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动物头颅快速解剖及完整脑部组织分离方法
申请号	CN201710194059.2	申请日	2017-03-28	公开(公告)号	CN107019576A	公开(公告)日	2017-08-08
申请人	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;			发明人	储明星; 刘秋月; 贺小云; 狄冉; 王翔宇; 胡文萍;
摘要	本发明提供一种动物头颅快速解剖及完整脑部组织分离方法，该方法能快速的将动物头骨分开，获得完整无污染的大脑、小脑、垂体、下丘脑等脑部组织样品，与传统斧头劈开头骨的方法相比，提高了脑部各组织样品的完整性，降低了操作污染和样品损坏的风险，方法简单，耗时短，在大规模动物屠宰试验中样品的采集有良好的应用前景。
权利要求	1.一种动物头颅快速解剖及完整脑部组织分离方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)取已屠宰的动物头部，固定在台虎钳上，在垂直于动物鼻骨的方向用手术刀去除两眼间的头骨皮肤，同时去除两耳间头顶部至枕骨间的皮肤，使暴露的头骨呈“T”字样；所述动物包括绵羊、山羊、猪、牛； (2)用电锯或手锯入骨一定深度，以穿透头骨且不损伤脑组织为准，沿“T”字垂直于地面切入头部； (3)用手术刀从枕骨上缘0.5cm处至两侧眼眶沿脸颊切开皮肤，用手锯沿切口入骨一定深度，以穿透头骨且不损伤脑组织为准，切入头部； (4)用骨凿插入“T”字切口轻撬，将大脑外的两侧头骨分离取走，暴露完整脑部组织； (5)用手术剪和眼科镊剥离脑膜，取出大脑、小脑、下丘脑及其它脑部组织； (6)取出大脑后，将垂体从垂体窝里取出。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括将取下的脑组织取下后装入冻存管中，立即放入液氮保存；或者将脑组织置于装有4％多聚甲醛的50ml离心管盛装后于4℃保存。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)取已屠宰的绵羊或山羊头部，固定在台虎钳上，在垂直于绵羊鼻骨的方向用手术刀去除两眼间的头骨皮肤，同时去除两耳间头顶部至枕骨间的皮肤，使暴露的头骨呈“T”字样； (2)用电锯或手锯入骨0.5-1.0cm，沿“T”字垂直于地面切入羊头； (3)用手术刀从枕骨上缘0.5cm处至两侧眼眶沿脸颊切开皮肤，用手锯沿切口入骨1.0- 1.5cm切入羊头； (4)用骨凿插入“T”字切口轻撬，将大脑外的两侧头骨分离取走，暴露完整脑部组织； (5)用手术剪和眼科镊剥离脑膜，取出大脑、小脑、下丘脑及其它脑部组织； (6)取出大脑后，用眼科剪将垂体从垂体窝里取出。
说明书全文	动物头颅快速解剖及完整脑部组织分离方法技术领域 [0001] 本发明涉及生命科学领域，尤其是一种动物头颅快速解剖及完整脑部组织分离方法。背景技术 [0002] 动物的脑部是控制其行为和支配一切生命活动的中枢，主要包括大脑、小脑、下丘脑、垂体等组织。大脑支配动物的一切生命活动(如：语言、运动、听觉、视觉、情感表达等)，够调节消化、呼吸、循环、泌尿、生殖、运动等中枢；小脑通过它与大脑、脑干和脊髓之间丰富的传入和传出联系，参与躯体平衡和肌肉张力(肌紧张)的调节，以及随意运动的协调；下丘脑是大脑皮层下调节内脏活动的高级中枢，能把内脏活动和其它生理活动联系起来，调节体温、采食、内分泌腺活动以及机体水平衡等重要生理功能；垂体是动物体内主要的内分泌腺体，分泌多种激素，如促性腺激素、生长激素、促甲状腺激素、催产素、催乳素等，还能接受下丘脑分泌的促性腺激素释放激素，这些激素对于动物的新陈代谢、生长发育、生殖生理等有重要作用。采集完整无污染的脑部组织对于提取组织RNA，研究脑部功能有重大意义。 [0003] 现有的动物(如绵羊)脑部组织样品的采集方法主要是用电锯或者斧头纵向劈开头颅，将之分成两半，在劈开后，寻找采集大脑、小脑、下丘脑、垂体等脑部组织。此方法获得的脑部组织受机械损伤较大，易将大脑、小脑、下丘脑、垂体等组织弄碎，造成污染和损失，且操作人员的熟练程度对脑部组织的采集影响很大；由于脑部完整性较差，某些组织的寻找耗时较长，降低采样效率，同时样品由于长时间暴露在空气中造成降解，对提取RNA进行后续实验的样品有毁灭性的影响。发明内容 [0004] 本发明的目的是提供一种解剖动物头颅并获取完整脑部组织的方法，该方法操作时间短、样品完整性好、污染和组织损伤机率低、简单易行，克服了现有技术的不足。 [0005] 本发明是这样实现的：动物头颅快速解剖及完整脑部组织分离方法，包括以下步骤： [0006] (1)取已屠宰的动物头部，固定在台虎钳上，在垂直于动物鼻骨的方向用手术刀去除两眼间的头骨皮肤，同时去除两耳间头顶部至枕骨间的皮肤，使暴露的头骨呈“T”字样； [0007] 所述动物包括绵羊、山羊、猪、牛等； [0008] (2)用电锯或手锯入骨一定深度，以穿透头骨且不损伤脑组织为准，沿“T”字垂直于地面切入头部； [0009] 对于绵羊和山羊以入骨0.5-1.0cm为佳； [0010] (3)用手术刀从枕骨上缘0.5cm处至两侧眼眶沿脸颊切开皮肤，用手锯沿切口入骨一定深度，以穿透头骨且不损伤脑组织为准，切入头部； [0011] 对于绵羊和山羊以入骨1.0-1.5cm为佳； [0012] (4)用骨凿插入“T”字切口轻撬，将大脑外的两侧头骨分离取走，暴露完整脑部组织； [0013] (5)用手术剪和眼科镊剥离脑膜，取出大脑、小脑、下丘脑及其它脑部组织； [0014] (6)取出大脑后，可用眼科剪将垂体从垂体窝里取出。 [0015] 进一步地，上述方法还包括将取下的动物大脑、小脑、下丘脑和垂体等组织取下后装入冻存管中，立即放入液氮保存；或者将脑组织置于装有4％多聚甲醛的50ml离心管盛装后于4℃保存。 [0016] 本发明方法适用于绵羊、山羊、猪、牛等；不同动物锯子的入骨深度、切开长度等一些参数需要调整，不同动物的开口位置基本一致。 [0017] 具体地，本发明提供一种动物头颅快速解剖及完整脑部组织分离方法，包括以下步骤： [0018] (1)取已屠宰的绵羊或山羊头部，固定在台虎钳上，在垂直于绵羊鼻骨的方向用手术刀去除两眼间的头骨皮肤，同时去除两耳间头顶部至枕骨间的皮肤，使暴露的头骨呈“T”字样； [0019] (2)用电锯或手锯入骨0.5-1.0cm，沿“T”字垂直于地面切入羊头； [0020] (3)用手术刀从枕骨上缘0.5cm处至两侧眼眶沿脸颊切开皮肤，用手锯沿切口入骨1.0-1.5cm切入羊头； [0021] (4)用骨凿插入“T”字切口轻撬，将大脑外的两侧头骨分离取走，暴露完整脑部组织； [0022] (5)用手术剪和眼科镊剥离脑膜，取出大脑、小脑、下丘脑及其它脑部组织； [0023] (6)取出大脑后，可用眼科剪将垂体从垂体窝里取出。 [0024] 与现有技术相比，本发明能够快速的将动物的头骨分开，获取完整、无污染的大脑、小脑、垂体、下丘脑等脑部组织样品，与传统斧头劈开头骨的方法相比，提高了脑部各组织样品采集的完整性，降低了操作污染和样品损坏的风险，方法简单，耗时短，使用效果好，对于大规模动物屠宰试验中样品的采集有良好的应用前景。附图说明 [0025] 图1为实施例1切口位置示意图；图1中A、B、C表示切口，切口C为两侧对称切口。 [0026] 图2A为实施例1采集到的绵羊脑部组织图片；图2B为现有方法采集到的绵羊脑部组织图片。具体实施方式 [0027] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。 [0028] 实施例1 [0029] 本发明的实施例：绵羊头颅快速解剖及完整脑部组织分离法，包括以下步骤： [0030] (1)取已屠宰的绵羊头部，固定在台虎钳上，在垂直于绵羊鼻骨的方向用手术刀去除两眼间的头骨皮肤，同时去除两耳间头顶部至枕骨间的皮肤，使暴露的头骨呈“T”字样； [0031] (2)用电锯或手锯入骨0.5-1.0cm，沿“T”字垂直于地面切入羊头，即图1中切口A和B(也可以理解为由切口A和B构成“T”字样)； [0032] (3)用手术刀从枕骨上缘0.5cm处至两侧眼眶沿脸颊切开皮肤，用手锯沿切口入骨1.0-1.5cm切入羊头，即图1中切口C，切口C为两侧对称切口； [0033] (4)用骨凿插入“T”字切口轻撬，将大脑外的两侧头骨分离取走，暴露完整脑部组织； [0034] (5)用手术剪和眼科镊剥离脑膜，取出大脑、小脑、下丘脑及其它脑部组织，见图2A； [0035] (6)取出大脑后，可用眼科剪将垂体从垂体窝里取出。 [0036] 将取下的绵羊大脑、小脑、下丘脑和垂体等组织取下后装入冻存管中，立即放入液氮保存；或者用装有4％多聚甲醛的50ml离心管盛装后放入4℃。 [0037] 实施例2 [0038] 将实施例1采集的绵羊脑部组织与现有方法取得的绵羊脑部组织(见图2B)进行对比：分别采集绵羊的大脑等组织，发现本发明完整性较好，且污染损伤较小，样品定位和采集较易。

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