[0100]实施方案78.如实施方案77所述的植物部分，进一步被定 义为花粉、原生质体、胚珠或者细胞。

[0101]实施方案79.从实施方案76所述的植物获得的细胞的组织 培养物。

[0102]实施方案80.如实施方案79所述的组织培养物，其中所述 细胞来源于组织，所述组织选自叶、花粉、胚、根部、根尖、花药、花、 芽、花球和分生组织。

[0103]实施方案81.花椰菜品种CLP/NY6633/9/Fre/CLP/ NY6633/HOCE的种子，其中所述品种种子的代表性样品已经被保藏， 保藏号为NCIMB41433。

[0104]实施方案82.从实施方案81所述的种子长成的植物。

[0105]实施方案83.如实施方案82所述的植物的植物部分。

[0106]实施方案84.如实施方案83所述的植物部分，进一步被定 义为花粉、原生质体、胚珠或者细胞。

[0107]实施方案85.从实施方案82所述的植物获得的细胞的组织 培养物。

[0108]实施方案86.如实施方案85所述的组织培养物，其中所述 细胞来源于组织，所述组织选自叶、花粉、胚、根部、根尖、花药、花、 芽、花球和分生组织。

[0109]实施方案87.将至少一种亮白色花球等位基因渐渗入花椰 菜植物的方法，包括a)将来自第一花椰菜品系具有至少一种白色花球等位基因的植物 作为第一亲本与作为第二亲本的第二花椰菜植物杂交形成分离 群体，
b)利用能够鉴定QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、QTLO7或者QTLO9 处白色等位基因的核酸分子筛选所述分离群体中具有至少一种 白色花球等位基因的成员；和
c)挑选在QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、QTLO7或者QTLO9处包 含至少一种白色等位基因的花椰菜植物用于进一步的杂交。

[0110]实施方案88.如实施方案87所述的方法，其中所述方法还 包括测定所述挑选的花椰菜植物在Ctifl比色图表中的颜色分数。

[0111]实施方案89.如实施方案87所述的方法，其中所述方法还 包括将所述挑选的花椰菜植物与来自长白花椰菜品系的植物杂交。

[0112]实施方案90.如实施方案87所述的方法，其中在步骤c) 挑选的花椰菜植物具有良好的花球特征。

[0113]实施方案91.如实施方案87所述的方法，其中在步骤c) 挑选的花椰菜植物其花球直径为大约15厘米，花球重量为至少700克。

[0114]实施方案92.如实施方案87所述的方法，其中所述核酸分 子选自SEQ ID NO：1、6、11、14、17，其互补序列，以及其具有至少 15个核苷酸的片段。

[0115]实施方案93.如实施方案87所述的方法，其中所述核酸分 子能够检测存在于连锁群上的核酸序列，所述连锁群选自位于所述白色 花球等位基因100kb以内的连锁群1、2、7或者9。

[0116]实施方案94.如实施方案93所述的方法，其中所述核酸分 子能够检测存在于连锁群上的核酸序列，所述连锁群选自位于所述白色 花球等位基因50kb以内的连锁群1、2、7或者9。

[0117]实施方案95.如实施方案94所述的方法，其中所述核酸分 子能够检测存在于连锁群上的核酸序列，所述连锁群选自位于所述白色 花球等位基因25kb以内的连锁群1、2、7或者9。

[0118]实施方案96.如实施方案95所述的方法，其中所述白色花 球等位基因还存在于选自CLP/NY6633、CLP/NY6633/9/Fre、 BCSS/CLP/NY6633和CLP/NY6633/9/Fre/CLP/NY6633/HOCE的花椰菜 品系。

[0119]实施方案97.如实施方案87所述的方法，其中所述成员具 有至少两种白色花球等位基因。

[0120]实施方案98.如实施方案97所述的方法，其中所述成员具 有至少三种白色花球等位基因。

[0121]实施方案99.如实施方案98所述的方法，其中所述成员具 有至少四种白色花球等位基因。

[0122]实施方案100.如实施方案99所述的方法，其中所述成员 具有五种白色花球等位基因。

[0123]实施方案101.产生具有亮白色花球的花椰菜的方法，包括a)从花椰菜植物品系CEL/1857挑选植物作为第一亲本
b)将第一亲本与作为第二亲本的来自选自CEL/1857、PI183214、 901203-2/FREMONT、NY6633、NY3339、90331、BCSS、HOCE 和PWCE的花椰菜品系的第二花椰菜植物杂交，
c)培育通过所述杂交产生的花椰菜种子以产生花椰菜子代植物，
d)测定花椰菜子代植物在Ctifl比色图表中的颜色分数，
e)如果在Ctifl比色图表中花椰菜子代植物的颜色分数等于或者大 于C4，则在每个连续循环中利用花椰菜子代植物作为第一亲本 重复步骤b)到d)直到已产生在Ctifl比色图表中颜色分数小于 C4的花椰菜植物，
从而产生具有亮白色花球的花椰菜。

[0124]实施方案102.如实施方案101所述的方法，其中步骤c) 的花椰菜子代植物具有良好的花球特征。

[0125]实施方案103.如实施方案101所述的方法，其中步骤c) 的花椰菜子代植物其花球直径为大约15厘米，花球重量为至少700克。

[0126]实施方案104.如实施方案101所述的方法，其中所述花椰 菜包含选自QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、QTLO7和QTLO9的至少一 种白色等位基因。

[0127]实施方案105.如实施方案101所述的方法，其中所述花椰 菜包含选自QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、QTLO7和QTLO9的至少两 种白色等位基因。

[0128]实施方案106.如实施方案105所述的方法，其中所述花椰 菜包含选自QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、QTLO7和QTLO9的至少三 种白色等位基因。

[0129]实施方案107.如实施方案106所述的方法，其中所述花椰 菜包含选自QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、QTLO7和QTLO9的至少四 种白色等位基因。

[0130]实施方案108.如实施方案107所述的方法，其中所述花 椰菜包含QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、QTLO7和QTLO9处的五种白 色等位基因。

[0131]实施方案109.产生具有亮白色花球的花椰菜的方法，包括a)从选自CEL/1857、PI183214、901203-2/FREMONT、NY6633、 NY3339、90331、BCSS、HOCE和PWCE的花椰菜品系挑选植 物作为第一亲本
b)将第一亲本与作为第二亲本的选自CEL/1857、PI183214、 901203-2/FREMONT、NY6633、NY3339、90331、BCSS、HOCE 和PWCE的第二花椰菜植物杂交以形成分离群体，
c)利用能够检测QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、QTLO7和QTLO9 处白色等位基因的一种或者更多种核酸标志物筛选所述分离群 体；
d)从所述分离群体挑选出在QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、QTLO7 和QTLO9处白色等位基因是纯合的花椰菜植物，
e)测定所述挑选的花椰菜植物在Ctifl比色图表中的颜色分数，
f)如果在Ctifl比色图表中所述挑选的花椰菜植物的颜色分数等于 或者大于C4，则在每个连续循环中利用所述挑选的花椰菜植物 作为第一亲本重复步骤b)到d)直到已产生在Ctifl比色图表中颜 色分数小于C4的花椰菜植物，
从而产生具有亮白色花球的花椰菜。

[0132]实施方案110.如实施方案109所述的方法，其中所述一种 或者更多种标志物能够检测存在于连锁群上的核酸序列，所述连锁群选 自位于所述白色花球等位基因100kb以内的连锁群1、2、7或者9。

[0133]实施方案111.如实施方案110所述的方法，其中所述核酸 分子能够检测存在于连锁群上的核酸序列，所述连锁群选自位于所述白 色花球等位基因50kb以内的连锁群1、2、7或者9。

[0134]实施方案112.如实施方案111所述的方法，其中所述核酸 分子能够检测存在于连锁群上的核酸序列，所述连锁群选自位于所述白 色花球等位基因25kb以内的连锁群1、2、7或者9。附图简述

[0135]专利或者申请文件包含至少一幅着色的图画。根据要求并 支付必要费用后，专利局将提供包括着色图画的该专利或者专利申请公 开文本的复印件。

[0136]图1提供连锁群O1、O2、O7和O9的花椰菜中亮白色(BW) 花球性状的区间作图曲线的实施方案。

[0137]图2提供连锁群O9的花椰菜中亮白色花球性状的区间作 图曲线的实施方案。

[0138]图3提供连锁群O1的花椰菜中亮白色花球性状的区间作 图曲线的实施方案。

[0139]图4提供供体品系NY6633和受体品系ED37之间对标志 物QTLO7处白色等位基因的INDEL多态性的实施方案。

[0140]图5是将原种亮白色花椰菜品系与亲本品系以及商品化杂 种(Fremont)比较的照片。上栏显示“BW来源”亲本品系NY6633(左上) 和PI183214(右上)的典型花球。下栏显示原种亮白色花椰菜品系 IBCSS/CLP/NY6633(左下)和来自对照杂种，Fremont(右下)的典型花 球。与“BW来源”亲本品系NY6633和PI183214相比，亮白色原种品 系的花球是白色的，具有更大的花球尺寸和优良的花球质量。发明详述

[0141]本申请公开具有亮白色花球的花椰菜。这种花椰菜可以被 称作亮白色花椰菜品种。还提供培育亮白色花椰菜品系的方法。本文还 公开了与亮白色花球性状有关的数量性状基因座。

[0142]如本文使用的“亮白色”花椰菜是指具有下述花球的任意 花椰菜：在无覆盖生长条件下，在如实施例7所述的Ctifl(Centre technique interprofessionnel des fruits et legumes，22.Rue Bergere，75009 Paris-France)花椰菜比色图表中花球的平均颜色分数小于C4，例如在C2 和C4之间的颜色分数，在本文中被称为C3(当在受控光(TL)条件或者受 控和环境光组合中测量时)。亮白色花椰菜品系的白色分数小于(即，更 白于)先前描述的花椰菜植物，诸如，BW来源品系PI183214和NY6633。

[0143]在另一方面，本发明提供一种花椰菜，当无覆盖生长时， 其平均花球颜色分数在Ctifl花椰菜比色图表中小于或等于大约C4。一 方面，在无覆盖生长大约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10天，1、2、 3或者4周后，所述花椰菜植物产生花球的花球颜色分数小于或等于大 约C4。在一个优选的方面，无覆盖生长大约2周后，所述花椰菜植物 产生花球的花球颜色分数小于或等于大约C4。

[0144]公开的花椰菜还包括能够被称作长白花椰菜的那些。如本 文使用的，“长白”花椰菜是指当暴露于阳光时花球不从白色变为奶油 色的花椰菜，因此在收获前不需要在田间覆盖或者捆绑。亮白色花椰菜 也可以是长白花椰菜，反之亦然。

[0145]如本文使用的，“对照”花椰菜是选自Fremont F1、Cornell F1、Aviso(Clause)F1、Aviron(Clause)F1和Fortados OP的花椰菜。在 一个优选的方面，Fremont F1是对照花椰菜。对照花椰菜也是在与试验 花椰菜类似的环境条件下生长。

[0146]如本文使用的，在“受控冷藏”条件保存表示在大约4-8℃ 保存。如本文使用的，“环境条件”表示棚架温度，例如，在白天大约 18-22℃和夜间大约13-17℃室内保存。

[0147]如本文使用的，“连锁”是一种现象，其中同一染色体的 等位基因倾向于比如果它们的遗传(transmission)是独立的时预期的偶 然共同分离更频繁地共同分离。

[0148]如本文使用的，“标志物”是至少一种表型、基因型或多 态性存在的指示物。DNA标志物的实例是单核苷酸多态性(SNPs)，切割 扩增多态性序列(CAPS)，扩增片段长度多态性(AFLPs)，限制性片段长 度多态性(RFLPs)，单序列重复(SSRs)，插入或者缺失(INDELs)，或者随 机扩增多态性DNA(RAPDs)。标志物优选是共显性的(位于二倍体杂合 子中基因座上的两种等位基因可以轻易被检测)，无环境方差分量，即， 遗传率为1。本文使用的“核酸标志物”表示能够作为检测多态性或者 表型的标志物的核酸分子。

[0149]一方面，具有亮白色花球的花椰菜植物包含与控制亮白色 性状的一种或复数种数量性状基因座(QTL)连锁的一种或者更多种标 志物。在一个优选的方面，所述花椰菜包含与连锁群O1、O2、O7或者 O9上QTL连锁的一种或者更多种标志物。在另一优选的方面，所述花 椰菜包含选自QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、QTLO7和QTLO9的一种 或者更多种标志物。在更优选的方面，所述花椰菜植物具有与SEQ ID NOs：1、6、11、14或者17杂交的一种或者更多种标志物。

[0150]如本文使用的，如果两种核酸分子能够形成反平行、双链 的核酸结构，则这两种核酸分子被称为能够彼此杂交。常规的严格条件 描述于Sambrook等，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，2nd Ed.， Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，New York(1989)和Haymes et al.，Nucleic Acid Hybridization，A Practical Approach，IRL Press， Washington，DC(1985)。因此偏离完全互补是允许的，只要这种偏离不 完全排除所述分子形成双链结构的能力。因此，对于作为引物或者探针 的核酸分子，在使用的特定溶剂和盐浓度条件下，只需要其序列充分互 补到能够形成稳定的双链结构。

[0151]促进DNA杂交的合适严格条件诸如，大约45℃的6.0×氯 化钠/柠檬酸钠(SSC)，然后在50℃用2.0×SSC洗涤，这是本领域技术 人员已知的，或者可以参见Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6。一方面，杂交条件可以是高、中 或者低严格条件。优选的条件包括利用50％甲酰胺，5.0 X SSC，1％SDS， 并在42℃孵育14小时，然后用0.2 X SSC、1％SDS洗涤，在65℃孵育。

[0152]一方面，杂交的特异性受杂交后洗涤的影响。例如，洗涤 步骤的盐浓度可以选自：50℃大约2.0 X SSC的低严格度，到50℃大 约1.0 X SSC的中严格度，到50℃大约0.2 X SSC的高严格度。此外， 洗涤步骤的温度可以从低严格条件下的室温(大约22℃)，增加到中严 格条件下的大约50℃，到高严格条件下的大约65℃。温度和盐均可以 变化，也可以是温度或者盐浓度保持不变而其他变量改变。一方面，洗 涤步骤可以进行5、10、15、20、25、30或者更多分钟。在一个优选的 方面，洗涤步骤进行大约20分钟。在另一方面，可以利用选择的盐浓 度、温度和时间将洗涤步骤重复1、2、3、4或者更多次。在一个优选 的方面，洗涤步骤重复两次。

[0153]在一个优选的方面，在中严格条件下(例如在大约65℃， 大约2.0 X SSC)，本发明的核酸将与SEQ ID NOs：1、6、11、14或者 17或者其互补序列的一种或者更多种核酸标志物特异性杂交。

[0154]在另一方面，本发明提供具有至少4种亮白色等位基因的 花椰菜植物。在一个优选的方面，所述花椰菜植物具有选自QTLO1、 QTLO2a、QTLO2b、QTLO7和QTLO9的至少2、3、4或者全部5种亮 白色等位基因。在更优选的方面，所述花椰菜植物还产生亮白色花球。

[0155]本申请提供具有良好花球特征的花椰菜植物。花椰菜对不 利的气候条件敏感。不寻常的炎热或者寒冷天气，以及干旱，可能造成 早季类型中劣质的花球。花椰菜的生长条件是非常苛刻的，需要肥沃的 土壤和良好的气候条件，例如，较凉爽的温度以及潮湿的空气。因此商 品化的花椰菜生产自然趋向于更高海拔的地区，尽管它也被成功的种植 于低海拔地区，只要其在夏季前种植到成熟或者，可选择地，在晚秋收 获。花球开始形成是温度依赖性的，高温延缓花球开始形成，尽管各个 品种在开始形成发生后产生可收获花球需要的时间上还存在不同。下述 因素的组合决定了指定品种的适宜性和适应能力：幼龄期、成熟营养期 需要的时间，诱导后产生可销售花球需要的时间，以及在上述所有期间 品种对温度的反应。

[0156]某些花球质量性状对于该作物的商业价值是特别重要的， 缺少这些其他质量性状可能对花椰菜的市场有同等的不利影响。例如， “苞片产生”发生在温暖的生长条件下，由整个花球上长出小的、白色 或者绿色叶片导致。“绒毛(Fuzzyness)”是花球上长出早期花蕾原基的 结果，也是由升温诱导的。关于这些性状的综述可以参见“Comparing Genetic And Physical Organisation Of Gene Families Affecting Plant Development Within Brassica And Arabidopsis”，King，G.J.等，10th International Rapeseed Congress，Canberra 1999。可以通过本领域已知的 任意方法检测苞片产生和绒毛。例如，可以通过比较相似条件下生长的 试验花球与对照花椰菜花球，检测苞片产生和绒毛情况。在另一方面， 本文描述的花椰菜植物基本上没有或者根本没有苞片产生。在一方面， 试验花球的苞片产生量低于相似条件下生长的标准花椰菜花球的10％、 20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或者90％。在另一方面，本 文描述的亮白色花椰菜植物基本上没有或者根本没有绒毛。仍在另一方 面，试验花球的绒毛量低于相似条件下生长的标准花椰菜花球的10％、 20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或者90％。

[0157]一方面，收获时花椰菜的花球直径为大约或者大于13.0厘 米(cm)、13.1cm、13.2cm、13.3cm、13.4cm、13.5cm、13.6cm、 13.7cm、13.8cm、13.9cm、14.0cm、14.1cm、14.2cm、14.3cm、14.4 cm、14.5cm、14.6cm、14.7cm、14.8cm、14.9cm、15.0cm、15.1cm、 15.2cm、15.3cm、15.4cm、15.5cm、15.6cm、15.7cm、15.8cm、15.9 cm、16.0cm、16.1cm、16.2cm、16.3cm、16.4cm、16.5cm、16.6cm、 16.7cm、16.8cm、16.9cm或者17.0cm。如本文使用的，通过测量花 球上距离最远的两点的直径来测量收获时的花球直径。

[0158]一方面，花椰菜的花球重量(即，收获时没有连接叶片的 花球或者“裸”花球重量)为大约或者大于350克、360克、380克、 400克、420克、440克、460克、480克、500克、520克、540克、550 克、560克、580克、600克、620克、640克、650克、660克、680克、 700克、720克、740克、750克、760克、780克、800克、820克、840 克、850克、5860克、880克、900克、920克、940克、950克、960 克、980克或者1000克。如本文使用的，通过称重一定规格的收获的 花球，测量收获时“裸”花球的重量。

[0159]一方面，收获时花椰菜的花球厚度为大约或者大于80毫米 (mm)、81mm、82mm、83mm、84mm、85mm、86mm、87mm、 88mm、89mm、90mm、91mm、92mm、93mm、94mm、95mm、 96mm、97mm、98mm、99mm、100mm、101mm、102mm、103mm、 104mm、105mm、106mm、107mm、108mm、109mm、110mm、111 mm、112mm、113mm、114mm、115mm、116mm、117mm、118mm、 119mm或者120mm。从花球高度的顶部到底部测量以毫米为单位的花 球厚度。如本文使用的，通过测量收获的“裸”花球顶部和底部间的距 离来测量花球厚度。

[0160]一方面，收获时花椰菜“夹套(jacket)”或者花球底部被覆 盖的百分比为大约或者大于85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、 92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或者100％。通过从花 球底部的总面积扣除花球底部被覆盖的面积，再除以花球底部的总面积 并乘以100，测得收获时“夹套”或者花球底部被覆盖的百分比。

[0161]一方面，花椰菜的“自覆盖”或者花球顶部被覆盖的百分 比为大约或者大于15％、16％、18％、20％、22％、24％、25％、26％、 28％、30％、32％、34％、35％、36％、38％、40％、42％、44％、45％、 46％、48％、50％、62％、64％、65％、66％、68％或者70％。通过从花 球顶部的总面积扣除花球顶部被覆盖的面积，再除以花球顶部的总面积 并乘以100，测得收获时“自覆盖”或者花球顶部被覆盖的百分比。

[0162]一方面，花椰菜具有1、2、3、4或者5的总花球质量等级， 其中根据目测使用1＝差的到5＝极好的标度范围来测量花球质量。在优 选的方面，总花球质量被测定为总印象(General Impression，“GI”) 分数，其标度范围从1＝差的到5＝极好的。一方面，GI分数结合了多种 花球质量因素的测量值，包括夹套，覆盖，花球形状，花球厚度，花球 重量，花珠，结构，米状，苞片产生和绒毛。

[0163]一方面，本发明提供了花椰菜，当无覆盖生长时，其平均 花球颜色分数在Ctifl花椰菜比色图表中小于大约C4，并且GI分数大于 3。在一个优选的方面，GI分数大于4。

[0164]一方面，在环境条件下保存期间，相对于收获时测定的Ctifl 比色图表中的颜色分数，花椰菜显示的颜色变化小于或者大约为5％、 10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、 65％、70％、75％、80％、85％、90％或者95％。另一方面，在5℃保存 期间，相对于收获时测定的Ctifl比色图表中的颜色分数，花椰菜显示的 颜色变化小于或者大约为5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、 40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或 者95％。按照实施例7所述测量Ctifl比色图表中的颜色分数。

[0165]一方面，在5℃保存期间，相对于收获时测定的花球重量， 花椰菜显示花球重量的变化小于5％，小于10％，小于15％，小于20％， 小于25％。另一方面，在环境条件下保存期间，相对于收获时测定的花 球重量，花椰菜显示花球重量的变化小于5％，小于10％，小于15％， 小于20％，小于25％。另一方面，在环境条件下保存期间，相对于收获 时测定的花球重量，花椰菜显示花球重量的变化为5％、10％、15％、20％、 25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、 80％、85％、90％或者95％。仍在另一方面，在5℃保存期间，相对于收 获时测定的花球重量，花椰菜显示花球重量的变化为5％、10％、15％、 20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、 75％、80％、85％、90％或者95％。

[0166]可以在各个时间测量花椰菜特质，诸如颜色、花球重量、 花球直径和厚度、米状、绒毛或者夹克百分比。另一方面，在生长箱中 生长后测量特质。另一方面，在农田中生长后测量特质。一方面，在收 获时测量特质。另一方面，收获后将花椰菜在环境条件下保存1天、2 天、3天、4天、5天、6天、一周或者两周后测量特质。仍在另一方面， 将花椰菜在5℃保存1天、2天、3天、4天、5天、6天、一周、两周 或者三周后测量特质。

[0167]如本文使用的，如果花球直径为大约15厘米，重量为至少 700克，并且具有最小量的苞片产生、米状和绒毛，则该花椰菜植物显 示“良好的花球特征”。在一个优选的方面，花球显示无苞片产生，米 状以及绒毛。如本文使用的，“最小量的苞片产生、米状和绒毛”是指 与标准花椰菜品系相比，具有中间量的苞片产生、米状或者绒毛的花球。 可以利用任何已有的测量所述性状的方法测量苞片产生、米状和绒毛。 例如，可以利用1到5的标度测量绒毛：1是不存在的，3是中等绒毛， 和5是完全绒毛的。

[0168]本发明的另一方面涉及本文所述花椰菜品系的组织培养 物。如本文使用的，术语“组织培养物”表示包括相同或者不同类型的 分离细胞的组合物或者构成植物部分的这类细胞的集合。组织培养物的 典型类型是原生质体、愈伤组织和植物细胞，它们在植物中或者在植物 的部分中是完整的，诸如胚、叶片、花序梗(peduncle)、花梗(pedicel)、 花药、分生组织、根尖和根节段、伐根和茎干、花球外植体，等等。在 一个优选的方面，所述组织培养物包括源自这些植物部分的不成熟组织 的胚、原生质体、分生组织细胞、花粉、叶子或者花药。制备并保持植 物组织培养物的方法是本领域公知的。花椰菜组织培养和再生步骤的实 例描述于，例如，KEIFFER等，ISHS SYMPOSIUM ON BRASSICAS， NINTH CRUCIFER GENETICS WORKSHOP(1994)；AND ROSS，C.L.， TISSUE CULTURE METHODS FOR PLANT PATHOLOGIST(1980)。

[0169]本发明还提供花椰菜植物的种子，其中从为获得所述种子 而种植的花椰菜植物获得的花球具有亮白色性状。一方面，本发明提供 花椰菜植物的种子，其中从所述种子长成的植物是雄性不育的。一方面， 本发明提供花椰菜品种CLP/NY6633/9/Fre的种子(种子的代表性样品已 经被保藏，保藏号为NCIMB41432)。另一方面，本发明提供花椰菜品 种CLP/NY6633的种子(种子的代表性样品已经被保藏，保藏号为 NCIMB41430)。仍在另一方面，本发明提供花椰菜品种BCSS/CLP/ NY6633的种子(种子的代表性样品已经被保藏，保藏号为 NCIMB41431)。另一方面，本发明提供花椰菜品种CLP/NY6633/9/Fre/ CLP/NY6633/HOCE的种子(种子的代表性样品已经被保藏，保藏号为 NCIMB41433)。

[0170]另一方面，本发明还提供由花椰菜植物种子长成的植物， 其中从为获得所述种子而种植的花椰菜植物获得的花球具有亮白色性 状，以及还提供来自该植物的植物部分和组织培养物。

[0171]本发明还提供花椰菜种子的容器，其中从大于50％的所述 种子长成的花椰菜植物获得的花球具有亮白色性状。另一方面，从所述 容器中大于55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％的 花椰菜种子长成的花椰菜植物获得的花球具有亮白色性状。

[0172]花椰菜种子的容器可以包含任意数量、重量或者体积的种 子。例如，容器可以包含至少，或者大于，大约100、200、300、400、 500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、 4000或者更多颗种子。或者，所述容器可以包含至少，或者大于，大约 1盎司、5盎司、10盎司、1磅、2磅、3磅、4磅、5磅或者更多的种 子。

[0173]花椰菜种子的容器可以是本领域可用的任何容器。作为非 限制性的实例，容器可以是盒子(box)、带子(tape)、包(packet)、小袋 (pouch)、胶带卷(tape roll)、桶(pail)、箔(foil)或者管(tube)。

[0174]另一方面，本发明还提供花椰菜花球的容器，其中大于50％ 的花球具有亮白色性状。另一方面，所述容器中大于55％、60％、65％、 70％、75％、80％、85％、90％、95％的花球具有亮白色性状。

[0175]花球的容器可以包含任意数量、重量或者体积的花球。例 如，容器可以包含至少，或者大于，大约5、10、15、20、25、30、35、 40、45、50或者100个花球。或者，所述容器可以包含至少，或者大于， 大约1磅、2磅、3磅、4磅、5磅或者更多的花球。

[0176]花球的容器可以是本领域可用的任何容器。作为非限制性 的实例，容器可以是盒子(box)，平板(flat)，袋子(bag)，包(packet)或者 束(bunch)。可以在任何场所发现本发明的花球容器，包括但不限于仓库， 配售商，批发商，或者零售市场，诸如杂货店。

[0177]另一方面，本发明还提供具有基因组的花椰菜植物，在所 述基因组中包括源自亮白色花椰菜植物的基因座。在一个优选的方面， 亮白色花椰菜选自CEL/1857、PI183214、901203-2/FREMONT、NY6633、 NY3339、90331、BCSS、HOCE和PWCE。一方面，可以利用遗传标志 物鉴定源自亮白色花椰菜的基因座。在一个优选的方面，所述基因座包 含与标志物核酸分子互补序列遗传连锁的数量性状基因座的1、2、3、4 或者5种等位基因，所述等位基因选自QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、 QTLO7和QTLO9。

[0178]一方面，任意数量的花椰菜植物基因组可以来源于亮白色 花椰菜。在一个优选的方面，花椰菜植物可以具有源自亮白色花椰菜植 物的50％、25％、12.5％或者更少的遗传物质。

[0179]一方面，花椰菜植物可以包含任意数目的亮白色数量性状 基因座。在一个优选的方面，花椰菜植物包含与亮白色数量性状基因座 有关的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或者10种等位基因。另一方 面，花椰菜的基因组具有1种或者更多种，2种或者更多种，3种或者 更多种，4种或者更多种，或者全部5种核酸标志物，所述核酸标志物 选自QTLO1、QTLO7、QTLO2a、QTLO2b或者QTLO9。另一方面，花 椰菜植物可以包含与数量性状基因座有关的等位基因的任意组合。

[0180]可以使用任何合适的方法筛选在与亮白色性状有关的数量 性状基因座处具有“亮白色”等位基因的植物，所述等位基因诸如， QTLO1、QTLO7、QTLO2a、QTLO2b或者QTLO9中的一种或者更多种。 在一个优选的方面，可以使用本发明的核酸标志物。

[0181]如本文使用的，核酸序列与另一核酸序列的连锁可以是遗 传或者物理的。在一个优选的方面，核酸标志物与QTLO1、QTLO7、 QTLO2a、QTLO2b或者QTLO9遗传连锁，其中基于下述极大似然法： Lander and Botstein，Genetics，121：185-199(1989)，以及例如在软件包 MAPMAKER/QTL(缺省参数)(Lincoln and Lander，Mapping Genes Controlling Quantitative Traits Using MAPMAKER/QTL，Whitehead Institute for Biomedical Research，Massachusetts，(1990))中的实施，通过 对亮白色性状的区间作图判断，由标志物鉴定的基因型显示大于2.0的 LOD分数，优选通过对亮白色性状的区间作图判断，所述标志物基因型 显示大于3.0的LOD分数，更优选的通过对亮白色性状的区间作图判断， 所述标志物基因型显示大于3.5的LOD分数，甚至更优选的通过对亮白 色性状的区间作图判断，所述标志物基因型显示大约4.0的LOD分数。

[0182]另一方面，核酸标志物与QTLO1、QTLO7、QTLO2a、 QTLO2b或者QTLO9遗传连锁在大约0到大约50厘摩(cM)之间，更优 选的，大约0到大约40cM之间，大约0到大约25cM之间，大约0到 大约10cM之间，大约0到大约5cM之间，或者大约0到大约3cM之 间。

[0183]另一方面，所述核酸分子可以与QTLO1、QTLO7、QTLO2a、 QTLO2b或者QTLO9物理连锁。在一个优选的方面，核酸标志物与具 有以下序列的核酸分子特异性杂交，所述序列存在于连锁群O1、O7、 O2或者O9上QTLO1、QTLO7、QTLO2a、QTLO2b或者QTLO9的500 kb或者100kb以内，更优选的50kb以内，甚至更优选的25kb以内。 在一个优选的方面，所述核酸标志物能够与具有以下序列的核酸分子特 异性杂交，所述序列存在于连锁群O1、O7、O2或者O9上QTLO1、 QTLO7、QTLO2a、QTLO2b或者QTLO9的500kb或者100kb以内， 更优选的50kb以内，甚至更优选的25kb以内。

[0184]近交种的遗传标志物分布可以预测利用该近交种产生的杂 种的农业性状。例如，如果已知遗传标志物分布和表型的近交种与已知 遗传标志物分布和表型的第二近交种杂交，有可能基于亲本近交种的组 合遗传标志物分布来预测F1杂种的表型。从遗传标志物数据预测杂种 特征的方法公开于美国专利号5,492,547，其全文特别地通过援引的方式 并入本文。可以利用任何合适的遗传标志物做出这种预测，所述遗传标 志物诸如SSRs、CAPS、INDELs、RFLPs、AFLPs、SNPs或者同工酶。

[0185]在本发明一个优选的方面，核酸标志物选自SEQ ID NO： 1、6、11、14、17，其互补序列，以及其片段的核酸标志物。

[0186]可以使用与本发明QTL的等位基因遗传连锁或者有关的 其他标志物，诸如SSRs、AFLP标志物、RFLP标志物、RAPD标志物、 表型标志物、SNPs、同工酶标志物、微阵列转录分布(Walton，Seed World 22-29(July，1993)；Burow and Blake，Molecular Dissection of Complex Traits，13-29，Eds.Paterson，CRC Press，New York(1988))。分离所述标 志物的方法是本领域已知的。例如，通过针对SSRs筛选基因组文库， 测序“阳性”克隆，设计在重复序列侧翼的引物，并用这些引物扩增基 因组DNA，可以获得基因座特异性SSRs。

[0187]通过诸如但不限于Lander和Botstein，Genetics， 121：185-199(1989)报道的侧翼标志物模型的基因作图模型，以及基于 Lander和Botstein，Genetics，121：185-199(1989)描述的极大似然法，在软 件包MAPMAKER/QTL(Lincoln and Lander，Mapping Genes Controlling Quantitative Traits Using MAPMAKER/QTL，Whitehead Institute for Biomedical Research，Massachusetts，(1990)。其他软件包括Qgene， Version 2.23(1996)，Department of Plant Breeding and Biometry，266 Emerson Hall，Cornell University，Ithaca，N.Y.)，JoinMap(Kyazma B.V.， Wageningen，Netherlands)和mapQTL(Kyazma B.V.，Wageningen， Netherlands))中实施的区间作图可以确定标志物分子的遗传连锁。

[0188]计算标志物存在的最大似然估计(MLE)，以及假定无QTL 影响的MLE，以避免假阳性。然后如下所示计算比值比的log10(LOD)： LOD＝log10(存在QTL的MLE/指定无连锁QTL的MLE))。

[0189]LOD分数表示假定QTL等位基因存在时数据出现的可能 性比其缺失时出现的可能性高多少。以给定置信度(比方说95％)避免 假阳性的LOD阈值取决于标志物的数量和基因组的长度。显示LOD阈 值的图表列于Lander和Botstein，Genetics，121：185-199(1989)，并由Ars 和Moreno-Gonzlez，Plant Breeding，Hayward，Bosemark，Romagosa(eds.) Chapman & Hall，London，pp.314-331(1993)进一步描述。

[0190]可以使用其他模型。已经报道了许多区间作图的改进和替 代方法，包括使用非参数法(Kruglyak and Lander，Genetics， 139：1421-1428(1995))。还可以使用多元回归方法或者模型，其中性状回 归到大量标志物(Jansen，Biometrics in Plant Breed，van Oijen，Jansen(eds.) Proceedings of the Ninth Meeting of the Eucarpia Section Biometrics in Plant Breeding，The Netherlands，pp.116-124(1994)；Weber and Wricke， Advances in Plant Breeding，Blackwell，Berlin，16(1994))。Jansen和Stam (Genetics，136：1447-1455(1994))以及Zeng(Genetics，136：1457-1468 (1994))报道了将区间作图与回归分析结合的步骤，从而使表型以指定 标志物间隔回归到单个推定的QTL上，并且同时回归到作为“辅助因子” 的大量标志物上。通常，辅助因子的使用降低了估计QTL位置的偏性和 取样误差(Utz and Melchinger，Biometrics in Plant Breeding，van Oijen， Jansen(eds.)Proceedings of the Ninth Meeting of the Eucarpia Section Biometrics in Plant Breeding，The Netherlands，pp.195-204(1994)，从而提 高了QTL作图的精确性和效率(Zeng，Genetics，136：1457-1468(1994))。 这些模型可以扩展到多环境实验以分析基因型环境相互作用(Jansen等， Theo.Appl.Genet.91：33-37(1995))。

[0191]利用2.5的LOD分数作为显著性水平，确定花椰菜的白色 由至少5种QTL控制。在连锁群O1、O7和O9上发现一种QTL，在连 锁群O2上发现两种QTL。在连锁群O1和O9上的QTL之间发现上位 相互作用。

[0192]合适的作图或者分离群体的选择对于图谱构建非常重要。 合适作图群体的选择取决于使用的标志物系统类型(Tanksley等， Molecular mapping plant chromosomes.Chromosome structure and function：Impact of new concepts J.P.Gustafson and R.Appels(eds.)， Plenum Press，New York，pp.157-173(1988))。必须考虑作图群体中使用 的亲本来源(适应的vs.引进的)。在远缘杂交(适应的×引进的)中染色体 配对和重组率受到严重干扰(抑制)，通常导致大大降低的连锁距离。 与近缘杂交(适应的×适应的)的子代相比，远缘杂交通常将提供具有 相对较大多态性阵列的分离群体。

[0193]如本文使用的，子代不仅包括，并且不限于，两种植物之 间任意杂交(其是回交或者其他)的产物，而且还包括谱系追溯到初次 杂交的所有子代。具体来说，但不受限制的，这种子代包括具有50％、 25％、12.5％或者更少的源自两种最初杂交植物之一的遗传物质的植物。 如本文使用的，如果第二植物的谱系包括第一植物，则第二植物来源于 第一植物。

[0194]在产生杂种种子后，F2群是自花或者近缘授粉的第一代。 通常单个F1植物是自身-或者近缘传粉以产生群，该群以孟德尔(1∶2∶1) 模式分离所有基因。利用共显性的标志物系统从完全分类的F2群获得最 大遗传信息(Mather，Measurement of Linkage in Heredity：Methuen and Co.，(1938))。就显性标志物而言，要求子代检验(例如，F3，BCF2)来鉴定 杂合子，从而使其相当于完全分类的F2群。但是，因为涉及子代检验的 成本和时间问题，该步骤经常是被禁止的。F2个体的子代检验常用于图 谱构建，其中表型不是始终如一的反映基因型(例如，抗病力)或者性 状表达由QTL控制。来自子代检验群(例如，F3或者BCF2)的分离数据 可用于图谱构建。然后可以基于标志物-性状图谱关联(F2，F3)，使用标志 物辅助的选择来杂交子代，其中连锁群还没有被重组事件完全分离(即， 最大不平衡)。

[0195]重组近交品系(RIL)(遗传相关的品系；通常＞F5，由连续的 自交F2品系向纯合性发展)可以被用作作图群。利用RIL可以将从显性 标志物获得的信息最大化，因为全部基因座都是纯合的或者几乎都是纯 合的。在紧密连锁的条件下(即，大约＜10％重组)，RIL群中评价的显性 和共显性标志物比回交群中的任意标志物类型提供每个个体更多的信 息(Reiter等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)89：1477-1481(1992))。但是， 随着标志物之间的距离变得更大(即，基因座变成更独立的)，与共显 性标志物相比，RIL群中的信息显著减少。

[0196]回交群可以用作作图群。将F1与亲本中一种进行一次或者 多次杂交产生回交群。可以进行一系列与轮回亲本的回交以恢复其大部 分合乎需要的性状。因此产生一种由几乎类似轮回亲本个体组成的群， 但是每个个体载有不同量或者嵌合的来自供体亲本的基因组区域。如果 轮回亲本的全部基因座都是纯合的，并且供体和轮回亲本具有相对的多 态性标志物等位基因，回交群可以用于对显性标志物作图(Reiter等，Proc. Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)89：1477-1481(1992))。利用共显性或者显性标志 物从回交群获得的信息少于从F2群获得的信息，因为从每种植物只取样 了一种而不是两种重组配偶子。但是，与RILs比较时，回交群是提供 更多信息的(以低标志物饱和度)，因为RIL群中连锁基因座之间的遗传 距离增加(即，大约15％重组)。增加的重组可能有利于紧密连锁的解析， 但在构建低标志物饱和度的图谱时可能是不希望的。

[0197]可以使用由为产生一系列除了渐渗下的性状或者基因组区 域之外遗传组成几乎相同的个体的许多次回交产生的近等基因系(NIL) 作为作图群。在用NILs作图时，预期只有一部分多态性基因座用来对 挑选的区域作图。

[0198]混合分离群体法(BSA)是一种开发用于快速鉴定标志物和 感兴趣的性状之间连锁的方法(Michelmore等，Proc.Natl.Acad.Sci. (U.S.A.)88：9828-9832(1991))。在BSA中，从来源于单次杂交的分离群 体中产生两种混合的DNA样品。这些混合物包含对于特定性状(例如， 对特定疾病的抗性或者易感性)或者基因组区域来说相同的个体。对于不 连锁或者连锁较远(～50cM)的基因座，等位基因的频率反映由独立分配 和群结构预测的那些。与靶区域不连锁的区域在BSA混合样品间不会变 化。

[0199]本申请提供本文描述的花椰菜品系(例如，F7 CLP/NY6633、F5 CLP/NY6633/9/Fre、F4 BCSS/CLP/NY6633和F4 CLP/NY6633/9/Fre/CLP/NY6633/HOCE)的遗传互补。还提供杂种遗传 互补，其中所述互补由来自本文描述的原种近交花椰菜品系的单倍体遗 传互补和另一单倍体遗传互补的组合形成。确定这种遗传互补的方法是 本领域公知的。

[0200]如本文使用的，短语“遗传互补”表示核苷酸序列的集合， 其表达确定了花椰菜植物或者该植物的细胞或者组织的表型。举例来 说，花椰菜植物被基因分型以确定其拥有的遗传标志物的典型样品。标 志物鉴定单基因座上的等位基因。标志物优选是共显性的，这样的话它 们可以鉴别纯合以及杂合基因型。因此，不受任何环境变异的影响，可 以轻易的检测二倍体基因座上的等位基因组成。优选的对后代植物的至 少一代进行基因分型，此外还确定所述后代植物的感兴趣的单种或复数 种定量性状的数值。单基因座基因型的阵列可以表示为每种基因座上两 种标志物等位基因的分布。每种基因座的标志物等位基因组成可以是纯 合或者杂合的。纯合性是基因座上两种等位基因的特征在于相同的核苷 酸序列或者相同大小的重复序列的状态。杂合性是指基因座上基因的不 同状态。可以使用任何有可能的遗传标志物类型，例如，单序列重复 (SSRs)、插入/缺失多态性(INDEL)、限制性片段长度多态性(RFLPs)、 扩增片段长度多态性(AFLPs)、单核苷酸多态性(SNPs)和同工酶。

[0201]另一方面，本发明提供将至少一种亮白色花球等位基因渐 渗入花椰菜植物的方法，包括：将来自第一花椰菜品系具有至少一种亮 白色花球等位基因的植物作为第一亲本与作为第二亲本的第二花椰菜 植物杂交形成分离群体，利用能够鉴定QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、 QTLO7或者QTLO9处白色等位基因的核酸分子筛选分离群体中具有至 少一种亮白色花球等位基因的成员，和挑选在QTLO1、QTLO2a、 QTLO2b、QTLO7或者QTLO9处包含至少一种亮白色等位基因的花椰 菜植物用于进一步的杂交。

[0202]另一方面，本发明提供产生具有亮白色花球的花椰菜的方 法，包括a)从花椰菜植物品系CEL/1857挑选植物作为第一亲本
b)将第一亲本与作为第二亲本的来自选自CEL/1857、PI183214、 901203-2/FREMONT、NY6633、NY3339、90331、BCSS、HOCE 和PWCE的花椰菜品系的第二花椰菜植物杂交，
c)培育通过所述杂交产生的花椰菜种子以产生花椰菜子代植物，
d)测定花椰菜子代植物在Ctifl比色图表中的颜色分数，
e)如果在Ctifl比色图表中花椰菜子代植物的颜色分数等于或者大 于C4，则在每个连续循环中利用花椰菜子代植物作为第一亲本 重复步骤b)到d)直到已产生在Ctifl比色图表中颜色分数小于C4 的花椰菜植物，
从而产生具有亮白色花球的花椰菜。

[0203]仍在另一方面，本发明提供产生具有亮白色花球的花椰菜 的方法，包括a)从选自CEL/1857、PI183214、901203-2/FREMONT、NY6633、 NY3339、90331、BCSS、HOCE和PWCE的花椰菜品系挑选植 物作为第一亲本
b)将第一亲本与作为第二亲本的选自CEL/1857、PI183214、 901203-2/FREMONT、NY6633、NY3339、90331、BCSS、HOCE 和PWCE的第二花椰菜植物杂交以形成分离群体，
c)利用能够检测QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、QTLO7和QTLO9 处亮白色等位基因的一种或者更多种核酸标志物筛选所述分离 群体；
d)从所述分离群体挑选出在QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、QTLO7 和QTLO9处亮白色等位基因是纯合的花椰菜植物，
e)测定所述挑选的花椰菜植物在Ctifl比色图表中的颜色分数，
f)如果在Ctifl比色图表中所述挑选的花椰菜植物的颜色分数等于 或者大于C4，则在每个连续循环中利用所述挑选的花椰菜植物 作为第一亲本重复步骤b)到d)直到已产生在Ctifl比色图表中颜 色分数小于C4的花椰菜植物，
从而产生具有亮白色花球的花椰菜。

[0204]本发明还提供通过本发明方法产生的花椰菜植物的部分。 植物部分包括，但不限于，种子、胚乳、胚珠和花粉。在本发明一个尤 其优选的实施方案中，植物部分是种子。

[0205]利用本发明方法产生的植物可以是育种计划的部分或者从 育种计划产生。育种方法的选择取决于植物繁育的方式，被改进性状的 遗传性，以及商业使用的栽培品种的类型(例如，F1杂交栽培品种，纯 系栽培品种，等等)。下面阐述挑选的用于培育本发明植物的非限制性 方法。利用对任意杂交子代的标志物辅助选择，可以加强育种计划。还 应理解在育种计划中可以使用任何商品化和非商品化的栽培品种。因素 诸如，例如，出苗力，营养势，应激耐受性，抗病力，分枝，开花，花 球大小，结实(seed set)和种子密度通常将决定选择。

[0206]对于高遗传的性状，在单个位置评价优良单株的选择将是 有效的，而对于低遗传的性状，选择应当基于从相关植物家族的重复评 价获得的平均值。流行的选择方法通常包括谱系选择、改良的谱系选择、 混合选择和轮回选择。在一个优选的实施方案中，进行回交或者轮回育 种计划。

[0207]遗传的复杂性影响育种方法的选择。回交育种可用于将针 对高遗传性状的一种或者几种优良基因转移到所需栽培品种。这种方法 已经广泛地被用于培育抗病的栽培品种。使用各种轮回选择技术来提高 受许多基因控制的定量遗传性状。自花授粉作物中轮回选择的使用依赖 于授粉的方便，每次授粉成功杂交的频率，以及来自每次成功杂交的杂 种后代的数量。

[0208]可以检验育种系，并在代表商品化目标区域的环境中与合 适的标准品比较两代或者更多代。将最优品系作为商品化新栽培品种的 候选物；那些性状仍然存在缺陷的品系被用作亲本以产生新的群体供进 一步选择。

[0209]鉴定优良植物的方法是观察其相对于其他实验性植物以及 广泛栽培的标准栽培品种的性能。如果单次观察是非结论性的，重复观 察可以提供其遗传价值的更好估计。育种人员可以挑选并杂交两种或更 多种亲本品系，然后是重复的自花或者近缘授粉和选择，产生许多新的 遗传组合。

[0210]花椰菜新品系的开发需要花椰菜品种的开发和选择，这些 品种的杂交以及优良杂种杂交系的选择。可以通过在挑选的雄性生育亲 本之间的人工杂交或者利用雄性不育系统产生杂种种子。针对某些单基 因性状诸如花色、种子产量或者除草剂抗性(其指示种子确实是杂种) 来挑选杂种。关于亲本品系的其他数据，以及杂种的表型，影响育种人 员决定是否继续特异性杂种杂交。

[0211]谱系育种和轮回选择育种方法可用于从育种种群开发栽培 品种。育种计划将来自两种或更多栽培品种或者各种基于广泛来源的所 需性状组合入育种库，通过自交和所需表型的选择从所述育种库开发出 栽培品种。可以对新的栽培品种进行评价以确定哪一种具有商品化潜 力。

[0212]谱系育种通常被用于自花授粉作物的改良。具有良好、互 补性状的两种亲本杂交产生F1。通过一种或者数种F1′s的自交产生F2 群。在最优家族中选择最优个体。可以在F4代开始家族的重复试验以提 高选择低遗传性状的效果。在近交(即，F6和F7)的晚期，检测最优品系 或者表型类似品系的混合物作为可能的新的栽培品种。

[0213]回交育种已经被用于将简单遗传、高遗传性的性状的基因 转移到所需纯合品种或者近交系，其是轮回亲本。待转移性状的来源被 称为供体亲本。所获植物预期具有轮回亲本(例如，栽培品种)的特质 以及从供体亲本转移的所需性状。在初次杂交后，选择具有供体亲本表 型的个体，并与轮回亲本反复杂交(回交)。所获植物预期具有轮回亲 本(例如，栽培品种)的特质以及从供体亲本转移的所需性状。

[0214]严格意义上来说单粒传方法是指从前代的单颗种子产生新 的一代。当群已经从F2提高到近交所需水平时，作为品系起源的植物均 将上溯至不同的F2个体。种群中植物的数量每代都下降，因为一些种子 不能发芽或者一些植物不能产生至少一颗种子。结果，当世代增加完成 时，不是所有最初在种群中取样的F2植物都由子代代表。

[0215]通常用于不同性状和作物的其他育种方法的说明可以参见 数种参考书之一(例如，Fehr，Principles of Cultivar Development Vol.1，pp. 2-3(1987))。

[0216]本发明提供一种将亮白色花球等位基因渐渗入花椰菜植物 的方法，包括：利用核酸标志物进行花椰菜植物的标志物辅助选择，其 中所述核酸标志物与具有第一核酸序列的核酸分子特异性杂交，所述第 一核酸序列与位于连锁群O1、O2、O7或者O9上的第二核酸序列物理 连锁，其中第二核酸序列位于第三核酸序列的500kb以内，所述第三核 酸序列能够与SEQ ID NO：1、6、11、14或者17的核酸序列，其互补序 列，或者其片段特异性杂交；和，基于标志物辅助选择挑选花椰菜植物。

[0217]在本发明一个优选的方面，用于育种计划的一种或者更多 种白色花球等位基因的来源是选自以下的植物：Celesta、Linas、 Fremont、Balboa、Belot、Jerez、Sevilla、Skywalker、Aviron、Beluga、 Defino、Meridien、Moby Dick、Nessie、Rafale、Redoubtable、Elinia、 Valtos、Veronie、Viviane、Deniol、Hef、Juluan、Milia、Nelig、Nevis、 Nominoe、Ceveline、Opaal、Chambord、Abruzzi、Albino、Amiata、 Armstrong、Baldo、Cadal、Conero、Cornell、Freedom、Hermon、Lattai、 Premato、Sasso、Sublime、Vinson、Vulture、Baker、Boulen、Broden、 Clapton、Celemen、Diamen、Lecanu、Lorien、PI183214、NY6633和 Magellan。在更优选的方面，用于育种计划的亮白色花球等位基因的来 源是选自PI183214和NY6633的植物。

[0218]根据现在公开的内容，可以利用本发明的标志物核酸分子 筛选植物导入和种质，以使用本文公开的或者本领域已知的一种或者更 多种技术来筛选白色花球性状的等位基因。

[0219]上文引用的每篇参考文献、专利或者其他出版物均全文通 过援引并入本文。实施例
实施例1.花椰菜品系CLP/NY6633x9/FRE的开发

[0220]原种花椰菜品系F5 CLP/NY6633x9/FRE(＝F5 CEL/1857/ PI183214/NY6633/901203/FREMONT)的起源和育种历史概述如下。这些 花椰菜品系在环境影响的限制内显示亮白色性状的均一性和稳定性。

[0221]将F3 CEL/1657系(自由授粉者(“O.P.”)CELESTA(来自 Rijk Zwaan)与O.P.LINAS品系(来自Royal Sluis)杂交)与花椰菜品系 PI183214杂交以产生F1系CEL/1857/PI183214。F1系自交产生F2系。F2 系与F5CEL/1657系杂交产生回交系1(BC1)CEL/1857/PI183214，其用 于与F6CEL/1657系回交。这种回交导致BC3CEL/1857/PI183214系。然 后将BC3Z1 CEL/1857/PI183214与FN NY6633系杂交产生F1 CEL/1857/ PI183214/NY6633，其通过多次自交产生F3 CEL/1857/PI183214/NY6633 系。将F3 CEL/1857/PI183214/NY6633系与F3 901203/Fremont系杂交产 生F1 CEL/1857/PI183214/NY6633/901203/Fremont系。该系通过多次自 交产生F5 CEL/1857/PI183214/NY6633/901203/Fremont系。

[0222]将FN 901203系与F1 Fremont系杂交产生F1 901203/ Fremont系，该系自交产生F3系，从而开发出F3 901203/Fremont系。实施例2.花椰菜品系CLP/NY6633的开发

[0223]原种花椰菜品系CLP/NY6633(F7 CEL/1857/PI83214/ NY6633系)的起源和育种历史概述如下。这些花椰菜品系在环境影响的 限制内显示亮白色性状的均一性和稳定性。

[0224]F3 CEL/1857系(O.P.CELESTA系(来自Rijk Zwaan)与O.P. Linas(来自Royal Sluis1857系)杂交的结果)与FN PI183214系杂交以产生 F1系CEL/1857/PI183214。F2系产生并与F5CEL/1857系杂交产生BC1 CEL/1857/PI183214系，该系反过来与F6 CEL/1857系回交产生BC3 CEL/1857/PI183214系。BC3Z1 CEL/1857/PI183214系与FN NY6633系 杂交产生F1 CEL/1857/PI183214/NY6633系，该系自交产生F7 CEL/1857/PI183214/NY6633系(CLP/NY6633)。实施例3.花椰菜品系IBCSS/CLP/NY6633的开发

[0225]原种花椰菜品系IBCSS/CLP/NY6633的起源和育种历史概 述如下。这些花椰菜品系在环境影响的限制内显示亮白色性状的均一性 和稳定性。

[0226]F3 CEL/1857/PI183214/NY6633系(如上所述)与FnZ1 BCSS(从长自来源诸如NY6633或者NY7642B与O.P品种Silverstar的 杂交获得)杂交产生F1 1BCSS/CEL/1857/PI183214/NY6633系，该系通 过多个世代自交产生F4系(1BCSS/CLP/NY6633)。实施例4.花椰菜品系CLP/NY663x9/FRE/CLP/NY663/HOCE的开发

[0227]原种花椰菜品系CLP/NY6633x9/FRE/CLP/NY6633/HOCE 的起源和育种历史概述如下。这些花椰菜品系在环境影响的限制内显示 亮白色性状的均一性和稳定性。

[0228]F2 CEL/1857/PI183214/NY6633系(如上所述)与F2 901203/Fremont系(来自于FN 901203系与F1 Fremont系的杂交)杂交产 生F1 901203/Fremont/CEL/1857/PI183214/NY6633系，该系与Fn PWHOCE 系(从长白来源诸如NY6633或者NY7642B与HOCE系(源自O.P.品种 Hormade与Celesta的杂交)的杂交获得)杂交产生F1 901203/Fremont/ CEL/1857/PI183214/NY6633/HO/CE系。F2 901203/Fremont/CEL/1857/ PI183214/NY6633/HO/CE系与F4 CEL/1857/PI183214/NY663系杂交产生 F1 CEL/1857/PI183214/NY6633/901203/Fremont/CEL/1857/PI183214/ NY6633/HO/CE系，该系自交产生F4系(CLP/NY6633x9/FRE/CLP/ NY6633/HOCE)。实施例5.花椰菜田间试验

[0229]花椰菜种子最初种于温室。在生长大约7周后，将幼苗移 植到农田，间距75×50厘米。植物在粘性土中生长。不去除自覆盖的 内叶。如实施例7所述，利用3次重复，5种头状花序(heads)/曲线(plot)(数 据点来源于15种植物)评价花球颜色。

[0230]每7天测量，共进行3个周期，分析收获后在受控条件(5 ℃)下颜色和重量的发展，最近的周期是在收获后21天测量。每条曲线 测量一种头状花序。

[0231]每7天测量，共进行2个周期，分析收获后在环境条件(室 内保存，白天大约20℃，夜间15℃)下颜色和重量的发展，最近的周期 是在收获后14天测量。每条曲线测量四种头状花序。

[0232]田间试验数据显示于表1。标志物分布数据用白色(W)，黄 色(Y)，分离(S)和杂合(H)代表。直径用收获时花球的测量值表示，单位 为厘米(cm)。“夹套”是指花球底部被覆盖的百分比，而“自覆盖” 是指花球顶部被覆盖的百分比。花球重量用“裸”花球的克数表示，厚 度代表从顶部到底部的花球高度，单位是厘米(cm)。“绒毛”分数指 示，绒毛不存在(“1”)，最少绒毛(“2”)，中等绒毛(“3”)，相当多 绒毛(“4”)，或者完全绒毛(“5”)。GI(“总印象”)栏表示按照1(差 的)到5(极好的)标度的总花球质量。“颜色”栏表示收获时在Ctifl比色 图表中的花球颜色，C3指示C2和C4之间的中间色。

[0233]每7天测量，共进行3个周期，评价收获后受控温度(5℃) 下颜色和重量的发展，最近的周期是在收获后21天测量，每条曲线测 量一种头状花序。每7天测量，共进行2个周期，获得收获后室温下颜 色和重量的发展，最近的周期是在收获后14天，每条曲线四种头状花 序。干物质栏提供来自冷藏的花球的百分比。表1
 曲线#   直径   夹套   自覆盖   重量   厚度   绒毛   GI   颜色  重复I  763   15.8   100   29   859   10.2   1   3   7  764   14.8   97   24   623   10.6   1   2   2  765   15.2   100   59   750   10.0   1   4   7  768   14.0   78   7   435   8.1   2   1   5  769   15.2   100   48   781   9.5   1   4   2  771   14.6   100   52   763   11.0   1   4   3  773   16.8   100   83   1001   10.6   1   4   4  774   15.4   94   28   715   9.7   1   3   3  781   15.0   96   13   602   9.0   1   2   8  783   14.8   38   3   256   8.2   2   1   7  重复2  784   15.2   100   36   700   9.5   1   4   3  785   13.0   78   5   275   7.0   2   2   4  787   15.5   100   62   699   10.3   1   4   8  788   14.7   97   44   679   9.2   1   3   3  792   15.0   100   36   646   9.7   1   4   8  793   16.1   100   67   1027   12.0   1   4   7  796   15.0   98   17   682   9.4   1   3   8  800   16.0   98   20   681   9.9   1   3   1  801   15.2   100   57   800   10.0   1   4   2  802   14.5   60   6   314   8.0   2   1   6  重复3  805   14.2   28   7   237   6.7   2   1   7  807   16.0   100   86   937   10.6   1   4   6  808   15.2   100   23   675   9.8   1   3   2  809   14.8   98   20   824   10.1   1   3   2  810   15.6   100   21   814   9.8   1   4   9  811   16.4   100   36   1018   9.9   1   4   3  812   14.9   100   41   766   10.5   1   4   3  816   16.3   100   61   970   10.6   1   4   7  817   14.5   81   7   441   8.0   2   2   5  822   14.7   100   28   601   9.2   1   4   8





实施例6.花椰菜生长箱试验

[0234]花椰菜种子最初种于温室。在生长大约10周后，将幼苗移 植到花盆(container pots)(10L)。再生长三周后，将花盆放入生长箱(GTI Zephyr Koudetechniek BV，Groningen，Netherlands)。植物在RSE02盆栽 土中生长。植物在15℃、大约7500LUX(Philips Son T plus 400W lage druk natrium，Phillips bulb‘Peer’40W，HPI-T 400W metaalhalogeen) 的光照条件下生长。不去除自覆盖的内叶。按照下面实施例7所述，每 个品系取2种植物的花球来评价花球颜色。

[0235]在生长箱条件下保存来自生长箱试验的花球。大约每3天 测量，共进行5个周期，分析收获后生长箱条件(15℃)下颜色和重量的 发展，最近的周期是在收获后15天测量。

[0236]生长箱数据显示于下面的表2。表2
  品系   直径   重量   厚度   绒毛   GI   颜色   重复1：   非BW对照：   Fremont F1   11.0   235   7.9   1   5   7   Cornell F1   11.5   293   8.2   1   5   5   Aviso F1   10.5   260   7.5   1   4   6   Fortados OP   11.0   186   7.3   1   4   8   BW来源：   PI 183214   11.5   84   5.5   2   1   4   NY6633   11.0   111   5.6   2   2   5   BW原种系：   CLP/NY6633 x 9/Fre   11.0   196   7.6   1   3   1   CLP x NY6633   11.0   232   8.0   1   4   1   1BCSS x CLP/NY6633   11.5   258   8.0   1   4   1   CLP/NY6633x9/Fre/CLP/   NY6633/HOCe   11.0   201   7.4   1   4   1   重复2：   非BW对照：   Fremont F1   11.0   249   7.9   1   5   7   Cornell F1   11.0   268   7.8   1   5   4   Aviso F1   11.5   282   8.0   1   5   6   Fortados OP   10.5   189   7.2   1   4   8   BW来源：   PI 183214   10.5   54   5.2   1   1   4
  品系   直径   重量   厚度   绒毛   GI   颜色   NY6633   11.5   141   6.5   2   2   3   BW原种系：   CLP/NY6633 x 9/Fre   11.0   206   7.9   1   3   2   CLP x NY6633   11.0   251   7.9   1   5   2   1BCSS x CLP/NY6633   10.5   208   7.6   1   5   1   CLP/NY6633x9/Fre/CLP/   NY6633/HOCe   11.0   188   7.1   1   4   1

  品系   重复的平均值   直径   重量   厚度   绒毛   GI   颜色   非BW对照   Fremont F1   11.0   242   79   1   5   7   Cornell F1   11.3   281   80   1   5   5   Aviso F1   11.0   271   78   1   5   6   Fortados OP   10.8   188   73   1   4   8   平均值   11.0   246   78   1   5   7   BW来源   PI 183214   11.0   69   54   2   1   4   NY6633   11.3   126   61   2   2   4   平均值   11.2   98   58   2   2   4   BW原种系   CLP/NY6633 x 9/Fre   11.0   201   78   1   3   2   CLP x NY6633   11.0   242   80   1   5   2   1BCSS x CLP/NY6633   11.0   233   78   1   5   1   CLP/NY6633x9/Fre/CLP/   NY6633/HOCe   11.0   195   73   1   4   1   平均值   11.0   218   77   1   4   2

实施例7.花椰菜花球颜色的评价

[0237]将花椰菜花球与Ctifl比色标准(Centre technique interprofessionnel des fruits et legumes，France)进行比较，并指定整数值。 Ctifl色码包括5类，从更白增加到更黄：C2(“白色(blanc)”)，C4 (“奶油色(crème)”)，C6(“象牙色(ivoire)”)，C8(“淡黄色(jaune pale)”)和C10(“黄色(jaune)”)。对于比C2更白的花球颜色，使 用RAL标准片9010。例如，颜色与RAL标准片9010最接近的花球被 指定颜色分数为零(0)；颜色在RAL标准片9010和Ctifl颜色C2之间的 花球被指定颜色分数为一(1)；颜色最接近Ctifl颜色C2的花球被指定颜 色分数为二(C2)；颜色在Ctifl颜色C2和Ctifl颜色C4之间的花球被指 定颜色分数为三(C3)；并且颜色最接近Ctifl颜色C4的花球被指定颜色 分数为四(C4)。颜色在两种颜色之间的花球被指定所述两种颜色中间的 颜色分数。通过测定收获时花椰菜品系的15种花球(3种放入冷藏室， 12种是来自该品系的环境样品花球)的平均颜色分数，获得指定给该品 系的颜色分数。实施例8.针对花椰菜亮白色表型的数量性状基因座作图

[0238]花椰菜系ED37和NY6633杂交，使用其F1植物产生500 种双单倍体(DH)。ED37系是非亮白色、非长白系，NY6633系是长白系。

[0239]繁殖DH植物，并将无性繁殖系用于两种田间试验。在每 种田间试验中，在暴露于光照后测量3次花球的白色。计算这6次重复 间的变化，使用标准偏差最小的94种DH植物绘制分子图谱。

[0240]使用作图软件版本3.0(Kyazma B.V.， Wageningen，The Netherlands)绘制所述94种DH植物的分子图谱。利用 配对重组估算进行作图，并利用所述软件的Haldane作图函数进行计算。 将LOD设置为5，鉴定出9种连锁群，这符合甘蓝(Brassica oleraceae) 的染色体数量。

[0241]通过软件，版本4(Kyazma B.V.，Wageningen， The Netherlands)，使用来自94种DH系的亮白色平均测量值和标志物 数据进行QTL作图。利用2.5的LOD分数作为显著性的截断，鉴定出5 种QTLs。在连锁群O1、O7和O9上发现一种QTL，在连锁群O2上发 现两种QTL。图1.所述QTLs经鉴定是QTLO1、QTLO2a、QTLO2b、 QTLO7和QTLO9。在连锁群O1和O9上的QTLs之间鉴定出上位相互 作用。

[0242]还确定了超过阈值的QTLs的位置和作用(表2)。通过染 色体确定了位置，并且还确定了在染色体的位置(以cM为单位)和降低 一LOD的间隔上。通过区间作图和R平方值的Kruskall wallis分析被用 于确定QTLs的作用。表3：
  QTL   标志物   染色体   位置   降低一LOD   的间隔   (以cM   为单位)   Kruskall   wallis   分析   O1   sN2176Fa   O1   4.7   4.1-5.3   43.5(p≤0.1   10-3)   O9处只有NY66   等位基因   sN2176Fa   O1   49.8(p≤0.1   10-3)   O9处只有ED37   等位基因   sN2176Fa   O1   2.6(ns)   O2a   PATGMTAT44   6ED37scar   O2   6.6   0-43.6   16.3(p＜0.5   10-3)   O2b   BH464729   O2   33.6   0-43.6   13.3(p＜0.5   10-3)   O7   BH458678   O7   94.9   61.5-   94.9   11.2(p＜0.1   10-2)   O9   BH576393   O9   17.8   0-22.6   11.7(p＜0.1   10-2)   O1处只有NY66   等位基因   BH576393   O9   20.8(p＜0.1   10-3)   O1处只有ED37   等位基因   BH576393   O9   0.8(ns)

[0243]图1、2和3提供花椰菜的染色体O1、O2、O7和O9中白 色花球性状的区间作图曲线。这4条染色体的曲线显示超过LOD 2.5的 显著LOD值(Y轴)。图1.在图1中用虚线表示通过置换检验计算的 基因组宽阈值。曲线中的X轴是相应的连锁群，用小箭头表示标志物基 因座，并给出距离(以cM为单位)。具有名称O1、O2a、O2b、O7和 O9的大粗体箭头是在特定QTL内最紧密连锁的标志物基因座。图2提 供染色体O1的花椰菜中白色花球性状的区间作图曲线。利用在标志物 基因座O9处具有ED37等位基因的品系构建上方的曲线。利用在标志 物基因座O9处具有NY66等位基因的品系构建下方的曲线。通过置换 检验计算的基因组宽LOD(Y轴)阈值，对于O9处ED37等位基因的曲 线是3.5，对于O9处NY66等位基因的曲线是3.7。图3提供染色体O9 的花椰菜中白色花球性状的区间作图曲线。利用在标志物基因座O1处 具有ED37等位基因的品系构建上方的曲线。利用在标志物基因座O1 处具有NY66等位基因的品系构建下方的曲线。通过置换检验计算的基 因组宽LOD(Y轴)阈值，对于O9处ED37等位基因的曲线是4.5，对于 O9处NY66等位基因的曲线是3.2。

[0244]如下进行QTLO1和QTLO2a的分析。PCR反应 物包含1.4微升DNA，5.0微升Platinum qPCR-Supermix(Invitrogen， Paisley UK；目录号11730-025)，0.2微升50x ROX Reference染料 (Invitrogen，Paisely，UK)，0.2微升PCR引物(来自包含每种引物各36μ M的储液)，0.2微升探针引物(来自包含各种引物各8μM的 储液)，和3.0微升无菌水。PCR反应物在50℃孵育2分钟，94℃2分 钟，继之以40个循环：94℃15秒和60℃1分钟。利用ABI9700PCR 设备(Applied Biosystems，Foster City，CA)进行PCR反应。在PCR反应完 成后，按照制造商提供的指导，利用ABI7000装置(Applied Biosystems， Foster City，CA)进行等位基因检测。

[0245]用于QTLO1的分析的示例性引物序列如下所示。 SEQ ID NO：2是用于O1QTL分析的PCR引物：5’ AGCTTCAGCAAAGTCACTCTCTT(SEQ ID NO：2)。SEQ ID 3是用于 O1QTL分析的PCR引物：5’ AGAGTGAGAAGACGCTTGAGTTC(SEQ ID NO：3)。SEQ ID 4是用于 O1QTL分析的探针引物：5’VIC CGAGCTGGCCGAGAA (SEQ ID NO：4)。SEQ ID 5是用于O1 QTL分析的探针引物：5’ FAM ACGAGCTGACCGAGAA(SEQ ID NO：5)。

[0246]邻近QTLO1处“白色”等位基因的标志物序列显示于SEQ ID NO：1。鉴定出供体NY6633和受体ED37亲本之间的单核苷酸多态 性存在于SEQ ID NO：1内的56位(C或者T)。

[0247]用于QTLO2a的分析的示例性引物序列如下所 示。SEQ ID NO：7是用于O2a QTL分析的PCR引物：5’ TCAGTTTTCAAACAGTAACCATTTTGTTCAT(SEQ ID NO：7)。SEQ ID NO：8是用于O2a QTL分析的PCR引物：5’ ATGATGGCTGGTGCTTGGA(SEQ ID NO：8)。SEQ ID NO：9是用于O2a QTL分析的探针引物：5’FAM-AACAGCGACATGAAT(SEQ ID NO：9)。SEQ ID NO：10是用于O2a QTL分析的探针引物： 5’VIC-AAGAACAGCGATATGAAT(SEQ ID NO：10)。

[0248]邻近QTLO2a处“白色”等位基因的标志物序列显示于SEQ ID NO：6。供体NY6633和受体ED37亲本之间的单核苷酸多态性位于 187位(C到T)。

[0249]如下进行QTLO2b的CAPS分析。PCR反应物包含2.0微 升10X PCR缓冲液(Invitrogen，Paisley，UK)，0.8微升50mM MgCl2，0.8 微升包含dNTP各2.5mM的储液，0.4微升10μM SEQ ID NO：12引物， 0.4微升10μM SEQ ID NO：13引物，0.1微升Taq聚合酶(Invitrogen， Paisley，UK，目录#10342-020)，1.0微升DNA(大约10-100ng)和14.5 微升无菌水。PCR反应物在94℃孵育2分钟，继之以35个循环：92℃60 秒，然后52℃30秒，然后72℃1分钟。然后将PCR反应物在72℃孵 育5分钟。在以下反应物中与Tsp509I限制性内切酶一起进行PCR后孵 育，所述反应物包含：20.0微升PCR反应物，3.0微升NEB缓冲液#1(New England Biolabs，Leusden，The Netherlands；目录号B7001S)，6.8微升无 菌水，和0.2微升Tsp509I限制性内切酶(New England Biolabs，Leusden， The Netherlands；目录号R0149L)。将该反应物在65℃孵育3-4小时。 在限制性内切酶消化后，在1.2％w/v琼脂糖凝胶(Biometra，Leusden，The Netherlands；目录号21069158)上电泳解析反应产物。在邻近的凝胶泳道 加入Invitrogen(Paisley，UK)的分子量标准来估计片段大小。对于“黄色” O2b等位基因纯合的样品产生大约400和大约180碱基对的片段，而对 于“白色”O2b等位基因纯合的样品产生大约580碱基对的片段。对该 基因座杂合的样品产生所有3种片段。

[0250]用于QTLO2a的CAPS分析的示例性引物序列如下所示。 SEQ ID NO：12是用O2b CAPS分析的PCR引物： 5’CCATAGTCCATAACTGTTTCATGC(SEQ ID NO：12)。SEQ ID NO： 13是用于O2b CAPS分析的PCR引物：5’ CACAGGCAAACCAAACACAC(SEQ ID NO：13)。

[0251]邻近QTLO2b处“白色”等位基因的标志物序列显示于SEQ ID NO：11。供体NY6633和受体ED37亲本之间的单核苷酸多态性位于 418位(A到T)。Tsp509I的限制性酶切位点也定位于SEQ ID NO：11内。

[0252]如下进行QTLO7a的INDEL分析。PCR反应物包含2.0微 升10X PCR缓冲液(Invitrogen，Paisley，UK)，0.8微升50mM MgCl2，0.8 微升包含dNTP各2.5mM的储液，0.4微升10μM SEQ ID：15引物，0.4 微升10μM SEQ ID：16引物，0.1微升Taq聚合酶(Invitrogen，Paisley，UK； 目录号10342-020)，1.0微升DNA(大约10-100ng)，和14.5微升无菌水。 PCR反应物在94℃孵育2分钟，继之以35个循环：92℃60秒，然后 52℃30秒，然后72℃1分钟。然后将PCR反应物在72℃孵育5分钟。

[0253]在PCR后，在1.2％w/v琼脂糖凝胶(Biometra，Leusden，The Netherlands；目录号21069158)上电泳解析反应产物。在邻近的凝胶泳道 加入Invitrogen(Paisley，UK)的分子量标准来估计片段大小。对于“黄色” O7等位基因纯合的样品产生大约700碱基对的片段，而对于“白色” O7等位基因纯合的样品产生大约930碱基对的片段。对该基因座杂合 的样品产生全部两种片段。

[0254]用于QTLO7的INDEL分析的示例性引物序列如下所示。 SEQ ID NO：15是用于O7INDEL分析的PCR引物：5’ TTTTGTTTTGTTTTATGCATGTTTC(SEQ ID NO：15)。SEQ ID NO：16 是用于O7INDEL分析的PCR引物：5’ GTAATGCTTCAAGATATGGAGAATG(SEQ ID NO：16)。

[0255]邻近QTLO7处“白色”等位基因的标志物序列显示于SEQ ID NO：14。供体NY6633和受体ED37亲本之间的INDEL多态性高亮显 示于图4。INDEL多态性用下划线表示，ED37受体序列提供于下部分 的曲线中。

[0256]如下进行QTLO9的CAPS分析。PCR反应物包含2.0微升 10X PCR缓冲液(Invitrogen，Paisley，UK)，0.8微升50mM MgCl2，0.8 微升包含dNTP各2.5mM的储液，0.4微升10μM SEQ ID NO：18引物， 0.4微升10μM SEQ ID NO：19引物，0.1微升Taq聚合酶(Invitrogen， Paisley，UK，目录#10342-020)，1.0微升DNA和14.5微升无菌水。PCR 反应物在94℃孵育2分钟，继之以35个循环：92℃60秒，然后52℃30 秒，然后72℃1分钟。然后将PCR反应物在72℃孵育5分钟。在以下 反应物中进行与BstUI限制性内切酶的PCR后孵育，所述反应物包含： 20.0微升PCR反应物，3.0微升NEB缓冲液#2(New England Biolabs， Leusden，The Netherlands；目录号B7002S)，6.8微升无菌水，和0.2微 升BstUI限制性内切酶(New England Biolabs，Leusden，The Netherlands； 目录号#R0518L，10单位/ul)。将该反应物在60℃孵育3-4小时。在限制 性内切酶消化后，在1.2％w/v琼脂糖凝胶(Biometra，Leusden，The Netherlands；目录号21069158)上电泳解析反应产物。在邻近的凝胶泳道 加入Invitrogen的分子量标准(Paisley，UK)来估计片段大小。对于“黄色” O9等位基因纯合的样品产生大约305、大约223、大约109和大约76 碱基对的片段，而对“白色”O9等位基因纯合的样品产生大约382、大 约223和大约109碱基对的片段。对该基因座杂合的样品产生所有五种 片段。

[0257]用于QTLO9的CAPS分析的示例性引物序列如下所示。 SEQ ID NO：18是用于O9CAPS分析的PCR  引物：5’ AGAAGGGTACATCCCCAAGG(SEQ ID NO：18)。SEQ ID NO：19是用 于O9CAPS分析的PCR引物：5’CTTTGTGCGACGGTGAGAG(SEQ ID NO：19)。

[0258]邻近QTLO9处“白色”等位基因的标志物序列显示于SEQ ID NO：17。供体NY6633和受体ED37亲本之间的单核苷酸多态性位于 268位(A到G)。BstUI的限制性酶切位点位于SEQ ID NO：17内，还有 另一个位点定位于受体序列内。

[0259]在田间生长的植物或者温室生长的植物中，分析来自不同 选择年份的花椰菜品系的植物物质中与亮白色表型有关的五种QTLs连 锁的标志物。此外，如上面实施例3所述，为花椰菜头状花序的颜色打 分。实施例9.QTLs其他来源的鉴定

[0260]筛选54种商品化供应的花椰菜品种(杂种)中与白色花球 表型有关的五种QTLs相关的标志物。分析结果提供于表4。表4
 品种(公司)   节段  QTLO1   QTLO2A   QTLO2B   QTLO7   QTLO9  BALBOA(Bejo)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   H   H  BELOT(Bejo)   晚秋花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   黄色  JEREZ(Bejo)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   H   H  SEVILLA(Bejo)   夏季花椰菜   H   黄色   黄色   黄色   H  SKYWALKER(Bejo)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   H  AVIRON(Clause)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   H  BELUGA(Clause)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   H  DELFINO(Clause)   夏季花椰菜   H   黄色   黄色   黄色   黄色  MERIDIEN(Clause)   夏季花椰菜   H   黄色   H   黄色   白色  MOBY DICK(Clause)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   H  NESSIE(Clause)   夏季花椰菜   H   黄色   黄色   黄色   黄色  RAFALE(Clause)   晚秋花椰菜   白色   黄色   H   黄色   白色  REDOUTABLE  (Clause)   冬季花椰菜   黄色   黄色   黄色   白色   白色
  品种(公司)   节段  QTLO1   QTLO2A   QTLO2B   QTLO7   QTLO9   ELINIA(Enza)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   黄色   VALTOS(Enza)   夏季花椰菜   H   黄色   黄色   黄色   H   VERONIE(Enza)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   H   黄色   VIVIANE(Enza)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   黄色   XENIA(Enza)   夏季花椰菜   H   黄色   黄色   黄色   黄色   DENIOL(OBS)   冬季花椰菜   H   白色   黄色   黄色   白色   JEF(OBS)   冬季花椰菜   H   H   黄色   H   白色   JULUAN(OBS)   冬季花椰菜   H   白色   黄色   黄色   白色   MILIAU(OBS)   冬季花椰菜   H   白色   H   H   白色   NELIG(OBS)   冬季花椰菜   黄色   H   H   H   H   NEVIS(Seminis)   晚秋花椰菜   白色   H   黄色   黄色   白色   NOMINOE(OBS)   晚秋花椰菜   黄色   黄色   黄色   H   H   CEVELINE(Ryk   Zwaan)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   黄色   OPAAL(Ryk Zwaan)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   黄色   CHAMBORD(Ryk   Zwaan)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   黄色   ABRUZZI(Seminis)   冬季花椰菜   白色   黄色   黄色   黄色   白色   ALBINO(Seminis)   冬季花椰菜   白色   黄色   白色   黄色   H   AMIATA(Seminis)   晚秋花椰菜   H   黄色   黄色   H   白色   ARMSTRONG   (Seminis)   夏季花椰菜   H   黄色   黄色   黄色   H   BALDO(Seminis)   夏季花椰菜   H   黄色   黄色   黄色   白色   CADAL(Seminis)   冬季花椰菜   黄色   H   黄色   H   白色   CONERO(Seminis)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   白色   CORNELL(Seminis)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   白色   FREEDOM(Seminis)   夏季花椰菜   H   黄色   黄色   黄色   H   FREMONT(Seminis)   夏季花椰菜   H   黄色   黄色   黄色   H   HERMON(Seminis)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   H   LATTAI(Seminis)   冬季花椰菜   黄色   H   黄色   H   H
 品种(公司)   节段  QTLO1   QTLO2A   QTLO2B   QTLO7   QTLO9  PREMATO(Seminis)   夏季花椰菜   黄色   H   黄色   H   黄色  SASSO(Seminis)   冬季花椰菜   白色   黄色   黄色   白色   白色  SUBLIME(Seminis)   夏季花椰菜   H   黄色   黄色   黄色   H  VINSON(Seminis)   夏季花椰菜   H   黄色   黄色   黄色   H  VULTURE(Seminis)   晚秋花椰菜   H   H   黄色   黄色   白色  BAKER(Syngenta)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   H   黄色  BOULEN(Syngenta)   冬季花椰菜   黄色   黄色   黄色   H   白色  BRODEN(Syngenta)   冬季花椰菜   黄色   H   黄色   白色   白色  CLAPTON(Syngenta)   夏季花椰菜   黄色   H   黄色   黄色   H  CLEMEN(Syngenta)   冬季花椰菜   黄色   白色   黄色   H   白色  DIAMEN(Syngenta)   冬季花椰菜   H   白色   黄色   黄色   白色  LECANU(Syngenta)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   H  LORIEN(Syngenta)   冬季花椰菜   H   H   黄色   黄色   白色  MAGELLAN  (Syngenta)   夏季花椰菜   黄色   黄色   黄色   黄色   黄色
实施例10.子代品系的开发

[0261]产生上文提供的4种品系的子代，并按照上文的讨论，利 用标志物QTL01、QTLO2a、QTL02b、QTL07和QTL09进行分析。

[0262]CLP/NY6633(02：310-2)的品系用于重复试验和QTL02b标 志物的分离。源自02：310-2(04：318-1)的品系被挑选，并且对全部QTL 标志物是纯合白色的。标志物分析的结果提供于下面的表5。

[0263]CLP/NY6633/9/FRE(03：259-1)的品系用于重复试验。获得 03：259-1的两种子代品系，04：296-2和04：369-2。这两种品系的植物均 包含标志物QTL09的黄色等位基因。标志物分析结果还提供于下面的表 5。

[0264]1BCSS/CLP/NY6633(03：298-3)的品系也被用于如上所述 的重复试验。该品系对于标志物QTLO1是分离的。获得两种子代品系， 04：476-1和04：476-3，对于标志物QTLO1也是分离的，或者包含标志物 QTLO1的黄色等位基因，它们对于标志物QTLO9都是分离的。标志物 分析结果还提供于下面的表5。

[0265]CLP/NY6633/9/FRE/CLP/NY6633/HOCE(356-1KNO)的品 系被用于如上所述的重复试验。该品系对于标志物QTLO2b是分离的。 获得3种子代品系，04：563-1、04：563-2和04：563-3。两种子代品系 04：563-1和04：563-2对于标志物QTLO2b是分离的，而品系04：563-3在 标志物QTLO2b处是纯合白色的。但是，品系04：563-3对于标志物 QTLO2a是分离的。标志物分析结果还提供于下面的表5。表5
  植物  QTLO1   QTLO2a   QTLO2b   QTLO9   QTLO7   02：310-2，1   白色   白色   H   白色   白色   -   -   -   -   -   02：310-2，3   白色   白色   黄色   白色   白色   02：310-2，4   白色   -   黄色   白色   白色   02：310-2，5   白色   白色   H   白色   白色   02：310-2，6   白色   白色   黄色   白色   白色   02：310-2，7   白色   白色   白色   白色   白色   02：310-2，8   白色   白色   白色   白色   白色   02：310-2，9   白色   白色   H   白色   白色   02：310-2，10   白色   白色   H   白色   白色   04：348-1，1   白色   白色   白色   白色   白色   04：348-1，2   白色   -   白色   白色   白色   04：348-1，3   白色   白色   白色   白色   白色   04：348-1，4   白色   白色   白色   白色   白色   04：348-1，5   白色   白色   白色   白色   白色   04：348-1，6   白色   白色   白色   白色   白色   04：348-1，7   白色   白色   白色   白色   白色   04：348-1，8   白色   白色   白色   白色   白色   -   -   -   -   -   -   -   -   -   -   03：259-1，1   白色   白色   白色   黄色   白色
  植物  QTLO1   QTLO2a   QTLO2b   QTLO9   QTLO7   03：259-1，2   白色   白色   白色   黄色   白色   03：259-1，3   白色   白色   白色   黄色   白色   03：259-1，4   白色   白色   白色   黄色   白色   03：259-1，5   白色   白色   白色   黄色   白色   03：259-1，6   白色   白色   白色   黄色   白色   03：259-1，7   白色   白色   白色   黄色   白色   03：259-1，8   -   -   白色   -   -   -   -   -   -   -   -   -   -   -   -   04：296-2，1   白色   白色   白色   -   白色   04：296-2，2   白色   白色   白色   黄色   白色   04：296-2，3   白色   白色   白色   黄色   白色   04：296-2，4   白色   白色   白色   黄色   白色   04：296-2，5   白色   白色   白色   黄色   白色   04：296-2，6   白色   白色   白色   黄色   白色   04：296-2，7   白色   白色   白色   黄色   白色   04：296-2，8   白色   白色   白色   黄色   白色   -   -   -   -   -   -   -   -   -   -   04：369-2，1   白色   白色   白色   黄色   白色   04：369-2，2   白色   白色   白色   黄色   白色   04：369-2，3   白色   白色   白色   黄色   白色   04：369-2，4   白色   白色   白色   黄色   白色   04：369-2，5   白色   白色   白色   黄色   白色   04：369-2，6   白色   白色   白色   黄色   白色   04：369-2，7   白色   白色   白色   黄色   白色   04：369-2，8   白色   白色   白色   黄色   白色   04：369-2，9   白色   白色   白色   黄色   白色
  植物  QTLO1   QTLO2a   QTLO2b   QTLO9   QTLO7   04：369-2，10   白色   白色   白色   黄色   白色   04：476-1，1   H   白色   白色   黄色   白色   04：476-1，2   白色   白色   白色   黄色   白色   04：476-1，3   H   白色   白色   H   白色   04：476-1，4   H   白色   白色   H   白色   04：476-1，5   H   白色   白色   H   白色   04：476-1，6   H   白色   白色   黄色   白色   04：476-1，7   H   白色   白色   H   白色   04：476-1，8   H   白色   白色   H   白色   04：476-1，9   H   白色   白色   黄色   白色   04：476-1，10   H   白色   白色   H   白色   04：476-3，1   黄色   白色   白色   H   白色   04：476-3，2   黄色   白色   白色   白色   白色   04：476-3，3   黄色   白色   白色   H   白色   04：476-3，4   黄色   白色   白色   黄色   白色   04：476-3，5   黄色   白色   白色   H   白色   04：476-3，6   黄色   白色   白色   白色   白色   04：476-3，7   黄色   白色   白色   黄色   白色   04：476-3，8   黄色   白色   白色   H   白色   04：476-3，9   黄色   白色   白色   白色   白色   04：476-3，10   黄色   白色   白色   H   白色   03：298-3，1   H   白色   白色   黄色   白色   03：298-3，2   H   白色   白色   黄色   白色   03：298-3，3   黄色   白色   白色   H   白色   03：298-3，4   白色   白色   白色   黄色   白色   03：298-3，5   黄色   白色   白色   H   白色   03：298-3，6   黄色   白色   白色   黄色   白色   03：298-3，7   H   白色   白色   黄色   白色   03：298-3，8   白色   白色   白色   黄色   白色   -   -   -   -
  植物  QTLO1   QTLO2a   QTLO2b   QTLO9   QTLO7   -   -   -   -   356-1KNO3，1   白色   白色   H   白色   白色   356-1KNO3，2   白色   白色   白色   白色   白色   356-1KNO3，3   白色   白色   黄色   白色   白色   356-1KNO3，4   白色   白色   H   白色   白色   356-1KNO3，5   白色   白色   H   白色   白色   356-1KNO3，6   白色   白色   白色/H   白色   白色   356-1KNO3，7   白色   白色   黄色   白色   白色   356-1KNO3，8   白色   白色   H   白色   白色   -   -   -   -   -   -   -   -   04：563-1，1   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-1，2   白色   白色   黄色   白色   白色   ED37   黄色   黄色   黄色   黄色   黄色   NY66   白色   白色   白色   白色   白色   H   H   H   H   H   H   TE   -   -   -   -   -   04：563-1，3   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-1，4   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-1，5   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-1，6   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-1，7   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-1，8   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-1，9   白色   白色   黄色   白色   白色   04：563-1，10   白色   白色   H   白色   白色   04：563-2，1   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-2，2   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-2，3   白色   白色   H   白色   白色   04：563-2，4   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-2，5   白色   白色   H   白色   白色
  植物  QTLO1   QTLO2a   QTLO2b   QTLO9   QTLO7   04：563-2，6   白色   白色   H   白色   白色   04：563-2，7   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-2，8   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-2，9   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-2，10   白色   白色   H   白色   白色   04：563-3，1   白色   H   白色   白色   白色   04：563-3，2   白色   白色   -   白色   白色   04：563-3，3   白色   H   白色   白色   白色   04：563-3，4   白色   H   白色   白色   白色   04：563-3，5   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-3，6   白色   H   白色   白色   白色   04：563-3，7   白色   黄色   白色   白色   白色   04：563-3，8   白色   白色   白色   白色   白色   04：563-3，9   白色   -   白色   白色   白色   04：563-3，10   白色   -   白色   白色   -
序列表
<110>Boon，Meinardus Petrus
     van den Bosch，Franciscus
     Koorevaar，Gerard
<120>亮白色花椰菜
<130>P30720WO00
<150>US 60/848,632
<151>2006-10-03
<160>19
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>544
<212>DNA
<213>甘蓝(Brassica oleracea)
<220>
<221>misc_feature
<222>(56)..(56)
<223>供体NY66与ED37受体之间的单核苷酸多态性
<400>1
caatcgacag cttcagcaaa gtcactctct ttcagaaaga gtgagccttt ctcggccagc   60
tcgtctgcga actcaagcgt cttctcactc tctagggttt gctcgagttc cgaagccgaa  120
gctggtgctt tttcttcaac catggctcaa gcttgagaat tgggtttctg ggtaggttcg  180
aaatcaaaac gagaacgtta gctgagaaag aggaagcgtt tatggctcta cttgtagtac  240
cctaaaaggc taaaaccctt tcttctttgt ttttttcttc tagaaatgtt gatctaggaa  300
gaagaacatt tctatttttg acatgtgatg tttttatgca ttttaatgag tactgcgtgt  360
cgttttagac tatttttgac atcatgatgt tttatgcgtt ttaacgggaa catcgagtcg  420
tttgtcatat ttttaatatg tgtggttgct aatagctttt agacgwagag acgaagaagc  480
catcatcgac ttgtaaagtc gaaacctttt gtgtgttctg tcatctctgt ctccactcga  540
tggc                                                               544
<210>2
<211>23
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>2
agcttcagca aagtcactct ctt                                           23
<210>3
<211>23
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>3
agagtgagaa gacgcttgag ttc                                           23
<210>4
<211>15
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>4
cgagctggcc gagaa                                                    15
<210>5
<211>16
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>5
acgagctgac cgagaa                                                   16
<210>6
<211>394
<212>DNA
<213>甘蓝(Brassica oleracea)
<220>
<221>misc_feature
<222>(187)..(187)
<223>NY66供体与ED37受体之间的单核苷酸多态性
<400>6
tcatgattta gagggagttt ccatcaacta caaggtcaag gtaactccgg atctcccgga   60
gacgtgcatc cagccccttc aaagcagtaa gtttcgcagt gacctggtgc aaaatacaat  120
ttcacattat ttcagttttc aaacagtaac cattttgttc atataacaac tttgcaagaa  180
cagcgacatg aatcctccaa gcaccagcca tcatgatttc acgactaaag ggatgataat  240
gaaacgttga aatattgtga agtcaaatac ctcagtcgca agggtactga tcgttgtgtc  300
tttcacatcc cttagcaaat gctccacgcc tattagagaa cgataataaa gcaattacgt  360
cagatgactt tcctcaatcc aatcataaaa gacg                              394
<210>7
<211>31
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>7
tcagttttca aacagtaacc attttgttca t                                  31
<210>8
<211>19
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>8
atgatggctg gtgcttgga                                                19
<210>9
<211>15
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>9
aacagcgaca tgaat                                                    15
<210>10
<211>18
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>10
aagaacagcg atatgaat                                                 18
<210>11
<211>585
<212>DNA
<213>甘蓝(Brassica oleracea)
<220>
<221>misc_feature
<222>(9)..(9)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(14)..(14)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(21)..(22)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(51)..(57)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(98)..(98)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(418)..(418)
<223>NY66供体与ED37受体之间的单核苷酸多态性
<400>11
ctatcttang acancccatg nnttgcatat acaaattgat atatcatttc nnnnnnngtt   60
ttttgacaaa tcattgtgaa ggatgtgtgg aaggaatnca caggctggcc attgaacgat  120
atggagagtt cgtataagtt catggtgaag catgttcagc tatggaaagt tgcattccac  180
accacatctc ccaaatgggt tcactcttgc tatctagcag ccattgcagc gtattacgca  240
aaggaagtcg aggcgggttt gatggagtac aagccagaga ttatcatcag tgttcatcct  300
ctgatgcaac acattccctt gtgggttctc aaatggcaag agctacaaaa gagagtcctc 360
tttgtcactg tcattactga tctcaacact tgtcatccta catggtatat ataataaata 420
ggccggttta ttatattctc tgagagatgc tggctgctgg tttgatattt tatcctgtat 480
ggtttaggtt tcatccaggg gtgaaccgat gctattgccc gtctcaagaa gtggcgaaaa 540
gggcgttgtt tgatgggcta gatgagtctc aagtccgtgt gtggg                 585
<210>12
<211>24
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>12
ccatagtcca taactgtttc atgc                                          24
<210>13
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>13
cacaggcaaa ccaaacacac                                               20
<210>14
<211>878
<212>DNA
<213>甘蓝(Brassica oleracea)
<220>
<221>misc_feature
<222>(9)..(12)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(41)..(49)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(55)..(64)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(85)..(91)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(423)..(423)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(854)..(854)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(861)..(861)
<223>n是a，c，g，或t
<400>14
cgtcatgtnn nntaggtttt acaagttaag cttagtcggt nnnnnnnnnc atgtnnnnnn     60
nnnngtggta gttgaatttt agttnnnnnn ncaccaaccc tatatgtttt atactccctc    120
cgtttttaaa tataagtagt tttagtaaaa agagtttgtt tcacaatata agtaatttat    180
atatttcaat gcattttttt tattggatat tgtgtgacca atgaaataat gttaggtttt    240
taataattgg ttgaattaat tggttaaatg atatattctt ttaaataata aatttctaaa    300
tattcgtatt tttaagcaaa actacttaca attagaaacg gatggagtaa cattttcttc    360
ccttccaata taacaaatga ataaatatct caccaactga tagtaacaaa aaaaaaaaaa  420
aancaaaaaa aaaaaaaaat ctcaccactg attaattaca tgtaaacgca aatgtcgttt  480
agtctaggtg tagtaggatg gtgcattgtg cttaagaagg ggtcctacct ttgtgggaaa  540
agcttcggtg cacgtgtctt gcgtgagttc ttgtcctctt atgtgccatg aacccacaca  600
caccgtcgtt tccttccgtc cattttcttt gactctcatt ggcttggaag tccgtgaaac  660
cacaagattc cacacaccgt taaatggctc cgttactctt gagttgttct tttcttattc  720
tactattgca ttttttttat tagagggaga aagacacttc tcacacgcct ctaacctaaa  780
tgagattacg tctgtcggat tttccgatct tttgcttgtt cccaagacat atatataaag  840
tagattttca ttcntgtacg ntcaaatctc gacctatg                          878
<210>15
<211>25
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>15
ttttgttttg ttttatgcat gtttc                                         25
<210>16
<211>25
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>16
gtaatgcttc aagatatgga gaatg                                         25
<210>17
<211>663
<212>DNA
<213>甘蓝(Brassica oleracea)
<220>
<221>misc_feature
<222>(11)..(11)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(47)..(55)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(62)..(70)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(93)..(97)
<223>n是a，c，g，或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(268)..(268)
<223>NY66供体与ED37受体之间的单核苷酸多态性
<400>17
cttgacgagc natccctttc tcaccttatt ctccttgcaa acccttnnnn nnnnngcatt   60
annnnnnnnn cgcatcaggt ttcaccccag ttnnnnnaca ttttcttgaa aacctcaaac  120
gcctggtccg ctcttccata cgagcagaac cccgtgatca tcgtattaca gctcaccgtt  180
gtctctccat acccatttct aagcatctct ccgtatagtt ccctagccag cacaacttcg  240
cctcttttca agtgcgcatg tatcatcaca ttgtaagtaa actcgttagg ccgcatccct  300
ttctccatca tctcaaacca cagcttcctc gcgctcccga accaccccat ctcgcatagc  360
ccatggatca tcgtggtgta aacgaccctg tcaggcgcat agcctctctc tttaagattg  420
ttaaacacac aaaacgcctc gcgctgcttc tgattcttgc acagcccctt gataatctcc  480
tggtaggtat aaatactcgg ggaatggttc caggcaatca tcgtgtggag aatctccgac  540
atacaagcgt agttcccaat cttacaaaag ccagaaatca atttggcata gacaacatgt  600
cctggatcaa gcccttgttt caaaactttc ttgagtagct cgtacccttc tgaaacctct  660
cac                                                                663
<210>18
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>18
agaagggtac atccccaagg                                               20
<210>19
<211>19
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物/探针序列
<400>19
ctttgtgcga cggtgagag                                                19