[0001] 本发明属于医药技术领域，具体公开了含乌司他丁的组合物在制备治疗放化疗引起的皮肤损伤药物中的用途。

[0002] 放射治疗(放疗)和化学药物治疗(化疗)均是目前治疗恶性肿瘤的重要手段之一，但无论放疗或者化疗均会引起全身及局部毒性反应，严重影响患者的生活质量，给患者带来的极大的痛苦。其中，毛发脱落是放疗和化疗常见的不良反应。虽然目前对于放疗和化疗引起的毛发脱落分子机制不是很清楚，但普遍认为放疗和化疗会引起皮肤的毛囊细胞发生凋亡，从而导致毛发脱落。

[0003] 此外，化疗药物在输注过程中，发生渗透现象对血管、组织的损伤较大，易引发静脉炎和渗漏性组织损伤。其中，轻度化疗性静脉炎表现为沿静脉走形出现红斑、局部不适或疼痛，严重者出现静脉栓塞、局部组织坏死、皮肤溃疡以及深部的肌腱和关节损伤等。而渗漏性组织损伤表现为局部组织疼痛、红肿、水泡、硬结、功能障碍。并且静脉炎与渗漏性组织损伤常常并发存在，静脉炎使静脉或毛细血管床痉挛，局部供血减少，导致局部组织缺血、缺氧，进一步加剧渗漏性组织损伤的症状，使组织出现发黑、溃疡、坏死。

[0004] 而放射性皮炎也是常见的皮肤损伤症状，其发生率和严重程度与放射治疗方案、射线种类以及受照射体积等诸多因素有关。表现为毛发脱落、色素沉着、皮肤萎缩，甚至出现皮损放射性坏死和溃疡。

[0005] 无论是放化疗引起的毛囊组织损伤，还是化疗引发的静脉炎和渗漏性组织损伤、放疗引发的放射性皮炎均给患者的身心带来巨大的痛苦，而且还会影响放化疗方案的顺利实施。因此，有必要提供一种能有效治疗放化疗引起的皮肤损伤药物，以消除上述的不良影响。

[0006] 乌司他丁是一种广谱的蛋白酶抑制制剂，能够抑制多种蛋白、糖和脂类水解酶的活性。其主要在肝脏中合成，由肾脏代谢随尿液排出，且其分解形成的低分子量成分也具有很强的抑制水解酶的作用。常用于治疗急性胰腺炎，慢性复发性胰腺炎，亦可用于急性循环衰竭的抢救辅助用药。公开号为CN 105597091 A的中国专利申请“乌司他丁在制备治疗放/化疗引起的皮肤损伤药物中的用途”中提及乌司他丁注射液可降低多柔比星注射液外渗引起的皮肤肿胀和溃烂的发生以及病理损伤，降低炎症细胞浸润，并可减轻放射性治疗引发的皮肤损伤。然而，该专利并没有研究乌司他丁对放化疗引起的毛囊组织损伤，以及化疗引起的静脉炎具有如何的作用。

[0007] 葛根素化学名为：4’，7-二羟基-8-β-D葡萄糖基异黄酮，口服生物利用度低，常以注射剂应用，具有退热、镇静、改善血液循环、增加冠脉血流量的作用，临床上用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。目前尚未发现葛根素在治疗放化疗引起的皮肤损伤方面的研究，且由于葛根素注射剂易引发血管内溶血发应，大大制约了其应用。

[0008] 本发明的目的在于一种由乌司他丁和葛根素组成的药物组合物，以及该药物组合物在制备治疗放/化疗引起的皮肤损伤药物中的用途，具体为制备治疗放/化疗引起的毛囊组织损伤、化疗引起的渗漏性组织损伤和静脉炎、放疗性皮炎药物中的用途。

[0009] 具体地，本发明提供一种药物组合物，该药物组合物由乌司他丁和葛根素以1:0.1～1的质量比组成。

[0010] 优选地，所述的药物组合物由乌司他丁和葛根素以1:0.4～0.6的质量比组成。

[0011] 更优选地，所述的药物组合物由乌司他丁和葛根素以1:0.45的质量比组成。

[0012] 进一步地，本发明还提供所述的药物组合物在制备治疗放/化疗引起的皮肤损伤药物中的用途，所述的放/化疗引起的皮肤损伤包括放/化疗引起的毛囊组织损伤、化疗引起的渗漏性组织损伤和静脉炎、放疗性皮炎。

[0013] 乌司他丁虽然已被专利(JP2000336041A)公开对皮肤角化和特应性皮炎具有保护作用，且在专利(CN105597091A)中披露对多柔比星注射液外渗引起的皮肤损伤以及放射性治疗引发的皮肤损伤具有保护作用，但其对放/化疗引起的毛囊组织损伤以及化疗引起的静脉炎的作用并没有进行深入的研究。

[0014] 本发明研究表明，乌司他丁和葛根素的联用具有较强的防治放化疗引起的皮肤损伤的保护作用，可有效防治放/化疗引发的毛囊组织损伤，抑制毛发脱落，并可有效防治化疗药物静注引发的静脉炎病理损伤，具有较佳的静脉炎防护作用，同时对化疗引发的渗漏性损伤以及放疗引发的放射性皮炎发挥较佳的协同保护作用，实现在乌司他丁剂量减少的情况下，增加乌司他丁抗放化疗引起的皮肤损伤的活性，降低用药不良反应，提高患者用药的顺应性和安全性。因此，本发明提供了一种防治放化疗引起的皮肤损伤效果更好的药物组合物。

[0015] 具体地，本发明人以成年C57BL/6J雄性小鼠作为试验对象，麻醉后用松香/蜡去毛法拔去小鼠背部的毛发诱导生长期毛囊，从拔毛后的第1天分别注射给予乌司他丁、葛根素、乌司他丁和葛根素组合物，并以生理盐水作为对照组，并从拔毛后第9天，给小鼠腹腔注射环磷酰胺(CYP)150mg/kg，建立化疗后脱毛小鼠模型，观察小鼠背部拔毛脱毛区脱毛和毛发再生的情况。结果发现，给予生理盐水的小鼠在给予CYP后很快出现明显脱毛现象，且小鼠的毛囊细胞凋亡数量较多，而单独给予乌司他丁虽然可延缓小鼠的脱毛现象并抑制毛囊细胞凋亡，但效果并不是很明显，单独给予葛根素延缓小鼠脱毛现象以及抑制毛囊细胞凋亡的效果较乌司他丁的好，但个别小鼠因溶血现象而死亡。本发明人发现使用乌司他丁和葛根素的组合物进行给药，可显著抑制小鼠的脱毛现象，并缩短小鼠毛发再生的周期，抑制毛囊细胞凋亡，降低葛根素溶血反应，提高了用药的安全性，取得了意料不到的技术效果。

[0016] 另一方面，本发明人以健康大耳白雌性家兔作为试验对象，用输液泵在兔耳缘静脉距耳尖2cm处静脉滴注3mL浓度为1.5g/L的吡柔比星溶液(保证滴注过程中静脉有没受损，没有发生药物外渗现象)，随后分别注射给予乌司他丁、葛根素、乌司他丁和葛根素组合物，并以生理盐水作为对照组，观察家兔静脉血管的变化。结果发现，家兔注射吡柔比星后给予生理盐水24h后出现明显的血管刺激反应，沿静脉走向及侧枝充血红肿，皮温升高，48h后耳缘静脉局部溃烂严重，全耳发黑、变硬、进食活动减少，并于第5天后死亡，而单独给予乌司他丁可减轻家兔静脉炎的程度，降低静脉炎的发生率，具有一定的治疗效果；单独给予葛根素抑制家兔静脉炎的病理损伤的效果不明显，并且在治疗过程中个别家兔出现死亡现象。本发明人发现使用乌司他丁和葛根素的组合物进行给药，可有效降低家兔静脉炎的发生率，缓解家兔静脉病理损伤程度，对静脉炎具有较佳的防护作用，且有效抑制葛根素引发的溶出现象。

[0017] 此外，本发明人参考专利CN105597091A公开的方法制备吡柔比星外渗性大鼠皮肤损伤模型，并分别注射给予乌司他丁、葛根素、乌司他丁和葛根素组合物，结果发现，乌司他丁和葛根素联用，在降低乌司他丁用量的同时保持较佳的抗化疗药物渗漏性损伤疗效，同时有效抑制葛根素溶血现象，提高用药的安全性。

[0018] 临床试验数据表明，乌司他丁和葛根素联用可有效缓解乳腺癌患者放射治疗引起的脱发现象，并对放射皮炎的疼痛缓解和皮损修复具有较好的效果，有效地缩短放射性皮炎愈合时间，提高了治疗的效果。

[0019] 与现有技术相比，本发明的优势在于：

[0020] 本发明以乌司他丁和葛根素联用，用于防治放化疗引起的皮肤损伤，具体为用于防治放/化疗引发的毛囊组织损伤，化疗引起的渗漏性组织损伤和静脉炎、放疗性皮炎。结果发现，在实现乌司他丁剂量减少的情况下，两者联用可有效抑制毛囊细胞凋亡，抑制毛发脱落，促进毛发再生，并抑制静脉炎的发生，缓解静脉病理损伤，具有较佳的静脉炎防护作用，对化疗药物渗漏性损伤以及放射性皮炎均具有较佳的疗效，同时有效抑制葛根素溶血现象，大大提高了用药的安全性，改善患者的生存质量。

[0021] 以下通过具体实施方式进一步描述本发明，但本发明不仅仅限于以下实施例。

[0022] 实施例1乌司他丁和葛根素复方注射剂

[0023]乌司他丁 28.57mg(每一万单位相当于2.857mg)
葛根素 7.14mg

[0024] 制备工艺：取处方量的乌司他丁和葛根素，溶于500ml 5％葡萄糖注射液中，过滤、灌封，灭菌即得。

[0025] 实施例2乌司他丁和葛根素复方注射剂

[0026]乌司他丁 28.57mg(每一万单位相当于2.857mg)
葛根素 12.86mg

[0027] 制备工艺：取处方量的乌司他丁和葛根素，溶于500ml 5％葡萄糖注射液中，过滤、灌封，灭菌即得。

[0028] 实施例3乌司他丁和葛根素复方注射剂

[0029]乌司他丁 28.57mg(每一万单位相当于2.857mg)
葛根素 17.14mg

[0030] 制备工艺：取处方量的乌司他丁和葛根素，溶于500ml 0.9％氯化钠注射液中，过滤、灌封，灭菌即得。

[0031] 实施例4乌司他丁和葛根素复方注射剂

[0032]乌司他丁 28.57mg(每一万单位相当于2.857mg)
葛根素 22.87mg

[0033] 制备工艺：取处方量的乌司他丁和葛根素，溶于500ml 0.9％氯化钠注射液中，过滤、灌封，灭菌即得。

[0034] 实施例5乌司他丁和葛根素复方注射剂

[0035]乌司他丁 28.57mg(每一万单位相当于2.857mg)
葛根素 28.57mg

[0036] 制备工艺：取处方量的乌司他丁和葛根素，溶于500ml 0.9％氯化钠注射液中，过滤、灌封，灭菌即得。

[0037] 试验例一、乌司他丁和葛根素联用对毛囊组织损伤的保护作用

[0038] 以成年C57BL/6J雄性小鼠作为试验对象，麻醉后用松香/蜡去毛法拔去小鼠背部的毛发诱导生长期毛囊，从拔毛后的第1天分别注射给予乌司他丁、葛根素、乌司他丁和葛根素组合物，并以生理盐水作为对照组，并从拔毛后第9天，给小鼠腹腔注射环磷酰胺(CYP)150mg/kg，建立化疗后脱发小鼠模型，具体的给药方案见下表所示：

[0039]组别 给药
对照组 生理盐水
乌司他丁低剂量 5mg/kg
乌司他丁中剂量 15mg/kg
乌司他丁高剂量 25mg/kg
葛根素 6.75mg/kg
乌司他丁+葛根素A 乌司他丁15mg/kg+葛根素1.5mg/kg
乌司他丁+葛根素B 乌司他丁15mg/kg+葛根素3.75mg/kg
乌司他丁+葛根素C 乌司他丁15mg/kg+葛根素6.75mg/kg
乌司他丁+葛根素D 乌司他丁15mg/kg+葛根素9mg/kg
乌司他丁+葛根素E 乌司他丁15mg/kg+葛根素12mg/kg

[0040] 观察各组小鼠拔毛区毛发的生长情况，统计试验过程中小鼠发生血管内溶血反应的发生率，并检测小鼠在拔毛第13天时拔毛区毛囊细胞凋亡情况，结果见下表1和2所示。

[0041] 表1各组小鼠拔毛区毛发生长情况

[0042]组别 毛发生长情况毛发生长情况
对照组 给予CYP第5天开始脱发，第7天全部掉光，第30天有毛发再生
乌司他丁低剂量 给予CYP第6天开始脱发，第8天脱发明显，第30天有毛发再生乌司他丁中剂量 给予CYP第7天开始脱发，第9天脱发明显，第28天有毛发再生乌司他丁高剂量 给予CYP第8天开始脱发，第10天脱发明显，第27天有毛发再生葛根素 给予CYP第8天开始脱发，第11天脱发明显，第26天有毛发再生
乌司他丁+葛根素A 给予CYP第9天开始脱发，第12天脱发明显，第25天有毛发再生乌司他丁+葛根素B 给予CYP第10天开始脱发，第13天脱发明显，第23天有毛发再生乌司他丁+葛根素C 给予CYP第12天开始脱发，第15天脱发明显，第20天有毛发再生乌司他丁+葛根素D 给予CYP第12天开始脱发，第14天脱发明显，第20天有毛发再生乌司他丁+葛根素E 给予CYP第13天开始脱发，第15天脱发明显，第19天有毛发再生[0043] 表2各组小鼠溶血反应发生率以及毛囊细胞凋亡数

[0044]

[0045]

[0046] 由上表1和2可知，乌司他丁和葛根素联合用药，在减少乌司他丁剂量的前提下，显著抑制小鼠的脱毛现象，缩短小鼠毛发再生的周期，抑制毛囊细胞凋亡，降低葛根素溶血反应，当两者以1:0.45的质量比组成时效果较佳。

[0047] 试验例二、乌司他丁和葛根素联用对注射吡柔比星所致静脉炎的防治作用[0048] 以健康大耳白雌性家兔作为试验对象，用输液泵在兔耳缘静脉距耳尖2cm处静脉滴注3mL浓度为1.5g/L的吡柔比星溶液(为避免血管受损发生药物外渗，防止在同一部位反复穿刺)，随后分别注射给予乌司他丁、葛根素、乌司他丁和葛根素组合物，并以生理盐水作为对照组，观察家兔静脉血管的变化。其中，静脉炎等级评价指标为：0级：没有症状；I级：局部发红；II级：局部红斑或水肿；Ⅲ级：红斑、水肿，条索状静脉形成；IV级：红斑水肿显著，条索状静脉形成>1英寸(2.5cm)，有脓液流出。具体的给药方案见下表所示：

[0049]组别 给药
对照组 生理盐水
乌司他丁低剂量 5mg/kg
乌司他丁中剂量 15mg/kg
乌司他丁高剂量 25mg/kg
葛根素 6.75mg/kg
乌司他丁+葛根素A 乌司他丁15mg/kg+葛根素1.5mg/kg
乌司他丁+葛根素B 乌司他丁15mg/kg+葛根素3.75mg/kg
乌司他丁+葛根素C 乌司他丁15mg/kg+葛根素6.75mg/kg
乌司他丁+葛根素D 乌司他丁15mg/kg+葛根素9mg/kg
乌司他丁+葛根素E 乌司他丁15mg/kg+葛根素12mg/kg

[0050] 通过对血管进行HE染色，观察各组家兔静脉血管内皮肿胀、血管周围水肿、管腔扩张、管壁增厚、纤维增生等指标，结果见下表3和4所示。

[0051] 表3各组家兔静脉炎发生情况(48h)

[0052]

[0053]

[0054] 表4各组家兔静脉血管病理损伤程度(48h)

[0055]组别 血管周围水肿 血管内皮肿胀 管腔扩张 管壁增厚 纤维增生
对照组 +++ +++ ++ +++ +++
乌司他丁低剂量 +++ ++ ++ +++ +++
乌司他丁中剂量 ++ ++ ++ ++ ++
乌司他丁高剂量 + ++ ++ ++ ++
葛根素 ++ ++ ++ +++ +++
乌司他丁+葛根素A + ++ ++ + +
乌司他丁+葛根素B + + + + +
乌司他丁+葛根素C + - + + +
乌司他丁+葛根素D + - + + +
乌司他丁+葛根素E + - + + +

[0056] 注：“-”表示：无；“+”表示：轻度；“++”表示：中度；“+++”表示：重度。

[0057] 给家兔注射吡柔比星后给予生理盐水24h后出现明显的血管刺激反应，沿静脉走向及侧枝充血红肿，皮温升高，48h后耳缘静脉局部溃烂严重，全耳发黑、变硬、进食活动减少，并于第5天后死亡。以乌司他丁和葛根素联合用药，在减少乌司他丁剂量的前提下，显著降低家兔注射吡柔比星后静脉炎的发生率，缓解家兔静脉病理损伤程度，对静脉炎具有较佳的防护作用。同时，在试验过程中单独注射葛根素的家兔中有1例出现溶血现象(1/6，发生率16.7％)，其余各组均没有出现溶血现象，表明乌司他丁和葛根素联用，可有效抑制葛根素引发的溶出现象。

[0058] 试验例三、乌司他丁和葛根素联用对注射吡柔比星所致渗漏性损伤的防治作用[0059] 以SPF级的SD大鼠作为试验对象，用脱毛剂脱去左侧臀部皮毛，常规消毒局部皮肤，分别皮下注射0.25ml 2g/L的吡柔比星注射液，5min后，于局部注药处再分别注射给予乌司他丁、葛根素、乌司他丁和葛根素组合物，并以生理盐水作为对照组，作局部环形封闭，观察给药后各组大鼠的皮肤变化。注射过程由同一人操作，以避免由此带来的人为误差，同时避免注射至肌肉和体腔中。注射后做好标记，不作任何处理，观察注射部位皮肤变化。具体的给药方案见下表所示：

[0060]

[0061]

[0062] 计算各组大鼠渗漏性损伤面积，并通过对皮肤组织进行HE染色，观察有无溃荡形成、坏死及成纤维细胞、新生血管等肉芽组织的增生情况，结果见下表5和6所示。

[0063] 表5各组大鼠渗漏性损伤面积

[0064]组别 d 1 d 5 d 10 d 15 d 20
对照组 68.54±8.58 74.20±9.01 75.34±9.15 67.50±8.47 60.02±9.06
乌司他丁低剂量 67.72±9.04 60.80±8.74 56.25±5.60 48.48±4.22* 40.65±4.15*乌司他丁中剂量 66.30±8.68 58.32±5.12 52.48±4.24 46.25±3.40* 39.04±3.70**乌司他丁高剂量 66.12±7.70 55.15±5.44 49.02±3.85* 40.30±3.76** 30.96±3.24**葛根素 67.65±8.82 60.46±7.92 55.70±4.06 47.24±3.02* 40.72±3.65*
乌司他丁+葛根素A 65.70±7.50 53.25±5.24* 46.60±3.65* 30.46±2.60** 25.10±2.52**乌司他丁+葛根素B 65.65±8.02 50.30±5.50* 43.32±3.42* 30.24±3.27** 16.55±2.60**乌司他丁+葛根素C 65.50±8.16 47.20±3.04* 38.15±3.20** 26.10±2.54** 10.32±1.54**乌司他丁+葛根素D 64.48±7.80 45.06±3.25* 36.40±3.05** 24.35±2.27** 9.67±1.60**乌司他丁+葛根素E 64.40±7.65 44.85±3.04* 35.14±3.26** 23.70±3.00** 9.50±1.48**[0065] 注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

[0066] 表6各组大鼠皮肤组织病变改变(d 20)

[0067]组别 磷状上皮缺少损 真皮水肿 炎细胞浸润 纤维增生 灶性坏死
对照组 +++ +++ +++ ++ +++
乌司他丁低剂量 +++ ++ ++ ++ ++
乌司他丁中剂量 ++ ++ ++ + ++
乌司他丁高剂量 ++ + + + +
葛根素 +++ + ++ ++ ++
乌司他丁+葛根素A ++ + + - +
乌司他丁+葛根素B + + + - +
乌司他丁+葛根素C + - + - +
乌司他丁+葛根素D + - + - +
乌司他丁+葛根素E + - - - +

[0068] 注：“-”表示：无；“+”表示：轻度；“++”表示：中度；“+++”表示：重度。

[0069] 由上表5和6可知，乌司他丁和葛根素联合用药，在减少剂量的前提下，可显著缓解化疗药物导致的渗漏性损伤，治疗20d后，大鼠皮肤组织渗漏性损伤面积显著减少，并且真皮水肿、纤维增生的现象完全消失，表明乌司他丁和葛根素联用具有较佳的防治化疗所致渗漏性损伤的作用。同时，在试验过程中单独注射葛根素的大鼠中有2例出现溶血现象(2/10，发生率20％)，其余各组均没有出现溶血现象，表明乌司他丁和葛根素联用，可有效抑制葛根素引发的溶出现象。

[0070] 试验例四、乌司他丁和葛根素联用对乳腺癌患者放射治疗所致的放射性皮炎以及脱发的防治作用

[0071] 筛选乳癌志愿患者100例，均正在接受放射性治疗，对照组仅接受放射治疗，不作其他处理，其余各组分别静脉滴注给予乌司他丁、乌司他丁和葛根素组合物，具体见下表所示：

[0072]组别 给药
对照组 /
乌司他丁 28.57mg/500mL
乌司他丁+葛根素A 实施例1制得的复方注射剂
乌司他丁+葛根素B 实施例2制得的复方注射剂
乌司他丁+葛根素C 实施例3制得的复方注射剂

[0073] 各组在接受放射性治疗的同时，均按上表所示的给药方案，每4天静脉滴注相应的注射剂，持续治疗1个月，根据RTOG急性放射性皮肤反应的分级标准，评价各组的治疗放射性皮炎效果，其中级别评价标准为：0级为放射野皮肤无变化；Ⅰ级为皮肤滤泡样暗红色斑或脱发或干性脱皮或出汗减少；Ⅱ级为皮肤触痛或鲜红色斑或片状湿性脱皮或中度水肿；Ⅲ级为皮肤皱褶以外部位出现融合性湿性脱皮或凹陷性水肿；Ⅳ级皮肤出现溃疡、出血和坏死。此外，评价治疗过程中各组患者出现脱发的概率，结果见下表7和8所示。

[0074] 表7各组放射性皮炎的发生率n(％)

[0075]组别 0 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
对照组 0(0) 8(40) 4(20) 6(30) 2(10)
乌司他丁 4(20) 9(45) 4(20) 3(15) 0(0)
乌司他丁+葛根素A 8(40) 10(50) 2(10) 0(0) 0(0)
乌司他丁+葛根素B 9(45) 9(45) 2(10) 0(0) 0(0)
乌司他丁+葛根素C 9(45) 10(50) 1(5) 0(0) 0(0)

[0076] 表8各组脱发的发生情况n(％)

[0077]组别 正常 少量脱发 中等斑片脱发 完全脱发
对照组 0(0) 8(40) 10(50) 2(10)
乌司他丁 2(10) 12(60) 6(30) 0(0)
乌司他丁+葛根素A 4(20) 13(65) 3(15) 0(0)
乌司他丁+葛根素B 7(35) 11(55) 2(10) 0(0)
乌司他丁+葛根素C 7(35) 12(60) 1(5) 0(0)

[0078] 由上表7和8可知，乌司他丁和葛根素联合用药，在减少乌司他丁剂量的前提下，可显著缓解放射性皮炎的症状，对放疗所致的皮肤损伤具有较佳的疗效，并有效抑制乳癌患者在放疗过程中发生脱发的现象，提高了治疗效果。同时在试验过程中志愿患者并没有出现溶血等不良反应。

[0079] 以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。