构建兔创伤止血动物模型的方法和利用该动物模型评价止血产品的方法 |
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| 申请号 | CN201610900575.8 | 申请日 | 2016-10-14 | 公开(公告)号 | CN106510886A | 公开(公告)日 | 2017-03-22 |
| 申请人 | 孙立旦; | 发明人 | 孙立旦; 杨飞霞; 李英俊; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了构建兔创伤 止血 动物模型的方法和利用该动物模型评价止血产品的方法，其中，构建兔创伤止血动物模型的方法包括：将兔禁食不禁 水 24h；将所述兔进行称重和麻醉处理；将经过所述麻醉处理的所述兔左侧卧，暴露右侧，于肝脏相应部位进行备皮处理；沿右侧最后肋骨平行处切口3～6cm，钝性分离腹外斜肌和内斜肌，暴露并剪开腹膜，暴露肝脏；以及于右叶肝脏的壁面切出小方口，剥离表层，形成出血创面，以便得到兔创伤止血动物模型。利用该兔创伤止血动物模型可以有效地对止血产品进行评价，进而为止血药物的筛选和评价提供可靠依据。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种构建兔创伤止血动物模型的方法，其特征在于，包括： |
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| 说明书全文 | 构建兔创伤止血动物模型的方法和利用该动物模型评价止血产品的方法 技术领域背景技术[0002] 目前市场上有很多用于止血的产品，但是对于这些止血产品的使用评价则没有统一的规定。 发明内容[0003] 本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出构建兔创伤止血动物模型的方法和利用该动物模型评价止血产品的方法，利用该兔创伤止血动物模型可以有效地对止血产品进行评价，进而为止血药物的筛选和评价提供可靠依据。 [0004] 为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种构建兔创伤止血动物模型的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：将兔禁食不禁水24h；将所述兔进行称重和麻醉处理；将经过所述麻醉处理的所述兔左侧卧，暴露右侧，于肝脏相应部位进行备皮处理；沿右侧最后肋骨平行处切口3～6cm，钝性分离腹外斜肌和内斜肌，暴露并剪开腹膜，暴露肝脏；以及于右叶肝脏的壁面切出小方口，剥离表层，形成出血创面，以便得到兔创伤止血动物模型。 [0005] 根据本发明的实施例，发明人发现，通过采用上述构建兔创伤止血动物模型的方法，所获得的动物模型可以有效地对多种止血产品进行测试评价，从而对止血产品的止血性能进行评价，对止血产品的研发提供指导。 [0006] 另外，根据本发明上述实施例的构建兔创伤止血动物模型的方法还可以具有如下附加的技术特征： [0007] 在本发明的一些实施例中，所述兔的体重为2.8～3.2kg。 [0008] 在本发明的一些实施例中，所述麻醉处理包括：采用3wt％戊巴比妥钠溶液按照0.5mL/kg的剂量对所述兔进行第一静脉注射；于3min后采用陆眠宁II按照0.1mL/kg的剂量对所述兔进行第二静脉注射。 [0009] 在本发明的一些实施例中，所述备皮处理得到的备皮区域为8cm×15cm。 [0010] 在本发明的一些实施例中，沿右侧最后肋骨平行处切口长度为3～6cm，优选5cm。 [0011] 在本发明的一些实施例中，所述小方口的大小为1cm×1cm。 [0012] 在本发明的一些实施例中，剥离所述表层3～4mm。 [0013] 在本发明的另一方面，本发明提出了一种用于评价止血产品的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：根据前面所述的方法构建得到兔创伤止血动物模型；对所述兔创伤止血动物模型施加所述止血产品。 [0014] 由此，采用上述实施例构建得到的兔创伤止血动物模型可以有效地对止血产品进行筛选和评价。 [0015] 另外，根据本发明上述实施例的用于评价止血产品的方法还可以具有如下附加的技术特征： [0016] 在本发明的一些实施例中，对所述兔创伤出血动物模型施加所述止血产品按照下列步骤进行：用纱布在所述出血创面处按压止血30s；取下纱布并立即在所述出血创面上施加所述止血产品；用纱布按压并持续3min直至无血液渗出。 [0018] 在本发明的一些实施例中，所述止血产品为止血粉、止血棉和止血纱布中的至少之一。 [0019] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。 具体实施方式[0020] 下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。 [0021] 此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。 [0022] 在本发明的一个方面，本发明提出了一种构建兔创伤止血动物模型的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：将兔禁食不禁水24h；将所述兔进行称重和麻醉处理；将经过所述麻醉处理的所述兔左侧卧，暴露右侧，于肝脏相应部位进行备皮处理；沿右侧最后肋骨平行处切口3～6cm，钝性分离腹外斜肌和内斜肌，暴露并剪开腹膜，暴露肝脏；以及于右叶肝脏的壁面切出小方口，剥离表层，形成出血创面，以便得到兔创伤止血动物模型。 [0023] 根据本发明的实施例，发明人发现，通过采用上述构建兔创伤止血动物模型的方法，所获得动物模型可以有效地对多种止血产品进行测试评价，从而对止血产品的止血性能进行评价，对止血产品的研发提供指导。 [0024] 根据本发明的具体实施例，兔的体重为2.8～3.2kg。 [0025] 根据本发明的具体实施例，将兔进行称重之后对兔进行麻醉处理。具体地，可以根据兔的体重给以适当剂量的麻药进行麻醉。根据本发明的具体实施例，麻醉处理具体可以按照下列步骤进行：采用3wt％戊巴比妥钠溶液按照0.5mL/kg的剂量对所述兔进行第一静脉注射；于3min后采用陆眠宁II按照0.1mL/kg的剂量对所述兔进行第二静脉注射。根据本发明的具体实施例，具体可以根据兔体重，通过上述二次麻醉进行追加麻醉，进而有效维持手术时间。该手术时间约为1小时。发明人还发现，首先采用3wt％戊巴比妥钠溶液进行预麻醉，然后采用陆眠宁II进行二次麻醉，可以有效地达到手术需要的时间麻醉效果，麻醉时效约为1小时，进而保证手术顺利进行完毕。 [0026] 根据本发明的具体示例，在后续的构建模型的过程中，可以根据兔的麻醉深度多次追加首次剂量1/4的陆眠宁II进行麻醉。由此可以保证构建模型的顺利完成。 [0027] 根据本发明的具体实施例，进一步地，将经上述麻醉处理后的兔左侧卧，暴露右侧，于肝脏相应部位进行备皮处理。由此可以有效地寻找到兔的肝脏。 [0028] 根据本发明的具体实施例，备皮处理具体操作为于肝脏相应部位进行剃毛，得到的备皮区域为8cm×15cm，由此可以便于后续切口暴露出肝脏。发明人发现，如果备皮区域过小，则无法获得足够大的切口区域，进而无法有效地暴露肝脏。根据本发明的具体示例，剃毛并清洁皮肤后，用碘酊对剃除毛的部位进行消毒，再用75％的酒精进行二次消毒、脱碘。备皮处理完成后，在备皮位置铺上创巾，暴露切口部位。 [0029] 根据本发明的具体实施例，备皮处理后，沿右侧最后肋骨平行处切口3～6cm，钝性分离腹外斜肌和腹内斜肌，暴露并剪开腹膜，暴露肝脏。根据本发明的具体示例，通过在沿右侧最后肋骨平行处切口可以有效地暴露肝脏，同时不会损伤肋骨。根据本发明的具体示例，钝性分离腹外斜肌和腹内斜肌过程中如遇可见大血管需结扎止血，防止出血量较大而影响实验。 [0030] 另外，发明人发现，根据兔的体型大小可以适当调节切口大小，具体长度控制在3～6cm比较合适。通常采用体重适中的兔，其切口大小可以为5cm。由此可以暴露出适当大小的肝脏，且便于后续在肝脏表面形成出血创面。发明人发现，切口过小，则手术视野太小，不便于手术操作，并且无法暴露出肝脏；切口过大则会导致创伤严重，出血过多，影响实验进行。 [0031] 根据本发明的具体实施例，暴露肝脏后，于右叶肝脏的壁面切出小方口，剥离表层，形成出血创面，以便得到兔创伤止血动物模型。 [0032] 根据本发明的具体实施例，为了方便操作，选择在右叶肝脏的壁面进行制造出血创面，首先在右叶肝脏的壁面切出小方口。根据本发明的具体示例，小方口的大小可以为1cm×1cm，由此可以形成适当大小的出血创面。发明人发现，如果小方口的面积大于1cm× 1cm会导致出血面积过大，出血严重，可能任何止血产品都达不到理想的效果，进而不能够有效地对止血产品进行评价。如果出血面积小于1cm×1cm，出血面积过小，一般的止血产品都能够达到止血效果，进而无法对止血产品进行合理的筛选和评价。为此，发明人通过反复试验发现，规定创口面积大小为1cm×1cm，可以有效地对止血产品进行评价。 [0033] 根据本发明的具体实施例，进一步地，成功切出小方口后，剥离小方口处的表层，具体地，剥离的厚度为3～4mm。由此可以形成出血量和出血速度合适的出血创面。根据本发明的具体示例，发明人发现，剥离的厚度为3～4mm，首先不会碰及大动脉，同时3～4mm的深度，小静脉和小动脉血管比较丰富，可以达到预期的出血效果。 [0034] 由此，根据本发明上述实施例的构建兔创伤止血动物模型的方法是发明人通过大量实验研究得出的，利用上述方法可以有效地在兔的肝脏壁面形成出血创面，该出血创面的面积大小和深度适宜，可以有效地用于止血产品的筛选和评价。另外，本发明上述实施例构建的兔创伤止血动物模型可以适用于上述各止血产品的筛选和评价，例如可以用于止血粉、止血棉和止血纱布等。因此，该兔创伤止血动物模型的适用性更加广泛。 [0035] 在本发明的另一方面，本发明提出了一种用于评价止血产品的方法。根据本发明的具体实施例，该方法包括：根据前面所述的方法构建得到兔创伤止血动物模型；对所述兔创伤止血动物模型施加所述止血产品。 [0036] 根据本发明的具体实施例，上述实施例的用于评价止血产品的方法中，对所述兔创伤出血动物模型施加所述止血产品按照下列步骤进行：用纱布在所述出血创面处按压止血30s；取下纱布并立即在所述出血创面上施加所述止血产品；用纱布按压并持续3min直至无血液渗出。 [0037] 根据本发明的具体实施例，利用上述实施例的方法构建得到的兔创伤止血动物模型的出血创面需要立即用纱布按压止血，时间为30s最佳，由此可以暂时止血并防止大量出血，为准备止血产品提供时间。 [0038] 根据本发明的具体实施例，按压止血30s后，取下纱布并立即在出血创面上使用待评价的止血产品，并用纱布按压持续3min。根据本发明的具体示例，在出血创面上使用止血产品后，应立即用纱布按压，由此可以达到轻微止血和便于止血药物发挥止血作用。 [0039] 根据本发明的具体实施例，按压持续3min后，取下纱布观察渗血情况，若有血液渗出，再给一次止血产品，并辅以按压，直至无血液渗出为止。 [0040] 根据本发明的具体实施例，上述实施例的用于评价止血产品的方法进一步包括：在施加所述止血产品后，关闭腹腔，并对创口进行消毒；对所述兔肌肉注射青霉素钠注射液，以便预防感染。 [0041] 根据本发明的具体实施例，止血产品为止血粉、止血棉和止血纱布中的至少一种。由此，本发明上述实施例构建的兔创伤止血动物模型可以适用于上述各止血产品的筛选和评价。 [0042] 根据本发明的具体实施例，根据上述方法对兔创伤止血动物模型给以止血产品并关闭腹腔后，进一步加强护理，观察临床变化，并做好记录。 [0043] 根据本发明的具体实施例，在动物模型给以止血产品后分别于不同时间点解剖，观察肝脏损伤创面的愈合(修复)情况，并取创面组织做病理组织学检查。以便进一步对止血产品的药理作用进行比较研究和评价。 [0044] 下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。 [0045] 实施例1 [0046] 构建兔创伤止血动物模型 [0047] (1)实验用新西兰兔(GB 14922-1994)；体重：3±0.2kg；性别：雌雄不限。 [0048] (2)器械和材料：常规外科手术器械、麻醉药品、急救药品、消毒药物、手术室耗材等。 [0049] (3)术前禁饲：动物术前24h禁食不禁水。 [0050] (4)麻醉：动物称重，先用3wt％戊巴比妥钠(sigma,P3761-25g；CAS Number:57-33-0)以0.5mL/kg剂量静脉注射，进行前期麻醉。3min后静脉注射陆眠宁Ⅱ(吉林省华牧动物保健品有限公司；2014.04,12)，以0.1mL/kg的剂量执行。 [0051] (5)术前采血 [0052] 麻醉前于前肢采集2mL静脉血，用于测定血相和血清生化。 [0053] (6)备皮 [0054] 根据麻醉程度，左侧卧，暴露右侧，于肝脏相应部位剃毛，备皮区8cm×15cm，清洁后用先用碘酊消毒，再用75％的酒精消毒、脱碘。铺上创巾，暴露切口部位。 [0055] (7)暴露肝脏制造出血创面 [0056] 沿右侧最后肋骨平行处切口，长度为5cm，钝性分离腹外斜肌和腹内斜肌，遇可见大血管需结扎止血，防止出血量较大而影响实验。暴露并剪开腹膜，暴露肝脏。 [0057] 于右叶壁面前段切一1cm×1cm的小方口，剥离3～4mm的表层。 [0058] 实施例2 [0059] 利用实施例1构建得到的兔创伤止血动物模型对止血产品进行评价 [0060] 按照实施例1的方法构建五头兔创伤止血动物模型。 [0061] 止血产品为止血粉。 [0062] 评价方法： [0063] (1)在五头兔创伤止血动物模型的出血创口立即用纱布按压止血30s，取下后立即在创面上使用止血产品，并用无菌纱布按压，持续3min，取下纱布观察渗血情况，若有血液渗出，再给一次止血产品，并辅以按压，直至无血液渗出为止。 [0064] (2)止血切实后，再观察10min，再无出血后关闭腹腔，创口常规消毒。 [0065] (3)术后，每日以20万IU/kg青霉素钠，配以0.9％的生理盐水肌肉注射，预防感染，1次/d。加强护理，观察临床变化，并做好记录。 [0066] (4)每头兔分别于创模后的不同时间点解剖，观察肝脏损伤创面的愈合(修复)情况，并取创面组织做病理组织学检查。以便对止血粉的止血性能以及药理作用进行评价。 [0067] 在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。 |
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