[0001] 本发明属于生命科学领域，具体涉及一种用于小鼠MCAO模型的线栓的制作方法。

[0002] 脑卒中是一种急性脑血管病的总称，临床表现为偏瘫、失语等症状，具有高致死率、高致残率和高复发率等特点。最新研究显示脑卒中已严重威胁人们的生命和生活质量，其中尤以缺血性脑卒中位列患者第一位，占所有脑卒中患者的80%左右。

[0003] 缺血性脑卒中动物模型是研究脑缺血损伤和治疗的基础，大脑中动脉是缺血性脑卒中的好发部位，因此常采用大脑中动脉栓塞（MCAO）动物模型作为研究基础，其中线栓法大脑中动脉脑缺血模型是研究缺血性脑损伤动物模型的首选造模方法，该模型是目前研究局灶性脑缺血/再灌注损伤最广泛的动物模型，具有无需开颅、创伤极小、脑缺血部位较恒定、脑梗死与临床病理过程一致等优点。然而，一直以来该模型多用于大鼠的研究，但由于大鼠具有成本高、体积大、不便饲养特别是单支试剂使用成本是小鼠的数十倍甚至更多，且不满足脑缺血基因水平研究等诸多因素，越来越多的研究采用小鼠来制备此模型。然而，由于手术操作复杂、小鼠体型小、手术耐受力较差，增加了制备脑缺血模型的难度，其稳定性和可靠性也是亟待解决的关键问题。但是，我们在研究中发现只要线栓做好，对血管机械损伤小，脑梗死区域稳定，梗塞体积稳定，重复性好，模型成功率就接近100%，术后存活率也很高。因此，MCAO线栓是制备局部脑缺血模型非常关键的实验材料。

[0004] 目前，MCAO线栓的制作方法有采用单线尼龙线、鼠须、钓鱼线等，但多选用一定直径的普通单线尼龙线，在头端包被一定的硅胶。但普通的单线尼龙线软硬度不够理想，在一定温度的液体中易变软，在血管弯处易停止，入颅比较困难，大大增加了插线的难度使模型成功率下降，也增加了出血和死亡风险；用鼠须代替尼龙线虽然较尼龙线有良好的弹性和硬度，但是鼠须直径不统一，对其头端不易进行处理，难以造成完全阻塞。对栓线头端的处理目的是在造模过程中对血管的损伤减到最低，梗塞灶更加稳定及较高的长期存活率等。常用的涂胶法有石蜡包裹、硅胶包被、聚己烯醇栓线等，其中石蜡包裹的容易脱落；硅胶包被出的线栓虽梗死面积相对稳定，但是没有膨胀效果，使梗死不完全，而且死亡率较高、不易长时间观察研究；聚己烯醇线栓硬度不够同时遇到血液会膨胀，使进线不顺利。

[0005] 本发明的目的是提供一种小鼠MCAO模型用的线栓的制作方法，进而改进线栓的特性，使之更适合用于建立小鼠MCAO模型，提高小鼠的术后存活率，降低MCAO模型的制作难度与成本。

[0006] 为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种小鼠MCAO模型用的线栓的制作方法，该线栓通过材料的选择与准备、线栓原线头端的包被以及在包被后的标记制得，其具体的步骤如下：（1）材料的选择与准备
将聚四氟乙烯树脂在300℃下拉成直径为0.065~0.01mm的丝状物后，在350℃条件下，用二氧化钛涂布于该丝状物表面得到制作线栓的线栓原线，然后按照重量将15％的硅乳液、34％的聚乙烯吡咯烷酮、23％的聚乙烯醇、16%的聚乙二醇和12％的聚四氟乙烯在
250~300℃下超声震荡后混合形成用于包被的包被材料；
（2）线栓原线头端的包被
首先从所制得的线栓原线上截取20±1.0mm作为线栓原线线段，将该线段两端加工成正圆并与所述线栓原线端部的直径保持一致，然后选择其中一端作为线栓原线的头端，将该头端包埋于步骤（1）所制得的包被材料中，然后将线栓原线的头端拉出包被材料即可完成对线栓原线头端的包被；
（3）包被后的标记
在头端包被后的线栓原线线段上，距离包被的端部11~12mm，环绕线栓原线线段一周进行标记，然后将线栓原线线段晾干即可得到小鼠MCAO模型用的线栓。

[0007] 在对线栓原线头端进行包被的过程中，线栓原线头端在包被材料停留1~3s后，再将线栓原线头端拉出包被材料。

[0008] 本发明所制作的线栓在使用前可以将其浸泡在含有肝素钠的生理盐水中备用，以减少线栓周围的血栓形成。

[0009] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：第一，本发明所做的线栓大小一致、硬度弹性适中、线栓头端圆钝光滑，使线栓能顺利进入大脑中动脉，并且插入后的线栓可随血管的弯曲而，减少了对血管的机械损伤，阻塞更彻底更可靠、脑缺血范围稳定、脑梗塞体积稳定，操作简单，模型成功率高，小鼠死亡率低；
第二，本发明采用先包被后标记的方法，可以避免先标记后进行包被的过程中包被材料会遮挡甚至覆盖标记的情况，并且先标记后包被的时候，由于包被材料的多少，使得包被的端部与标记之间的距离会大于标记时标记处和线栓头端端部之间的距离，进而影响在插线时对进线长度的判断，而采用本发明先包被后标记的方法，则可以很好地避免这个问题，准确的掌控进线的长度；
第三，本发明所做的线栓原线为非毛管性的，光滑程度接近真丝，对组织损伤非常微弱，并且涂布二氧化钛，在光照条件下，二氧化钛会发生氧化还原反应，具有杀菌的效果，使得制作后的线栓更好的保持无菌状态；
第四，本发明所用的包被材料为一种透明高分子抗菌材料，能减少小鼠的颅内感染几率，并且可以减少对血管的刺激，从而提高模型制作后小鼠的存活率，并且，在制作该透明高分子抗菌材料的原料中，硅乳液可以降低材料的表面张力，聚乙二醇使包被材料具有一定的抗凝性；
第五，本包被过程中，线栓原线的头端在包被材料中停留1~3s，可以有利于线栓原线的头端吸附包被材料，使其具有一定的硬度与韧性，并且包被材料与线栓原线之间的结合更加紧密，在制作模型的过程中，不会出现包被脱落的情况，但是如果停留时间过长，则会使得制作出来的线栓头端硬度较大，再插入血管的过程中容易对血管内壁造成机械损伤，不利于模型的制作；
第六，在使用中，线栓在肝素钠中浸泡后，可以减少线栓周围血栓的形成，有利与拔线再灌注时线栓的拔出，而且在拔出线栓后能保持血流通畅，不会因为形成血栓而阻断血流。

[0010] 下面通过具体实施方式对本发明作进一步的说明。

[0011] 实施例1：一种小鼠MCAO模型用的线栓的制作方法，通过制作材料的选择与准备、头端包被以及包被后的标记，最后得到适用于小鼠MCAO模型制作的线栓，其具体的制作方法如下：1、制作材料的选择与准备
1.1、线栓材料
将聚四氟乙烯树脂在300℃下拉成直径为0.065mm的丝状物后，在350℃条件下，用二氧化钛涂布于该丝状物表面得到制作线栓的原线，所制作的线栓原线的自然张力为1.96N，牵引张力为1.67±0.78 N；
1.2、头端的包被材料
用于线栓头端包被的包被材料为透明高分子抗菌材料，该透明高分子抗菌材料是由
15％的硅乳液、34％的聚乙烯吡咯烷酮、23％的聚乙烯醇、16%的聚乙二醇和12％的聚四氟乙烯在250℃下超声震荡后混合而成的；
2、头端包被
2.1、线栓原线的加工
将上述所制作的线栓原线放置在显微镜下后，测量其端部的直径后，垂直截取长度为
19mm的线栓原线线段，并且将得到的线栓原线线段的两端加工成正圆，其直径与加工前的线栓原线端部的直径保持一致；
2.2、包被
将步骤1.2中制得的包被材料置于显微镜下的玻璃平面上，然后将步骤2.1中加工所得的线栓原线线段的一端选作头端，并使用显微镊夹持线栓原线线段，将其头端包埋于包被材料中，停留1s后迅速拖拉并将其拉出包被材料，即可完成对头端的包被，并且包被部分的长度为5mm；
3、包被后的标记
3.1、标记
将步骤2.2包被后的线栓原线线段置于显微镜下，使用游标卡尺在距离包被的端部
11mm进行标记，并且所做标记要环绕线栓原线线段一周，以便准确判断及调整进线的方向并控制进线的深度，从而使得制作后的线栓能够顺利进入颈外；
3.2、干燥
将经标记的线栓原线线段晾干即可得到用于小鼠MCAO模型的线栓成品。

[0012] 实施例2：一种小鼠MCAO模型用的线栓的制作方法，通过制作材料的选择与准备、头端包被以及包被后的标记，最后得到适用于小鼠MCAO模型的线栓，其具体的制作方法如下：1、制作材料的选择与准备
1.1、线栓材料
将聚四氟乙烯树脂在300℃下拉成直径为0.1mm的丝状物后，在350℃条件下，用二氧化钛涂布于该丝状物表面得到制作线栓的原线，所制作的线栓原线的自然张力为1.88N，牵引张力为1.71±0.82 N；
1.2、头端的包被材料
用于线栓头端包被的包被材料为透明高分子抗菌材料，该透明高分子抗菌材料是由
15％的硅乳液、34％的聚乙烯吡咯烷酮、23％的聚乙烯醇、16%的聚乙二醇和12％的聚四氟乙烯在300℃下超声震荡后混合而成的；
2、头端包被
2.1、线栓原线的加工
将上述所制作的线栓原线放置在显微镜下后，测量其端部的直径后，垂直截取长度为
21mm的线栓原线线段，并且将得到的线栓原线线段的两端加工成正圆，其直径与加工前的线栓原线端部的直径保持一致；
2.2、包被
将步骤1.2中制得的包被材料置于显微镜下的玻璃平面上，然后将步骤2.1中加工所得的线栓原线线段的一端选作头端，并使用显微镊夹持线栓原线线段，将其头端包埋于包被材料中，并在停留3s后迅速拖拉并将其拉出包被材料，即可完成对头端的包被，并且包被部分的长度为5mm；
3、包被后的标记
3.1、标记
将步骤2.2包被后的线栓原线线段置于显微镜下，使用游标卡尺在距离包被的端部
12mm进行标记，并且所做标记要环绕线栓原线线段一周，以便准确判断及调整进线的方向并控制进线的深度，从而使得制作后的线栓能够顺利进入颈外；
3.2、干燥
将经标记的线栓原线线段晾干即可得到用于小鼠MCAO模型的线栓成品。

[0013] 实施例3：一种小鼠MCAO模型用的线栓的制作方法，通过制作材料的选择与准备、头端包被以及包被后的标记，最后得到适用于小鼠MCAO模型的线栓，其具体的制作方法如下：1、制作材料的选择与准备
1.1、线栓材料
将聚四氟乙烯树脂在300℃下拉成直径为0.08mm的丝状物后，在350℃条件下，用二氧化钛涂布于该丝状物表面得到制作线栓的原线，所制作的线栓原线的自然张力为1.92N，牵引张力为1.66±0.9 N；
1.2、头端的包被材料
用于线栓头端包被的包被材料为透明高分子抗菌材料，该透明高分子抗菌材料是由
15％的硅乳液、34％的聚乙烯吡咯烷酮、23％的聚乙烯醇、16%的聚乙二醇和12％的聚四氟乙烯在270℃下超声震荡后混合而成的；
2、头端包被
2.1、线栓原线的加工
将上述所制作的线栓原线放置在显微镜下后，测量其端部的直径后，垂直截取长度为
21mm的线栓原线线段，并且将得到的线栓原线线段的两端加工成正圆，其直径与加工前的线栓原线端部的直径保持一致；