程更接近人类疾病的发生过程。 [0047] 实施例1：食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型 [0048] 本发明食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型动物的建立方法中，其包括以下步骤： [0049] 步骤A：将食蟹猴的右侧腹股沟备皮消毒； [0050] 步骤B：采用动脉穿刺针穿刺股动脉，置入4F动脉鞘； [0051] 步骤C：通过动脉鞘插入导管，导管内具有导丝，在导丝的引导下，将导管引至右侧颈内动脉； [0052] 步骤D：通过DSA造影确定导管位于右侧颈内动脉，将导丝从导管中退出，本步骤中，通过DSA造影确定导管位于右侧颈内动脉的位置； [0053] 步骤E：将微导管以及位于微导管内的微导丝沿着导管引至右侧大脑中动脉M1段； [0054] 步骤F：通过DSA造影确定微导管引至右侧大脑中动脉M1段，将微导丝退出； [0055] 步骤G：将弹簧圈通过微导管引入到右侧大脑中动脉M1段远端，使得弹簧圈闭塞豆纹动脉的数量为2支，并保持弹簧圈闭塞大脑中动脉以及豆纹动脉的时间为2小时，获得食蟹猴缺血性脑卒中疾病动物模型。 [0056] 实施例2：食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型 [0057] 本发明食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型的建立方法中，其包括以下步骤： [0058] 步骤A：将食蟹猴的右侧腹股沟备皮消毒； [0059] 步骤B：采用动脉穿刺针穿刺股动脉，置入4F动脉鞘； [0060] 步骤C：通过动脉鞘插入导管，导管内具有导丝，在导丝的引导下，将导管引至右侧颈内动脉； [0061] 步骤D：通过DSA造影确定导管位于右侧颈内动脉，将导丝从导管中退出，本步骤中，通过DSA造影确定导管位于右侧颈内动脉的位置； [0062] 步骤E：将微导管以及位于微导管内的微导丝沿着导管引至右侧大脑中动脉M1段； [0063] 步骤F：通过DSA造影确定微导管引至右侧大脑中动脉M1段，将微导丝退出； [0064] 步骤G：将弹簧圈通过微导管引入到右侧大脑中动脉M1段远端，使得弹簧圈闭塞豆纹动脉的数量为1支，并保持弹簧圈闭塞大脑中动脉以及豆纹动脉的时间为2小时，获得食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型。 [0065] 如图6所示，本发明的实施例1和实施例2中的食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型，栓塞完毕后，进行磁共振扫描，右侧大脑中动脉分布区缺血性脑梗死，梗死面积3适中，但基底节区4尚正常。 [0066] 本发明食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型建立方法制备的6只食蟹猴缺血性脑卒中疾病模型中，食蟹猴全部存活，其中，存活时间最长时间1年余，并且所有6只动物均具有典型的右侧大脑中动脉阻塞引起的脑梗死症状-左侧肢体无力、偏瘫。而传统方法建立的动物模型存活最长时间为1个多月，最短的在术后24h内就死于大面积脑水肿、脑疝，能存活的动物又往往因为梗死面积太小而缺乏相应的临床表现。 |
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