KSP抑制剂与抗B7H3抗体的抗体药物缀合物(ADC)
阅读：406发布：2024-02-19
专利汇可以提供KSP抑制剂与抗B7H3抗体的抗体药物缀合物(ADC)专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及新型结合剂药物缀合物(ADC)、所述ADC的活性 代谢物 、用于制备所述ADC的方法、所述ADC用于 治疗 和/或 预防 疾病 的用途以及所述ADC用于制备用于治疗和/或预防疾病、特别是过度增殖性疾病和/或血管生成疾病(诸如癌症)的药剂的用途。此类治疗可作为单一疗法或者与其它药剂或其它治疗措施联合实现。，下面是KSP抑制剂与抗B7H3抗体的抗体药物缀合物(ADC)专利的具体信息内容。
1.下式的抗体与一个或多个活性物质分子的缀合物：
其中
BINDER 代表糖基化或去糖基化的抗B7H3抗体，或代表其抗原结合片段，
L 代表接头，
n 代表1至50、优选1.2至20且特别优选2至8的数值，且
KSP 代表下式(I)的化合物：
式(I)：
其中
R1 代表-H、-L-#1、-MOD或-(CH2)0-3Z，
其中
Z 代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤素、-C(=O)-NY1Y2或-C(=O)-OY3，
1 2
Y 和Y 彼此独立地代表-H、-NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH(CH2W)Z’，
Y3代表-H或-(CH2)0-3Z’，
Z’代表-H、-NH2、-SO3H、-COOH、-NH-C(=O)-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-
3COOH；
W代表H或OH，
Y4代表任选地被-NH-C(=O)-NH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被-NH2取代的芳基或苄基；
R2代表H、-MOD、-C(=O)-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中
Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-C(=O)-NY1Y2或-C(=O)-OY3，
Y1和Y2彼此独立地代表-H、-NH2或-(CH2)0-3Z’，
Y3代表-H或-(CH2)0-3Z’，
Z’代表-H、-SO3H、-NH2或-COOH；
Y4代表任选地被-NH-C(=O)-NH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被-NH2取代的芳基或苄基，且
Y5代表-H或-C(=O)-CHY6-NH2，
Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
R4代表-H、-L-#1、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-C(=O)-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中
SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，
R4’是C1-10-烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可被-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、NH-C(=O)-烷基、N(烷基)-C(=O)烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-C(=O)NH2、-C(=O)N(烷基)2或-OH取代一次或多次，是-H或基团-Ox-(CH2CH2O)v-R4’’，其中x是0或1，
其中v是1至10的数值，且
R4’’是- H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2；
Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-C(=O)-NY1Y2或-C(=O)-OY3，
Y1和Y2彼此独立地代表-H、-NH2或-(CH2)0-3Z’，
3
Y代表-H或-(CH2)0-3Z’，
Z’代表-H、-SO3H、-NH2或-COOH；
Y4代表任选地被-NH-C(=O)-NH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被-NH2取代的芳基或苄基，
Y5代表-H或-C(=O)-CHY6-NH2，且
Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
或
R2和R4 一起代表-CH2-CHR11-或-CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，
其中
R11代表-H、-NH2、-SO3H、-COOH、-SH、卤素(特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、-COO(C1-4-烷基)或-OH；
A代表-C(=O)-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-S(=O)2NH-或-C(=N-NH2)-；
R3代表-L-#1、-MOD或任选地取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷基，优选-L-#1或C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可各自被1-3个-OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(其各自具有1-
3个卤素原子)、1-3个-O-烷基、1-3个-SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-C(=O)-烷基、1-3个-O-C(=O)-NH-烷基、1-3个-NH-C(=O)-烷基、1-3个-NH-C(=O)-NH-烷基、1-3个-S(=O)n-烷基、
1-3个-S(=O)2-NH-烷基、1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z基团取代，
其中
n代表0、1或2，
3 3 3 1 2 3
Z代表-H、卤素、-OY、-SY、-NHY、-C(=O)-NYY或-C(=O)-OY，
Y1和Y2彼此独立地代表-H、-NH2或-(CH2)0-3Z’，
Y3代表-H、-(CH2)0-3-CH(NH-C(=O)-CH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-3Z’，Z’代表-H、-SO3H、-NH2或-COOH，
R5代表-H、-NH2、-NO2、卤素(特别是F、Cl、Br)、-CN、CF3、-OCF3、-CH2F、-CH2F、SH或-(CH2)0-3Z，
其中
Z代表-H、-OY3、-SY3、卤素、-NHY3、-C(=O)-NY1Y2或-C(=O)-OY3，
Y1和Y2彼此独立地代表-H、-NH2或-(CH2)0-3Z’，
Y3代表-H或-(CH2)0-3Z’，
Z’代表-H、-SO3H、-NH2或-COOH；
R6和R7彼此独立地代表-H、氰基、C1-10-烷基、氟-C1-10-烷基、C2-10-烯基、氟-C2-10-烯基、C2-10-炔基、氟-C2-10-炔基、羟基、-NO2、-NH2、-COOH或卤素，
R8代表C1-10-烷基、氟-C1-10-烷基、C2-10-烯基、氟-C2-10-烯基、C2-10-炔基、氟-C2-10-炔基、
2
C4-10-环烷基、氟-C4-10-环烷基或-(CH2)0-2-(HZ)，其可以被-OH、-COOH或-NH2相同或不同地单-或二取代，且
其中
HZ2代表具有最多2个选自N、O和S的杂原子的4-至7-元杂环，
9
R代表-H、-F、-CH3、-CF3、-CH2F或-CHF2；
其中
取代基R1、R3和R4之一代表-L-#1，
L代表接头且#1代表与所述抗体的键，
-MOD代表-(NR10)n-(G1)o-G2-G3，
其中
R10代表-H或C1-C3-烷基；
G1代表-NHC(=O)- 或-C(=O)-NH-
(其中，如果G1代表-NH-C(=O)-，则R10不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表具有1至10个碳原子的直链或支化的烃链，其可被基团-O-、-S-、-S(=O)-、S(=O)2、-NRy-、-NRyC(=O)-、-C(=O)-NRy-、-NRyNRy-、-S(=O)2-NRyNRy-、-C(=O)-NRyNRy-中的一个或多个中断一次或多次，
其中
Ry代表-H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被-NH-C(=O)-NH2、-COOH、-OH、-NH2、-NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸相同或不同地单取代或多取代，和/或其x
可被-C(=O)-、-CR=N-O-相同或不同地中断一次或多次，
其中
Rx代表-H、C1-C3-烷基或苯基，且
其中
包括任选地在烃基团上取代的C1-C10-烷基作为侧链的烃链可被-NH-C(=O)-NH2、-COOH、-OH、-NH2、-NH-CN-NH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，
G3代表-H或-COOH，
且
其中基团-MOD优选地具有至少一个基团-COOH；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
2.根据权利要求1所述的缀合物，其中A代表-C(=O)-。
3.根据权利要求1或2所述的缀合物，其中R1代表-H、-L-#1、-COOH、-C(=O)-NHNH2、-(CH2)1-3NH2、-C(=O)-NZ’’(CH2)1-3 NH2和-C(=O)-NZ’’CH2COOH，其中Z’’代表-H或-NH2。
4.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中R2和R4代表-H，或
2 4 11 11
R和R一起代表-CHR -CH2-或-CH2-CHR -(以形成吡咯烷环)；
其中R11代表-H、-COOH、-F、甲基、-CH2F、-O甲基、-CH2OH、-C(=O)-O-(C1-4-烷基)或OH。
5.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中R3代表-L-#1，或代表可被卤素、C1-3-烷基或氟-C1-3-烷基单取代或多取代的苯基，或代表C1-10-烷基或氟-C1-10-烷基，其可任
4 4 4 4 4 4
选地被-OY、-SY 、-O-C(=O)-Y、-O-C(=O)-NH-Y、-NH-C(=O)-Y、-NH-C(=O)-NH-Y、-S(O)n-Y4、-S(=O)2-NH-Y4、-NH-Y4或-N(Y4)2取代，
其中
n代表0、1或2，
4
Y代表-H，任选地被卤素、C1-3 烷基或氟-C1-3-烷基单取代或多取代的苯基，或代表可被-OH、-COOH和/或-NH-C(=O)-C1-3-烷基取代的烷基。
6.根据权利要求5所述的缀合物，其中所述缀合物具有以下式(IIj)：
其中
R3代表-L-#1；
A代表-C(=O)-；且
R6、R7、R8和R9具有与权利要求1中的式(I)中相同的含义。
7.根据权利要求1至5中一项或多项所述的缀合物，其中取代基R1代表-L-#1。
8.根据权利要求7所述的缀合物，其中所述缀合物具有式(IIk)：
其中
R1代表-L-#1；
A代表-C(=O)-且
R3代表-CH2OH-；
6 7 8 9
R、R、R和R具有与权利要求1中的式(I)中相同的含义。
9.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中R5代表-H或-F。
10.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中R6和R7彼此独立地代表-H、C1-3-烷基、氟-C1-3-烷基、C2-4-烯基、氟-C2-4-烯基、C2-4-炔基、氟-C2-4-炔基、羟基或卤素。
8
11.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中R代表支化的C1-5-烷基或环己基。
12.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中R9代表-H或氟。
13.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中所述接头-L-具有以下基本结构(i)至(iv)之一：
(i) -(C=O)m-SG1-L1-L2-
(ii) -(C=O)m-L1-SG-L1-L2-
(iii) -(C=O)m-L1-L2-
(iv) -(C=O)m-L1-SG-L2
其中m代表0或1，SG和SG1代表体内可裂解的基团，L1代表体内不可裂解的有机基团，且L2代表与所述结合剂的偶联基团。
14.根据权利要求13所述的缀合物，其中所述体内可裂解的基团SG是2-8寡肽基团，优选三肽或二肽基团或二硫化物、腙、缩醛或缩醛胺且SG1是2-8寡肽基团，优选二肽基团。
15.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，
其中所述接头L连接至半胱氨酸侧链或半胱氨酸残基且具有下式：
§-(C(=O)-)m-L1-L2-§§
其中
m代表0或1；
§代表与所述活性物质分子的键，且
§§代表与所述抗体的键，且
-L2-代表
其中
#1表示与所述抗体的硫原子的连接点，
#2表示与基团L1的连接点，
L1 代表-(NR10)n-(G1)o-G2-,
其中
10
R 代表-H、-NH2或C1-C3-烷基；
G1代表-NH-C(=O)-；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表具有1至100个(优选1至25个)碳原子的直链或支化的烃链，其来自芳基和/或直链和/或支化的烷基和/或环状烷基且可被-O-、-S-、-S(=O)-、S(=O)2-、-NH-、-C(=O)-、-N-CH3-、-NHNH-、-S(=O)2-NHNH-、-NH-C(=O)-、-C(=O)-NH-、-C(=O)-NHNH-和具有1至4个选自N、O和S、-S(=O)-或-S(=O)2-的相同或不同的杂原子和/或杂基团的5-至10-元芳族或非芳族杂环相同或不同地中断一次或多次，
其中
直链或支化的烃链可任选地被-NH-C(=O)-NH2、-COOH、-OH、-NH2、-NH-CN-NH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，
或代表以下基团之一：
其中Rx代表-H、C1-C3-烷基或苯基。
16.根据权利要求15所述的缀合物，其中L2由下式中的一者或两者代表：
其中
#1 表示与所述结合剂的硫原子的连接点，#2 表示与基团L1的连接点，
R22代表-COOH，且
与所述结合剂的硫原子的键的多于80%(基于所述接头与所述结合剂的键的总数计)以这两种结构之一存在。
17.根据权利要求15或16中一项或多项所述的缀合物，其中L1具有下式：
其中
r代表0至8的数值。
18.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中所述接头-L-连接至半胱氨酸侧链或半胱氨酸残基且具有下式：
其中
§代表与所述活性物质分子的键，且
§§代表与所述抗体的键，
m代表0、1、2或3；
n代表0、1或2；
p代表0至20；且
L3代表
其中
o代表0或1；且
G3代表具有1至100个(优选1至25个)碳原子的直链或支化的烃链，其来自芳基和/或直链和/或支化的烷基和/或环状烷基且可被-O-、-S-、-S(=O)-、S(=O)2-、-NH-、-C(=O)-、-N-CH3-、-NHNH-、-S(=O)2-NHNH-、-NH-C(=O)-、-C(=O)-NH-、-C(=O)-NHNH-和具有1至4个选自N、O和S、-S(=O)-或-S(=O)2-的相同或不同的杂原子和/或杂基团的5-至10-元芳族或非芳族杂环相同或不同地中断一次或多次，
其中
所述直链或支化的烃链可任选地被-NH-C(=O)-NH2、-COOH、-OH、-NH2-、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
19.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中所述缀合物具有下式之一：
和
其中
AK1 代表经由半胱氨酸连接的抗B7H3 抗体，且
AK2 代表经由赖氨酸连接的抗B7H3 抗体，其是抗体TPP-5706或TPP-3803的嵌合或人源化变体，
n是1至20的数值；且
L1是具有1至30个碳原子的直链或支化的烃链，其可被-O-、-S-、-C(=O)-、-S(=O)2-、-NH-、环戊基、哌啶基、苯基相同或不同地中断一次或多次，
其中所述直链或支化的烃链可被-COOH或-NH2取代；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
20.根据权利要求19所述的缀合物，其中所述接头L1代表以下基团
其中
§代表至与所述活性物质分子的键，且
§§代表与所述抗体的键，且
isoC3H7代表异丙基，
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和R/S对映异构体。
21.根据权利要求1至18中一项或多项所述的缀合物，其中所述缀合物具有下式之一：
其中
AK1代表经由半胱氨酸连接的抗B7H3 抗体，且
AK2代表经由赖氨酸连接的抗B7H3抗体，其是抗体TPP-5706或TPP-3803的嵌合或人源化变体，且
n是1至20的数值。
22.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中所述抗B7H3抗体是去糖基化抗体。
23.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中所述抗B7H3抗体是由杂交瘤PTA-4058产生的抗体或其抗原结合片段。
24.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中所述抗B7H3抗体是由杂交瘤PTA-4058产生的抗体的嵌合或人源化变体或其抗原结合片段。
25.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段结合如SEQ ID NO:41中所示的多肽。
26.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段包含：
可变重链，其包含如SEQ ID NO:2中所示的重链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:3中所示的重链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:4中所示的重链的可变CDR3序列，和
可变轻链，其包含如SEQ ID NO:6中所示的轻链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:7中所示的轻链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:8中所示的轻链的可变CDR3序列，或
可变重链，其包含如SEQ ID NO:12中所示的重链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:13中所示的重链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:14中所示的重链的可变CDR3序列，和
可变轻链，其包含如SEQ ID NO:16中所示的轻链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:17中所示的轻链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:18中所示的轻链的可变CDR3序列，或
可变重链，其包含如SEQ ID NO:22中所示的重链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:23中所示的重链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:24中所示的重链的可变CDR3序列，和
可变轻链，其包含如SEQ ID NO:26中所示的轻链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:27中所示的轻链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:28中所示的轻链的可变CDR3序列，或
可变重链，其包含如SEQ ID NO:32中所示的重链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:33中所示的重链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:34中所示的重链的可变CDR3序列，和
可变轻链，其包含如SEQ ID NO:36中所示的轻链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:37中所示的轻链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:38中所示的轻链的可变CDR3序列。
27.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段包含：
如SEQ ID NO:1中所示的重链的可变序列以及如SEQ ID NO:5中所示的轻链的可变序列，或
如SEQ ID NO:11中所示的重链的可变序列以及如SEQ ID NO:15中所示的轻链的可变序列，或
如SEQ ID NO:21中所示的重链的可变序列以及如SEQ ID NO:25中所示的轻链的可变序列，或
如SEQ ID NO:31中所示的重链的可变序列以及如SEQ ID NO:35中所示的轻链的可变序列。
28.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中所述抗B7H3抗体是IgG抗体。
29.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段包含：
如SEQ ID NO:9中所示的重链的序列以及如SEQ ID NO:10中所示的轻链的序列，或如SEQ ID NO:19中所示的重链的序列以及如SEQ ID NO:20中所示的轻链的序列，或如SEQ ID NO:29中所示的重链的序列以及如SEQ ID NO:30中所示的轻链的序列，或如SEQ ID NO:39中所示的重链的序列以及如SEQ ID NO:40中所示的轻链的序列。
30.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段是抗体TPP6642和TPP6850之一的人源化变体。
31.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其中所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段包含：
如SEQ ID NO:19中所示的重链的序列，其含有至少一个选自包含以下替换的组的氨基酸替换：I31S、N33Y、V34M、T50I、F52N、G54S、N55G、D57S、N61A、K65Q、D66G、K67R、T72R、A79V，和
如SEQ ID NO:20中所示的轻链的序列，其含有至少一个选自包含以下替换的组的氨基酸替换：E27Q、N28S、N30S、N31S、T34N、F36Y、Q40P、S43A、Q45K、H50A、K52S、T53S、A55Q、E56S、H90Q、H91S、G93S、P96L，或
如SEQ ID NO:29中所示的重链的序列，其含有至少一个选自包含以下替换的组的氨基酸替换：I31S、N33G、V34I、H35S、I37V、T50W、F52S、P53A、G54Y、D57N、S59N、N61A、F64L、K65Q、D66G、A68V、L70M、K74T、K77S、A107Q，和
如SEQ ID NO:30中所示的轻链的序列，其含有至少一个选自包含以下替换的组的氨基酸替换：E27Q、N28S、N30S、N31S、T34N、F36Y、V48I、H50A、K52S、T53S、A55Q、E56S、Q70D、H90Q、H91S、G93S。
32.药物组合物，其包含根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物与惰性、无毒性的药学上合适的辅助剂的组合。
33.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其用于治疗和/或预防疾病的方法中。
34.根据前述权利要求中一项或多项所述的缀合物，其用于治疗过度增殖性疾病和/或血管生成疾病的方法中。
KSP抑制剂与抗B7H3抗体的抗体药物缀合物(ADC)
[0001] 引言和现有技术状况本发明涉及纺锤体驱动蛋白抑制剂的结合剂活性物质缀合物(ADC)、这些ADC的活性代
谢物、制备这些ADC的方法、这些ADC用于治疗和/或预防疾病的用途和这些ADC用于制备治
疗和/或预防疾病，特别是过度增殖性疾病和/或血管生成疾病，例如癌症的药剂的用途。此
类治疗可作为单一疗法或另外与其它药剂或其它治疗措施联合实现。
谢物、制备这些ADC的方法、这些ADC用于治疗和/或预防疾病的用途和这些ADC用于制备治
疗和/或预防疾病，特别是过度增殖性疾病和/或血管生成疾病，例如癌症的药剂的用途。此
类治疗可作为单一疗法或另外与其它药剂或其它治疗措施联合实现。
[0002] 癌症是多种多样的组织的不受控细胞生长的后果。在许多情况下，新的细胞渗透到现有组织中(浸润性生长)或它们转移到远端器官中。癌症发生在多种多样的器官中并通
常具有组织特异性病程。术语“癌症”作为通用术语因此描述不同器官、组织和细胞类型的
大量确定疾病。
常具有组织特异性病程。术语“癌症”作为通用术语因此描述不同器官、组织和细胞类型的
大量确定疾病。
[0004] 结合剂蛋白与一个或多个活性物质分子的缀合物是已知的，特别是以所谓的“抗体活性物质缀合物”(ADC)的形式，其中针对肿瘤相关抗原的内化抗体经连接单元（“接头”）
共价连接至细胞毒性剂。在将ADC引入肿瘤细胞中和该缀合物随后离解后，在肿瘤细胞内释
放细胞毒性剂本身或由其形成的其它细胞毒性代谢物且可在该处直接和选择性展现其作
用。以该方式，不同于传统癌症化疗，可将对正常组织的损伤保持在明显较窄的界限内 [参
见例如J. M. Lambert, Curr. Opin. Pharmacol.5, 543-549 (2005); A. M. Wu和P. D.
Senter, Nat. Biotechnol.23, 1137-1146 (2005); P. D. Senter, Curr. Opin. Chem.
Biol.13, 235-244 (2009); L. Ducry和B. Stump, Bioconjugate Chem.21, 5-13
(2010)]。因此，WO2012/171020描述了ADC，其中多个毒簇分子经聚合接头连接至抗体。作为
可能的毒簇，WO2012/171020尤其提到物质SB 743921、SB 715992 (Ispinesib)、MK-0371、
AZD8477、AZ3146和ARRY-520。
共价连接至细胞毒性剂。在将ADC引入肿瘤细胞中和该缀合物随后离解后，在肿瘤细胞内释
放细胞毒性剂本身或由其形成的其它细胞毒性代谢物且可在该处直接和选择性展现其作
用。以该方式，不同于传统癌症化疗，可将对正常组织的损伤保持在明显较窄的界限内 [参
见例如J. M. Lambert, Curr. Opin. Pharmacol.5, 543-549 (2005); A. M. Wu和P. D.
Senter, Nat. Biotechnol.23, 1137-1146 (2005); P. D. Senter, Curr. Opin. Chem.
Biol.13, 235-244 (2009); L. Ducry和B. Stump, Bioconjugate Chem.21, 5-13
(2010)]。因此，WO2012/171020描述了ADC，其中多个毒簇分子经聚合接头连接至抗体。作为
可能的毒簇，WO2012/171020尤其提到物质SB 743921、SB 715992 (Ispinesib)、MK-0371、
AZD8477、AZ3146和ARRY-520。
[0005] 最后提到的物质是所谓的纺锤体驱动蛋白抑制剂。纺锤体驱动蛋白(KSP，也称作Eg5、HsEg5、KNSL1或KIF11)是双极有丝分裂纺锤体发挥作用所必需的驱动蛋白样马达蛋
白。KSP的抑制导致有丝分裂阻滞并经相对较长时间导致细胞凋亡(Tao等人, Cancer Cell
2005 Jul 8(1), 39-59)。在发现最早的细胞常见KSP抑制剂Monastrol后，KSP抑制剂已确
立为一类新型化疗药物(Mayer等人, Science 286: 971-974, 1999)，且已经是许多专利
申请的主题(例如WO2006/044825；WO2006/002236；WO2005/051922；WO2006/060737；WO03/
060064；WO03/040979；和WO03/049527)。但是，由于KSP仅在有丝分裂期的相对短时期内展
现其作用，KSP抑制剂在该期期间必须以足够高的浓度存在。WO2014/151030公开了包括某
些KSP抑制剂的ADC。
白。KSP的抑制导致有丝分裂阻滞并经相对较长时间导致细胞凋亡(Tao等人, Cancer Cell
2005 Jul 8(1), 39-59)。在发现最早的细胞常见KSP抑制剂Monastrol后，KSP抑制剂已确
立为一类新型化疗药物(Mayer等人, Science 286: 971-974, 1999)，且已经是许多专利
申请的主题(例如WO2006/044825；WO2006/002236；WO2005/051922；WO2006/060737；WO03/
060064；WO03/040979；和WO03/049527)。但是，由于KSP仅在有丝分裂期的相对短时期内展
现其作用，KSP抑制剂在该期期间必须以足够高的浓度存在。WO2014/151030公开了包括某
些KSP抑制剂的ADC。
[0007] 为了实现该目的，本发明提供糖基化或去糖基化的抗B7H3抗体与以下式(I)化合物的缀合物，其中一个或多个式(I)化合物经由接头L连接至抗体。在该情况下，去糖基化的
抗体在Fc区的CH2结构域中的保守N-结合位点不具有聚糖且因此不结合NK细胞。因此，去糖
基化的抗体不支持NK细胞介导的细胞毒性。所述抗体优选为人、人源化或嵌合单克隆抗体。
特别优选为特异性结合B7H3的人Ig4和/或人和/或鼠Ig2同种型的抗B7H3抗体，特别是抗
B7H3抗体TPP-5706及其人源化变体。
抗体在Fc区的CH2结构域中的保守N-结合位点不具有聚糖且因此不结合NK细胞。因此，去糖
基化的抗体不支持NK细胞介导的细胞毒性。所述抗体优选为人、人源化或嵌合单克隆抗体。
特别优选为特异性结合B7H3的人Ig4和/或人和/或鼠Ig2同种型的抗B7H3抗体，特别是抗
B7H3抗体TPP-5706及其人源化变体。
[0008] 式(I)：其中
R1代表H、–L-#1、–MOD或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤素、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
3
(CH2W)Z’，且Y代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH，其中W代表H或OH，
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
2 4 5
R代表H、-MOD、-CO-CHY-NHY或-(CH2)0-3Z，
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
R4代表H、–L-#1、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，R4’是C1-10-
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可被-NH2、-NH-烷基、-N(烷
基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R4’’(其中x是0或1且v是1至10的
数值，且R4’’是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)，其中在裂解后存在伯胺基团(对应于R4 = H)；
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
或R2和R4一起代表–CH2-CHR11-或-CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11代表H、NH2、
SO3H、COOH、SH、卤素 (特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
R3代表–L-#1、-MOD或任选地取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷基，优
选–L-#1或C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个卤
素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-NH-
烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷基、
1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z基团取代，n代表0、
1或2，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1和Y2 彼此独立地代
3
表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-
3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH
(其中“烷基”优选地代表C1-10-烷基)；
R5代表H、NH2、NO2、卤素 (特别是F、Cl、Br)、-CN、CF3、-OCF3、-CH2F、-CH2F、SH或-(CH2)0-
3Z，其中Z代表-H、-OY3、-SY3、卤素、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基、NO2、NH2、COOH或卤素(特别是F、Cl、Br)，
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯基、(任选地氟代的)C2-10-
炔基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或–(CH2)0-2-(HZ2)，其中HZ2代表具有最多2个选自N、O和
S的杂原子的4-至7-元杂环，其中这些基团的每个可以被–OH、CO2H或NH2取代；
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
其中取代基R1、R3或R4之一代表或(在R8的情况下)含有–L-#1，
L代表接头且#1代表与所述结合剂或其衍生物的键，
其中–MOD代表–(NR10)n-(G1)o-G2-G3，其中
R10代表H或C1-C3-烷基；
10
G1代表–NHCO-或-CONH-(其中，如果G1代表–NHCO-，则R 不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链和/或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、
y y y y y y y y y y
SO2、-NR -、-NRCO-、CONR-、-NRNR -、-SO2NR NR-、-CONRNR-(其中R代表H、苯基、C1-C10-
烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-或-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个
中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-
CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，G3代表-H或-COOH，且其中基团–MOD优选地具有至少一
个基团-COOH；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
R1代表H、–L-#1、–MOD或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤素、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
3
(CH2W)Z’，且Y代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH，其中W代表H或OH，
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
2 4 5
R代表H、-MOD、-CO-CHY-NHY或-(CH2)0-3Z，
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
R4代表H、–L-#1、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，R4’是C1-10-
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可被-NH2、-NH-烷基、-N(烷
基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R4’’(其中x是0或1且v是1至10的
数值，且R4’’是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)，其中在裂解后存在伯胺基团(对应于R4 = H)；
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
或R2和R4一起代表–CH2-CHR11-或-CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11代表H、NH2、
SO3H、COOH、SH、卤素 (特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
R3代表–L-#1、-MOD或任选地取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷基，优
选–L-#1或C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个卤
素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-NH-
烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷基、
1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z基团取代，n代表0、
1或2，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1和Y2 彼此独立地代
3
表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-
3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH
(其中“烷基”优选地代表C1-10-烷基)；
R5代表H、NH2、NO2、卤素 (特别是F、Cl、Br)、-CN、CF3、-OCF3、-CH2F、-CH2F、SH或-(CH2)0-
3Z，其中Z代表-H、-OY3、-SY3、卤素、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基、NO2、NH2、COOH或卤素(特别是F、Cl、Br)，
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯基、(任选地氟代的)C2-10-
炔基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或–(CH2)0-2-(HZ2)，其中HZ2代表具有最多2个选自N、O和
S的杂原子的4-至7-元杂环，其中这些基团的每个可以被–OH、CO2H或NH2取代；
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
其中取代基R1、R3或R4之一代表或(在R8的情况下)含有–L-#1，
L代表接头且#1代表与所述结合剂或其衍生物的键，
其中–MOD代表–(NR10)n-(G1)o-G2-G3，其中
R10代表H或C1-C3-烷基；
10
G1代表–NHCO-或-CONH-(其中，如果G1代表–NHCO-，则R 不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链和/或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、
y y y y y y y y y y
SO2、-NR -、-NRCO-、CONR-、-NRNR -、-SO2NR NR-、-CONRNR-(其中R代表H、苯基、C1-C10-
烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-或-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个
中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-
CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，G3代表-H或-COOH，且其中基团–MOD优选地具有至少一
个基团-COOH；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
[0009] 根据本发明的缀合物可具有化学不稳定接头、酶不稳定接头或稳定接头。特别优选的是稳定接头和可被蛋白酶裂解的接头。
[0010] 本发明还提供制备根据本发明的缀合物的方法以及用于该制备的前体和中间体。
[0011] 根据本发明的缀合物的制备通常包括下列步骤：制备任选带有保护基并具有能够偶联至所述抗体的反应性基团的接头前体；
所述接头前体缀合至式(I)的KSP抑制剂的任选带有保护基的衍生物(其中在这些式中
还没有与接头的键)，由此产生任选带有保护基的反应性KSP抑制剂/接头缀合物；
除去所述KSP抑制剂/接头缀合物中任选存在的保护基，和
所述抗体缀合至所述KSP抑制剂/接头缀合物，由此产生根据本发明的抗体/KSP抑制剂
缀合物。
所述接头前体缀合至式(I)的KSP抑制剂的任选带有保护基的衍生物(其中在这些式中
还没有与接头的键)，由此产生任选带有保护基的反应性KSP抑制剂/接头缀合物；
除去所述KSP抑制剂/接头缀合物中任选存在的保护基，和
所述抗体缀合至所述KSP抑制剂/接头缀合物，由此产生根据本发明的抗体/KSP抑制剂
缀合物。
[0012] 也可以在构建任选受保护的KSP抑制剂/接头前体缀合物之后进行反应性基团的连接。
[0013] 根据接头，琥珀酰亚胺连接的ADC在缀合后可根据方案26转化成具有有利的稳定性状况的开链琥珀酰胺。
[0014] 如上所示，可通过式(I)中的R1、R3或R4处的氢原子被接头替代使接头前体缀合至低分子量KSP抑制剂。在缀合前的合成步骤中，任选存在的官能团也可能以受保护形式存
在。在缀合步骤前，通过肽化学的已知方法除去这些保护基。该缀合可通过如实施例中的方
案20至31中以示例性方式显示的各种途径来化学进行。特别地，可以任选改性用于缀合至
接头的低分子量KSP抑制剂，例如通过引入保护基或离去基以使替代变容易。
在。在缀合步骤前，通过肽化学的已知方法除去这些保护基。该缀合可通过如实施例中的方
案20至31中以示例性方式显示的各种途径来化学进行。特别地，可以任选改性用于缀合至
接头的低分子量KSP抑制剂，例如通过引入保护基或离去基以使替代变容易。
[0015] 特别地，本发明提供缀合至抗B7H3抗体的新型低分子量KSP抑制剂。这些KSP抑制剂或它们的抗体缀合物具有下列通式(II)：
其中
R1代表H、–L-BINDER、–MOD或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤素、-CO-
NY1Y2或-CO-OY3，
其中
Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3 Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
(CH2W)Z’，
Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，
Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH；
W代表H或OH，
Y4代表任选地被-NH-C(O)-NH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
2 4 5
R代表H、-MOD、-C(=O)-CHY-NHY或-(CH2)0-3Z，
或
R2和R4一起代表–CH2-CHR11-或-CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，
其中
11
R 代表-H、-NH2、-SO3H、-COOH、-SH、卤素 (特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、
C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；
Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、
SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
R4代表H、-L-BINDER、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，R4’是C1-10-
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可被-NH2、-NH-烷基、-N(烷
基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R4’’(其中x是0或1且v是1至10的
数值，且R4’’是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)，其中在裂解后存在伯胺基团(对应于R4 = H)；
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
2 4 11 11 11
或R 和R 一起代表–CH2-CHR -或-CHR -CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R 代表H、NH2、
SO3H、COOH、SH、卤素 (特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；
A代表-C(=O)-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-S(=O)2-NH或-CNNH2-；
3
R 代表–L-BINDER、-MOD或任选地取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷
基，优选–L-BINDER或C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具
有1-3个卤素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-
O-CO-NH-烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-
NH-烷基、1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z基团取
代，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-
3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH
(其中“烷基”优选地代表C1-10-烷基)；
n代表0、1或2，
R5代表H、NH2、NO2、卤素(特别是F、Cl、Br)、-CN、CF3、-OCF3、-CH2F、-CH2F、SH或-(CH2)0-
3Z，其中Z代表-H、-OY3、-SY3、卤素、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯基、(任选地氟代的)C2-10-
炔基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或–(CH2)0-2-(HZ2)，其中HZ2代表具有最多2个选自N、O和
S的杂原子的4-至7-元杂环(优选氧杂环丁烷)，其中这些基团的每个可以被–OH、CO2H或NH2
取代；
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
其中L代表接头且BINDER代表去糖基化抗B7H3抗体，其中所述结合剂可任选地连接至
多个活性物质分子，
其中R1、R3和R4中的一个代表表示-L-结合剂；
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基、NO2、NH2、COOH或卤素(特别是F、Cl、Br)，
其中–MOD代表–(NR10)n-(G1)o-G2-G3，其中
R10代表H或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或-CONH-(其中，如果G1代表–NHCO-，则R10不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链和/或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、
SO2、-NRy-、-NRyCO-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-、-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个
中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-
CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，G3代表-H或-COOH，其中基团–MOD优选地具有至少一个
基团-COOH；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
附图说明
其中
R1代表H、–L-BINDER、–MOD或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤素、-CO-
NY1Y2或-CO-OY3，
其中
Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3 Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
(CH2W)Z’，
Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，
Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH；
W代表H或OH，
Y4代表任选地被-NH-C(O)-NH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
2 4 5
R代表H、-MOD、-C(=O)-CHY-NHY或-(CH2)0-3Z，
或
R2和R4一起代表–CH2-CHR11-或-CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，
其中
11
R 代表-H、-NH2、-SO3H、-COOH、-SH、卤素 (特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、
C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；
Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、
SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
R4代表H、-L-BINDER、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，R4’是C1-10-
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可被-NH2、-NH-烷基、-N(烷
基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R4’’(其中x是0或1且v是1至10的
数值，且R4’’是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)，其中在裂解后存在伯胺基团(对应于R4 = H)；
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
2 4 11 11 11
或R 和R 一起代表–CH2-CHR -或-CHR -CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R 代表H、NH2、
SO3H、COOH、SH、卤素 (特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；
A代表-C(=O)-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-S(=O)2-NH或-CNNH2-；
3
R 代表–L-BINDER、-MOD或任选地取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷
基，优选–L-BINDER或C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具
有1-3个卤素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-
O-CO-NH-烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-
NH-烷基、1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z基团取
代，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-
3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH
(其中“烷基”优选地代表C1-10-烷基)；
n代表0、1或2，
R5代表H、NH2、NO2、卤素(特别是F、Cl、Br)、-CN、CF3、-OCF3、-CH2F、-CH2F、SH或-(CH2)0-
3Z，其中Z代表-H、-OY3、-SY3、卤素、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯基、(任选地氟代的)C2-10-
炔基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或–(CH2)0-2-(HZ2)，其中HZ2代表具有最多2个选自N、O和
S的杂原子的4-至7-元杂环(优选氧杂环丁烷)，其中这些基团的每个可以被–OH、CO2H或NH2
取代；
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
其中L代表接头且BINDER代表去糖基化抗B7H3抗体，其中所述结合剂可任选地连接至
多个活性物质分子，
其中R1、R3和R4中的一个代表表示-L-结合剂；
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基、NO2、NH2、COOH或卤素(特别是F、Cl、Br)，
其中–MOD代表–(NR10)n-(G1)o-G2-G3，其中
R10代表H或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或-CONH-(其中，如果G1代表–NHCO-，则R10不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链和/或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、
SO2、-NRy-、-NRyCO-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-、-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个
中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-
CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，G3代表-H或-COOH，其中基团–MOD优选地具有至少一个
基团-COOH；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
附图说明
[0016] 图1：人肾癌细胞系A498中特异性B7H3抗体TPP5706的内化行为。
[0017] 显示经24小时的荧光标记的B7H3抗体的内化的动力学进展。为了检测靶标非依赖性内化，平行使用荧光标记的同种型对照。详细实验条件描述于C-2b下(x-轴：时间，以小时
计；y-轴：每个细胞的颗粒数目)。
计；y-轴：每个细胞的颗粒数目)。
[0019] 发明详述本发明提供抗B7H3抗体例如TPP-5706和TPP-5706的去糖基化和/或人源化变体与一个
或多个活性物质分子的缀合物，其中该活性物质分子是经接头L连接至抗体的纺锤体驱动
蛋白抑制剂(KSP抑制剂)。
或多个活性物质分子的缀合物，其中该活性物质分子是经接头L连接至抗体的纺锤体驱动
蛋白抑制剂(KSP抑制剂)。
[0020] 根据本发明的缀合物可由下列通式表示其中BINDER代表抗B7H3抗体例如TPP-5706和TPP-5706的去糖基化和/或人源化变体，L
代表接头，KSP代表KSP抑制剂且n代表1至50、优选1.2至20且特别优选2至8的数值。在此，n
是每个BINDER的KSP抑制剂/接头缀合物数目的平均值。优选地，KSP-L具有上文所示的式
(I)。另外，接头优选连接至抗体的不同氨基酸。特别优选为结合结合剂的不同半胱氨酸残
基。该抗体优选为去糖基化的人、人源化或嵌合单克隆抗B7H3抗体或其抗原结合片段。特别
优选为特异性结合人4Ig同种型的抗B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源化变
体例如TPP-6642和TPP-6850。
代表接头，KSP代表KSP抑制剂且n代表1至50、优选1.2至20且特别优选2至8的数值。在此，n
是每个BINDER的KSP抑制剂/接头缀合物数目的平均值。优选地，KSP-L具有上文所示的式
(I)。另外，接头优选连接至抗体的不同氨基酸。特别优选为结合结合剂的不同半胱氨酸残
基。该抗体优选为去糖基化的人、人源化或嵌合单克隆抗B7H3抗体或其抗原结合片段。特别
优选为特异性结合人4Ig同种型的抗B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源化变
体例如TPP-6642和TPP-6850。
[0021] 下面描述可根据本发明使用的抗体、可根据本发明使用的KSP抑制剂和可根据本发明使用的接头，它们可以无限制地组合使用。特别地，在每种情况下被表示为优选或特别
优选的结合剂可以与在每种情况下被表示为优选或特别优选的KSP抑制剂组合使用，任选
与在每种情况下被表示为优选或特别优选的接头组合使用。
优选的结合剂可以与在每种情况下被表示为优选或特别优选的KSP抑制剂组合使用，任选
与在每种情况下被表示为优选或特别优选的接头组合使用。
[0022] KSP抑制剂和它们的结合剂缀合物定义
术语“取代的”表示在指定原子或指定基团上的一个或多个氢被来自所指定的基团的
选择所替代，条件是在本情况下没有超过指定原子的正常价数。允许取代基和/或变量的组
合。
术语“取代的”表示在指定原子或指定基团上的一个或多个氢被来自所指定的基团的
选择所替代，条件是在本情况下没有超过指定原子的正常价数。允许取代基和/或变量的组
合。
[0023] 术语“任选地取代的”表示取代基的数目可等于零或不同于零。除非另有说明，否则任选地取代的基团可被如在任意可用的碳或氮或硫原子上的氢原子被非氢取代基替代
可容许那样多的任选的取代基取代。通常，任选的取代基(如果存在)的数目可以是1、2、3、4
或5，特别是1、2或3。
可容许那样多的任选的取代基取代。通常，任选的取代基(如果存在)的数目可以是1、2、3、4
或5，特别是1、2或3。
[0024] 例如，如此处所使用，例如在本发明的通式的化合物的取代基的定义中，表述“单或多/一次或多次”表示“1、2、3、4或5，优选1、2、3或4，特别优选1、2或3，尤其优选1或2”。
[0025] 当根据本发明的化合物中的基团被取代时，除非另外说明，否则这些基团可被单或多取代。在本发明的保护范围内，所有的多次出现的基团的定义彼此独立。优选为被一
个、二个或三个相同或不同的取代基取代。被一个取代基取代是特别优选的。
个、二个或三个相同或不同的取代基取代。被一个取代基取代是特别优选的。
[0026] 烷基烷基是具有1至10个碳原子(C1-C10-烷基)、通常1至6个碳原子(C1-C6-烷基)、优选1至4
个碳原子(C1-C4-烷基)且特别优选1至3个碳原子(C1-C3-烷基)的直链或支化的饱和单价烃
基团。
个碳原子(C1-C4-烷基)且特别优选1至3个碳原子(C1-C3-烷基)的直链或支化的饱和单价烃
基团。
[0027] 优选的实例包括：甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁
基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲
基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基
丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基和1,2-二甲基丁基。
基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲
基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基
丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基和1,2-二甲基丁基。
[0028] 特别优选甲基、乙基、丙基、异丙基和叔丁基。
[0029] 杂烷基杂烷基是具有1至10个碳原子的直链和/或支化的烃链，其可被基团-O-、-S-、-C(=
O)-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-NRy-、-NRyC(=O)-、-C(=O)-NRy-、-NRyNRy-、-S(=O)2-NRyNRy-、-C(=O)-NRyNRy-、-CRx=N-O-中的一个或多个中断一次或多次，且其中包括侧链(如果存在)的烃
链可被–NH-C(=O)-NH2、-C(=O)-OH、-OH、-NH2、-NH-C(=NNH2)-、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，此处，Ry在每种情况下是-H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自又可
被–NH-C(=O)-NH2、-C(=O)-OH、-OH、-NH2、-NH-C(=NNH2)、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
O)-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-NRy-、-NRyC(=O)-、-C(=O)-NRy-、-NRyNRy-、-S(=O)2-NRyNRy-、-C(=O)-NRyNRy-、-CRx=N-O-中的一个或多个中断一次或多次，且其中包括侧链(如果存在)的烃
链可被–NH-C(=O)-NH2、-C(=O)-OH、-OH、-NH2、-NH-C(=NNH2)-、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，此处，Ry在每种情况下是-H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自又可
被–NH-C(=O)-NH2、-C(=O)-OH、-OH、-NH2、-NH-C(=NNH2)、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
[0030] 在此，Rx是-H、C1-C3-烷基或苯基。
[0031] 烯基烯基是具有一个或两个双键和2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子(C2-C10-烯基)、特别是2
或3个碳原子(C2-C3- 烯基)的直链或支化的单价烃链，其中应理解，如果烯基包含多于一个
双键，则这些双键可与彼此分隔或与彼此共轭。烯基是例如乙烯基(或乙烯基)、丙-2-烯-1-
基(或“烯丙基”)、丙-1-烯-1-基、丁-3-烯基、丁-2-烯基、丁-1-烯基、戊-4-烯基、戊-3-烯
基、戊-2-烯基、戊-1-烯基、己-5-烯基、己-4-烯基、己-3-烯基、己-2-烯基、己-1-烯基、丙-
1-烯-2-基(或“异丙烯基”)、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、1-甲
基丙-1-烯基、3-甲基丁-3-烯基、2-甲基丁-3-烯基、1-甲基丁-3-烯基、3-甲基丁-2-烯基、
2-甲基丁-2-烯基、1-甲基丁-2-烯基、3-甲基丁-1-烯基、2-甲基丁-1-烯基、1-甲基丁-1-烯
基、1-,1-二甲基丙-2-烯基、1-乙基丙-1-烯基、1-丙基乙烯基、1-异丙基乙烯基、4-甲基戊-
4-烯基、3-甲基戊-4-烯基、2-甲基戊-4-烯基、1-甲基戊-4-烯基、4-甲基戊-3-烯基、3-甲基
戊-3-烯基、2-甲基戊-3-烯基、1-甲基戊-3-烯基、4-甲基戊-2-烯基、3-甲基戊-2-烯基、2-
甲基戊-2-烯基、1-甲基戊-2-烯基、4-甲基戊-1-烯基、3-甲基戊-1-烯基、2-甲基戊-1-烯
基、1-甲基戊-1-烯基、3-乙基丁-3-烯基、2-乙基丁-3-烯基、1-乙基丁-3-烯基、3-乙基丁-
2-烯基、2-乙基丁-2-烯基、1-乙基丁-2-烯基、3-乙基丁-1-烯基、2-乙基丁-1-烯基、1-乙基
丁-1-烯基、2-丙基丙-2-烯基、1-丙基丙-2-烯基、2-异丙基丙-2-烯基、1-异丙基丙-2-烯
基、2-丙基丙-1-烯基、1-丙基丙-1-烯基、2-异丙基丙-1-烯基、1-异丙基丙-1-烯基、3,3-二
甲基丙-1-烯基、1-(1,1-二甲基乙基)乙烯基、丁-1,3-二烯基、戊-1,4-二烯基或己-1-5-二
烯基。特别地，所述基团是乙烯基或烯丙基。
或3个碳原子(C2-C3- 烯基)的直链或支化的单价烃链，其中应理解，如果烯基包含多于一个
双键，则这些双键可与彼此分隔或与彼此共轭。烯基是例如乙烯基(或乙烯基)、丙-2-烯-1-
基(或“烯丙基”)、丙-1-烯-1-基、丁-3-烯基、丁-2-烯基、丁-1-烯基、戊-4-烯基、戊-3-烯
基、戊-2-烯基、戊-1-烯基、己-5-烯基、己-4-烯基、己-3-烯基、己-2-烯基、己-1-烯基、丙-
1-烯-2-基(或“异丙烯基”)、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、1-甲
基丙-1-烯基、3-甲基丁-3-烯基、2-甲基丁-3-烯基、1-甲基丁-3-烯基、3-甲基丁-2-烯基、
2-甲基丁-2-烯基、1-甲基丁-2-烯基、3-甲基丁-1-烯基、2-甲基丁-1-烯基、1-甲基丁-1-烯
基、1-,1-二甲基丙-2-烯基、1-乙基丙-1-烯基、1-丙基乙烯基、1-异丙基乙烯基、4-甲基戊-
4-烯基、3-甲基戊-4-烯基、2-甲基戊-4-烯基、1-甲基戊-4-烯基、4-甲基戊-3-烯基、3-甲基
戊-3-烯基、2-甲基戊-3-烯基、1-甲基戊-3-烯基、4-甲基戊-2-烯基、3-甲基戊-2-烯基、2-
甲基戊-2-烯基、1-甲基戊-2-烯基、4-甲基戊-1-烯基、3-甲基戊-1-烯基、2-甲基戊-1-烯
基、1-甲基戊-1-烯基、3-乙基丁-3-烯基、2-乙基丁-3-烯基、1-乙基丁-3-烯基、3-乙基丁-
2-烯基、2-乙基丁-2-烯基、1-乙基丁-2-烯基、3-乙基丁-1-烯基、2-乙基丁-1-烯基、1-乙基
丁-1-烯基、2-丙基丙-2-烯基、1-丙基丙-2-烯基、2-异丙基丙-2-烯基、1-异丙基丙-2-烯
基、2-丙基丙-1-烯基、1-丙基丙-1-烯基、2-异丙基丙-1-烯基、1-异丙基丙-1-烯基、3,3-二
甲基丙-1-烯基、1-(1,1-二甲基乙基)乙烯基、丁-1,3-二烯基、戊-1,4-二烯基或己-1-5-二
烯基。特别地，所述基团是乙烯基或烯丙基。
[0032] 炔基炔基是具有三键且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子(C2-C10-炔基)、特别是2或3个
碳原子(C2-C3-炔基)的直链或支化的单价烃链。C2-C6-炔基是例如乙炔基、丙-1-炔基、丙-
2-炔基(或炔丙基)、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、戊-1-炔基、戊-2-炔基、戊-3-炔基、
戊-4-炔基、己-1-炔基、己-2-炔基、己-3-炔基、己-4-炔基、己-5-炔基、1-甲基丙-2-炔基、
2-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-2-炔基、3-甲基丁-1-炔基、1-乙基丙-2-炔
基、3-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-4-炔基、1-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-3-炔基、1-甲基戊-
3-炔基、4-甲基戊-2-炔基、1-甲基戊-2-炔基、4-甲基戊-1-炔基、3-甲基戊-1-炔基、2-乙基
丁-3-炔基、1-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-2-炔基、1-丙基丙-2-炔基、1-异丙基丙-2-炔基、
2,2-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-2-炔基或3,3-二甲基丁-1-
炔基。特别地，所述炔基是乙炔基、丙-1-炔基或丙-2-炔基。
碳原子(C2-C3-炔基)的直链或支化的单价烃链。C2-C6-炔基是例如乙炔基、丙-1-炔基、丙-
2-炔基(或炔丙基)、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、戊-1-炔基、戊-2-炔基、戊-3-炔基、
戊-4-炔基、己-1-炔基、己-2-炔基、己-3-炔基、己-4-炔基、己-5-炔基、1-甲基丙-2-炔基、
2-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-2-炔基、3-甲基丁-1-炔基、1-乙基丙-2-炔
基、3-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-4-炔基、1-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-3-炔基、1-甲基戊-
3-炔基、4-甲基戊-2-炔基、1-甲基戊-2-炔基、4-甲基戊-1-炔基、3-甲基戊-1-炔基、2-乙基
丁-3-炔基、1-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-2-炔基、1-丙基丙-2-炔基、1-异丙基丙-2-炔基、
2,2-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-2-炔基或3,3-二甲基丁-1-
炔基。特别地，所述炔基是乙炔基、丙-1-炔基或丙-2-炔基。
[0033] 环烷基环烷基是具有3-12个碳原子的饱和单价单环或双环烃基团(C3-C12-环烷基)。
[0034] 此处，单环烃基团是具有通常3至10 (C3-C10-环烷基)、优选3至8 (C3-C8-环烷基)且特别优选3至7 (C3-C7-环烷基)个碳原子的单价烃基团。
[0035] 单环烃基团的优选实例包括：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
[0036] 特别优选环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
[0037] 此处，双环烃基团是具有通常3至12个碳原子的烃基团(C3-C12-环烷基)，其中此处应理解两个饱和环体系的稠合，所述两个环体系一起共享两个直接相邻的原子。双环烃基
团的优选实例包括：双环[2.2.0]己基、双环[3.3.0]辛基、双环[4.4.0]癸基、双环[5.4.0]
十一烷基、双环[3.2.0]庚基、双环[4.2.0]辛基、双环[5.2.0]壬基、双环[6.2.0]癸基、双环
[4.3.0]壬基、双环[5.3.0]癸基、双环[6.3.0]十一烷基和双环[5.4.0]十一烷基。
团的优选实例包括：双环[2.2.0]己基、双环[3.3.0]辛基、双环[4.4.0]癸基、双环[5.4.0]
十一烷基、双环[3.2.0]庚基、双环[4.2.0]辛基、双环[5.2.0]壬基、双环[6.2.0]癸基、双环
[4.3.0]壬基、双环[5.3.0]癸基、双环[6.3.0]十一烷基和双环[5.4.0]十一烷基。
[0038] 杂环烷基杂环烷基是具有一、二、三或四个可相同或不同的杂原子的非芳族单环或双环体系。杂
原子可以是氮原子、氧原子或硫原子。
原子可以是氮原子、氧原子或硫原子。
[0039] 根据本发明的单环环体系可具有3至8个、优选4至7个、特别优选5或6个环原子。
[0040] 具有3个环原子的杂环烷基的优选实例包括：氮杂环丙烷基。
[0041] 具有4个环原子的杂环烷基的优选实例包括：氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基。
[0042] 具有5个环原子的杂环烷基的优选实例包括：吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基、二氧杂环戊烷基和四氢呋喃基。
[0043] 具有6个环原子的杂环烷基的优选实例包括：哌啶基、哌嗪基、吗啉基、二氧杂环己烷基、四氢吡喃基和硫代吗啉基。
[0044] 具有7个环原子的杂环烷基的优选实例包括：氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、1,3-二氮杂环庚烷基、1,4-二氮杂环庚烷基。
[0045] 具有8个环原子的杂环烷基的优选实例包括：氧杂环辛烷基、氮杂环辛烷基。
[0046] 单环杂环烷基优选为具有最多两个选自O、N和S的杂原子的4-至7-元饱和杂环基。
[0047] 特别优选吗啉基、哌啶基、吡咯烷基和四氢呋喃基。
[0048] 具有一、二、三或四个可相同或不同的杂原子的双环环体系根据本发明可具有6至12个、优选6至10个环原子，其中一、二、三或四个碳原子可替换成选自O、N和S的相同或不同
的杂原子。
的杂原子。
[0049] 实例包括：氮杂双环[3.3.0]辛基、氮杂双环[4.3.0]壬基、二氮杂双环[4.3.0]壬基、氧杂氮杂双环[4.3.0]壬基、硫杂氮杂双环[4.3.0]壬基或氮杂双环[4.4.0]癸基以及衍
生自根据定义的另外可能组合的基团。
生自根据定义的另外可能组合的基团。
[0050] 特别优选全氢环戊二烯并[c]吡咯基、全氢呋喃并[3,2-c]吡啶基、全氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基、全氢吡咯并[3,4-c]吡咯基和3,4-亚甲基二氧基苯基。
[0052] C6-C10-芳烷基本发明范围内的C6-10-芳烷基是C1-C4-烷基连接的单环芳族芳基，例如苯基。
[0053] C6-10-芳烷基的一个实例是苄基。
[0054] 杂芳基杂芳基表示具有5、6、8、9、10、11、12、13或14个环原子(“5-至14-元杂芳基”基团)，特别
是5、6、9或10个环原子的单价单环、双环或三环芳环体系，其包含至少一个环杂原子和任选
地一个、两个或三个选自N、O和S的另外环杂原子且经由环碳原子或任选地(如果价数允许)
经由环氮原子连接。
是5、6、9或10个环原子的单价单环、双环或三环芳环体系，其包含至少一个环杂原子和任选
地一个、两个或三个选自N、O和S的另外环杂原子且经由环碳原子或任选地(如果价数允许)
经由环氮原子连接。
[0055] 杂芳基可以是5-元杂芳基，诸如噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基或四唑基；或6-元杂芳基诸如吡
啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基；或三环杂芳基诸如咔唑基、吖啶基或吩嗪基；或9-
元杂芳基诸如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑
基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基、吲哚嗪基或嘌呤基；或10-元杂芳基诸如喹啉
基、喹唑啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹喔啉基或喋啶基。
啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基；或三环杂芳基诸如咔唑基、吖啶基或吩嗪基；或9-
元杂芳基诸如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑
基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基、吲哚嗪基或嘌呤基；或10-元杂芳基诸如喹啉
基、喹唑啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹喔啉基或喋啶基。
[0056] 一般而言，且如果未另外陈述，则杂芳基包括其所有可能的异构体形式，例如关于与分子其余部分的连接点的互变异构体和位置异构体。因此，作为说明性非排他性实例，术
语吡啶基涵盖吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4-基；或术语噻吩基涵盖噻吩-2-基和噻吩-3-
基。
语吡啶基涵盖吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4-基；或术语噻吩基涵盖噻吩-2-基和噻吩-3-
基。
[0057] C5-C10-杂芳基本发明范围内的C5-10-杂芳基是具有一、二、三或四个可相同或不同的杂原子的单环或
双环芳环体系。杂原子可以是：N、O、S、S(=O)和/或S(=O)2。键价可位于任意芳族碳原子或位
于氮原子。
双环芳环体系。杂原子可以是：N、O、S、S(=O)和/或S(=O)2。键价可位于任意芳族碳原子或位
于氮原子。
[0058] 根据本发明的单环杂芳基具有5或6个环原子。优选为具有一个或两个杂原子的那些杂芳基。在此特别优选一个或两个氮原子。
[0059] 具有5个环原子的杂芳基包括例如以下环：噻吩基、噻唑基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑
基、三唑基、四唑基和噻二唑基。
基、三唑基、四唑基和噻二唑基。
[0060] 具有6个环原子的杂芳基包括例如以下环：吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基和三嗪基。
[0061] 根据本发明的单环杂芳基具有9或10个环原子。
[0062] 具有9个环原子的杂芳基包括例如以下环：苯酞基、硫代苯酞基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩
基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、吖辛因基、吲哚嗪基、嘌呤基、二氢吲哚基。
基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、吖辛因基、吲哚嗪基、嘌呤基、二氢吲哚基。
[0063] 具有10个环原子的杂芳基包括例如以下环：异喹啉基、喹啉基、喹嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基、酞嗪基、1,7-和1,8-萘啶基、
喋啶基、色满基。
喋啶基、色满基。
[0064] 杂烷氧基杂烷氧基是具有1至10个碳原子的直链和/或支化的烃链，其经由-O-连接至分子的其
余部分且可进一步被基团-O-、-S-、-C(=O)-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-NRy-、-NRyC(=O)-、-C(=
y y y y y y y x
O)-NR-、-NRNR -、-S(=O)2-NRNR -、-C(=O)-NRNR -、-CR =N-O-中的一个或多个中断一次
或多次，且其中包括侧链(如果存在)的烃链可被–NH-C(=O)-NH2、-C(=O)-OH、-OH、-NH2、-NH-
C(=NNH2)-、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
余部分且可进一步被基团-O-、-S-、-C(=O)-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-NRy-、-NRyC(=O)-、-C(=
y y y y y y y x
O)-NR-、-NRNR -、-S(=O)2-NRNR -、-C(=O)-NRNR -、-CR =N-O-中的一个或多个中断一次
或多次，且其中包括侧链(如果存在)的烃链可被–NH-C(=O)-NH2、-C(=O)-OH、-OH、-NH2、-NH-
C(=NNH2)-、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
[0065] 此处，Ry在每种情况下为-H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其又可被–NH-C(=O)-NH2、-C(=O)-OH、-OH、-NH2、-NH-C(=NNH2)-、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
[0066] 在此，Rx是-H、C1-C3-烷基或苯基。
[0067] 本发明范围内的卤素或卤素原子是氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)或碘(-I)。
[0068] 氟烷基、氟烯基和氟炔基表示该烷基、烯基和炔基可被氟单取代或多取代。
[0069] KSP抑制剂与抗体的缀合可通过如实施例中的方案20至31中以示例性方式显示的各种途径化学进行。特别地，可以任选改性用于缀合至接头的低分子量KSP抑制剂，例如通
过引入保护基或离去基以使替代变容易(使得在该反应中，所述离去基而非氢原子被接头
替代)。以该方式获得的KSP抑制剂-接头分子(其中该接头具有用于偶联至结合剂的反应性
基团)可然后与结合剂反应以产生根据本发明的结合剂缀合物。在实验部分中，通过大量实
施例以示例性方式例示该程序。
过引入保护基或离去基以使替代变容易(使得在该反应中，所述离去基而非氢原子被接头
替代)。以该方式获得的KSP抑制剂-接头分子(其中该接头具有用于偶联至结合剂的反应性
基团)可然后与结合剂反应以产生根据本发明的结合剂缀合物。在实验部分中，通过大量实
施例以示例性方式例示该程序。
[0070] 其它特别优选的化合物具有下式(I)或(Ia)：式(I)：
其中
R1代表H、–L-#1、–MOD或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤素、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
(CH2W)Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH，其中W代表H或OH，
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
R2代表H、-MOD、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
5 6 6
代的芳基或苄基，且Y代表H或–CO-CHY-NH2，其中Y代表直链或支化的C1-6-烷基；
R4代表H、–L-#1、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，R4’是C1-10-
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R4’’(其中x是0或1且v是1至20的数
4’’
值，且R 是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)；
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
或R2和R4一起代表–CH2-CHR11-或-CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11代表H、NH2、
SO3H、COOH、SH、卤素 (特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
R3代表–L-#1、-MOD或任选地取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷基，优
选C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个卤素原子)、1-
3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-NH-烷基、1-3个-
NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷基、1-3个-NH-烷
基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH((CH2CH2O)1-20H)基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z
基团取代，其中n代表0、1或2，Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1
2 3
和Y 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y 代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH (其中“烷基”优选是C1-10-烷基)；
R5代表H、-MOD、NH2、NO2、卤素 (特别是F、Cl、Br)、-CN、CF3、-OCF3、-CH2F、-CH2F、SH或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-OY3、-SY3、卤素、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
1 2 3
其中Y和Y 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基、NO2、NH2、COOH或卤素(特别是F、Cl、Br)，
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯基、(任选地氟代的)C2-10-
炔基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或–(CH2)0-2-(HZ2)，其中HZ2代表具有最多2个选自N、O和
S的杂原子的4-至7-元杂环(优选氧杂环丁烷)，其中这些基团的每个可以被–OH、CO2H或NH2
取代；
其中取代基R1、R3和R4之一代表–L-#1，
L代表接头且#1代表与所述抗体的键，
9
R代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
其中–MOD代表–(NR10)n-(G1)o-G2-G3，其中
R10代表H或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-、-CONH-或 (其中，如果G1代表–NHCO-或 ，
10
则R 不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链和/或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、
y y y y y y y y y y
SO2、-NR -、-NRCO-、CONR-、-NRNR -、-SO2NR NR-、-CONRNR-(其中R代表H、苯基、C1-C10-
烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-或-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个
中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-
CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，其中G3代表-H或-COOH，且其中基团–MOD优选地具有至
少一个基团-COOH；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
其中
R1代表H、–L-#1、–MOD或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤素、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
(CH2W)Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH，其中W代表H或OH，
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
R2代表H、-MOD、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
5 6 6
代的芳基或苄基，且Y代表H或–CO-CHY-NH2，其中Y代表直链或支化的C1-6-烷基；
R4代表H、–L-#1、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，R4’是C1-10-
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R4’’(其中x是0或1且v是1至20的数
4’’
值，且R 是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)；
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
或R2和R4一起代表–CH2-CHR11-或-CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11代表H、NH2、
SO3H、COOH、SH、卤素 (特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
R3代表–L-#1、-MOD或任选地取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷基，优
选C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个卤素原子)、1-
3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-NH-烷基、1-3个-
NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷基、1-3个-NH-烷
基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH((CH2CH2O)1-20H)基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z
基团取代，其中n代表0、1或2，Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1
2 3
和Y 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y 代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH (其中“烷基”优选是C1-10-烷基)；
R5代表H、-MOD、NH2、NO2、卤素 (特别是F、Cl、Br)、-CN、CF3、-OCF3、-CH2F、-CH2F、SH或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-OY3、-SY3、卤素、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
1 2 3
其中Y和Y 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基、NO2、NH2、COOH或卤素(特别是F、Cl、Br)，
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯基、(任选地氟代的)C2-10-
炔基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或–(CH2)0-2-(HZ2)，其中HZ2代表具有最多2个选自N、O和
S的杂原子的4-至7-元杂环(优选氧杂环丁烷)，其中这些基团的每个可以被–OH、CO2H或NH2
取代；
其中取代基R1、R3和R4之一代表–L-#1，
L代表接头且#1代表与所述抗体的键，
9
R代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
其中–MOD代表–(NR10)n-(G1)o-G2-G3，其中
R10代表H或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-、-CONH-或 (其中，如果G1代表–NHCO-或 ，
10
则R 不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链和/或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、
y y y y y y y y y y
SO2、-NR -、-NRCO-、CONR-、-NRNR -、-SO2NR NR-、-CONRNR-(其中R代表H、苯基、C1-C10-
烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-或-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个
中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-
CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，其中G3代表-H或-COOH，且其中基团–MOD优选地具有至
少一个基团-COOH；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
[0071] 在式(I)的一个优选实施方案中，取代基R1或R3之一代表–L-#1。在该实施方案中，如果R4代表H或-SGlys-(CO)0-1-R4’，则其尤其优选，其中SGlys和R4’具有与上述相同的含义。在式(I)的另一个优选实施方案中，取代基R4代表–L-#1，其中该接头是可在结合R4的氮原子处
裂解的接头，以使得裂解之后存在伯胺基团(对应于R4 = H)。下面详细地描述相应的可裂解
基团。
裂解的接头，以使得裂解之后存在伯胺基团(对应于R4 = H)。下面详细地描述相应的可裂解
基团。
[0072] 如果R1不代表H，则R1所连接的碳原子是可以L和/或D构型、优选以L构型存在的立构中心。
[0073] 如果R2不代表H，则R2所连接的碳原子是可以L和/或D构型存在的立构中心。
[0074] 式(Ia)：其中
R1代表H、–L-#1或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤素、-CO-NY1Y2或-CO-
OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
(CH2W)Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH，其中W代表H或OH；
4
其中Y代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基。
R1代表H、–L-#1或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤素、-CO-NY1Y2或-CO-
OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
(CH2W)Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH，其中W代表H或OH；
4
其中Y代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基。
[0075] R2和R4 彼此独立地代表H、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，其中SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，R4’是C1-10-
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可各自被-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON
4’’
(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R (其中x是0或1且v是1至20
的数值，且R4’’是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)；
或R2和R4一起代表–CH2-CHR11-或-CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11代表H、NH2、
SO3H、COOH、SH、卤素 (特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；或R2代表H、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z且R4代表–L-#1，且其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4彼此独立地代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选
地被–NH2取代的芳基或苄基，其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，
或代表任选地被–NH2取代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化
的C1-6-烷基；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH；
R3代表任选地取代的烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷基，优选–L-#1或C1-10-烷基、
C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被
1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个卤素原子)、1-3个O-烷基、
1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-NH-烷基、1-3个-NH-CO-烷
基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷基、1-3个-NH-烷基、1-3个-
N(烷基)2基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z基团取代，其中n代表0、1或2，Z代表-H、卤
素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH
(其中“烷基”优选地代表C1-10-烷基)；
R5代表H、F、NH2、NO2、卤素、SH或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基或卤素，
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或任选地取代的氧杂
环丁烷；且
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可各自被-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON
4’’
(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R (其中x是0或1且v是1至20
的数值，且R4’’是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)；
或R2和R4一起代表–CH2-CHR11-或-CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11代表H、NH2、
SO3H、COOH、SH、卤素 (特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；或R2代表H、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z且R4代表–L-#1，且其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4彼此独立地代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选
地被–NH2取代的芳基或苄基，其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，
或代表任选地被–NH2取代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化
的C1-6-烷基；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH；
R3代表任选地取代的烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷基，优选–L-#1或C1-10-烷基、
C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被
1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个卤素原子)、1-3个O-烷基、
1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-NH-烷基、1-3个-NH-CO-烷
基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷基、1-3个-NH-烷基、1-3个-
N(烷基)2基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z基团取代，其中n代表0、1或2，Z代表-H、卤
素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH
(其中“烷基”优选地代表C1-10-烷基)；
R5代表H、F、NH2、NO2、卤素、SH或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基或卤素，
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或任选地取代的氧杂
环丁烷；且
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
[0076] 通过取代R1、R3或R4的氢原子，可将式(I)或(Ia)的化合物(其中取代基R1、R3和R4无一代表-L-#1)以本领域普通技术人员已知的方式连接至接头。由此得到式(I)或(Ia)的缀
合物，其中取代基R1、R3或R4之一代表-L-#1，L代表接头且#1代表与抗体的键。如果根据式
(I)或(Ia)的KSP抑制剂与结合剂缀合，则取代基R1、R3或R4之一因此代表-L-#1，其中L代表
接头且#1代表与抗体的键。即，在缀合物的情况下，取代基R1、R3或R4之一代表-L-#1，其中-
L-#1代表与抗体的键。在式(I)或(Ia)的一个优选实施方案中，取代基R1或R3之一代表-L-#
1。在该实施方案中，如果R4代表H或-SGlys-(CO)0-1-R4’，则尤其优选，其中SGlys和R4’具有与上述相同的含义。在式(I)的另一个优选实施方案中，取代基R4代表-L-#1，其中接头是可在结
合R4的氮原子处裂解的接头，以使得裂解之后存在伯胺基团(对应于R4 = H)。相应的可裂解
基团详细描述如下。所述结合剂优选为人、人源化或嵌合单克隆抗体或其抗原结合片段。所
述抗体优选为去糖基化的人、人源化或嵌合单克隆抗B7H3抗体。特别优选为特异性结合人
4Ig同种型的抗B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源化变体例如TPP-6642和
TPP-6850。
合物，其中取代基R1、R3或R4之一代表-L-#1，L代表接头且#1代表与抗体的键。如果根据式
(I)或(Ia)的KSP抑制剂与结合剂缀合，则取代基R1、R3或R4之一因此代表-L-#1，其中L代表
接头且#1代表与抗体的键。即，在缀合物的情况下，取代基R1、R3或R4之一代表-L-#1，其中-
L-#1代表与抗体的键。在式(I)或(Ia)的一个优选实施方案中，取代基R1或R3之一代表-L-#
1。在该实施方案中，如果R4代表H或-SGlys-(CO)0-1-R4’，则尤其优选，其中SGlys和R4’具有与上述相同的含义。在式(I)的另一个优选实施方案中，取代基R4代表-L-#1，其中接头是可在结
合R4的氮原子处裂解的接头，以使得裂解之后存在伯胺基团(对应于R4 = H)。相应的可裂解
基团详细描述如下。所述结合剂优选为人、人源化或嵌合单克隆抗体或其抗原结合片段。所
述抗体优选为去糖基化的人、人源化或嵌合单克隆抗B7H3抗体。特别优选为特异性结合人
4Ig同种型的抗B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源化变体例如TPP-6642和
TPP-6850。
[0077] 所述化合物中也可存在基团-L-#3，而非-L-#1，其中L代表接头且#3代表用于结合抗体的反应性基团。包含-L-#3的化合物是与抗体反应的反应性化合物。#3优选为优选通过
蛋白中的半胱氨酸残基而与氨基或硫醇基发生反应以形成共价键的基团。蛋白中的半胱氨
酸残基可天然存在于蛋白中，可通过生物化学方法引入，或优选可通过预先还原该结合剂
的二硫化物来产生。
蛋白中的半胱氨酸残基而与氨基或硫醇基发生反应以形成共价键的基团。蛋白中的半胱氨
酸残基可天然存在于蛋白中，可通过生物化学方法引入，或优选可通过预先还原该结合剂
的二硫化物来产生。
[0078] 作为A，优选CO (羰基)。
[0079] 作为R1，优选–L-#1、H、-COOH、-CONHNH2、-(CH2)1-3NH2、-CONZ’’(CH2)1-3 NH2和–CONZ’’CH2COOH，其中Z’’代表H或NH2。
[0080] 作为R2和R4，优选H，或R2和R4一起代表-CH2-CHR11-或–CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11代表H。作为R4，还优选–L-#1，其中-L-#1是可裂解的接头，优选可通过酶在细胞
内裂解的接头。
内裂解的接头。
[0081] 作为R3，优选–L-#1或C1-10-烷基-，其可任选地被–OH、O-烷基、SH、S-烷基、O-CO-烷基、O-CO-NH-烷基、NH-CO-烷基、NH-CO-NH-烷基、S(O)n-烷基、SO2-NH-烷基、NH-烷基、N(烷基)2或NH2取代(其中烷基优选为C1-3-烷基)。
[0082] 作为R5，优选H或F。
[0083] 作为R6和R7，彼此独立地优选H、(任选地氟代的)C1-3-烷基、(任选地氟代的)C2-4-烯基、(任选地氟代的)C2-4-炔基、羟基或卤素。
[0084] 作为R8，优选支化C1-5-烷基，特别是式–C(CH3)2-(CH2)0-2–Ry的基团，其中Ry代表–H、–OH、CO2H或NH2或(任选地氟代的)C5-7-环烷基。特别优选为式–C(CH3)3的基团或环己基。
[0085] 作为R9，优选H或F。
[0086] 尤其优选为式(I)或(Ia)的化合物，其中A代表CO(羰基)；
R1代表H、–L-#1、-COOH、-CONHNH2、-(CH2)1-3NH2、-CONZ’’(CH2)1-3 NH2或–CONZ’’
CH2COOH，其中Z’’代表H或NH2；
R2和R4代表H，或R2和R4一起代表-CH2-CHR11-或–CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11
代表H；或R4代表–L-#1且R2代表H；
R3代表-L-#1或可被卤素(特别是F)或任选地氟代的C1-3-烷基单取代或多取代的苯基，
或代表可任选地被–OY4、-SY4、-O-CO-Y4、-O-CO-NH-Y4、NH-CO-Y4、-NH-CO-NH-Y4、S(O)n-Y4 (其中n代表0、1或2)、-SO2-NH-Y4、NH-Y4或N(Y4)2取代的任选地氟代的C1-10-烷基，其中Y4代
表H、苯基(任选地被卤素(特别是F)或任选地氟代的C1-3-烷基单取代或多取代)或烷基(其
中该烷基可被-OH、-COOH和/或-NHCO-C1-3-烷基取代且其中该烷基优选表示C1-3-烷基)；
其中特别优选地，R3可被–OH、O-烷基、SH、S-烷基、O-CO-烷基、O-CO-NH-烷基、NH-CO-烷
基、NH-CO-NH-烷基、S(O)n-烷基、SO2-NH-烷基、NH-烷基、N(烷基)2或NH2取代(其中烷基优选
意指C1-3-烷基)；其中n为0、1或2；
R5代表H或F；
R6和R7彼此独立地代表H、(任选地氟代的)C1-3-烷基、(任选地氟代的)C2-4-烯基、(任选
地氟代的)C2-4-炔基、羟基或卤素；
R8代表支化的C1-5-烷基或环己基；且
R9代表H或F。
R1代表H、–L-#1、-COOH、-CONHNH2、-(CH2)1-3NH2、-CONZ’’(CH2)1-3 NH2或–CONZ’’
CH2COOH，其中Z’’代表H或NH2；
R2和R4代表H，或R2和R4一起代表-CH2-CHR11-或–CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11
代表H；或R4代表–L-#1且R2代表H；
R3代表-L-#1或可被卤素(特别是F)或任选地氟代的C1-3-烷基单取代或多取代的苯基，
或代表可任选地被–OY4、-SY4、-O-CO-Y4、-O-CO-NH-Y4、NH-CO-Y4、-NH-CO-NH-Y4、S(O)n-Y4 (其中n代表0、1或2)、-SO2-NH-Y4、NH-Y4或N(Y4)2取代的任选地氟代的C1-10-烷基，其中Y4代
表H、苯基(任选地被卤素(特别是F)或任选地氟代的C1-3-烷基单取代或多取代)或烷基(其
中该烷基可被-OH、-COOH和/或-NHCO-C1-3-烷基取代且其中该烷基优选表示C1-3-烷基)；
其中特别优选地，R3可被–OH、O-烷基、SH、S-烷基、O-CO-烷基、O-CO-NH-烷基、NH-CO-烷
基、NH-CO-NH-烷基、S(O)n-烷基、SO2-NH-烷基、NH-烷基、N(烷基)2或NH2取代(其中烷基优选
意指C1-3-烷基)；其中n为0、1或2；
R5代表H或F；
R6和R7彼此独立地代表H、(任选地氟代的)C1-3-烷基、(任选地氟代的)C2-4-烯基、(任选
地氟代的)C2-4-炔基、羟基或卤素；
R8代表支化的C1-5-烷基或环己基；且
R9代表H或F。
[0087] 此外，优选的是(单独或组合)，1
R代表–L-#1、COOH或H，
R2和R4代表H，或R2和R4一起代表-CH2-CHR11-或–CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11
代表H，或R4代表–L-#1且R2代表H；
A代表CO，
3
R代表-(CH2)OH、-CH(CH3)OH、-CH2SCH2CH(COOH)NHCOCH3、-CH(CH3)OCH3、可被1-3个卤
素原子、1-3个氨基或1-3个烷基(其可任选地卤代)取代的苯基，或代表–L-#1，
R5代表F，
R6和R7彼此独立地代表H、C1-3-烷基或卤素；特别地，R6和R7代表F；
R8代表C1-4-烷基(优选叔丁基)或环己基；和/或
R9代表H。
R代表–L-#1、COOH或H，
R2和R4代表H，或R2和R4一起代表-CH2-CHR11-或–CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11
代表H，或R4代表–L-#1且R2代表H；
A代表CO，
3
R代表-(CH2)OH、-CH(CH3)OH、-CH2SCH2CH(COOH)NHCOCH3、-CH(CH3)OCH3、可被1-3个卤
素原子、1-3个氨基或1-3个烷基(其可任选地卤代)取代的苯基，或代表–L-#1，
R5代表F，
R6和R7彼此独立地代表H、C1-3-烷基或卤素；特别地，R6和R7代表F；
R8代表C1-4-烷基(优选叔丁基)或环己基；和/或
R9代表H。
[0088] 此外，根据本发明，优选的是R1代表–L-#1、COOH或H，
R2和R4代表H或R2和R4一起代表-CH2-CHR11-或–CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11代
表H，
A代表CO，
R3代表-(CH2)OH、-CH(CH3)OH、-CH2SCH2CH(COOH)NHCOCH3、-CH(CH3)OCH3、可被1-3个卤
素原子、1-3个氨基或1-3个烷基(其可任选地卤代)取代的苯基，或代表–L-#1，
R5代表H，
6 7 6 7
R和R彼此独立地代表H、C1-3-烷基或卤素；特别地，R和R代表F；
R8代表C1-4-烷基(优选叔丁基)；且
R9代表H。
R2和R4代表H或R2和R4一起代表-CH2-CHR11-或–CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11代
表H，
A代表CO，
R3代表-(CH2)OH、-CH(CH3)OH、-CH2SCH2CH(COOH)NHCOCH3、-CH(CH3)OCH3、可被1-3个卤
素原子、1-3个氨基或1-3个烷基(其可任选地卤代)取代的苯基，或代表–L-#1，
R5代表H，
6 7 6 7
R和R彼此独立地代表H、C1-3-烷基或卤素；特别地，R和R代表F；
R8代表C1-4-烷基(优选叔丁基)；且
R9代表H。
[0089] 其它特别优选的化合物具有以下式(II)或(IIa)：式(II)：
其中
R1代表H、–L-结合剂、–MOD或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤素、-CO-
NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
(CH2W)Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、-COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH，其中W代表H或OH，
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
R2代表H、-MOD、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链
或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其
中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基，
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R4代表H、-L-结合剂、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，R4’是C1-10-
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可被-NH2、-NH-烷基、-N(烷
基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R4’’(其中x是0或1且v是1至10的
4’’
数值，且R 是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)；
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
4
其中Y 代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
或R2和R4一起代表–CH2-CHR10-或-CHR10-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R10代表H、NH2、
SO3H、COOH、SH或OH；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
R3代表–L-结合剂、-MOD或任选地取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷
基，优选–L-BINDER或C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具
有1-3个卤素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-
O-CO-NH-烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-
NH-烷基、1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z基团取
代，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-
3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH
(其中“烷基”优选地代表C1-10-烷基)；
R5代表H、NH2、NO2、卤素(特别是F、Cl、Br)、-CN、CF3、-OCF3、-CH2F、-CH2F、SH或-(CH2)0-
3Z，其中Z代表-H、-OY3、-SY3、卤素、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R6和R7 彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基、NO2、NH2、COOH或卤素(特别是F、Cl、Br)，
8
R代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯基、(任选地氟代的)C2-10-
炔基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或–(CH2)0-2-(HZ2)，其中HZ2代表具有最多2个选自N、O和
S的杂原子的4-至7-元杂环，其中这些基团的每个可以被–OH、CO2H或NH2取代；
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
10
其中–MOD代表–(NR )n-(G1)o-G2-G3，其中
R10代表H或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或-CONH-(其中，如果G1代表–NHCO-，则R10不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链和/或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、
SO2、-NRy-、-NRyCO-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-或-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个
中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-
CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，其中基团–MOD优选地具有至少一个基团-COOH；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
其中
R1代表H、–L-结合剂、–MOD或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤素、-CO-
NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
(CH2W)Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、-COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH，其中W代表H或OH，
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
R2代表H、-MOD、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链
或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其
中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基，
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R4代表H、-L-结合剂、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，R4’是C1-10-
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可被-NH2、-NH-烷基、-N(烷
基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R4’’(其中x是0或1且v是1至10的
4’’
数值，且R 是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)；
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
4
其中Y 代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
或R2和R4一起代表–CH2-CHR10-或-CHR10-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R10代表H、NH2、
SO3H、COOH、SH或OH；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
R3代表–L-结合剂、-MOD或任选地取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷
基，优选–L-BINDER或C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具
有1-3个卤素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-
O-CO-NH-烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-
NH-烷基、1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z基团取
代，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-
3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH
(其中“烷基”优选地代表C1-10-烷基)；
R5代表H、NH2、NO2、卤素(特别是F、Cl、Br)、-CN、CF3、-OCF3、-CH2F、-CH2F、SH或-(CH2)0-
3Z，其中Z代表-H、-OY3、-SY3、卤素、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R6和R7 彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基、NO2、NH2、COOH或卤素(特别是F、Cl、Br)，
8
R代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯基、(任选地氟代的)C2-10-
炔基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或–(CH2)0-2-(HZ2)，其中HZ2代表具有最多2个选自N、O和
S的杂原子的4-至7-元杂环，其中这些基团的每个可以被–OH、CO2H或NH2取代；
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
10
其中–MOD代表–(NR )n-(G1)o-G2-G3，其中
R10代表H或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或-CONH-(其中，如果G1代表–NHCO-，则R10不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链和/或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、
SO2、-NRy-、-NRyCO-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-或-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个
中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-
CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，其中基团–MOD优选地具有至少一个基团-COOH；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
[0090] 在式(II)的KSP抑制剂的结合剂缀合物的情况下，R1、R3和R4的最多一个代表(代替上文给出的含义之一)可以代表-L-结合剂，其中L代表接头且BINDER代表抗体，其中所述抗
体可任选地连接至多个活性物质分子。
体可任选地连接至多个活性物质分子。
[0091] 式(IIa)：其中
1 3 3 3 1 2
R代表–L-BINDER、H或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY 、-OY、-SY 、卤素、-CO-NYY或-
CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’或-CH(CH2W)Z’，且Y3代表
H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-
CHY4)1-3COOH；其中W代表H或OH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
R2和R4 彼此独立地代表H、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z或R2和R4一起
代表–CH2-CHR11-或-CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，或R2代表H、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z
且R4代表–L-#1，其中R11代表H、NH2、SO3H、COOH、SH、卤素(特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；
其中SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，R4’是C1-10-
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可被-NH2、-NH-烷基、-N(烷
基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R4’’(其中x是0或1且v是1至10的
数值，且R4’’是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)；
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
5 6 6
代的芳基或苄基，且Y代表H或–CO-CHY-NH2，其中Y代表直链或支化的C1-6-烷基；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
R3代表–L-BINDER或任选地取代的烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷基，优选–L-
BINDER或C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个卤
素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-NH-
烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷基、
1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z基团取代，其中Z代
3 3 3 1 2 3 1 2
表-H、卤素、-OY 、-SY 、-NHY、-CO-NY Y或-CO-OY ，其中Y 和Y 彼此独立地代表H、NH2或-
(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH
(其中“烷基”优选地代表C1-10-烷基)；
R5代表H、F、NH2、NO2、卤素、SH或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中L代表接头且BINDER代表结合剂或其衍生物，其中所述结合剂可任选地连接至多
个活性物质分子，
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基或卤素，
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或任选地取代的氧杂
环丁烷；且
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
1 3 3 3 1 2
R代表–L-BINDER、H或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY 、-OY、-SY 、卤素、-CO-NYY或-
CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’或-CH(CH2W)Z’，且Y3代表
H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-
CHY4)1-3COOH；其中W代表H或OH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
R2和R4 彼此独立地代表H、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z或R2和R4一起
代表–CH2-CHR11-或-CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，或R2代表H、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z
且R4代表–L-#1，其中R11代表H、NH2、SO3H、COOH、SH、卤素(特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；
其中SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，R4’是C1-10-
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可被-NH2、-NH-烷基、-N(烷
基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R4’’(其中x是0或1且v是1至10的
数值，且R4’’是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)；
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
5 6 6
代的芳基或苄基，且Y代表H或–CO-CHY-NH2，其中Y代表直链或支化的C1-6-烷基；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
R3代表–L-BINDER或任选地取代的烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷基，优选–L-
BINDER或C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个卤
素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-NH-
烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷基、
1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z基团取代，其中Z代
3 3 3 1 2 3 1 2
表-H、卤素、-OY 、-SY 、-NHY、-CO-NY Y或-CO-OY ，其中Y 和Y 彼此独立地代表H、NH2或-
(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH
(其中“烷基”优选地代表C1-10-烷基)；
R5代表H、F、NH2、NO2、卤素、SH或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中L代表接头且BINDER代表结合剂或其衍生物，其中所述结合剂可任选地连接至多
个活性物质分子，
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基或卤素，
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或任选地取代的氧杂
环丁烷；且
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
[0092] 此外，根据本发明，优选为以下KSP抑制剂/抗体缀合物：式(IIb)：
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和R9具有与式(II)或(IIa)中相同的含义，A代表CO，B代表单
键、–O-CH2–或–CH2-O-且R20代表NH2、F、CF3或CH3且n代表0、1或2。
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和R9具有与式(II)或(IIa)中相同的含义，A代表CO，B代表单
键、–O-CH2–或–CH2-O-且R20代表NH2、F、CF3或CH3且n代表0、1或2。
[0093] 式(IIc)：其中A、R1、R3、R6、R7、R8和R9具有与式(II)或(IIa)中相同的含义，其中A优选代表CO且R3
代表–CH2OH、-CH2OCH3、CH(CH3)OH或CH(CH3)OCH3。
代表–CH2OH、-CH2OCH3、CH(CH3)OH或CH(CH3)OCH3。
[0094] 式(IId)：其中A、R3、R6、R7、R8和R9具有与式(II)或(IIa)中相同的含义，其中A优选代表CO且R3代
5 5 6 6
表–CH2-Sx-(CH2)0-4-CHY-COOH，其中x代表0或1和Y代表H或NHY，其中Y代表H或-COCH3。
5 5 6 6
表–CH2-Sx-(CH2)0-4-CHY-COOH，其中x代表0或1和Y代表H或NHY，其中Y代表H或-COCH3。
[0095] 式(IIe)：其中A、R2、R3、R4、R6、R7、R8和R9具有与式(II)或(IIa)中相同的含义，且R1代表-L–
BINDER。
BINDER。
[0096] 式(IIi)：其中A、R1、R2、R3、R6、R7、R8和R9具有与式(II)或(IIa)中相同的含义，且R4代表-L-
BINDER，优选可酶裂解的结合剂，以使得裂解后R4 =H。
BINDER，优选可酶裂解的结合剂，以使得裂解后R4 =H。
[0097] 式(IIj)：其中
R3代表–L-#1；
A代表CO；且
R6、R7、R8和R9具有与式(I)中相同的含义
式(IIk)：
其中
R1代表–L-#1；
A代表CO且R3代表–CH2OH；
R3、R6、R7、R8和R9具有与式(I)中相同的含义。
R3代表–L-#1；
A代表CO；且
R6、R7、R8和R9具有与式(I)中相同的含义
式(IIk)：
其中
R1代表–L-#1；
A代表CO且R3代表–CH2OH；
R3、R6、R7、R8和R9具有与式(I)中相同的含义。
[0098] 此外，优选为在式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIi)、(IIj)和(IIk)的化合物中(单独或组合)：
Z代表Cl或Br；
R1代表-(CH2)0-3Z，其中Z代表COOH或-CO-NY1Y2，其中Y2代表-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’且
Y1代表H、NH2或-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’；
Y1代表H，Y2代表-(CH2CH2O)3-CH2CH2Z’且Z’代表–COOH；
1 2 4
Y代表H，Y代表-CH2CH2Z’且Z’代表-(CONHCHY)2COOH；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’，Z’代表-(CONHCHY4)2COOH且一个Y4代表异丙基且另一个代
表–(CH2)3-NHCONH2；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’，Z’代表-(CONHCHY4)2COOH且一个Y4代表–CH3且另一个代表–
(CH2)3-NHCONH2；
Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基；
Y4的至少一个代表选自异丙基或–CH3；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’，Z’代表-CONHCHY4COOH且Y4代表任选地被–NH2取代的芳基或
苄基；
Y4代表氨基苄基；
R2代表–(CH2)0-3Z且Z代表–SY3；
R4代表-CO-CHY4-NHY5且Y5代表H；
R4代表-CO-CHY4-NHY5且Y5代表–CO-CHY6-NH2；
Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基。
Z代表Cl或Br；
R1代表-(CH2)0-3Z，其中Z代表COOH或-CO-NY1Y2，其中Y2代表-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’且
Y1代表H、NH2或-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’；
Y1代表H，Y2代表-(CH2CH2O)3-CH2CH2Z’且Z’代表–COOH；
1 2 4
Y代表H，Y代表-CH2CH2Z’且Z’代表-(CONHCHY)2COOH；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’，Z’代表-(CONHCHY4)2COOH且一个Y4代表异丙基且另一个代
表–(CH2)3-NHCONH2；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’，Z’代表-(CONHCHY4)2COOH且一个Y4代表–CH3且另一个代表–
(CH2)3-NHCONH2；
Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基；
Y4的至少一个代表选自异丙基或–CH3；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’，Z’代表-CONHCHY4COOH且Y4代表任选地被–NH2取代的芳基或
苄基；
Y4代表氨基苄基；
R2代表–(CH2)0-3Z且Z代表–SY3；
R4代表-CO-CHY4-NHY5且Y5代表H；
R4代表-CO-CHY4-NHY5且Y5代表–CO-CHY6-NH2；
Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基。
[0099] 此外，优选为在式(I)或(II)中的R1、R2或R3代表-MOD。
[0100] 特别优选地，R3代表-MOD且R1代表–L-#1或–L-BINDER，其中–MOD代表–(NR10)n-(G1)o-G2-G3，其中
R10代表H或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或-CONH- (其中，如果G1代表–NHCO-，R10不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链和/或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、
SO2、-NRy-、-NRyCO-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、x x
砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-或-CR =N-O-(其中R 代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个
中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-
CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，其中G3代表-H或-COOH，且其中基团–MOD优选地具有至
少一个基团-COOH。
R10代表H或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或-CONH- (其中，如果G1代表–NHCO-，R10不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链和/或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、
SO2、-NRy-、-NRyCO-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、x x
砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-或-CR =N-O-(其中R 代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个
中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-
CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，其中G3代表-H或-COOH，且其中基团–MOD优选地具有至
少一个基团-COOH。
[0101] 特别优选地，基团–MOD具有(优选末端的)–COOH基团，例如在甜菜碱基团中。优选地，基团–MOD具有式–CH2-Sx-(CH2)0-4-CHY5-COOH，其中x是0或1，且Y5代表H或NHY6，其中Y6代表H或-COCH3。
[0102] 其它特别优选的化合物具有以下式(III)：其中
R1代表–L-BINDER、H或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤素、-CO-NY1Y2或-
CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’或-CH(CH2W)Z’，且Y3代表
H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-
CHY4)1-3COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
R2和R4 彼此独立地代表H、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，或R2和R4一
起代表–CH2-CHR11-或-CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11代表H、NH2、SO3H、COOH、SH、卤素(特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；
其中SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，R4’是C1-10-
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可被-NH2、-NH-烷基、-N(烷
基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R4’’(其中x是0或1且v是1至10的
数值，且R4’’是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)；
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
3
R 代表–L-BINDER、任选地取代的烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷基或–CH2-Sx-
(CH2)0-4-CHY5-COOH，其中x代表0或1且Y5代表H或NHY6，其中Y6代表H或-COCH3，优选–L-
BINDER或C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个卤
素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-NH-
烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷基、
1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z基团取代，其中Z代
表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2或-
(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH，
(其中“烷基”优选地代表C1-10-烷基)；
R5代表H、F、NH2、NO2、卤素、SH或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中L代表接头且BINDER代表抗体，其中所述结合剂可任选地连接至多个活性物质分
子，
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基或卤素，
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或任选地取代的氧杂
环丁烷；且
9
R代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
R1代表–L-BINDER、H或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤素、-CO-NY1Y2或-
CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’或-CH(CH2W)Z’，且Y3代表
H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-
CHY4)1-3COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
R2和R4 彼此独立地代表H、-SGlys-(CO)0-1-R4’、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，或R2和R4一
起代表–CH2-CHR11-或-CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11代表H、NH2、SO3H、COOH、SH、卤素(特别是F或Cl)、C1-4-烷基、C1-4-卤代烷基、C1-4-烷氧基、羟基-取代的C1-4-烷基、COO(C1-4-烷基)或OH；
其中SGlys是可通过溶酶体酶裂解的基团，特别是由二肽或三肽组成的基团，R4’是C1-10-
烷基、C5-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基、C5-10-杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、C1-10-烷氧基、C6-10-芳基氧基或C6-10-芳烷氧基、C5-10-杂芳烷氧基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基氧基、C5-10-杂环烷氧基，其可被-NH2、-NH-烷基、-N(烷
基)2、NH-CO-烷基、N(烷基)-CO烷基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2-N(烷基)2、-COOH、-CONH2、-CON(烷基)2或–OH取代一次或多次，或是-H或基团–Ox-(CH2CH2O)v-R4’’(其中x是0或1且v是1至10的
数值，且R4’’是-H、-烷基(优选C1-12-烷基)、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH或-CH2-CH2-NH2)；
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
3
R 代表–L-BINDER、任选地取代的烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂环烷基或–CH2-Sx-
(CH2)0-4-CHY5-COOH，其中x代表0或1且Y5代表H或NHY6，其中Y6代表H或-COCH3，优选–L-
BINDER或C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个卤
素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-NH-
烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷基、
1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH2基团或1-3个-(CH2)0-3Z基团取代，其中Z代
表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2或-
(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH，
(其中“烷基”优选地代表C1-10-烷基)；
R5代表H、F、NH2、NO2、卤素、SH或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中L代表接头且BINDER代表抗体，其中所述结合剂可任选地连接至多个活性物质分
子，
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基或卤素，
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C4-10-环烷基或任选地取代的氧杂
环丁烷；且
9
R代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
[0103] 此外，优选的是(单独或组合)，在式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIi)、(IIj)、(IIk)或(III)中：
Z代表Cl或Br；
R1代表-(CH2)0-3Z，其中Z代表-CO-NY1Y2，其中Y2代表-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’且Y1代表
H、NH2或-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’；
Y1代表H，Y2代表-(CH2CH2O)3-CH2CH2Z’且Z’代表–COOH；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’且Z’代表-(CONHCHY4)2COOH；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’，Z’代表-(CONHCHY4)2COOH且Y4的一个代表表示异丙基且另
一个表示–(CH2)3-NHCONH2；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’，Z’代表-(CONHCHY4)2COOH且Y4的一个代表表示–CH3且另一
个表示–(CH2)3-NHCONH2；
Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基；
4
Y的至少一个代表选自异丙基或–CH3；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’，Z’代表-CONHCHY4COOH且Y4代表任选地被–NH2取代的芳基或
苄基；
Y4代表氨基苄基；
2 3
R代表–(CH2)0-3Z且Z代表–SY ；
R4代表-CO-CHY4-NHY5且Y5代表H；
R4代表-CO-CHY4-NHY5且Y5代表–CO-CHY6-NH2；
Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基。
Z代表Cl或Br；
R1代表-(CH2)0-3Z，其中Z代表-CO-NY1Y2，其中Y2代表-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’且Y1代表
H、NH2或-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’；
Y1代表H，Y2代表-(CH2CH2O)3-CH2CH2Z’且Z’代表–COOH；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’且Z’代表-(CONHCHY4)2COOH；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’，Z’代表-(CONHCHY4)2COOH且Y4的一个代表表示异丙基且另
一个表示–(CH2)3-NHCONH2；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’，Z’代表-(CONHCHY4)2COOH且Y4的一个代表表示–CH3且另一
个表示–(CH2)3-NHCONH2；
Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基；
4
Y的至少一个代表选自异丙基或–CH3；
Y1代表H，Y2代表-CH2CH2Z’，Z’代表-CONHCHY4COOH且Y4代表任选地被–NH2取代的芳基或
苄基；
Y4代表氨基苄基；
2 3
R代表–(CH2)0-3Z且Z代表–SY ；
R4代表-CO-CHY4-NHY5且Y5代表H；
R4代表-CO-CHY4-NHY5且Y5代表–CO-CHY6-NH2；
Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基。
[0104] 此外，优选为式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)或(III)的化合物其中
R1代表H、–L-#1或–L-BINDER、–MOD或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤
素、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
(CH2W)Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH，其中W代表H或OH，
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
R2代表H、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4彼此独立地代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选
地被–NH2取代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷
基；
R4代表H或-L-#1或-L-BINDER(其中-L-#1或-L-BINDER是酶可裂解的接头，其导致R4转
化为H)；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
R3代表–L-#1或–L-BINDER、-MOD或任选地取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、
杂环烷基，优选C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个
卤素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-
NH-烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷
基、1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH((CH2CH2O)1-20H)基团、1-3个-NH2基团或
1-3个-(CH2)0-3Z基团取代，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH (其中“烷基”优选是C1-10-烷基)；
R5代表H、-MOD、NH2、NO2、卤素(特别是F、Cl、Br)、-CN、CF3、-OCF3、-CH2F、-CH2F、SH或-
(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-OY3、-SY3、卤素、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基、NO2、NH2、COOH或卤素(特别是F、Cl、Br)，
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯基、(任选地氟代的)C2-10-
炔基或(任选地氟代的)C4-10-环烷基；
其中取代基R1和R3之一代表–L-#1或–L-BINDER，
L代表接头且#1代表与所述抗体的键，且BINDER代表抗体，
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
10
其中–MOD代表–(NR )n-(G1)o-G2-G3，其中
R10代表H或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或-CONH-(其中，如果G1代表–NHCO-，则R10不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链和/或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、
SO2、-NRy-、-NRyCO-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-或-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个
中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-
CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，其中G3代表-H或-COOH，且其中基团–MOD优选地具有至
少一个基团-COOH；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
R1代表H、–L-#1或–L-BINDER、–MOD或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤
素、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
(CH2W)Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH，其中W代表H或OH，
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
R2代表H、-CO-CHY4-NHY5或-(CH2)0-3Z，
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4彼此独立地代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选
地被–NH2取代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷
基；
R4代表H或-L-#1或-L-BINDER(其中-L-#1或-L-BINDER是酶可裂解的接头，其导致R4转
化为H)；
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
R3代表–L-#1或–L-BINDER、-MOD或任选地取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、
杂环烷基，优选C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个
卤素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-
NH-烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷
基、1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH((CH2CH2O)1-20H)基团、1-3个-NH2基团或
1-3个-(CH2)0-3Z基团取代，其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、-NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，其中Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH (其中“烷基”优选是C1-10-烷基)；
R5代表H、-MOD、NH2、NO2、卤素(特别是F、Cl、Br)、-CN、CF3、-OCF3、-CH2F、-CH2F、SH或-
(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-OY3、-SY3、卤素、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R6和R7彼此独立地代表H、氰基、(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯
基、(任选地氟代的)C2-10-炔基、羟基、NO2、NH2、COOH或卤素(特别是F、Cl、Br)，
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基、(任选地氟代的)C2-10-烯基、(任选地氟代的)C2-10-
炔基或(任选地氟代的)C4-10-环烷基；
其中取代基R1和R3之一代表–L-#1或–L-BINDER，
L代表接头且#1代表与所述抗体的键，且BINDER代表抗体，
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
10
其中–MOD代表–(NR )n-(G1)o-G2-G3，其中
R10代表H或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或-CONH-(其中，如果G1代表–NHCO-，则R10不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链和/或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、
SO2、-NRy-、-NRyCO-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-或-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个
中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-
CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，其中G3代表-H或-COOH，且其中基团–MOD优选地具有至
少一个基团-COOH；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
[0105] 此外，优选为式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)或(III)的化合物，其中R1代表H、–L-#1或–L-BINDER、–MOD或-(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-NHY3、-OY3、-SY3、卤
素、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
3
(CH2W)Z’，且Y代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH，其中W代表H或OH，
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
2 4 5
R代表H、-CO-CHY-NHY或-(CH2)0-3Z，
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
R4代表H，
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
R3代表–L-#1或–L-BINDER、-MOD或任选地取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、
杂环烷基，优选C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个
卤素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-
NH-烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷
基、1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH((CH2CH2O)1-20H)基团、1-3个-NH2基团或
3 3 3 1 2 3
1-3个-(CH2)0-3Z基团取代，其中Z代表-H、卤素、-OY、-SY、-NHY、-CO-NYY或-CO-OY ，其中
Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH (其中“烷基”优选是C1-10-烷基)；
R5代表H、-MOD、NH2、NO2、卤素(特别是F、Cl、Br)、-CN、CF3、-OCF3、-CH2F、-CH2F、SH或-
3 3 3 1 2 3
(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-OY、-SY、卤素、NHY、-CO-NYY或-CO-OY，
其中Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R6和R7 彼此独立地代表H或卤素(特别是F、Cl、Br)；
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基；
其中取代基R1和R3之一代表–L-#1或–L-BINDER，
L代表接头且#1代表与所述抗体的键，且BINDER代表抗体，
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
其中–MOD代表–CH2-Sx-(CH2)0-4-CHY5-COOH，其中x是0或1，且Y5代表H或NHY6，其中Y6代
表H或-COCH3，
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
素、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2、-(CH2CH2O)0-3-(CH2)0-3Z’ (例如-(CH2)0-3Z’)或-CH
3
(CH2W)Z’，且Y代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、NH2、SO3H、COOH、-NH-CO-CH2-CH2-CH(NH2)COOH或-(CO-NH-CHY4)1-3COOH，其中W代表H或OH，
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6烷基，或代表任选地被–NH2取代
的芳基或苄基；
2 4 5
R代表H、-CO-CHY-NHY或-(CH2)0-3Z，
其中Z代表-H、卤素、-OY3、-SY3、NHY3、-CO-NY1Y2或-CO-OY3，
其中Y1和Y2 彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
其中Y4代表任选地被-NHCONH2取代的直链或支化的C1-6-烷基，或代表任选地被–NH2取
代的芳基或苄基，且Y5代表H或–CO-CHY6-NH2，其中Y6代表直链或支化的C1-6-烷基；
R4代表H，
A代表CO、SO、SO2、SO2NH或CNNH2；
R3代表–L-#1或–L-BINDER、-MOD或任选地取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、
杂环烷基，优选C1-10-烷基、C6-10-芳基或C6-10-芳烷基、C5-10-杂烷基、C1-10-烷基-O-C6-10-芳基或C5-10-杂环烷基，其可被1-3个–OH基团、1-3个卤素原子、1-3个卤代烷基(各自具有1-3个
卤素原子)、1-3个O-烷基、1-3个–SH基团、1-3个-S-烷基、1-3个-O-CO-烷基、1-3个-O-CO-
NH-烷基、1-3个-NH-CO-烷基、1-3个-NH-CO-NH-烷基、1-3个-S(O)n-烷基、1-3个-SO2-NH-烷
基、1-3个-NH-烷基、1-3个-N(烷基)2基团、1-3个-NH((CH2CH2O)1-20H)基团、1-3个-NH2基团或
3 3 3 1 2 3
1-3个-(CH2)0-3Z基团取代，其中Z代表-H、卤素、-OY、-SY、-NHY、-CO-NYY或-CO-OY ，其中
Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’且Y3代表H、-(CH2)0-3-CH(NHCOCH3)Z’、-(CH2)0-3-CH(NH2)Z’或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表H、SO3H、NH2或COOH (其中“烷基”优选是C1-10-烷基)；
R5代表H、-MOD、NH2、NO2、卤素(特别是F、Cl、Br)、-CN、CF3、-OCF3、-CH2F、-CH2F、SH或-
3 3 3 1 2 3
(CH2)0-3Z，其中Z代表-H、-OY、-SY、卤素、NHY、-CO-NYY或-CO-OY，
其中Y1和Y2彼此独立地代表H、NH2或-(CH2)0-3Z’，且Y3代表H或-(CH2)0-3Z’，其中Z’代表
H、SO3H、NH2或COOH；
R6和R7 彼此独立地代表H或卤素(特别是F、Cl、Br)；
R8代表(任选地氟代的)C1-10-烷基；
其中取代基R1和R3之一代表–L-#1或–L-BINDER，
L代表接头且#1代表与所述抗体的键，且BINDER代表抗体，
R9代表H、F、CH3、CF3、CH2F或CHF2；
其中–MOD代表–CH2-Sx-(CH2)0-4-CHY5-COOH，其中x是0或1，且Y5代表H或NHY6，其中Y6代
表H或-COCH3，
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
[0106] 此外优选为以下化合物，其任选地可与酸诸如例如三氟乙酸一起存在。这些化合物可经由对应于位置R1、R3和R4的位置，经由接头连接至抗体(其中氢原子被接头替代)：
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-2-羟基乙酰胺；
(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-甲基丁酰胺(1:1)；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1S)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2基]-2,2-二甲基
丙基}乙酰胺；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1S)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-2-羟基乙酰胺；
S-(1-{2-[(N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)氨基]乙基}-2,5-二氧代吡
咯烷-3-基)-L-半胱氨酸；
S-(1-{2-[(N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)氨基]乙基}-2,5-二氧代吡
咯烷-3-基)-L-半胱氨酸；
S-[1-(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)-2,5-二氧
代吡咯烷-3-基]-L-半胱氨酸；
N-[19-(3(R/S)-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-2,5-二氧代吡咯烷-1-基)-17-氧
代-4,7,10,13-四氧杂-16-氮杂十九烷-1-酰基]-R/S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄
基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}高半胱氨酸；
S-{(3R/S)-1-[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]-2,5-二氧代吡咯烷-3-基}-
L-半胱氨酸；
S-[(3R/S)-1-(2-{[6-({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)己酰基]氨基}乙基)-2,5-二氧代
吡咯烷-3-基]-L-半胱氨酸；
S-{1-[2-({[(1R,3S)-3-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-
1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)环戊基]羰基}氨基)乙
基]-2,5-二氧代吡咯烷-3-基}-L-半胱氨酸；
S-(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)-L-半胱氨酸；
N6-(N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)-N2-{N-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧
基乙基]硫基}-2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基}-L-赖氨酸；
N-[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]-L-谷氨酰胺；
N6-(N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)-L-赖氨酸；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-3,3,3-三氟丙酰胺；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-4-氟苯甲酰胺；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}乙酰胺；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-4-(三氟甲基)苯甲酰胺；
(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基} (乙醇酰基)氨基]丁酸；
(2S)-2-氨基-N-(2-氨基乙基)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰胺；
4-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-3-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸；
4-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-2-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸；
N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酸；
N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-L-丝氨酸；
N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-L-丙氨酸；
N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}甘氨酸；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-4-甲基苯甲酰胺；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-4-(甲基硫基)苯甲酰胺；
(2S)-N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2-羟基丙酰胺；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-2-(甲基硫基)乙酰胺；
(2S)-N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[4-苄基-1-(2,5-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2,2-
二甲基丙基}-2-羟基丙酰胺；
4-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}氨基]-4-氧代丁酸甲酯；
4-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}氨基]-4-氧代丁酸；
(2R)-22-[(3R/S)-3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-2,5-二氧代吡咯烷-1-基]-
2-[({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)甲基]-4,20-二氧代-7,10,13,16-四氧杂-3,19-二氮杂二
十二烷-1-酸；
N-乙酰基-S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-L-半胱氨酸；
N-乙酰基-S-[2-([3-(L-丙氨酰基氨基)丙基]{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-
1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基)-2-氧代乙基]-L-半胱氨酸；
(2S)-N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}四氢呋喃-2-甲酰胺；
3-({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二
甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)丙酸；
S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}高半胱氨酸；
4-氨基-N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}苯甲酰胺；
4-[(2-{[(2R)-2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)-2-羧基乙基]氨基}-2-氧代乙基)
氨基]-3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸；
4-[(2-{[(2R)-2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)-2-羧基乙基]氨基}-2-氧代乙基)
氨基]-2-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸。
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-2-羟基乙酰胺；
(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-甲基丁酰胺(1:1)；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1S)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2基]-2,2-二甲基
丙基}乙酰胺；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1S)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-2-羟基乙酰胺；
S-(1-{2-[(N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)氨基]乙基}-2,5-二氧代吡
咯烷-3-基)-L-半胱氨酸；
S-(1-{2-[(N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)氨基]乙基}-2,5-二氧代吡
咯烷-3-基)-L-半胱氨酸；
S-[1-(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)-2,5-二氧
代吡咯烷-3-基]-L-半胱氨酸；
N-[19-(3(R/S)-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-2,5-二氧代吡咯烷-1-基)-17-氧
代-4,7,10,13-四氧杂-16-氮杂十九烷-1-酰基]-R/S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄
基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}高半胱氨酸；
S-{(3R/S)-1-[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]-2,5-二氧代吡咯烷-3-基}-
L-半胱氨酸；
S-[(3R/S)-1-(2-{[6-({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)己酰基]氨基}乙基)-2,5-二氧代
吡咯烷-3-基]-L-半胱氨酸；
S-{1-[2-({[(1R,3S)-3-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-
1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)环戊基]羰基}氨基)乙
基]-2,5-二氧代吡咯烷-3-基}-L-半胱氨酸；
S-(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)-L-半胱氨酸；
N6-(N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)-N2-{N-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧
基乙基]硫基}-2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基}-L-赖氨酸；
N-[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]-L-谷氨酰胺；
N6-(N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)-L-赖氨酸；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-3,3,3-三氟丙酰胺；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-4-氟苯甲酰胺；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}乙酰胺；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-4-(三氟甲基)苯甲酰胺；
(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基} (乙醇酰基)氨基]丁酸；
(2S)-2-氨基-N-(2-氨基乙基)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰胺；
4-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-3-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸；
4-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-2-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸；
N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酸；
N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-L-丝氨酸；
N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-L-丙氨酸；
N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}甘氨酸；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-4-甲基苯甲酰胺；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-4-(甲基硫基)苯甲酰胺；
(2S)-N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2-羟基丙酰胺；
N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-2-(甲基硫基)乙酰胺；
(2S)-N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[4-苄基-1-(2,5-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2,2-
二甲基丙基}-2-羟基丙酰胺；
4-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}氨基]-4-氧代丁酸甲酯；
4-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}氨基]-4-氧代丁酸；
(2R)-22-[(3R/S)-3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-2,5-二氧代吡咯烷-1-基]-
2-[({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)甲基]-4,20-二氧代-7,10,13,16-四氧杂-3,19-二氮杂二
十二烷-1-酸；
N-乙酰基-S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-L-半胱氨酸；
N-乙酰基-S-[2-([3-(L-丙氨酰基氨基)丙基]{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-
1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基)-2-氧代乙基]-L-半胱氨酸；
(2S)-N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}四氢呋喃-2-甲酰胺；
3-({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二
甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)丙酸；
S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}高半胱氨酸；
4-氨基-N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}苯甲酰胺；
4-[(2-{[(2R)-2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)-2-羧基乙基]氨基}-2-氧代乙基)
氨基]-3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸；
4-[(2-{[(2R)-2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)-2-羧基乙基]氨基}-2-氧代乙基)
氨基]-2-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸。
[0107] 根据本发明特别优选为下列式IV的化合物，其中R1、R2、R3、R4和R5具有上文提到的含义(如例如对于式(I)或(II)所提及)：
特别优选为式IV的化合物，其中R1和R5代表H或–L-#1；R2和R4代表H或R2和R4一起代表–
CH2-CHR10-或-CHR10-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R10代表H；且R3代表CH2OH、CH(CH3)OH或–
L-#1，其中取代基R1和R3之一代表–L-#1。此外，特别优选式IV的化合物， 其中R1代表H或
COOH；R2和R5代表H；R4代表–L-#1；且R3代表CH2OH或CH(CH3)OH，其中-L-#1是导致R4转化为H
的酶可裂解的接头。
特别优选为式IV的化合物，其中R1和R5代表H或–L-#1；R2和R4代表H或R2和R4一起代表–
CH2-CHR10-或-CHR10-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R10代表H；且R3代表CH2OH、CH(CH3)OH或–
L-#1，其中取代基R1和R3之一代表–L-#1。此外，特别优选式IV的化合物， 其中R1代表H或
COOH；R2和R5代表H；R4代表–L-#1；且R3代表CH2OH或CH(CH3)OH，其中-L-#1是导致R4转化为H
的酶可裂解的接头。
[0108] 接头文献公开了用于将有机分子共价偶联(缀合)至结合剂例如抗体的各种可能性(参见例
如K. Lang和J. W. Chin. Chem. Rev. 2014, 114, 4764-4806，M. Rashidian等人
Bioconjugate Chem. 2013, 24, 1277-1294)。根据本发明优选的是KSP抑制剂经由已作为
游离硫醇存在或通过二硫桥的还原所生成的抗体的半胱氨酸残基的一个或多个硫原子和/
或经由抗体的赖氨酸残基的一个或多个NH基团缀合至抗体。但是，也可以经由酪氨酸残基、
经由谷氨酰胺残基、经由非天然氨基酸的残基、经由游离羧基或经由抗体的糖残基将KSP抑
制剂连接至抗体。对于偶联，使用所谓的接头。接头可分成可体内裂解的接头类别和体内稳
定的接头类别(参见Ducry和B. Stump, Bioconjugate Chem.21, 5-13 (2010))。可体内裂
解的接头具有可体内裂解的基团，其中又可区分可体内化学裂解的基团和可体内酶促裂解
的基团。“可体内化学裂解”和“可体内酶促裂解”是指该接头或基团在血液循环中稳定并仅
在靶细胞处或靶细胞中通过其中变化的化学或酶环境(较低pH；升高的谷胱甘肽浓度；溶酶
体酶如组织蛋白酶或血纤维蛋白溶酶，或糖苷酶(Glyosidasen)如β-葡糖醛酸酶的存在)才
裂解，以释放低分子量KSP抑制剂或其衍生物。可体内化学裂解的基团特别是二硫化物、腙、
缩醛和缩醛胺；可体内酶促裂解的基团特别是2-8-寡肽基团，尤其是二肽基团或糖苷。在
Bioconjugate Chem. 2002, 13, 855-869和Bioorganic & Medicinal Chemistry
Letters 8 (1998) 3341-3346以及Bioconjugate Chem. 1998, 9, 618-626中公开了肽裂
解位点。这些包括例如缬氨酸-丙氨酸、缬氨酸-赖氨酸、缬氨酸-瓜氨酸、丙氨酸-赖氨酸和
苯基丙氨酸-赖氨酸(任选具有附加的酰胺基团)。
如K. Lang和J. W. Chin. Chem. Rev. 2014, 114, 4764-4806，M. Rashidian等人
Bioconjugate Chem. 2013, 24, 1277-1294)。根据本发明优选的是KSP抑制剂经由已作为
游离硫醇存在或通过二硫桥的还原所生成的抗体的半胱氨酸残基的一个或多个硫原子和/
或经由抗体的赖氨酸残基的一个或多个NH基团缀合至抗体。但是，也可以经由酪氨酸残基、
经由谷氨酰胺残基、经由非天然氨基酸的残基、经由游离羧基或经由抗体的糖残基将KSP抑
制剂连接至抗体。对于偶联，使用所谓的接头。接头可分成可体内裂解的接头类别和体内稳
定的接头类别(参见Ducry和B. Stump, Bioconjugate Chem.21, 5-13 (2010))。可体内裂
解的接头具有可体内裂解的基团，其中又可区分可体内化学裂解的基团和可体内酶促裂解
的基团。“可体内化学裂解”和“可体内酶促裂解”是指该接头或基团在血液循环中稳定并仅
在靶细胞处或靶细胞中通过其中变化的化学或酶环境(较低pH；升高的谷胱甘肽浓度；溶酶
体酶如组织蛋白酶或血纤维蛋白溶酶，或糖苷酶(Glyosidasen)如β-葡糖醛酸酶的存在)才
裂解，以释放低分子量KSP抑制剂或其衍生物。可体内化学裂解的基团特别是二硫化物、腙、
缩醛和缩醛胺；可体内酶促裂解的基团特别是2-8-寡肽基团，尤其是二肽基团或糖苷。在
Bioconjugate Chem. 2002, 13, 855-869和Bioorganic & Medicinal Chemistry
Letters 8 (1998) 3341-3346以及Bioconjugate Chem. 1998, 9, 618-626中公开了肽裂
解位点。这些包括例如缬氨酸-丙氨酸、缬氨酸-赖氨酸、缬氨酸-瓜氨酸、丙氨酸-赖氨酸和
苯基丙氨酸-赖氨酸(任选具有附加的酰胺基团)。
[0110] 所述接头–L-优选具有下示基本结构(i)至(iv)之一：(i) –(C=O)m–SG1-L1-L2-
(ii) –(C=O)m –L1-SG-L1-L2-
(iii) –(C=O)m –L1-L2-
(iv) –(C=O)m –L1-SG-L2
其中m是0或1；SG是可(化学或酶促)体内裂解的基团(特别是二硫化物、腙、缩醛和缩醛
胺；或可被蛋白酶裂解的2-8-寡肽基团)，SG1是寡肽基团或优选二肽基团，L1彼此独立地代
表体内稳定的有机基团，且L2代表与结合剂的缀合基团或代表单键。在此，优选偶联至抗体
的半胱氨酸残基或赖氨酸残基。或者，可以偶联至抗体的酪氨酸残基、谷氨酰胺残基或非天
然氨基酸。非天然氨基酸可含有例如醛基或酮基(例如甲酰基甘氨酸)或叠氮基或炔基(参
见Lan & Chin, Cellular Incorporation of Unnatural Amino Acids and
Bioorthogonal Labeling of Proteins, Chem.Rev. 2014, 114, 4764-4806)。
(ii) –(C=O)m –L1-SG-L1-L2-
(iii) –(C=O)m –L1-L2-
(iv) –(C=O)m –L1-SG-L2
其中m是0或1；SG是可(化学或酶促)体内裂解的基团(特别是二硫化物、腙、缩醛和缩醛
胺；或可被蛋白酶裂解的2-8-寡肽基团)，SG1是寡肽基团或优选二肽基团，L1彼此独立地代
表体内稳定的有机基团，且L2代表与结合剂的缀合基团或代表单键。在此，优选偶联至抗体
的半胱氨酸残基或赖氨酸残基。或者，可以偶联至抗体的酪氨酸残基、谷氨酰胺残基或非天
然氨基酸。非天然氨基酸可含有例如醛基或酮基(例如甲酰基甘氨酸)或叠氮基或炔基(参
见Lan & Chin, Cellular Incorporation of Unnatural Amino Acids and
Bioorthogonal Labeling of Proteins, Chem.Rev. 2014, 114, 4764-4806)。
[0111] 根据本发明优选的特别是接头基本结构(iii)。经由代谢，具有基本接头结构(iii)且接头与抗体的半胱氨酸或赖氨酸残基偶联的根据本发明的缀合物的施用产生下式
的半胱氨酸或赖氨酸衍生物：
其中L1在每种情况下连接至低分子量KSP抑制剂，例如式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)、
(IIb)、(IIca)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(III)或(IV)的化合物。
的半胱氨酸或赖氨酸衍生物：
其中L1在每种情况下连接至低分子量KSP抑制剂，例如式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)、
(IIb)、(IIca)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(III)或(IV)的化合物。
[0112] 根据本发明也优选的是基本接头结构(ii)和(iv)，特别是当连接至位置R1时，特别是当基团L1具有下列结构之一时：
(a) –NH-(CH2)0-4-(CHCH3)0-4-CHY5-CO-Y7，其中Y5代表H或NHY6，其中Y6代表H或-COCH3，
且Y7代表单键或–NH-(CH2)0-4–CHNH2-CO-，以使得在裂解后获得相应的结构–NH-(CH2)0-4-
(CHCH3)0-4-CHY5-COOH或–NH-(CH2)0-4-(CHCH3)0-4-CHY5-CO-NH-(CH2)0-4-CHNH2-COOH。
(a) –NH-(CH2)0-4-(CHCH3)0-4-CHY5-CO-Y7，其中Y5代表H或NHY6，其中Y6代表H或-COCH3，
且Y7代表单键或–NH-(CH2)0-4–CHNH2-CO-，以使得在裂解后获得相应的结构–NH-(CH2)0-4-
(CHCH3)0-4-CHY5-COOH或–NH-(CH2)0-4-(CHCH3)0-4-CHY5-CO-NH-(CH2)0-4-CHNH2-COOH。
[0113] (b) –CH2-Sx-(CH2)0-4-CHY5-CO-，其中x是0或1，且Y5代表H或NHY6，其中Y6代表H或-COCH3，以在裂解后获得相应的结构–CH2-Sx-(CH2)0-4-CHY5-COOH。
[0114] 根据本发明还优选当连接至位置R4时的基本接头结构(i)，特别是如果m=0。
[0115] 如果接头连接至半胱氨酸侧链或半胱氨酸残基，L2优选衍生自与半胱氨酸的巯基呈反应性的基团。这些包括卤代乙酰基、马来酰亚胺、氮杂环丙烷、丙烯酰基、芳基化化合
物、乙烯基砜、吡啶基二硫化物、TNB硫醇和二硫化物还原剂。这些基团通常以亲电子方式与
巯基键反应以形成硫桥(例如硫醚)或二硫桥。优选的是稳定的硫桥。L2优选是
其中
#1表示与抗体的硫原子的连接点，
#2 表示与基团L1的连接点，且
R22代表COOH、COOR、COR、CONHR、CONR2 (其中R在每种情况下代表C1-3-烷基)、CONH2，优
选COOH。
物、乙烯基砜、吡啶基二硫化物、TNB硫醇和二硫化物还原剂。这些基团通常以亲电子方式与
巯基键反应以形成硫桥(例如硫醚)或二硫桥。优选的是稳定的硫桥。L2优选是
其中
#1表示与抗体的硫原子的连接点，
#2 表示与基团L1的连接点，且
R22代表COOH、COOR、COR、CONHR、CONR2 (其中R在每种情况下代表C1-3-烷基)、CONH2，优
选COOH。
[0116] 作为L2，特别优选：或
其中#1表示与抗体的硫原子的连接点，#2表示与活性物质的连接点，x代表1或2，且R22
代表COOH、COOR、COR、CONR2、CONHR(其中R在每种情况下代表C1-3-烷基)、CONH2，优选COOH。当x=1且R22代表COOH时，是优选的。
其中#1表示与抗体的硫原子的连接点，#2表示与活性物质的连接点，x代表1或2，且R22
代表COOH、COOR、COR、CONR2、CONHR(其中R在每种情况下代表C1-3-烷基)、CONH2，优选COOH。当x=1且R22代表COOH时，是优选的。
[0117] 在根据本发明的缀合物中或在根据本发明的缀合物的混合物中，与所述抗体的半胱氨酸残基的键在优选大于80%，特别优选大于90%(在每种情况下基于所述接头与抗体的
键的总数计)的程度上特别优选以式A3或A4的两种结构之一存在。在此，式A3或A4的结构通
常一起存在，基于与所述抗体的键的数量计，优选以60:40至40:60的比率。剩余键此时以下
列结构存在
。
键的总数计)的程度上特别优选以式A3或A4的两种结构之一存在。在此，式A3或A4的结构通
常一起存在，基于与所述抗体的键的数量计，优选以60:40至40:60的比率。剩余键此时以下
列结构存在
。
[0118] 根据本发明，L1优选由下式代表1 10 2
#–(NR )n-(G1)o-G2-#
其中
R10代表H、NH2或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO- 、-CONH-或 ；(如果G1代表NHCO或 ，则R10
优选不是NH2)。
#–(NR )n-(G1)o-G2-#
其中
R10代表H、NH2或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO- 、-CONH-或 ；(如果G1代表NHCO或 ，则R10
优选不是NH2)。
[0119] n代表0或1；o代表0或1；且
G2代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化
和/或环状亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NRy-、-NRyCO-、-C(NH)NRy-、CONRy-、-
NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，它们各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-
CO-、-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)和/或具有最多4个选自N、O和S、-SO-或–
SO2-的杂原子的3至10元芳族或非芳族杂环(优选 )中的一个或多个中
断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、
磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
G2代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化
和/或环状亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NRy-、-NRyCO-、-C(NH)NRy-、CONRy-、-
NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，它们各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-
CO-、-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)和/或具有最多4个选自N、O和S、-SO-或–
SO2-的杂原子的3至10元芳族或非芳族杂环(优选 )中的一个或多个中
断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、
磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
[0120] G2代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化和/或环状亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NMe-、-NHNH-、-SO2NHNH-、-CONHNH-和具有最多4个选自N、O和S或-SO-的杂原子的5至10元芳族或
非芳族杂环(优选 )中的一个或多个中断一次或多次，其中侧链(如果
存在)可被–NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
非芳族杂环(优选 )中的一个或多个中断一次或多次，其中侧链(如果
存在)可被–NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
[0121] G2优选代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化和/或环状亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-
NMe-、-NHNH-、-SO2NHNH-、-CONHNH-、-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)和具有最
多4个选自N、O和S、-SO-或–SO2-的杂原子的3至10元，例如5至10元芳族或非芳族杂环(优选
)中的一个或多个中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)烃链可被–
NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
NMe-、-NHNH-、-SO2NHNH-、-CONHNH-、-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)和具有最
多4个选自N、O和S、-SO-或–SO2-的杂原子的3至10元，例如5至10元芳族或非芳族杂环(优选
)中的一个或多个中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)烃链可被–
NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
[0122] G2中的其它中断基团优选是其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基。
[0123] 在此，#1是与KSP抑制剂的键且#2是与连接至抗体的缀合基团(例如L2)的键。
[0124] 来自亚芳基和/或直链和/或支化和/或环状亚烷基的直链或支化的烃链通常包含具有各自所示的碳原子数的α,ω-二价烷基。以下可通过实例的方式且作为优选提到：亚甲
基、乙烷-1,2-二基(1,2-亚乙基)、丙烷-1,3-二基(1,3-亚丙基)、丁烷-1,4-二基(1,4-亚丁
基)、戊烷-1,5-二基(1,5-亚戊基)、己烷-1,6-二基(1,6-亚己基)、庚烷-1,7-二基(1,7-亚
己基)、辛烷-1,8-二基(1,8-亚辛基)、壬烷-1,9-二基(1,9-亚壬基)、癸烷-1,10-二基(1,
10-亚癸基)。但是，该烃链中的亚烷基也可以是支化的，即上文提到的直链亚烷基的一个或
多个氢原子可任选被C1-10-烷基替代，因此形成侧链。该烃链还可含有环状亚烷基(环烷二
基)，例如1,4-环己烷二基或1,3-环戊烷二基。这些环状基团可以是不饱和的。特别地，在该
烃基团中可存在芳族基团(亚芳基)，例如亚苯基。进而，在该环状亚烷基和亚芳基中，一个
或多个氢原子也可任选被C1-10-烷基替代。以该方式，形成任选支化的烃链。这种烃链具有
总共0至100个碳原子，优选1至50，特别优选2至25个碳原子。
基、乙烷-1,2-二基(1,2-亚乙基)、丙烷-1,3-二基(1,3-亚丙基)、丁烷-1,4-二基(1,4-亚丁
基)、戊烷-1,5-二基(1,5-亚戊基)、己烷-1,6-二基(1,6-亚己基)、庚烷-1,7-二基(1,7-亚
己基)、辛烷-1,8-二基(1,8-亚辛基)、壬烷-1,9-二基(1,9-亚壬基)、癸烷-1,10-二基(1,
10-亚癸基)。但是，该烃链中的亚烷基也可以是支化的，即上文提到的直链亚烷基的一个或
多个氢原子可任选被C1-10-烷基替代，因此形成侧链。该烃链还可含有环状亚烷基(环烷二
基)，例如1,4-环己烷二基或1,3-环戊烷二基。这些环状基团可以是不饱和的。特别地，在该
烃基团中可存在芳族基团(亚芳基)，例如亚苯基。进而，在该环状亚烷基和亚芳基中，一个
或多个氢原子也可任选被C1-10-烷基替代。以该方式，形成任选支化的烃链。这种烃链具有
总共0至100个碳原子，优选1至50，特别优选2至25个碳原子。
[0125] 如果存在，所述侧链可被–NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸相同或不同地取代一次或多次。
[0126] 该烃链可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NMe-、-NHNH-、-SO2NHNH-、-CONHNH-和具有最多4个选自N、O和S、-SO-或–SO2-的杂原子的5至10元芳族或非芳族杂环中的一个或多个相同或不同地中断一次或多次。
[0127] G2中的其它中断基团优选是
[0128] 优选地，所述接头对应于下式：§-(CO)m-L1-L2-§§
其中
m代表0或1；
§代表与活性物质分子的键且
§§代表与结合剂肽或-蛋白的键，且
L1和L2具有上文给出的含义。
其中
m代表0或1；
§代表与活性物质分子的键且
§§代表与结合剂肽或-蛋白的键，且
L1和L2具有上文给出的含义。
[0129] 特别优选地，L1具有式–NR11B-，其中R11代表H或NH2；
B代表–[(CH2)x-(X4)y]w-(CH2)z-，
w = 0至20；
x = 0至5；
x = 0至5；
y = 0或1；
z = 0至5；且
X4代表–O-、-CONH-、–NHCO-或 。
B代表–[(CH2)x-(X4)y]w-(CH2)z-，
w = 0至20；
x = 0至5；
x = 0至5；
y = 0或1；
z = 0至5；且
X4代表–O-、-CONH-、–NHCO-或 。
[0130] 根据本发明优选的接头L具有下式：其中
#3代表与活性物质分子的键，
#4代表与结合剂肽或-蛋白的键，
R11代表H或NH2；
4
B代表–[(CH2)x-(X)y]w-(CH2)z-，
w = 0至20；
x = 0至5；
y = 0或1；
z = 1至5；且
X4代表–O-、-CONH-、–NHCO-或 。
#3代表与活性物质分子的键，
#4代表与结合剂肽或-蛋白的键，
R11代表H或NH2；
4
B代表–[(CH2)x-(X)y]w-(CH2)z-，
w = 0至20；
x = 0至5；
y = 0或1；
z = 1至5；且
X4代表–O-、-CONH-、–NHCO-或 。
[0131] 上文提到的接头在式(I)或(II)的缀合物中尤其优选，其中该接头通过替代R1处的氢原子或与可裂解接头SG1一起偶联至R4，即R1代表–L-#1或R4代表-SG1-L-#1，其中#1代
表与抗体的键。
表与抗体的键。
[0132] 根据本发明还优选的是下列接头：在根据本发明的缀合物中或在根据本发明的缀合物的混合物中，与抗体的半胱氨酸残基的键在优选大于80%，特别优选大于90%(在每种情
况下基于所述接头与抗体的键的总数计)的程度上特别优选以式A5或A6的两种结构之一存
在：
其中
#1表示与抗体的硫原子的连接点，
#2表示与基团L1的连接点，且
R22代表COOH、COOR、COR、CONR2、CONHR(其中R在每种情况下代表C1-3-烷基)、CONH2，优
选COOH。
况下基于所述接头与抗体的键的总数计)的程度上特别优选以式A5或A6的两种结构之一存
在：
其中
#1表示与抗体的硫原子的连接点，
#2表示与基团L1的连接点，且
R22代表COOH、COOR、COR、CONR2、CONHR(其中R在每种情况下代表C1-3-烷基)、CONH2，优
选COOH。
[0133] 在此，式A5或A6的结构通常一起存在，基于与抗体的键的数量计，优选以60:40至40:60的比率。剩余键此时作为下列结构存在
。
。
[0134] 连接至半胱氨酸侧链或半胱氨酸残基的其它接头–L-具有下式：其中
§代表与活性物质分子的键且
§§代表与结合剂肽或-蛋白的键，
m代表0、1、2或3；
n代表0、1或2；
p代表0至20；且
L3代表
其中
o代表0或1；
且
G3代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或环状
亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NMe-、-NHNH-、-
SO2NHNH-、-CONHNH-和具有最多4个选自N、O和S、-SO-或SO2的杂原子的3至10元(优选5至10
元)芳族或非芳族杂环中的一个或多个中断一次或多次，其中侧链(如果存在)可被–
NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
§代表与活性物质分子的键且
§§代表与结合剂肽或-蛋白的键，
m代表0、1、2或3；
n代表0、1或2；
p代表0至20；且
L3代表
其中
o代表0或1；
且
G3代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或环状
亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NMe-、-NHNH-、-
SO2NHNH-、-CONHNH-和具有最多4个选自N、O和S、-SO-或SO2的杂原子的3至10元(优选5至10
元)芳族或非芳族杂环中的一个或多个中断一次或多次，其中侧链(如果存在)可被–
NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
[0135] 在上式中，优选地，m代表1；
p代表0；
n代表0；
且L3代表
其中
o代表0或1；且
G3代表-(CH2CH2O)s(CH2)t(CONH)u CH2CH2O)v(CH2)w-，其中
s、t、v和w各自彼此独立地为0至20，且u是0或1。
p代表0；
n代表0；
且L3代表
其中
o代表0或1；且
G3代表-(CH2CH2O)s(CH2)t(CONH)u CH2CH2O)v(CH2)w-，其中
s、t、v和w各自彼此独立地为0至20，且u是0或1。
[0136] 上式§-(CO)m-L1-L2-§§中的优选基团L1是下示那些，其中r在每种情况下彼此独立地代表0至20，优选0至15，特别优选1至20，尤其优选2至10的数值：
。
。
[0137] 在表C中给出L1的进一步实例，其中这一基团突出标示在框中。
[0138] 在下表A和A’中给出接头部分L1的实例。该表还指出L1的这些实例优选与哪种基团L2组合，以及优选的偶联点(R1或R3或R4)和m的优选值，即在L1前是否存在羰基(参见§-
(CO)m-L1-L2-§§)。这些接头优选偶联至半胱氨酸残基。如果L2是琥珀酰亚胺或由其衍生而
得，这种酰亚胺也可以完全或部分为如上所述的水解开链琥珀酰胺的形式。根据L1，这种水
解成开链琥珀酰胺可以是或多或少显著或完全不明显的。
(CO)m-L1-L2-§§)。这些接头优选偶联至半胱氨酸残基。如果L2是琥珀酰亚胺或由其衍生而
得，这种酰亚胺也可以完全或部分为如上所述的水解开链琥珀酰胺的形式。根据L1，这种水
解成开链琥珀酰胺可以是或多或少显著或完全不明显的。
[0139] 表A**特别优选地，这些行中给出的接头L1连接至选自下列的接头L2：
和/或
其中#1表示与结合剂的硫原子的连接点，#2表示与基团L1的连接点，R22优选代表COOH。
在根据本发明的缀合物中或在根据本发明的缀合物的混合物中，与结合剂的半胱氨酸残基
的键在优选大于80%，特别优选大于90%(在每种情况下基于接头与结合剂的键的总数计)的
程度上特别优选以式A7或A8的两种结构之一存在。在此，式A7或A8的结构通常一起存在，基
于与结合剂的键的数量计，优选以60:40至40:60的比率。剩余键此时作为下列结构存在
**：参见表A的注释**。
***：当存在该结构L2时，可同时存在下式的结构L2：
。
和/或
其中#1表示与结合剂的硫原子的连接点，#2表示与基团L1的连接点，R22优选代表COOH。
在根据本发明的缀合物中或在根据本发明的缀合物的混合物中，与结合剂的半胱氨酸残基
的键在优选大于80%，特别优选大于90%(在每种情况下基于接头与结合剂的键的总数计)的
程度上特别优选以式A7或A8的两种结构之一存在。在此，式A7或A8的结构通常一起存在，基
于与结合剂的键的数量计，优选以60:40至40:60的比率。剩余键此时作为下列结构存在
**：参见表A的注释**。
***：当存在该结构L2时，可同时存在下式的结构L2：
。
[0140] 具有相应接头的缀合物的实例具有以下结构，其中X1代表CH，X2代表C且X3代表N且L1具有上文给出的含义，L2和L3具有与L1相同的含义，AK1代表经由半胱氨酸残基连接的
抗B7H3抗体且n是1至10的数值。AK1优选为人、人源化或嵌合单克隆抗体或其抗原结合片
段。特别优选地，AK1是特异性结合B7H3的人Ig4和/或人和/或鼠Ig2同种型的去糖基化的抗
B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源化变体例如TPP-6642和TPP-6850。
抗B7H3抗体且n是1至10的数值。AK1优选为人、人源化或嵌合单克隆抗体或其抗原结合片
段。特别优选地，AK1是特异性结合B7H3的人Ig4和/或人和/或鼠Ig2同种型的去糖基化的抗
B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源化变体例如TPP-6642和TPP-6850。
[0141] 如果该接头连接至赖氨酸侧链或赖氨酸残基，其优选具有下式：-§-(SG)x-L4-C(=O)-§§
其中
§代表与活性物质分子的键且
§§代表与结合剂肽或-蛋白的键，
x代表0或1，
SG代表可裂解基团，优选2-8寡肽，特别优选二肽，
且
L4代表单键或基团–(CO)y-G4-，其中y代表0或1，且
G4代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化
和/或环状亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NMe-、-
NHNH-、-SO2NHNH-、-CONHNH-和具有最多4个选自N、O和S、-SO-或-SO2-的杂原子的5至10元
芳族或非芳族杂环中的一个或多个中断一次或多次，其中侧链(如果存在)可被–NHCONH2、-
COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
其中
§代表与活性物质分子的键且
§§代表与结合剂肽或-蛋白的键，
x代表0或1，
SG代表可裂解基团，优选2-8寡肽，特别优选二肽，
且
L4代表单键或基团–(CO)y-G4-，其中y代表0或1，且
G4代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化
和/或环状亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NMe-、-
NHNH-、-SO2NHNH-、-CONHNH-和具有最多4个选自N、O和S、-SO-或-SO2-的杂原子的5至10元
芳族或非芳族杂环中的一个或多个中断一次或多次，其中侧链(如果存在)可被–NHCONH2、-
COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
[0142] 下表B给出与赖氨酸残基的接头的实例。该表还给出优选的缀合点(R1-R5)。第一列还指出使用相应接头的实施例号。
[0143] 表B：赖氨酸接头-§-(SG)x-L4-C(=O)-§§
[0144] 具有相应接头的缀合物的实例具有以下结构，其中X1代表CH，X2代表C且X3代表N且L4具有上文给出的含义，AK2代表经由赖氨酸残基连接的抗体且n是1至10的数值。优选的
AK2为人、人源化或嵌合单克隆抗B7H3抗体或其抗原结合片段。特别优选为特异性结合人
4Ig同种型的去糖基化的抗B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其去人源化变体例如
TPP-6642和TPP-6850。
AK2为人、人源化或嵌合单克隆抗B7H3抗体或其抗原结合片段。特别优选为特异性结合人
4Ig同种型的去糖基化的抗B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其去人源化变体例如
TPP-6642和TPP-6850。
[0145] 根据本发明还优选的是基本结构(i)、(ii)或(iv)，其中SG1或SG代表可被蛋白酶裂解的基团，且L1和L2具有上文给出的含义。特别优选的是下列基团：
-Val-Ala-CONH-(由此裂解丙氨酸的C-末端酰胺处的酰胺键)
-NH-Val-Lys-CONH-(裂解赖氨酸的C-末端酰胺处的酰胺键)
-NH-Val-Cit-CONH-(裂解瓜氨酸的C-末端酰胺处的酰胺键)
-NH-Phe-Lys-CONH(裂解赖氨酸的C-末端酰胺处的酰胺键)
-NH-Ala-Lys-CONH-(裂解赖氨酸的C-末端酰胺处的酰胺键)
-NH-Ala-Cit-CONH-(裂解瓜氨酸的C-末端酰胺处的酰胺键)。
-Val-Ala-CONH-(由此裂解丙氨酸的C-末端酰胺处的酰胺键)
-NH-Val-Lys-CONH-(裂解赖氨酸的C-末端酰胺处的酰胺键)
-NH-Val-Cit-CONH-(裂解瓜氨酸的C-末端酰胺处的酰胺键)
-NH-Phe-Lys-CONH(裂解赖氨酸的C-末端酰胺处的酰胺键)
-NH-Ala-Lys-CONH-(裂解赖氨酸的C-末端酰胺处的酰胺键)
-NH-Ala-Cit-CONH-(裂解瓜氨酸的C-末端酰胺处的酰胺键)。
[0146] SG1或SG特别优选是其中X代表H或可任选被–NHCONH2、-COOH、-OH、NH2、-NH-CNNH2或磺酸取代的C1-10-烷基。
[0147] 下表C给出接头部分–SG1-L1-或–L1-SG-L1-的实例，其中SG1或SG是可被蛋白酶裂解的基团。表C还指出–SG1-L1-或–L1-SG-L1-的这些实例优选与哪种基团L2组合，以及优选
1 5
的偶联点(R-R)和m的优选值，即在L1前是否存在羰基(参见§-(CO)m-L1-L2-§§)。这些接头
优选偶联至半胱氨酸残基。L1基团突出标示在框中。但是，这些基团L1可被对上式§-(CO)m-
L1-L2-§§给出的基团L1之一替代。如果L2是琥珀酰胺或由其衍生而得，这种酰胺也可以完
全或部分为如上所述的水解开链琥珀酰胺的形式。
1 5
的偶联点(R-R)和m的优选值，即在L1前是否存在羰基(参见§-(CO)m-L1-L2-§§)。这些接头
优选偶联至半胱氨酸残基。L1基团突出标示在框中。但是，这些基团L1可被对上式§-(CO)m-
L1-L2-§§给出的基团L1之一替代。如果L2是琥珀酰胺或由其衍生而得，这种酰胺也可以完
全或部分为如上所述的水解开链琥珀酰胺的形式。
[0148] 具有基本结构(i)的缀合物的实例具有以下结构，其中X1代表CH，X2代表C且X3代表N，L4具有与L1相同的含义，AK1代表经由半胱氨酸残基连接的抗B7H3抗体且n是1至10的
数值。该抗体优选为去糖基化的人、人源化或嵌合单克隆抗B7H3抗体或其抗原结合片段。特
别优选为特异性结合人4Ig同种型的抗B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源化
变体例如TPP-6642和TPP-6850。
数值。该抗体优选为去糖基化的人、人源化或嵌合单克隆抗B7H3抗体或其抗原结合片段。特
别优选为特异性结合人4Ig同种型的抗B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源化
变体例如TPP-6642和TPP-6850。
[0149] KSP抑制剂 - 接头中间体和该缀合物的制备根据本发明的缀合物通过首先为低分子量KSP抑制剂配备接头来制备。因为以该方式
获得的中间体然后与结合剂(优选抗体)反应。
获得的中间体然后与结合剂(优选抗体)反应。
[0150] 优选地，为了偶联至半胱氨酸残基，使下示化合物之一与为此目的任选部分还原的含半胱氨酸的结合剂如抗体反应：
其中R代表-H或–COOH，
其中K代表任选被C1-C6-烷氧基或–OH取代的直链或支化的C1-C6烷基，且
其中X1代表CH，X2代表C且X3代表N，SG1、L1、L2、L3和L4具有如上所述的相同含义。
其中R代表-H或–COOH，
其中K代表任选被C1-C6-烷氧基或–OH取代的直链或支化的C1-C6烷基，且
其中X1代表CH，X2代表C且X3代表N，SG1、L1、L2、L3和L4具有如上所述的相同含义。
[0151] 在上述化合物的每一个中和在下述化合物中，叔丁基可被环己基替代。
[0152] 该化合物可以例如以其三氟乙酸盐的形式使用。对于与结合剂例如抗体的反应，该化合物优选相对于该结合剂以2至12倍摩尔过量使用。
[0153] 优选地，为了偶联至赖氨酸残基，使下示化合物之一与含赖氨酸的结合剂如抗体反应：
其中X1代表CH，X2代表C且X3代表N且L4具有与L1相同的含义且L1具有与上文所述相同
的含义。
其中X1代表CH，X2代表C且X3代表N且L4具有与L1相同的含义且L1具有与上文所述相同
的含义。
[0154] 为了偶联至半胱氨酸残基的中间体，该反应可以如下所示：可以相应地使其它中间体和其它抗体反应。
[0155] 为了偶联至赖氨酸残基的中间体，该反应可以如下所示：根据本发明，这产生下列缀合物：
[0156] 根据接头，琥珀酰亚胺连接的ADC在缀合后可转化成具有有利的稳定性状况的开链琥珀酰胺。
[0158] 在上式中，X1代表CH，X2代表C且X3代表N，SG1和L1具有如上所述的相同含义且L2、L3和L4具有与L1相同的含义；R和K具有如上所述的相同含义。AK1是经半胱氨酸残基偶联的
抗B7H3抗体或其抗原结合片段且AK2是经赖氨酸残基偶联的抗B7H3抗体或其抗原结合片
段。AK1和AK2优选为去糖基化的抗B7H3抗体。特别优选地，AK1和AK2是特异性结合人4Ig同
种型的抗B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源化变体例如TPP-6642和TPP-
6850。
抗B7H3抗体或其抗原结合片段且AK2是经赖氨酸残基偶联的抗B7H3抗体或其抗原结合片
段。AK1和AK2优选为去糖基化的抗B7H3抗体。特别优选地，AK1和AK2是特异性结合人4Ig同
种型的抗B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源化变体例如TPP-6642和TPP-
6850。
[0159] 抗B7H3抗体缀合物所述抗体优选为去糖基化的人、人源化或嵌合单克隆抗B7H3抗体或其抗原结合片段。
特别优选为特异性结合人4Ig同种型的抗B7H3抗体或其抗原结合片段，特别是抗B7H3抗体
TPP-5706及其人源化变体例如TPP-6642和TPP-6850。在这种情况中，糖基化或去糖基化抗
体在Fc区的CH2结构域中的保守N-结合位点处不具有聚糖。文献还公开了有机分子共价偶
联(缀合)至抗体的各种可能性。根据本发明优选的是毒簇经由抗体的半胱氨酸残基的一个
或多个硫原子和/或经由抗体的赖氨酸残基的一个或多个NH基团缀合至抗体。但是，也可以
经由抗体的游离羧基或经由糖残基将毒簇结合至抗体。
特别优选为特异性结合人4Ig同种型的抗B7H3抗体或其抗原结合片段，特别是抗B7H3抗体
TPP-5706及其人源化变体例如TPP-6642和TPP-6850。在这种情况中，糖基化或去糖基化抗
体在Fc区的CH2结构域中的保守N-结合位点处不具有聚糖。文献还公开了有机分子共价偶
联(缀合)至抗体的各种可能性。根据本发明优选的是毒簇经由抗体的半胱氨酸残基的一个
或多个硫原子和/或经由抗体的赖氨酸残基的一个或多个NH基团缀合至抗体。但是，也可以
经由抗体的游离羧基或经由糖残基将毒簇结合至抗体。
[0160] 抗体可经由键连接到接头。抗体可经由所述结合剂的杂原子连接。抗体的根据本发明可用于连接的杂原子是硫(在一个实施方案中经由抗体的巯基)、氧(根据本发明借助
抗体的羧基或羟基)和氮(在一个实施方案中经由抗体的伯或仲胺基或酰胺基)。这些杂原
子可存在于天然抗体中或通过化学方法或分子生物学方法引入。根据本发明，抗体与毒簇
的连接对于抗体对靶分子的结合活性而言只有轻微影响。在一个优选实施方案中，该连接
对于抗体对靶分子的结合活性而言没有影响。
抗体的羧基或羟基)和氮(在一个实施方案中经由抗体的伯或仲胺基或酰胺基)。这些杂原
子可存在于天然抗体中或通过化学方法或分子生物学方法引入。根据本发明，抗体与毒簇
的连接对于抗体对靶分子的结合活性而言只有轻微影响。在一个优选实施方案中，该连接
对于抗体对靶分子的结合活性而言没有影响。
[0161] 根据本发明，术语“抗体”应以其最广的含义理解并包括免疫球蛋白分子，例如完整或修饰的单克隆抗体、多克隆抗体或多特异性抗体(例如双特异性抗体)。免疫球蛋白分
子优选包含具有通常通过二硫桥连接的四个多肽链(两个重链(H链)和两个轻链(L链))的
分子。各重链包含重链可变结构域(缩写为VH)和重链恒定结构域。重链恒定结构域可以例
如包含三个结构域CH1、CH2和CH3。各轻链包含可变结构域(缩写为VL)和恒定结构域。轻链
恒定结构域包含结构域(缩写为CL)。VH和VL结构域可进一步细分成高变区，也称作互补决
定区(缩写为CDR)，和具有低序列变异性的区(框架区，缩写为FR)。通常，各VH和VL区由三个
CDR和最多四个FR构成。例如以下列顺序从氨基末端到羧基末端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、
CDR3、FR4。抗体可获自每个对此合适的物种，例如兔、美洲驼、骆驼、小鼠或大鼠。在一个实
施方案中，该抗体为人或鼠来源的。该抗体可以例如是人、人源化或嵌合的。
子优选包含具有通常通过二硫桥连接的四个多肽链(两个重链(H链)和两个轻链(L链))的
分子。各重链包含重链可变结构域(缩写为VH)和重链恒定结构域。重链恒定结构域可以例
如包含三个结构域CH1、CH2和CH3。各轻链包含可变结构域(缩写为VL)和恒定结构域。轻链
恒定结构域包含结构域(缩写为CL)。VH和VL结构域可进一步细分成高变区，也称作互补决
定区(缩写为CDR)，和具有低序列变异性的区(框架区，缩写为FR)。通常，各VH和VL区由三个
CDR和最多四个FR构成。例如以下列顺序从氨基末端到羧基末端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、
CDR3、FR4。抗体可获自每个对此合适的物种，例如兔、美洲驼、骆驼、小鼠或大鼠。在一个实
施方案中，该抗体为人或鼠来源的。该抗体可以例如是人、人源化或嵌合的。
[0162] 术语“单克隆”抗体是指获自一群基本同质抗体的抗体，即该群的各个抗体除天然存在的突变(其可以少数出现)外是相同的。单克隆抗体以高特异性识别单个抗原结合位
点。术语单克隆抗体不涉及特定制备方法。
点。术语单克隆抗体不涉及特定制备方法。
[0163] 术语“完整”抗体是指包含抗原结合结构域和轻链和重链的恒定结构域的抗体。恒定结构域可以是天然存在的结构域或具有许多修饰的氨基酸位置的变体。
[0164] 术语“修饰的完整”抗体是指借助共价键(例如肽键)经由它们的氨基末端或羧基末端与不源自抗体的另一多肽或蛋白融合的完整抗体。此外，可以修饰抗体，以使得在定义
位置处引入反应性半胱氨酸以使偶联至毒簇变容易(参见Junutula等人Nat Biotechnol.
2008 Aug; 26(8):925-32)。
位置处引入反应性半胱氨酸以使偶联至毒簇变容易(参见Junutula等人Nat Biotechnol.
2008 Aug; 26(8):925-32)。
[0165] 术语“人”抗体是指可获自人类或作为合成人抗体的抗体。“合成”人抗体是部分或甚至完全地可由基于人抗体序列分析的合成序列计算机模拟获得的抗体。人抗体可以例如
由从人源性抗体序列库中分离的核酸编码。此类抗体的实例可见于Söderlind等人,
Nature Biotech. 2000, 18:853-856。
由从人源性抗体序列库中分离的核酸编码。此类抗体的实例可见于Söderlind等人,
Nature Biotech. 2000, 18:853-856。
[0166] 术语“人源化”或“嵌合”抗体描述由序列的非人部分和人部分组成的抗体。在这些抗体中，人免疫球蛋白的一部分序列(受体)被非人免疫球蛋白的序列部分(供体)替换。在
许多情况下，该供体是鼠免疫球蛋白。在人源化抗体的情况下，受体的CDR的氨基酸被供体
的氨基酸替换。有时，框架的氨基酸也被供体的相应氨基酸替换。在一些情况下，该人源化
抗体含有在抗体的优化过程中引入的既不包含于受体中又不包含于供体中的氨基酸。在嵌
合抗体的情况下，供体免疫球蛋白的可变结构域与人抗体的恒定区融合。
许多情况下，该供体是鼠免疫球蛋白。在人源化抗体的情况下，受体的CDR的氨基酸被供体
的氨基酸替换。有时，框架的氨基酸也被供体的相应氨基酸替换。在一些情况下，该人源化
抗体含有在抗体的优化过程中引入的既不包含于受体中又不包含于供体中的氨基酸。在嵌
合抗体的情况下，供体免疫球蛋白的可变结构域与人抗体的恒定区融合。
[0167] 如本文所用的术语互补决定区(CDR)是指对于结合至抗原所需的可变抗体结构域的那些氨基酸。通常，各可变区具有三个CDR区，其被称作CDR1、CDR2和CDR3。各CDR区可包含
根据Kabat定义的氨基酸和/或根据Chotia定义的高变环的氨基酸。根据Kabat的定义包含
例如来自大致可变轻链的氨基酸位置24 – 34(CDR1)、50 – 56(CDR2)和89 – 97(CDR3)和
可变重链的31 – 35(CDR1)、50 – 65(CDR2)和95 – 102(CDR3)的区域(Kabat等人,
Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service,
National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))。根据Chotia的定义包含例如
来自大致可变轻链的氨基酸位置26 – 32(CDR1)、50 – 52(CDR2)和91 –96(CDR3)和可变重
链的26 – 32(CDR1)、53 – 55(CDR2)和96 – 101(CDR3)的区域(Chothia和Lesk；J Mol
Biol 196: 901-917 (1987))。在一些情况下，CDR可包含来自根据Kabat和Chotia定义的
CDR区的氨基酸。
根据Kabat定义的氨基酸和/或根据Chotia定义的高变环的氨基酸。根据Kabat的定义包含
例如来自大致可变轻链的氨基酸位置24 – 34(CDR1)、50 – 56(CDR2)和89 – 97(CDR3)和
可变重链的31 – 35(CDR1)、50 – 65(CDR2)和95 – 102(CDR3)的区域(Kabat等人,
Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service,
National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))。根据Chotia的定义包含例如
来自大致可变轻链的氨基酸位置26 – 32(CDR1)、50 – 52(CDR2)和91 –96(CDR3)和可变重
链的26 – 32(CDR1)、53 – 55(CDR2)和96 – 101(CDR3)的区域(Chothia和Lesk；J Mol
Biol 196: 901-917 (1987))。在一些情况下，CDR可包含来自根据Kabat和Chotia定义的
CDR区的氨基酸。
[0168] 根据重链恒定结构域的氨基酸序列，可以将抗体分成不同种类。完整抗体有五大类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中几种可分成进一步的亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、
IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。与不同种类对应的重链恒定结构域被称作[alpha/α]、[delta/δ]、
[epsilon/ε]、[gamma/γ]和[my/μ]。抗体的三维结构和亚基结构都是已知的。
IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。与不同种类对应的重链恒定结构域被称作[alpha/α]、[delta/δ]、
[epsilon/ε]、[gamma/γ]和[my/μ]。抗体的三维结构和亚基结构都是已知的。
[0169] 抗体/免疫球蛋白的术语“功能片段”或“抗原结合抗体片段”被定义为仍包含抗体/免疫球蛋白的抗原结合结构域的抗体/免疫球蛋白片段(例如IgG的可变结构域)。抗体
的“抗原结合结构域”通常包含抗体的一个或多个高变区，例如CDR、CDR2和/或CDR3区。但
是，抗体的“框架”或“骨架”区在抗体结合至抗原的过程中也可起到作用。框架区构成CDR的
骨架。抗原结合结构域优选至少包含可变轻链的氨基酸4至103和可变重链的氨基酸5至
109，更优选可变轻链的氨基酸3至107和可变重链的4至111，特别优选为完整的可变轻链和
重链，即VL的氨基酸1 – 109和VH的1至113(根据WO97/08320编号)。
的“抗原结合结构域”通常包含抗体的一个或多个高变区，例如CDR、CDR2和/或CDR3区。但
是，抗体的“框架”或“骨架”区在抗体结合至抗原的过程中也可起到作用。框架区构成CDR的
骨架。抗原结合结构域优选至少包含可变轻链的氨基酸4至103和可变重链的氨基酸5至
109，更优选可变轻链的氨基酸3至107和可变重链的4至111，特别优选为完整的可变轻链和
重链，即VL的氨基酸1 – 109和VH的1至113(根据WO97/08320编号)。
[0170] 本发明的“功能片段”或“抗原结合抗体片段”非穷举地包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段、双价抗体、单结构域抗体(DAb)、线性抗体、单链抗体(单链Fv，缩写为scFv)；和多特
异性抗体，如双和三特异性抗体，其例如由抗体片段形成，C. A. K Borrebaeck编辑(1995)
Antibody Engineering (Breakthroughs in Molecular Biology), Oxford University
Press；R. Kontermann & S. Duebel, 编辑 (2001) Antibody Engineering (Springer
Laboratory Manual), Springer Verlag。非“多特异性”或“多功能”抗体的抗体是具有相
同结合位点的那些。多特异性抗体可对抗原的不同表位是特异性的或可对多于一种抗原的
表位是特异性的(参见例如WO 93/17715；WO 92/08802；WO 91/00360；WO 92/05793；Tutt,
等人, 1991, J. Immunol. 147:60 69；美国专利号4,474,893；4,714,681；4,925,648；5,
573,920；5,601,819；或Kostelny等人, 1992, J. Immunol. 148: 1547 1553)。可以构建F
(ab’)2或Fab分子，以使得可以减少或完全防止在Ch1和CL结构域之间发生的分子间二硫化
物相互作用的数量。
异性抗体，如双和三特异性抗体，其例如由抗体片段形成，C. A. K Borrebaeck编辑(1995)
Antibody Engineering (Breakthroughs in Molecular Biology), Oxford University
Press；R. Kontermann & S. Duebel, 编辑 (2001) Antibody Engineering (Springer
Laboratory Manual), Springer Verlag。非“多特异性”或“多功能”抗体的抗体是具有相
同结合位点的那些。多特异性抗体可对抗原的不同表位是特异性的或可对多于一种抗原的
表位是特异性的(参见例如WO 93/17715；WO 92/08802；WO 91/00360；WO 92/05793；Tutt,
等人, 1991, J. Immunol. 147:60 69；美国专利号4,474,893；4,714,681；4,925,648；5,
573,920；5,601,819；或Kostelny等人, 1992, J. Immunol. 148: 1547 1553)。可以构建F
(ab’)2或Fab分子，以使得可以减少或完全防止在Ch1和CL结构域之间发生的分子间二硫化
物相互作用的数量。
[0171] “表位”是指能特异性结合至免疫球蛋白或T细胞受体的蛋白决定簇。表位决定簇通常由分子的化学活性表面基团如氨基酸或糖侧链或其组合构组成，并通常具有特定的三
维结构性质以及特定的电荷性质。
维结构性质以及特定的电荷性质。
[0172] “功能片段”或“抗原结合抗体片段”可经由其氨基末端或羧基末端借助共价键(例如肽键)与不源自抗体的另一多肽或蛋白融合。此外，可通过在特定位置处引入反应性半胱
氨酸而修饰抗体和抗原结合片段，以使偶联至毒簇变容易(参见Junutula等人Nat
Biotechnol. 2008 Aug；26(8):925-32)。
氨酸而修饰抗体和抗原结合片段，以使偶联至毒簇变容易(参见Junutula等人Nat
Biotechnol. 2008 Aug；26(8):925-32)。
[0173] 多克隆抗体可通过本领域普通技术人员已知的方法制备。单克隆抗体可通过本领域普通技术人员已知的方法制备(Köhler和Milstein, Nature, 256, 495-497, 1975)。人
和人源化单克隆抗体可通过本领域普通技术人员已知的方法制备(Olsson等人, Meth
Enzymol. 92, 3-16或Cabilly等人US 4,816,567或Boss等人US 4,816,397)。
和人源化单克隆抗体可通过本领域普通技术人员已知的方法制备(Olsson等人, Meth
Enzymol. 92, 3-16或Cabilly等人US 4,816,567或Boss等人US 4,816,397)。
[0174] 本领域普通技术人员了解制备人抗体及其片段的各种方法，例如借助转基因小鼠(N Lonberg和D Huszar, Int Rev Immunol. 1995；13(1):65-93)或噬菌体展示技术
(Clackson等人, Nature. 1991年8月15日；352(6336):624-8)。本发明的抗体可获自例如
由汇集自大量健康志愿者的多种多样抗体的氨基酸序列组成的重组抗体库。抗体也可借助
已知的重组DNA技术制备。抗体的核酸序列可通过常规测序获得或可获自可公开访问的数
据库。
(Clackson等人, Nature. 1991年8月15日；352(6336):624-8)。本发明的抗体可获自例如
由汇集自大量健康志愿者的多种多样抗体的氨基酸序列组成的重组抗体库。抗体也可借助
已知的重组DNA技术制备。抗体的核酸序列可通过常规测序获得或可获自可公开访问的数
据库。
[0175] “分离的”抗体或结合剂已经纯化以除去细胞的其它成分。可能干扰诊断或治疗用途的细胞的污染成分是例如酶、激素或细胞的其它肽或非肽成分。抗体或结合剂优选地已
纯化基于该抗体或结合剂计的大于95重量%(例如通过Lowry法、UV-Vis光谱学或通过SDS毛
细管凝胶电泳测定)。此外，已纯化至可以决定氨基末端或内部氨基酸序列的至少15个氨基
酸或已纯化至同质性的抗体，其中同质性通过SDS-PAGE在还原或非还原条件下测定(可以
借助考马斯蓝染色或优选通过银着色进行检测)。但是，通常通过一个或多个纯化步骤制备
抗体。
纯化基于该抗体或结合剂计的大于95重量%(例如通过Lowry法、UV-Vis光谱学或通过SDS毛
细管凝胶电泳测定)。此外，已纯化至可以决定氨基末端或内部氨基酸序列的至少15个氨基
酸或已纯化至同质性的抗体，其中同质性通过SDS-PAGE在还原或非还原条件下测定(可以
借助考马斯蓝染色或优选通过银着色进行检测)。但是，通常通过一个或多个纯化步骤制备
抗体。
[0176] 术语“特异性结合”或“特异性地结合”是指抗体或结合剂结合至预定抗原/靶分子。抗体或结合剂的特异性结合通常描述具有至少10-7 M的亲和力(作为Kd值；即优选为具
-7
有比10 M更小的Kd值的那些)的抗体或结合剂，其中该抗体或结合剂对预定抗原/靶分子
的亲和力为对不是预定抗原/靶分子或密切相关抗原/靶分子的非特异性抗原/靶分子(例
如牛血清白蛋白或酪蛋白)的至少两倍。该抗体优选具有至少10-7 M(作为Kd值；换言之优选
为具有比10-7 M更小的Kd值的那些)，优选至少10-8 M，更优选10-9 M至10-11 M的亲和力。可
以例如借助表面等离子体共振波谱法测定Kd值。
-7
有比10 M更小的Kd值的那些)的抗体或结合剂，其中该抗体或结合剂对预定抗原/靶分子
的亲和力为对不是预定抗原/靶分子或密切相关抗原/靶分子的非特异性抗原/靶分子(例
如牛血清白蛋白或酪蛋白)的至少两倍。该抗体优选具有至少10-7 M(作为Kd值；换言之优选
为具有比10-7 M更小的Kd值的那些)，优选至少10-8 M，更优选10-9 M至10-11 M的亲和力。可
以例如借助表面等离子体共振波谱法测定Kd值。
[0177] 本发明的抗体/活性物质缀合物同样表现出在这些范围内的亲和力。该亲和力优选基本不受活性物质缀合的影响(一般而言，该亲和力降低小于一个量级，换言之，例如最
多从10-8 M至10-7 M)。
多从10-8 M至10-7 M)。
[0178] 根据本发明使用的抗体也优选以高选择性为特征。当本发明的抗体对靶蛋白表现出的亲和力为对非依赖性的其它抗原，例如人血清白蛋白的至少2倍，优选5倍或更优选10
倍(可以例如借助表面等离子体共振波谱法测定亲和力)，则存在高选择性。
倍(可以例如借助表面等离子体共振波谱法测定亲和力)，则存在高选择性。
[0179] 此外，所用的本发明的抗体优选是交叉反应性的。为了能够促进和更好地解释临床前研究，例如毒理学或效力研究(例如在异种移植小鼠中)，如果根据本发明使用的抗体
不仅结合人靶蛋白、还结合用于研究的物种中的物种靶蛋白，则是有利的。在一个实施方案
中，根据本发明使用的抗体除人靶蛋白外还对至少一个其它物种的靶蛋白呈交叉反应性。
对于毒理学和效力研究，优选使用啮齿科、犬科和非人灵长科的物种。优选的啮齿物种是小
鼠和大鼠。优选的非人灵长类动物是猕猴、猩猩和长尾猕猴。
不仅结合人靶蛋白、还结合用于研究的物种中的物种靶蛋白，则是有利的。在一个实施方案
中，根据本发明使用的抗体除人靶蛋白外还对至少一个其它物种的靶蛋白呈交叉反应性。
对于毒理学和效力研究，优选使用啮齿科、犬科和非人灵长科的物种。优选的啮齿物种是小
鼠和大鼠。优选的非人灵长类动物是猕猴、猩猩和长尾猕猴。
[0180] 在一个实施方案中，根据本发明使用的抗体除人靶蛋白外还对选自小鼠、大鼠和长尾猕猴(食蟹猴)的至少一个其它物种的靶蛋白呈交叉反应性。尤其优选的是除人靶蛋白
外至少对小鼠靶蛋白呈交叉反应性的根据本发明使用的抗体。优选的是对其它非人物种的
靶蛋白的亲和力与对人靶蛋白的亲和力相差不大于50倍，特别是不大于10倍的交叉反应性
抗体。
外至少对小鼠靶蛋白呈交叉反应性的根据本发明使用的抗体。优选的是对其它非人物种的
靶蛋白的亲和力与对人靶蛋白的亲和力相差不大于50倍，特别是不大于10倍的交叉反应性
抗体。
[0181] 针对癌症靶分子的抗体结合剂，例如抗体或其抗原结合片段所针对的靶分子优选是癌症靶分子。术语“癌症靶
分子”描述与相同组织类型的非癌细胞相比更大量存在于一种或多种癌细胞种类上的靶分
子。优选地，癌症靶分子与相同组织类型的非癌细胞相比选择性存在于一种或多种癌细胞
种类上，其中选择性描述与相同组织类型的非癌细胞相比至少两倍富集在癌细胞上(“选择
性癌症靶分子”)。癌症靶分子的使用允许通过根据本发明的缀合物选择性治疗癌细胞。
分子”描述与相同组织类型的非癌细胞相比更大量存在于一种或多种癌细胞种类上的靶分
子。优选地，癌症靶分子与相同组织类型的非癌细胞相比选择性存在于一种或多种癌细胞
种类上，其中选择性描述与相同组织类型的非癌细胞相比至少两倍富集在癌细胞上(“选择
性癌症靶分子”)。癌症靶分子的使用允许通过根据本发明的缀合物选择性治疗癌细胞。
[0182] 在此，特别优选细胞外癌症靶分子B7H3 (SEQ ID NO: Q5ZPR3 (蛋白质); SEQ ID NO: 80381 (DNA)。
[0183] 结合癌症靶分子的抗体可由本领域普通技术人员使用已知方法制备，例如化学合成或重组表达。用于癌症靶分子的结合剂可以商业获得或可以由本领域普通技术人员使用
已知方法制备，例如化学合成或重组表达。在WO 2007/070538(参见第22页“抗体”)中描述
了用于制备抗体或抗原结合抗体片段的其它方法。本领域技术人员知道如所谓的噬菌体展
示库(例如Morphosys HuCAL Gold)的方法可编制且可用于发现抗体或抗原结合抗体片段
(参见WO 2007/070538，第24页及其后和第70页中的AK实施例1、第72页中的AK实施例2)。例
如在第26页中(WO 2007/070538)描述了使用来自B细胞的DNA库制备抗体的其它方法。抗体
的人源化方法描述在WO2007070538的第30-32页中并详细描述在Queen等人, Pros. Natl.
Acad. Sci. USA 86:10029-10033, 1989或WO 90/0786中。此外，通常蛋白，特别是抗体的
重组表达方法是本领域技术人员已知的(参见例如Berger和Kimrnel (Guide to
Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymology, Vo1. 152, Academic
Press, Inc.); Sambrook,等人, (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (第二
版, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Cold Spring Harbor, N.Y.; 1989) Vol.
1-3); Current Protocols in Molecular Biology, (F. M. Ausabel等人 [编],
Current Protocols, Green Publishing Associates, Inc. / John Wiley & Sons,
Inc.); Harlow等人, (Monoclonal Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring
Harbor Laboratory Press (19881, Paul [编]); Fundamental Immunology,
(Lippincott Williams & Wilkins (1998));和Harlow,等人, (Using Antibodies: A
Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1998))。本领域技术人员
知道对于蛋白/抗体的表达所必需的相应载体、启动子和信号肽。常见方法也描述在WO
2007/070538第41-45页中。例如在WO 2007/070538第74页及其后的实施例6中描述了制备
IgG1抗体的方法。可用于测定抗体在结合至其抗原后的内化的方法是技术人员已知的并例
如描述在WO 2007/070538第80页中。本领域技术人员能够使用WO 2007/070538中描述的方
法，其已用于与具有另外靶分子特异性的抗体的制备类似地制备碳酸酐酶IX (Mn)抗体。
已知方法制备，例如化学合成或重组表达。在WO 2007/070538(参见第22页“抗体”)中描述
了用于制备抗体或抗原结合抗体片段的其它方法。本领域技术人员知道如所谓的噬菌体展
示库(例如Morphosys HuCAL Gold)的方法可编制且可用于发现抗体或抗原结合抗体片段
(参见WO 2007/070538，第24页及其后和第70页中的AK实施例1、第72页中的AK实施例2)。例
如在第26页中(WO 2007/070538)描述了使用来自B细胞的DNA库制备抗体的其它方法。抗体
的人源化方法描述在WO2007070538的第30-32页中并详细描述在Queen等人, Pros. Natl.
Acad. Sci. USA 86:10029-10033, 1989或WO 90/0786中。此外，通常蛋白，特别是抗体的
重组表达方法是本领域技术人员已知的(参见例如Berger和Kimrnel (Guide to
Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymology, Vo1. 152, Academic
Press, Inc.); Sambrook,等人, (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (第二
版, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Cold Spring Harbor, N.Y.; 1989) Vol.
1-3); Current Protocols in Molecular Biology, (F. M. Ausabel等人 [编],
Current Protocols, Green Publishing Associates, Inc. / John Wiley & Sons,
Inc.); Harlow等人, (Monoclonal Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring
Harbor Laboratory Press (19881, Paul [编]); Fundamental Immunology,
(Lippincott Williams & Wilkins (1998));和Harlow,等人, (Using Antibodies: A
Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1998))。本领域技术人员
知道对于蛋白/抗体的表达所必需的相应载体、启动子和信号肽。常见方法也描述在WO
2007/070538第41-45页中。例如在WO 2007/070538第74页及其后的实施例6中描述了制备
IgG1抗体的方法。可用于测定抗体在结合至其抗原后的内化的方法是技术人员已知的并例
如描述在WO 2007/070538第80页中。本领域技术人员能够使用WO 2007/070538中描述的方
法，其已用于与具有另外靶分子特异性的抗体的制备类似地制备碳酸酐酶IX (Mn)抗体。
[0184] 本发明的抗体被糖基化或去糖基化，即在后一情况下，其在Fc区的CH2结构域中的保守N-结合位点不具有聚糖。
[0185] 抗B7H3抗体根据本发明，利用抗B7H3抗体或其抗原结合片段，优选TPP5706或由其衍生的抗体。另
外，本领域技术人员熟悉结合B7H3的抗体，参见例如US6965018、EP2121008描述了抗B7H3抗
体8H9及其CDR序列。TPP3803含有人IgG1情况下的这些CDR 序列。
外，本领域技术人员熟悉结合B7H3的抗体，参见例如US6965018、EP2121008描述了抗B7H3抗
体8H9及其CDR序列。TPP3803含有人IgG1情况下的这些CDR 序列。
[0186] 本发明尤其涉及具有以下特性的抗体或其抗原结合抗体片段或其变体的缀合物：特异性结合人B7H3，即不结合人B7H2或人B7H4；体外和体内有效和特异性杀死表达B7H3的
肿瘤细胞。根据本发明的抗体结合在进行结合后尤其适于内化的表位。同时，根据本发明的
抗体的特征在于当用于人类中时通过根据本发明的抗体的氨基酸序列与相应人种系序列
基本相似而实现的低免疫原性。
肿瘤细胞。根据本发明的抗体结合在进行结合后尤其适于内化的表位。同时，根据本发明的
抗体的特征在于当用于人类中时通过根据本发明的抗体的氨基酸序列与相应人种系序列
基本相似而实现的低免疫原性。
[0187] TPP5706及其衍生物的产生抗B7H3抗体已描述在相关文献中；因此例如US 6965018公开了由杂交瘤PTA-4058分泌
的鼠抗B7H3抗体。通过使用标准方法，我们已测定了这一抗体的氨基酸序列。TPP5706是衍
生自这一抗体的鼠Fv与人IgG1的Ch1-Ch3区的嵌合体。相应的DNA序列插入哺乳动物IgG表
达载体中，并作为全长IgG表达。例如瞬时地在哺乳动物细胞中表达这些构造体
(Konstrukte)，如描述在Tom等人, 第12章, Methods Express: Expression Systems, 由
Michael R、Dyson和Yves Durocher编辑, Scion Publishing Ltd, 2007。该抗体通过蛋白
A色谱法纯化，其与人B7H3以及人B7H2和B7H4的结合通过Elisa表征，如描述在AK-实施例1。
此外，与TPP5706的活性物质缀合物的功效在体外和体内测试，如描述在实施例C-1、C-2和
C-6。在随后的结合剂人源化过程中，识别TPP5706的多种人源化衍生物，特别是TPP6642和
TPP6850，如描述在AK-实施例1。在这些抗体中，鼠序列已基本上被人类序列替换，而B7H3结
合特性没有显著改变。
的鼠抗B7H3抗体。通过使用标准方法，我们已测定了这一抗体的氨基酸序列。TPP5706是衍
生自这一抗体的鼠Fv与人IgG1的Ch1-Ch3区的嵌合体。相应的DNA序列插入哺乳动物IgG表
达载体中，并作为全长IgG表达。例如瞬时地在哺乳动物细胞中表达这些构造体
(Konstrukte)，如描述在Tom等人, 第12章, Methods Express: Expression Systems, 由
Michael R、Dyson和Yves Durocher编辑, Scion Publishing Ltd, 2007。该抗体通过蛋白
A色谱法纯化，其与人B7H3以及人B7H2和B7H4的结合通过Elisa表征，如描述在AK-实施例1。
此外，与TPP5706的活性物质缀合物的功效在体外和体内测试，如描述在实施例C-1、C-2和
C-6。在随后的结合剂人源化过程中，识别TPP5706的多种人源化衍生物，特别是TPP6642和
TPP6850，如描述在AK-实施例1。在这些抗体中，鼠序列已基本上被人类序列替换，而B7H3结
合特性没有显著改变。
[0188] 此外，这些抗体的氨基酸序列与常见人类种系序列的比较鉴定出能够提高抗体序列与人种系序列之间的相似度的一系列氨基酸替换。
[0189] 抗B7H3抗体的具体实施方案在本申请中，提及以下优选抗体，如下表中所示：TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850和TPP-
3803。
3803。
[0190] TPP-5706是包含对应于SEQ ID NO:9的重链区和对应于SEQ ID NO:10的轻链区的抗体。
[0191] TPP-6642是包含对应于SEQ ID NO:19的重链区和对应于SEQ ID NO:20的轻链区的抗体。
[0192] TPP-6850是包含对应于SEQ ID NO:29的重链区和对应于SEQ ID NO:30的轻链区的抗体。
[0193] TPP-3803是包含对应于SEQ ID NO:39的重链区和对应于SEQ ID NO:40的轻链区的抗体。
[0194] TPP-5706是：包含对应于SEQ ID NO:1的重链可变区和对应于SEQ ID NO:5的轻链可变区的抗体。
[0195] TPP-6642是：包含对应于SEQ ID NO:11的重链可变区和对应于SEQ ID NO:15的轻链可变区的抗体。
[0196] TPP-6850是：包含对应于SEQ ID NO:21的重链可变区和对应于SEQ ID NO:25的轻链可变区的抗体。
[0197] TPP-3803是：包含对应于SEQ ID NO:31的重链可变区和对应于SEQ ID NO:35的轻链可变区的抗体。
[0198] 用于与根据本发明的接头和/或毒簇偶联的抗B7H3抗体的优选实施方案为下述抗体：
1. 由杂交瘤PTA-4058产生的抗B7H3抗体或其抗原结合片段。
1. 由杂交瘤PTA-4058产生的抗B7H3抗体或其抗原结合片段。
[0199] 2. 由杂交瘤PTA-4058产生的抗B7H3抗体的嵌合或人源化变体或其抗原结合片段。
[0200] 3. 结合如示于SEQ ID NO: 41的多肽的根据实施方案1或2任一项的抗B7H3抗体或其抗原结合片段。SEQ ID NO: 41表示人B7H3多肽的胞外域的氨基酸序列。
[0201] 4. 结合B7H3的抗体或其抗原结合片段，其包含：可变重链，其包含如SEQ ID NO:2中所示的重链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:3中所
示的重链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:4中所示的重链的可变CDR3序列，和
可变轻链，其包含如SEQ ID NO:6中所示的轻链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:7中所
示的轻链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:8中所示的轻链的可变CDR3序列，或
可变重链，其包含如SEQ ID NO:12中所示的重链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:13中
所示的重链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:14中所示的重链的可变CDR3序列，和
可变轻链，其包含如SEQ ID NO:16中所示的轻链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:17中
所示的轻链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:18中所示的轻链的可变CDR3序列，或
可变重链，其包含如SEQ ID NO:22中所示的重链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:23中
所示的重链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:24中所示的重链的可变CDR3序列，和
可变轻链，其包含如SEQ ID NO:26中所示的轻链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:27中
所示的轻链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:28中所示的轻链的可变CDR3序列，或
可变重链，其包含如SEQ ID NO:32中所示的重链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:33中
所示的重链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:34中所示的重链的可变CDR3序列，和
可变轻链，其包含如SEQ ID NO:36中所示的轻链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:37中
所示的轻链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:38中所示的轻链的可变CDR3序列。
示的重链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:4中所示的重链的可变CDR3序列，和
可变轻链，其包含如SEQ ID NO:6中所示的轻链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:7中所
示的轻链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:8中所示的轻链的可变CDR3序列，或
可变重链，其包含如SEQ ID NO:12中所示的重链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:13中
所示的重链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:14中所示的重链的可变CDR3序列，和
可变轻链，其包含如SEQ ID NO:16中所示的轻链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:17中
所示的轻链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:18中所示的轻链的可变CDR3序列，或
可变重链，其包含如SEQ ID NO:22中所示的重链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:23中
所示的重链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:24中所示的重链的可变CDR3序列，和
可变轻链，其包含如SEQ ID NO:26中所示的轻链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:27中
所示的轻链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:28中所示的轻链的可变CDR3序列，或
可变重链，其包含如SEQ ID NO:32中所示的重链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:33中
所示的重链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:34中所示的重链的可变CDR3序列，和
可变轻链，其包含如SEQ ID NO:36中所示的轻链的可变CDR1序列，如SEQ ID NO:37中
所示的轻链的可变CDR2序列和如SEQ ID NO:38中所示的轻链的可变CDR3序列。
[0202] 5. 根据实施方案4所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：如SEQ ID NO:1中所示的重链的可变序列和如SEQ ID NO:5中所示的轻链的可变序列，
或
如SEQ ID NO:11中所示的重链的可变序列和如SEQ ID NO:15中所示的轻链的可变序
列，或
如SEQ ID NO:21中所示的重链的可变序列和如SEQ ID NO:25中所示的轻链的可变序
列，或
如SEQ ID NO:31中所示的重链的可变序列和如SEQ ID NO:35中所示的轻链的可变序
列。根据前述权利要求任一项所述的缀合物，其中抗B7H3抗体是IgG抗体。
或
如SEQ ID NO:11中所示的重链的可变序列和如SEQ ID NO:15中所示的轻链的可变序
列，或
如SEQ ID NO:21中所示的重链的可变序列和如SEQ ID NO:25中所示的轻链的可变序
列，或
如SEQ ID NO:31中所示的重链的可变序列和如SEQ ID NO:35中所示的轻链的可变序
列。根据前述权利要求任一项所述的缀合物，其中抗B7H3抗体是IgG抗体。
[0203] 6. 根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其包含：如SEQ ID NO:9中所示的重链的序列以及如SEQ ID NO:10中所示的轻链的序列，或
如SEQ ID NO:19中所示的重链的序列以及如SEQ ID NO:20中所示的轻链的序列，或
如SEQ ID NO:29中所示的重链的序列以及如SEQ ID NO:30中所示的轻链的序列，或
如SEQ ID NO:39中所示的重链的序列以及如SEQ ID NO:40中所示的轻链的序列。
如SEQ ID NO:19中所示的重链的序列以及如SEQ ID NO:20中所示的轻链的序列，或
如SEQ ID NO:29中所示的重链的序列以及如SEQ ID NO:30中所示的轻链的序列，或
如SEQ ID NO:39中所示的重链的序列以及如SEQ ID NO:40中所示的轻链的序列。
[0204] 7. 根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗B7H3抗体是抗体TPP6642和TPP6850之一的人源化变体。
[0205] 8. 根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其包含：如SEQ ID NO:19中所示的重链的序列，其含有至少一个选自包含以下替换的组的氨基
酸替换：I31S、N33Y、V34M、T50I、F52N、G54S、N55G、D57S、N61A、K65Q、D66G、K67R、T72R、A79V，和
如SEQ ID NO:20中所示的轻链的序列，其含有至少一个选自包含以下替换的组的氨基
酸替换：E27Q、N28S、N30S、N31S、T34N、F36Y、Q40P、S43A、Q45K、H50A、K52S、T53S、A55Q、E56S、H90Q、H91S、G93S、P96L，或
如SEQ ID NO:29中所示的重链的序列，其含有至少一个选自包含以下替换的组的氨基
酸替换：I31S、N33G、V34I、H35S、I37V、T50W、F52S、P53A、G54Y、D57N、S59N、N61A、F64L、K65Q、D66G、A68V、L70M、K74T、K77S、A107Q，和
如SEQ ID NO:30中所示的轻链的序列，其含有至少一个选自包含以下替换的组的氨基
酸替换：E27Q、N28S、N30S、N31S、T34N、F36Y、V48I、H50A、K52S、T53S、A55Q、E56S、Q70D、H90Q、H91S、G93S。
酸替换：I31S、N33Y、V34M、T50I、F52N、G54S、N55G、D57S、N61A、K65Q、D66G、K67R、T72R、A79V，和
如SEQ ID NO:20中所示的轻链的序列，其含有至少一个选自包含以下替换的组的氨基
酸替换：E27Q、N28S、N30S、N31S、T34N、F36Y、Q40P、S43A、Q45K、H50A、K52S、T53S、A55Q、E56S、H90Q、H91S、G93S、P96L，或
如SEQ ID NO:29中所示的重链的序列，其含有至少一个选自包含以下替换的组的氨基
酸替换：I31S、N33G、V34I、H35S、I37V、T50W、F52S、P53A、G54Y、D57N、S59N、N61A、F64L、K65Q、D66G、A68V、L70M、K74T、K77S、A107Q，和
如SEQ ID NO:30中所示的轻链的序列，其含有至少一个选自包含以下替换的组的氨基
酸替换：E27Q、N28S、N30S、N31S、T34N、F36Y、V48I、H50A、K52S、T53S、A55Q、E56S、Q70D、H90Q、H91S、G93S。
[0206] 9. 根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其为IgG抗体。
[0207] 10. 根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其包含：根据前述实施方案中任一项所述的抗原结合片段或根据前述实施方案中任一项所述的抗体的抗原结合片段，其为
scFv、Fab、Fab ̓ 片段或F(ab)2片段。
scFv、Fab、Fab ̓ 片段或F(ab)2片段。
[0208] 11. 根据前述实施方案中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其为单克隆抗体或其抗原结合片段。
[0209] 12. 根据前述实施方案中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其为人、人源化或嵌合抗体或抗原结合片段。
[0210] 特别优选为抗B7H3抗体TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850和TPP-3803。因此，本发明还提供具有以下氨基酸替换的人源化衍生物TPP6642和TPP6850，其中E27Q意指在各自的人
源化衍生物的相应链的氨基酸位置27处E被Q替换，N28S意指在各自的人源化衍生物的相应
链的位置28处N被S替换，等等。
源化衍生物的相应链的氨基酸位置27处E被Q替换，N28S意指在各自的人源化衍生物的相应
链的位置28处N被S替换，等等。
[0211] 同位素、盐、溶剂合物、同位素变体本发明还包括本发明的化合物的所有合适的同位素变体。本发明的化合物的同位素变
体在此被理解为是指本发明的化合物内的至少一个原子已被具有相同原子序数但原子质
量不同于自然界中通常或主要存在的原子质量的另一原子替换的化合物。可并入本发明的
化合物中的同位素的实例是氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘的同位素，如2H(氘)、3H
(氚)、13C、14C、15N、17O、18O、32P、33P、33S、34S、35S、36S、18F、36Cl、82Br、123I、124I、129I和131I。本发明的化合物的特定同位素变体，尤其是其中已并入一个或多个放射性同位素的那些，可能有
3 14
益于例如检查作用机制或体内的活性物质分布；由于比较容易制备和检测，用H或 C同位
素标记的化合物尤其适用于此用途。此外，同位素，例如氘的并入可由于该化合物的更大代
谢稳定性而带来特定治疗益处，例如体内半衰期的延长或所需活性剂量的降低；本发明的
化合物的此类改性因此任选也可构成本发明的优选实施方案。可通过本领域技术人员已知
的方法，例如通过下述方法和实施例中描述的程序、通过使用各自的试剂和/或起始化合物
的相应同位素改性来制备本发明的化合物的同位素变体。
体在此被理解为是指本发明的化合物内的至少一个原子已被具有相同原子序数但原子质
量不同于自然界中通常或主要存在的原子质量的另一原子替换的化合物。可并入本发明的
化合物中的同位素的实例是氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘的同位素，如2H(氘)、3H
(氚)、13C、14C、15N、17O、18O、32P、33P、33S、34S、35S、36S、18F、36Cl、82Br、123I、124I、129I和131I。本发明的化合物的特定同位素变体，尤其是其中已并入一个或多个放射性同位素的那些，可能有
3 14
益于例如检查作用机制或体内的活性物质分布；由于比较容易制备和检测，用H或 C同位
素标记的化合物尤其适用于此用途。此外，同位素，例如氘的并入可由于该化合物的更大代
谢稳定性而带来特定治疗益处，例如体内半衰期的延长或所需活性剂量的降低；本发明的
化合物的此类改性因此任选也可构成本发明的优选实施方案。可通过本领域技术人员已知
的方法，例如通过下述方法和实施例中描述的程序、通过使用各自的试剂和/或起始化合物
的相应同位素改性来制备本发明的化合物的同位素变体。
[0212] 本发明上下文中优选的盐是根据本发明的化合物的生理可接受盐。还包括本身不适合药物应用，但可例如用于本发明的化合物的分离或纯化的盐。
[0213] 根据本发明的化合物的生理可接受盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸的盐。
[0214] 本发明的化合物的生理可接受盐还包括常规碱的盐，例如且优选碱金属盐(例如钠和钾盐)、碱土金属盐(例如钙和镁盐)和由氨或具有1至16个碳原子的有机胺，例如且优
选乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、二甲基
氨基乙醇、普鲁卡因、二苄胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸和1,2-乙二胺衍生
的铵盐。
选乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、二甲基
氨基乙醇、普鲁卡因、二苄胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸和1,2-乙二胺衍生
的铵盐。
[0215] 在本发明上下文中，溶剂合物是指以固态或液态通过与溶剂分子配位而形成络合物的根据本发明的化合物的那些形式。水合物是溶剂合物的一种特定形式，其中与水发生
配位。本发明上下文中优选的溶剂合物是水合物。
配位。本发明上下文中优选的溶剂合物是水合物。
[0216] 此外，本发明还包括本发明的化合物的前药。在此，术语“前药”是指本身可能在生物学上有活性或无活性但其在体内停留期间(例如通过代谢或水解方式)转化成本发明的
化合物的化合物。
化合物的化合物。
[0217] 特定实施方案特别优选下列实施方案：
实施方案A：
下式的ADC
其中KSP-L-代表以下式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIi)、
(IIj)、(IIk)或以下式(IIf)的化合物，所述结合剂是优选去糖基化的抗B7H3抗体。特别优
选为特异性结合B7H3的人Ig4和/或人和/或鼠Ig2同种型的抗B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体
TPP-5706及其人源化变体例如TPP-6642和TPP-6850，其中n代表1至10的数值：
式(IIf)：
其中
A代表–C(=O)-；
R1代表–L-#1、H、-COOH、-CONHNH2、-(CH2)1-3NH2、-CONZ’’(CH2)1-3 NH2和–CONZ’’
CH2COOH，其中Z’’代表H或NH2；
R2和R4代表H，或R2和R4一起代表-CH2-CHR11-或–CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11
代表H；
R3代表–L-#1或C1-10-烷基-，其可任选地被–OH、O-烷基、SH、S-烷基、O-CO-烷基、O-CO-
NH-烷基、NH-CO-烷基、NH-CO-NH-烷基、S(O)n-烷基、SO2-NH-烷基、NH-烷基、N(烷基)2或NH2
取代(其中烷基优选为C1-3-烷基)；
R5代表H或F；
R6和R7彼此独立地代表H、(任选地氟代的)C1-3-烷基、(任选地氟代的)C2-4-烯基、(任选
地氟代的)C2-4-炔基、羟基或卤素；
R8代表支化的C1-5-烷基；且
R9代表H或F，
其中取代基R1和R3之一代表–L-#1，且
–L-代表接头且#1代表与所述抗体的键，
以及所述ADC的盐、溶剂合物和溶剂合物的盐。
实施方案A：
下式的ADC
其中KSP-L-代表以下式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIi)、
(IIj)、(IIk)或以下式(IIf)的化合物，所述结合剂是优选去糖基化的抗B7H3抗体。特别优
选为特异性结合B7H3的人Ig4和/或人和/或鼠Ig2同种型的抗B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体
TPP-5706及其人源化变体例如TPP-6642和TPP-6850，其中n代表1至10的数值：
式(IIf)：
其中
A代表–C(=O)-；
R1代表–L-#1、H、-COOH、-CONHNH2、-(CH2)1-3NH2、-CONZ’’(CH2)1-3 NH2和–CONZ’’
CH2COOH，其中Z’’代表H或NH2；
R2和R4代表H，或R2和R4一起代表-CH2-CHR11-或–CHR11-CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R11
代表H；
R3代表–L-#1或C1-10-烷基-，其可任选地被–OH、O-烷基、SH、S-烷基、O-CO-烷基、O-CO-
NH-烷基、NH-CO-烷基、NH-CO-NH-烷基、S(O)n-烷基、SO2-NH-烷基、NH-烷基、N(烷基)2或NH2
取代(其中烷基优选为C1-3-烷基)；
R5代表H或F；
R6和R7彼此独立地代表H、(任选地氟代的)C1-3-烷基、(任选地氟代的)C2-4-烯基、(任选
地氟代的)C2-4-炔基、羟基或卤素；
R8代表支化的C1-5-烷基；且
R9代表H或F，
其中取代基R1和R3之一代表–L-#1，且
–L-代表接头且#1代表与所述抗体的键，
以及所述ADC的盐、溶剂合物和溶剂合物的盐。
[0218] 所述接头优选为接头§-(C=O)m-L1-L2-§§
其中
m代表0或1；
§代表与KSP的键，且
§§代表与所述抗体的键，且
L2代表
其中
#1表示与抗体的硫原子的连接点，
#2 表示与基团L1的连接点，
且L1由下式代表
#1–(NR10)n-(G1)o-G2-#2
其中
R10代表H、NH2或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或 ；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化
和/或环状亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NMe-、-
NHNH-、-SO2NHNH-、-CONHNH-和具有最多4个选自N、O和S或-SO-的杂原子的3-至10-元芳族
或非芳族杂环(优选 )中的一个或多个中断一次或多次，其中侧链(如果存
在)可被–NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
其中
m代表0或1；
§代表与KSP的键，且
§§代表与所述抗体的键，且
L2代表
其中
#1表示与抗体的硫原子的连接点，
#2 表示与基团L1的连接点，
且L1由下式代表
#1–(NR10)n-(G1)o-G2-#2
其中
R10代表H、NH2或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或 ；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化
和/或环状亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NMe-、-
NHNH-、-SO2NHNH-、-CONHNH-和具有最多4个选自N、O和S或-SO-的杂原子的3-至10-元芳族
或非芳族杂环(优选 )中的一个或多个中断一次或多次，其中侧链(如果存
在)可被–NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
[0219] 此处，#1是与KSP抑制剂的键且#2是与连接至抗体的偶联基团(例如L2)的键。
[0220] 实施方案B：下式的ADC
其中KSP-L-代表以下式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIi)、
(IIj)、(IIk)、(IIf)或以下式(II’g)或以下式(IIg)的化合物，所述结合剂是优选去糖基化
的抗B7H3抗体。在此特别优选为特异性结合B7H3的人Ig4和/或人和/或鼠Ig2同种型的抗
B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源化变体例如TPP-6642和TPP-6850，其中代
表1至10的数值：
式(IIg)：
其中
A代表CO (羰基)；
R1代表–L-#1、H、-COOH、-CONHNH2、-(CH2)1-3NH2、-CONZ’’(CH2)1-3 NH2和–CONZ’’
CH2COOH，其中Z’’代表H或NH2；
2 4 2 4 11 11 10
R和R 代表H，或R 和R 一起代表-CH2-CHR -或–CHR -CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R
代表H；
R3代表–L-#1或C1-10-烷基-，其可任选地被–OH、O-烷基、SH、S-烷基、O-CO-烷基、O-CO-
NH-烷基、NH-CO-烷基、NH-CO-NH-烷基、S(O)n-烷基、SO2-NH-烷基、NH-烷基、N(烷基)2或NH2
取代(其中烷基优选为C1-3-烷基)；
R5代表H或F；
R6和R7彼此独立地代表H、(任选地氟代的)C1-3-烷基、(任选地氟代的)C2-4-烯基、(任选
地氟代的)C2-4-炔基、羟基或卤素；
R8代表支化的C1-5-烷基；且
R9代表H或F，
其中取代基R1和R3之一代表–L-#1，且
–L-代表接头且#1代表与所述抗体的键，
其中–L-由如下代表
§-(CO)m-L1-L2-§§
其中
m代表0或1；
§代表与KSP的键，且
§§代表与所述抗体的键，且
L2代表
其中
#1表示与抗体的硫原子的连接点，
2 1
# 表示与基团L的连接点，
且L1由下式代表
#1–(NR10)n-(G1)o-G2-#2
其中
10
R 代表H、NH2或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或 ；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化
和/或环状亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NMe-、-
NHNH-、-SO2NHNH-、-CONHNH-和具有最多4个选自N、O和S或-SO-的杂原子的3-至10-元芳族
或非芳族杂环(优选 )中的一个或多个中断一次或多次，其中侧链(如果存
在)可被–NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，
#1是与KSP抑制剂的键且#2是与连接至抗体的偶联基团(例如L2)的键，
以及所述ADC的盐、溶剂合物和溶剂合物的盐。
其中KSP-L-代表以下式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIi)、
(IIj)、(IIk)、(IIf)或以下式(II’g)或以下式(IIg)的化合物，所述结合剂是优选去糖基化
的抗B7H3抗体。在此特别优选为特异性结合B7H3的人Ig4和/或人和/或鼠Ig2同种型的抗
B7H3抗体，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源化变体例如TPP-6642和TPP-6850，其中代
表1至10的数值：
式(IIg)：
其中
A代表CO (羰基)；
R1代表–L-#1、H、-COOH、-CONHNH2、-(CH2)1-3NH2、-CONZ’’(CH2)1-3 NH2和–CONZ’’
CH2COOH，其中Z’’代表H或NH2；
2 4 2 4 11 11 10
R和R 代表H，或R 和R 一起代表-CH2-CHR -或–CHR -CH2-(以形成吡咯烷环)，其中R
代表H；
R3代表–L-#1或C1-10-烷基-，其可任选地被–OH、O-烷基、SH、S-烷基、O-CO-烷基、O-CO-
NH-烷基、NH-CO-烷基、NH-CO-NH-烷基、S(O)n-烷基、SO2-NH-烷基、NH-烷基、N(烷基)2或NH2
取代(其中烷基优选为C1-3-烷基)；
R5代表H或F；
R6和R7彼此独立地代表H、(任选地氟代的)C1-3-烷基、(任选地氟代的)C2-4-烯基、(任选
地氟代的)C2-4-炔基、羟基或卤素；
R8代表支化的C1-5-烷基；且
R9代表H或F，
其中取代基R1和R3之一代表–L-#1，且
–L-代表接头且#1代表与所述抗体的键，
其中–L-由如下代表
§-(CO)m-L1-L2-§§
其中
m代表0或1；
§代表与KSP的键，且
§§代表与所述抗体的键，且
L2代表
其中
#1表示与抗体的硫原子的连接点，
2 1
# 表示与基团L的连接点，
且L1由下式代表
#1–(NR10)n-(G1)o-G2-#2
其中
10
R 代表H、NH2或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或 ；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化
和/或环状亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NMe-、-
NHNH-、-SO2NHNH-、-CONHNH-和具有最多4个选自N、O和S或-SO-的杂原子的3-至10-元芳族
或非芳族杂环(优选 )中的一个或多个中断一次或多次，其中侧链(如果存
在)可被–NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，
#1是与KSP抑制剂的键且#2是与连接至抗体的偶联基团(例如L2)的键，
以及所述ADC的盐、溶剂合物和溶剂合物的盐。
[0221] 实施方案C：下式的ADC
其中KSP-L-代表以下式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIi)、
(IIj)、(IIk) 或以下式(IIh)的化合物，所述结合剂是去糖基化的抗B7H3抗体，且n代表1至
10的数值：
式(IIh)：
其中
A代表–C(=O)-；
R1代表–L-#1；
2 4 2 4 11 11 11
R和R 代表H，或R 和R 一起(形成吡咯烷环)代表-CH2-CHR -或–CHR -CH2-，其中R 代
表H；
R3代表C1-10-烷基-，其可任选地被–OH、O-烷基、SH、S-烷基、O-CO-烷基、O-CO-NH-烷基、
NH-CO-烷基、NH-CO-NH-烷基、S(O)n-烷基、SO2-NH-烷基、NH-烷基、N(烷基)2或NH2取代(其中
烷基优选为C1-3-烷基)，或是–MOD；
其中–MOD代表–(NR10)n-(G1)o-G2-G3，其中
R10代表H或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或-CONH-(其中，如果G1代表–NHCO-，则R10不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-
NRy-、-NRyCO-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-或-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个中断
一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺
酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，G3代表-H或-COOH，
其中基团–MOD优选地具有至少一个基团-COOH；
R5代表H或F；
R6和R7彼此独立地代表H、(任选地氟代的)C1-3-烷基、(任选地氟代的)C2-4-烯基、(任选
地氟代的)C2-4-炔基、羟基或卤素；
R8代表支化的C1-5-烷基；且
R9代表H或F，
其中–L-代表接头且#1代表与所述抗体的键，
其中–L-由如下代表
§-(CO)m-L1-L2-§§
其中
m代表0或1；
§代表与KSP的键，且
§§代表与所述抗体的键，且
L2代表
其中
#1表示与抗体的硫原子的连接点，
#2 表示与基团L1的连接点，
且L1由下式代表
#1–(NR10)n-(G1)o-G2-#2
其中
R10代表H、NH2或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或 ；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化
和/或环状亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NMe-、-
NHNH-、-SO2NHNH-、-CONHNH-、-CRx=N-O- (其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)和具有最多4个
选自N、O和S、-SO-或–SO2-的杂原子的3-至10-元芳族或非芳族杂环(优选 )
中的一个或多个中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被–NHCONH2、-COOH、-
OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，
#1是与KSP抑制剂的键且#2是与连接至抗体的偶联基团(例如L2)的键，
以及所述ADC的盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
其中KSP-L-代表以下式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIi)、
(IIj)、(IIk) 或以下式(IIh)的化合物，所述结合剂是去糖基化的抗B7H3抗体，且n代表1至
10的数值：
式(IIh)：
其中
A代表–C(=O)-；
R1代表–L-#1；
2 4 2 4 11 11 11
R和R 代表H，或R 和R 一起(形成吡咯烷环)代表-CH2-CHR -或–CHR -CH2-，其中R 代
表H；
R3代表C1-10-烷基-，其可任选地被–OH、O-烷基、SH、S-烷基、O-CO-烷基、O-CO-NH-烷基、
NH-CO-烷基、NH-CO-NH-烷基、S(O)n-烷基、SO2-NH-烷基、NH-烷基、N(烷基)2或NH2取代(其中
烷基优选为C1-3-烷基)，或是–MOD；
其中–MOD代表–(NR10)n-(G1)o-G2-G3，其中
R10代表H或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或-CONH-(其中，如果G1代表–NHCO-，则R10不代表NH2)；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表直链或支化的烃基团，其具有1至10个碳原子且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-
NRy-、-NRyCO-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-或-CRx=N-O-(其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)中的一个或多个中断
一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺
酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，G3代表-H或-COOH，
其中基团–MOD优选地具有至少一个基团-COOH；
R5代表H或F；
R6和R7彼此独立地代表H、(任选地氟代的)C1-3-烷基、(任选地氟代的)C2-4-烯基、(任选
地氟代的)C2-4-炔基、羟基或卤素；
R8代表支化的C1-5-烷基；且
R9代表H或F，
其中–L-代表接头且#1代表与所述抗体的键，
其中–L-由如下代表
§-(CO)m-L1-L2-§§
其中
m代表0或1；
§代表与KSP的键，且
§§代表与所述抗体的键，且
L2代表
其中
#1表示与抗体的硫原子的连接点，
#2 表示与基团L1的连接点，
且L1由下式代表
#1–(NR10)n-(G1)o-G2-#2
其中
R10代表H、NH2或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-或 ；
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化
和/或环状亚烷基且可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NMe-、-
NHNH-、-SO2NHNH-、-CONHNH-、-CRx=N-O- (其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基)和具有最多4个
选自N、O和S、-SO-或–SO2-的杂原子的3-至10-元芳族或非芳族杂环(优选 )
中的一个或多个中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被–NHCONH2、-COOH、-
OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代，
#1是与KSP抑制剂的键且#2是与连接至抗体的偶联基团(例如L2)的键，
以及所述ADC的盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
[0222] 实施方案D：本发明还提供了以下通式的结合剂/活性物质缀合物：
其中BINDER代表(在一个优选的实施方案中去糖基化的)抗B7H3抗体，L代表接头，WS代
表活性物质，优选KSP抑制剂，诸如例如式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、
(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)或(IIi)之一的根据本发明的KSP抑制剂，m代表1至2、优选1的数
值，且n代表1至50、优选1.2至20且特别优选2至8的数值，其中L具有以下结构之一。在此，m
代表每个接头的活性物质分子的数目，且n代表每个BINDER的活性物质/接头缀合物的数目
的平均值。缀合物分子中存在的所有WS的总和因此是m和n的乘积。
其中BINDER代表(在一个优选的实施方案中去糖基化的)抗B7H3抗体，L代表接头，WS代
表活性物质，优选KSP抑制剂，诸如例如式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、
(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)或(IIi)之一的根据本发明的KSP抑制剂，m代表1至2、优选1的数
值，且n代表1至50、优选1.2至20且特别优选2至8的数值，其中L具有以下结构之一。在此，m
代表每个接头的活性物质分子的数目，且n代表每个BINDER的活性物质/接头缀合物的数目
的平均值。缀合物分子中存在的所有WS的总和因此是m和n的乘积。
[0223] WS是在动物、优选人类中具有局部或全身性治疗作用的活性物质。这些活性物质通常具有低于5kDa、优选低于1.5kDa的分子量。优选的活性物质是长春花生物碱、奥瑞他汀
(Auristatine)、妥布赖森(Tubulysine)、倍癌霉素(Duocarmycine)、激酶抑制剂、MEK抑制
剂和KSP抑制剂。
(Auristatine)、妥布赖森(Tubulysine)、倍癌霉素(Duocarmycine)、激酶抑制剂、MEK抑制
剂和KSP抑制剂。
[0224] 在此，L代表下面式A3和A4之一其中#1表示与所述结合剂的硫原子的连接点，#2表示与所述活性物质的连接点，x代表
1或2，且R22代表COOH、COOR、COR (其中R在每种情况下代表C1-3-烷基)、CONH2、Br，优选
COOH。
1或2，且R22代表COOH、COOR、COR (其中R在每种情况下代表C1-3-烷基)、CONH2、Br，优选
COOH。
[0225] L1具有与上述相同的含义。优选地，-L1-#2由下式代表：#3–(NR10)n-(G1)o-G2-#2
其中
#3 表示与氮原子的连接点，
R10代表H、NH2或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-、-CONH-或 (其中，如果G1代表NHCO或 ，则
R10不代表NH2)，
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化
和/或环状亚烷基，且其可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NRy-、-NRyCO-、-C(NH)NRy-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-、-x x
CR=N-O- (其中R代表H、C1-C3-烷基或苯基)和/或具有最多4个选自N、O和S、-SO-或–SO2-的
杂原子的3-至10-元芳族或非芳族杂环(优选 )中的一个或多个中断一
次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰
胺、砜、亚砜或磺酸取代。
其中
#3 表示与氮原子的连接点，
R10代表H、NH2或C1-C3-烷基；
G1代表–NHCO-、-CONH-或 (其中，如果G1代表NHCO或 ，则
R10不代表NH2)，
n代表0或1；
o代表0或1；且
G2代表具有1至100个碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化
和/或环状亚烷基，且其可被基团-O-、-S-、-SO-、SO2、-NRy-、-NRyCO-、-C(NH)NRy-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy-(其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-、-x x
CR=N-O- (其中R代表H、C1-C3-烷基或苯基)和/或具有最多4个选自N、O和S、-SO-或–SO2-的
杂原子的3-至10-元芳族或非芳族杂环(优选 )中的一个或多个中断一
次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰
胺、砜、亚砜或磺酸取代。
[0226] G2中的另外中断基团优选为其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯基。
[0227] 在根据本发明的缀合物中或在根据本发明的缀合物的混合物中，与抗体的半胱氨酸残基的键在优选大于80%、特别优选大于90%(在每种情况下基于接头与抗体的键的总数
计)的程度上作为式A3或A4的两种结构之一存在。
计)的程度上作为式A3或A4的两种结构之一存在。
[0228] 具有式A3或A4的接头的缀合物可通过将抗体偶联至下式A3’或A4’的相应溴衍生物而获得：
式A3’或A4’的这些溴衍生物可通过如以下方案30至32中以示例性方式所示
HOOCCH2CHBrCOOR22或HOOCCHBrCH2COOR22与结合剂的胺基团的反应而获得。
式A3’或A4’的这些溴衍生物可通过如以下方案30至32中以示例性方式所示
HOOCCH2CHBrCOOR22或HOOCCHBrCH2COOR22与结合剂的胺基团的反应而获得。
[0229] 方案30：[a): 2-溴-1-乙基吡啶鎓四氟硼酸盐(BEP), DCM, 吡啶, RT；b) 氯化锌, 三氟乙醇,
50℃, EDTA；c) 3-4当量TCEP, PBS缓冲液；d] PBS缓冲液, 20h RT.]。
50℃, EDTA；c) 3-4当量TCEP, PBS缓冲液；d] PBS缓冲液, 20h RT.]。
[0230] 方案31：[a): 2-溴-1-乙基吡啶鎓四氟硼酸盐(BEP), DCM, 吡啶, RT；b) 氯化锌, 三氟乙醇,
50℃, EDTA；c) 3-4当量TCEP, PBS缓冲液；d) PBS缓冲液, 20h RT.]。
50℃, EDTA；c) 3-4当量TCEP, PBS缓冲液；d) PBS缓冲液, 20h RT.]。
[0231] 实施方案E：本发明还提供了以下通式的结合剂/活性物质缀合物：
其中BINDER代表优选去糖基化的抗B7H3抗体，L代表接头，WS代表活性物质，优选KSP抑
制剂，诸如例如式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)之一的根据本发明的KSP抑制剂，m代表1至2、优选
1的数值，且n代表1至50、优选1.2至20且特别优选2至8的数值，其中L具有以下结构之一。在
此，m代表每个接头的活性物质分子的数目，且n代表每个BINDER的活性物质/接头缀合物的
数目的平均值。缀合物分子中存在的所有WS的总和因此是m和n的乘积。
其中BINDER代表优选去糖基化的抗B7H3抗体，L代表接头，WS代表活性物质，优选KSP抑
制剂，诸如例如式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)之一的根据本发明的KSP抑制剂，m代表1至2、优选
1的数值，且n代表1至50、优选1.2至20且特别优选2至8的数值，其中L具有以下结构之一。在
此，m代表每个接头的活性物质分子的数目，且n代表每个BINDER的活性物质/接头缀合物的
数目的平均值。缀合物分子中存在的所有WS的总和因此是m和n的乘积。
[0232] 在此，L代表：其中#1表示与所述抗体的硫原子的连接点，#2表示与所述活性物质的连接点，且R22代
表COOH、COOR、COR (其中R在每种情况下代表C1-3-烷基)、CONH2、Br，优选COOH。与结合剂的
硫原子的键因此可具有以下结构之一：
在每个活性物质/抗体缀合物含有多于一个活性物质分子WS的活性物质/抗体缀合物
的情况下，根据式A1和/或A2的两种结构都可存在于活性物质/抗体缀合物中。由于根据本
发明的活性物质/抗体缀合物可以是不同活性物质/抗体缀合物的混合物，该混合物也可包
含式A1或式A2的活性物质/抗体缀合物以及式A1和A2的活性物质/抗体缀合物。
表COOH、COOR、COR (其中R在每种情况下代表C1-3-烷基)、CONH2、Br，优选COOH。与结合剂的
硫原子的键因此可具有以下结构之一：
在每个活性物质/抗体缀合物含有多于一个活性物质分子WS的活性物质/抗体缀合物
的情况下，根据式A1和/或A2的两种结构都可存在于活性物质/抗体缀合物中。由于根据本
发明的活性物质/抗体缀合物可以是不同活性物质/抗体缀合物的混合物，该混合物也可包
含式A1或式A2的活性物质/抗体缀合物以及式A1和A2的活性物质/抗体缀合物。
[0233] L5是选自-(CH2)m-(CHRS)n-(OCH2CH2)o-(X)p-(CH2)q-的基团，其中m、n、o、p和q彼此独立地具有下列值：m=0-10；n=0或1；o=0-10；p=0或1；且q=0-10，其中m+n+o=1-15，优选1-6。
X代表5-或6-元芳族或非芳族杂环或碳环，优选–C6H4-或-C6H10-。RS代表酸基，优选-COOH或
SO3H。
X代表5-或6-元芳族或非芳族杂环或碳环，优选–C6H4-或-C6H10-。RS代表酸基，优选-COOH或
SO3H。
[0234] L6是选自–CONH-、-OCONH-、-NHCO-、-NHCOO-、 和 的基团，其中r是1、2或3。
[0235] L7是单键或选自如下的基团：具有1至100个(优选1至10个)碳原子的直链或支化的烃链，其来自亚芳基和/或直链和/或支化和/或环状亚烷基，且其可被基团-O-、-S-、-
SO-、SO2、-NRy-、-NRyCO-、-C(NH)NRy-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy- (其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-、-CRx=N-O- (其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯
基)和/或具有最多4个选自N、O和S、-SO-或–SO2-的杂原子的3-至10-元、优选5-至10-元芳
族或非芳族杂环中的一个或多个中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-
NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
SO-、SO2、-NRy-、-NRyCO-、-C(NH)NRy-、CONRy-、-NRyNRy-、-SO2NRyNRy-、-CONRyNRy- (其中Ry代表H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其各自可被NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代)、-CO-、-CRx=N-O- (其中Rx代表H、C1-C3-烷基或苯
基)和/或具有最多4个选自N、O和S、-SO-或–SO2-的杂原子的3-至10-元、优选5-至10-元芳
族或非芳族杂环中的一个或多个中断一次或多次，其中包括侧链(如果存在)的烃链可被-
NHCONH2、-COOH、-OH、-NH2、NH-CNNH2、磺酰胺、砜、亚砜或磺酸取代。
[0236] L5优选是基团-(CH2)m-(CHRS)n-(OCH2CH2)o-(X)p-(CH2)q-，其中m=1-3，n=0，o=0-7，p=0且q=0或1。特别优选为基团-(CH2)m-(CHRS)n-(OCH2CH2)o-(X)p-(CH2)q-，其中m=1或2，n=0，
o=0或1，p=0且q=0或1。
o=0或1，p=0且q=0或1。
[0237] L6优选是选自–CONH-和-NHCO-的基团。
[0238] L7优选是单键或–[(CH2)x-(X4)y]w-(CH2)z-，其中
w = 0至20；
x = 0至5；
y = 0或1；
z = 1至5；且
X4代表–O-、-CONH-、–NHCO-或 。
w = 0至20；
x = 0至5；
y = 0或1；
z = 1至5；且
X4代表–O-、-CONH-、–NHCO-或 。
[0239] 特别优选地，L7是单键或基团–[(CH2)x-NHCO-)]，其中x = 1至5。
[0240] 特别优选地，–L5-L6-L7-代表-(CH2)m-(CHRS)n-(OCH2CH2)o-(X)p-(CH2)q-–NHCO-–[(CH2)x-NHCO-)]，其中m=1或2，n=0，o=0或1，p=0，且q=0或1，且x=1-5。
[0241] 然而，这两种结构也可共同存在于根据本发明的缀合物中。
[0242] 根据本发明，这些抗体/活性物质缀合物可由下式的化合物制备其中L具有下式A’：
优选地，通过在具有7.5至8.5、优选8的pH的pH缓冲液中在低于37℃、优选10至25℃的
温度下经最多40小时、优选1至15小时的时段搅拌而将A’转化为A。
优选地，通过在具有7.5至8.5、优选8的pH的pH缓冲液中在低于37℃、优选10至25℃的
温度下经最多40小时、优选1至15小时的时段搅拌而将A’转化为A。
[0243] 实施方案I：下式的抗体缀合物
其中
R2、R4和R5代表H；
R3代表–CH2OH；
R1代表–L1-L2-BINDER，其中
L1代表
其中#2代表与L2的连接点，且#1代表与另一连接的连接点；
且L2代表下式A5和A6的结构的一者或两者：
其中
#1表示与所述抗体的硫原子的连接点，
#2 表示与基团L1的连接点，且
R22代表COOH、COOR、COR、CONHR (其中R在每种情况下代表C1-3-烷基)、CONH2，优选
COOH。
其中
R2、R4和R5代表H；
R3代表–CH2OH；
R1代表–L1-L2-BINDER，其中
L1代表
其中#2代表与L2的连接点，且#1代表与另一连接的连接点；
且L2代表下式A5和A6的结构的一者或两者：
其中
#1表示与所述抗体的硫原子的连接点，
#2 表示与基团L1的连接点，且
R22代表COOH、COOR、COR、CONHR (其中R在每种情况下代表C1-3-烷基)、CONH2，优选
COOH。
[0244] 在根据本发明的缀合物中或在根据本发明的缀合物的混合物中，与抗体的半胱氨酸残基的键在优选大于80%、特别优选大于90%(在每种情况下基于接头与抗体的键的总数
计)的程度上特别优选作为式A5或A6的两种结构之一存在：
在此，式A5或A6的结构通常一起存在，基于与抗体的键的数量计，优选以60:40至40:60
的比率。剩余键则作为以下结构存在
。
计)的程度上特别优选作为式A5或A6的两种结构之一存在：
在此，式A5或A6的结构通常一起存在，基于与抗体的键的数量计，优选以60:40至40:60
的比率。剩余键则作为以下结构存在
。
[0245] 所述抗体优选为特异性结合B7H3的人Ig4和/或人和/或鼠Ig2同种型的抗B7H3抗体或抗原结合片段，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源化变体例如TPP-6642和TPP-
6850。在一个优选实施方案中，抗B7H3抗体以去糖基化形式存在。
具体实施方案
6850。在一个优选实施方案中，抗B7H3抗体以去糖基化形式存在。
具体实施方案
[0246] 提供了根据下式之一的以下优选抗体缀合物，其中n是1至20的数值，且AK1 (以及AK1a、AK1b等)和AK2(以及AK2a、AK2b等)是抗体。AK1代表经由半胱氨酸连接的抗体，AK2是经
由赖氨酸连接的抗体。
由赖氨酸连接的抗体。
[0247] 下式中的抗体(AK1或AK2)优选为特异性结合B7H3的人Ig4和/或人和/或鼠Ig2同种型的嵌合或人源化抗B7H3抗体或其抗原结合片段，特别是抗B7H3抗体TPP-5706及其人源
化变体例如TPP-6642和TPP-6850，和抗B7H3抗体TPP-3803。在一个优选实施方案中，抗B7H3
抗体以去糖基化形式存在。
化变体例如TPP-6642和TPP-6850，和抗B7H3抗体TPP-3803。在一个优选实施方案中，抗B7H3
抗体以去糖基化形式存在。
[0248] 其它缀合物可具有下式之一：和
其中
AK1代表经由半胱氨酸连接的抗B7H3 抗体，且
AK2代表经由赖氨酸连接的抗B7H3 抗体，其为抗体TPP-5706或TPP-3803的嵌合或人源
化变体，
n是1至20的数值；且
L1是具有1至30个碳原子的直链或支化的烃链，其可被-O-、-S-、-C(=O)-、-S(=O)2-、-
NH-、环戊基、哌啶基、苯基相同或不同地中断一次或多次，
其中所述直链或支化的烃链可被-COOH或-NH2取代；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
其中
AK1代表经由半胱氨酸连接的抗B7H3 抗体，且
AK2代表经由赖氨酸连接的抗B7H3 抗体，其为抗体TPP-5706或TPP-3803的嵌合或人源
化变体，
n是1至20的数值；且
L1是具有1至30个碳原子的直链或支化的烃链，其可被-O-、-S-、-C(=O)-、-S(=O)2-、-
NH-、环戊基、哌啶基、苯基相同或不同地中断一次或多次，
其中所述直链或支化的烃链可被-COOH或-NH2取代；
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
[0249] 在此，所述接头L1优选代表以下基团或
其中
§代表与所述活性物质分子的键，且
§§代表与所述抗体的键，且
isoC3H7代表异丙基残基，
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和R/S差向异构体。
所述缀合物还包括其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
其中
§代表与所述活性物质分子的键，且
§§代表与所述抗体的键，且
isoC3H7代表异丙基残基，
以及其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和R/S差向异构体。
所述缀合物还包括其盐、溶剂合物、溶剂合物的盐和差向异构体。
[0250] 治疗用途根据本发明的化合物可用于治疗的过度增殖疾病特别包括癌症和肿瘤疾病类。在本发
明上下文中，这些被理解为尤其是指下列疾病，但不限于它们：乳腺癌和乳腺肿瘤(乳腺癌
包括导管和小叶形式，以及原位(in situ))、呼吸道肿瘤(小细胞和非小细胞肺癌、支气管
癌)、脑肿瘤(例如脑干肿瘤和下丘脑肿瘤、星形细胞瘤、室管膜瘤、胶质母细胞瘤、胶质瘤、
髓母细胞瘤、脑膜瘤和神经外胚层和松果体瘤)、消化器官肿瘤(食道、胃、胆囊、小肠、大肠、
直肠和肛门癌)、肝肿瘤(尤其是肝细胞癌、胆管细胞癌和混合肝细胞和胆管细胞癌)、头颈
区的肿瘤(喉、下咽部、鼻咽、口咽、嘴唇和口腔癌，口腔黑色素瘤)、皮肤瘤(基底细胞瘤、
Spinaliome、鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、恶性黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌、梅克尔细胞皮肤
癌、肥大细胞瘤)、支持和结缔组织肿瘤(尤其是软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、
软骨肉瘤、纤维肉瘤、血管肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴肉瘤和横纹肌肉瘤)、眼睛肿瘤
(尤其是眼内黑色素瘤和成视网膜细胞瘤)、内分泌和外分泌腺的肿瘤(例如甲状腺和甲状
旁腺、胰腺和唾液腺癌、腺癌)、尿道肿瘤(膀胱、阴茎、肾、肾盂和输尿管的肿瘤)和生殖器官
肿瘤(在女性中为子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌和子宫癌，在男性中为前
列腺癌和睾丸癌)。这些还包括实体形式和作为循环细胞的血液、淋巴系统和脊髓的增殖性
疾病，如白血病、淋巴瘤和骨髓增生性疾病，例如急性髓细胞白血病、急性成淋巴细胞性白
血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病和毛细胞性白血病和AIDS相关淋巴瘤、
霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和中枢神经系统中的
淋巴瘤。
明上下文中，这些被理解为尤其是指下列疾病，但不限于它们：乳腺癌和乳腺肿瘤(乳腺癌
包括导管和小叶形式，以及原位(in situ))、呼吸道肿瘤(小细胞和非小细胞肺癌、支气管
癌)、脑肿瘤(例如脑干肿瘤和下丘脑肿瘤、星形细胞瘤、室管膜瘤、胶质母细胞瘤、胶质瘤、
髓母细胞瘤、脑膜瘤和神经外胚层和松果体瘤)、消化器官肿瘤(食道、胃、胆囊、小肠、大肠、
直肠和肛门癌)、肝肿瘤(尤其是肝细胞癌、胆管细胞癌和混合肝细胞和胆管细胞癌)、头颈
区的肿瘤(喉、下咽部、鼻咽、口咽、嘴唇和口腔癌，口腔黑色素瘤)、皮肤瘤(基底细胞瘤、
Spinaliome、鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、恶性黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌、梅克尔细胞皮肤
癌、肥大细胞瘤)、支持和结缔组织肿瘤(尤其是软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、
软骨肉瘤、纤维肉瘤、血管肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴肉瘤和横纹肌肉瘤)、眼睛肿瘤
(尤其是眼内黑色素瘤和成视网膜细胞瘤)、内分泌和外分泌腺的肿瘤(例如甲状腺和甲状
旁腺、胰腺和唾液腺癌、腺癌)、尿道肿瘤(膀胱、阴茎、肾、肾盂和输尿管的肿瘤)和生殖器官
肿瘤(在女性中为子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌和子宫癌，在男性中为前
列腺癌和睾丸癌)。这些还包括实体形式和作为循环细胞的血液、淋巴系统和脊髓的增殖性
疾病，如白血病、淋巴瘤和骨髓增生性疾病，例如急性髓细胞白血病、急性成淋巴细胞性白
血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病和毛细胞性白血病和AIDS相关淋巴瘤、
霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和中枢神经系统中的
淋巴瘤。
[0251] 这些在人类中已充分表征的疾病在其它哺乳动物中也以相当的病因学发生，并在此同样可用本发明的化合物治疗。
[0252] 用本发明的化合物治疗上述癌症包括实体瘤的治疗及其转移或循环形式的治疗。
[0253] 在本发明上下文中，术语“治疗”在传统意义上使用并且是指为了对抗、减轻、减弱或缓解疾病或健康异常和改善例如在癌症的情况下因该疾病受损的生存状况而照料、护理
和看护患者。
和看护患者。
[0254] 本发明因此还提供本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病，特别是上文提到的疾病的用途。
[0255] 本发明还提供根据本发明的化合物用于制备治疗和/或预防疾病，特别是上文提到的疾病的药剂的用途。
[0256] 本发明还提供本发明的化合物在治疗和/或预防疾病，特别是上文提到的疾病的方法中的用途。
[0257] 本发明还提供使用有效量的至少一种本发明的化合物治疗和/或预防疾病，特别是上文提到的疾病的方法。
[0258] 本发明的化合物可以独自使用或如果需要，与一种或多种其它药理活性物质组合使用，只要这种组合不会造成不合意和不可接受的副作用。因此，本发明还提供含有至少一
种本发明的化合物和一种或多种其它活性物质的药剂，其特别是用于治疗和/或预防上述
疾病。
种本发明的化合物和一种或多种其它活性物质的药剂，其特别是用于治疗和/或预防上述
疾病。
[0259] 例如，本发明的化合物可以与用于治疗癌症的已知抗过度增殖、细胞生长抑制或细胞毒性物质组合。合适的组合活性物质的实例包括：
131I-chTNT、阿倍瑞克(Abarelix)、阿比特龙、阿柔比星、Ado-Trastuzumab Emtansin、
阿法替尼、阿柏西普、阿地白介素、阿仑单抗(Alemtuzumab)、阿仑棒酸、阿利维A酸
(Alitretinoin)、六甲蜜胺、氨磷汀、氨鲁米特、己基-5-氨基乙酰丙酸酯、氨柔比星、安吖
啶、阿那曲唑、安西司亭、茴三硫、血管紧张素II、抗凝血酶III、阿瑞吡坦、阿西莫单抗、
Arglabin、三氧化二砷、门冬酰胺酶、阿西替尼、阿扎胞苷、贝洛替康(Belotecan)、苯达莫司
汀、贝利司他、贝伐单抗(Bevacizumab)、贝沙罗汀(Bexaroten)、比卡鲁胺、比生群、博来霉
素、硼替佐米、布舍瑞林、博舒替尼、Brentuximab Vedotin、白消安、卡巴他赛
(Cabazitaxel)、卡博替尼、亚叶酸钙、左亚叶酸钙、卡培他滨、卡罗单抗、卡铂、卡菲偌米布、卡莫氟、卡莫司汀、卡妥索单抗(Catumaxomab)、西乐葆、西莫白介素、色瑞替尼、西妥昔单
抗、苯丁酸氮芥、氯地孕酮、氮芥、西多福韦、西那卡塞、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸、氯法拉滨
(Clofarabine)、Copanlisib、克立他酶(Crisantaspase)、克唑替尼、环磷酰胺、环丙孕酮、
阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素、达拉非尼、达沙替尼、柔红霉素、地西他滨、地加瑞克、地尼
白介素(Denileukin-Diftitox)、地诺塞麦(Denosumab)、地普奥肽、地洛瑞林、右丙亚胺、二
溴螺氯铵、二去水矛醇、双氯芬酸、多西他赛、多拉司琼、去氧氟尿苷、多柔比星、多柔比星+
雌酮、屈大麻酚、依决洛单抗、依利醋铵、血管内皮抑素、依诺他滨、恩扎鲁胺、表柔比星、环
硫雄醇、依泊汀α、依泊汀β、依泊汀ζ、依他铂、艾日布林(Eribulin)、埃洛替尼、埃索美拉唑、雌莫司汀、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、法屈唑、芬太尼、氟羚甲基睾丸素、氟尿苷、氟达
拉滨、氟尿嘧啶、氟他胺、亚叶酸、福美坦、福沙吡坦、福莫司汀、氟维司群、钆布醇、加多利
道、钆特酸葡胺盐、钆弗塞胺、钆塞酸二钠盐(Gd-EOB-DTPA二钠盐)、硝酸镓、加尼瑞克、吉非
替尼、吉西他滨、吉妥单抗(Gemtuzumab)、羧肽酶、谷胱甘肽(Glutoxim)、戈舍瑞林、格兰西
龙、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、二盐酸组胺、组
氨瑞林(Histrelin)、羟基脲、I-125粒子、兰索拉唑、依班膦酸-替伊莫单抗(Ibritumomab
Tiuxetan)、依鲁替尼、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、咪喹莫特、英丙舒凡
(Improsulfan)、吲地司琼、英卡膦酸、巨大戟醇甲基丁烯酸酯、干扰素α、干扰素β、干扰素
γ、碘比醇、碘苄胍(123I)、碘美普尔、易普利姆玛(Ipilimumab)、伊立替康、伊曲康唑、伊沙
匹隆(Ixabepilone)、兰瑞肽、兰索拉唑(Lansoprazole)、拉帕替尼(Lapatinib)、
Lasocholine、来那度胺(Lenalidomide)、蘑菇多糖、来曲唑、亮丙瑞林、左旋四咪唑、左炔诺
孕酮、左甲状腺素钠、Lipegfilgrastim、麦角乙脲、乐铂、环己亚硝脲、氯尼达明、马索罗酚、甲羟孕酮、甲地孕酮、美拉胂醇、苯丙氨酸氮芥、美雄烷、巯基嘌呤、美司钠、美沙酮、氨甲喋
呤、甲氧呋豆素、甲基氨基酮戊酸盐、甲基泼尼松龙、甲基睾酮、Metirosin、米伐木肽
(Mifamurtid)、米特福辛、米铂(Miriplatin)、二溴甘露醇、丙脒腙、二溴卫矛醇、丝裂霉素、
米托坦、米托蒽醌、Mogamulizumab、莫拉司亭、莫哌达醇、盐酸吗啡、硫酸吗啡、大麻隆、
Nabiximols、那法瑞林、纳洛酮+戊唑辛、纳曲酮、那托司亭、奈达铂、奈拉滨(Nelarabin)、奈
立膦酸、Nivolumabpentetreotid、尼洛替尼(Nilotinib)、尼鲁米特、尼莫唑、尼妥珠单抗
(Nimotuzumab)、嘧啶亚硝脲、二胺硝吖啶(Nitraerin)、纳武单抗、阿托珠单抗、奥曲肽、奥
法木单抗(Ofatumumab)、高三尖杉酯碱、奥美拉唑、奥坦西隆、奥古蛋白、Orilotimod、奥沙
利铂、羟考酮、羟甲烯龙、Ozogamicin、p53基因疗法、紫杉醇、钯-103粒子、帕洛诺司琼、帕米膦酸、帕尼单抗(Panitumumab)、泮托拉唑、帕唑帕尼(Pazopanib)、培加帕酶、帕母单抗、聚
乙二醇干扰素α-2b、培美曲唑、喷司他丁、培洛霉素、全氟丁烷、培磷酰胺、帕妥株单抗、溶链菌制剂(Picibanil)、毛果芸香碱、吡柔比星、匹克生琼、普乐沙福(Plerixafor)、普卡霉素、
聚氨葡糖(Poliglusam)、磷酸聚雌二醇、聚乙烯吡咯烷酮 +透明质酸钠、多糖-K、泊马度胺、
帕纳替尼、卟吩姆钠、普拉曲沙(Pralatrexat)、松龙苯芥、泼尼松、甲基苄肼、丙考达唑、普
萘洛尔、喹高利特(Quinagolid)、雷贝拉唑、Racotumomab、氯化镭223、拉多替尼、雷诺昔酚、
雷替曲塞(Raltitrexed)、雷莫司琼、雷莫芦单抗、雷莫司汀(Ranimustin)、拉布立酶、丙亚
胺、Refametinib 、瑞戈非尼(Regorafenib)、利塞膦酸、铼-186依替膦酸盐、利妥昔单抗
(Rituximab)、罗米地辛(Romidepsin)、罗莫肽、Roniciclib 、来昔决南钐(153Sm)、沙妥莫
单抗、分泌素、Sipuleucel-T、西佐喃、索布佐生、甘氨双唑钠(Natriumglycididazol)、索拉
非尼(Sorafenib)、康力龙、链脲霉素、舒尼替尼、他拉泊芬(Talaporfin)、他米巴罗汀
(Tamibaroten)、他莫昔芬、他喷他多、他索纳明(Tasonermin)、替西白介素(Teceleukin)、
锝[99mTc]巯诺莫单抗、99mTc-HYNIC-[Tyr3]-奥曲肽、替加氟、替加氟+吉美嘧啶
(Gimeracil)+奥替拉西(Oteracil)、替莫卟吩、替莫唑胺、西罗莫司(Temsirolimus)、表鬼
臼毒噻吩糖苷、睾酮、替曲膦(Tetrofosmin)、反应停、硫替派、胸腺法新(Thymalfasin)、促
甲状腺素α、硫鸟嘌呤(Tioguanin)、托珠单抗(Tocilizumab)、托泊替康、托瑞米芬、托西莫
单抗(Tositumomab)、曲贝替定(Trabectedin)、曲马多、曲妥珠单抗、曲奥舒凡
(Treosulfan)、维甲酸、曲氟尿苷+ Tipiracil、曲美替尼、曲洛司坦、曲普瑞林、氯乙环磷酰
胺、促血小板生成素、乌苯美司、戊柔比星(Valrubicin)、凡德他尼(Vandetanib)、伐普肽、
瓦他拉尼、维罗非尼(Vemurafenib)、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春氟宁、长春瑞宾、维
莫德吉、伏立诺他(Vorinostat)、钇-90玻璃微球、新制癌菌素、净司他丁斯酯、唑来膦酸、佐
柔比星。
131I-chTNT、阿倍瑞克(Abarelix)、阿比特龙、阿柔比星、Ado-Trastuzumab Emtansin、
阿法替尼、阿柏西普、阿地白介素、阿仑单抗(Alemtuzumab)、阿仑棒酸、阿利维A酸
(Alitretinoin)、六甲蜜胺、氨磷汀、氨鲁米特、己基-5-氨基乙酰丙酸酯、氨柔比星、安吖
啶、阿那曲唑、安西司亭、茴三硫、血管紧张素II、抗凝血酶III、阿瑞吡坦、阿西莫单抗、
Arglabin、三氧化二砷、门冬酰胺酶、阿西替尼、阿扎胞苷、贝洛替康(Belotecan)、苯达莫司
汀、贝利司他、贝伐单抗(Bevacizumab)、贝沙罗汀(Bexaroten)、比卡鲁胺、比生群、博来霉
素、硼替佐米、布舍瑞林、博舒替尼、Brentuximab Vedotin、白消安、卡巴他赛
(Cabazitaxel)、卡博替尼、亚叶酸钙、左亚叶酸钙、卡培他滨、卡罗单抗、卡铂、卡菲偌米布、卡莫氟、卡莫司汀、卡妥索单抗(Catumaxomab)、西乐葆、西莫白介素、色瑞替尼、西妥昔单
抗、苯丁酸氮芥、氯地孕酮、氮芥、西多福韦、西那卡塞、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸、氯法拉滨
(Clofarabine)、Copanlisib、克立他酶(Crisantaspase)、克唑替尼、环磷酰胺、环丙孕酮、
阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素、达拉非尼、达沙替尼、柔红霉素、地西他滨、地加瑞克、地尼
白介素(Denileukin-Diftitox)、地诺塞麦(Denosumab)、地普奥肽、地洛瑞林、右丙亚胺、二
溴螺氯铵、二去水矛醇、双氯芬酸、多西他赛、多拉司琼、去氧氟尿苷、多柔比星、多柔比星+
雌酮、屈大麻酚、依决洛单抗、依利醋铵、血管内皮抑素、依诺他滨、恩扎鲁胺、表柔比星、环
硫雄醇、依泊汀α、依泊汀β、依泊汀ζ、依他铂、艾日布林(Eribulin)、埃洛替尼、埃索美拉唑、雌莫司汀、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、法屈唑、芬太尼、氟羚甲基睾丸素、氟尿苷、氟达
拉滨、氟尿嘧啶、氟他胺、亚叶酸、福美坦、福沙吡坦、福莫司汀、氟维司群、钆布醇、加多利
道、钆特酸葡胺盐、钆弗塞胺、钆塞酸二钠盐(Gd-EOB-DTPA二钠盐)、硝酸镓、加尼瑞克、吉非
替尼、吉西他滨、吉妥单抗(Gemtuzumab)、羧肽酶、谷胱甘肽(Glutoxim)、戈舍瑞林、格兰西
龙、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、二盐酸组胺、组
氨瑞林(Histrelin)、羟基脲、I-125粒子、兰索拉唑、依班膦酸-替伊莫单抗(Ibritumomab
Tiuxetan)、依鲁替尼、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、咪喹莫特、英丙舒凡
(Improsulfan)、吲地司琼、英卡膦酸、巨大戟醇甲基丁烯酸酯、干扰素α、干扰素β、干扰素
γ、碘比醇、碘苄胍(123I)、碘美普尔、易普利姆玛(Ipilimumab)、伊立替康、伊曲康唑、伊沙
匹隆(Ixabepilone)、兰瑞肽、兰索拉唑(Lansoprazole)、拉帕替尼(Lapatinib)、
Lasocholine、来那度胺(Lenalidomide)、蘑菇多糖、来曲唑、亮丙瑞林、左旋四咪唑、左炔诺
孕酮、左甲状腺素钠、Lipegfilgrastim、麦角乙脲、乐铂、环己亚硝脲、氯尼达明、马索罗酚、甲羟孕酮、甲地孕酮、美拉胂醇、苯丙氨酸氮芥、美雄烷、巯基嘌呤、美司钠、美沙酮、氨甲喋
呤、甲氧呋豆素、甲基氨基酮戊酸盐、甲基泼尼松龙、甲基睾酮、Metirosin、米伐木肽
(Mifamurtid)、米特福辛、米铂(Miriplatin)、二溴甘露醇、丙脒腙、二溴卫矛醇、丝裂霉素、
米托坦、米托蒽醌、Mogamulizumab、莫拉司亭、莫哌达醇、盐酸吗啡、硫酸吗啡、大麻隆、
Nabiximols、那法瑞林、纳洛酮+戊唑辛、纳曲酮、那托司亭、奈达铂、奈拉滨(Nelarabin)、奈
立膦酸、Nivolumabpentetreotid、尼洛替尼(Nilotinib)、尼鲁米特、尼莫唑、尼妥珠单抗
(Nimotuzumab)、嘧啶亚硝脲、二胺硝吖啶(Nitraerin)、纳武单抗、阿托珠单抗、奥曲肽、奥
法木单抗(Ofatumumab)、高三尖杉酯碱、奥美拉唑、奥坦西隆、奥古蛋白、Orilotimod、奥沙
利铂、羟考酮、羟甲烯龙、Ozogamicin、p53基因疗法、紫杉醇、钯-103粒子、帕洛诺司琼、帕米膦酸、帕尼单抗(Panitumumab)、泮托拉唑、帕唑帕尼(Pazopanib)、培加帕酶、帕母单抗、聚
乙二醇干扰素α-2b、培美曲唑、喷司他丁、培洛霉素、全氟丁烷、培磷酰胺、帕妥株单抗、溶链菌制剂(Picibanil)、毛果芸香碱、吡柔比星、匹克生琼、普乐沙福(Plerixafor)、普卡霉素、
聚氨葡糖(Poliglusam)、磷酸聚雌二醇、聚乙烯吡咯烷酮 +透明质酸钠、多糖-K、泊马度胺、
帕纳替尼、卟吩姆钠、普拉曲沙(Pralatrexat)、松龙苯芥、泼尼松、甲基苄肼、丙考达唑、普
萘洛尔、喹高利特(Quinagolid)、雷贝拉唑、Racotumomab、氯化镭223、拉多替尼、雷诺昔酚、
雷替曲塞(Raltitrexed)、雷莫司琼、雷莫芦单抗、雷莫司汀(Ranimustin)、拉布立酶、丙亚
胺、Refametinib 、瑞戈非尼(Regorafenib)、利塞膦酸、铼-186依替膦酸盐、利妥昔单抗
(Rituximab)、罗米地辛(Romidepsin)、罗莫肽、Roniciclib 、来昔决南钐(153Sm)、沙妥莫
单抗、分泌素、Sipuleucel-T、西佐喃、索布佐生、甘氨双唑钠(Natriumglycididazol)、索拉
非尼(Sorafenib)、康力龙、链脲霉素、舒尼替尼、他拉泊芬(Talaporfin)、他米巴罗汀
(Tamibaroten)、他莫昔芬、他喷他多、他索纳明(Tasonermin)、替西白介素(Teceleukin)、
锝[99mTc]巯诺莫单抗、99mTc-HYNIC-[Tyr3]-奥曲肽、替加氟、替加氟+吉美嘧啶
(Gimeracil)+奥替拉西(Oteracil)、替莫卟吩、替莫唑胺、西罗莫司(Temsirolimus)、表鬼
臼毒噻吩糖苷、睾酮、替曲膦(Tetrofosmin)、反应停、硫替派、胸腺法新(Thymalfasin)、促
甲状腺素α、硫鸟嘌呤(Tioguanin)、托珠单抗(Tocilizumab)、托泊替康、托瑞米芬、托西莫
单抗(Tositumomab)、曲贝替定(Trabectedin)、曲马多、曲妥珠单抗、曲奥舒凡
(Treosulfan)、维甲酸、曲氟尿苷+ Tipiracil、曲美替尼、曲洛司坦、曲普瑞林、氯乙环磷酰
胺、促血小板生成素、乌苯美司、戊柔比星(Valrubicin)、凡德他尼(Vandetanib)、伐普肽、
瓦他拉尼、维罗非尼(Vemurafenib)、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春氟宁、长春瑞宾、维
莫德吉、伏立诺他(Vorinostat)、钇-90玻璃微球、新制癌菌素、净司他丁斯酯、唑来膦酸、佐
柔比星。
[0260] 此外，本发明的化合物可以例如与可例如结合下列靶标的结合剂组合：OX-40、CD137/4-1BB、DR3、IDO1/IDO2、LAG-3、CD40。
[0261] 此外，根据本发明的化合物也可以与放射疗法和/或外科手术联合使用。
[0262] 通常，用本发明的化合物与其它细胞生长抑制或细胞毒性活性剂的组合追求下列目标：
与用单一活性物质治疗相比，在减慢肿瘤生长、降低其尺寸或甚至完全消除其方面改
进的效力；
以比单一疗法的情况中更低的剂量使用所用化疗药物的可能性；
与独立施用相比，更耐受治疗、副作用较少的可能性；
治疗更广谱的肿瘤疾病的可能性；
实现更高的治疗响应率；
与当今标准疗法相比，更长的患者存活时间。
与用单一活性物质治疗相比，在减慢肿瘤生长、降低其尺寸或甚至完全消除其方面改
进的效力；
以比单一疗法的情况中更低的剂量使用所用化疗药物的可能性；
与独立施用相比，更耐受治疗、副作用较少的可能性；
治疗更广谱的肿瘤疾病的可能性；
实现更高的治疗响应率；
与当今标准疗法相比，更长的患者存活时间。
[0263] 此外，根据本发明的化合物也可以与放射疗法和/或外科手术联合使用。
[0264] 本发明还提供包含至少一种本发明化合物通常与一种或多种惰性、无毒性的药学上合适的辅助剂的药剂，及其用于上述目的的用途。
[0266] 本发明的化合物可以以适合这些施用途径的施用形式施用。
[0267] 肠道外施用可以绕开再吸收步骤(例如静脉内、动脉内、心脏内、脊柱内或腰内)或包括再吸收(例如肌肉内、皮下、皮内、经皮或腹膜内)进行。适合肠道外施用的施用形式包
括溶液剂、混悬剂、乳剂或冻干产物形式的注射和输液制剂。优选的是肠道外施用，尤其是
静脉施用。
括溶液剂、混悬剂、乳剂或冻干产物形式的注射和输液制剂。优选的是肠道外施用，尤其是
静脉施用。
[0268] 通常已经发现，在肠道外施用的情况下有利的是施用约0.001至1 mg/kg，优选约0.01至0.5 mg/kg体重的量以实现有效结果。
[0269] 然而，在一些情况下可能必需偏离所示的量，尤其取决于体重、施用途径、个体对活性物质的响应、制剂性质和施用时间点或时间间隔。因此，在一些情况下，少于上述最低
量可能是足够的，而在另一些情况下，必须超过所提到的上限。在给予更大量的情况下，可
能最好将它们在一天内分成几个单剂。
实施例
量可能是足够的，而在另一些情况下，必须超过所提到的上限。在给予更大量的情况下，可
能最好将它们在一天内分成几个单剂。
实施例
[0270] 下列实施例说明本发明。本发明不限于这些实施例。
[0271] 除非另行指明，下列测试和实施例中的百分比为重量百分比；份数为重量份。液体/液体溶液的溶剂比、稀释比和浓度在每种情况下都基于体积。
[0272] 如果在实验的描述中未说明进行反应的温度，则可认为是室温。
[0273] 合成途径：对实施例示例，下列方案显示产生实施例的示例性合成途径：
方案20：半胱氨酸连接的ADC的合成
。
方案20：半胱氨酸连接的ADC的合成
。
[0274] 方案21：半胱氨酸连接的ADC的合成。
[0275] 方案22[a): 例如三乙酰氧基硼氢化钠, 乙酸, DCM, RT；b) 例如乙酰氧基乙酰氯, NEt3,
DCM, RT；c) 例如LiOH, THF/水, RT；d) 例如H2, Pd-C, EtOH, RT；e) 例如Teoc-OSu,
NEt3, 二氧杂环己烷, RT；f] 例如Fmoc-Cl, 二异丙基乙基胺, 二氧杂环己烷/水2:1,
RT]。
DCM, RT；c) 例如LiOH, THF/水, RT；d) 例如H2, Pd-C, EtOH, RT；e) 例如Teoc-OSu,
NEt3, 二氧杂环己烷, RT；f] 例如Fmoc-Cl, 二异丙基乙基胺, 二氧杂环己烷/水2:1,
RT]。
[0276] 方案24[a): 例如苄基溴, Cs2CO3, DMF, RT；b) 例如Pd(dppf)2Cl2, DMF, Na2CO3, 85℃；c)
例如LiAlH4, THF, 0℃；MnO2, DCM, RT；d) 例如Ti(iOPr)4, THF, RT；e) 例如tBuLi,
THF, -78℃；MeOH, NH4Cl；f] 例如HCl/1,4-二氧杂环己烷]。
例如LiAlH4, THF, 0℃；MnO2, DCM, RT；d) 例如Ti(iOPr)4, THF, RT；e) 例如tBuLi,
THF, -78℃；MeOH, NH4Cl；f] 例如HCl/1,4-二氧杂环己烷]。
[0277] 方案25: 半胱氨酸连接的ADC的合成。
[0278] 方案26：经由水解琥珀酰胺合成半胱氨酸连接的ADC这种方法特别用于其中L1 = CH2的ADC，以将这些ADC转化成开链连接形式。
[0279] 方案27：[a): 三乙酰氧基硼氢化钠, 乙酸, DCM, RT；b) 乙酰氧基乙酰氯, 二异丙基乙基胺,
DCM, RT；c) LiOH, MeOH, RT；d) 三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)
HATU, DMF, 二异丙基乙基胺, RT；e] 氯化锌, 三氟乙醇, 50℃, EDTA.]。
DCM, RT；c) LiOH, MeOH, RT；d) 三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)
HATU, DMF, 二异丙基乙基胺, RT；e] 氯化锌, 三氟乙醇, 50℃, EDTA.]。
[0280] 方案28：[a): HATU, DMF, 二异丙基乙基胺, RT；b) 氯化锌, 三氟乙醇, 50℃, EDTA.]。
[0281] 方案29：[a): 三乙酰氧基硼氢化钠, 乙酸, DCM, RT；b) 乙酰氧基乙酰氯, 三乙胺, DCM,
RT；c) LiOH, MeOH, RT；d) 三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1) HATU,
DMF, 二异丙基乙基胺, RT；e] 氯化锌, 三氟乙醇, 50℃, EDTA.]。
RT；c) LiOH, MeOH, RT；d) 三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1) HATU,
DMF, 二异丙基乙基胺, RT；e] 氯化锌, 三氟乙醇, 50℃, EDTA.]。
[0282] 方案30：[a): 2-溴-1-乙基吡啶鎓四氟硼酸盐(BEP), DCM, 吡啶, RT；b) 氯化锌, 三氟乙醇,
50℃, EDTA；c) 3-4当量的TCEP, PBS缓冲液；d) PBS缓冲液, 20h RT.]。
50℃, EDTA；c) 3-4当量的TCEP, PBS缓冲液；d) PBS缓冲液, 20h RT.]。
[0283] 方案31：[a): 2-溴-1-乙基吡啶鎓四氟硼酸盐(BEP), DCM, 吡啶, RT；b) 氯化锌, 三氟乙醇,
50℃, EDTA；c) 3-4当量的TCEP, PBS缓冲液；d) PBS缓冲液, 20h RT.]。
50℃, EDTA；c) 3-4当量的TCEP, PBS缓冲液；d) PBS缓冲液, 20h RT.]。
[0284] 方案32：[a) 例如二甲基锌，环己基MgCl，THF，-78°C；NH4Cl；b)例如HCl/1,4-二氧杂环己烷]。
[0285] 方案33：[a)：三乙酰氧基硼氢化钠，乙酸，DCM，室温；b)乙酰氧基乙酰氯，三乙胺，DCM，室温；c)
L-半胱氨酸，NaHCO3，DBU，异丙醇/水，室温；d) 3-硫烷基丙酸，K2CO3，室温；e)接头，HATU，DMF，二异丙基乙胺，室温；e)氯化锌，三氟乙醇，50℃，EDTA]。
L-半胱氨酸，NaHCO3，DBU，异丙醇/水，室温；d) 3-硫烷基丙酸，K2CO3，室温；e)接头，HATU，DMF，二异丙基乙胺，室温；e)氯化锌，三氟乙醇，50℃，EDTA]。
[0286] A. 实施例缩写和首字母缩略词：
A431NS 人肿瘤细胞系
A549 人肿瘤细胞系
A498 人肿瘤细胞系
ABCB1 ATP-结合盒亚家族B成员1(P-gp和MDR1的同义词)
abs. 纯
Ac 乙酰基
CAN 乙腈
aq. 含水，水溶液
ATP 三磷酸腺苷
BCRP 乳腺癌耐药蛋白，外排转运蛋白
BEP 2-溴-1-乙基吡啶鎓四氟硼酸盐
Boc 叔丁氧基羰基
br. 宽(在NMR中)
Bsp. 实施例
CI 化学电离(在MS中)
d 双重峰(在NMR中)
d 天
DC 薄层色谱法
DCI 直接化学电离(在MS中)
dd 双重双峰(在NMR中)
DMAP 4-N,N-二甲基氨基吡啶
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMEM Dulbecco氏改良的Eagle培养基(用于细胞培养的标准化营
养培养基)
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DPBS、D-PBS、PBS Dulbecco氏磷酸盐缓冲的盐溶液
PBS = DPBS = D-PBS, pH 7.4，来自Sigma, No D8537
组成：
0.2 g KCl
0.2 g KH2PO4 (无水)
8.0 g NaCl
1.15 g Na2HPO4 (无水)
用H2O补充到1升
dt 双重三峰(在NMR中)
DTT DL-二硫苏糖醇
d. Th. 理论值的(在化学产率中)
EDC N’-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐
EGFR 表皮生长因子受体
EI 电子碰撞电离(在MS中)
ELISA 酶联免疫吸附测定法
eq. 当量
ESI 电喷雾电离(在MS中)
ESI-MicroTofq ESI- MicroTofq (质谱仪名称Tof = 飞行时间和q = 四
极)
FCS 胎牛血清
Fmoc (9H-芴-9-基甲氧基)羰基
ges. 饱和
GTP 5’-三磷酸鸟苷
h 小时
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷
酸盐
HCT-116 人肿瘤细胞系
HEPES 4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸
HOAc 乙酸
HOAt 1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HOBt 水合1-羟基-1H-苯并三唑
HOSu N-羟基琥珀酰亚胺
HPLC 高压高效液相色谱法
HT29 人肿瘤细胞系
IC50 半最大抑制浓度
i.m. 肌肉内，施用至肌肉中
i.v. 静脉，施用至静脉中
konz. 浓缩
LC-MS 液相色谱法-质谱法联用
LLC-PK1 cells Lewis肺癌猪肾细胞系
L-MDR 人MDR1转染的LLC-PK1细胞
m 多重峰(在NMR中)
Me 甲基
MDR1 多药耐药蛋白1
MeCN 乙腈
min 分钟
MS 质谱法
MTT 溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-四唑鎓
NCI-H292 人肿瘤细胞系
NCI-H520 人肿瘤细胞系
NMM N-甲基吗啉
NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
NMR 核磁共振谱法
NMRI 小鼠品系，源自Naval Medical Research Institute
(NMRI)
Nude Mäuse 裸小鼠(实验动物)
NSCLC 非小细胞肺癌
PBS 磷酸盐缓冲的盐溶液
Pd/C 活性炭载钯
P-gp P-糖蛋白，转运蛋白
PNGaseF 用于裂解糖的酶
quant. 定量(产率)
quart 四重峰(在NMR中)
quint 五重峰(在NMR中)
Rf 保留指数(在DC中)
RT 室温
Rt 停留时间(在HPLC中)
s 单重峰(在NMR中)
s.c. 皮下，在皮肤下施用
SCC-4 人肿瘤细胞系
SCC-9 人肿瘤细胞系
SCID Mäuse 具有重症联合免疫缺陷的受试小鼠
t 三重峰(在NMR中)
TBAF 四正丁基氟化铵
TEMPO (2,2,6,6-四甲基哌啶-1-基)氧基
tert. 叔
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
®
T3P 2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三
氧化物
UV 紫外光谱法
v/v (溶液的)体积比
Z 苄氧基羰基
786-O 人肿瘤细胞系。
A431NS 人肿瘤细胞系
A549 人肿瘤细胞系
A498 人肿瘤细胞系
ABCB1 ATP-结合盒亚家族B成员1(P-gp和MDR1的同义词)
abs. 纯
Ac 乙酰基
CAN 乙腈
aq. 含水，水溶液
ATP 三磷酸腺苷
BCRP 乳腺癌耐药蛋白，外排转运蛋白
BEP 2-溴-1-乙基吡啶鎓四氟硼酸盐
Boc 叔丁氧基羰基
br. 宽(在NMR中)
Bsp. 实施例
CI 化学电离(在MS中)
d 双重峰(在NMR中)
d 天
DC 薄层色谱法
DCI 直接化学电离(在MS中)
dd 双重双峰(在NMR中)
DMAP 4-N,N-二甲基氨基吡啶
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMEM Dulbecco氏改良的Eagle培养基(用于细胞培养的标准化营
养培养基)
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DPBS、D-PBS、PBS Dulbecco氏磷酸盐缓冲的盐溶液
PBS = DPBS = D-PBS, pH 7.4，来自Sigma, No D8537
组成：
0.2 g KCl
0.2 g KH2PO4 (无水)
8.0 g NaCl
1.15 g Na2HPO4 (无水)
用H2O补充到1升
dt 双重三峰(在NMR中)
DTT DL-二硫苏糖醇
d. Th. 理论值的(在化学产率中)
EDC N’-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐
EGFR 表皮生长因子受体
EI 电子碰撞电离(在MS中)
ELISA 酶联免疫吸附测定法
eq. 当量
ESI 电喷雾电离(在MS中)
ESI-MicroTofq ESI- MicroTofq (质谱仪名称Tof = 飞行时间和q = 四
极)
FCS 胎牛血清
Fmoc (9H-芴-9-基甲氧基)羰基
ges. 饱和
GTP 5’-三磷酸鸟苷
h 小时
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷
酸盐
HCT-116 人肿瘤细胞系
HEPES 4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸
HOAc 乙酸
HOAt 1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HOBt 水合1-羟基-1H-苯并三唑
HOSu N-羟基琥珀酰亚胺
HPLC 高压高效液相色谱法
HT29 人肿瘤细胞系
IC50 半最大抑制浓度
i.m. 肌肉内，施用至肌肉中
i.v. 静脉，施用至静脉中
konz. 浓缩
LC-MS 液相色谱法-质谱法联用
LLC-PK1 cells Lewis肺癌猪肾细胞系
L-MDR 人MDR1转染的LLC-PK1细胞
m 多重峰(在NMR中)
Me 甲基
MDR1 多药耐药蛋白1
MeCN 乙腈
min 分钟
MS 质谱法
MTT 溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-四唑鎓
NCI-H292 人肿瘤细胞系
NCI-H520 人肿瘤细胞系
NMM N-甲基吗啉
NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
NMR 核磁共振谱法
NMRI 小鼠品系，源自Naval Medical Research Institute
(NMRI)
Nude Mäuse 裸小鼠(实验动物)
NSCLC 非小细胞肺癌
PBS 磷酸盐缓冲的盐溶液
Pd/C 活性炭载钯
P-gp P-糖蛋白，转运蛋白
PNGaseF 用于裂解糖的酶
quant. 定量(产率)
quart 四重峰(在NMR中)
quint 五重峰(在NMR中)
Rf 保留指数(在DC中)
RT 室温
Rt 停留时间(在HPLC中)
s 单重峰(在NMR中)
s.c. 皮下，在皮肤下施用
SCC-4 人肿瘤细胞系
SCC-9 人肿瘤细胞系
SCID Mäuse 具有重症联合免疫缺陷的受试小鼠
t 三重峰(在NMR中)
TBAF 四正丁基氟化铵
TEMPO (2,2,6,6-四甲基哌啶-1-基)氧基
tert. 叔
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
®
T3P 2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三
氧化物
UV 紫外光谱法
v/v (溶液的)体积比
Z 苄氧基羰基
786-O 人肿瘤细胞系。
[0287] HPLC和LC-MS方法：方法1 (LC-MS)：
仪器：Waters ACQUITY SQD UPLC系统；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50×
1mm；流动相A：1l水+0.25ml 99%甲酸，流动相B：1l乙腈+0.25ml 99%甲酸；梯度：0.0min 90%
A→1.2min 5% A→2.0min 5% A烘箱：50℃；流动速率：0.40ml/min；UV检测：208-400nm。
仪器：Waters ACQUITY SQD UPLC系统；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50×
1mm；流动相A：1l水+0.25ml 99%甲酸，流动相B：1l乙腈+0.25ml 99%甲酸；梯度：0.0min 90%
A→1.2min 5% A→2.0min 5% A烘箱：50℃；流动速率：0.40ml/min；UV检测：208-400nm。
[0288] 方法2 (LC-MS)：MS仪器类型：Waters Synapt G2S；UPLC仪器类型：Waters Acquity I-CLASS；柱：
Waters，BEH300，2.1×150mm，C18 1.7μm；流动相A：1l水+0.01%甲酸；流动相B：1l乙腈+
0.01%甲酸；梯度：0.0min 2% B→1.5min 2% B→8.5min 95% B→10.0min 95% B；烘箱：50
℃；流动速率：0.50ml/min；UV检测：220nm。
Waters，BEH300，2.1×150mm，C18 1.7μm；流动相A：1l水+0.01%甲酸；流动相B：1l乙腈+
0.01%甲酸；梯度：0.0min 2% B→1.5min 2% B→8.5min 95% B→10.0min 95% B；烘箱：50
℃；流动速率：0.50ml/min；UV检测：220nm。
[0289] 方法3 (LC-MS)：MS仪器：Waters(Micromass) QM；HPLC仪器：Agilent 1100系列；柱：Agilent ZORBAX
Extend-C18 3.0×50mm 3.5微米；流动相A：1l水+0.01mol碳酸铵，流动相B：1l乙腈；梯度：
0.0min 98% A→0.2min 98% A→3.0min 5% A→4.5min 5% A；烘箱：40℃；流动速率：
1.75ml/min；UV检测：210nm。
Extend-C18 3.0×50mm 3.5微米；流动相A：1l水+0.01mol碳酸铵，流动相B：1l乙腈；梯度：
0.0min 98% A→0.2min 98% A→3.0min 5% A→4.5min 5% A；烘箱：40℃；流动速率：
1.75ml/min；UV检测：210nm。
[0290] 方法4 (LC-MS)：MS仪器类型：Waters Synapt G2S；UPLC仪器类型：Waters Acquity I-CLASS；柱：
Waters，HSST3，2.1×50mm，C18 1.8μm；流动相A：1l水+0.01%甲酸；流动相B：1l乙腈+0.01%
甲酸；梯度：0.0min 10% B→0.3min 10% B→1.7min 95% B→2.5min 95% B；烘箱：50℃；流
动速率：1.20ml/min；UV检测：210nm。
Waters，HSST3，2.1×50mm，C18 1.8μm；流动相A：1l水+0.01%甲酸；流动相B：1l乙腈+0.01%
甲酸；梯度：0.0min 10% B→0.3min 10% B→1.7min 95% B→2.5min 95% B；烘箱：50℃；流
动速率：1.20ml/min；UV检测：210nm。
[0291] 方法5 (LC-MS)：仪器：Waters ACQUITY SQD UPLC系统；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50×
1mm；流动相A：1l水+0.25ml 99%甲酸，流动相B：1l乙腈+0.25ml 99%甲酸；梯度：0.0min 95%
A→6.0min 5% A→7.5min 5% A烘箱：50℃；流动速率：0.35ml/min；UV检测：210-400nm。
1mm；流动相A：1l水+0.25ml 99%甲酸，流动相B：1l乙腈+0.25ml 99%甲酸；梯度：0.0min 95%
A→6.0min 5% A→7.5min 5% A烘箱：50℃；流动速率：0.35ml/min；UV检测：210-400nm。
[0292] 方法6 (LC-MS)：仪器：Micromass Quattro Premier与Waters UPLC Acquity；柱：Thermo Hypersil
GOLD 1.9μ 50×1mm；流动相A：1l水+0.5ml 50%甲酸，流动相B：1l乙腈+0.5ml 50%甲酸；梯
度：0.0min 97% A→0.5min 97% A→3.2min 5% A→4.0min 5% A烘箱：50℃；流动速率：
0.3ml/min；UV检测：210nm。
GOLD 1.9μ 50×1mm；流动相A：1l水+0.5ml 50%甲酸，流动相B：1l乙腈+0.5ml 50%甲酸；梯
度：0.0min 97% A→0.5min 97% A→3.2min 5% A→4.0min 5% A烘箱：50℃；流动速率：
0.3ml/min；UV检测：210nm。
[0293] 方法7 (LC-MS)：仪器：Agilent MS Quad 6150；HPLC：Agilent 1290；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3
1.8μ 50×2.1mm；流动相A：1l水+0.25ml 99%甲酸，流动相B：1l乙腈+0.25ml 99%甲酸；梯
度：0.0min 90% A→0.3min 90% A→1.7min 5% A→3.0min 5% A烘箱：50℃；流动速率：
1.20ml/min；UV检测：205-305nm。
1.8μ 50×2.1mm；流动相A：1l水+0.25ml 99%甲酸，流动相B：1l乙腈+0.25ml 99%甲酸；梯
度：0.0min 90% A→0.3min 90% A→1.7min 5% A→3.0min 5% A烘箱：50℃；流动速率：
1.20ml/min；UV检测：205-305nm。
[0294] 方法8 (LC-MS)：MS仪器类型：Waters Synapt G2S；UPLC仪器类型：Waters Acquity I-CLASS；柱：
Waters，HSST3，2.1×50mm，C18 1.8μm；流动相A：1l水+0.01%甲酸；流动相B：1l乙腈+0.01%
甲酸；梯度：0.0min 2% B→2.0min 2% B→13.0min 90% B→15.0min 90% B；烘箱：50℃；流
动速率：1.20ml/min；UV检测：210nm。
Waters，HSST3，2.1×50mm，C18 1.8μm；流动相A：1l水+0.01%甲酸；流动相B：1l乙腈+0.01%
甲酸；梯度：0.0min 2% B→2.0min 2% B→13.0min 90% B→15.0min 90% B；烘箱：50℃；流
动速率：1.20ml/min；UV检测：210nm。
[0295] 方法9：实施例181-191的LC-MS-Prep纯化方法(方法LIND-LC-MS-Prep)MS仪器：Waters，HPLC仪器：Waters(柱Waters X-Bridge C18，19mm×50mm，5μm，流动相
A：水+0.05%氨，流动相B：具有梯度的乙腈(ULC)；流动速率：40ml/min；UV检测：DAD；210-
400nm)。
或：
MS仪器：Waters，HPLC仪器：Waters(柱Phenomenex Luna 5μ C18(2) 100A，AXIA
Tech.50×21.2mm，流动相A：水+0.05%甲酸，流动相B：具有梯度的乙腈(ULC)；流动速率：
40ml/min；UV检测：DAD；210-400nm)。
A：水+0.05%氨，流动相B：具有梯度的乙腈(ULC)；流动速率：40ml/min；UV检测：DAD；210-
400nm)。
或：
MS仪器：Waters，HPLC仪器：Waters(柱Phenomenex Luna 5μ C18(2) 100A，AXIA
Tech.50×21.2mm，流动相A：水+0.05%甲酸，流动相B：具有梯度的乙腈(ULC)；流动速率：
40ml/min；UV检测：DAD；210-400nm)。
[0296] 方法10：实施例181-191的LC-MS分析方法(LIND_SQD_SB_AQ)MS仪器：Waters SQD；仪器HPLC：Waters UPLC；柱：Zorbax SB-Aq (Agilent)，50mm×
2.1mm，1.8μm；流动相A：水+0.025%甲酸，流动相B：乙腈(ULC)+0.025%甲酸；梯度：0.0min
98%A-0.9min 25%A-1.0min 5%A-1.4min 5%A-1.41min 98%A-1.5min 98%A；烘箱：40℃；流
动速率：0.600ml/min；UV检测：DAD；210nm。
2.1mm，1.8μm；流动相A：水+0.025%甲酸，流动相B：乙腈(ULC)+0.025%甲酸；梯度：0.0min
98%A-0.9min 25%A-1.0min 5%A-1.4min 5%A-1.41min 98%A-1.5min 98%A；烘箱：40℃；流
动速率：0.600ml/min；UV检测：DAD；210nm。
[0297] 方法11 (HPLC)：仪器：HP1100系列
柱：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e, 50-4.6mm，目录号1.51450.0001，预柱
Chromolith Guard Cartridge Kit, RP-18e，5-4.6mm，目录号1.51470.0001
梯度：流动速率5ml/min
注射体积5μl
溶剂A：水中的HClO4(70%)(4ml/l)
溶剂B：乙腈
起始20% B
0.50min 20% B
3.00min 90% B
3.50min 90% B
3.51min 20% B
4.00min 20% B
柱温度：40℃
波长：210nm。
柱：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e, 50-4.6mm，目录号1.51450.0001，预柱
Chromolith Guard Cartridge Kit, RP-18e，5-4.6mm，目录号1.51470.0001
梯度：流动速率5ml/min
注射体积5μl
溶剂A：水中的HClO4(70%)(4ml/l)
溶剂B：乙腈
起始20% B
0.50min 20% B
3.00min 90% B
3.50min 90% B
3.51min 20% B
4.00min 20% B
柱温度：40℃
波长：210nm。
[0298] 方法12 (LC-MS、MCW-FT-MS-M1)：MS仪器类型：Thermo Scientific FT-MS；UHPLC+仪器类型：Thermo Scientific
UltiMate 3000；柱：Waters，HSST3，2.1×75mm，C18 1.8μm；流动相A：1l水+0.01%甲酸；流动相B：1l乙腈+0.01%甲酸；梯度：0.0min 10% B→2.5min 95% B→3.5min 95% B；烘箱：50℃；
流动速率：0.90ml/min；UV检测：210nm/最佳积分途径210-300nm。
UltiMate 3000；柱：Waters，HSST3，2.1×75mm，C18 1.8μm；流动相A：1l水+0.01%甲酸；流动相B：1l乙腈+0.01%甲酸；梯度：0.0min 10% B→2.5min 95% B→3.5min 95% B；烘箱：50℃；
流动速率：0.90ml/min；UV检测：210nm/最佳积分途径210-300nm。
[0299] 方法13：(MCW-QM-BAS1)：MS仪器：Waters (Micromass) Quattro Micro；仪器Waters UPLC Acquity；柱：Waters
BEH C18 1.7μ 50×2.1mm；流动相A：1l水+0.01mol甲酸铵，流动相B：1l乙腈；梯度：0.0min
95% A→0.1min 95% A→2.0min 15% A→2.5min 15% A→2.51min 10% A→3.0min 10% A；
烘箱：40℃；流动速率：0.5ml/min；UV检测：210nm。
BEH C18 1.7μ 50×2.1mm；流动相A：1l水+0.01mol甲酸铵，流动相B：1l乙腈；梯度：0.0min
95% A→0.1min 95% A→2.0min 15% A→2.5min 15% A→2.51min 10% A→3.0min 10% A；
烘箱：40℃；流动速率：0.5ml/min；UV检测：210nm。
[0300] 下文没有明确描述其制备的所有反应物或试剂购自一般可得的来源。对于其制备同样没有描述在下文中并且不可购得或获自一般不可得的来源的所有其它反应物或试剂，
参考描述了其制备的公开文献。
参考描述了其制备的公开文献。
[0301] 起始化合物和中间体：中间体C2
(2S)-4-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨
基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁酸叔丁酯
将4.22g (14.5mmol) N-(叔丁氧基羰基)-L-高丝氨酸叔丁酯溶解于180ml二氯甲烷
中，且然后添加3.5ml吡啶和9.2g (21.7mmol) 1,1,1-三乙酰氧基-1λ5,2-苯并碘杂氧杂环
戊-3(1H)-酮。将混合物在室温下搅拌1小时且然后用500ml二氯甲烷稀释，并用10%硫代硫
酸钠溶液振摇两次且然后相继用5%柠檬酸振摇两次并用10%碳酸氢钠溶液振摇两次。分离
出有机相，经硫酸镁干燥且然后在真空下浓缩。将残余物置于DCM中，并添加二乙醚和正戊
烷的混合物。滤出沉淀物且然后浓缩滤液并从乙腈/水冻干。这得到3.7g (93%) (2S)-2-
[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-氧代丁酸叔丁基酯，其未经进一步纯化即用于下一步骤。(Rf值：
0.5 (DCM/甲醇95/5)。
(2S)-4-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨
基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁酸叔丁酯
将4.22g (14.5mmol) N-(叔丁氧基羰基)-L-高丝氨酸叔丁酯溶解于180ml二氯甲烷
中，且然后添加3.5ml吡啶和9.2g (21.7mmol) 1,1,1-三乙酰氧基-1λ5,2-苯并碘杂氧杂环
戊-3(1H)-酮。将混合物在室温下搅拌1小时且然后用500ml二氯甲烷稀释，并用10%硫代硫
酸钠溶液振摇两次且然后相继用5%柠檬酸振摇两次并用10%碳酸氢钠溶液振摇两次。分离
出有机相，经硫酸镁干燥且然后在真空下浓缩。将残余物置于DCM中，并添加二乙醚和正戊
烷的混合物。滤出沉淀物且然后浓缩滤液并从乙腈/水冻干。这得到3.7g (93%) (2S)-2-
[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-氧代丁酸叔丁基酯，其未经进一步纯化即用于下一步骤。(Rf值：
0.5 (DCM/甲醇95/5)。
[0302] 将3.5g (9.85mmol)中间体C1溶解于160ml DCM中，并添加3.13g (14.77mmol)三乙酰氧基硼氢化钠和0.7ml乙酸。在室温下搅拌5分钟后，添加3.23g (11.85mmol)(2S)-2-
[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-氧代丁酸叔丁酯并将混合物在室温下再搅拌30分钟。然后在真
空中蒸发溶剂并将残余物溶于乙腈/水中。滤出沉淀固体并干燥，得到5.46g (84%)标题化
合物。
[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-氧代丁酸叔丁酯并将混合物在室温下再搅拌30分钟。然后在真
空中蒸发溶剂并将残余物溶于乙腈/水中。滤出沉淀固体并干燥，得到5.46g (84%)标题化
合物。
[0303] HPLC (方法11): Rt = 2.5 min;LC-MS (方法1): Rt = 1.13 min; MS (ESIpos): m/z = 613 (M+H)+。
[0304] 中间体C11R/S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,
2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-高半胱氨酸/三氟乙
酸盐(1:1)
将990.0mg (2.79mmol)(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二
甲基丙-1-胺最初装入15.0ml二氯甲烷中，并添加828.8mg (3.91mmol)三乙酰氧基硼氢化
钠和129.9mg (3.21mmol)乙酸，并在室温下搅拌5分钟。添加溶解于15.0ml二氯甲烷中的
698.1mg (3.21mmol)(3-氧代丙基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(中间体L58)，并将
反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释，并将有机相用饱和碳酸钠溶
液和饱和NaCl溶液洗涤各两次。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物在硅胶
上(流动相：二氯甲烷/甲醇=100：2)纯化。在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这
得到1.25g (理论值的73%)化合物[3-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}氨基)丙基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-高半胱氨酸/三氟乙
酸盐(1:1)
将990.0mg (2.79mmol)(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二
甲基丙-1-胺最初装入15.0ml二氯甲烷中，并添加828.8mg (3.91mmol)三乙酰氧基硼氢化
钠和129.9mg (3.21mmol)乙酸，并在室温下搅拌5分钟。添加溶解于15.0ml二氯甲烷中的
698.1mg (3.21mmol)(3-氧代丙基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(中间体L58)，并将
反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释，并将有机相用饱和碳酸钠溶
液和饱和NaCl溶液洗涤各两次。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物在硅胶
上(流动相：二氯甲烷/甲醇=100：2)纯化。在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这
得到1.25g (理论值的73%)化合物[3-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}氨基)丙基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0305] LC-MS (方法1): Rt = 1.09 min; MS (ESIpos): m/z = 556 (M+H)+。
[0306] 将151.4mg (1.5mmol)三乙胺和161.6mg (1.43mmol)氯乙酰氯添加至400.0mg (0.65mmol) [3-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}
氨基)丙基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将乙酸
乙酯添加至反应混合物且有机相用水洗涤三次并用饱和NaCl溶液洗涤一次。经硫酸镁干燥
并在真空中蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱法(流动相：环己烷/乙酸乙酯=3：1)纯化。在真
空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到254.4mg (理论值的57%)化合物{3-
[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨
基]丙基}氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
氨基)丙基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将乙酸
乙酯添加至反应混合物且有机相用水洗涤三次并用饱和NaCl溶液洗涤一次。经硫酸镁干燥
并在真空中蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱法(流动相：环己烷/乙酸乙酯=3：1)纯化。在真
空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到254.4mg (理论值的57%)化合物{3-
[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨
基]丙基}氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0307] LC-MS (方法1): Rt = 1.49 min; MS (ESIneg): m/z = 676 (M+HCOO-)-。
[0308] 将117.4mg (0.19mmol){3-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]丙基}氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于
10.0ml异丙醇中，并添加928.4μl 1M NaOH和50.2mg (0.37mmol) DL-高半胱氨酸。将反应
混合物在50℃下搅拌4.5小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用饱和碳酸氢钠溶
液和饱和NaCl溶液洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型RP-
HPLC(柱：Reprosil 250x40；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中
蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到75.3mg (理论值的48%)标题化合物。
10.0ml异丙醇中，并添加928.4μl 1M NaOH和50.2mg (0.37mmol) DL-高半胱氨酸。将反应
混合物在50℃下搅拌4.5小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用饱和碳酸氢钠溶
液和饱和NaCl溶液洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型RP-
HPLC(柱：Reprosil 250x40；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中
蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到75.3mg (理论值的48%)标题化合物。
[0309] 中间体C12R/S-[(8S)-11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-8-羧基-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基]高半
胱氨酸
类似于中间体C11的合成，该合成使用(2S)-4-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧
基]羰基}氨基)丁酸甲酯(中间体L57)和中间体C52作为反应物来进行。
基}-8-羧基-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基]高半
胱氨酸
类似于中间体C11的合成，该合成使用(2S)-4-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧
基]羰基}氨基)丁酸甲酯(中间体L57)和中间体C52作为反应物来进行。
[0310] LC-MS (方法1): Rt = 1.18 min; MS (ESIpos): m/z = 775 (M+H)+。
[0311] 中间体C52(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙-1-胺
将10.00g (49.01mmol) 4-溴-1H-吡咯-2-甲酸甲酯最初装入100.0ml DMF，并添加
20.76g (63.72mmol)碳酸铯和9.22g (53.91mmol)苄基溴。将反应混合物在室温下搅拌过
夜。将反应混合物分配于水和乙酸乙酯之间且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相经硫酸
镁干燥并在真空中蒸发溶剂。用90.0g 4-溴-1H-吡咯-2-甲酸甲酯重复反应。
将10.00g (49.01mmol) 4-溴-1H-吡咯-2-甲酸甲酯最初装入100.0ml DMF，并添加
20.76g (63.72mmol)碳酸铯和9.22g (53.91mmol)苄基溴。将反应混合物在室温下搅拌过
夜。将反应混合物分配于水和乙酸乙酯之间且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相经硫酸
镁干燥并在真空中蒸发溶剂。用90.0g 4-溴-1H-吡咯-2-甲酸甲酯重复反应。
[0312] 两种合并的混合物通过制备型RP-HPLC(柱：Daiso 300x100；10μ，流动速率：250ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到125.15g
(理论值的87%)化合物1-苄基-4-溴-1H-吡咯-2-甲酸甲酯。
(理论值的87%)化合物1-苄基-4-溴-1H-吡咯-2-甲酸甲酯。
[0313] LC-MS (方法1): Rt = 1.18 min; MS (ESIpos): m/z = 295 [M+H]+。
[0314] 在氩气下，将4.80g (16.32mmol) 1-苄基-4-溴-1H-吡咯-2-甲酸甲酯最初装入DMF，并添加3.61g (22.85mmol)(2,5-二氟苯基)硼酸、19.20ml饱和碳酸钠溶液和1.33g
(1.63mmol)[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)：二氯甲烷。将反应混合物在85℃
下搅拌过夜。将反应混合物通过C盐过滤且滤饼用乙酸乙酯洗涤。有机相用水萃取且然后用
饱和NaCl溶液洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱法(流
动相：环己烷/乙酸乙酯100：3)纯化。在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到
3.60g (理论值的67%)化合物1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯。
(1.63mmol)[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)：二氯甲烷。将反应混合物在85℃
下搅拌过夜。将反应混合物通过C盐过滤且滤饼用乙酸乙酯洗涤。有机相用水萃取且然后用
饱和NaCl溶液洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱法(流
动相：环己烷/乙酸乙酯100：3)纯化。在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到
3.60g (理论值的67%)化合物1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯。
[0315] LC-MS (方法7): Rt = 1.59 min; MS (ESIpos): m/z = 328 [M+H]+。
[0316] 将3.60g (11.00mmol) 1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯最初装入90.0ml THF，并在0℃下添加1.04g (27.50mmol)氢化锂铝(2.4M，在THF中)。将反应混合
物在0℃下搅拌30分钟。在0℃下，添加饱和酒石酸钾钠溶液，并将乙酸乙酯添加至反应混合
物。有机相用饱和酒石酸钾钠溶液萃取三次。有机相用饱和NaCl溶液洗涤一次且经硫酸镁
干燥。在真空中蒸发溶剂并将残余物溶解于30.0ml二氯甲烷中。添加3.38g (32.99mmol)氧
化锰(IV)，并在室温下搅拌48小时。添加另外2.20g (21.47mmol)氧化锰(IV)，并在室温下
搅拌过夜。将反应混合物通过C盐过滤且滤饼用二氯甲烷洗涤。在真空中蒸发溶剂且残余物
2.80g (1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-甲醛)未经进一步纯化即用于下一合成步
骤。
物在0℃下搅拌30分钟。在0℃下，添加饱和酒石酸钾钠溶液，并将乙酸乙酯添加至反应混合
物。有机相用饱和酒石酸钾钠溶液萃取三次。有机相用饱和NaCl溶液洗涤一次且经硫酸镁
干燥。在真空中蒸发溶剂并将残余物溶解于30.0ml二氯甲烷中。添加3.38g (32.99mmol)氧
化锰(IV)，并在室温下搅拌48小时。添加另外2.20g (21.47mmol)氧化锰(IV)，并在室温下
搅拌过夜。将反应混合物通过C盐过滤且滤饼用二氯甲烷洗涤。在真空中蒸发溶剂且残余物
2.80g (1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-甲醛)未经进一步纯化即用于下一合成步
骤。
[0317] LC-MS (方法7): Rt = 1.48 min; MS (ESIpos): m/z = 298 [M+H]+。
[0318] 将28.21g (94.88mmol) 1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-甲醛与23.00g (189.77mmol)(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺一起最初装入403.0ml纯THF中，并添加67.42g
(237.21mmol)异丙醇钛(IV)并将混合物在室温下搅拌过夜。添加500.0ml饱和NaCl溶液和
1000.0ml乙酸乙酯，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物过滤通过C盐且滤液用饱和
NaCl溶液洗涤两次。有机相经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂且残余物使用Biotage
Isolera(硅胶，柱1500+340g SNAP，流动速率200ml/min，乙酸乙酯/环己烷1:10)纯化。
(237.21mmol)异丙醇钛(IV)并将混合物在室温下搅拌过夜。添加500.0ml饱和NaCl溶液和
1000.0ml乙酸乙酯，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物过滤通过C盐且滤液用饱和
NaCl溶液洗涤两次。有机相经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂且残余物使用Biotage
Isolera(硅胶，柱1500+340g SNAP，流动速率200ml/min，乙酸乙酯/环己烷1:10)纯化。
[0319] LC-MS (方法7): Rt = 1.63 min; MS (ESIpos): m/z = 401 [M+H]+。
[0320] 在氩气下将25.00g (62.42mmol)(R)-N-{(E/Z)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]亚甲基}-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺最初装入纯THF中并冷却至-78℃。然后在-78
℃下添加12.00g (187.27mmol)叔丁基锂(戊烷中的1.7M溶液)并在该温度下搅拌3小时。
在-78℃下，然后相继添加71.4ml甲醇和214.3ml饱和氯化铵溶液，并使反应混合物达到室
温并在室温下搅拌1小时。用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸
发溶剂。残余物(R)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
℃下添加12.00g (187.27mmol)叔丁基锂(戊烷中的1.7M溶液)并在该温度下搅拌3小时。
在-78℃下，然后相继添加71.4ml甲醇和214.3ml饱和氯化铵溶液，并使反应混合物达到室
温并在室温下搅拌1小时。用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸
发溶剂。残余物(R)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
[0321] LC-MS (方法6): Rt = 2.97 min; MS (ESIpos): m/z = 459 [M+H]+。
[0322] 将28.00g (61.05mmol)(R)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺最初装入186.7ml 1,4-二氧杂环己烷中，
且然后添加45.8ml 以1,4-二氧杂环己烷溶液的HCl(4.0M)。将反应混合物在室温下搅拌2
小时并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Kinetix 100x30；流动速率：
60ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸发乙腈并将二氯甲烷添加至水性残余物。有机相用碳
酸氢钠溶液洗涤且经硫酸镁干燥。在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到
16.2g (理论值的75%)标题化合物。
且然后添加45.8ml 以1,4-二氧杂环己烷溶液的HCl(4.0M)。将反应混合物在室温下搅拌2
小时并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Kinetix 100x30；流动速率：
60ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸发乙腈并将二氯甲烷添加至水性残余物。有机相用碳
酸氢钠溶液洗涤且经硫酸镁干燥。在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到
16.2g (理论值的75%)标题化合物。
[0323] 中间体C53(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙
醇酰基)氨基]-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}丁酸
首先，类似于中间体C2，中间体C52用(2S)-2-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4-氧代丁酸苄
酯还原性烷基化。如对于中间体C27所述，然后仲氨基用乙酸2-氯-2-氧代乙酯酰化，且两个
酯基然后用甲醇中的2M氢氧化锂溶液水解。将以该方式获得的中间体溶解于乙醇中，添加
炭载钯(10%)，在室温下在标准压力下用氢气氢化1小时。将脱保护的化合物置于二氧杂环
己烷/水2：1中并在最后步骤中在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下使用氯碳酸9H-芴-9-基
甲酯引入Fmoc保护基。
醇酰基)氨基]-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}丁酸
首先，类似于中间体C2，中间体C52用(2S)-2-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4-氧代丁酸苄
酯还原性烷基化。如对于中间体C27所述，然后仲氨基用乙酸2-氯-2-氧代乙酯酰化，且两个
酯基然后用甲醇中的2M氢氧化锂溶液水解。将以该方式获得的中间体溶解于乙醇中，添加
炭载钯(10%)，在室温下在标准压力下用氢气氢化1小时。将脱保护的化合物置于二氧杂环
己烷/水2：1中并在最后步骤中在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下使用氯碳酸9H-芴-9-基
甲酯引入Fmoc保护基。
[0324] LC-MS (方法1): Rt = 1.37 min; MS (ESIpos): m/z = 734 (M-H)-。
[0325] 中间体C54N-[(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}
(乙醇酰基)氨基]-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}丁酰基]-β-丙氨酸
首先，类似于中间体C2，中间体C52用N-[(2S)-2-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4-氧代丁
酰基]-β-丙氨酸苄酯还原性烷基化。如对于中间体C27所述，然后仲氨基用乙酸2-氯-2-氧
代乙酯酰化。将以该方式获得的中间体溶解于甲醇中，添加炭载钯(10%)且在室温下在标准
压力下用氢气氢化1小时。然后酯基用甲醇中的2M氢氧化锂溶液水解。将脱保护的化合物置
于二氧杂环己烷/水2：1中并在最后步骤中在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下使用氯碳酸
9H-芴-9-基甲酯引入Fmoc保护基。获得48mg标题化合物。
(乙醇酰基)氨基]-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}丁酰基]-β-丙氨酸
首先，类似于中间体C2，中间体C52用N-[(2S)-2-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4-氧代丁
酰基]-β-丙氨酸苄酯还原性烷基化。如对于中间体C27所述，然后仲氨基用乙酸2-氯-2-氧
代乙酯酰化。将以该方式获得的中间体溶解于甲醇中，添加炭载钯(10%)且在室温下在标准
压力下用氢气氢化1小时。然后酯基用甲醇中的2M氢氧化锂溶液水解。将脱保护的化合物置
于二氧杂环己烷/水2：1中并在最后步骤中在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下使用氯碳酸
9H-芴-9-基甲酯引入Fmoc保护基。获得48mg标题化合物。
[0326] LC-MS (方法1): Rt = 1.38 min; MS (ESIpos): m/z = 807 (M+H)+。
[0327] 中间体C58(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙
醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酸
首先，类似于中间体C2，中间体C52用(2S)-2-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4-氧代丁酸苄
酯还原性烷基化。如对于中间体C27所述，然后仲氨基用乙酸2-氯-2-氧代乙酯酰化，且两个
酯基然后用甲醇中的2M氢氧化锂溶液水解。将以该方式获得的中间体溶解于乙醇中，添加
炭载钯(10%)且在室温下在标准压力下用氢气氢化1小时。
醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酸
首先，类似于中间体C2，中间体C52用(2S)-2-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4-氧代丁酸苄
酯还原性烷基化。如对于中间体C27所述，然后仲氨基用乙酸2-氯-2-氧代乙酯酰化，且两个
酯基然后用甲醇中的2M氢氧化锂溶液水解。将以该方式获得的中间体溶解于乙醇中，添加
炭载钯(10%)且在室温下在标准压力下用氢气氢化1小时。
[0328] 将500mg (0.886mmol)该完全脱保护的中间体置于60ml二氧杂环己烷中，并添加253mg (0.975mmol) 1-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮和
198μl三乙胺。在室温下搅拌24小时后，浓缩该混合物且残余物通过制备型HPLC纯化。合并
相应级分、在真空中浓缩并在高真空下干燥后，得到312mg (理论值的50%)标题化合物。
198μl三乙胺。在室温下搅拌24小时后，浓缩该混合物且残余物通过制备型HPLC纯化。合并
相应级分、在真空中浓缩并在高真空下干燥后，得到312mg (理论值的50%)标题化合物。
[0329] LC-MS (方法5): Rt = 4.61 min; MS (ESIpos): m/z = 658 (M+H)-。
[0330] 中间体C59(2S)-4-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}
[(2S)-2-甲氧基丙酰基]氨基)-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}丁酸
最初，如对于中间体C53所述，(2S)-4-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡
咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基)-2-{[(苄基氧基)羰基]氨基}丁酸苄酯的仲氨基在三乙
胺存在的情况下用(2S)-2-甲氧基丙酰氯(中间体C53的中间体)酰化。将获得的中间体置于
乙醇中，添加炭载钯(10%)且在室温下在标准压力下用氢气氢化1小时。将脱保护的化合物
置于二氧杂环己烷/水2：1中并在最后步骤中在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下使用氯碳
酸9H-芴-9-基甲酯引入Fmoc保护基。
[(2S)-2-甲氧基丙酰基]氨基)-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}丁酸
最初，如对于中间体C53所述，(2S)-4-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡
咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基)-2-{[(苄基氧基)羰基]氨基}丁酸苄酯的仲氨基在三乙
胺存在的情况下用(2S)-2-甲氧基丙酰氯(中间体C53的中间体)酰化。将获得的中间体置于
乙醇中，添加炭载钯(10%)且在室温下在标准压力下用氢气氢化1小时。将脱保护的化合物
置于二氧杂环己烷/水2：1中并在最后步骤中在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下使用氯碳
酸9H-芴-9-基甲酯引入Fmoc保护基。
[0331] LC-MS (方法1): Rt = 1.39 min; MS (ESIpos): m/z = 764 (M-H)-。
[0332] 中间体C60(2S)-4-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}
[(2S)-2-甲氧基丙酰基]氨基)-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}丁酸
该合成类似于中间体C53进行。
[(2S)-2-甲氧基丙酰基]氨基)-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}丁酸
该合成类似于中间体C53进行。
[0333] LC-MS (方法1): Rt = 1.41 min; MS (ESIpos): m/z = 750 (M+H)+。
[0334] 中间体C61N-[(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}
(乙醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酰基]-β-丙氨酸
标题化合物通过如下来制备：将60mg (0.091mmol)中间体C58与ß-丙氨酸甲酯偶联，然
后用2M氢氧化锂溶液进行酯裂解。这经2个步骤得到67mg (理论值的61%)标题化合物。
(乙醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酰基]-β-丙氨酸
标题化合物通过如下来制备：将60mg (0.091mmol)中间体C58与ß-丙氨酸甲酯偶联，然
后用2M氢氧化锂溶液进行酯裂解。这经2个步骤得到67mg (理论值的61%)标题化合物。
[0335] LC-MS (方法1): Rt = 1.29 min; MS (ESIpos): m/z = 729 (M+H)+。
[0336] 中间体C62N-[(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}
(乙醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酰基]-D-丙氨酸
该标题化合物类似于中间体C61由中间体C58和D-丙氨酸甲酯制备。
(乙醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酰基]-D-丙氨酸
该标题化合物类似于中间体C61由中间体C58和D-丙氨酸甲酯制备。
[0337] LC-MS (方法1): Rt = 1.32 min; MS (ESIpos): m/z = 729 (M+H)+。
[0338] 中间体C64三氟乙酸/{(2S)-1-[(2-氨基乙基)氨基]-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-
1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-1-氧代丁-2-基}氨基甲酸2-(三甲基
甲硅烷基)乙酯(1:1)
该标题化合物类似于中间体C63从中间体C58制备。
1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-1-氧代丁-2-基}氨基甲酸2-(三甲基
甲硅烷基)乙酯(1:1)
该标题化合物类似于中间体C63从中间体C58制备。
[0339] HPLC (方法11): Rt = 2.4 min;LC-MS (方法1): Rt = 1.01 min; MS (ESIpos): m/z = 700 (M+H)+。
[0340] 中间体C65(8S)-8-{2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-(乙醇酰基)氨基]乙基}-2,2-二甲基-6,11-二氧代-5-氧杂-7,10-二氮杂-2-硅杂十四
烷-14-酸
将215mg (0.59mmol)中间体L66最初装入25ml二氯甲烷中，并添加377mg (0.89mmol)
戴斯-马丁高价碘化物和144μl (1.78mmol)吡啶。在室温下搅拌30分钟。然后将混合物用
300ml二氯甲烷稀释并将有机相用10%Na2S2O3溶液、10%柠檬酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液各
洗涤两次。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。这得到305mg醛，其未经进一步纯化
即反应。
基}-(乙醇酰基)氨基]乙基}-2,2-二甲基-6,11-二氧代-5-氧杂-7,10-二氮杂-2-硅杂十四
烷-14-酸
将215mg (0.59mmol)中间体L66最初装入25ml二氯甲烷中，并添加377mg (0.89mmol)
戴斯-马丁高价碘化物和144μl (1.78mmol)吡啶。在室温下搅拌30分钟。然后将混合物用
300ml二氯甲烷稀释并将有机相用10%Na2S2O3溶液、10%柠檬酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液各
洗涤两次。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。这得到305mg醛，其未经进一步纯化
即反应。
[0341] 将175mg (0.49mmol)中间体C52溶解于50ml二氯甲烷中，并添加147mg (0.69mmol)三乙酰氧基硼氢化钠和32.5μl乙酸。在室温下搅拌5分钟后，添加214mg
(0.593mmol)上述醛，并将混合物在室温下搅拌过夜。此处，代替预期产物，形成[(2S)-4-
({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基)-1-(2,5-
二氧代吡咯烷-1-基)丁-2-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。因为该酰亚胺也应该可
以进一步转化为标题化合物，所以浓缩该混合物且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应
的含酰亚胺的级分后，在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到195mg (58%)的
以上提及的酰亚胺。
(0.593mmol)上述醛，并将混合物在室温下搅拌过夜。此处，代替预期产物，形成[(2S)-4-
({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基)-1-(2,5-
二氧代吡咯烷-1-基)丁-2-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。因为该酰亚胺也应该可
以进一步转化为标题化合物，所以浓缩该混合物且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应
的含酰亚胺的级分后，在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到195mg (58%)的
以上提及的酰亚胺。
[0342] LC-MS (方法5): Rt = 3.32 min; MS (ESIpos): m/z = 667 (M+H)+。
[0343] 将65mg (97.5μmol)该酰亚胺置于15ml二氯甲烷中，并添加367μl (3.4mmol)乙酰氧基乙酰氯和595μl N,N-二异丙基乙胺。在室温下搅拌30分钟后，在真空中在无加热的情
况下浓缩该混合物且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分，在蒸发溶剂和在高真空
下干燥后得到28mg (理论值的37%)乙酸(8S)-11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-
1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-8-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)甲基]-2,2-二甲基-6,
12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基酯。
况下浓缩该混合物且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分，在蒸发溶剂和在高真空
下干燥后得到28mg (理论值的37%)乙酸(8S)-11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-
1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-8-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)甲基]-2,2-二甲基-6,
12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基酯。
[0344] LC-MS (方法1): Rt = 1.44 min; MS (ESIpos): m/z = 767 (M+H)+。
[0345] 将28mg (37μmol)该中间体溶解于3ml甲醇中，并添加548μl 2M氢氧化锂溶液。在室温下搅拌10分钟后，混合物用三氟乙酸调节至pH 4且然后浓缩。残余物通过制备型HPLC
纯化。合并相应级分、蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥后，得到26mg (理论值的96%)作为
白色固体的标题化合物。
纯化。合并相应级分、蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥后，得到26mg (理论值的96%)作为
白色固体的标题化合物。
[0346] LC-MS (方法1): Rt = 1.33 min; MS (ESIpos): m/z = 743 (M+H)+。
[0347] 中间体C66[(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}
(乙醇酰基)氨基]-1-{[2-(甘氨酰基氨基)乙基]氨基}-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸2-(三甲
基甲硅烷基)乙酯
首先，根据肽化学的经典方法(HATU偶联和Boc移除)，由N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酸和
(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯制备三氟乙酸/{2-[(2-氨基乙基)氨基]-2-氧代乙基}氨基
甲酸苄酯(1:1)。
(乙醇酰基)氨基]-1-{[2-(甘氨酰基氨基)乙基]氨基}-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸2-(三甲
基甲硅烷基)乙酯
首先，根据肽化学的经典方法(HATU偶联和Boc移除)，由N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酸和
(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯制备三氟乙酸/{2-[(2-氨基乙基)氨基]-2-氧代乙基}氨基
甲酸苄酯(1:1)。
[0348] 将13mg (0.036mmol)该中间体和25mg (0.033mmol)中间体C58置于3ml DMF中，并添加19mg (0.05mmol) HATU和17μl N,N-二异丙基乙胺。在室温下搅拌10分钟后混合物且
残余物通过制备型HPLC纯化。这得到17.8mg (理论值的60%)中间体。
残余物通过制备型HPLC纯化。这得到17.8mg (理论值的60%)中间体。
[0349] LC-MS (方法1): Rt = 1.36 min; MS (ESIpos): m/z = 891 (M+H)+。
[0350] 将17mg (0.019mmol)该中间体溶解于10ml乙醇中，添加炭载钯(10%)且在室温下在标准压力下用氢气氢化2小时。滤出催化剂，在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干
燥。这得到9mg (理论值的62%)标题化合物。
燥。这得到9mg (理论值的62%)标题化合物。
[0351] LC-MS (方法1): Rt = 1.03 min; MS (ESIpos): m/z = 757 (M+H)+。
[0352] 中间体C67[3-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基)丙
基]氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯
将605.3mg (1.71mmol) (1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二
甲基丙-1-胺(中间体C52)最初装入10.0ml二氯甲烷中，并添加506.7mg (2.39mmol)三乙酰
氧基硼氢化钠和117.9mg (1.96mmol)乙酸并在室温下搅拌5分钟。添加溶解于10.0ml二氯
甲烷中的580.0mg (1.96mmol)(3-氧代丙基)氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(中间体L70)并将反
应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释且有机相在用饱和碳酸钠溶液和
饱和NaCl溶液各洗涤两次。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物通过硅胶(流
动相：环己烷/乙酸乙酯3：1)纯化。在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到
514.7mg (理论值的46%)标题化合物。
基]氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯
将605.3mg (1.71mmol) (1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二
甲基丙-1-胺(中间体C52)最初装入10.0ml二氯甲烷中，并添加506.7mg (2.39mmol)三乙酰
氧基硼氢化钠和117.9mg (1.96mmol)乙酸并在室温下搅拌5分钟。添加溶解于10.0ml二氯
甲烷中的580.0mg (1.96mmol)(3-氧代丙基)氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(中间体L70)并将反
应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释且有机相在用饱和碳酸钠溶液和
饱和NaCl溶液各洗涤两次。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物通过硅胶(流
动相：环己烷/乙酸乙酯3：1)纯化。在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到
514.7mg (理论值的46%)标题化合物。
[0353] LC-MS (方法1): Rt = 1.10 min; MS (ESIpos): m/z = 634 (M+H)+。
[0354] 中间体C6911-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二
甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-酸
将117.0mg (0.19mmol){3-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]丙基}氨基甲酸(2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(中间体C70)和
21.6mg (0.20mmol) 3-硫烷基丙酸最初装入3.0ml甲醇中，添加89.5mg (0.65mmol)碳酸钾
并在50℃下搅拌4小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释且有机相用水和饱和NaCl溶液洗涤。有
机相经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。残余物未经进一步纯化
即用于下一合成步骤。这得到106.1mg (理论值的73%)标题化合物。
甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-酸
将117.0mg (0.19mmol){3-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]丙基}氨基甲酸(2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(中间体C70)和
21.6mg (0.20mmol) 3-硫烷基丙酸最初装入3.0ml甲醇中，添加89.5mg (0.65mmol)碳酸钾
并在50℃下搅拌4小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释且有机相用水和饱和NaCl溶液洗涤。有
机相经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。残余物未经进一步纯化
即用于下一合成步骤。这得到106.1mg (理论值的73%)标题化合物。
[0355] LC-MS (方法1): Rt = 1.42 min; MS (ESIneg): m/z = 700 (M-H)-。
[0356] 中间体C70{3-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰
基)氨基]丙基}氨基甲酸(2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
将908.1mg (1.63mmol)[3-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}氨基)丙基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(参见中间体C11的合成)和
545.6mg (5.39mmol)三乙胺最初装入10.0ml二氯甲烷中，并冷却至0℃。在该温度下，添加
590.5mg (5.23mmol)氯乙酰氯并在室温下搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释且有机相
用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化铵溶液各洗涤三次。有机相用饱和NaCl溶液洗涤且经硫酸
镁干燥。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/
水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到673.8mg (理论值
的65%)标题化合物。
基)氨基]丙基}氨基甲酸(2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
将908.1mg (1.63mmol)[3-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}氨基)丙基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(参见中间体C11的合成)和
545.6mg (5.39mmol)三乙胺最初装入10.0ml二氯甲烷中，并冷却至0℃。在该温度下，添加
590.5mg (5.23mmol)氯乙酰氯并在室温下搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释且有机相
用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化铵溶液各洗涤三次。有机相用饱和NaCl溶液洗涤且经硫酸
镁干燥。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/
水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂且残余物在高真空下干燥。这得到673.8mg (理论值
的65%)标题化合物。
[0357] LC-MS (方法1): Rt = 1.53 min; MS (ESIneg): m/z = 676 (M+HCOO-)-。
[0358] 中间体C71S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-
二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸
(1:1)
将536.6mg (4.43mmol) L-半胱氨酸与531.5mg (6.33mmol)碳酸氢钠一起悬浮于
2.5ml水中。向其中添加溶解于25.0ml异丙醇中的400.0mg (0.63mmol){3-[{(1R)-1-[1-苄
基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]丙基}氨基甲酸
2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(中间体C70)以及1.16g (7.59mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十
一-7-烯。将反应混合物在50℃下搅拌1.5小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用
饱和碳酸氢钠溶液重复洗涤并用饱和NaCl溶液洗涤一次。有机相经硫酸镁干燥，在真空中
蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10
μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到449.5mg (理论值的86%)标题化合物。
二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸
(1:1)
将536.6mg (4.43mmol) L-半胱氨酸与531.5mg (6.33mmol)碳酸氢钠一起悬浮于
2.5ml水中。向其中添加溶解于25.0ml异丙醇中的400.0mg (0.63mmol){3-[{(1R)-1-[1-苄
基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]丙基}氨基甲酸
2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(中间体C70)以及1.16g (7.59mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十
一-7-烯。将反应混合物在50℃下搅拌1.5小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用
饱和碳酸氢钠溶液重复洗涤并用饱和NaCl溶液洗涤一次。有机相经硫酸镁干燥，在真空中
蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10
μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到449.5mg (理论值的86%)标题化合物。
[0359] LC-MS (方法1): Rt = 1.20 min; MS (ESIpos): m/z = 717 (M+H)+。
[0360] 中间体C72(9S)-9-{[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}
(乙醇酰基)氨基]甲基}-2,2-二甲基-6,11-二氧代-5-氧杂-7,10-二氮杂-2-硅杂十四烷-
14-酸
将90mg (0.212mmol)中间体L72最初装入6ml二氯甲烷中，并添加86μl (1.06mmol)吡
啶和135mg (0.318mmol) 戴斯-马丁高价碘化物。在室温下搅拌30分钟。然后混合物用30ml
二氯甲烷稀释且有机相用10%Na2S2O3溶液洗涤两次并用5%柠檬酸溶液洗涤一次。有机相经
硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。以该方式获得的醛未经进一步纯化即反应。
(乙醇酰基)氨基]甲基}-2,2-二甲基-6,11-二氧代-5-氧杂-7,10-二氮杂-2-硅杂十四烷-
14-酸
将90mg (0.212mmol)中间体L72最初装入6ml二氯甲烷中，并添加86μl (1.06mmol)吡
啶和135mg (0.318mmol) 戴斯-马丁高价碘化物。在室温下搅拌30分钟。然后混合物用30ml
二氯甲烷稀释且有机相用10%Na2S2O3溶液洗涤两次并用5%柠檬酸溶液洗涤一次。有机相经
硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。以该方式获得的醛未经进一步纯化即反应。
[0361] 将63mg (0.177mmol)中间体C52溶解于15ml二氯甲烷中，并添加52.4mg (0.247mmol)三乙酰氧基硼氢化钠和20.2μl乙酸。在室温下搅拌5分钟后，添加89.6mg
(0.212mmol)上述醛，并将混合物在室温下搅拌20分钟。在真空中浓缩该混合物且残余物通
过制备型HPLC纯化。合并相应级分后，在真空中蒸发溶剂且残余物从乙腈/水冻干。这得到
71mg (经2个步骤，理论值的53%)(9R)-9-[({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡
咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基)甲基]-2,2-二甲基-6,11-二氧代-5-氧杂-7,10-二氮杂-
2-硅杂十四烷-14-酸苄酯。
(0.212mmol)上述醛，并将混合物在室温下搅拌20分钟。在真空中浓缩该混合物且残余物通
过制备型HPLC纯化。合并相应级分后，在真空中蒸发溶剂且残余物从乙腈/水冻干。这得到
71mg (经2个步骤，理论值的53%)(9R)-9-[({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡
咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基)甲基]-2,2-二甲基-6,11-二氧代-5-氧杂-7,10-二氮杂-
2-硅杂十四烷-14-酸苄酯。
[0362] LC-MS (方法1): Rt = 1.21 min; MS (ESIpos): m/z = 761 (M+H)+。
[0363] 将70mg (92μmol)该中间体置于15ml二氯甲烷中，冷却至10℃并添加54μl三乙胺和25.5μl (0.23mmol)乙酰氧基乙酰氯。在室温下搅拌1小时后，添加相同量的酰基氯和三
乙胺，并在室温下再搅拌一小时后再添加一次。然后将该混合物在室温下再搅拌30分钟且
然后在真空中浓缩，且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分，在蒸发溶剂并从乙腈/
水冻干残余物后得到46.5mg (理论值的59%)酰化中间体。
乙胺，并在室温下再搅拌一小时后再添加一次。然后将该混合物在室温下再搅拌30分钟且
然后在真空中浓缩，且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分，在蒸发溶剂并从乙腈/
水冻干残余物后得到46.5mg (理论值的59%)酰化中间体。
[0364] LC-MS (方法1): Rt = 1.53 min; MS (ESIpos): m/z = 861 (M+H)+。
[0365] 将46mg (53μmol)该中间体溶解于5ml甲醇中，并添加2.7ml 2M氢氧化锂溶液。在室温下搅拌10分钟后，混合物用乙酸调节至pH 3-4且然后用15ml水稀释。水相用乙酸乙酯
萃取且有机相经硫酸镁干燥并浓缩。残余物从乙腈/水冻干，在高真空下干燥残余物后得到
37mg (理论值的90%)作为白色固体的标题化合物。
萃取且有机相经硫酸镁干燥并浓缩。残余物从乙腈/水冻干，在高真空下干燥残余物后得到
37mg (理论值的90%)作为白色固体的标题化合物。
[0366] LC-MS (方法1): Rt = 1.32 min; MS (ESIpos): m/z = 729 (M+H)+。
[0367] 中间体C73S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-
二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[3-(三甲基甲硅烷
基)丙酰基]-L-半胱氨酸
将619mg (0.86mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-
基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)最初装入8.8ml二氯甲烷中，并添加87mg
(0.86mmol)三乙胺和224mg (0.86mmol) N-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基氧基]吡咯
烷-2,5-二酮。1小时后，添加45mg (0.17mmol) N-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基氧基]
吡咯烷-2,5-二酮。将反应混合物在室温下搅拌1小时。在真空中浓缩混合物，将残余物置于
二氯甲烷中且然后有机相用水和饱和碳酸氢钠溶液洗涤两次。有机相经硫酸镁干燥，在旋
转蒸发仪上浓缩，并在高真空下干燥。残余物未经进一步纯化即进一步使用。这得到602mg
(71%，纯度87%)标题化合物。
二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[3-(三甲基甲硅烷
基)丙酰基]-L-半胱氨酸
将619mg (0.86mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-
基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)最初装入8.8ml二氯甲烷中，并添加87mg
(0.86mmol)三乙胺和224mg (0.86mmol) N-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基氧基]吡咯
烷-2,5-二酮。1小时后，添加45mg (0.17mmol) N-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基氧基]
吡咯烷-2,5-二酮。将反应混合物在室温下搅拌1小时。在真空中浓缩混合物，将残余物置于
二氯甲烷中且然后有机相用水和饱和碳酸氢钠溶液洗涤两次。有机相经硫酸镁干燥，在旋
转蒸发仪上浓缩，并在高真空下干燥。残余物未经进一步纯化即进一步使用。这得到602mg
(71%，纯度87%)标题化合物。
[0368] LC-MS (方法1): Rt = 1.58 min; MS (ESIpos): m/z = 861 (M+H)+。
[0369] 中间体C74三氟乙酸3-氨基-N-[(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酰
基]-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)
将75mg (0.114mmol)中间体C58置于12.5ml DMF中并在65mg (0.11mmol) HATU和79μl
N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与78mg (0.171mmol)中间体L75偶联。通过制备型HPLC纯
化后，将中间体置于20ml乙醇中并在室温下在氢气标准压力下在10%活性炭载钯上氢化1小
时。然后滤出催化剂，在真空中移除溶剂且产物通过制备型HPLC纯化。从乙腈/水1:1冻干
后，得到63mg (经2个步骤，理论值的64%)标题化合物。
2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酰
基]-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)
将75mg (0.114mmol)中间体C58置于12.5ml DMF中并在65mg (0.11mmol) HATU和79μl
N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与78mg (0.171mmol)中间体L75偶联。通过制备型HPLC纯
化后，将中间体置于20ml乙醇中并在室温下在氢气标准压力下在10%活性炭载钯上氢化1小
时。然后滤出催化剂，在真空中移除溶剂且产物通过制备型HPLC纯化。从乙腈/水1:1冻干
后，得到63mg (经2个步骤，理论值的64%)标题化合物。
[0370] LC-MS (方法1): Rt = 1.16 min; MS (EIpos): m/z = 844 [M+H]+。
[0371] 中间体C75(2S)-4-[(乙酰氧基乙酰基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酸甲酯
将4.3g (12.2mmol)中间体C52溶解于525ml DCM中，并添加3.63g (17.12mmol)三乙酰
氧基硼氢化钠和8.4ml乙酸。在室温下搅拌5分钟后，添加溶解于175ml DCM中的3.23g
(11.85mmol) (2S)-4-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酸甲酯(通过
经典方法从(3S)-3-氨基-4-甲氧基-4-氧代丁酸制备)，并将混合物在室温下再搅拌45分
钟。然后混合物用DCM稀释，并用100ml饱和碳酸氢钠溶液振摇两次且然后用饱和氯化钠溶
液振摇。有机相经硫酸镁干燥，过滤并然后浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级
分、将残余物浓缩并在高真空下干燥后，得到4.6g (理论值的6184%)中间体。
2-二甲基丙基}氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酸甲酯
将4.3g (12.2mmol)中间体C52溶解于525ml DCM中，并添加3.63g (17.12mmol)三乙酰
氧基硼氢化钠和8.4ml乙酸。在室温下搅拌5分钟后，添加溶解于175ml DCM中的3.23g
(11.85mmol) (2S)-4-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酸甲酯(通过
经典方法从(3S)-3-氨基-4-甲氧基-4-氧代丁酸制备)，并将混合物在室温下再搅拌45分
钟。然后混合物用DCM稀释，并用100ml饱和碳酸氢钠溶液振摇两次且然后用饱和氯化钠溶
液振摇。有机相经硫酸镁干燥，过滤并然后浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级
分、将残余物浓缩并在高真空下干燥后，得到4.6g (理论值的6184%)中间体。
[0372] LC-MS (方法12): Rt = 1.97 min; MS (ESIpos): m/z = 614.32 (M+H)+。
[0373] 将200mg (0.33mmol)该中间体溶解于10ml DCM中，且然后添加105μl三乙胺和77μl (0.717mmol)乙酰氧基乙酰氯。将混合物在室温下搅拌过夜且然后在真空中浓缩。将残余
物置于乙酸乙酯中，并用饱和碳酸氢钠溶液振摇两次且然后用饱和氯化钠溶液振摇。有机
相经硫酸镁干燥且然后浓缩。这得到213mg (75%)作为米色泡沫的标题化合物。
物置于乙酸乙酯中，并用饱和碳酸氢钠溶液振摇两次且然后用饱和氯化钠溶液振摇。有机
相经硫酸镁干燥且然后浓缩。这得到213mg (75%)作为米色泡沫的标题化合物。
[0374] LC-MS (方法1): Rt = 1.46 min; MS (ESIpos): m/z = 714 (M+H)+。
[0375] 中间体C76N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-N-{(1S)-3-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯
基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-1-羧基丙基}-L-丙氨酰胺
标题化合物根据肽化学的经典方法(用氯化锌移除Teoc保护基，在HATU存在的情况下
用N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸酰化并用THF/水中的氢氧化锂进行酯裂解)
从中间体C75制备。
基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-1-羧基丙基}-L-丙氨酰胺
标题化合物根据肽化学的经典方法(用氯化锌移除Teoc保护基，在HATU存在的情况下
用N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸酰化并用THF/水中的氢氧化锂进行酯裂解)
从中间体C75制备。
[0376] LC-MS (方法1): Rt = 1.23 min; MS (ESIpos): m/z = 818 (M+H)+。
[0377] 中间体C77S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-
二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-(4-叔丁氧基-4-氧
代丁酰基)-L-半胱氨酸
将4-叔丁氧基-4-氧代丁酸(8.39mg，48.1μmol)最初装入1.0ml DMF中，添加7.37mg
(48.1μmol) 1-羟基-1H-苯并三唑水合物、15.5mg (48.1μmol)氟硼酸(苯并三唑-1-基氧
基)双二甲基氨基甲基鎓和8.60μl (48.1μmol) N,N-二异丙基乙胺并在室温下搅拌10分
钟。40.0mg (0.048mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-
L-半胱氨酸三氟乙酸(1:1)(中间体C71)最初装入1.0ml DMF中，添加25.4μl (141.9μmol)
N,N-二异丙基乙胺，添加至所述混合物并在室温下搅拌4小时。反应混合物直接通过制备型
RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到35.0mg (理论值的83%)标题化合物。
二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-(4-叔丁氧基-4-氧
代丁酰基)-L-半胱氨酸
将4-叔丁氧基-4-氧代丁酸(8.39mg，48.1μmol)最初装入1.0ml DMF中，添加7.37mg
(48.1μmol) 1-羟基-1H-苯并三唑水合物、15.5mg (48.1μmol)氟硼酸(苯并三唑-1-基氧
基)双二甲基氨基甲基鎓和8.60μl (48.1μmol) N,N-二异丙基乙胺并在室温下搅拌10分
钟。40.0mg (0.048mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-
L-半胱氨酸三氟乙酸(1:1)(中间体C71)最初装入1.0ml DMF中，添加25.4μl (141.9μmol)
N,N-二异丙基乙胺，添加至所述混合物并在室温下搅拌4小时。反应混合物直接通过制备型
RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到35.0mg (理论值的83%)标题化合物。
[0378] LC-MS (方法12): Rt = 2.76 min; MS (ESIpos): m/z = 873 [M+H]+。
[0379] 中间体C7811-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二
甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十五烷-15-酸
将197mg (0.354mmol) [3-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}氨基)丙基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(参见C11的合成中间体)最
初装入5.0ml二氯甲烷中，并加热至40℃。在该温度下，添加240μl (3.0mmol)吡啶和220μl
(1.8mmol) 4-氯-4-氧代丁酸甲酯，并在室温下搅拌1小时。然后添加240μl (3.0mmol)吡啶
和220μl (1.8mmol) 4-氯-4-氧代丁酸甲酯，并在室温下搅拌1小时。然后添加240μl
(3.0mmol)吡啶和220μl (1.8mmol) 4-氯-4-氧代丁酸甲酯，并在室温下搅拌1小时。反应混
合物用乙酸乙酯稀释并将有机相用5%KHSO4溶液萃取三次。有机相用饱和NaCl溶液洗涤且
经硫酸镁干燥。在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，
流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余
物。这得到74.1mg (理论值的31%) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十五烷-
15-酸甲酯。
甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十五烷-15-酸
将197mg (0.354mmol) [3-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}氨基)丙基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(参见C11的合成中间体)最
初装入5.0ml二氯甲烷中，并加热至40℃。在该温度下，添加240μl (3.0mmol)吡啶和220μl
(1.8mmol) 4-氯-4-氧代丁酸甲酯，并在室温下搅拌1小时。然后添加240μl (3.0mmol)吡啶
和220μl (1.8mmol) 4-氯-4-氧代丁酸甲酯，并在室温下搅拌1小时。然后添加240μl
(3.0mmol)吡啶和220μl (1.8mmol) 4-氯-4-氧代丁酸甲酯，并在室温下搅拌1小时。反应混
合物用乙酸乙酯稀释并将有机相用5%KHSO4溶液萃取三次。有机相用饱和NaCl溶液洗涤且
经硫酸镁干燥。在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，
流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余
物。这得到74.1mg (理论值的31%) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十五烷-
15-酸甲酯。
[0380] LC-MS (方法1): Rt = 1.49 min; MS (ESIpos): m/z = 670 [M+H]+。
[0381] 将78.3mg (117μmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十五烷-15-酸
甲酯最初装入4.0ml THF中，并添加800μl甲醇、160μl水和230μl (230μmol) LiOH水溶液
(1M)。将反应混合物在室温下搅拌3小时，用乙酸淬灭且直接通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂
并在高真空下干燥残余物。这得到64.8mg (理论值的85%)标题化合物。
甲酯最初装入4.0ml THF中，并添加800μl甲醇、160μl水和230μl (230μmol) LiOH水溶液
(1M)。将反应混合物在室温下搅拌3小时，用乙酸淬灭且直接通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂
并在高真空下干燥残余物。这得到64.8mg (理论值的85%)标题化合物。
[0382] LC-MS (方法12): Rt = 2.61 min; MS (ESIneg): m/z = 654 [M-H]-。
[0383] 中间体C79三氟乙酸3-氨基-N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七
烷-17-基)-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)
将57.4mg (81.8μmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-
17-酸(中间体C69)最初装入5.7ml DMF中，添加74.0mg (164μmol)三氟乙酸3-{[(苄基氧
基)羰基]氨基}-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)(中间体L75)、43μl (250μmol)
N,N-二异丙基乙胺和62.2mg (164μmol) HATU并在室温下再搅拌1小时。将反应混合物在室
温下搅拌1小时，用乙酸淬灭且直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速
率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得
到52.4mg (理论值的63%)化合物N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅
杂十七烷-17-基)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七
烷-17-基)-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)
将57.4mg (81.8μmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-
17-酸(中间体C69)最初装入5.7ml DMF中，添加74.0mg (164μmol)三氟乙酸3-{[(苄基氧
基)羰基]氨基}-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)(中间体L75)、43μl (250μmol)
N,N-二异丙基乙胺和62.2mg (164μmol) HATU并在室温下再搅拌1小时。将反应混合物在室
温下搅拌1小时，用乙酸淬灭且直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速
率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得
到52.4mg (理论值的63%)化合物N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅
杂十七烷-17-基)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0384] LC-MS (方法1): Rt = 1.64 min; MS (ESIpos): m/z = 1022 [M]+。
[0385] 在氩气下，将6.23mg (27.7μmol)乙酸钯(II)最初装入3.0ml二氯甲烷中，添加12μl (83μmol)三乙胺和89μl (550μmol)三乙基甲硅烷并搅拌5分钟。然后添加3.0ml二氯甲烷
中的56.7mg (55.5μmol) N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七
烷-17-基)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯，并在室温下
搅拌过夜。混合物浓缩至几乎干燥，添加乙腈/水，过滤并通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空
下干燥残余物。这得到37.4mg (理论值的67%)标题化合物。
中的56.7mg (55.5μmol) N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七
烷-17-基)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯，并在室温下
搅拌过夜。混合物浓缩至几乎干燥，添加乙腈/水，过滤并通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空
下干燥残余物。这得到37.4mg (理论值的67%)标题化合物。
[0386] LC-MS (方法12): ): Rt = 2.15 min; MS (ESIpos): m/z = 888 [M+H]+。
[0387] 中间体C80S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-
二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[15-(甘氨酰基氨
基)-4,7,10,13-四氧杂十五烷-1-酰基]-L-半胱氨酸三氟乙酸(1:1)
在氩气下，将43.4mg (95.1μmol) 1-({N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酰基}氨基)-3,6,9,
12-四氧杂十五烷-15-酸(中间体L90)最初装入2.5ml DMF中，添加14.6mg (95.1μmol) 1-
羟基-1H-苯并三唑水合物、30.5mg (95.1μmol)氟硼酸(苯并三唑-1-基氧基)双二甲基氨基
甲基鎓和16.5μl (95.1μmol) N,N-二异丙基乙胺并搅拌10分钟。将79.0mg (95.1μmol) S-
(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲
基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸三氟乙酸(1:1)
(中间体C71)溶解于2.5ml DMF中，添加49.5μl (285.3μmol) N,N-二异丙基乙胺并添加至
所述混合物。将反应混合物在室温下搅拌2小时且直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空
下干燥残余物。这得到44.2mg (理论值的40%)化合物S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二
氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮
杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[15-({N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酰基}氨基)-4,7,10,13-四
氧杂十五烷-1-酰基]-L-半胱氨酸。
二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[15-(甘氨酰基氨
基)-4,7,10,13-四氧杂十五烷-1-酰基]-L-半胱氨酸三氟乙酸(1:1)
在氩气下，将43.4mg (95.1μmol) 1-({N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酰基}氨基)-3,6,9,
12-四氧杂十五烷-15-酸(中间体L90)最初装入2.5ml DMF中，添加14.6mg (95.1μmol) 1-
羟基-1H-苯并三唑水合物、30.5mg (95.1μmol)氟硼酸(苯并三唑-1-基氧基)双二甲基氨基
甲基鎓和16.5μl (95.1μmol) N,N-二异丙基乙胺并搅拌10分钟。将79.0mg (95.1μmol) S-
(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲
基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸三氟乙酸(1:1)
(中间体C71)溶解于2.5ml DMF中，添加49.5μl (285.3μmol) N,N-二异丙基乙胺并添加至
所述混合物。将反应混合物在室温下搅拌2小时且直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空
下干燥残余物。这得到44.2mg (理论值的40%)化合物S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二
氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮
杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[15-({N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酰基}氨基)-4,7,10,13-四
氧杂十五烷-1-酰基]-L-半胱氨酸。
[0388] LC-MS (方法12): Rt = 2.57 min; MS (ESIpos): m/z = 1156 [M+H]+。
[0389] 将60.2mg (52.1μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-N-[15-({N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酰基}氨基)-4,7,10,13-四氧杂十五烷-1-酰
基]-L-半胱氨酸悬浮于3.0ml乙醇中，添加6.0mg活性炭载钯(10%)且在室温和标准压力下
用氢气氢化1小时。两次添加6.0mg活性炭载钯(10%)且在室温和标准压力下用氢气氢化1小
时。滤出催化剂并在真空中从反应混合物移除溶剂，并在高真空下干燥。残余物通过制备型
RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到29.4mg (理论值的50%)标题化合物。
13-基)-N-[15-({N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酰基}氨基)-4,7,10,13-四氧杂十五烷-1-酰
基]-L-半胱氨酸悬浮于3.0ml乙醇中，添加6.0mg活性炭载钯(10%)且在室温和标准压力下
用氢气氢化1小时。两次添加6.0mg活性炭载钯(10%)且在室温和标准压力下用氢气氢化1小
时。滤出催化剂并在真空中从反应混合物移除溶剂，并在高真空下干燥。残余物通过制备型
RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到29.4mg (理论值的50%)标题化合物。
[0390] LC-MS (方法5): Rt = 3.77 min; MS (ESIpos): m/z = 1021 [M+H]+。
[0391] 中间体C81(R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-1-环己基甲胺
在氩气下和在-78℃下，将18.7ml (37.45mmol)在二乙醚中的氯化环己基镁(2M)添加
至3.12ml (6.24mmol)二甲基锌于甲苯中的溶液(2.0M)中，并将混合物在-78℃下搅拌30分
钟。然后在-78℃下添加5.0g (12.48mmol)(R)-N-{(E/Z)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-
吡咯-2-基]亚甲基}-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺于THF中的溶液，并将反应混合物在该温度下
搅拌1小时且然后在室温下搅拌4小时。在-78℃下，然后添加ml饱和氯化铵溶液并使反应混
合物达到室温。用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残
余物使用Biotage Isolera(硅胶，乙酸乙酯/环己烷25：75)纯化。这得到1.59g (理论值的
26%)中间体。
在氩气下和在-78℃下，将18.7ml (37.45mmol)在二乙醚中的氯化环己基镁(2M)添加
至3.12ml (6.24mmol)二甲基锌于甲苯中的溶液(2.0M)中，并将混合物在-78℃下搅拌30分
钟。然后在-78℃下添加5.0g (12.48mmol)(R)-N-{(E/Z)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-
吡咯-2-基]亚甲基}-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺于THF中的溶液，并将反应混合物在该温度下
搅拌1小时且然后在室温下搅拌4小时。在-78℃下，然后添加ml饱和氯化铵溶液并使反应混
合物达到室温。用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残
余物使用Biotage Isolera(硅胶，乙酸乙酯/环己烷25：75)纯化。这得到1.59g (理论值的
26%)中间体。
[0392] LC-MS (方法12): Rt = 2.76 min; MS (ESIneg): m/z = 483 [M-H]-。
[0393] 在氩气下，将264.0mg (0.54mmol)该中间体最初装入0.5ml 1,4-二氧杂环己烷中，且然后添加1.36ml在1,4-二氧杂环己烷中的HCl溶液(4.0M)。将反应混合物在室温下搅
拌1小时。向该反应混合物添加二氯甲烷，且用1M氢氧化钠水溶液洗涤。有机相经硫酸镁干
燥并在真空中蒸发溶剂。残余物使用Biotage Isolera(硅胶，甲醇/二氯甲烷98：2)纯化。在
真空中蒸发溶剂并将残余物溶于二氯甲烷中，用碳酸氢钠溶液洗涤并经硫酸钠干燥。在真
空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到148mg (理论值的72%)标题化合物。
拌1小时。向该反应混合物添加二氯甲烷，且用1M氢氧化钠水溶液洗涤。有机相经硫酸镁干
燥并在真空中蒸发溶剂。残余物使用Biotage Isolera(硅胶，甲醇/二氯甲烷98：2)纯化。在
真空中蒸发溶剂并将残余物溶于二氯甲烷中，用碳酸氢钠溶液洗涤并经硫酸钠干燥。在真
空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到148mg (理论值的72%)标题化合物。
[0394] LC-MS (方法13): Rt = 2.07 min; MS (ESIpos): m/z = 364 [M-NH2]+。
[0395] 中间体C82(3-{[(R)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基]氨基}丙基)氨
基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
在氩气下，将392.2mg (1.85mmol)三乙酰氧基硼氢化钠和91.29mg (1.52mmol)乙酸添
加至503.0mg (1.32mmol) 1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-1-环己基甲胺
(中间体C81)于1.4ml二氯甲烷中的溶液，并将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加
574.6 (2.38mmol)(3-氧代丙基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯于二氯甲烷中的溶液，
并将混合物在室温下搅拌过夜。添加143mg (0.66mmol)(3-氧代丙基)氨基甲酸2-(三甲基
甲硅烷基)乙酯后，将混合物再搅拌2小时。反应混合物用二氯甲烷稀释并将有机相用饱和
碳酸钠溶液和饱和NaCl溶液各洗涤两次，经硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备型HPLC纯
化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到488g (理论值的63%)标题化合物。
基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
在氩气下，将392.2mg (1.85mmol)三乙酰氧基硼氢化钠和91.29mg (1.52mmol)乙酸添
加至503.0mg (1.32mmol) 1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-1-环己基甲胺
(中间体C81)于1.4ml二氯甲烷中的溶液，并将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加
574.6 (2.38mmol)(3-氧代丙基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯于二氯甲烷中的溶液，
并将混合物在室温下搅拌过夜。添加143mg (0.66mmol)(3-氧代丙基)氨基甲酸2-(三甲基
甲硅烷基)乙酯后，将混合物再搅拌2小时。反应混合物用二氯甲烷稀释并将有机相用饱和
碳酸钠溶液和饱和NaCl溶液各洗涤两次，经硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备型HPLC纯
化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到488g (理论值的63%)标题化合物。
[0396] LC-MS (方法12): Rt = 1.89 min; MS (ESIpos): m/z = 582 (M+H)+。
[0397] 中间体C83(3-{[(R)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基](氯乙酰基)氨
基}丙基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
用4Å分子筛将280.0mg (2.77mmol)三乙胺和397.8mg (3.52mmol)氯乙酰氯添加至
487.9mg (0.84mmol)(3-{[(R)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲
基]氨基}丙基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(中间体C82)于8.40ml二氯甲烷中的溶
液，并将反应混合物在室温下搅拌6小时。反应混合物用二氯甲烷稀释且有机相用饱和碳酸
氢钠溶液和饱和氯化铵溶液洗涤。有机相经硫酸钠干燥并浓缩。残余物未经进一步纯化即
使用。这得到470mg (理论值的85%)标题化合物。
基}丙基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
用4Å分子筛将280.0mg (2.77mmol)三乙胺和397.8mg (3.52mmol)氯乙酰氯添加至
487.9mg (0.84mmol)(3-{[(R)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲
基]氨基}丙基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(中间体C82)于8.40ml二氯甲烷中的溶
液，并将反应混合物在室温下搅拌6小时。反应混合物用二氯甲烷稀释且有机相用饱和碳酸
氢钠溶液和饱和氯化铵溶液洗涤。有机相经硫酸钠干燥并浓缩。残余物未经进一步纯化即
使用。这得到470mg (理论值的85%)标题化合物。
[0398] LC-MS (方法12): Rt = 2.88 min; MS (ESIpos): m/z = 680 (M+Na)+。
[0399] 中间体C84S-{11-[(R)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基]-2,2-二甲
基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基}-L-半胱氨酸
将322.1mg (2.66mmol) L-半胱氨酸与319.0mg (3.80mmol)碳酸氢钠一起悬浮于
0.19ml水中。向其中添加溶解于1.90ml异丙醇中的250.0mg (0.38mmol)(3-{[(R)-[1-苄
基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基](氯乙酰基)氨基}丙基)氨基甲酸2-
(三甲基甲硅烷基)乙酯(中间体C83)以及693.8g (4.56mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十
一-7-烯。将反应混合物在50℃下搅拌3.5小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用
饱和碳酸氢钠溶液和饱和NaCl溶液反复洗涤。有机相经硫酸钠干燥并在真空中蒸发溶剂。
残余物未经进一步纯化即进一步使用。这得到276mg (理论值的97%)标题化合物。
基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基}-L-半胱氨酸
将322.1mg (2.66mmol) L-半胱氨酸与319.0mg (3.80mmol)碳酸氢钠一起悬浮于
0.19ml水中。向其中添加溶解于1.90ml异丙醇中的250.0mg (0.38mmol)(3-{[(R)-[1-苄
基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基](氯乙酰基)氨基}丙基)氨基甲酸2-
(三甲基甲硅烷基)乙酯(中间体C83)以及693.8g (4.56mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十
一-7-烯。将反应混合物在50℃下搅拌3.5小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用
饱和碳酸氢钠溶液和饱和NaCl溶液反复洗涤。有机相经硫酸钠干燥并在真空中蒸发溶剂。
残余物未经进一步纯化即进一步使用。这得到276mg (理论值的97%)标题化合物。
[0400] LC-MS (方法12): Rt = 2.34 min; MS (ESIpos): m/z = 744 (M+H)+。
[0401] 中间体C85S-{11-[(R)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基]-2,2-二甲
基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基}-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二
氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-半胱氨酸
将34.8mg (0.27mmol) N,N-二异丙基乙胺添加至100mg (0.13mmol) S-{11-[(R)-[1-
苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基]-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧
杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基}-L-半胱氨酸(1:1)(中间体C84)和41.5mg
(0.13mmol) 1-{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二酮于
4.0ml DMF中的混合物，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。在不后处理的情况下，混合物
通过制备型HPLC纯化。这得到88mg (理论值的70%)标题化合物。
基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基}-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二
氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-半胱氨酸
将34.8mg (0.27mmol) N,N-二异丙基乙胺添加至100mg (0.13mmol) S-{11-[(R)-[1-
苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基]-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧
杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基}-L-半胱氨酸(1:1)(中间体C84)和41.5mg
(0.13mmol) 1-{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二酮于
4.0ml DMF中的混合物，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。在不后处理的情况下，混合物
通过制备型HPLC纯化。这得到88mg (理论值的70%)标题化合物。
[0402] LC-MS (方法12): Rt = 2.71 min; MS (ESIpos): m/z = 936 (M+H)+。
[0403] 中间体C8611-[(R)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基]-2,2-二甲基-6,
12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-酸
将161.65mg (1.17mmol)碳酸钾添加至220.0mg (0.33mmol)(3-{[(R)-[1-苄基-4-(2,
5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基](氯乙酰基)氨基}丙基)氨基甲酸2-(三甲基甲
硅烷基)乙酯(中间体C83)和39.02mg (0.37mmol) 3-硫烷基丙酸于7.45ml甲醇和几滴水中
的混合物。将反应混合物在50℃下搅拌4小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用水
和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸钠干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物未经后处理
即进一步使用。这得到201mg (理论值的83%)标题化合物。
12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-酸
将161.65mg (1.17mmol)碳酸钾添加至220.0mg (0.33mmol)(3-{[(R)-[1-苄基-4-(2,
5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基](氯乙酰基)氨基}丙基)氨基甲酸2-(三甲基甲
硅烷基)乙酯(中间体C83)和39.02mg (0.37mmol) 3-硫烷基丙酸于7.45ml甲醇和几滴水中
的混合物。将反应混合物在50℃下搅拌4小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用水
和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸钠干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物未经后处理
即进一步使用。这得到201mg (理论值的83%)标题化合物。
[0404] LC-MS (方法12): Rt = 2.72 min; MS (ESIneg): m/z = 726 (M-H)-。
[0405] 中间体C87{13-[(R)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基]-1-(2,5-二氧
代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,7,12-三氧代-10-硫杂-3,6,13-三氮杂十六烷-16-基}氨
基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
将54.18mg (0.28mmol) N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
乙酰胺(中间体L1)、71.01mg (0.50mmol) N,N-二异丙基乙胺、104.46mg (0.27mmol) HATU
和0.23ml (0.14mmol) 1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.5M，在DMF中)添加至100mg (0.14mmol)
11-[(R)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基]-2,2-二甲基-6,12-
二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-酸(中间体C86)于1.37ml DMF中
的溶液。将反应混合物在室温下搅拌5小时。在无进一步后处理的情况下，混合物通过制备
型HPLC纯化。这得到41mg (理论值的33%)标题化合物。
代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,7,12-三氧代-10-硫杂-3,6,13-三氮杂十六烷-16-基}氨
基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
将54.18mg (0.28mmol) N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
乙酰胺(中间体L1)、71.01mg (0.50mmol) N,N-二异丙基乙胺、104.46mg (0.27mmol) HATU
和0.23ml (0.14mmol) 1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.5M，在DMF中)添加至100mg (0.14mmol)
11-[(R)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基]-2,2-二甲基-6,12-
二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-酸(中间体C86)于1.37ml DMF中
的溶液。将反应混合物在室温下搅拌5小时。在无进一步后处理的情况下，混合物通过制备
型HPLC纯化。这得到41mg (理论值的33%)标题化合物。
[0406] LC-MS (方法12): Rt = 2.61 min; MS (ESIpos): m/z = 907 (M+H)+。
[0407] 中间体C883-[({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基)甲
基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯三氟乙酸(1:1)
立体异构体的混合物
将1.71g (8.05mmol)三乙酰氧基硼氢化钠和0.40g (6.61mmol)乙酸添加至2.04mg
(5.75mmol)(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙-1-胺于
51ml二氯甲烷中的溶液，并将反应混合物在室温下搅拌5分钟。然后添加1.32g (6.61mmol)
3-甲酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯于20ml二氯甲烷中的溶液，并将混合物在室温下搅拌过夜。
反应混合物用乙酸乙酯稀释并将有机相用饱和碳酸钠溶液和饱和NaCl溶液各洗涤两次，经
硫酸镁干燥并浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到1.86g (理论值的50%)标题化合物。
基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯三氟乙酸(1:1)
立体异构体的混合物
将1.71g (8.05mmol)三乙酰氧基硼氢化钠和0.40g (6.61mmol)乙酸添加至2.04mg
(5.75mmol)(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙-1-胺于
51ml二氯甲烷中的溶液，并将反应混合物在室温下搅拌5分钟。然后添加1.32g (6.61mmol)
3-甲酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯于20ml二氯甲烷中的溶液，并将混合物在室温下搅拌过夜。
反应混合物用乙酸乙酯稀释并将有机相用饱和碳酸钠溶液和饱和NaCl溶液各洗涤两次，经
硫酸镁干燥并浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到1.86g (理论值的50%)标题化合物。
[0408] LC-MS (方法1): Rt = 0.99 min; MS (ESIpos): m/z = 538 (M+H-CF3CO2H)+。
[0409] 中间体C893-{[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰
基)氨基]甲基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
用4Å分子筛将1.36g (13.42mmol)三乙胺和2.13g (18.87mmol)氯乙酰氯添加至2.89g
(4.19mmol，80%纯) 3-[({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}氨基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间体C90)于42ml二氯甲烷中的溶液。将反应
混合物在室温下搅拌5小时。混合物在旋转蒸发仪上浓缩且残余物通过制备型HPLC纯化。这
得到449mg (理论值的17%)标题化合物的异构体1和442mg (理论值的17%)标题化合物的异
构体2。
基)氨基]甲基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
用4Å分子筛将1.36g (13.42mmol)三乙胺和2.13g (18.87mmol)氯乙酰氯添加至2.89g
(4.19mmol，80%纯) 3-[({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}氨基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间体C90)于42ml二氯甲烷中的溶液。将反应
混合物在室温下搅拌5小时。混合物在旋转蒸发仪上浓缩且残余物通过制备型HPLC纯化。这
得到449mg (理论值的17%)标题化合物的异构体1和442mg (理论值的17%)标题化合物的异
构体2。
[0410] 异构体 1 LC-MS (方法12): Rt = 2.74 min; MS (ESIpos): m/z = 636 (M+NH4+ +
)
异构体 2 LC-MS (方法12): Rt = 2.78 min; MS (ESIpos): m/z = 636 (M+NH4+)+。
)
异构体 2 LC-MS (方法12): Rt = 2.78 min; MS (ESIpos): m/z = 636 (M+NH4+)+。
[0411] 中间体C90S-[2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-L-半胱氨酸(异构体1)
将357.3mg (0.58mmol) L-半胱氨酸与488.7mg (4.07mmol)碳酸氢钠一起悬浮于
2.3ml水中。向其中添加溶解于23.0ml异丙醇中的357.0mg (0.58mmol) 3-{[{(1R)-1-[1-
苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]甲基}吡咯
烷-1-甲酸叔丁酯(异构体1)(中间体C91，异构体1)以及1.06g (6.98mmol) 1,8-二氮杂双
环[5.4.0]十一-7-烯。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且
有机相用饱和碳酸氢钠溶液重复洗涤并用饱和NaCl溶液洗涤一次。有机相经硫酸镁干燥并
在真空中蒸发溶剂。残余物未经进一步纯化即使用。这得到255.0mg (理论值的62%)标题化
合物。
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-L-半胱氨酸(异构体1)
将357.3mg (0.58mmol) L-半胱氨酸与488.7mg (4.07mmol)碳酸氢钠一起悬浮于
2.3ml水中。向其中添加溶解于23.0ml异丙醇中的357.0mg (0.58mmol) 3-{[{(1R)-1-[1-
苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]甲基}吡咯
烷-1-甲酸叔丁酯(异构体1)(中间体C91，异构体1)以及1.06g (6.98mmol) 1,8-二氮杂双
环[5.4.0]十一-7-烯。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且
有机相用饱和碳酸氢钠溶液重复洗涤并用饱和NaCl溶液洗涤一次。有机相经硫酸镁干燥并
在真空中蒸发溶剂。残余物未经进一步纯化即使用。这得到255.0mg (理论值的62%)标题化
合物。
[0412] LC-MS (方法1): Rt = 1.09 min; MS (ESIpos): m/z = 699 (M+H)+。
[0413] 中间体C91S-[2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-L-半胱氨酸(异构体2)
将453.5mg (3.74mmol) L-半胱氨酸与449.2mg (5.35mmol)碳酸氢钠一起悬浮于
2.1ml水中。向其中添加溶解于21.1ml异丙醇中的3287.4mg (0.54mmol) 3-{[{(1R)-1-[1-
苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]甲基}吡咯
烷-1-甲酸叔丁酯(中间体C91，异构体2)和0.98g (6.42mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十
一-7-烯。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用饱
和碳酸氢钠溶液重复洗涤并用饱和NaCl溶液洗涤一次。有机相经硫酸镁干燥并在减真空中
蒸发溶剂。残余物未经进一步纯化即使用。这得到221.0mg (理论值的59%)标题化合物。
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-L-半胱氨酸(异构体2)
将453.5mg (3.74mmol) L-半胱氨酸与449.2mg (5.35mmol)碳酸氢钠一起悬浮于
2.1ml水中。向其中添加溶解于21.1ml异丙醇中的3287.4mg (0.54mmol) 3-{[{(1R)-1-[1-
苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]甲基}吡咯
烷-1-甲酸叔丁酯(中间体C91，异构体2)和0.98g (6.42mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十
一-7-烯。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用饱
和碳酸氢钠溶液重复洗涤并用饱和NaCl溶液洗涤一次。有机相经硫酸镁干燥并在减真空中
蒸发溶剂。残余物未经进一步纯化即使用。这得到221.0mg (理论值的59%)标题化合物。
[0414] LC-MS (方法1): Rt = 1.12 min; MS (ESIpos): m/z = 699 (M+H)+。
[0415] 中间体C92S-[2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-半胱氨酸(异构体1)
将18.49mg (0.14mmol) N,N-二异丙基乙胺添加至50mg (0.07mmol) S-[2-({(1R)-1-
[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡咯
烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-L-半胱氨酸(中间体C92)和22.06mg (0.07mmol) 1-
{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二酮于3.3ml DMF中的
混合物，并将反应混合物在室温下搅拌45分钟。在不后处理的情况下，混合物通过制备型
HPLC纯化。这得到65mg (理论值的100%，71%纯)标题化合物。
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-半胱氨酸(异构体1)
将18.49mg (0.14mmol) N,N-二异丙基乙胺添加至50mg (0.07mmol) S-[2-({(1R)-1-
[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡咯
烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-L-半胱氨酸(中间体C92)和22.06mg (0.07mmol) 1-
{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二酮于3.3ml DMF中的
混合物，并将反应混合物在室温下搅拌45分钟。在不后处理的情况下，混合物通过制备型
HPLC纯化。这得到65mg (理论值的100%，71%纯)标题化合物。
[0416] LC-MS (方法1): Rt = 1.31 min; MS (ESIpos): m/z = 892 (M+H)+。
[0417] 中间体C93S-[2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-半胱氨酸(异构体2)
将18.49mg (0.14mmol) N,N-二异丙基乙胺添加至50.0mg (0.07mmol) S-[2-({(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡
咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-L-半胱氨酸(中间体C93)和22.06mg (0.07mmol) 1-
{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二酮于3.0ml DMF中的
混合物，并将反应混合物在室温下搅拌90分钟。在不后处理的情况下，混合物通过制备型
HPLC纯化。这得到63mg (理论值的98%，73%纯)标题化合物。
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-半胱氨酸(异构体2)
将18.49mg (0.14mmol) N,N-二异丙基乙胺添加至50.0mg (0.07mmol) S-[2-({(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡
咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-L-半胱氨酸(中间体C93)和22.06mg (0.07mmol) 1-
{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二酮于3.0ml DMF中的
混合物，并将反应混合物在室温下搅拌90分钟。在不后处理的情况下，混合物通过制备型
HPLC纯化。这得到63mg (理论值的98%，73%纯)标题化合物。
[0418] LC-MS (方法1): Rt = 1.34 min; MS (ESIpos): m/z = 892 (M+H)+。
[0419] 中间体C94S-[2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-
吡咯-1-基)乙酰基]-L-半胱氨酸(异构体1)
将18.5mg (0.14mmol) N,N-二异丙基乙胺添加至50.0mg (0.07mmol) S-[2-({(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[-1-(叔丁氧基羰基)吡
咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-L-半胱氨酸(中间体C92)和18.0mg (0.07mmol) -
{2-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-2-氧代乙基}-1H-吡咯-2,5-二酮于3.3ml DMF中的
混合物，并将反应混合物在室温下搅拌30分钟。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用
饱和NH4Cl溶液和饱和NaCl溶液反复洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余
物未经进一步纯化即采用。这得到57mg (理论值的81%，85%纯)标题化合物。
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-
吡咯-1-基)乙酰基]-L-半胱氨酸(异构体1)
将18.5mg (0.14mmol) N,N-二异丙基乙胺添加至50.0mg (0.07mmol) S-[2-({(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[-1-(叔丁氧基羰基)吡
咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-L-半胱氨酸(中间体C92)和18.0mg (0.07mmol) -
{2-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-2-氧代乙基}-1H-吡咯-2,5-二酮于3.3ml DMF中的
混合物，并将反应混合物在室温下搅拌30分钟。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用
饱和NH4Cl溶液和饱和NaCl溶液反复洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余
物未经进一步纯化即采用。这得到57mg (理论值的81%，85%纯)标题化合物。
[0420] LC-MS (方法1): Rt = 0.96 min; MS (ESIpos): m/z = 836 (M+H)+。
[0421] 中间体C953-{[2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]硫基}丙酸(异构体1)
将302.5mg (2.19mmol)碳酸钾添加至384.0mg (0.62mmol) 3-{[{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]甲基}吡咯烷-1-甲酸
叔丁酯(中间体C91异构体1)和73.0mg (0.69mmol) 3-硫烷基丙酸于14ml甲醇和几滴水中
的混合物。将反应混合物在50℃下搅拌2.5小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用
水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥
残余物。残余物未经处理即进一步使用。这得到358.0mg (理论值的84%)标题化合物。
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]硫基}丙酸(异构体1)
将302.5mg (2.19mmol)碳酸钾添加至384.0mg (0.62mmol) 3-{[{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]甲基}吡咯烷-1-甲酸
叔丁酯(中间体C91异构体1)和73.0mg (0.69mmol) 3-硫烷基丙酸于14ml甲醇和几滴水中
的混合物。将反应混合物在50℃下搅拌2.5小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用
水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥
残余物。残余物未经处理即进一步使用。这得到358.0mg (理论值的84%)标题化合物。
[0422] LC-MS (方法1): Rt = 1.33 min; MS (ESIpos): m/z = 684 (M+H)+。
[0423] 中间体C963-{[2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]硫基}丙酸(异构体2)
将226.0mg (1.64mmol)碳酸钾添加至287.0mg (0.45mmol) 3-{[{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]甲基}吡咯烷-1-甲酸
叔丁酯(中间体C91异构体2)和54.6mg (0.51mmol) 3-硫烷基丙酸于14ml甲醇和几滴水中
的混合物。将反应混合物在50℃下搅拌2.5小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用
水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥
残余物。残余物未经处理即进一步使用。这得到318.7mg (理论值的88%，88%纯)标题化合
物。
(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]硫基}丙酸(异构体2)
将226.0mg (1.64mmol)碳酸钾添加至287.0mg (0.45mmol) 3-{[{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]甲基}吡咯烷-1-甲酸
叔丁酯(中间体C91异构体2)和54.6mg (0.51mmol) 3-硫烷基丙酸于14ml甲醇和几滴水中
的混合物。将反应混合物在50℃下搅拌2.5小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用
水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥
残余物。残余物未经处理即进一步使用。这得到318.7mg (理论值的88%，88%纯)标题化合
物。
[0424] LC-MS (方法1): Rt = 1.36 min; MS (ESIpos): m/z = 684 (M+H)+。
[0425] 中间体C973-[2-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-14-
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3,8,13-三氧代-5-硫杂-2,9,12-三氮杂十四烷-
1-基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(异构体2)
在氩气下，将14.17mg (0.11mmol) N,N-二异丙基乙胺和27.80mg (0.07mmol) HATU添
加至25.0mg (0.04mmol) 3-{[2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]硫基}丙酸
(中间体C102)于2.81ml DMF中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加
22.75mg (0.07mmol) N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺-
乙烷(1:1)三氟乙酸(中间体L1)于1.4ml DMF中的溶液和5mg (0.04mmol) N,N-二异丙基乙
胺，并将混合物在室温下搅拌过夜。向该混合物添加水且用二氯甲烷萃取。有机相经硫酸镁
干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物未经后处理即进一步使用。这得到318.7mg (理论值的
88%)标题化合物。
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3,8,13-三氧代-5-硫杂-2,9,12-三氮杂十四烷-
1-基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(异构体2)
在氩气下，将14.17mg (0.11mmol) N,N-二异丙基乙胺和27.80mg (0.07mmol) HATU添
加至25.0mg (0.04mmol) 3-{[2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]硫基}丙酸
(中间体C102)于2.81ml DMF中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加
22.75mg (0.07mmol) N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺-
乙烷(1:1)三氟乙酸(中间体L1)于1.4ml DMF中的溶液和5mg (0.04mmol) N,N-二异丙基乙
胺，并将混合物在室温下搅拌过夜。向该混合物添加水且用二氯甲烷萃取。有机相经硫酸镁
干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物未经后处理即进一步使用。这得到318.7mg (理论值的
88%)标题化合物。
[0426] LC-MS (方法5): Rt = 4.39 min; MS (ESIpos): m/z = 863 (M+H)+。
[0427] 中间体C983-[2-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-18-
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3,8,13-三氧代-5-硫杂-2,9,12-三氮杂十八烷-
1-基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(异构体2)
在氩气下，将14.17mg (0.11mmol) N,N-二异丙基乙胺和27.80mg (0.07mmol) HATU添
加至25.0mg (0.04mmol) 3-{[2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]硫基}丙酸
(中间体C102)于2.81ml DMF中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加
37.30mg (0.07mmol) N-(2-氨基乙基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺-
乙烷(1:1)三氟乙酸于1.4ml DMF中的溶液和5mg (0.04mmol) N,N-二异丙基乙胺，并将混
合物在室温下搅拌过夜。向该混合物添加水且用二氯甲烷萃取。有机相经硫酸镁干燥并在
真空中蒸发溶剂。残余物未经进一步纯化即采用。这得到318.7mg (理论值的88%)标题化合
物。
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3,8,13-三氧代-5-硫杂-2,9,12-三氮杂十八烷-
1-基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(异构体2)
在氩气下，将14.17mg (0.11mmol) N,N-二异丙基乙胺和27.80mg (0.07mmol) HATU添
加至25.0mg (0.04mmol) 3-{[2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]硫基}丙酸
(中间体C102)于2.81ml DMF中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加
37.30mg (0.07mmol) N-(2-氨基乙基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺-
乙烷(1:1)三氟乙酸于1.4ml DMF中的溶液和5mg (0.04mmol) N,N-二异丙基乙胺，并将混
合物在室温下搅拌过夜。向该混合物添加水且用二氯甲烷萃取。有机相经硫酸镁干燥并在
真空中蒸发溶剂。残余物未经进一步纯化即采用。这得到318.7mg (理论值的88%)标题化合
物。
[0428] LC-MS (方法5): Rt = 4.54 min; MS (ESIpos): m/z = 919 (M+H)+。
[0429] 中间体C993-[2-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-24-
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3,8,19-三氧代-12,15-二氧杂-5-硫杂-2,9,18-
三氮杂二十四烷-1-基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(异构体2)
在氩气下，将14.17mg (0.11mmol) N,N-二异丙基乙胺和27.80mg (0.07mmol) HATU添
加至25.0mg (0.04mmol) 3-{[2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]硫基}丙酸
(中间体C102)于2.81ml DMF中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加
35.05mg (0.07mmol) N-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基}-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)己酰胺-乙烷(1:1)三氟乙酸(中间体L82)于1.4ml DMF中的溶液和5mg
(0.04mmol) N,N-二异丙基乙胺，并将混合物在室温下搅拌过夜。向该混合物添加水且用二
氯甲烷萃取。有机相经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。残余物未
经后处理即进一步使用。这得到25mg (理论值的36%)标题化合物。
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3,8,19-三氧代-12,15-二氧杂-5-硫杂-2,9,18-
三氮杂二十四烷-1-基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(异构体2)
在氩气下，将14.17mg (0.11mmol) N,N-二异丙基乙胺和27.80mg (0.07mmol) HATU添
加至25.0mg (0.04mmol) 3-{[2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]硫基}丙酸
(中间体C102)于2.81ml DMF中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加
35.05mg (0.07mmol) N-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基}-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)己酰胺-乙烷(1:1)三氟乙酸(中间体L82)于1.4ml DMF中的溶液和5mg
(0.04mmol) N,N-二异丙基乙胺，并将混合物在室温下搅拌过夜。向该混合物添加水且用二
氯甲烷萃取。有机相经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。残余物未
经后处理即进一步使用。这得到25mg (理论值的36%)标题化合物。
[0430] LC-MS (方法1): Rt = 4.52 min; MS (ESIpos): m/z = 1007 (M+H)+。
[0431] 中间体C100{(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}
(乙醇酰基)氨基]-1-[(2-{[(2R)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}
乙基)氨基]-1-氧代丁-2-基}氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
将22.2mg (0.068mmol)(2R)-N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-
基)丙酰胺(1:1)三氟乙酸添加至45mg (0.068mmol)(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二
氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)
乙氧基]羰基}氨基)丁酸于5.8ml DMF中的溶液。在室温下搅拌30分钟后，将39mg
(0.10mmol) HATU和36mg (0.27mmol) N,N-二异丙基乙胺添加至混合物。将反应混合物在
室温下搅拌1小时。在不后处理的情况下，混合物通过制备型HPLC纯化。这得到7mg (理论值
的12%)标题化合物。
(乙醇酰基)氨基]-1-[(2-{[(2R)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}
乙基)氨基]-1-氧代丁-2-基}氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
将22.2mg (0.068mmol)(2R)-N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-
基)丙酰胺(1:1)三氟乙酸添加至45mg (0.068mmol)(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二
氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)
乙氧基]羰基}氨基)丁酸于5.8ml DMF中的溶液。在室温下搅拌30分钟后，将39mg
(0.10mmol) HATU和36mg (0.27mmol) N,N-二异丙基乙胺添加至混合物。将反应混合物在
室温下搅拌1小时。在不后处理的情况下，混合物通过制备型HPLC纯化。这得到7mg (理论值
的12%)标题化合物。
[0432] LC-MS (方法1): Rt = 1.41 min; MS (ESIpos): m/z 851 (M+H)+。
[0433] 中间体L1三氟乙酸/N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:1)
标题化合物通过肽化学的经典方法由市售(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙
酸和(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯来制备。
标题化合物通过肽化学的经典方法由市售(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙
酸和(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯来制备。
[0434] HPLC (方法11): Rt = 0.19 min;+
LC-MS (方法1): Rt = 0.17 min; MS (ESIpos): m/z = 198 (M+H) 。
LC-MS (方法1): Rt = 0.17 min; MS (ESIpos): m/z = 198 (M+H) 。
[0435] 中间体L2三氟乙酸/rel-(1R,2S)-2-氨基-N-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]
环戊烷甲酰胺(1:1)
从50mg (0.214mmol)市售顺-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1-环戊烷甲酸和60mg
(0.235mmol)同样市售的三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过用EDC/
HOBT偶联且随后用TFA脱保护来制备标题化合物。这得到36mg (经2个步骤，理论值的38%)
标题化合物。
环戊烷甲酰胺(1:1)
从50mg (0.214mmol)市售顺-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1-环戊烷甲酸和60mg
(0.235mmol)同样市售的三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过用EDC/
HOBT偶联且随后用TFA脱保护来制备标题化合物。这得到36mg (经2个步骤，理论值的38%)
标题化合物。
[0436] HPLC (方法11): Rt = 0.2 min;+
LC-MS (方法1): Rt = 0.17 min; MS (ESIpos): m/z = 252 (M+H) 。
LC-MS (方法1): Rt = 0.17 min; MS (ESIpos): m/z = 252 (M+H) 。
[0437] 中间体L3三氟乙酸/(1S,2R)-2-氨基-N-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]环戊
烷甲酰胺(1:1)
从50mg (0.214mmol)市售(1S,2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸与72mg
(0.283mmol)同样市售的三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过用EDC/
HOBT偶联且随后用TFA脱保护来制备标题化合物。这得到13mg (经2个步骤，理论值的16%)
标题化合物。
烷甲酰胺(1:1)
从50mg (0.214mmol)市售(1S,2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸与72mg
(0.283mmol)同样市售的三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过用EDC/
HOBT偶联且随后用TFA脱保护来制备标题化合物。这得到13mg (经2个步骤，理论值的16%)
标题化合物。
[0438] HPLC (方法11): Rt = 0.2 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.2 min; MS (ESIpos): m/z = 252 (M+H)+。
[0439] 中间体L4三氟乙酸/N-(2-氨基乙基)-4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)环己烷甲酰胺
(1:1)
标题化合物通过肽化学的经典方法从市售1-[(4-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]
羰基}环己基)甲基]-1H-吡咯-2,5-二酮和(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯来制备。
(1:1)
标题化合物通过肽化学的经典方法从市售1-[(4-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]
羰基}环己基)甲基]-1H-吡咯-2,5-二酮和(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯来制备。
[0440] HPLC (方法11): Rt = 0.26 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.25 min; MS (ESIpos): m/z = 280 (M+H)+。
[0441] 中间体L5三氟乙酸/N-[4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)苯基]-β-丙氨酰胺(1:1)
标题化合物通过肽化学的经典方法从市售1-(4-氨基苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮和N-
(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸制备。
标题化合物通过肽化学的经典方法从市售1-(4-氨基苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮和N-
(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸制备。
[0442] HPLC (方法11): Rt = 0.22 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.22 min; MS (ESIpos): m/z = 260 (M+H)+。
[0443] 中间体L6三氟乙酸/N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨
酰基-L-赖氨酸叔丁酯(1:1)
通过最初在EDC/HOBT存在的情况下将市售6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
己酸与通过肽化学的经典方法制备的部分保护的肽L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-N6-(叔丁氧
基羰基)-L-赖氨酸叔丁酯偶联来制备标题化合物。这随后在温和条件下通过在DCM中的5%
三氟乙酸中在室温下搅拌来在氨基处脱保护，由此得到标题化合物，产率为37%。
酰基-L-赖氨酸叔丁酯(1:1)
通过最初在EDC/HOBT存在的情况下将市售6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
己酸与通过肽化学的经典方法制备的部分保护的肽L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-N6-(叔丁氧
基羰基)-L-赖氨酸叔丁酯偶联来制备标题化合物。这随后在温和条件下通过在DCM中的5%
三氟乙酸中在室温下搅拌来在氨基处脱保护，由此得到标题化合物，产率为37%。
[0444] HPLC (方法11): Rt = 1.29 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.62 min; MS (ESIpos): m/z = 566 (M+H)+。
[0445] 中间体L7三氟乙酸/β-丙氨酰基-L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-N-[4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)苯基]-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物根据肽化学的经典方法从市售1-(4-氨基苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮通过如
下来制备：依次在HATU存在的情况下与N2-(叔丁氧基羰基)-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸偶联，
用TFA脱保护，与N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联，用TFA脱保
护，与N-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联和再用TFA脱保护。获得
32mg标题化合物。
1H-吡咯-1-基)苯基]-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物根据肽化学的经典方法从市售1-(4-氨基苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮通过如
下来制备：依次在HATU存在的情况下与N2-(叔丁氧基羰基)-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸偶联，
用TFA脱保护，与N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联，用TFA脱保
护，与N-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联和再用TFA脱保护。获得
32mg标题化合物。
[0446] HPLC (方法11): Rt = 0.31 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.47 min; MS (ESIpos): m/z = 516 (M+H)+。
[0447] 中间体L8三氟乙酸/L-丙氨酰基-N5-氨基甲酰基-N-[4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
苯基]-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物根据肽化学的经典方法从市售1-(4-氨基苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮通过如
2 5
下来制备：依次在HATU存在的情况下与N-(叔丁氧基羰基)-N-氨基甲酰基-L-鸟氨酸偶联，
用TFA脱保护，与N-(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联和再用TFA脱
保护。获得171mg标题化合物。
苯基]-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物根据肽化学的经典方法从市售1-(4-氨基苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮通过如
2 5
下来制备：依次在HATU存在的情况下与N-(叔丁氧基羰基)-N-氨基甲酰基-L-鸟氨酸偶联，
用TFA脱保护，与N-(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联和再用TFA脱
保护。获得171mg标题化合物。
[0448] HPLC (方法11): Rt = 0.23 min;LC-MS (方法7): Rt = 0.3 min; MS (ESIpos): m/z = 417 (M+H)+。
[0449] 中间体L9三氟乙酸/β-丙氨酰基-L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-N-[4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯
基]-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物类似于中间体L7从市售(4-氨基苯基)乙酸甲酯制备。获得320mg标题化合
物。
基]-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物类似于中间体L7从市售(4-氨基苯基)乙酸甲酯制备。获得320mg标题化合
物。
[0450] HPLC (方法11): Rt = 0.45 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.48 min; MS (ESIpos): m/z = 493 (M+H)+。
[0451] 中间体L10N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-rel-
N6-{[(1R,2S)-2-氨基环戊基]羰基}-L-赖氨酸/三氟乙酸(1:2)
标题化合物从中间体L6通过在EDC/HOBT下与顺-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1-环戊烷
甲酸偶联且随后用TFA脱保护来制备。这得到12mg (经2个步骤，理论值的52%)标题化合物。
N6-{[(1R,2S)-2-氨基环戊基]羰基}-L-赖氨酸/三氟乙酸(1:2)
标题化合物从中间体L6通过在EDC/HOBT下与顺-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1-环戊烷
甲酸偶联且随后用TFA脱保护来制备。这得到12mg (经2个步骤，理论值的52%)标题化合物。
[0452] HPLC (方法11): Rt = 1.45 min;+
LC-MS (方法1): Rt = 0.73 min; MS (ESIpos): m/z = 677 (M+H) 。
LC-MS (方法1): Rt = 0.73 min; MS (ESIpos): m/z = 677 (M+H) 。
[0453] 中间体L11N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-N6-
{[(1S,2R)-2-氨基环戊基]羰基}-L-赖氨酸/三氟乙酸(1:2)
标题化合物从中间体L6通过在EDC/HOBT下与(1S,2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊
烷甲酸偶联且随后用TFA脱保护来制备。这得到11mg (经2个步骤，理论值的39%)标题化合
物。
{[(1S,2R)-2-氨基环戊基]羰基}-L-赖氨酸/三氟乙酸(1:2)
标题化合物从中间体L6通过在EDC/HOBT下与(1S,2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊
烷甲酸偶联且随后用TFA脱保护来制备。这得到11mg (经2个步骤，理论值的39%)标题化合
物。
[0454] HPLC (方法11): Rt = 1.45 min;+
LC-MS (方法1): Rt = 0.74 min; MS (ESIpos): m/z = 677 (M+H) 。
LC-MS (方法1): Rt = 0.74 min; MS (ESIpos): m/z = 677 (M+H) 。
[0455] 中间体L12三氟乙酸/1-[2-(2-氨基乙氧基)乙基]-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)
将381mg (2.46mmol) 2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯添加至溶解于7ml
二氧杂环己烷/水1:1中的228mg (1.12mmol)[2-(2-氨基乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯。然
后添加1.2ml饱和碳酸氢钠溶液并将混合物在室温下搅拌。总共搅拌5天和再添加2次相同
量的碳酸氢钠溶液后，混合物通过如下来后处理：用三氟乙酸酸化，在旋转蒸发仪上浓缩且
通过制备型HPLC纯化残余物。合并相应级分，在真空中移除溶剂且残余物从乙腈/水1:1冻
干。
将381mg (2.46mmol) 2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯添加至溶解于7ml
二氧杂环己烷/水1:1中的228mg (1.12mmol)[2-(2-氨基乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯。然
后添加1.2ml饱和碳酸氢钠溶液并将混合物在室温下搅拌。总共搅拌5天和再添加2次相同
量的碳酸氢钠溶液后，混合物通过如下来后处理：用三氟乙酸酸化，在旋转蒸发仪上浓缩且
通过制备型HPLC纯化残余物。合并相应级分，在真空中移除溶剂且残余物从乙腈/水1:1冻
干。
[0456] 将残余物置于3ml二氯甲烷中，并添加1ml三氟乙酸。在室温下搅拌15分钟后，在真空中移除溶剂且残余物从乙腈/水1:1冻干。这得到70mg (经2个步骤，理论值的67%)作为树
脂质残余物的标题化合物。
脂质残余物的标题化合物。
[0457] HPLC (方法11): Rt = 0.2 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.18 min; MS (ESIpos): m/z = 185 (M+H)+。
[0458] 中间体L13三氟乙酸/N2-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-赖氨酸叔丁酯(1:
1)
标题化合物类似于中间体L6通过如下来制备：在EDC/HOBT存在的情况下将(2,5-二氧
代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸与N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸叔丁酯盐酸盐(1:1)偶
联且随后温和移除叔丁氧基羰基保护基。
1)
标题化合物类似于中间体L6通过如下来制备：在EDC/HOBT存在的情况下将(2,5-二氧
代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸与N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸叔丁酯盐酸盐(1:1)偶
联且随后温和移除叔丁氧基羰基保护基。
[0459] HPLC (方法11): Rt = 0.42 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.43 min; MS (ESIpos): m/z = 340 (M+H)+。
[0460] 中间体L14三氟乙酸/1-[2-(4-氨基哌嗪-1-基)-2-氧代乙基]-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)
标题化合物类似于中间体L2经2个步骤从哌嗪-1-基氨基甲酸叔丁酯和(2,5-二氧代-
2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸制备。
标题化合物类似于中间体L2经2个步骤从哌嗪-1-基氨基甲酸叔丁酯和(2,5-二氧代-
2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸制备。
[0461] HPLC (方法11): Rt = 0.2 min;LC-MS (方法3): Rt = 0.25 min; MS (ESIpos): m/z = 239 (M+H)+。
[0462] 中间体L15三氟乙酸/N-(2-氨基乙基)-3-(2-{2-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧
基]乙氧基}乙氧基)丙酰胺(1:1)
将2.93g (10.58mmol) 3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸叔丁酯溶解于
100ml二氧杂环己烷/水1:1中，并添加3.28g (21.15mmol) 2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡
咯-1-甲酸甲酯和饱和碳酸氢钠溶液，直至达到6-7的pH值。将溶液在室温下搅拌30分钟且
然后在真空中蒸发1,4-二氧杂环己烷。然后添加200ml水，且混合物用300ml乙酸乙酯振摇
三次。将有机萃取物合并，经硫酸镁干燥且过滤。浓缩后得到作为棕色油的3-(2-{2-[2-(2,
5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酸叔丁酯，其然后在高真空
下干燥。
基]乙氧基}乙氧基)丙酰胺(1:1)
将2.93g (10.58mmol) 3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸叔丁酯溶解于
100ml二氧杂环己烷/水1:1中，并添加3.28g (21.15mmol) 2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡
咯-1-甲酸甲酯和饱和碳酸氢钠溶液，直至达到6-7的pH值。将溶液在室温下搅拌30分钟且
然后在真空中蒸发1,4-二氧杂环己烷。然后添加200ml水，且混合物用300ml乙酸乙酯振摇
三次。将有机萃取物合并，经硫酸镁干燥且过滤。浓缩后得到作为棕色油的3-(2-{2-[2-(2,
5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酸叔丁酯，其然后在高真空
下干燥。
[0463] HPLC (方法11): Rt = 1.5 min;LC-MS (方法3): Rt = 0.88 min; MS (ESIpos): m/z = 375 (M+NH4)+。
[0464] 该中间体通过标准方法(用TFA脱保护，与(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯偶联和再用TFA脱保护)转化为标题化合物。
[0465] HPLC (方法11): Rt = 0.2 min;LC-MS (方法3): Rt = 0.25 min; MS (ESIpos): m/z = 344 (M+H)+。
[0466] 中间体L16N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-
L-鸟氨酸
将535mg (1.73mmol)市售1-{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-
吡咯-2,5-二酮和930ml N,N-二异丙基乙胺添加至266mg (1.33mmol) L-缬氨酰基-N5-氨
基甲酰基-L-鸟氨酸于24ml DMF中的溶液。将混合物在超声波浴中处理24小时且然后在真
空中浓缩至干燥。剩余的残余物通过制备型HPCL纯化并在浓缩相应级分和在高真空下干燥
残余物后得到337mg (理论值的50%)标题化合物。
L-鸟氨酸
将535mg (1.73mmol)市售1-{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-
吡咯-2,5-二酮和930ml N,N-二异丙基乙胺添加至266mg (1.33mmol) L-缬氨酰基-N5-氨
基甲酰基-L-鸟氨酸于24ml DMF中的溶液。将混合物在超声波浴中处理24小时且然后在真
空中浓缩至干燥。剩余的残余物通过制备型HPCL纯化并在浓缩相应级分和在高真空下干燥
残余物后得到337mg (理论值的50%)标题化合物。
[0467] HPLC (方法11): Rt = 0.4 min;LC-MS (方法3): Rt = 0.58 min; MS (ESIpos): m/z = 468 (M+H)+。
[0468] 中间体L17三氟乙酸/N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N5-氨
基甲酰基-L-鸟氨酰基-L-赖氨酸叔丁酯(1:1)
标题化合物通过如下来制备：最初在EDC/HOBT和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将
172mg (0.37mmol)中间体L16和125mg (0.37mmol) N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸叔丁酯
盐酸盐(1:1)偶联且然后在温和条件下通过在DCM中的10%三氟乙酸中在室温下搅拌2小时
而在氨基处脱保护。从乙腈/水冻干后经2个步骤得到194mg (理论值的49%)标题化合物。
基甲酰基-L-鸟氨酰基-L-赖氨酸叔丁酯(1:1)
标题化合物通过如下来制备：最初在EDC/HOBT和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将
172mg (0.37mmol)中间体L16和125mg (0.37mmol) N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸叔丁酯
盐酸盐(1:1)偶联且然后在温和条件下通过在DCM中的10%三氟乙酸中在室温下搅拌2小时
而在氨基处脱保护。从乙腈/水冻干后经2个步骤得到194mg (理论值的49%)标题化合物。
[0469] HPLC (方法11): Rt = 1.1 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.58 min; MS (ESIpos): m/z = 652 (M+H)+。
[0470] 中间体L18三氟乙酸/β-丙氨酰基-L-丙氨酰基-N5-氨基甲酰基-N-[4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯
基]-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物类似于中间体L7从(4-氨基苯基)乙酸甲酯依次根据肽化学的经典方法通
过如下来制备：在HATU存在的情况下连接N2-(叔丁氧基羰基)-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸，用
TFA脱保护，与N-(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联，用TFA脱保护，
与N-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联和再用TFA脱保护。获得
330mg标题化合物。
基]-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物类似于中间体L7从(4-氨基苯基)乙酸甲酯依次根据肽化学的经典方法通
过如下来制备：在HATU存在的情况下连接N2-(叔丁氧基羰基)-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸，用
TFA脱保护，与N-(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联，用TFA脱保护，
与N-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联和再用TFA脱保护。获得
330mg标题化合物。
[0471] HPLC (方法11): Rt = 0.29 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.41 min; MS (ESIpos): m/z = 465 (M+H)+。
[0472] 中间体L19三氟乙酸/L-丙氨酰基-N5-氨基甲酰基-N-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-
基)乙酰基]氨基}苯基)-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物从1,4-苯二胺依次根据肽化学的经典方法制备。在第一步骤中，在HATU和
N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将942mg (8.72mmol) 1,4-苯二胺用0.8g (2.9mmol) N2-
(叔丁氧基羰基)-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸单酰化。在第二步骤中，以类似方式，第二苯胺
氨基在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下用(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
乙酸酰化。用TFA脱保护，与N-(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联和
再用TFA脱保护在另外3个合成步骤中得到标题化合物，其中通过该途径获得148mg。
基)乙酰基]氨基}苯基)-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物从1,4-苯二胺依次根据肽化学的经典方法制备。在第一步骤中，在HATU和
N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将942mg (8.72mmol) 1,4-苯二胺用0.8g (2.9mmol) N2-
(叔丁氧基羰基)-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸单酰化。在第二步骤中，以类似方式，第二苯胺
氨基在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下用(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
乙酸酰化。用TFA脱保护，与N-(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联和
再用TFA脱保护在另外3个合成步骤中得到标题化合物，其中通过该途径获得148mg。
[0473] LC-MS (方法1): Rt = 0.21 min; MS (ESIpos): m/z = 474 (M+H)+。LC-MS (方法4): Rt = 0.2 min; MS (ESIpos): m/z = 474 (M+H)+。
[0474] 中间体L20三氟乙酸/L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-N-[4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
苯基]-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物根据肽化学的经典方法类似于中间体L8从市售1-(4-氨基苯基)-1H-吡咯-
2,5-二酮通过如下来制备：依次在HATU存在的情况下与N2-(叔丁氧基羰基)-N5-氨基甲酰
基-L-鸟氨酸偶联，用TFA脱保护，与N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基
酯偶联和再用TFA脱保护。获得171mg标题化合物。
苯基]-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物根据肽化学的经典方法类似于中间体L8从市售1-(4-氨基苯基)-1H-吡咯-
2,5-二酮通过如下来制备：依次在HATU存在的情况下与N2-(叔丁氧基羰基)-N5-氨基甲酰
基-L-鸟氨酸偶联，用TFA脱保护，与N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基
酯偶联和再用TFA脱保护。获得171mg标题化合物。
[0475] HPLC (方法11): Rt = 0.28 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.39 min; MS (ESIpos): m/z = 445 (M+H)+。
[0476] 中间体L216
L-缬氨酰基-N-(叔丁氧基羰基)-N-[4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯基]-L-赖氨酰胺
标题化合物根据肽化学的经典方法从市售0.42g (2.56mmol)(4-氨基苯基)乙酸甲酯
通过如下来制备：依次在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与N6-(叔丁氧基羰基)-
N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-赖氨酸偶联，用哌啶脱保护，在N,N-二异丙基乙胺存在
的情况下与N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联和随后在10%活
性炭载钯上氢解移除苄基氧基羰基保护基。这得到360mg (经4个步骤，理论值的32%)标题
化合物。
L-缬氨酰基-N-(叔丁氧基羰基)-N-[4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯基]-L-赖氨酰胺
标题化合物根据肽化学的经典方法从市售0.42g (2.56mmol)(4-氨基苯基)乙酸甲酯
通过如下来制备：依次在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与N6-(叔丁氧基羰基)-
N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-赖氨酸偶联，用哌啶脱保护，在N,N-二异丙基乙胺存在
的情况下与N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯偶联和随后在10%活
性炭载钯上氢解移除苄基氧基羰基保护基。这得到360mg (经4个步骤，理论值的32%)标题
化合物。
[0477] HPLC (方法11): Rt = 1.5 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.73 min; MS (ESIpos): m/z = 493 (M+H)+。
[0478] 中间体L22三氟乙酸/N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[(2S)-2-氨基-3-甲氧
基-3-氧代丙基]苯基}-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物从N-(叔丁氧基羰基)-4-硝基-L-苯基丙氨酸依次根据肽化学的经典方法
来制备。2.5g (8.06mmol)该反应物在第一步骤中最初转化为铯盐且然后用DMF中的碘甲烷
转化为甲酯。
基-3-氧代丙基]苯基}-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物从N-(叔丁氧基羰基)-4-硝基-L-苯基丙氨酸依次根据肽化学的经典方法
来制备。2.5g (8.06mmol)该反应物在第一步骤中最初转化为铯盐且然后用DMF中的碘甲烷
转化为甲酯。
[0479] 然后在10%活性炭载钯上在甲醇中使硝基氢解转化为氨基。
[0480] 然后以该方式产生的氨基在DMF中在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下用N5-氨基甲酰基-N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-鸟氨酸酰化。在下一步骤中，用DMF中的
哌啶移除Fmoc基团。
哌啶移除Fmoc基团。
[0481] 然后在DMF中在1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐、1-羟基-1H-苯并三唑水合物和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-缬氨
酸偶联且最终用三氟乙酸移除叔丁氧基羰基。
酸偶联且最终用三氟乙酸移除叔丁氧基羰基。
[0482] HPLC (方法11): Rt = 1.6 min;+
LC-MS (方法1): Rt = 0.77 min; MS (ESIpos): m/z = 673 (M+H) 。
LC-MS (方法1): Rt = 0.77 min; MS (ESIpos): m/z = 673 (M+H) 。
[0483] 中间体L23三氟乙酸/N-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]-β-丙氨酰胺(1:1)
标题化合物从市售三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过如下来制
备：在EDCI/HOBT和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与N-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸偶联且
随后用三氟乙酸脱保护。
标题化合物从市售三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过如下来制
备：在EDCI/HOBT和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与N-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸偶联且
随后用三氟乙酸脱保护。
[0484] HPLC (方法11): Rt = 0.19 min。
[0485] 中间体L24三氟乙酸/1-氨基-N-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]环丙烷甲酰胺
(1:1)
将114mg (0.67mmol)市售1-[(叔丁氧基羰基)氨基]环丙烷甲酸溶解于25ml DCM中，添
加110mg (0.623mmol)市售三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)和395μl
N,N-二异丙基乙胺并冷却至-10℃。然后添加217mg (0.793mmol)四氟硼酸2-溴-1-乙基吡
啶鎓，并将混合物在室温下搅拌2小时。然后用乙酸乙酯稀释且相继用10%柠檬酸、饱和碳酸
氢钠溶液和饱和氯化钠溶液振摇，然后经硫酸镁干燥并浓缩。在高真空下干燥后得到152mg
保护的中间体。
(1:1)
将114mg (0.67mmol)市售1-[(叔丁氧基羰基)氨基]环丙烷甲酸溶解于25ml DCM中，添
加110mg (0.623mmol)市售三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)和395μl
N,N-二异丙基乙胺并冷却至-10℃。然后添加217mg (0.793mmol)四氟硼酸2-溴-1-乙基吡
啶鎓，并将混合物在室温下搅拌2小时。然后用乙酸乙酯稀释且相继用10%柠檬酸、饱和碳酸
氢钠溶液和饱和氯化钠溶液振摇，然后经硫酸镁干燥并浓缩。在高真空下干燥后得到152mg
保护的中间体。
[0486] 然后将这些置于10ml DCM中并用1ml三氟乙酸脱保护。从乙腈/水冻干后得到158mg (经2个步骤，理论值的71%)标题化合物。
[0487] HPLC (方法11): Rt = 0.19 min.LC-MS (方法3): Rt = 0.98 min; MS (ESIpos): m/z = 224 (M+H)+。
[0488] 中间体L25N-[31-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-29-氧代-4,7,10,13,16,19,22,25-八
氧杂-28-氮杂三十一烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸
将31.4mg (0.17mmol)缬氨酰基-L-丙氨酸溶解于3.0ml DMF中，并添加115.0mg
(0.17mmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{27-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-
基)氧基]-27-氧代-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-1-基}丙酰胺和33.7mg
(0.33mmol)三乙胺。在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到74.1mg (理论值的58%)标题化合物。
氧杂-28-氮杂三十一烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸
将31.4mg (0.17mmol)缬氨酰基-L-丙氨酸溶解于3.0ml DMF中，并添加115.0mg
(0.17mmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{27-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-
基)氧基]-27-氧代-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-1-基}丙酰胺和33.7mg
(0.33mmol)三乙胺。在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到74.1mg (理论值的58%)标题化合物。
[0489] LC-MS (方法1): Rt = 0.61 min; MS (ESIpos): m/z = 763 [M+H]+。
[0490] 中间体L26L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸
将600.0mg (1.58mmol) N2-[(苄基氧基)羰基]-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸悬浮于
25.0ml水/乙醇/THF(1:1:0.5)中，添加炭载钯(10%)且在室温下在标准压力下用氢气氢化5
小时。滤出催化剂且溶剂在真空中蒸发。获得的化合物未经进一步纯化即用于下一步骤。
将600.0mg (1.58mmol) N2-[(苄基氧基)羰基]-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸悬浮于
25.0ml水/乙醇/THF(1:1:0.5)中，添加炭载钯(10%)且在室温下在标准压力下用氢气氢化5
小时。滤出催化剂且溶剂在真空中蒸发。获得的化合物未经进一步纯化即用于下一步骤。
[0491] LC-MS (方法1): Rt = 0.42 min; MS (ESIpos): m/z = 247 [M+H]+。
[0492] 将180mg (0.73mmol) N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸溶解于5.0ml DMF中，并添加74.0mg (0.73mmol)三乙胺。然后添加254.6mg (0.73mmol) N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨
酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯和74.0mg (0.73mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌
3.5小时。反应溶液直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
294.1mg (理论值的76%) N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨
酸。
酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯和74.0mg (0.73mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌
3.5小时。反应溶液直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
294.1mg (理论值的76%) N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨
酸。
[0493] LC-MS (方法1): Rt = 0.97 min; MS (ESIpos): m/z = 480 [M+H]+。
[0494] 将272.2mg (0.57mmol) N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸最初装入20.0ml乙酸乙酯/乙醇/THF(1:1:1)中，并添加27.2mg活性炭载钯。在室
温下在标准压力下用氢气氢化5小时。借助于Celite(R)滤出且滤饼用乙酸乙酯/乙醇/THF
(1:1:1)洗涤。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。标题化合物(182mg，理论值的
72%)未经进一步纯化即用于下一反应步骤中。
温下在标准压力下用氢气氢化5小时。借助于Celite(R)滤出且滤饼用乙酸乙酯/乙醇/THF
(1:1:1)洗涤。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。标题化合物(182mg，理论值的
72%)未经进一步纯化即用于下一反应步骤中。
[0495] LC-MS (方法1): Rt = 0.53 min; MS (ESIpos): m/z = 346 [M+H]+。
[0496] 中间体L27N-[31-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-29-氧代-4,7,10,13,16,19,22,25-八
氧杂-28-氮杂三十一烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸
将30mg (0.07mmol) L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸(中间体L26)和
46.1mg (0.07mmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{27-[(2,5-二氧代吡咯
烷-1-基)氧基]-27-氧代-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-1-基}丙酰胺最初装入
1.5ml DMF中，并添加6.8mg (0.07mmol) 4-甲基吗啉。将反应溶液在室温下搅拌过夜。反应
混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)
纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到55.6mg (理论值的90%)标题化
合物。
氧杂-28-氮杂三十一烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸
将30mg (0.07mmol) L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸(中间体L26)和
46.1mg (0.07mmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{27-[(2,5-二氧代吡咯
烷-1-基)氧基]-27-氧代-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-1-基}丙酰胺最初装入
1.5ml DMF中，并添加6.8mg (0.07mmol) 4-甲基吗啉。将反应溶液在室温下搅拌过夜。反应
混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)
纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到55.6mg (理论值的90%)标题化
合物。
[0497] LC-MS (方法1): Rt = 0.77 min; MS (ESIpos): m/z = 920 [M+H]+。
[0498] 中间体L283-甲酰基-4-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将461.7mg (1.15mmol) 4-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)吡咯烷-1,3-
二甲酸1-叔丁酯3-乙基酯(该化合物根据WO 2006/066896的文献程序制备)最初装入5.0ml
纯二氯甲烷中并冷却至-78℃。然后逐滴缓慢添加326.2mg (2.29mmol)氢化二异丁基铝溶
液(1M，在THF中)，并在-78℃下搅拌2小时(通过薄层色谱法监测(石油醚/乙酸乙酯=3：1))。
逐滴添加溶解于60ml水中的1.3g (4.59mmol)酒石酸钾钠并使反应混合物升温至室温。将
乙酸乙酯添加至反应混合物且水相用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机相用饱和NaCl溶液洗
涤一次且经硫酸镁干燥。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到629.0mg标题
化合物作为粗产物，其未经进一步纯化立即用于下一反应步骤。
将461.7mg (1.15mmol) 4-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)吡咯烷-1,3-
二甲酸1-叔丁酯3-乙基酯(该化合物根据WO 2006/066896的文献程序制备)最初装入5.0ml
纯二氯甲烷中并冷却至-78℃。然后逐滴缓慢添加326.2mg (2.29mmol)氢化二异丁基铝溶
液(1M，在THF中)，并在-78℃下搅拌2小时(通过薄层色谱法监测(石油醚/乙酸乙酯=3：1))。
逐滴添加溶解于60ml水中的1.3g (4.59mmol)酒石酸钾钠并使反应混合物升温至室温。将
乙酸乙酯添加至反应混合物且水相用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机相用饱和NaCl溶液洗
涤一次且经硫酸镁干燥。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到629.0mg标题
化合物作为粗产物，其未经进一步纯化立即用于下一反应步骤。
[0499] 中间体L293-甲酰基-4-[({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁
酯
非对映异构体的混合物
将807.1mg (2.34mmol) 3-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-(羟基甲基)
吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(根据WO 2006/100036的文献程序制备)最初装入8.0ml二氯甲烷中，
并添加236.4mg (2.34mmol)三乙胺。在0℃下，逐滴添加267.6mg (2.34mmol)甲磺酰氯，并
将反应混合物在室温下搅拌过夜。再添加133.8mg (1.17mmol)甲磺酰氯和118.2mg
(1.17mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌过夜。用二氯甲烷稀释并将有机相用饱和
碳酸氢钠溶液、5%硫酸氢钾溶液和饱和NaCl溶液各洗涤一次。经硫酸镁干燥后，在真空中蒸
发溶剂且残余物在Biotage Isolera(硅胶，柱50g SNAP，流动速率66ml/min，环己烷/乙酸
乙酯)上纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到402.0mg (理论值的
41%)化合物3-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-{[(甲基磺酰基)氧基]甲基}吡
咯烷-1-甲酸叔丁酯。
酯
非对映异构体的混合物
将807.1mg (2.34mmol) 3-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-(羟基甲基)
吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(根据WO 2006/100036的文献程序制备)最初装入8.0ml二氯甲烷中，
并添加236.4mg (2.34mmol)三乙胺。在0℃下，逐滴添加267.6mg (2.34mmol)甲磺酰氯，并
将反应混合物在室温下搅拌过夜。再添加133.8mg (1.17mmol)甲磺酰氯和118.2mg
(1.17mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌过夜。用二氯甲烷稀释并将有机相用饱和
碳酸氢钠溶液、5%硫酸氢钾溶液和饱和NaCl溶液各洗涤一次。经硫酸镁干燥后，在真空中蒸
发溶剂且残余物在Biotage Isolera(硅胶，柱50g SNAP，流动速率66ml/min，环己烷/乙酸
乙酯)上纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到402.0mg (理论值的
41%)化合物3-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-{[(甲基磺酰基)氧基]甲基}吡
咯烷-1-甲酸叔丁酯。
[0500] LC-MS (方法1): Rt = 1.38 min; MS (ESIpos): m/z = 424 [M+H]+。
[0501] 将400.0mg (0.94mmol) 3-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-{[(甲基磺酰基)氧基]甲基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯最初装入5.0ml DMF中，并添加98.2mg
(1.51mmol)叠氮化钠。将反应混合物在40℃下搅拌10小时。然后添加另外30.7mg
(0.47mmol)叠氮化钠，并在40℃下再搅拌10小时。添加乙酸乙酯且有机相用水重复洗涤。经
硫酸镁干燥有机相后，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到309.5mg (理论
值的89%)化合物3-(叠氮基甲基)-4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡咯烷-1-
甲酸叔丁酯。化合物未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
(1.51mmol)叠氮化钠。将反应混合物在40℃下搅拌10小时。然后添加另外30.7mg
(0.47mmol)叠氮化钠，并在40℃下再搅拌10小时。添加乙酸乙酯且有机相用水重复洗涤。经
硫酸镁干燥有机相后，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到309.5mg (理论
值的89%)化合物3-(叠氮基甲基)-4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡咯烷-1-
甲酸叔丁酯。化合物未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
[0502] LC-MS (方法1): Rt = 1.50 min; MS (ESIpos): m/z = 371 [M+H]+。
[0503] 将250mg (0.68mmol) 3-(叠氮基甲基)-4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯溶解于10.0ml乙酸乙酯/乙醇(1:1)中，并添加25.0mg活性炭载钯
(R)
(10%)。在室温下在标准压力下用氢气氢化8小时。将反应通过Celite 过滤且滤饼用乙酸
乙酯彻底洗涤。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到226.2mg (理论值的
82%)化合物3-(氨基甲基)-4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡咯烷-1-甲酸叔
丁酯。化合物未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
(R)
(10%)。在室温下在标准压力下用氢气氢化8小时。将反应通过Celite 过滤且滤饼用乙酸
乙酯彻底洗涤。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到226.2mg (理论值的
82%)化合物3-(氨基甲基)-4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡咯烷-1-甲酸叔
丁酯。化合物未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
[0504] LC-MS (方法1): Rt = 0.89 min; MS (ESIpos): m/z = 345 [M+H]+。
[0505] 将715.0mg (2.08mmol) 3-(氨基甲基)-4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯溶解于15.0ml THF中，并添加2.28ml (2.28mmol)TBAF溶液(1M，
在THF中)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂且残余物(1.54g)未经进一
步纯化即用于下一合成步骤。
在THF中)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂且残余物(1.54g)未经进一
步纯化即用于下一合成步骤。
[0506] LC-MS (方法1): Rt = 0.41 min; MS (ESIpos): m/z = 231 [M+H]+。
[0507] 将1.54g (4.88mmol) 3-(氨基甲基)-4-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯最初装入1,4-二氧杂环己烷中，并添加541.8mg (4.88mmol)氯化钙(无水)和488.6mg (4.88mmol)
碳酸钙并用力搅拌。然后添加592.8mg (5.86mmol)三乙胺和1.52g (5.86mmol) 1-({[2-
(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮且反应混合物在室温下搅拌过夜。
添加644.9mg (10.7mmol) HOAc和乙酸乙酯。有机相用水洗涤两次并用饱和NaCl溶液洗涤
一次。经硫酸镁干燥后，在真空中蒸发溶剂且残余物在硅胶(流动相：二氯甲烷/甲醇=100：
1)上纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到346.9mg (理论值的19%)化
合物3-(羟基甲基)-4-[({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)甲基]吡咯烷-1-甲酸
叔丁酯。
碳酸钙并用力搅拌。然后添加592.8mg (5.86mmol)三乙胺和1.52g (5.86mmol) 1-({[2-
(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮且反应混合物在室温下搅拌过夜。
添加644.9mg (10.7mmol) HOAc和乙酸乙酯。有机相用水洗涤两次并用饱和NaCl溶液洗涤
一次。经硫酸镁干燥后，在真空中蒸发溶剂且残余物在硅胶(流动相：二氯甲烷/甲醇=100：
1)上纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到346.9mg (理论值的19%)化
合物3-(羟基甲基)-4-[({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)甲基]吡咯烷-1-甲酸
叔丁酯。
[0508] LC-MS (方法1): Rt = 1.08 min; MS (ESIpos): m/z = 375 [M+H]+。
[0509] 将804.0mg (2.15mmol) 3-(羟基甲基)-4-[({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯最初装入20.0ml氯仿和20.0ml 0.05N碳酸钾/0.05N
碳酸氢钠溶液(1:1)中。然后添加59.7mg (0.22mmol)氯化四正丁基铵、429.9mg
(3.22mmol) N-氯代琥珀酰亚胺和33.5mg (0.22mmol)TEMPO并将反应混合物在室温下用力
搅拌过夜。分离出有机相并在真空中脱除溶剂。残余物通过硅胶色谱法(流动相：环己烷/乙
酸乙酯=3：1)纯化。这得到517.0mg (理论值的46%)标题化合物。
碳酸氢钠溶液(1:1)中。然后添加59.7mg (0.22mmol)氯化四正丁基铵、429.9mg
(3.22mmol) N-氯代琥珀酰亚胺和33.5mg (0.22mmol)TEMPO并将反应混合物在室温下用力
搅拌过夜。分离出有机相并在真空中脱除溶剂。残余物通过硅胶色谱法(流动相：环己烷/乙
酸乙酯=3：1)纯化。这得到517.0mg (理论值的46%)标题化合物。
[0510] LC-MS (方法1): Rt = 1.13 min; MS (ESIpos): m/z = 373 [M+H]+。
[0511] 中间体L303-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-甲酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
立体异构体的混合物
将250.0mg (0.72mmol) 3-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-(羟基甲基)
吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(化合物根据WO2006/100036的文献程序制备)最初装入12.5ml二氯
甲烷/DMSO(4：1)中，并添加219.6mg (2.17mmol)三乙胺。在2℃下，分份添加345.5mg
(2.17mmol)三氧化硫-吡啶络合物并在2℃下搅拌3小时。分份添加另外345.5mg
(2.17mmol)三氧化硫-吡啶络合物并在室温下搅拌17小时。将反应混合物分配于二氯甲烷
和水之间。水相用二氯甲烷萃取三次且合并的有机相用水洗涤一次且经硫酸镁干燥。在真
空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。残余物未经进一步纯化即用于下一合成步骤(薄
层色谱法：石油醚/乙酸乙酯7：3)。
立体异构体的混合物
将250.0mg (0.72mmol) 3-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-(羟基甲基)
吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(化合物根据WO2006/100036的文献程序制备)最初装入12.5ml二氯
甲烷/DMSO(4：1)中，并添加219.6mg (2.17mmol)三乙胺。在2℃下，分份添加345.5mg
(2.17mmol)三氧化硫-吡啶络合物并在2℃下搅拌3小时。分份添加另外345.5mg
(2.17mmol)三氧化硫-吡啶络合物并在室温下搅拌17小时。将反应混合物分配于二氯甲烷
和水之间。水相用二氯甲烷萃取三次且合并的有机相用水洗涤一次且经硫酸镁干燥。在真
空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。残余物未经进一步纯化即用于下一合成步骤(薄
层色谱法：石油醚/乙酸乙酯7：3)。
[0512] 中间体L31{[(叔丁氧基羰基)氨基]甲基}丙二酸二叔丁酯
将57.2g (488.27mmol)氨基甲酸叔丁酯、51.2ml (683.57mmol)甲醛于水中的37%溶液
和25.9g (244.13mmol)碳酸钠添加至600ml水。将混合物温热直至形成溶液且然后在室温
下搅拌16小时。形成的悬浮液用500ml二氯甲烷萃取且分离出有机相，用饱和氯化钠溶液洗
涤并经硫酸钠干燥。在旋转蒸发仪上浓缩且残余物在高真空下干燥，由此得到结晶固体。将
残余物置于1000ml无水THF中，并在室温下逐滴添加322ml (3.414mol)乙酸酐和138ml
(1.707mol)吡啶的混合物。将反应混合物在室温下搅拌16小时且然后在旋转蒸发仪上浓
缩，其中水浴在室温下。将残余物置于二乙醚中并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤三次并用饱和
氯化钠溶液洗涤一次。有机相经硫酸钠干燥并在旋转蒸发仪上浓缩并将残余物在高真空下
干燥2天。将残余物置于2000ml无水THF中，并在冰冷却下添加456ml (456.52mmol) 1M在
THF中的叔丁醇钾溶液。在0℃下搅拌20分钟，且然后逐滴添加溶解于200ml无水THF中的
100.8g (456.52mmol)丙二酸二叔丁酯。在室温下搅拌48小时，且然后添加水。反应混合物
在旋转蒸发仪上浓缩且置于500ml乙酸乙酯中。混合物用500ml水和100ml饱和氯化钠溶液
洗涤且有机相经硫酸钠干燥。有机相在旋转蒸发仪上浓缩并将残余物在高真空下干燥。残
余物通过在硅胶上过滤(流动相：环己烷/乙酸乙酯，梯度=30：1→5：1)来纯化。这得到
37.07g (理论值的22%)标题化合物。
将57.2g (488.27mmol)氨基甲酸叔丁酯、51.2ml (683.57mmol)甲醛于水中的37%溶液
和25.9g (244.13mmol)碳酸钠添加至600ml水。将混合物温热直至形成溶液且然后在室温
下搅拌16小时。形成的悬浮液用500ml二氯甲烷萃取且分离出有机相，用饱和氯化钠溶液洗
涤并经硫酸钠干燥。在旋转蒸发仪上浓缩且残余物在高真空下干燥，由此得到结晶固体。将
残余物置于1000ml无水THF中，并在室温下逐滴添加322ml (3.414mol)乙酸酐和138ml
(1.707mol)吡啶的混合物。将反应混合物在室温下搅拌16小时且然后在旋转蒸发仪上浓
缩，其中水浴在室温下。将残余物置于二乙醚中并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤三次并用饱和
氯化钠溶液洗涤一次。有机相经硫酸钠干燥并在旋转蒸发仪上浓缩并将残余物在高真空下
干燥2天。将残余物置于2000ml无水THF中，并在冰冷却下添加456ml (456.52mmol) 1M在
THF中的叔丁醇钾溶液。在0℃下搅拌20分钟，且然后逐滴添加溶解于200ml无水THF中的
100.8g (456.52mmol)丙二酸二叔丁酯。在室温下搅拌48小时，且然后添加水。反应混合物
在旋转蒸发仪上浓缩且置于500ml乙酸乙酯中。混合物用500ml水和100ml饱和氯化钠溶液
洗涤且有机相经硫酸钠干燥。有机相在旋转蒸发仪上浓缩并将残余物在高真空下干燥。残
余物通过在硅胶上过滤(流动相：环己烷/乙酸乙酯，梯度=30：1→5：1)来纯化。这得到
37.07g (理论值的22%)标题化合物。
[0513] LC-MS (方法6): Rt = 2.87 min; MS (ESIpos): m/z = 346 [M+H]+。
[0514] 中间体L32[3-羟基-2-(羟基甲基)丙基]氨基甲酸叔丁酯
将37.0g (107.11mmol)(乙酰氧基甲基)丙二酸二叔丁酯溶解于1000ml无水THF中，并
在冰冷却下逐滴添加535.5ml (1071.10mmol)硼氢化锂于THF中的2M溶液。逐滴添加19.3ml
(1071.10mmol)水并在室温下搅拌4.5小时。反应混合物在旋转蒸发仪上浓缩，并在高真空
下干燥。将残余物置于1500ml乙酸乙酯中，添加100ml水并在水冷却下搅拌(轻微放热)30分
钟。分离出有机相且水相用500ml乙酸乙酯萃取两次。有机相在旋转蒸发仪上浓缩并将残余
物在高真空下干燥。这得到20.7g (理论值的94%)标题化合物。
将37.0g (107.11mmol)(乙酰氧基甲基)丙二酸二叔丁酯溶解于1000ml无水THF中，并
在冰冷却下逐滴添加535.5ml (1071.10mmol)硼氢化锂于THF中的2M溶液。逐滴添加19.3ml
(1071.10mmol)水并在室温下搅拌4.5小时。反应混合物在旋转蒸发仪上浓缩，并在高真空
下干燥。将残余物置于1500ml乙酸乙酯中，添加100ml水并在水冷却下搅拌(轻微放热)30分
钟。分离出有机相且水相用500ml乙酸乙酯萃取两次。有机相在旋转蒸发仪上浓缩并将残余
物在高真空下干燥。这得到20.7g (理论值的94%)标题化合物。
[0515] LC-MS (方法6): Rt = 1.49 min; MS (EIpos): m/z = 106 [M-C5H8O2]+。
[0516] 中间体L33[3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(羟基甲基)丙基]氨基甲酸叔丁酯
将20.00g (97.44mmol)[3-羟基-2-(羟基甲基)丙基]氨基甲酸叔丁酯溶解于1000ml纯
二氯甲烷中，并在室温下添加6.63g (97.44mmol)咪唑和16.16g (107.18mmol)叔丁基(氯)
二甲基甲硅烷。在室温下搅拌16小时并用半浓氯化钠溶液洗涤该反应混合物。水相用乙酸
乙酯萃取且合并的有机相经硫酸钠干燥，在旋转蒸发仪上浓缩并在高真空下干燥。这得到
28.50g (理论值的92%)标题化合物。
将20.00g (97.44mmol)[3-羟基-2-(羟基甲基)丙基]氨基甲酸叔丁酯溶解于1000ml纯
二氯甲烷中，并在室温下添加6.63g (97.44mmol)咪唑和16.16g (107.18mmol)叔丁基(氯)
二甲基甲硅烷。在室温下搅拌16小时并用半浓氯化钠溶液洗涤该反应混合物。水相用乙酸
乙酯萃取且合并的有机相经硫酸钠干燥，在旋转蒸发仪上浓缩并在高真空下干燥。这得到
28.50g (理论值的92%)标题化合物。
[0517] 中间体L34(3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-甲酰基丙基)氨基甲酸叔丁酯
将12.65g (39.591mmol)[3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(羟基-甲基)丙基]
氨基甲酸叔丁酯溶解于200ml二氯甲烷中，并在室温下逐滴添加溶解于150ml二氯甲烷中的
19.31g (45.53mmol) 戴斯-马丁高价碘化物。将混合物在室温下搅拌2小时，然后添加
250ml半浓碳酸氢钠溶液和250ml 10%硫代硫酸钠溶液并搅拌20分钟。分离出有机相且水相
用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用300ml水洗涤，经硫酸钠干燥，在旋转蒸发仪上浓缩并在
高真空下干燥。这得到11.35g (理论值的90%)标题化合物。
将12.65g (39.591mmol)[3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(羟基-甲基)丙基]
氨基甲酸叔丁酯溶解于200ml二氯甲烷中，并在室温下逐滴添加溶解于150ml二氯甲烷中的
19.31g (45.53mmol) 戴斯-马丁高价碘化物。将混合物在室温下搅拌2小时，然后添加
250ml半浓碳酸氢钠溶液和250ml 10%硫代硫酸钠溶液并搅拌20分钟。分离出有机相且水相
用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用300ml水洗涤，经硫酸钠干燥，在旋转蒸发仪上浓缩并在
高真空下干燥。这得到11.35g (理论值的90%)标题化合物。
[0518] 中间体L35(3-氧代丙基)氨基甲酸叔丁酯
标题化合物根据从文献已知的方法(例如Jean Bastide等人J. Med. Chem. 2003, 46
(16), 3536-3545)制备。
标题化合物根据从文献已知的方法(例如Jean Bastide等人J. Med. Chem. 2003, 46
(16), 3536-3545)制备。
[0519] 中间体L36N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸
将100mg (0.57mmol) N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸置于4.0ml DMF中，并添加0.08ml
(0.57mmol)三乙胺。然后添加199.0mg (0.57mmol) 2,5-二氧代吡咯烷-1-基-N-[(苄基氧
基)羰基]-L-缬氨酸和0.08ml (0.57mmol)三乙胺。在室温下搅拌48小时。反应混合物直接
通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，含0.1%
TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到75.7mg (理论值的33%)标
题化合物。
将100mg (0.57mmol) N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸置于4.0ml DMF中，并添加0.08ml
(0.57mmol)三乙胺。然后添加199.0mg (0.57mmol) 2,5-二氧代吡咯烷-1-基-N-[(苄基氧
基)羰基]-L-缬氨酸和0.08ml (0.57mmol)三乙胺。在室温下搅拌48小时。反应混合物直接
通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，含0.1%
TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到75.7mg (理论值的33%)标
题化合物。
[0520] LC-MS (方法1): Rt = 0.69 min; MS (ESIpos): m/z = 409 [M+H]+。
[0521] 中间体L37L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸
将75.7mg (0.19mmol)中间体L36悬浮于25ml水/乙醇/THF中，并添加7.5mg活性炭载钯
(10%)且在室温下在标准压力下用氢气氢化4.5小时。滤出催化剂并将反应混合物在真空中
脱除溶剂，并在高真空下干燥。残余物未经进一步纯化即用于下一步骤。这得到64.9mg (理
论值的93%)标题化合物。
将75.7mg (0.19mmol)中间体L36悬浮于25ml水/乙醇/THF中，并添加7.5mg活性炭载钯
(10%)且在室温下在标准压力下用氢气氢化4.5小时。滤出催化剂并将反应混合物在真空中
脱除溶剂，并在高真空下干燥。残余物未经进一步纯化即用于下一步骤。这得到64.9mg (理
论值的93%)标题化合物。
[0522] LC-MS (方法6): Rt = 0.25 min; MS (ESIpos): m/z = 275 [M+H]+。
[0523] 中间体L38N-[31-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-29-氧代-4,7,10,13,16,19,22,25-八
氧杂-28-氮杂三十一烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸
将38.3mg (0.14mmol)中间体L37最初装入3.0ml DMF中，并添加96.4mg (0.14mmol)
3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{27-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-27-
氧代-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-1-基}丙酰胺和39.0μl (0.28mmol)三乙
胺。在室温下搅拌过夜。然后向反应混合物添加16.0μl (0.28mmol) HOAc，且直接通过制备
型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸发
溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到58.9mg (理论值的45%)标题化合物。
氧杂-28-氮杂三十一烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸
将38.3mg (0.14mmol)中间体L37最初装入3.0ml DMF中，并添加96.4mg (0.14mmol)
3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{27-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-27-
氧代-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-1-基}丙酰胺和39.0μl (0.28mmol)三乙
胺。在室温下搅拌过夜。然后向反应混合物添加16.0μl (0.28mmol) HOAc，且直接通过制备
型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸发
溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到58.9mg (理论值的45%)标题化合物。
[0524] LC-MS (方法1): Rt = 0.61 min; MS (ESIpos): m/z = 849 [M+H]+。
[0525] 中间体L39(2-烷硫基乙基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
将300mg (2.64mmol) 2-氨基乙硫醇盐酸盐(1:1)最初装入3.0ml二氯甲烷中，并添加
668.0mg (6.60mmol)三乙胺和719.1mg (2.77mmol) 1-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰
基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮。在室温下搅拌2天(通过薄层色谱法监测：二氯甲烷/甲醇=100：
1.5)。向该反应混合物添加乙酸乙酯且用水洗涤三次。有机相用饱和NaCl溶液洗涤两次且
经硫酸镁干燥。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。化合物未经进一步纯化即用
于下一合成步骤。
将300mg (2.64mmol) 2-氨基乙硫醇盐酸盐(1:1)最初装入3.0ml二氯甲烷中，并添加
668.0mg (6.60mmol)三乙胺和719.1mg (2.77mmol) 1-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰
基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮。在室温下搅拌2天(通过薄层色谱法监测：二氯甲烷/甲醇=100：
1.5)。向该反应混合物添加乙酸乙酯且用水洗涤三次。有机相用饱和NaCl溶液洗涤两次且
经硫酸镁干燥。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。化合物未经进一步纯化即用
于下一合成步骤。
[0526] 中间体L40N-[31-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-29-氧代-4,7,10,13,16,19,22,25-八
氧杂-28-氮杂三十一烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸
600mg (1.58mmol) N2-[(苄基氧基)羰基]-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸在25.0ml
水/乙醇/THF(1:1:0.5)中在室温下在标准压力下使用炭载钯(10%)用氢气氢化。化合物N6-
(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
氧杂-28-氮杂三十一烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸
600mg (1.58mmol) N2-[(苄基氧基)羰基]-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸在25.0ml
水/乙醇/THF(1:1:0.5)中在室温下在标准压力下使用炭载钯(10%)用氢气氢化。化合物N6-
(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
[0527] LC-MS (方法1): Rt = 0.99 min; MS (ESIpos): m/z = 247 [M+H]+。
[0528] 将180.0(0.73mmol) N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸溶解于5.0ml DMF中，并添加74.0mg (0.73mmol)三乙胺。添加254.6mg (0.73mmol) N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酸2,
5-二氧代吡咯烷-1-基酯和74.0mg (0.73mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌3.5小
时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC (柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，
MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到294.1mg
(理论值的76%)化合物N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸。
5-二氧代吡咯烷-1-基酯和74.0mg (0.73mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌3.5小
时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC (柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，
MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到294.1mg
(理论值的76%)化合物N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸。
[0529] LC-MS (方法1): Rt = 0.97 min; MS (ESIpos): m/z = 480 [M+H]+。
[0530] 将272.2mg (0.57mmol) N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸溶解于20ml乙酸乙酯/乙醇/THF(1:1:1)中，添加27.2mg活性炭载钯且在标准压力
下和在室温下用氢气氢化。通过Celite(R) 过滤且滤饼用乙酸乙酯/乙醇/THF(1:1:1)彻底
洗涤。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到182.0mg (理论值的72%)化合物
L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸。
下和在室温下用氢气氢化。通过Celite(R) 过滤且滤饼用乙酸乙酯/乙醇/THF(1:1:1)彻底
洗涤。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到182.0mg (理论值的72%)化合物
L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸。
[0531] LC-MS (方法1): Rt = 0.53 min; MS (ESIpos): m/z = 346 [M+H]+。
[0532] 将30.0mg (0.07mmol) L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸和46.1mg (0.07mmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{27-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-
基)氧基]-27-氧代-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-1-基}丙酰胺溶解于1.5ml
DMF中，并添加6.8mg (0.07mmol) 4-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合
物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯
化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到55.6mg (理论值的90%)标题化合
物。
基)氧基]-27-氧代-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-1-基}丙酰胺溶解于1.5ml
DMF中，并添加6.8mg (0.07mmol) 4-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合
物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯
化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到55.6mg (理论值的90%)标题化合
物。
[0533] LC-MS (方法1): Rt = 0.77 min; MS (ESIpos): m/z = 920 [M+H]+。
[0534] 中间体L41N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-16-氮杂
十九烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸
600mg (1.58mmol) N2-[(苄基氧基)羰基]-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸在25.0ml
水/乙醇/THF(1:1:0.5)中在室温下在标准压力下使用炭载钯(10%)用氢气氢化。化合物N6-
(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
十九烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸
600mg (1.58mmol) N2-[(苄基氧基)羰基]-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸在25.0ml
水/乙醇/THF(1:1:0.5)中在室温下在标准压力下使用炭载钯(10%)用氢气氢化。化合物N6-
(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
[0535] LC-MS (方法1): Rt = 0.99 min; MS (ESIpos): m/z = 247 [M+H]+。
[0536] 将180.0 (0.73mmol) N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸溶解于5.0ml DMF中，并添加74.0mg (0.73mmol)三乙胺。添加254.6mg (0.73mmol) N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酸2,
5-二氧代吡咯烷-1-基酯和74.0mg (0.73mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌3.5小
时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，
MeCN/水，0.1% TFA)纯化。然后在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
294.1mg (理论值的76%)化合物N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-
赖氨酸。
5-二氧代吡咯烷-1-基酯和74.0mg (0.73mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌3.5小
时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，
MeCN/水，0.1% TFA)纯化。然后在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
294.1mg (理论值的76%)化合物N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-
赖氨酸。
[0537] LC-MS (方法1): Rt = 0.97 min; MS (ESIpos): m/z = 480 [M+H]+。
[0538] 将272.2mg (0.57mmol) N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸溶解于20.0ml乙酸乙酯/乙醇/THF(1:1:1)中，添加27.2mg活性炭载钯且在标准压
(R)
力下和在室温下用氢气氢化。通过Celite 过滤且滤饼用乙酸乙酯/乙醇/THF(1:1:1)彻
底洗涤。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到182.0mg (理论值的72%)化合
物L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸。
(R)
力下和在室温下用氢气氢化。通过Celite 过滤且滤饼用乙酸乙酯/乙醇/THF(1:1:1)彻
底洗涤。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到182.0mg (理论值的72%)化合
物L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸。
[0539] LC-MS (方法1): Rt = 0.53 min; MS (ESIpos): m/z = 346 [M+H]+。
[0540] 将30.0mg (0.07mmol) L-缬氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸和34.3mg (0.07mmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{15-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-
基)氧基]-15-氧代-3,6,9,12-四氧杂十五烷-1-基}丙酰胺溶解于1.5ml DMF中，并添加
6.8mg (0.07mmol) 4-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制
备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸
发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到40.6mg (理论值的82%)标题化合物。
基)氧基]-15-氧代-3,6,9,12-四氧杂十五烷-1-基}丙酰胺溶解于1.5ml DMF中，并添加
6.8mg (0.07mmol) 4-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制
备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸
发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到40.6mg (理论值的82%)标题化合物。
[0541] LC-MS (方法1): Rt = 0.73 min; MS (ESIpos): m/z = 744 [M+H]+。
[0542] 中间体L42N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-16-氮杂
十九烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸
将50.0mg (0.18mmol) L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸(中间体L37)最初装入
DMF中，并添加93.6mg (0.18mmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{15-[(2,
5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-15-氧代-3,6,9,12-四氧杂十五烷-1-基}丙酰胺和36.9mg
(0.37mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加21.9mg (0.37mmol) HOAc且反
应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/
水)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到20.6mg (理论值的14%)标题
化合物。
十九烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸
将50.0mg (0.18mmol) L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸(中间体L37)最初装入
DMF中，并添加93.6mg (0.18mmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{15-[(2,
5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-15-氧代-3,6,9,12-四氧杂十五烷-1-基}丙酰胺和36.9mg
(0.37mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加21.9mg (0.37mmol) HOAc且反
应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/
水)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到20.6mg (理论值的14%)标题
化合物。
[0543] LC-MS (方法1): Rt = 0.55 min; MS (ESIpos): m/z = 673 [M+H]+。
[0544] 中间体L43N-[67-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-65-氧代-4,7,10,13,16,19,22,25,
28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61-二十氧杂-64-氮杂六十七烷-1-酰基]-L-缬氨酰
基-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸
将11.3mg (0.04mmol) L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸(中间体L37)最初装入
DMF中，并添加50.0mg (0.04mmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{63-[(2,
5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-63-氧代-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,
48,51,54,57,60-二十氧杂六十三烷-1-基}丙酰胺和8.3mg (0.08mmol)三乙胺。将反应混
合物在室温下搅拌过夜。添加4.9mg (0.08mmol) HOAc且反应混合物直接通过制备型RP-
HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸发溶剂并
在高真空下干燥残余物。这得到15.8mg (理论值的20%)标题化合物。
28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61-二十氧杂-64-氮杂六十七烷-1-酰基]-L-缬氨酰
基-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸
将11.3mg (0.04mmol) L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸(中间体L37)最初装入
DMF中，并添加50.0mg (0.04mmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{63-[(2,
5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-63-氧代-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,
48,51,54,57,60-二十氧杂六十三烷-1-基}丙酰胺和8.3mg (0.08mmol)三乙胺。将反应混
合物在室温下搅拌过夜。添加4.9mg (0.08mmol) HOAc且反应混合物直接通过制备型RP-
HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸发溶剂并
在高真空下干燥残余物。这得到15.8mg (理论值的20%)标题化合物。
[0545] LC-MS (方法4): Rt = 0.94 min; MS (ESIpos): m/z = 1377 [M+H]+。
[0546] 中间体L44N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-16-氮杂
十九烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸
将73.3mg (0.39mmol) L-缬氨酰基-L-丙氨酸溶解于7.0ml DMF中，并添加200.0mg
(0.39mmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{15-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-
基)氧基]-15-氧代-3,6,9,12-四氧杂十五烷-1-基}丙酰胺和78.8mg (0.78mmol)三乙胺。
将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到103.3mg (理论值的45%)标题化合物。
十九烷-1-酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸
将73.3mg (0.39mmol) L-缬氨酰基-L-丙氨酸溶解于7.0ml DMF中，并添加200.0mg
(0.39mmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{15-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-
基)氧基]-15-氧代-3,6,9,12-四氧杂十五烷-1-基}丙酰胺和78.8mg (0.78mmol)三乙胺。
将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到103.3mg (理论值的45%)标题化合物。
[0547] LC-MS (方法1): Rt = 0.58 min; MS (ESIpos): m/z = 587 [M+H]+。
[0548] 中间体L45(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-氧代丁酸叔丁酯
将2.00g (7.26mmol) N-(叔丁氧基羰基)-L-高丝氨酸叔丁酯溶解于90ml二氯甲烷中，
且然后添加1.76ml吡啶和4.62g (10.90mmol) 1,1,1-三乙酰氧基-1λ5,2-苯并氧杂环戊-3
(1H)-酮(戴斯-马丁高价碘化物)。将混合物在室温下搅拌2小时且然后用200ml二氯甲烷稀
释，并用10%硫代硫酸钠溶液振摇两次且然后相继用5%柠檬酸振摇两次并用饱和碳酸氢钠
溶液振摇两次。分离出有机相，经硫酸钠干燥且然后在真空中浓缩。将100ml二乙醚和环己
烷(v/v=1:1)添加至残余物并略微浓缩，由此形成白色沉淀。将其以抽吸滤出。滤液在旋转
蒸发仪上浓缩并在高真空下干燥，由此得到1.74g (理论值的88%)作为淡黄色油状物的标
题化合物。
将2.00g (7.26mmol) N-(叔丁氧基羰基)-L-高丝氨酸叔丁酯溶解于90ml二氯甲烷中，
且然后添加1.76ml吡啶和4.62g (10.90mmol) 1,1,1-三乙酰氧基-1λ5,2-苯并氧杂环戊-3
(1H)-酮(戴斯-马丁高价碘化物)。将混合物在室温下搅拌2小时且然后用200ml二氯甲烷稀
释，并用10%硫代硫酸钠溶液振摇两次且然后相继用5%柠檬酸振摇两次并用饱和碳酸氢钠
溶液振摇两次。分离出有机相，经硫酸钠干燥且然后在真空中浓缩。将100ml二乙醚和环己
烷(v/v=1:1)添加至残余物并略微浓缩，由此形成白色沉淀。将其以抽吸滤出。滤液在旋转
蒸发仪上浓缩并在高真空下干燥，由此得到1.74g (理论值的88%)作为淡黄色油状物的标
题化合物。
[0549] 中间体L46三氟乙酸/N-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]-L-谷氨酰胺叔丁酯(1:
1)
标题化合物通过如下来制备：首先将200mg (0.79mmol)三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-
1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)与263mg (0.87mmol)(4S)-5-叔丁氧基-4-[(叔丁氧基羰基)氨
基]-5-氧代戊酸/三氟乙酸(1:1)在EDC/HOBT和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下偶联且然
后在温和条件下通过在室温下在DCM中的10%三氟乙酸中搅拌1小时而在氨基处脱保护。从
乙腈/水冻干后经2个步骤得到85mg (理论值的20%)标题化合物。
1)
标题化合物通过如下来制备：首先将200mg (0.79mmol)三氟乙酸/1-(2-氨基乙基)-
1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)与263mg (0.87mmol)(4S)-5-叔丁氧基-4-[(叔丁氧基羰基)氨
基]-5-氧代戊酸/三氟乙酸(1:1)在EDC/HOBT和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下偶联且然
后在温和条件下通过在室温下在DCM中的10%三氟乙酸中搅拌1小时而在氨基处脱保护。从
乙腈/水冻干后经2个步骤得到85mg (理论值的20%)标题化合物。
[0550] LC-MS (方法1): Rt = 0.37 min; MS (ESIpos): m/z = 326 [M+H]+。
[0551] 中间体L47三氟乙酸/β-丙氨酰基-L-丙氨酰基-N5-氨基甲酰基-N-[4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)苯基]-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物通过将中间体L8与N-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基
酯偶联且随后用TFA脱保护来制备。
1H-吡咯-1-基)苯基]-L-鸟氨酰胺(1:1)
标题化合物通过将中间体L8与N-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基
酯偶联且随后用TFA脱保护来制备。
[0552] LC-MS (方法3): Rt = 1.36 min; MS (ESIpos): m/z = 488 (M+H)+。
[0553] 中间体L48三氟乙酸/(1R,2S)-2-氨基-N-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]环戊
烷甲酰胺(1:1)
标题化合物类似于中间体L2从市售(1R,2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸制
备。
烷甲酰胺(1:1)
标题化合物类似于中间体L2从市售(1R,2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸制
备。
[0554] LC-MS (方法3): Rt = 1.22 min; MS (ESIpos): m/z = 252 (M+H)+。
[0555] 中间体L49三氟乙酸/N-(溴乙酰基)-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-L-赖氨酸叔丁酯(1:1)
标题化合物通过如下来制备：首先将市售溴乙酸酐与根据肽化学的经典方法制备的部
分保护的肽L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸叔丁酯在N,N-二异丙
基乙胺存在的情况下在二氯甲烷中偶联。随后在温和条件下通过在室温下在DCM中的10%三
氟乙酸中搅拌而在氨基处脱保护，由此得到标题化合物，经2个步骤产率为49%。
标题化合物通过如下来制备：首先将市售溴乙酸酐与根据肽化学的经典方法制备的部
分保护的肽L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸叔丁酯在N,N-二异丙
基乙胺存在的情况下在二氯甲烷中偶联。随后在温和条件下通过在室温下在DCM中的10%三
氟乙酸中搅拌而在氨基处脱保护，由此得到标题化合物，经2个步骤产率为49%。
[0556] LC-MS (方法1): Rt = 1.09 min; MS (ESIpos): m/z = 593和595 (M+H)+。
[0557] 中间体L50三氟乙酸/(1S,3R)-3-氨基-N-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]环戊
烷甲酰胺(1:1)
标题化合物从市售(1S,3R)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸和同样市售的三氟
乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过如下来制备：在N,N-二异丙基乙胺存
在的情况下与HATU偶联且随后用TFA脱保护。
烷甲酰胺(1:1)
标题化合物从市售(1S,3R)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸和同样市售的三氟
乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过如下来制备：在N,N-二异丙基乙胺存
在的情况下与HATU偶联且随后用TFA脱保护。
[0558] HPLC (方法11): Rt = 0.2 min;LC-MS (方法3): Rt = 0.88 min; MS (ESIpos): m/z = 252 (M+H)+。
[0559] 中间体L51三氟乙酸/(1R,3R)-3-氨基-N-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]环戊
烷甲酰胺(1:1)
标题化合物从市售(1R,3R)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸和同样市售的三氟
乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过如下来制备：在N,N-二异丙基乙胺存
在的情况下与HATU偶联且随后用TFA脱保护。
烷甲酰胺(1:1)
标题化合物从市售(1R,3R)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸和同样市售的三氟
乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过如下来制备：在N,N-二异丙基乙胺存
在的情况下与HATU偶联且随后用TFA脱保护。
[0560] LC-MS (方法3): Rt = 0.98 min; MS (ESIpos): m/z = 250 (M-H)-。
[0561] 中间体L52三氟乙酸/N-(2-氨基乙基)-2-溴乙酰胺(1:1)
将420mg (2.62mmol)(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯置于50ml二氯甲烷中，并添加
817mg (3.15mmol)溴乙酸酐和913μl (5.24mmol) N,N-二异丙基乙胺。将混合物在室温下
搅拌1小时且然后在真空中浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化。
将420mg (2.62mmol)(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯置于50ml二氯甲烷中，并添加
817mg (3.15mmol)溴乙酸酐和913μl (5.24mmol) N,N-二异丙基乙胺。将混合物在室温下
搅拌1小时且然后在真空中浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化。
[0562] 这得到577mg保护的中间体，其然后置于50ml二氯甲烷中，并添加10ml三氟乙酸。在室温下搅拌1小时后，在真空中浓缩该混合物且残余物从乙腈/水冻干。这得到705mg (理
论值的65%)标题化合物。
论值的65%)标题化合物。
[0563] LC-MS (方法3): Rt = 0.34 min; MS (ESIpos): m/z = 181和183 (M+H)+。
[0564] 中间体L53三氟乙酸/(1S,3S)-3-氨基-N-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]环戊
烷甲酰胺(1:1)
标题化合物从市售(1S,3S)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸和同样市售的三氟
乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过如下来制备：在N,N-二异丙基乙胺存
在的情况下与HATU偶联且随后用TFA脱保护。
烷甲酰胺(1:1)
标题化合物从市售(1S,3S)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸和同样市售的三氟
乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过如下来制备：在N,N-二异丙基乙胺存
在的情况下与HATU偶联且随后用TFA脱保护。
[0565] HPLC (方法11): Rt = 0.19 min;LC-MS (方法3): Rt = 0.88 min; MS (ESIpos): m/z = 250 (M-H)-。
[0566] 中间体L54三氟乙酸/(1R,3S)-3-氨基-N-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]环戊
烷甲酰胺(1:1)
标题化合物从市售(1R,3S)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸和同样市售的三氟
乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过如下来制备：在N,N-二异丙基乙胺存
在的情况下与HATU偶联且随后用TFA脱保护。
烷甲酰胺(1:1)
标题化合物从市售(1R,3S)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸和同样市售的三氟
乙酸/1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)通过如下来制备：在N,N-二异丙基乙胺存
在的情况下与HATU偶联且随后用TFA脱保护。
[0567] LC-MS (方法3): Rt = 0.89 min; MS (ESIpos): m/z = 252 (M+H)+。
[0568] 中间体L55三氟乙酸/ N6-D-丙氨酰基-N2-{N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-己酰
基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基}-L-赖氨酸叔丁基酯(1:1)
标题化合物通过如下来制备：首先在HATU存在的情况下将中间体L6与N-(叔丁氧基羰
基)-D-丙氨酸偶联，随后在温和条件下通过在室温下在DCM中的5%三氟乙酸中搅拌90分钟
而在氨基处脱保护。
基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基}-L-赖氨酸叔丁基酯(1:1)
标题化合物通过如下来制备：首先在HATU存在的情况下将中间体L6与N-(叔丁氧基羰
基)-D-丙氨酸偶联，随后在温和条件下通过在室温下在DCM中的5%三氟乙酸中搅拌90分钟
而在氨基处脱保护。
[0569] HPLC (方法11): Rt = 1.35 min;+
LC-MS (方法1): Rt = 0.67 min; MS (ESIpos): m/z = 637 (M+H) 。
LC-MS (方法1): Rt = 0.67 min; MS (ESIpos): m/z = 637 (M+H) 。
[0570] 中间体L56三氟乙酸/N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨
酰基-N6-{[(1R,3S)-3-氨基环戊基]羰基}-L-赖氨酸叔丁基酯(1:1)
标题化合物通过如下来制备：首先在HATU存在的情况下将中间体L6与(1R,3S)-3-[(叔
丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸偶联，然后在温和条件下通过在室温下在DCM中的25%三氟乙
酸中搅拌15分钟而在氨基处脱保护。
酰基-N6-{[(1R,3S)-3-氨基环戊基]羰基}-L-赖氨酸叔丁基酯(1:1)
标题化合物通过如下来制备：首先在HATU存在的情况下将中间体L6与(1R,3S)-3-[(叔
丁氧基羰基)氨基]环戊烷甲酸偶联，然后在温和条件下通过在室温下在DCM中的25%三氟乙
酸中搅拌15分钟而在氨基处脱保护。
[0571] HPLC (方法11): Rt = 1.4 min;+
LC-MS (方法1): Rt = 0.7 min; MS (ESIpos): m/z = 677 (M+H) 。
LC-MS (方法1): Rt = 0.7 min; MS (ESIpos): m/z = 677 (M+H) 。
[0572] 中间体L57(2S)-4-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酸甲酯
将500.0mg (2.72mmol) L-天冬酰胺甲酯盐酸盐和706.3mg (2.72mmol) 2,5-二氧代
吡咯烷-1-甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯最初装入5.0ml 1,4-二氧杂环己烷中，并添加
826.8mg (8.17mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制备
型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x40；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。然后在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到583.9mg (理论值的74%)化合物(3S)-
4-甲氧基-4-氧代-3-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酸。
将500.0mg (2.72mmol) L-天冬酰胺甲酯盐酸盐和706.3mg (2.72mmol) 2,5-二氧代
吡咯烷-1-甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯最初装入5.0ml 1,4-二氧杂环己烷中，并添加
826.8mg (8.17mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制备
型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x40；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。然后在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到583.9mg (理论值的74%)化合物(3S)-
4-甲氧基-4-氧代-3-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酸。
[0573] LC-MS (方法1): Rt = 0.89 min; MS (ESIneg): m/z = 290 (M-H)-。
[0574] 将592.9mg (3S)-4-甲氧基-4-氧代-3-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丁酸最初装入10.0ml 1,2-二甲氧基乙烷中，冷却至-15℃并添加205.8mg (2.04mmol)
4-甲基吗啉和277.9mg (2.04mmol)氯甲酸异丁酯。15分钟后，以抽吸滤出沉淀并用10.0ml
1,2-二甲氧基乙烷各洗涤两次。将滤液冷却至-10℃，并在用力搅拌下添加溶解于10ml水中
的115.5mg (3.05mmol)硼氢化钠。分离各相并将有机相用饱和碳酸氢钠溶液和饱和NaCl溶
液各洗涤一次。有机相经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
515.9mg (理论值的91%)化合物N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-高丝氨酸甲酯。
4-甲基吗啉和277.9mg (2.04mmol)氯甲酸异丁酯。15分钟后，以抽吸滤出沉淀并用10.0ml
1,2-二甲氧基乙烷各洗涤两次。将滤液冷却至-10℃，并在用力搅拌下添加溶解于10ml水中
的115.5mg (3.05mmol)硼氢化钠。分离各相并将有机相用饱和碳酸氢钠溶液和饱和NaCl溶
液各洗涤一次。有机相经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
515.9mg (理论值的91%)化合物N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-高丝氨酸甲酯。
[0575] LC-MS (方法1): Rt = 0.87 min; MS (ESIpos): m/z = 278 (M+H)+。
[0576] 将554.9mg (2.00mmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-高丝氨酸甲酯最初装入30.0ml二氯甲烷中，并添加1.27g (3.0mmol)戴斯-马丁高价碘化物和474.7mg
(6.00mmol)吡啶。在室温下搅拌过夜。4小时后，混合物用二氯甲烷稀释并将有机相用10%
Na2S2O3溶液、10%柠檬酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液各洗涤三次。有机相经硫酸镁干燥并在真
空中蒸发溶剂。这得到565.7mg (理论值的97%)标题化合物。
(6.00mmol)吡啶。在室温下搅拌过夜。4小时后，混合物用二氯甲烷稀释并将有机相用10%
Na2S2O3溶液、10%柠檬酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液各洗涤三次。有机相经硫酸镁干燥并在真
空中蒸发溶剂。这得到565.7mg (理论值的97%)标题化合物。
[0577] 中间体L58(3-氧代丙基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
将434.4mg (5.78mmol) 3-氨基-1-丙醇和1.50g (5.78mmol) 2,5-二氧代吡咯烷-1-
甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于10.0ml二氯甲烷中，添加585.3mg (5.78mmol)三乙胺
并在室温下搅拌过夜。反应混合物用二氯甲烷稀释且有机相用水和饱和碳酸氢钠溶液洗涤
且然后经硫酸镁干燥。在真空中蒸发溶剂。在高真空下干燥残余物(3-羟基丙基)氨基甲酸
2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(996.4mg，理论值的79%)且未经进一步纯化即用于下一合成步
骤。
将434.4mg (5.78mmol) 3-氨基-1-丙醇和1.50g (5.78mmol) 2,5-二氧代吡咯烷-1-
甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于10.0ml二氯甲烷中，添加585.3mg (5.78mmol)三乙胺
并在室温下搅拌过夜。反应混合物用二氯甲烷稀释且有机相用水和饱和碳酸氢钠溶液洗涤
且然后经硫酸镁干燥。在真空中蒸发溶剂。在高真空下干燥残余物(3-羟基丙基)氨基甲酸
2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(996.4mg，理论值的79%)且未经进一步纯化即用于下一合成步
骤。
[0578] 将807.0mg (3.68mmol)(3-羟基丙基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯最初装入15.0ml氯仿和15.0ml 0.05N碳酸钾/0.05N碳酸氢钠溶液(1:1)中。然后添加102.2mg
(0.37mmol)氯化四正丁基铵、736.9mg (5.52mmol) N-氯代琥珀酰亚胺和57.5mg
(0.37mmol) TEMPO并将反应混合物在室温下用力搅拌过夜。反应混合物用二氯甲烷稀释且
有机相用水和饱和NaCl溶液洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物在高
真空下干燥且未经进一步纯化即用于下一合成步骤(890.3mg)。
(0.37mmol)氯化四正丁基铵、736.9mg (5.52mmol) N-氯代琥珀酰亚胺和57.5mg
(0.37mmol) TEMPO并将反应混合物在室温下用力搅拌过夜。反应混合物用二氯甲烷稀释且
有机相用水和饱和NaCl溶液洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物在高
真空下干燥且未经进一步纯化即用于下一合成步骤(890.3mg)。
[0579] 中间体L59三氟乙酸/1-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基}-1H-吡咯-2,5-二酮(1:1)
将300.0mg (0.91mmol)(2-{2-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙
氧基}乙基)氨基甲酸叔丁酯最初装入二氯甲烷中，添加4.2g (36.54mmol) TFA并在室温下
搅拌1小时(通过DC监测：二氯甲烷/甲醇10:1)。在真空中蒸发挥发性组分且残余物与二氯
甲烷共蒸馏四次。残余物在高真空下干燥且未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
将300.0mg (0.91mmol)(2-{2-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙
氧基}乙基)氨基甲酸叔丁酯最初装入二氯甲烷中，添加4.2g (36.54mmol) TFA并在室温下
搅拌1小时(通过DC监测：二氯甲烷/甲醇10:1)。在真空中蒸发挥发性组分且残余物与二氯
甲烷共蒸馏四次。残余物在高真空下干燥且未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
[0580] LC-MS (方法1): Rt = 0.19 min; MS (ESIpos): m/z = 229 (M+H)+。
[0581] 中间体L606-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氯
将200.0mg (0.95mmol) 6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸溶解于4.0ml
二氯甲烷中，并添加338.0mg (2.84mmol)亚硫酰氯。将反应混合物在室温下搅拌3小时，且
然后添加1滴DMF。将混合物再搅拌1小时。在真空中蒸发溶剂且与二氯甲烷共蒸馏三次。粗
产物未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
将200.0mg (0.95mmol) 6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸溶解于4.0ml
二氯甲烷中，并添加338.0mg (2.84mmol)亚硫酰氯。将反应混合物在室温下搅拌3小时，且
然后添加1滴DMF。将混合物再搅拌1小时。在真空中蒸发溶剂且与二氯甲烷共蒸馏三次。粗
产物未经进一步纯化即用于下一合成步骤。
[0582] 中间体L61三氟乙酸/N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨
酰基-L-赖氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)
首先，三肽衍生物L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸2-(三甲基
甲硅烷基)乙酯从N2-[(苄基氧基)羰基]-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸根据肽化学的经典
方法(使用EDCI/DMAP用2-(三甲基甲硅烷基乙醇)酯化，氢解，在HATU存在的情况下与N-
[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸偶联和再氢解)来制备。标题化合物通过在HATU
和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将该部分保护的肽衍生物与市售6-(2,5-二氧代-2,5-
二氢-1H-吡咯-1-基)己酸偶联来制备。随后在温和条件下，通过在室温下在DCM中的5%三氟
乙酸中搅拌2.5小时而在氨基处脱保护，其中保留酯保护基。后处理和通过制备型HPLC纯化
后得到438mg标题化合物。
酰基-L-赖氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)
首先，三肽衍生物L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸2-(三甲基
甲硅烷基)乙酯从N2-[(苄基氧基)羰基]-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸根据肽化学的经典
方法(使用EDCI/DMAP用2-(三甲基甲硅烷基乙醇)酯化，氢解，在HATU存在的情况下与N-
[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸偶联和再氢解)来制备。标题化合物通过在HATU
和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将该部分保护的肽衍生物与市售6-(2,5-二氧代-2,5-
二氢-1H-吡咯-1-基)己酸偶联来制备。随后在温和条件下，通过在室温下在DCM中的5%三氟
乙酸中搅拌2.5小时而在氨基处脱保护，其中保留酯保护基。后处理和通过制备型HPLC纯化
后得到438mg标题化合物。
[0583] HPLC (方法11): Rt = 1.69 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.78 min; MS (ESIpos): m/z = 610 (M+H)+。
[0584] 中间体L625
三氟乙酸/N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-氨
基甲酰基-L-鸟氨酰基-L-赖氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)
首先，N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯根据肽化学的经典方法
从N2-[(苄基氧基)羰基]-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸制备。然后148mg (0.43mmol)该中
间体在195mg (0.51mmol) HATU和149μl N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与200mg
(0.43mmol)中间体L16偶联。在浓缩和通过制备型HPLC纯化残余物后，将保护的中间体置于
20ml DCM中且叔丁氧基羰基保护基通过添加2ml三氟乙酸和在室温下搅拌1小时而移除。残
余物的浓缩和从乙腈/水冻干后得到254mg (经2个步骤，理论值的63%)。
三氟乙酸/N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-氨
基甲酰基-L-鸟氨酰基-L-赖氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)
首先，N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯根据肽化学的经典方法
从N2-[(苄基氧基)羰基]-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸制备。然后148mg (0.43mmol)该中
间体在195mg (0.51mmol) HATU和149μl N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与200mg
(0.43mmol)中间体L16偶联。在浓缩和通过制备型HPLC纯化残余物后，将保护的中间体置于
20ml DCM中且叔丁氧基羰基保护基通过添加2ml三氟乙酸和在室温下搅拌1小时而移除。残
余物的浓缩和从乙腈/水冻干后得到254mg (经2个步骤，理论值的63%)。
[0585] HPLC (方法11): Rt = 1.51 min;LC-MS (方法1): Rt = 0.68 min; MS (ESIpos): m/z = 696 (M+H)+。
[0586] 中间体L63(4S)-4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨
基}-3-甲基丁酰基]氨基}丙酰基]氨基}-5-氧代-5-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]戊酸
首先，三肽衍生物(4S)-4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-氨基-3-甲基丁酰基]氨基}丙酰基]氨
基}-5-氧代-5-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]戊酸从(2S)-5-(苄基氧基)-2-[(叔丁氧基羰
基)氨基]-5-氧代戊酸根据肽化学的经典方法(使用EDCI/DMAP用2-三甲基甲硅烷基乙醇酯
化，用三氟乙酸移除Boc保护基，在HATU存在的情况下与N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-
L-丙氨酸偶联和在甲醇中在10%活性炭载钯上氢解)来制备。标题化合物通过将该部分保护
的肽衍生物与市售1-{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二
酮偶联来制备。后处理和通过制备型HPLC纯化后得到601mg标题化合物。
基}-3-甲基丁酰基]氨基}丙酰基]氨基}-5-氧代-5-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]戊酸
首先，三肽衍生物(4S)-4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-氨基-3-甲基丁酰基]氨基}丙酰基]氨
基}-5-氧代-5-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]戊酸从(2S)-5-(苄基氧基)-2-[(叔丁氧基羰
基)氨基]-5-氧代戊酸根据肽化学的经典方法(使用EDCI/DMAP用2-三甲基甲硅烷基乙醇酯
化，用三氟乙酸移除Boc保护基，在HATU存在的情况下与N-[(苄基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-
L-丙氨酸偶联和在甲醇中在10%活性炭载钯上氢解)来制备。标题化合物通过将该部分保护
的肽衍生物与市售1-{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二
酮偶联来制备。后处理和通过制备型HPLC纯化后得到601mg标题化合物。
[0587] LC-MS (方法1): Rt = 0.96 min; MS (ESIpos): m/z = 611 (M+H)+。
[0588] 中间体L64(4S)-4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}-5-氧代-5-[2-(三甲
基甲硅烷基)乙氧基]戊酸
标题化合物从(2S)-5-(苄基氧基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氧代戊酸根据肽化学
的经典方法(使用EDCI/DMAP用2-(三甲基甲硅烷基乙醇酯化，用三氟乙酸移除Boc保护基，
在甲醇中在10%活性炭载钯上将苄酯氢解裂解和在 N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与1-
{2-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-2-氧代乙基}-1H-吡咯-2,5-二酮偶联)来制备。
基甲硅烷基)乙氧基]戊酸
标题化合物从(2S)-5-(苄基氧基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氧代戊酸根据肽化学
的经典方法(使用EDCI/DMAP用2-(三甲基甲硅烷基乙醇酯化，用三氟乙酸移除Boc保护基，
在甲醇中在10%活性炭载钯上将苄酯氢解裂解和在 N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与1-
{2-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-2-氧代乙基}-1H-吡咯-2,5-二酮偶联)来制备。
[0589] LC-MS (方法1): Rt = 0.84 min; MS (ESIpos): m/z = 385 (M+H)+。
[0590] 中间体L65三氟乙酸/3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-L-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)
标题化合物从3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-N-(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酸根据肽化学
的经典方法(使用EDCI/DMAP用2-(三甲基甲硅烷基乙醇酯化并用三氟乙酸移除Boc保护基)
来制备。这得到373mg (经2个步骤，理论值的79%)标题化合物。
标题化合物从3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-N-(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酸根据肽化学
的经典方法(使用EDCI/DMAP用2-(三甲基甲硅烷基乙醇酯化并用三氟乙酸移除Boc保护基)
来制备。这得到373mg (经2个步骤，理论值的79%)标题化合物。
[0591] LC-MS (方法1): Rt = 0.72 min; MS (ESIpos): m/z = 339 (M+H)+。
[0592] 中间体L66(8S)-8-(2-羟基乙基)-2,2-二甲基-6,11-二氧代-5-氧杂-7,10-二氮杂-2-硅杂十四
烷-14-酸甲酯
将1000mg (2.84mmol)(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁
酸最初装入10.0ml 1,2-二甲氧基乙烷中，并添加344.4mg (3.4mmol) 4-甲基吗啉和504mg
(3.69mmol)氯甲酸异丁酯。在室温下搅拌10分钟后，将混合物冷却至5℃并在用力搅拌下分
份添加溶解于3ml水中的161mg (4.26mmol)硼氢化钠。1小时后，再次添加相同量的硼氢化
钠且然后将混合物缓慢升温至室温。添加170ml水且然后该混合物用各200ml乙酸乙酯萃取
四次。分离各相且有机相用柠檬酸洗涤一次且然后用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。有机相经硫
酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到760mg (理论值的78%)化合
物[(2S)-4-羟基丁-1,2-二基]双氨基甲酸苄酯叔丁酯。
烷-14-酸甲酯
将1000mg (2.84mmol)(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁
酸最初装入10.0ml 1,2-二甲氧基乙烷中，并添加344.4mg (3.4mmol) 4-甲基吗啉和504mg
(3.69mmol)氯甲酸异丁酯。在室温下搅拌10分钟后，将混合物冷却至5℃并在用力搅拌下分
份添加溶解于3ml水中的161mg (4.26mmol)硼氢化钠。1小时后，再次添加相同量的硼氢化
钠且然后将混合物缓慢升温至室温。添加170ml水且然后该混合物用各200ml乙酸乙酯萃取
四次。分离各相且有机相用柠檬酸洗涤一次且然后用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。有机相经硫
酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到760mg (理论值的78%)化合
物[(2S)-4-羟基丁-1,2-二基]双氨基甲酸苄酯叔丁酯。
[0593] LC-MS (方法1): Rt = 0.84 min; MS (ESIpos): m/z = 339 (M+H)+。
[0594] 将溶解于13ml盐酸/二氧杂环己烷中的760mg (2.16mmol)该中间体在室温下搅拌20分钟。然后将混合物浓缩至5ml，并添加二乙醚。滤出沉淀并从乙腈/水1:1冻干。
[0595] 将以该方式获得的产物溶解于132ml DMF中，并添加345.5mg (2.35mmol) 4-甲氧基-4-氧代丁酸、970mg (2.55mmol) HATU和1025μl N,N-二异丙基乙胺。将混合物在室温下
搅拌5分钟。在真空中移除溶剂且剩余的残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分并在真
空中蒸发乙腈。剩余的水相用乙酸乙酯萃取两次且然后浓缩有机相并在高真空下干燥。
搅拌5分钟。在真空中移除溶剂且剩余的残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分并在真
空中蒸发乙腈。剩余的水相用乙酸乙酯萃取两次且然后浓缩有机相并在高真空下干燥。
[0596] 将以该方式获得的中间体置于甲醇中并在10%活性炭载钯上在室温下在氢气标准压力下氢化1小时。然后滤出催化剂并在真空中移除溶剂。
[0597] 将247mg该脱保护的化合物置于20ml DMF中，并添加352mg (1.36mmol) 1-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮和592μl N,N-二异丙基乙胺。将反
应混合物在室温下搅拌1小时且然后浓缩，且残余物通过制备型HPLC纯化。然后在真空中蒸
发溶剂并在高真空下干燥残余物。经这5个反应步骤得到218mg标题化合物，总产率为21%。
应混合物在室温下搅拌1小时且然后浓缩，且残余物通过制备型HPLC纯化。然后在真空中蒸
发溶剂并在高真空下干燥残余物。经这5个反应步骤得到218mg标题化合物，总产率为21%。
[0598] LC-MS (方法1): Rt = 0.74 min; MS (ESIpos): m/z = 363 (M+H)+。
[0599] 中间体L67三氟乙酸/2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基-β-丙氨酸酯(1:1)
标题化合物从50mg (0.354mmol)市售1-(2-羟基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮通过如下来
制备：在10ml二氯甲烷中在1.5当量EDCI和0.1当量4-N,N-二甲基氨基吡啶存在的情况下与
134mg (0.71mmol) N-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸偶联且随后用三氟乙酸脱保护。
标题化合物从50mg (0.354mmol)市售1-(2-羟基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮通过如下来
制备：在10ml二氯甲烷中在1.5当量EDCI和0.1当量4-N,N-二甲基氨基吡啶存在的情况下与
134mg (0.71mmol) N-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸偶联且随后用三氟乙酸脱保护。
[0600] 产率：56mg (经2个步骤，理论值的48%)LC-MS (方法3): Rt = 1.15 min; MS (ESIpos): m/z = 213 (M+H)+。
[0601] 中间体L68三氟乙酸/N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺(1:1)
标题化合物类似于中间体L1根据肽化学的经典方法从市售(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)丙酸和(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯制备。
标题化合物类似于中间体L1根据肽化学的经典方法从市售(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)丙酸和(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯制备。
[0602] LC-MS (方法1): Rt = 0.17 min; MS (ESIpos): m/z = 212 (M+H)+。
[0603] 中间体L69三氟乙酸/1-[(苄基氧基)羰基]哌啶-4-基-L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸酯
(1:1)
标题化合物通过肽化学的经典方法从市售4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯通过如下来制备：
使用EDCI/DMAP用N2-(叔丁氧基羰基)-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸酯化，随后用TFA移除Boc，
然后在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与N-[(叔丁氧基)羰基]-L-缬氨酸偶联且最
终再用TFA移除Boc。
(1:1)
标题化合物通过肽化学的经典方法从市售4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯通过如下来制备：
使用EDCI/DMAP用N2-(叔丁氧基羰基)-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酸酯化，随后用TFA移除Boc，
然后在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与N-[(叔丁氧基)羰基]-L-缬氨酸偶联且最
终再用TFA移除Boc。
[0604] LC-MS (方法1): Rt = 0.62 min; MS (ESIpos): m/z = 492 (M+H)+。
[0605] 中间体L70(3-氧代丙基)氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯
将1000.0mg (3.36mmol)(3-羟基丙基)氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯最初装入15.0ml氯仿
和15.0ml 0.05N碳酸钾/0.05N碳酸氢钠溶液(1:1)中。然后添加93.5mg (0.34mmol)氯化四
正丁基铵、673.6mg (5.04mmol) N-氯代琥珀酰亚胺和52.5mg (0.34mmol) TEMPO并将反应
混合物在室温下用力搅拌过夜。反应混合物用二氯甲烷稀释且有机相用水和饱和NaCl溶液
洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物在高真空下干燥且通过硅胶色谱
法(流动相：环己烷/乙酸乙酯3:1-1:1)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。
这得到589.4mg (理论值的58%)标题化合物。
将1000.0mg (3.36mmol)(3-羟基丙基)氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯最初装入15.0ml氯仿
和15.0ml 0.05N碳酸钾/0.05N碳酸氢钠溶液(1:1)中。然后添加93.5mg (0.34mmol)氯化四
正丁基铵、673.6mg (5.04mmol) N-氯代琥珀酰亚胺和52.5mg (0.34mmol) TEMPO并将反应
混合物在室温下用力搅拌过夜。反应混合物用二氯甲烷稀释且有机相用水和饱和NaCl溶液
洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物在高真空下干燥且通过硅胶色谱
法(流动相：环己烷/乙酸乙酯3:1-1:1)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。
这得到589.4mg (理论值的58%)标题化合物。
[0606] LC-MS (方法6): Rt = 2.15 min; MS (ESIpos): m/z = 296 (M-H)+。
[0607] 中间体L71[4-(氯羰基)苯基]氨基甲酸叔丁酯
将100.0mg (0.42mmol) 4-[(叔丁氧基羰基)氨基]苯甲酸最初装入2.0ml二氯甲烷中，
并添加64.2mg (0.51mmol)乙二酰二氯。将反应混合物在室温下搅拌30分钟(通过DC监测：
二氯甲烷/甲醇)。然后添加另外192.6mg (1.53mmol)乙二酰二氯和1滴DMF并在室温下搅拌
1小时。在真空中蒸发溶剂且残余物重复与二氯甲烷共蒸馏。残余物未经进一步纯化即用于
下一合成步骤。
将100.0mg (0.42mmol) 4-[(叔丁氧基羰基)氨基]苯甲酸最初装入2.0ml二氯甲烷中，
并添加64.2mg (0.51mmol)乙二酰二氯。将反应混合物在室温下搅拌30分钟(通过DC监测：
二氯甲烷/甲醇)。然后添加另外192.6mg (1.53mmol)乙二酰二氯和1滴DMF并在室温下搅拌
1小时。在真空中蒸发溶剂且残余物重复与二氯甲烷共蒸馏。残余物未经进一步纯化即用于
下一合成步骤。
[0608] 中间体L72(9S)-9-(羟基甲基)-2,2-二甲基-6,11-二氧代-5-氧杂-7,10-二氮杂-2-硅杂十四烷-
14-酸苄酯
标题化合物从市售[(2S)-3-羟基丙-1,2-二基]双氨基甲酸苄酯叔丁酯根据肽化学的
经典方法通过如下来制备：氢解移除Z保护基，随后在EDCI/HOBT存在的情况下与4-(苄基氧
基)-4-氧代丁酸偶联，随后用TFA移除Boc保护基且最终在三乙胺存在的情况下与1-({[2-
(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮反应。
14-酸苄酯
标题化合物从市售[(2S)-3-羟基丙-1,2-二基]双氨基甲酸苄酯叔丁酯根据肽化学的
经典方法通过如下来制备：氢解移除Z保护基，随后在EDCI/HOBT存在的情况下与4-(苄基氧
基)-4-氧代丁酸偶联，随后用TFA移除Boc保护基且最终在三乙胺存在的情况下与1-({[2-
(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮反应。
[0609] LC-MS (方法1): Rt = 0.94 min; MS (ESIpos): m/z = 425 [M+H]+。
[0610] 中间体L73N-(2-氨基乙基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺
将395.5mg (1.87mmol) 6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸、1.21g
(9.36mmol) N,N-二异丙基乙胺和854.3mg (2.25mmol) HATU添加至300mg (1.87mmol)(2-
氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯于20ml二甲基甲酰胺中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌5分
钟。浓缩混合物后，将残余物置于DCM中并用水洗涤。有机相用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，滤
出并浓缩。这得到408mg (33%，纯度53%)标题化合物，其未经进一步纯化即使用。
将395.5mg (1.87mmol) 6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸、1.21g
(9.36mmol) N,N-二异丙基乙胺和854.3mg (2.25mmol) HATU添加至300mg (1.87mmol)(2-
氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯于20ml二甲基甲酰胺中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌5分
钟。浓缩混合物后，将残余物置于DCM中并用水洗涤。有机相用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，滤
出并浓缩。这得到408mg (33%，纯度53%)标题化合物，其未经进一步纯化即使用。
[0611] LC-MS (方法1): Rt = 0.75 min; MS (ESIpos): m/z = 354 (M+H)+。
[0612] 将1ml TFA添加至(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙基)氨基甲酸叔丁酯(408mg，0.365mmol)于7ml二氯甲烷中的溶液。将反应混合物在室温
下搅拌0.5小时。在真空中浓缩反应混合物且残余物与二氯甲烷共蒸馏两次。残余物未经进
一步纯化即进一步使用。这得到384mg (94%，纯度57%)标题化合物。
下搅拌0.5小时。在真空中浓缩反应混合物且残余物与二氯甲烷共蒸馏两次。残余物未经进
一步纯化即进一步使用。这得到384mg (94%，纯度57%)标题化合物。
[0613] LC-MS (方法1): Rt = 0.26 min; MS (ESIpos): m/z = 254 (M+H)+。
[0614] 中间体L743-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,5-二氧代吡咯-1-基)乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]
乙氧基]丙酸
将107mg (0.335mmol) 3-[2-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸叔
丁酯和93mg (0.369mmol) 2-(2,5-二氧代吡咯-1-基)乙酸(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯溶
解于5ml二甲基甲酰胺中，并添加0.074ml (0.671mmol) N-甲基吗啉。将反应混合物在室温
下搅拌过夜。添加0.048ml (0.838mmol)乙酸且反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂
并在高真空下干燥残余物。这得到133mg (86%，纯度100%) 3-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,5-二氧
代吡咯-1-基)乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸叔丁酯。
乙氧基]丙酸
将107mg (0.335mmol) 3-[2-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸叔
丁酯和93mg (0.369mmol) 2-(2,5-二氧代吡咯-1-基)乙酸(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯溶
解于5ml二甲基甲酰胺中，并添加0.074ml (0.671mmol) N-甲基吗啉。将反应混合物在室温
下搅拌过夜。添加0.048ml (0.838mmol)乙酸且反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂
并在高真空下干燥残余物。这得到133mg (86%，纯度100%) 3-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,5-二氧
代吡咯-1-基)乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸叔丁酯。
[0615] LC-MS (方法1): Rt = 0.82 min; MS (ESIpos): m/z = 459 (M+H)+。
[0616] 将0.5ml TFA添加至3-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,5-二氧代吡咯-1-基)乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸叔丁酯(130mg，0.284mmol)于5ml二氯甲烷中的溶液。
将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物并将残余物置于水中并冻干。
残余物未经进一步纯化即进一步使用。这得到102mg (90%，纯度100%)标题化合物。
将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物并将残余物置于水中并冻干。
残余物未经进一步纯化即进一步使用。这得到102mg (90%，纯度100%)标题化合物。
[0617] LC-MS (方法1): Rt = 0.52 min; MS (ESIpos): m/z = 402 (M+H)+。
[0618] 中间体L75三氟乙酸/3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)
标题化合物从3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酸根据肽化学
的经典方法(使用EDCI/DMAP用2-(三甲基甲硅烷基乙醇酯化，并用三氟乙酸移除Boc保护
基)来制备。这得到405mg (经2个步骤，理论值的58%)标题化合物。
标题化合物从3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酸根据肽化学
的经典方法(使用EDCI/DMAP用2-(三甲基甲硅烷基乙醇酯化，并用三氟乙酸移除Boc保护
基)来制备。这得到405mg (经2个步骤，理论值的58%)标题化合物。
[0619] LC-MS (方法1): Rt = 0.75 min; MS (ESIpos): m/z = 339 (M+H)+。
[0620] 中间体L76(2S)-2-溴-4-氧代-4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]丁酸
首先，合适保护的天冬氨酸衍生物从(3S)-4-(苄基氧基)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨
基}-4-氧代丁酸根据肽化学的经典方法(使用EDCI/DMAP用2-(三甲基甲硅烷基乙醇酯化，
和氢解移除Z保护基和苄酯)来制备。
首先，合适保护的天冬氨酸衍生物从(3S)-4-(苄基氧基)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨
基}-4-氧代丁酸根据肽化学的经典方法(使用EDCI/DMAP用2-(三甲基甲硅烷基乙醇酯化，
和氢解移除Z保护基和苄酯)来制备。
[0621] 将470mg (1.8mmol)以该方式获得的(2S)-2-氨基-4-氧代-4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]丁酸悬浮于10ml水中，并添加1.8ml 1摩尔浓度盐酸和0.5ml浓硫酸，随后添加
863mg (7.25mmol)溴化钾。然后在10℃下，经30分钟时段逐滴添加150mg (2.175mmol)亚硝
酸钠于1ml水中的溶液，并将混合物在10-15℃下搅拌2小时。然后混合物用50ml乙酸乙酯振
摇。有机相用饱和氯化钠溶液洗涤且经硫酸镁干燥。蒸发溶剂且通过制备型HPLC纯化产物
后，得到260mg (理论值的48%)标题化合物。
863mg (7.25mmol)溴化钾。然后在10℃下，经30分钟时段逐滴添加150mg (2.175mmol)亚硝
酸钠于1ml水中的溶液，并将混合物在10-15℃下搅拌2小时。然后混合物用50ml乙酸乙酯振
摇。有机相用饱和氯化钠溶液洗涤且经硫酸镁干燥。蒸发溶剂且通过制备型HPLC纯化产物
后，得到260mg (理论值的48%)标题化合物。
[0622] 中间体L77三氟乙酸/N-[2-(2-氨基乙氧基)乙基]-2-溴乙酰胺(1:1)
418mg (2.05mmol)[2-(2-氨基乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯最初与638mg
(2.46mmol)溴乙酸酐反应，且然后用三氟乙酸移除Boc保护基。这得到551mg (经2个步骤，
理论值的63%)标题化合物。
418mg (2.05mmol)[2-(2-氨基乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯最初与638mg
(2.46mmol)溴乙酸酐反应，且然后用三氟乙酸移除Boc保护基。这得到551mg (经2个步骤，
理论值的63%)标题化合物。
[0623] LC-MS (方法): Rt = 0.32 min; MS (ESIpos): m/z = 227和225 (M+H)+。
[0624] 中间体L78N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-β-丙氨酸
标题化合物从市售(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸通过如下来制备：在
EDCI/HOBt和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与β-丙氨酸叔丁酯盐酸盐(1:1)偶联且随后
用三氟乙酸脱保护。
标题化合物从市售(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸通过如下来制备：在
EDCI/HOBt和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与β-丙氨酸叔丁酯盐酸盐(1:1)偶联且随后
用三氟乙酸脱保护。
[0625] LC-MS (方法1): Rt = 0.32 min; MS (ESIpos): m/z = 227 (M+H)+。
[0626] 中间体L79N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酸
将64.8mg (0.357mmol)β-丙氨酸叔丁酯盐酸盐(1:1)和100mg (0.324mmol) 1-{6-
[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二酮溶解于4ml二甲基甲酰
胺中，并添加65.6mg (0.649mmol) N-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加
0.048ml (0.838mmol)乙酸且反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；
10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)来纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干
燥残余物。这得到84.5mg (77%，纯度100%) N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
己酰基]-β-丙氨酸叔丁酯。
将64.8mg (0.357mmol)β-丙氨酸叔丁酯盐酸盐(1:1)和100mg (0.324mmol) 1-{6-
[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二酮溶解于4ml二甲基甲酰
胺中，并添加65.6mg (0.649mmol) N-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加
0.048ml (0.838mmol)乙酸且反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；
10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)来纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干
燥残余物。这得到84.5mg (77%，纯度100%) N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
己酰基]-β-丙氨酸叔丁酯。
[0627] LC-MS (方法1): Rt = 0.78 min; MS (ESIpos): m/z = 339 (M+H)+。
[0628] 将1.62ml TFA添加至N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酸叔丁酯(82.8mg，0.244mmol)于8ml二氯甲烷中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌2小
时。在真空中浓缩反应混合物并将残余物置于水中并冻干。残余物未经进一步纯化即进一
步使用。这得到62.7mg (87%，纯度95%)标题化合物。
时。在真空中浓缩反应混合物并将残余物置于水中并冻干。残余物未经进一步纯化即进一
步使用。这得到62.7mg (87%，纯度95%)标题化合物。
[0629] LC-MS (方法1): Rt = 0.75 min; MS (ESIpos): m/z = 283 (M+H)+。
[0630] 中间体L803-[(15-氨基-4,7,10,13-四氧杂十五烷-1-酰基)氨基]-N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酸
2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
标题化合物从市售3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酸/N-环己
基环己胺(1:1)根据肽化学的经典方法(从盐释放和使用EDCI/DMAP用2-(三甲基甲硅烷基
乙醇酯化，氢解移除Z保护基，在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与市售3-氧代-1-
苯基-2,7,10,13,16-五氧杂-4-氮杂十九烷-19-酸偶联和再氢解移除Z保护基)来制备。
2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
标题化合物从市售3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酸/N-环己
基环己胺(1:1)根据肽化学的经典方法(从盐释放和使用EDCI/DMAP用2-(三甲基甲硅烷基
乙醇酯化，氢解移除Z保护基，在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与市售3-氧代-1-
苯基-2,7,10,13,16-五氧杂-4-氮杂十九烷-19-酸偶联和再氢解移除Z保护基)来制备。
[0631] LC-MS (方法1): Rt = 0.70 min; MS (ESIpos): m/z = 552 (M+H)+。
[0632] 中间体L81三氟乙酸/{2-[(2-氨基乙基)磺酰基]乙基}氨基甲酸苄酯(1:1)
在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下在DMF中将250mg (1.11mmol) 2,2’-磺酰基二乙胺
与92.3mg (0.37mmol) 1-{[(苄基氧基)羰基]氧基}吡咯烷-2,5-二酮偶联。随后HPLC纯化
后，得到70mg (理论值的47%)标题化合物。
在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下在DMF中将250mg (1.11mmol) 2,2’-磺酰基二乙胺
与92.3mg (0.37mmol) 1-{[(苄基氧基)羰基]氧基}吡咯烷-2,5-二酮偶联。随后HPLC纯化
后，得到70mg (理论值的47%)标题化合物。
[0633] LC-MS (方法12): Rt = 0.64 min; MS (ESIpos): m/z = 257.11 (M+H)+。
[0634] 中间体L82三氟乙酸/N-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基}-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡
咯-1-基)己酰胺(1:1)
将88.6mg (0.357mmol) N-Boc-2,2’-(亚乙基二氧基)二乙胺和100mg (0.324mmol)
6-顺丁烯二酰亚胺基己酸N-琥珀酰亚胺基酯溶解于4.0ml二甲基甲酰胺中，并添加0.071ml
(0.650mmol) N-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加0.048ml (0.838mmol)乙
酸且反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：75ml/min，
MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到127mg (理
论值的81%){2-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)
乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯。
咯-1-基)己酰胺(1:1)
将88.6mg (0.357mmol) N-Boc-2,2’-(亚乙基二氧基)二乙胺和100mg (0.324mmol)
6-顺丁烯二酰亚胺基己酸N-琥珀酰亚胺基酯溶解于4.0ml二甲基甲酰胺中，并添加0.071ml
(0.650mmol) N-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加0.048ml (0.838mmol)乙
酸且反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：75ml/min，
MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到127mg (理
论值的81%){2-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)
乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯。
[0635] LC-MS (方法1): Rt = 0.78 min; MS (ESIpos): m/z = 442 (M+H)+。
[0636] 将2.0ml TFA添加至123mg (225μmol){2-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯于7.5ml二氯甲烷中的溶
液。将反应混合物在室温下搅拌2小时。在真空中浓缩反应混合物并将残余物置于水中并冻
干。残余物未经进一步纯化即进一步使用。这得到111mg (理论值的100%)标题化合物。
液。将反应混合物在室温下搅拌2小时。在真空中浓缩反应混合物并将残余物置于水中并冻
干。残余物未经进一步纯化即进一步使用。这得到111mg (理论值的100%)标题化合物。
[0637] 中间体L83三氟乙酸/N-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基}-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡
咯-1-基)乙酰胺(1:1)
将200mg (0.805mmol){2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯、150mg
(0.966mmol)(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸和560μl (3.2mmol) N,N-二异丙
基乙胺溶解于10ml二甲基甲酰胺中，并添加459mg (1.21mmol) HATU。将反应混合物在室温
下搅拌30分钟。在真空中蒸发溶剂并将残余物溶于二氯甲烷中。有机相用5%柠檬酸溶液洗
涤两次且经硫酸镁干燥，并在真空中蒸发溶剂。残余物使用Biotage Isolera(硅胶，柱25g
SNAP，二氯甲烷：甲醇98：2)纯化。这得到276mg (理论值的89%){2-[2-(2-{[(2,5-二氧代-
2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯。
咯-1-基)乙酰胺(1:1)
将200mg (0.805mmol){2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯、150mg
(0.966mmol)(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸和560μl (3.2mmol) N,N-二异丙
基乙胺溶解于10ml二甲基甲酰胺中，并添加459mg (1.21mmol) HATU。将反应混合物在室温
下搅拌30分钟。在真空中蒸发溶剂并将残余物溶于二氯甲烷中。有机相用5%柠檬酸溶液洗
涤两次且经硫酸镁干燥，并在真空中蒸发溶剂。残余物使用Biotage Isolera(硅胶，柱25g
SNAP，二氯甲烷：甲醇98：2)纯化。这得到276mg (理论值的89%){2-[2-(2-{[(2,5-二氧代-
2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯。
[0638] LC-MS (方法1): Rt = 0.67 min; MS (ESIpos): m/z = 386 (M+H)+。
[0639] 将4ml TFA添加至{2-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯(275mg，714μmol)于15ml二氯甲烷中的溶液。将
反应混合物在室温下搅拌30分钟。在真空中浓缩反应混合物并将残余物置于水中并冻干。
这得到281mg (理论值的99%)标题化合物。
反应混合物在室温下搅拌30分钟。在真空中浓缩反应混合物并将残余物置于水中并冻干。
这得到281mg (理论值的99%)标题化合物。
[0640] LC-MS (方法1): Rt = 0.17 min; MS (ESIpos): m/z = 286 (M+H)+。
[0641] 中间体L84三氟乙酸/N-(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)己酰胺(1:1)
将200mg (0.594mmol)(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯和
202mg (0.654mmol) 1-{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-
二酮溶解于4.0ml二甲基甲酰胺中，并添加0.130ml (1.2mmol) N-甲基吗啉。将反应混合物
在室温下搅拌过夜。添加0.085ml (1.5mmol)乙酸且反应混合物直接通过制备型RP-HPLC
(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发
溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到275mg (理论值的73%)[21-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)-16-氧代-3,6,9,12-四氧杂-15-氮杂二十一烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯。
1H-吡咯-1-基)己酰胺(1:1)
将200mg (0.594mmol)(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯和
202mg (0.654mmol) 1-{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-
二酮溶解于4.0ml二甲基甲酰胺中，并添加0.130ml (1.2mmol) N-甲基吗啉。将反应混合物
在室温下搅拌过夜。添加0.085ml (1.5mmol)乙酸且反应混合物直接通过制备型RP-HPLC
(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发
溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到275mg (理论值的73%)[21-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)-16-氧代-3,6,9,12-四氧杂-15-氮杂二十一烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯。
[0642] LC-MS (方法1): Rt = 0.81 min; MS (ESIpos): m/z = 530 (M+H)+。
[0643] 将780μl (10mmol)TFA添加至[21-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-16-氧代-3,6,9,12-四氧杂-15-氮杂二十一烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(268mg，505μmol)于5.0ml
二氯甲烷中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物并将残余
物置于水中并冻干。残余物未经进一步纯化即进一步使用。这得到266mg (理论值的97%)标
题化合物。
二氯甲烷中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物并将残余
物置于水中并冻干。残余物未经进一步纯化即进一步使用。这得到266mg (理论值的97%)标
题化合物。
[0644] 中间体L85三氟乙酸/N-(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:1)
将200mg (0.594mmol)(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯、
111mg (0.713mmol)(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸和410μl (2.4mmol) N,N-
二异丙基乙胺溶解于6ml二甲基甲酰胺中，并添加339mg (0.892mmol) HATU。将反应混合物
在室温下搅拌1小时且直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：
50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
130mg (理论值的43%)[17-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-16-氧代-3,6,9,12-四
氧杂-15-氮杂十七烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯。
1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:1)
将200mg (0.594mmol)(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯、
111mg (0.713mmol)(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸和410μl (2.4mmol) N,N-
二异丙基乙胺溶解于6ml二甲基甲酰胺中，并添加339mg (0.892mmol) HATU。将反应混合物
在室温下搅拌1小时且直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：
50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
130mg (理论值的43%)[17-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-16-氧代-3,6,9,12-四
氧杂-15-氮杂十七烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯。
[0645] LC-MS (方法1): Rt = 0.71 min; MS (ESIpos): m/z = 474 (M+H)+。
[0646] 将410μl (5.3mmol) TFA添加至[17-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-16-氧代-3,6,9,12-四氧杂-15-氮杂十七烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(126mg，267μmol)于4.0ml
二氯甲烷中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物并在高真
空下干燥残余物。这得到124mg (理论值的95%)标题化合物。
二氯甲烷中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物并在高真
空下干燥残余物。这得到124mg (理论值的95%)标题化合物。
[0647] 中间体L86N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸
将100mg (0.531mmol) L-缬氨酰基-L-丙氨酸和134mg (0.531mmol) 1-{2-[(2,5-二
氧代吡咯烷-1-基)氧基]-2-氧代乙基}-1H-吡咯-2,5-二酮溶解于3ml二甲基甲酰胺中，并
添加0.150ml (1.1mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌8小时。反应混合物直接通过
制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中
蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到71.5mg (理论值的41%)标题化合物。
将100mg (0.531mmol) L-缬氨酰基-L-丙氨酸和134mg (0.531mmol) 1-{2-[(2,5-二
氧代吡咯烷-1-基)氧基]-2-氧代乙基}-1H-吡咯-2,5-二酮溶解于3ml二甲基甲酰胺中，并
添加0.150ml (1.1mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌8小时。反应混合物直接通过
制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中
蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到71.5mg (理论值的41%)标题化合物。
[0648] LC-MS (方法1): Rt = 0.42 min; MS (ESIpos): m/z = 326 (M+H)+。
[0649] 中间体L873-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]丙
酸
将250mg (1.07mmol) 3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]丙酸叔丁酯、151mg (0.974mmol)
2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸、224mg (1.46mmol) 1-羟基-1H-苯并三唑
水合物和224mg (1.17mmol) 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐溶解于
5.0ml二甲基甲酰胺中。将反应混合物在室温下搅拌1小时。向该混合物添加乙酸乙酯且用
5%柠檬酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液萃取两次。有机相用饱和氯化钠溶液洗涤两次且经硫酸
镁干燥，并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x40；10μ，流动
速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这
得到267mg (理论值的64%) 3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨
基}乙氧基)乙氧基]丙酸叔丁酯。
酸
将250mg (1.07mmol) 3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]丙酸叔丁酯、151mg (0.974mmol)
2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸、224mg (1.46mmol) 1-羟基-1H-苯并三唑
水合物和224mg (1.17mmol) 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐溶解于
5.0ml二甲基甲酰胺中。将反应混合物在室温下搅拌1小时。向该混合物添加乙酸乙酯且用
5%柠檬酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液萃取两次。有机相用饱和氯化钠溶液洗涤两次且经硫酸
镁干燥，并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x40；10μ，流动
速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这
得到267mg (理论值的64%) 3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨
基}乙氧基)乙氧基]丙酸叔丁酯。
[0650] LC-MS (方法1): Rt = 0.73 min; MS (ESIpos): m/z = 371 (M+H)+。
[0651] 将1.1ml (14mmol)TFA添加至3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]丙酸叔丁酯(263mg，710μmol)于10ml二氯甲烷中的溶液。将
反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物并在高真空下干燥残余物。这得
到240mg (理论值的94%)标题化合物。
反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物并在高真空下干燥残余物。这得
到240mg (理论值的94%)标题化合物。
[0652] LC-MS (方法12): Rt = 0.57 min; MS (ESIpos): m/z = 315 (M+H)+。
[0653] 中间体L88N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸2,5-二
氧代吡咯烷-1-基酯
将150mg (0.797mmol) L-缬氨酰基-L-丙氨酸和246mg (0.797mmol) 1-{6-[(2,5-二
氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二酮溶解于4.0ml二甲基甲酰胺中，
并添加0.220ml (1.6mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过
制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中
蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到302mg (理论值的97%) N-[6-(2,5-二氧代-2,
5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸。
氧代吡咯烷-1-基酯
将150mg (0.797mmol) L-缬氨酰基-L-丙氨酸和246mg (0.797mmol) 1-{6-[(2,5-二
氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1H-吡咯-2,5-二酮溶解于4.0ml二甲基甲酰胺中，
并添加0.220ml (1.6mmol)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过
制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中
蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到302mg (理论值的97%) N-[6-(2,5-二氧代-2,
5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸。
[0654] 将130mg (0.531mmol) N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸溶解于6.5ml二氯甲烷中，并添加58.8mg (0.511mmol) 1-羟基吡咯烷-
2,5-二酮和78.4mg (0.409mmol) 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐。添加
另外58.8mg (0.511mmol) 1-羟基吡咯烷-2,5-二酮和78.4mg (0.409mmol) 1-(3-二甲基
氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐。向该混合物添加二氯甲烷且用水洗涤三次。有机相
经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到172mg (理论值的87%)
标题化合物。
2,5-二酮和78.4mg (0.409mmol) 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐。添加
另外58.8mg (0.511mmol) 1-羟基吡咯烷-2,5-二酮和78.4mg (0.409mmol) 1-(3-二甲基
氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐。向该混合物添加二氯甲烷且用水洗涤三次。有机相
经硫酸镁干燥，在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到172mg (理论值的87%)
标题化合物。
[0655] LC-MS (方法12): Rt = 1.28 min; MS (ESIpos): m/z = 479 (M+H)+。
[0656] 中间体L89L-谷氨酸1-苄基酯5-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]酯盐酸盐(1:1)
将1.00g (2.96mmol)(4S)-5-(苄基氧基)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氧代戊酸最初
装入13.0ml THF中，并添加510μl (3.6mmol) 2-(三甲基甲硅烷基)乙醇和109mg (889μ
mol) 4-二甲基氨基吡啶。将反应混合物冷却至0℃，并添加682mg (3.56mmol) N-乙基-N’-
3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐。将反应混合物在室温下搅拌过夜。溶剂在真空中
蒸发并将残余物溶解于乙酸乙酯中。有机相用0.1N HCl溶液和饱和氯化钠溶液洗涤两次且
经硫酸镁干燥，并在真空中蒸发溶剂。残余物使用Biotage Isolera(硅胶，柱25g SNAP，环
己烷：乙酸乙酯80：20)纯化。这得到649mg (理论值的50%)化合物N-(叔丁氧基羰基)-L-谷
氨酸1-苄基酯5-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]-酯。
将1.00g (2.96mmol)(4S)-5-(苄基氧基)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氧代戊酸最初
装入13.0ml THF中，并添加510μl (3.6mmol) 2-(三甲基甲硅烷基)乙醇和109mg (889μ
mol) 4-二甲基氨基吡啶。将反应混合物冷却至0℃，并添加682mg (3.56mmol) N-乙基-N’-
3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐。将反应混合物在室温下搅拌过夜。溶剂在真空中
蒸发并将残余物溶解于乙酸乙酯中。有机相用0.1N HCl溶液和饱和氯化钠溶液洗涤两次且
经硫酸镁干燥，并在真空中蒸发溶剂。残余物使用Biotage Isolera(硅胶，柱25g SNAP，环
己烷：乙酸乙酯80：20)纯化。这得到649mg (理论值的50%)化合物N-(叔丁氧基羰基)-L-谷
氨酸1-苄基酯5-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]-酯。
[0657] LC-MS (方法1): Rt = 4.6 min; MS (ESIpos): m/z = 438 (M+H)+。
[0658] 将649mg (1.48mmol) N-(叔丁氧基羰基)-L-谷氨酸1-苄基酯5-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]酯溶解于7.0ml二氧杂环己烷中，并在冰浴冷却下添加二氧杂环己烷中的14ml
(59mmol) 4N HCl。将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物并在高真空
下干燥残余物且通过Biotage Isolera(硅胶，柱25g SNAP，二氯甲烷：甲醇90：10)纯化。这
得到320mg (理论值的57%)标题化合物。
(59mmol) 4N HCl。将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物并在高真空
下干燥残余物且通过Biotage Isolera(硅胶，柱25g SNAP，二氯甲烷：甲醇90：10)纯化。这
得到320mg (理论值的57%)标题化合物。
[0659] LC-MS (方法1): Rt = 0.79 min; MS (ESIpos): m/z = 338 (M+H)+。
[0660] 中间体L901-({N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酰基}氨基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酸
将118mg (566μmol) N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酸最初装入5.0ml DMF中，添加200mg
(622μmol) 1-氨基-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酸叔丁酯、130mg (849μmol) 1-羟基-1H-
苯并三唑水合物和130mg (679μmol) 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐并
在室温下搅拌1小时。向该混合物添加乙酸乙酯且用5%柠檬酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液萃
取两次。有机相用饱和氯化钠溶液洗涤两次且经硫酸镁干燥。在真空中蒸发溶剂并在高真
空下干燥残余物。这得到274mg (理论值的95%) 1-({N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酰基}氨
基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酸叔丁酯。
将118mg (566μmol) N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酸最初装入5.0ml DMF中，添加200mg
(622μmol) 1-氨基-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酸叔丁酯、130mg (849μmol) 1-羟基-1H-
苯并三唑水合物和130mg (679μmol) 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐并
在室温下搅拌1小时。向该混合物添加乙酸乙酯且用5%柠檬酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液萃
取两次。有机相用饱和氯化钠溶液洗涤两次且经硫酸镁干燥。在真空中蒸发溶剂并在高真
空下干燥残余物。这得到274mg (理论值的95%) 1-({N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酰基}氨
基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酸叔丁酯。
[0661] LC-MS (方法12): Rt = 1.69 min; MS (ESIpos): m/z = 513 (M+H)+。
[0662] 将820μl (11mmol) TFA添加至274mg (535μmol) 1-({N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酰基}氨基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酸叔丁酯于5.0ml二氯甲烷中的溶液。将反应混
合物在室温下搅拌3小时。在真空中浓缩反应混合物并将残余物置于水中并冻干。这得到
262mg (理论值的100%)标题化合物。
合物在室温下搅拌3小时。在真空中浓缩反应混合物并将残余物置于水中并冻干。这得到
262mg (理论值的100%)标题化合物。
[0663] LC-MS (方法12): Rt = 1.12 min; MS (ESIpos): m/z = 457 (M+H)+。
[0664] 中间体L91三氟乙酸/1-{[3-氨基-N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酰基]氨基}-3,6,9,12-四氧杂十五
烷-15-酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)
标题化合物从市售3-氧代-1-苯基-2,7,10,13,16-五氧杂-4-氮杂十九烷-19-酸通过
肽化学的经典方法(使用EDCI/DMAP用2-三甲基甲硅烷基乙醇酯化，氢解移除Z保护基，与市
售N-(叔丁氧基羰基)-3-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-D-丙氨酸偶联和移除Fmoc保
护基)来制备。
烷-15-酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)
标题化合物从市售3-氧代-1-苯基-2,7,10,13,16-五氧杂-4-氮杂十九烷-19-酸通过
肽化学的经典方法(使用EDCI/DMAP用2-三甲基甲硅烷基乙醇酯化，氢解移除Z保护基，与市
售N-(叔丁氧基羰基)-3-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-D-丙氨酸偶联和移除Fmoc保
护基)来制备。
[0665] LC-MS (方法1): Rt = 0.74 min; MS (ESIpos): m/z = 552 (M+H)+。
[0666] 中间体F104三氟乙酸/(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]
氨基}乙基)丁酰胺(1:1)
将10mg (0.014mmol)中间体C53溶解于3.3ml DMF中，并添加8.5mg (0.027mmol)中间
体L1、7.8mg (0.02mmol) HATU和12μl N,N-二异丙基乙胺。将混合物在室温下搅拌15分钟
且然后浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化，冻干后得到5.6mg (理论值的38%)保护的中间
体。
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]
氨基}乙基)丁酰胺(1:1)
将10mg (0.014mmol)中间体C53溶解于3.3ml DMF中，并添加8.5mg (0.027mmol)中间
体L1、7.8mg (0.02mmol) HATU和12μl N,N-二异丙基乙胺。将混合物在室温下搅拌15分钟
且然后浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化，冻干后得到5.6mg (理论值的38%)保护的中间
体。
[0667] LC-MS (方法1): Rt = 1.32 min; MS (ESIpos): m/z = 915 (M+H)+。
[0668] 将5.6mg (0.006mmol)该中间体溶于2ml DMF中，并添加69mg (0.61mmol) 1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷。将混合物在超声波浴中处理2小时。然后添加35μl乙酸并在高真空
下浓缩该混合物。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到2.4mg (理论值的48%)标题化合物。
下浓缩该混合物。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到2.4mg (理论值的48%)标题化合物。
[0669] LC-MS (方法1): Rt = 0.84 min; MS (EIpos): m/z = 693 [M+H]+。
[0670] HPLC (方法11): Rt = 1.91 min；或者，还从中间体C58制备标题化合物。15mg (0.023mmol)中间体C58最初与11mg
(0.036mmol)中间体L1在13mg (0.034mmol) HATU和10μl N,N-二异丙基乙胺存在的情况下
反应。在室温下搅拌60分钟后浓缩且残余物通过制备型HPLC纯化。这得到12.3mg (理论值
的63%)保护的中间体。
(0.036mmol)中间体L1在13mg (0.034mmol) HATU和10μl N,N-二异丙基乙胺存在的情况下
反应。在室温下搅拌60分钟后浓缩且残余物通过制备型HPLC纯化。这得到12.3mg (理论值
的63%)保护的中间体。
[0671] LC-MS (方法1): Rt = 1.3 min; MS (EIpos): m/z = 837 [M+H]+。
[0672] 在第二步骤中，将该中间体溶解于3ml 2,2,2-三氟乙醇中。添加12mg (0.088mmol)氯化锌，并将混合物在50℃下搅拌2小时。然后添加26mg (0.088mmol)乙二胺-
N,N,N’,N’-四乙酸和2ml 0.1%三氟乙酸水溶液。该混合物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应
级分并从乙腈/水冻干残余物后，得到8.1mg (理论值的68%)标题化合物。
N,N,N’,N’-四乙酸和2ml 0.1%三氟乙酸水溶液。该混合物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应
级分并从乙腈/水冻干残余物后，得到8.1mg (理论值的68%)标题化合物。
[0673] LC-MS (方法1): Rt = 0.89 min; MS (ESIpos): m/z = 693 (M+H)+。
[0674] 中间体F119三氟乙酸/(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-{2-[(溴乙酰基)氨基]乙基}丁酰胺(1:1)
将29mg (0.044mmol)中间体C58置于3.4ml DMF中，并添加36mg (0.087mmol)中间体
L52、25mg (0.065mmol) HATU和19μl N,N-二异丙基乙胺。在室温下搅拌60分钟后浓缩且残
余物通过制备型HPLC纯化。这得到26.4mg (理论值的73%)中间体。
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-{2-[(溴乙酰基)氨基]乙基}丁酰胺(1:1)
将29mg (0.044mmol)中间体C58置于3.4ml DMF中，并添加36mg (0.087mmol)中间体
L52、25mg (0.065mmol) HATU和19μl N,N-二异丙基乙胺。在室温下搅拌60分钟后浓缩且残
余物通过制备型HPLC纯化。这得到26.4mg (理论值的73%)中间体。
[0675] LC-MS (方法1): Rt = 1.34 min; MS (ESIpos): m/z = 820和822 (M+H)+。
[0676] 将该中间体溶解于3ml 2,2,2-三氟乙醇中。添加6.5mg (0.048mmol)氯化锌，并将混合物在50℃下搅拌4小时。然后添加13.9mg (0.048mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸和
2ml 0.1%三氟乙酸水溶液。该混合物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙腈/水冻干
残余物后，得到14.4mg (理论值的58%)标题化合物。
2ml 0.1%三氟乙酸水溶液。该混合物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙腈/水冻干
残余物后，得到14.4mg (理论值的58%)标题化合物。
[0677] LC-MS (方法1): Rt = 0.88 min; MS (ESIpos): m/z = 676和678 (M+H)+。
[0678] 中间体F127三氟乙酸/(2S)-2-氨基-4-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}[(2S)-2-甲氧基丙酰基]氨基)-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-
1-基)乙酰基]氨基}乙基)丁酰胺(1:1)
将12mg (0.015mmol)中间体C59溶解于2.4ml DMF中，并添加14.6mg (0.046mmol)中间
体L1、6mg (0.031mmol) 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐、5.9mg
(0.039mmol) 1-羟基-1H-苯并三唑水合物和8μl N,N-二异丙基乙胺。在室温下搅拌1小时
后浓缩且残余物通过制备型HPLC纯化。这得到11mg (理论值的70%)该中间体。
2-二甲基丙基}[(2S)-2-甲氧基丙酰基]氨基)-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-
1-基)乙酰基]氨基}乙基)丁酰胺(1:1)
将12mg (0.015mmol)中间体C59溶解于2.4ml DMF中，并添加14.6mg (0.046mmol)中间
体L1、6mg (0.031mmol) 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐、5.9mg
(0.039mmol) 1-羟基-1H-苯并三唑水合物和8μl N,N-二异丙基乙胺。在室温下搅拌1小时
后浓缩且残余物通过制备型HPLC纯化。这得到11mg (理论值的70%)该中间体。
[0679] LC-MS (方法1): Rt = 1.34 min; MS (ESIpos): m/z = 942 (M+H)+。
[0680] 将11mg (0.011mmol)该中间体置于2ml DMF中，并添加123mg (1.1mmol) 1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷。将混合物在超声波浴中处理2小时。然后添加63μl乙酸并在高真空
下浓缩该混合物。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到2mg (理论值的22%)标题化合物。
下浓缩该混合物。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到2mg (理论值的22%)标题化合物。
[0681] LC-MS (方法1): Rt = 0.89 min; MS (EIpos): m/z = 721 [M+H]+。HPLC (方法11): Rt = 1.95 min。
[0682] 中间体F153三氟乙酸/(2S)-2-氨基-4-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}[(2S)-2-羟基丙酰基]氨基)-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-
基)乙酰基]氨基}乙基)丁酰胺(1:1)
该合成类似于中间体F104，从中间体C60进行。
2-二甲基丙基}[(2S)-2-羟基丙酰基]氨基)-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-
基)乙酰基]氨基}乙基)丁酰胺(1:1)
该合成类似于中间体F104，从中间体C60进行。
[0683] LC-MS (方法1): Rt = 1.1 min; MS (ESIpos): m/z = 707 (M+H)+。
[0684] 中间体F155N6-(N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)-N2-{N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基}-L-赖氨酸/三氟乙酸(1:1)
标题化合物通过如下来制备：在8.7mg (0.023mmol) HATU和17μl N,N-二异丙基乙胺
存在的情况下将14mg (0.019mmol)中间体C61与15mg (0.021mmol)中间体L61偶联且随后
如对于中间体F119所述，在三氟乙醇中用氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化后得到13mg
(经2个步骤，理论值的59%)标题化合物。
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)-N2-{N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基}-L-赖氨酸/三氟乙酸(1:1)
标题化合物通过如下来制备：在8.7mg (0.023mmol) HATU和17μl N,N-二异丙基乙胺
存在的情况下将14mg (0.019mmol)中间体C61与15mg (0.021mmol)中间体L61偶联且随后
如对于中间体F119所述，在三氟乙醇中用氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化后得到13mg
(经2个步骤，理论值的59%)标题化合物。
[0685] LC-MS (方法1): Rt = 0.86 min; MS (ESIpos): m/z = 1076 (M+H)+。
[0686] 中间体F173N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-N-
[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]-L-谷氨酰胺/三氟乙酸(1:1)
标题化合物从15mg (0.018mmol)中间体C64通过如下来制备：在7.7mg (0.02mmol)
HATU和16μl N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与12mg (0.02mmol)中间体L63偶联且随后如
对于中间体F119所述，在三氟乙醇中用氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化后得到12mg
(经2个步骤，理论值的58%)标题化合物。
[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]-L-谷氨酰胺/三氟乙酸(1:1)
标题化合物从15mg (0.018mmol)中间体C64通过如下来制备：在7.7mg (0.02mmol)
HATU和16μl N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与12mg (0.02mmol)中间体L63偶联且随后如
对于中间体F119所述，在三氟乙醇中用氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化后得到12mg
(经2个步骤，理论值的58%)标题化合物。
[0687] LC-MS (方法1): Rt = 0.91 min; MS (EIpos): m/z = 1048 [M+H]+。
[0688] 中间体F178三氟乙酸/(1R,2S)-2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)-N-{2-[(溴乙酰基)氨基]乙
基}环戊烷甲酰胺(1:1)
标题化合物类似于中间体F177来制备，其中使用中间体L52替代中间体L1。
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)-N-{2-[(溴乙酰基)氨基]乙
基}环戊烷甲酰胺(1:1)
标题化合物类似于中间体F177来制备，其中使用中间体L52替代中间体L1。
[0689] LC-MS (方法1): Rt = 0.89 min; MS (EIpos): m/z = 787和789 [M+H]+。
[0690] 中间体F180N-[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
2
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-
1-基)乙酰基]-L-谷氨酰胺/三氟乙酸(1:1)
标题化合物通过如下来制备：在7mg (0.018mmol) HATU和6μl N,N-二异丙基乙胺存在
的情况下将9.6mg (0.012mmol)中间体C64与5mg (0.013mmol)中间体L64偶联且随后如对
于中间体F119所述，在三氟乙醇中用氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化得到3.1mg (经2
个步骤，理论值的28%)标题化合物。
2
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-
1-基)乙酰基]-L-谷氨酰胺/三氟乙酸(1:1)
标题化合物通过如下来制备：在7mg (0.018mmol) HATU和6μl N,N-二异丙基乙胺存在
的情况下将9.6mg (0.012mmol)中间体C64与5mg (0.013mmol)中间体L64偶联且随后如对
于中间体F119所述，在三氟乙醇中用氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化得到3.1mg (经2
个步骤，理论值的28%)标题化合物。
[0691] LC-MS (方法1): Rt = 0.85 min; MS (EIpos): m/z = 822 [M+H]+。
[0692] 中间体F192N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨
基}-L-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
将60mg (0.091mmol)中间体C58置于8ml DMF中并在42mg (0.11mmol) HATU和64μl N,
N-二异丙基乙胺存在的情况下与45mg (0.100mmol)中间体L65偶联。通过制备型HPLC纯化
后，将中间体置于10ml乙醇中并在10%活性炭载钯上在室温下在氢气标准压力下氢化45分
钟。然后滤出催化剂，在真空中移除溶剂且产物通过制备型HPLC纯化。从乙腈/水1:1冻干后
得到24.5mg (经2个步骤，理论值的31%) 3-氨基-N-[(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-
二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷
基)乙氧基]羰基}氨基)丁酰基]-L-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨
基}-L-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
将60mg (0.091mmol)中间体C58置于8ml DMF中并在42mg (0.11mmol) HATU和64μl N,
N-二异丙基乙胺存在的情况下与45mg (0.100mmol)中间体L65偶联。通过制备型HPLC纯化
后，将中间体置于10ml乙醇中并在10%活性炭载钯上在室温下在氢气标准压力下氢化45分
钟。然后滤出催化剂，在真空中移除溶剂且产物通过制备型HPLC纯化。从乙腈/水1:1冻干后
得到24.5mg (经2个步骤，理论值的31%) 3-氨基-N-[(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-
二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷
基)乙氧基]羰基}氨基)丁酰基]-L-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0693] LC-MS (方法1): Rt = 1.17 min; MS (EIpos): m/z = 844 [M+H]+。
[0694] 然后标题化合物通过如下来制备：在5.4mg (0.014mmol) HATU和8μl N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将10mg (0.012mmol)该中间体与2mg (0.013mmol)市售(2,5-二氧代-
2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸中间体偶联且随后如对于中间体F119所述，在三氟乙醇中用
氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化后得到3.5mg (经2个步骤，理论值的33%)标题化合物。
2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸中间体偶联且随后如对于中间体F119所述，在三氟乙醇中用
氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化后得到3.5mg (经2个步骤，理论值的33%)标题化合物。
[0695] LC-MS (方法1): Rt = 0.81 min; MS (ESIpos): m/z = 737 (M+H)+。
[0696] 中间体F193N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨
基}-D-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
标题化合物的合成类似于中间体F192从3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-N-(叔丁氧基羰
基)-D-丙氨酸/N-环己基环己胺(1:1)进行。
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨
基}-D-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
标题化合物的合成类似于中间体F192从3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-N-(叔丁氧基羰
基)-D-丙氨酸/N-环己基环己胺(1:1)进行。
[0697] LC-MS (方法1): Rt = 0.87 min; MS (ESIpos): m/z = 737 (M+H)+。
[0698] 中间体F194N-{5-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-5-氧代戊酰基}-L-缬氨酰基-N-{3-[{(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丙基}-
L-丙氨酰胺
标题化合物从实施例M9首先通过在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与N-[(苄
基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸偶联来制备。在下一步骤中，Z保护基通过如下来移
除：在10%活性炭载钯上在室温下在氢气标准压力下氢化1小时；且然后将脱保护的中间体
通过与1,1’-[(1,5-二氧代戊烷-1,5-二基)双(氧基)]二吡咯烷-2,5-二酮反应而转化为标
题化合物。
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丙基}-
L-丙氨酰胺
标题化合物从实施例M9首先通过在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与N-[(苄
基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸偶联来制备。在下一步骤中，Z保护基通过如下来移
除：在10%活性炭载钯上在室温下在氢气标准压力下氢化1小时；且然后将脱保护的中间体
通过与1,1’-[(1,5-二氧代戊烷-1,5-二基)双(氧基)]二吡咯烷-2,5-二酮反应而转化为标
题化合物。
[0699] LC-MS (方法1): Rt = 1.19 min; MS (ESIpos): m/z = 851 [M+H]+。
[0700] 中间体F207N6-(N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)-N2-{N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-
吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基}-L-赖氨酸/三氟乙酸(1:1)
标题化合物类似于中间体F155制备。
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)-N2-{N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-
吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基}-L-赖氨酸/三氟乙酸(1:1)
标题化合物类似于中间体F155制备。
[0701] LC-MS (方法1): Rt = 0.81 min; MS (ESIpos): m/z = 1020 (M+H)+。
[0702] 中间体F213三氟乙酸/3-({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡
咯-1-基)乙酰基]氨基}乙基)丙酰胺(1:1)
将27.5mg (0.04mmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-
17-酸(中间体C69)最初与15.9mg (0.05mmol)三氟乙酸/N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-
2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:1)(中间体L1)一起装入1.8ml乙腈。然后添加32.4mg
(0.31mmol) N,N-二异丙基乙胺，且逐滴添加32.4mg (0.05mmol)T3P(50%，在乙酸乙酯中)。
将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到11.9mg (理论值的35%)化合物[13-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,7,12-三氧
代-10-硫杂-3,6,13-三氮杂十六烷-16-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡
咯-1-基)乙酰基]氨基}乙基)丙酰胺(1:1)
将27.5mg (0.04mmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-
17-酸(中间体C69)最初与15.9mg (0.05mmol)三氟乙酸/N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-
2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:1)(中间体L1)一起装入1.8ml乙腈。然后添加32.4mg
(0.31mmol) N,N-二异丙基乙胺，且逐滴添加32.4mg (0.05mmol)T3P(50%，在乙酸乙酯中)。
将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到11.9mg (理论值的35%)化合物[13-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,7,12-三氧
代-10-硫杂-3,6,13-三氮杂十六烷-16-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0703] LC-MS (方法1): Rt = 1.39 min; MS (ESIpos): m/z = 881 (M+H)+。
[0704] 将11.9mg (0.01mol)[13-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,7,12-三氧代-10-硫杂-3,
6,13-三氮杂十六烷-16-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于1.0ml三氟乙醇中，
并添加5.5mg (0.04mmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌过夜。向该反应混合物添
加11.8mg (0.04mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。
纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，
0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到7.4mg (理论值的
60%)标题化合物。
6,13-三氮杂十六烷-16-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于1.0ml三氟乙醇中，
并添加5.5mg (0.04mmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌过夜。向该反应混合物添
加11.8mg (0.04mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。
纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，
0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到7.4mg (理论值的
60%)标题化合物。
[0705] LC-MS (方法5): Rt = 2.75 min; MS (ESIpos): m/z = 737 (M+H)+。
[0706] 中间体F216S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,
7,10,13-四氧杂-16-氮杂十九烷-1-酰基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
在氩气下，将30.2mg (0.06mmol) N,N’-双[(苄基氧基)羰基]-L-胱氨酸最初装入
2.0ml水和2.0ml异丙醇中，并添加56.7mg (0.20mmol) TCEP。将反应混合物在室温下搅拌
30分钟。然后添加溶解于2.0ml异丙醇中的50.0mg (0.08mmol){3-[{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]丙基}氨基甲酸2-(三
甲基甲硅烷基)乙酯(中间体C70)以及122.2mg (0.48mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-
7-烯，并将反应混合物在50℃下搅拌7小时。然后添加另外122.2mg (0.48mmol) 1,8-二氮
杂双环[5.4.0]十一-7-烯，并将反应混合物在50℃下搅拌1小时。用乙酸乙酯稀释且有机相
用水和饱和碳酸氢钠溶液萃取并用饱和NaCl溶液洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸
发溶剂。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/
水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到43.1mg (理论值
的64%)化合物S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[(苄基氧
基)羰基]-L-半胱氨酸。
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,
7,10,13-四氧杂-16-氮杂十九烷-1-酰基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
在氩气下，将30.2mg (0.06mmol) N,N’-双[(苄基氧基)羰基]-L-胱氨酸最初装入
2.0ml水和2.0ml异丙醇中，并添加56.7mg (0.20mmol) TCEP。将反应混合物在室温下搅拌
30分钟。然后添加溶解于2.0ml异丙醇中的50.0mg (0.08mmol){3-[{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(氯乙酰基)氨基]丙基}氨基甲酸2-(三
甲基甲硅烷基)乙酯(中间体C70)以及122.2mg (0.48mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-
7-烯，并将反应混合物在50℃下搅拌7小时。然后添加另外122.2mg (0.48mmol) 1,8-二氮
杂双环[5.4.0]十一-7-烯，并将反应混合物在50℃下搅拌1小时。用乙酸乙酯稀释且有机相
用水和饱和碳酸氢钠溶液萃取并用饱和NaCl溶液洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸
发溶剂。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/
水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到43.1mg (理论值
的64%)化合物S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[(苄基氧
基)羰基]-L-半胱氨酸。
[0707] LC-MS (方法1): Rt = 1.46 min; MS (ESIpos): m/z = 851 (M+H)+。
[0708] 将16.5mg (0.05mmol) 4-甲基苯磺酸/β-丙氨酸苄酯(1:1)最初与14.0mg (0.11mmol) N,N-二异丙基乙胺一起装入1.5ml乙腈中。将反应混合物在室温下搅拌3分钟，
且然后添加溶解于1.5ml乙腈中的30.8mg (0.04mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-
二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二
氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[(苄基氧基)羰基]-L-半胱氨酸、23.4mg (0.18mmol) N,N-
二异丙基乙胺和29.9mg (0.05mmol)T3P(50%，在乙酸乙酯中)。将反应混合物在室温下搅拌
过夜。添加水，且反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速
率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。获得
的化合物为S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[(苄基氧
基)羰基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸苄酯。
且然后添加溶解于1.5ml乙腈中的30.8mg (0.04mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-
二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二
氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[(苄基氧基)羰基]-L-半胱氨酸、23.4mg (0.18mmol) N,N-
二异丙基乙胺和29.9mg (0.05mmol)T3P(50%，在乙酸乙酯中)。将反应混合物在室温下搅拌
过夜。添加水，且反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速
率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。获得
的化合物为S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[(苄基氧
基)羰基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸苄酯。
[0709] LC-MS (方法1): Rt = 1.59 min; MS (ESIpos): m/z = 1012 (M+H)+。
[0710] 将43.8mg (43.3μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-N-[(苄基氧基)羰基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸苄酯溶解于8.0ml乙醇中，添加
4.4mg活性炭载钯(10%)且在室温和标准压力下氢化过夜。将反应混合物通过纸板过滤器过
滤且滤饼用乙醇继续洗涤。在真空中蒸发溶剂。再如刚刚所述处理残余物两次。残余物通过
制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。
在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到14.5mg (理论值的37%)化合物S-(11-
{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,
12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸/三氟乙
酸(1:1)。
13-基)-N-[(苄基氧基)羰基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸苄酯溶解于8.0ml乙醇中，添加
4.4mg活性炭载钯(10%)且在室温和标准压力下氢化过夜。将反应混合物通过纸板过滤器过
滤且滤饼用乙醇继续洗涤。在真空中蒸发溶剂。再如刚刚所述处理残余物两次。残余物通过
制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。
在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到14.5mg (理论值的37%)化合物S-(11-
{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,
12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸/三氟乙
酸(1:1)。
[0711] LC-MS (方法1): Rt = 1.08 min; MS (ESIpos): m/z = 788 (M+H)+。
[0712] 将14.5mg (16.1μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)最初与9.1mg (17.7μmol) 3-(2,5-二氧
代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{15-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-15-氧代-3,6,9,
12-四氧杂十五烷-1-基}丙酰胺一起装入1.0ml DMF中，并添加4.9mg (48.2μmol) 4-甲基
吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜，且然后添加3.4mg (0.06mmol)乙酸。反应混合物直
接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1%
TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到4.9mg (理论值的50%)化合
物S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二
甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酰基-β-丙氨
酸/三氟乙酸(1:1)。
13-基)-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)最初与9.1mg (17.7μmol) 3-(2,5-二氧
代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{15-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-15-氧代-3,6,9,
12-四氧杂十五烷-1-基}丙酰胺一起装入1.0ml DMF中，并添加4.9mg (48.2μmol) 4-甲基
吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜，且然后添加3.4mg (0.06mmol)乙酸。反应混合物直
接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1%
TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到4.9mg (理论值的50%)化合
物S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二
甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酰基-β-丙氨
酸/三氟乙酸(1:1)。
[0713] LC-MS (方法1): Rt = 1.28 min; MS (ESIpos): m/z = 1186 (M+H)+。
[0714] 将14.1mg (11.9μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-16-
氮杂十九烷-1-酰基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)溶解于1.5ml三氟乙醇中，
并添加9.7mg (71.3μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。添加另外9.7mg
(71.3μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃下搅拌3小时。添加另外9.7mg (71.3μmol)二
氯化锌并将反应混合物在70℃下搅拌4小时。向该反应混合物添加20.8mg (0.07mmol)乙二
胺-N,N,N’,N’-四乙酸并搅拌10分钟，且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-
HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中
蒸发溶剂并冻干残余物。这得到6.2mg (理论值的44%)标题化合物。
13-基)-N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-16-
氮杂十九烷-1-酰基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)溶解于1.5ml三氟乙醇中，
并添加9.7mg (71.3μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。添加另外9.7mg
(71.3μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃下搅拌3小时。添加另外9.7mg (71.3μmol)二
氯化锌并将反应混合物在70℃下搅拌4小时。向该反应混合物添加20.8mg (0.07mmol)乙二
胺-N,N,N’,N’-四乙酸并搅拌10分钟，且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-
HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中
蒸发溶剂并冻干残余物。这得到6.2mg (理论值的44%)标题化合物。
[0715] LC-MS (方法1): Rt = 0.82 min; MS (ESIpos): m/z = 1042 (M+H)+。
[0716] 中间体F217S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-半胱
氨酸/三氟乙酸(1:1)
在氩气下，将7.5mg (0.05mmol)(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸最初装入
1.5ml DMF中，并添加7.5mg (0.05mmol) HOBt、15.5mg (0.05mmol) TBTU和6.2mg
(0.05mmol) N,N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加溶解于
1.5ml DMF中的40.0mg (0.05mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡
咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三
烷-13-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)以及18.7mg (0.14mmol) N,N-二异丙
基乙胺，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂
并在高真空下干燥残余物。这得到11.2mg (理论值的25%)化合物S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-
4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-
7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-
L-半胱氨酸。
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-半胱
氨酸/三氟乙酸(1:1)
在氩气下，将7.5mg (0.05mmol)(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸最初装入
1.5ml DMF中，并添加7.5mg (0.05mmol) HOBt、15.5mg (0.05mmol) TBTU和6.2mg
(0.05mmol) N,N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加溶解于
1.5ml DMF中的40.0mg (0.05mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡
咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三
烷-13-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)以及18.7mg (0.14mmol) N,N-二异丙
基乙胺，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂
并在高真空下干燥残余物。这得到11.2mg (理论值的25%)化合物S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-
4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-
7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-
L-半胱氨酸。
[0717] LC-MS (方法1): Rt = 1.37 min; MS (ESIpos): m/z = 854 (M+H)+。
[0718] 将10.9mg (12.8μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-
基)-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-半胱氨酸溶解于2.0ml三氟乙
醇中，并添加10.4mg (76.6μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌4小时。向反应混合
物添加22.4mg (0.08mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1%
TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/
水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并冻干残余物。这得到7.5mg (理论值的65%)标题化
合物。
基)-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-半胱氨酸溶解于2.0ml三氟乙
醇中，并添加10.4mg (76.6μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌4小时。向反应混合
物添加22.4mg (0.08mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1%
TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/
水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并冻干残余物。这得到7.5mg (理论值的65%)标题化
合物。
[0719] LC-MS (方法1): Rt = 0.92 min; MS (ESIpos): m/z = 710 (M+H)+。
[0720] 中间体F241三氟乙酸/(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-(2-{[N-(溴乙酰基)甘氨酰基]氨基}乙基)丁酰胺(1:
1)
标题化合物从中间体C66通过如下来制备：与市售1-(2-溴乙酰氧基)吡咯烷-2,5-二酮
偶联，且随后用氯化锌去解封阻。
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-(2-{[N-(溴乙酰基)甘氨酰基]氨基}乙基)丁酰胺(1:
1)
标题化合物从中间体C66通过如下来制备：与市售1-(2-溴乙酰氧基)吡咯烷-2,5-二酮
偶联，且随后用氯化锌去解封阻。
[0721] LC-MS (方法1): Rt = 0.84 min; MS (EIpos): m/z = 733和735 [M+H]+。
[0722] 中间体F242三氟乙酸/(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-(3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]
氨基}丙基)丁酰胺(1:1)
标题化合物的合成类似于中间体F104进行。
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-(3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]
氨基}丙基)丁酰胺(1:1)
标题化合物的合成类似于中间体F104进行。
[0723] LC-MS (方法1): Rt = 0.84 min; MS (ESIpos): m/z = 707 (M+H)+。
[0724] 中间体F243三氟乙酸/(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰
基]氨基}乙氧基)乙基]丁酰胺(1:1)
标题化合物的合成类似于中间体F242进行。
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰
基]氨基}乙氧基)乙基]丁酰胺(1:1)
标题化合物的合成类似于中间体F242进行。
[0725] LC-MS (方法1): Rt = 0.81 min; MS (ESIpos): m/z = 737 (M+H)+。
[0726] 中间体F245三氟乙酸/N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁基}-N’-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-
1-基)乙酰基]氨基}乙基)琥珀酰亚胺(1:1)
标题化合物通过如下来制备：在8ml DMF中在15mg (0.04mmol) HATU和9μl N,N-二异
丙基乙胺存在的情况下将10mg (0.0135mmol)中间体C65与8mg (0.027mmol)中间体L1偶联
且随后如对于中间体F119所述，在三氟乙醇中用氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化后得
到8.8mg (经2个步骤，理论值的58%)标题化合物。
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁基}-N’-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-
1-基)乙酰基]氨基}乙基)琥珀酰亚胺(1:1)
标题化合物通过如下来制备：在8ml DMF中在15mg (0.04mmol) HATU和9μl N,N-二异
丙基乙胺存在的情况下将10mg (0.0135mmol)中间体C65与8mg (0.027mmol)中间体L1偶联
且随后如对于中间体F119所述，在三氟乙醇中用氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化后得
到8.8mg (经2个步骤，理论值的58%)标题化合物。
[0727] LC-MS (方法1): Rt = 0.84 min; MS (ESIpos): m/z = 778 (M+H)+。
[0728] 中间体F247三氟乙酸/4-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨
基]-2-溴-4-氧代丁酸甲酯(1:1)
将14mg (0.018mmol)中间体C66溶解于14ml DCM中并添加10.1mg (0.037mmol)四氟硼
酸2-溴-1-乙基吡啶鎓(BEP)以及分份添加总共250μl吡啶，其中将pH值维持在5和6之间。然
后pH值用乙酸调节至4，浓缩该混合物且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分、冻干
和干燥后得到4mg (理论值的21%)保护的中间体，然后其用氯化锌在氨基官能处脱保护。
HPLC纯化和冻干后得到3mg (理论值的72%)作为无色泡沫的标题化合物。
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨
基]-2-溴-4-氧代丁酸甲酯(1:1)
将14mg (0.018mmol)中间体C66溶解于14ml DCM中并添加10.1mg (0.037mmol)四氟硼
酸2-溴-1-乙基吡啶鎓(BEP)以及分份添加总共250μl吡啶，其中将pH值维持在5和6之间。然
后pH值用乙酸调节至4，浓缩该混合物且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分、冻干
和干燥后得到4mg (理论值的21%)保护的中间体，然后其用氯化锌在氨基官能处脱保护。
HPLC纯化和冻干后得到3mg (理论值的72%)作为无色泡沫的标题化合物。
[0729] LC-MS (方法1): Rt = 0.88 min; MS (ESIpos): m/z = 805和807(M+H)+。
[0730] 中间体F248三氟乙酸/(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-{2-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧
基]乙基}丁酰胺(1:1)
标题化合物通过如下来制备：在HATU存在的情况下将10mg (0.015mmol)中间体C58与
5mg (0.017mmol)中间体L12偶联，且随后用氯化锌脱保护。这得到6.5mg (经2个步骤，理论
值的52%)标题化合物。
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-{2-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧
基]乙基}丁酰胺(1:1)
标题化合物通过如下来制备：在HATU存在的情况下将10mg (0.015mmol)中间体C58与
5mg (0.017mmol)中间体L12偶联，且随后用氯化锌脱保护。这得到6.5mg (经2个步骤，理论
值的52%)标题化合物。
[0731] LC-MS (方法1): Rt = 0.91 min; MS (ESIpos): m/z = 680 (M+H)+。
[0732] 中间体F254三氟乙酸/(3S)-4-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯
基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代
乙基)氨基]-3-溴-4-氧代丁酸甲酯(1:1)
标题化合物类似于中间体247通过如下来制备：将15mg (0.02mmol)中间体C66与21mg
(0.099mmol)(2S)-2-溴-4-甲氧基-4-氧代丁酸(其如(J.Org.Chem. 200, 65, 517-522)中
所述由(2S)-2-氨基-4-甲氧基-4-氧代丁酸盐酸盐(1:1)合成)偶联。
基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代
乙基)氨基]-3-溴-4-氧代丁酸甲酯(1:1)
标题化合物类似于中间体247通过如下来制备：将15mg (0.02mmol)中间体C66与21mg
(0.099mmol)(2S)-2-溴-4-甲氧基-4-氧代丁酸(其如(J.Org.Chem. 200, 65, 517-522)中
所述由(2S)-2-氨基-4-甲氧基-4-氧代丁酸盐酸盐(1:1)合成)偶联。
[0733] LC-MS (方法1): Rt = 0.89 min; MS (ESIpos): m/z = 805和807(M+H)+。
[0734] 中间体F255R/S-(N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-
16-氮杂十九烷-1-酰基]-L-α-谷氨酰基-S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-
二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基})高半胱氨酸/三氟乙酸
(1:1)
将13.1mg (0.04mmol)(2S)-5-(苄基氧基)-2-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-5-氧代戊酸
最初装入1.0ml DMF中，并添加5.4mg (0.04mmol) HOBt、11.4mg (0.04mmol) TBTU和4.6mg
(0.04mmol) N,N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加溶解于
12.9mg (0.1mmol) N,N-二异丙基乙胺中的30.0mg (0.04mmol) R/S-(11-{(1R)-1-[1-苄
基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧
杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)高半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C11)以及1ml
DMF。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空
下干燥残余物。这得到32mg (73%)化合物4-[2-[[(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)吡
咯-2-基]-2,2-二甲基丙基]-[3-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基氨基)丙基]氨基]-2-氧代
乙基]硫基-2-[[(2S)-5-苄基氧基-2-(苄基氧基羰基氨基)-5-氧代-戊酰基]氨基]丁酸。
16-氮杂十九烷-1-酰基]-L-α-谷氨酰基-S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-
二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基})高半胱氨酸/三氟乙酸
(1:1)
将13.1mg (0.04mmol)(2S)-5-(苄基氧基)-2-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-5-氧代戊酸
最初装入1.0ml DMF中，并添加5.4mg (0.04mmol) HOBt、11.4mg (0.04mmol) TBTU和4.6mg
(0.04mmol) N,N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加溶解于
12.9mg (0.1mmol) N,N-二异丙基乙胺中的30.0mg (0.04mmol) R/S-(11-{(1R)-1-[1-苄
基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧
杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)高半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C11)以及1ml
DMF。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空
下干燥残余物。这得到32mg (73%)化合物4-[2-[[(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)吡
咯-2-基]-2,2-二甲基丙基]-[3-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基氨基)丙基]氨基]-2-氧代
乙基]硫基-2-[[(2S)-5-苄基氧基-2-(苄基氧基羰基氨基)-5-氧代-戊酰基]氨基]丁酸。
[0735] LC-MS (方法1): Rt = 1.53 min; MS (ESIpos): m/z = 1084 (M+H)+。
[0736] 将41.4mg (0.038mmol) 4-[2-[[(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基]-[3-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基氨基)丙基]氨基]-2-氧代乙基]
硫基-2-[[(2S)-5-苄基氧基-2-(苄基氧基羰基氨基)-5-氧代-戊酰基]氨基]丁酸溶解于
10ml乙醇中，添加4.2mg Pd/C且在标准压力下氢化。将反应混合物通过纸板过滤器过滤且
滤饼用乙醇洗涤。在无加热的情况下在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 250x40；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂
并在高真空下干燥残余物。这得到21.1mg (56%)化合物R/S-(L-α-谷氨酰基-S-(11-{(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧
代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)高半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)。
硫基-2-[[(2S)-5-苄基氧基-2-(苄基氧基羰基氨基)-5-氧代-戊酰基]氨基]丁酸溶解于
10ml乙醇中，添加4.2mg Pd/C且在标准压力下氢化。将反应混合物通过纸板过滤器过滤且
滤饼用乙醇洗涤。在无加热的情况下在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 250x40；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂
并在高真空下干燥残余物。这得到21.1mg (56%)化合物R/S-(L-α-谷氨酰基-S-(11-{(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧
代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)高半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)。
[0737] LC-MS (方法1): Rt = 1.11 min; MS (ESIpos): m/z = 860 (M+H)+。
[0738] 将20.4mg (20.94μmol) R/S-(L-α-谷氨酰基-S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二
氮杂-2-硅杂十三烷-13-基))高半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)最初与11.8mg (23.04μmol) 3-
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{15-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-15-氧
代-3,6,9,12-四氧杂十五烷-1-基}丙酰胺一起装入1.0ml DMF中，并添加4.2mg (41.88μ
mol) 4-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜，且然后添加3.1mg (0.05mmol)乙酸。
反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，
MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到9.5mg
(36%)化合物R/S-(N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四
氧杂-16-氮杂十九烷-1-酰基]-L-α-谷氨酰基-S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯
基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-
2-硅杂十三烷-13-基))高半胱氨酸。
氮杂-2-硅杂十三烷-13-基))高半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)最初与11.8mg (23.04μmol) 3-
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-{15-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-15-氧
代-3,6,9,12-四氧杂十五烷-1-基}丙酰胺一起装入1.0ml DMF中，并添加4.2mg (41.88μ
mol) 4-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜，且然后添加3.1mg (0.05mmol)乙酸。
反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，
MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到9.5mg
(36%)化合物R/S-(N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四
氧杂-16-氮杂十九烷-1-酰基]-L-α-谷氨酰基-S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯
基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-
2-硅杂十三烷-13-基))高半胱氨酸。
[0739] LC-MS (方法1): Rt = 1.66 min; MS (ESIpos): m/z = 1259 (M+H)+。
[0740] 将9.4mg (7.47μmol) R/S-(N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-16-氮杂十九烷-1-酰基]-L-α-谷氨酰基-S-(11-{(1R)-1-[1-苄
基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧
杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基))高半胱氨酸溶解于1.5ml三氟乙醇中，并添加
6.1mg (44.81μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。向该反应混合物添加
13.1mg (0.05mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯
化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到6.9mg (75%)标题化合物。
基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧
杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基))高半胱氨酸溶解于1.5ml三氟乙醇中，并添加
6.1mg (44.81μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。向该反应混合物添加
13.1mg (0.05mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯
化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到6.9mg (75%)标题化合物。
[0741] LC-MS (方法1): Rt = 0.87 min; MS (ESIpos): m/z = 1114 (M+H)+。
[0742] 中间体F256三氟乙酸/N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁基}-N’-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡
咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙基]琥珀酰亚胺(1:1)
标题化合物通过如下来制备：在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将10mg
(0.014mmol)中间体C65和9.6mg (0.027mmol)三氟乙酸/N-[2-(2-氨基乙氧基)乙基]-2-
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:1)偶联且随后如对于中间体F119所述，
在三氟乙醇中用氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化后得到8mg (经2个步骤，理论值的
64%)标题化合物。
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁基}-N’-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡
咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙基]琥珀酰亚胺(1:1)
标题化合物通过如下来制备：在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将10mg
(0.014mmol)中间体C65和9.6mg (0.027mmol)三氟乙酸/N-[2-(2-氨基乙氧基)乙基]-2-
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:1)偶联且随后如对于中间体F119所述，
在三氟乙醇中用氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化后得到8mg (经2个步骤，理论值的
64%)标题化合物。
[0743] LC-MS (方法1): Rt = 0.84 min; MS (ESIpos): m/z = 822 (M+H)+。
[0744] 中间体F257R-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-[18-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,
7,10,13-四氧杂-16-氮杂十八烷-1-酰基]-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将50.0mg (0.06mmol) R-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-
基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)和29mg (0.07mmol) 3-[2-[2-[2-[2-[[2-
(2,5-二氧代吡咯-1-基)乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(中间体L74)
溶解于3.0ml DMF中，并添加27.3mg (0.07mmol) HATU和23.3mg (0.18mmol) N,N-二异丙
基乙胺。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂
并在高真空下干燥残余物。这得到17.4mg (26%)化合物R-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-
二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二
氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[18-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,
7,10,13-四氧杂-16-氮杂十八烷-1-酰基]-L-半胱氨酸。
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-[18-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,
7,10,13-四氧杂-16-氮杂十八烷-1-酰基]-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将50.0mg (0.06mmol) R-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-
基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)和29mg (0.07mmol) 3-[2-[2-[2-[2-[[2-
(2,5-二氧代吡咯-1-基)乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(中间体L74)
溶解于3.0ml DMF中，并添加27.3mg (0.07mmol) HATU和23.3mg (0.18mmol) N,N-二异丙
基乙胺。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂
并在高真空下干燥残余物。这得到17.4mg (26%)化合物R-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-
二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二
氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[18-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,
7,10,13-四氧杂-16-氮杂十八烷-1-酰基]-L-半胱氨酸。
[0745] LC-MS (方法6): Rt = 1.34 min; MS (ESIpos): m/z = 1101 (M+H)+。
[0746] 将17mg (0.02mmol) R-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-N-[18-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-16-
氮杂十八烷-1-酰基]-L-半胱氨酸溶解于1.0ml三氟乙醇中，并添加6.3mg (0.05mmol)二氯
化锌。将反应混合物在50℃下搅拌过夜。向该反应混合物添加13.5mg (0.05mmol)乙二胺-
N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC
(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发
溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到7.6mg (46%)标题化合物。
13-基)-N-[18-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-16-
氮杂十八烷-1-酰基]-L-半胱氨酸溶解于1.0ml三氟乙醇中，并添加6.3mg (0.05mmol)二氯
化锌。将反应混合物在50℃下搅拌过夜。向该反应混合物添加13.5mg (0.05mmol)乙二胺-
N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC
(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发
溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到7.6mg (46%)标题化合物。
[0747] LC-MS (方法1): Rt = 0.91 min; MS (ESIpos): m/z = 957 (M+H)+。
[0748] 中间体F258三氟乙酸/(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-[3-{2-[(溴乙酰基)氨基]乙基}氨基)-3-氧代丙基]丁
酰胺(1:1)
标题化合物通过如下来制备：使用HATU将中间体C58与三氟乙酸/[2-(β-丙氨酰基氨
基)乙基]氨基甲酸苄酯(1:1)偶联，随后氢解，随后与1-(2-溴乙酰氧基)吡咯烷-2,5-二酮
偶联且最终通过用氯化锌脱保护。
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-[3-{2-[(溴乙酰基)氨基]乙基}氨基)-3-氧代丙基]丁
酰胺(1:1)
标题化合物通过如下来制备：使用HATU将中间体C58与三氟乙酸/[2-(β-丙氨酰基氨
基)乙基]氨基甲酸苄酯(1:1)偶联，随后氢解，随后与1-(2-溴乙酰氧基)吡咯烷-2,5-二酮
偶联且最终通过用氯化锌脱保护。
[0749] LC-MS (方法1): Rt = 0.86 min; MS (ESIpos): m/z = 747和749(M+H)+。
[0750] 中间体F259N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[N-(溴乙酰基)甘氨酰基]氨基}-D-丙氨酸/三氟乙
酸(1:1)
将75mg (0.114mmol)中间体C58溶于12.5ml DMF中并在65mg (0.11mmol) HATU和79μl
N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与78mg (0.171mmol)中间体L75偶联。通过制备型HPLC纯
化后，将中间体置于20ml乙醇中并在10%活性炭载钯上在室温下在氢气标准压力下氢化1小
时。然后滤出催化剂，在真空中移除溶剂且产物通过制备型HPLC纯化。从乙腈/水1:1冻干
后，得到63mg (经2个步骤，理论值的64%) 3-氨基-N-[(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-
二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷
基)乙氧基]羰基}氨基)丁酰基]-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[N-(溴乙酰基)甘氨酰基]氨基}-D-丙氨酸/三氟乙
酸(1:1)
将75mg (0.114mmol)中间体C58溶于12.5ml DMF中并在65mg (0.11mmol) HATU和79μl
N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与78mg (0.171mmol)中间体L75偶联。通过制备型HPLC纯
化后，将中间体置于20ml乙醇中并在10%活性炭载钯上在室温下在氢气标准压力下氢化1小
时。然后滤出催化剂，在真空中移除溶剂且产物通过制备型HPLC纯化。从乙腈/水1:1冻干
后，得到63mg (经2个步骤，理论值的64%) 3-氨基-N-[(2S)-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-
二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-2-({[2-(三甲基甲硅烷
基)乙氧基]羰基}氨基)丁酰基]-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0751] LC-MS (方法1): Rt = 1.16 min; MS (EIpos): m/z = 844 [M+H]+。
[0752] 然后在HATU存在的情况下将40mg (0.047mmol)该中间体如上所述与N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酸偶联且然后再氢解脱保护。
[0753] 然后标题化合物通过如下来制备：在4μl N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将10mg (0.012mmol)该中间体与7.7mg (0.032mmol)市售1-(2-溴乙酰氧基)吡咯烷-2,5-二酮偶联
且随后如对于中间体F119所述，在三氟乙醇中用氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化后得
到1.3mg标题化合物。
且随后如对于中间体F119所述，在三氟乙醇中用氯化锌脱保护。通过制备型HPLC纯化后得
到1.3mg标题化合物。
[0754] LC-MS (方法1): Rt = 0.83 min; MS (ESIpos): m/z = 777和779 (M+H)+。
[0755] 中间体F261三氟乙酸/(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-(2-{2-[(溴乙酰基)氨基]乙氧基}乙基)丁酰胺(1:1)
标题化合物通过如下来制备：在HATU存在的情况下将20mg (0.03mmol)中间体C58与
25.8mg (0.061mmol)中间体L77偶联且随后用氯化锌脱保护。这得到11.9mg (经2个步骤，
理论值的47%)标题化合物。
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-(2-{2-[(溴乙酰基)氨基]乙氧基}乙基)丁酰胺(1:1)
标题化合物通过如下来制备：在HATU存在的情况下将20mg (0.03mmol)中间体C58与
25.8mg (0.061mmol)中间体L77偶联且随后用氯化锌脱保护。这得到11.9mg (经2个步骤，
理论值的47%)标题化合物。
[0756] LC-MS (方法1): Rt = 0.84 min; MS (ESIpos): m/z = 722和720 (M+H)+。
[0757] 中间体F262S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-{3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙
酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]丙酰基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将30mg (36μmol) S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡
咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)
与16.9mg (40μmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-[2-(2-{3-[(2,5-二氧
代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙基]丙酰胺一起最初装入1.5ml DMF中，并
添加10.9mg (108μmol) 4-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜，且然后添加7.58mg
(0.13mmol)乙酸。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速
率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得
到33.4mg (理论值的80%)化合物S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-N-{3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙
氧基]丙酰基}-L-半胱氨酸。
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-{3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙
酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]丙酰基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将30mg (36μmol) S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡
咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)
与16.9mg (40μmol) 3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-[2-(2-{3-[(2,5-二氧
代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙基]丙酰胺一起最初装入1.5ml DMF中，并
添加10.9mg (108μmol) 4-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜，且然后添加7.58mg
(0.13mmol)乙酸。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速
率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得
到33.4mg (理论值的80%)化合物S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-N-{3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙
氧基]丙酰基}-L-半胱氨酸。
[0758] LC-MS (方法1): Rt = 1.34 min; MS (ESIpos): m/z = 1027 (M+H)+。
[0759] 将32.8mg (32μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-N-{3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙
氧基]丙酰基}-L-半胱氨酸溶解于3.0ml三氟乙醇中，并添加26.1mg (192μmol)二氯化锌。
将反应混合物在50℃下搅拌2小时。向该反应混合物添加56.0mg (0.192mmol)乙二胺-N,N,
N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂
并冻干残余物。这得到22.9mg (理论值的71%)标题化合物。
13-基)-N-{3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙
氧基]丙酰基}-L-半胱氨酸溶解于3.0ml三氟乙醇中，并添加26.1mg (192μmol)二氯化锌。
将反应混合物在50℃下搅拌2小时。向该反应混合物添加56.0mg (0.192mmol)乙二胺-N,N,
N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂
并冻干残余物。这得到22.9mg (理论值的71%)标题化合物。
[0760] LC-MS (方法1): Rt = 0.88 min; MS (ESIpos): m/z = 883 (M+H)+。
[0761] 中间体F263N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-β-丙氨酰基-S-{2-[(3-氨基丙
基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代
乙基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将30.0mg (0.036mmol) R-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)和9.8mg (0.04mmol) N-[(2,5-二氧代-
2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-β-丙氨酸(中间体L78)溶解于1.0ml DMF中，并添加
16.4mg (0.04mmol) HATU和14.0mg (0.11mmol) N,N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温
下搅拌2小时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：
50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
4.2mg (13%)化合物N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-β-丙氨酰基-S-
(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲
基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸。
基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代
乙基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将30.0mg (0.036mmol) R-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)和9.8mg (0.04mmol) N-[(2,5-二氧代-
2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-β-丙氨酸(中间体L78)溶解于1.0ml DMF中，并添加
16.4mg (0.04mmol) HATU和14.0mg (0.11mmol) N,N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温
下搅拌2小时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：
50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
4.2mg (13%)化合物N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-β-丙氨酰基-S-
(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲
基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸。
[0762] LC-MS (方法6): Rt = 1.31 min; MS (ESIpos): m/z = 925 (M+H)+。
[0763] 将11.3mg (0.011mmol) N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-β-丙氨酰基-S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸
溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加5.0mg (0.04mmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌
2小时。向该反应混合物添加10.7mg (0.04mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且
然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速
率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得
到4.4mg (40%)标题化合物。
基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸
溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加5.0mg (0.04mmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌
2小时。向该反应混合物添加10.7mg (0.04mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且
然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速
率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得
到4.4mg (40%)标题化合物。
[0764] LC-MS (方法1): Rt = 0.91 min; MS (ESIpos): m/z = 781 (M+H)+。
[0765] 中间体F264N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰基-S-{2-[(3-氨基丙
基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代
乙基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将30.0mg (0.036mmol) R-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)和12.2mg (0.04mmol) N-[6-(2,5-二氧
代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酸(中间体L79)溶解于1.0ml DMF中，并添加
16.4mg (0.04mmol) HATU和14.0mg (0.11mmol) N,N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温
下搅拌2小时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：
50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
8.9mg (24%)化合物N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰基-S-
(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲
基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸。
基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代
乙基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将30.0mg (0.036mmol) R-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)和12.2mg (0.04mmol) N-[6-(2,5-二氧
代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酸(中间体L79)溶解于1.0ml DMF中，并添加
16.4mg (0.04mmol) HATU和14.0mg (0.11mmol) N,N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温
下搅拌2小时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：
50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
8.9mg (24%)化合物N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰基-S-
(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲
基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸。
[0766] LC-MS (方法6): Rt = 1.38 min; MS (ESIpos): m/z = 981 (M+H)+。
[0767] 将15.3mg (0.015mmol) N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰基-S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸
溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加6.3mg (0.045mmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅
拌2小时。向该反应混合物添加13.5mg (0.045mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分
钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流
动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。
这得到9.1mg (62%)标题化合物。
基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸
溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加6.3mg (0.045mmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅
拌2小时。向该反应混合物添加13.5mg (0.045mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分
钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流
动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。
这得到9.1mg (62%)标题化合物。
[0768] LC-MS (方法1): Rt = 0.92 min; MS (ESIpos): m/z = 837 (M+H)+。
[0769] 中间体F265三氟乙酸/N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}-22-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-6,17-二氧代-10,13-二氧
杂-3-硫杂-7,16-二氮杂二十二烷-1-酰胺(1:1)
30.0mg (42.7μmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-
17-酸(中间体C69)和25.3mg (55.6μmol)三氟乙酸/N-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙
基}-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺(1:1)(中间体L82)最初装入1.9ml乙
腈中，并添加60μl (340μmol) N,N-二异丙基乙胺和33μl (56μmol)在乙酸乙酯中的50% 2,
4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物。将反应混合物在室温下
搅拌过夜。添加水(2.0ml)，且纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流
动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。
这得到26.7mg (理论值的60%)化合物[4-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}-26-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5,10,21-三氧代-
14,17-二氧杂-7-硫杂-4,11,20-三氮杂二十六烷-1-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙
酯。
2,2-二甲基丙基}-22-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-6,17-二氧代-10,13-二氧
杂-3-硫杂-7,16-二氮杂二十二烷-1-酰胺(1:1)
30.0mg (42.7μmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-
17-酸(中间体C69)和25.3mg (55.6μmol)三氟乙酸/N-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙
基}-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺(1:1)(中间体L82)最初装入1.9ml乙
腈中，并添加60μl (340μmol) N,N-二异丙基乙胺和33μl (56μmol)在乙酸乙酯中的50% 2,
4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物。将反应混合物在室温下
搅拌过夜。添加水(2.0ml)，且纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流
动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。
这得到26.7mg (理论值的60%)化合物[4-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}-26-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5,10,21-三氧代-
14,17-二氧杂-7-硫杂-4,11,20-三氮杂二十六烷-1-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙
酯。
[0770] LC-MS (方法1): Rt = 1.40 min; MS (ESIpos): m/z = 1025 (M+H)+。
[0771] 将25.3mg (24.7μmol)[4-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-26-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5,10,21-三氧代-14,17-二
氧杂-7-硫杂-4,11,20-三氮杂二十六烷-1-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于
2.0ml三氟乙醇中，并添加20.2mg (148μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌1小时。
向反应混合物添加43.3mg (148μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加
水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到23.4mg
(理论值的95%)标题化合物。
氧杂-7-硫杂-4,11,20-三氮杂二十六烷-1-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于
2.0ml三氟乙醇中，并添加20.2mg (148μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌1小时。
向反应混合物添加43.3mg (148μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加
水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到23.4mg
(理论值的95%)标题化合物。
[0772] LC-MS (方法1): Rt = 0.89 min; MS (ESIpos): m/z = 881 (M+H)+。
[0773] 中间体F266三氟乙酸/N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,13-二氧代-6,9-二氧杂-
16-硫杂-3,12-二氮杂十八烷-18-酰胺(1:1)
30.0mg (0.043mmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-
17-酸(中间体C69)最初与22.2mg (0.056mmol)三氟乙酸/N-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧
基]乙基}-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:1)(中间体L83)一起装入
1.9ml乙腈中。然后添加60μl (0.34mmol) N,N-二异丙基乙胺，且逐滴添加33μl
(0.056mmol)T3P(50%，在乙酸乙酯中)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加水(2.0ml)。
反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，
MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到20.5mg (理
论值的49%)化合物[19-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,13,18-三氧代-6,9-二氧杂-16-硫杂-
3,12,19-三氮杂二十二烷-22-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,13-二氧代-6,9-二氧杂-
16-硫杂-3,12-二氮杂十八烷-18-酰胺(1:1)
30.0mg (0.043mmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-
17-酸(中间体C69)最初与22.2mg (0.056mmol)三氟乙酸/N-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧
基]乙基}-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:1)(中间体L83)一起装入
1.9ml乙腈中。然后添加60μl (0.34mmol) N,N-二异丙基乙胺，且逐滴添加33μl
(0.056mmol)T3P(50%，在乙酸乙酯中)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加水(2.0ml)。
反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，
MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到20.5mg (理
论值的49%)化合物[19-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,13,18-三氧代-6,9-二氧杂-16-硫杂-
3,12,19-三氮杂二十二烷-22-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0774] LC-MS (方法1): Rt = 1.38 min; MS (ESIpos): m/z = 969 (M+H)+。
[0775] 将19.1mg (19.7μmol)[19-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,13,18-三氧代-6,9-
二氧杂-16-硫杂-3,12,19-三氮杂二十二烷-22-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶
解于2.0ml三氟乙醇中，并添加16.1mg (118μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌1
小时。向该反应混合物添加34.6mg (118μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然
后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：
50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
13.9mg (理论值的75%)标题化合物。
二氧杂-16-硫杂-3,12,19-三氮杂二十二烷-22-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶
解于2.0ml三氟乙醇中，并添加16.1mg (118μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌1
小时。向该反应混合物添加34.6mg (118μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然
后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：
50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
13.9mg (理论值的75%)标题化合物。
[0776] LC-MS (方法1): Rt = 0.86 min; MS (ESIpos): m/z = 825 (M+H)+。
[0777] 中间体F267S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-[1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,18-二氧代-
6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十八烷-18-基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
在氩气下，13.4mg (33.3μmol) 1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-6,
9,12,15-四氧杂-3-氮杂十八烷-18-酸(中间体L74)最初装入1.0ml DMF中，并添加9.3μl
(54.4μmol) N,N-二异丙基乙胺和12.6mg (33.3μmol) HATU。将反应混合物在室温下搅拌
10分钟。然后添加溶解于4.7μl (27.7μmol) N,N-二异丙基乙胺和1.0ml DMF中的25.0mg
(27.7μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酰
基-β-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)(参见中间体F216的合成)。将反应混合物在室温下搅拌90分
钟。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，
MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到6.90mg (理
论值的19%)化合物S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[1-
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,18-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十八烷-
18-基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸。
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-[1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,18-二氧代-
6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十八烷-18-基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
在氩气下，13.4mg (33.3μmol) 1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-6,
9,12,15-四氧杂-3-氮杂十八烷-18-酸(中间体L74)最初装入1.0ml DMF中，并添加9.3μl
(54.4μmol) N,N-二异丙基乙胺和12.6mg (33.3μmol) HATU。将反应混合物在室温下搅拌
10分钟。然后添加溶解于4.7μl (27.7μmol) N,N-二异丙基乙胺和1.0ml DMF中的25.0mg
(27.7μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酰
基-β-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)(参见中间体F216的合成)。将反应混合物在室温下搅拌90分
钟。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，
MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到6.90mg (理
论值的19%)化合物S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[1-
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,18-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十八烷-
18-基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸。
[0778] LC-MS (方法5): Rt = 4.44 min; MS (ESIpos): m/z = 1172 (M+H)+。
[0779] 将6.70mg (5.71μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-N-[1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,18-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-
3-氮杂十八烷-18-基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸溶解于1.0ml三氟乙醇中，并添加4.67mg
(34.3μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌1小时。向该反应混合物添加10mg (34.3
μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制
备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到4.4mg (理论值的67%)标题化合物。
13-基)-N-[1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,18-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-
3-氮杂十八烷-18-基]-L-半胱氨酰基-β-丙氨酸溶解于1.0ml三氟乙醇中，并添加4.67mg
(34.3μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌1小时。向该反应混合物添加10mg (34.3
μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制
备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到4.4mg (理论值的67%)标题化合物。
[0780] LC-MS (方法1): Rt = 0.85 min; MS (ESIpos): m/z = 1028 (M+H)+。
[0781] 中间体F268三氟乙酸/N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}-28-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-6,23-二氧代-10,13,16,
19-四氧杂-3-硫杂-7,22-二氮杂二十八烷-1-酰胺(1:1)
将30.0mg (0.043mmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-
17-酸(中间体C69)最初与30.2mg (0.056mmol)三氟乙酸/N-(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十
四烷-1-基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺(1:1)(中间体L84)一起装入
2.0ml乙腈中。然后添加60μl (0.34mmol) N,N-二异丙基乙胺，且逐滴添加33μl
(0.056mmol) T3P (50%，在乙酸乙酯中)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加水
(2.0ml)。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到27.9mg
(理论值的59%)化合物[4-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-32-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5,10,27-三氧代-14,17,20,23-四氧
杂-7-硫杂-4,11,26-三氮杂三十二烷-1-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
2,2-二甲基丙基}-28-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-6,23-二氧代-10,13,16,
19-四氧杂-3-硫杂-7,22-二氮杂二十八烷-1-酰胺(1:1)
将30.0mg (0.043mmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-
17-酸(中间体C69)最初与30.2mg (0.056mmol)三氟乙酸/N-(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十
四烷-1-基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺(1:1)(中间体L84)一起装入
2.0ml乙腈中。然后添加60μl (0.34mmol) N,N-二异丙基乙胺，且逐滴添加33μl
(0.056mmol) T3P (50%，在乙酸乙酯中)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加水
(2.0ml)。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到27.9mg
(理论值的59%)化合物[4-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-32-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5,10,27-三氧代-14,17,20,23-四氧
杂-7-硫杂-4,11,26-三氮杂三十二烷-1-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0782] LC-MS (方法1): Rt = 1.41 min; MS (ESIpos): m/z = 1114 (M+H)+。
[0783] 将25.6mg (23.0μmol)[4-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-32-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5,10,27-三氧代-14,17,
20,23-四氧杂-7-硫杂-4,11,26-三氮杂三十二烷-1-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙
酯溶解于2.5ml三氟乙醇中，并添加18.8mg (138μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅
拌1小时。向该反应混合物添加40.3mg (138μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟
且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动
速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这
得到22.2mg (理论值的88%)标题化合物。
20,23-四氧杂-7-硫杂-4,11,26-三氮杂三十二烷-1-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙
酯溶解于2.5ml三氟乙醇中，并添加18.8mg (138μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅
拌1小时。向该反应混合物添加40.3mg (138μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟
且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动
速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这
得到22.2mg (理论值的88%)标题化合物。
[0784] LC-MS (方法1): Rt = 0.94 min; MS (ESIpos): m/z = 969 (M+H)+。
[0785] 中间体F2694-{[(8R,14R)-13-(3-氨基丙基)-14-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-1-
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-15,15-二甲基-2,7,12-三氧代-10-硫杂-3,6,13-
三氮杂十六烷-8-基]氨基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
将17.0mg (0.0195mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-N-(4-叔丁氧基-4-氧代丁酰基)-L-半胱氨酸(中间体C77)最初与4.99mg
(0.0253mmol) N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(中间体
L1)一起装入1.0ml乙腈中。然后添加27μl (0.16mmol) N,N-二异丙基乙胺，且逐滴添加15μ
l (0.025mmol) T3P (50%，在乙酸乙酯中)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加水
(2.0ml)。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到9.5mg
(理论值的46%)化合物4-{[(16R)-11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-23-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基-6,12,17,
22-四氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11,18,21-四氮杂-2-硅杂二十三烷-16-基]氨基}-4-氧代
丁酸叔丁酯。
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-15,15-二甲基-2,7,12-三氧代-10-硫杂-3,6,13-
三氮杂十六烷-8-基]氨基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
将17.0mg (0.0195mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-N-(4-叔丁氧基-4-氧代丁酰基)-L-半胱氨酸(中间体C77)最初与4.99mg
(0.0253mmol) N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(中间体
L1)一起装入1.0ml乙腈中。然后添加27μl (0.16mmol) N,N-二异丙基乙胺，且逐滴添加15μ
l (0.025mmol) T3P (50%，在乙酸乙酯中)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加水
(2.0ml)。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到9.5mg
(理论值的46%)化合物4-{[(16R)-11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-23-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基-6,12,17,
22-四氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11,18,21-四氮杂-2-硅杂二十三烷-16-基]氨基}-4-氧代
丁酸叔丁酯。
[0786] LC-MS (方法1): Rt = 1.47 min; MS (ESIpos): m/z = 1052 (M+H)+。
[0787] 将8.3mg (7.89μmol) 4-{[(16R)-11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-23-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基-
6,12,17,22-四氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11,18,21-四氮杂-2-硅杂二十三烷-16-基]氨
基}-4-氧代丁酸叔丁酯溶解于1.0ml三氟乙醇中，并添加6.45mg (47.3μmol)二氯化锌。将
反应混合物在50℃下搅拌6小时。添加6.45mg (47.3μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃
下搅拌过夜。向该反应混合物添加27.7mg (94.6μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸并搅拌10
分钟，且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，
流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余
物。这得到1.10mg (理论值的14%)标题化合物。
6,12,17,22-四氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11,18,21-四氮杂-2-硅杂二十三烷-16-基]氨
基}-4-氧代丁酸叔丁酯溶解于1.0ml三氟乙醇中，并添加6.45mg (47.3μmol)二氯化锌。将
反应混合物在50℃下搅拌6小时。添加6.45mg (47.3μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃
下搅拌过夜。向该反应混合物添加27.7mg (94.6μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸并搅拌10
分钟，且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，
流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余
物。这得到1.10mg (理论值的14%)标题化合物。
[0788] LC-MS (方法1): Rt = 0.89 min; MS (ESIpos): m/z = 852 (M+H)+。
[0789] 中间体F270三氟乙酸/N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}-N’-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙基)琥
珀酰亚胺(1:1)
在氩气下，将15.0mg (22.9μmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十五烷-
15-酸(中间体C78)最初装入1.0ml DMF中，并添加8.0μl (45.8μmol) N,N-二异丙基乙胺和
10.4mg (27.4μmol) HATU。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加溶解于4.0μl
(22.9μmol) N,N-二异丙基乙胺和1.0ml DMF中的8.54mg (27.4μmol)三氟乙酸/N-(2-氨基
乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:1)(中间体L1)。将反应混合物
在室温下搅拌1小时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动
速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这
得到14.7mg (理论值的77%)化合物[3-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}{4-[(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙
基)氨基]-4-氧代丁酰基}氨基)丙基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
2,2-二甲基丙基}-N’-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙基)琥
珀酰亚胺(1:1)
在氩气下，将15.0mg (22.9μmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十五烷-
15-酸(中间体C78)最初装入1.0ml DMF中，并添加8.0μl (45.8μmol) N,N-二异丙基乙胺和
10.4mg (27.4μmol) HATU。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加溶解于4.0μl
(22.9μmol) N,N-二异丙基乙胺和1.0ml DMF中的8.54mg (27.4μmol)三氟乙酸/N-(2-氨基
乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:1)(中间体L1)。将反应混合物
在室温下搅拌1小时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动
速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这
得到14.7mg (理论值的77%)化合物[3-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}{4-[(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙
基)氨基]-4-氧代丁酰基}氨基)丙基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0790] LC-MS (方法5): Rt = 1.33 min; MS (ESIpos): m/z = 835 (M+H)+。
[0791] 将13.2mg (15.8μmol)[3-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{4-[(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙
基)氨基]-4-氧代丁酰基}氨基)丙基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于2.0ml三氟
乙醇中，并添加12.9mg (94.8μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌1小时。向该反应
混合物添加27.7mg (94.6μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水
(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到10.9mg
(理论值的83%)标题化合物。
基)氨基]-4-氧代丁酰基}氨基)丙基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于2.0ml三氟
乙醇中，并添加12.9mg (94.8μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌1小时。向该反应
混合物添加27.7mg (94.6μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水
(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到10.9mg
(理论值的83%)标题化合物。
[0792] LC-MS (方法1): Rt = 0.83 min; MS (ESIpos): m/z = 691 (M+H)+。
[0793] 中间体F2714-{[(20R,26R)-25-(3-氨基丙基)-26-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-27,27-二甲基-2,19,24-三氧代-6,9,12,15-四
氧杂-22-硫杂-3,18,25-三氮杂二十八烷-20-基]氨基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
在氩气下，将19.4mg (22.2μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡
咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三
烷-13-基)-N-(4-叔丁氧基-4-氧代丁酰基)-L-半胱氨酸(中间体C77)最初装入2.0ml DMF
中，并添加21.7mg (44.4μmol)三氟乙酸/N-(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)-2-
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:1)(中间体L74)、12μl (67μmol) N,N-二
异丙基乙胺和16.9mg (44.4μmol) HATU。将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物直
接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1%
TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到18.1mg (理论值的66%)化
合物4-{[(16R)-11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-35-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基-6,12,17,34-四氧代-5,21,
24,27,30-五氧杂-14-硫杂-7,11,18,33-四氮杂-2-硅杂三十五烷-16-基]氨基}-4-氧代丁
酸叔丁酯。
1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-27,27-二甲基-2,19,24-三氧代-6,9,12,15-四
氧杂-22-硫杂-3,18,25-三氮杂二十八烷-20-基]氨基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
在氩气下，将19.4mg (22.2μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡
咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三
烷-13-基)-N-(4-叔丁氧基-4-氧代丁酰基)-L-半胱氨酸(中间体C77)最初装入2.0ml DMF
中，并添加21.7mg (44.4μmol)三氟乙酸/N-(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)-2-
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:1)(中间体L74)、12μl (67μmol) N,N-二
异丙基乙胺和16.9mg (44.4μmol) HATU。将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物直
接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1%
TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到18.1mg (理论值的66%)化
合物4-{[(16R)-11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-35-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基-6,12,17,34-四氧代-5,21,
24,27,30-五氧杂-14-硫杂-7,11,18,33-四氮杂-2-硅杂三十五烷-16-基]氨基}-4-氧代丁
酸叔丁酯。
[0794] LC-MS (方法4): Rt = 1.79 min; MS (ESIpos): m/z = 1250 (M+Na)+。
[0795] 将18.1mg (14.7μmol) 4-{[(16R)-11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-35-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基-
6,12,17,34-四氧代-5,21,24,27,30-五氧杂-14-硫杂-7,11,18,33-四氮杂-2-硅杂三十五
烷-16-基]氨基}-4-氧代丁酸叔丁酯溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加12.0mg (88.4μmol)
二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌4小时。向反应混合物添加25.8mg (88.4μmol)乙二
胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-
HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中
蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到12.3mg (理论值的73%)标题化合物。
6,12,17,34-四氧代-5,21,24,27,30-五氧杂-14-硫杂-7,11,18,33-四氮杂-2-硅杂三十五
烷-16-基]氨基}-4-氧代丁酸叔丁酯溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加12.0mg (88.4μmol)
二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌4小时。向反应混合物添加25.8mg (88.4μmol)乙二
胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-
HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中
蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到12.3mg (理论值的73%)标题化合物。
[0796] LC-MS (方法1): Rt = 0.87 min; MS (ESIpos): m/z = 1028 (M+H)+。
[0797] 中间体F272三氟乙酸/N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}-N’-[17-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-16-氧代-3,6,9,12-四
氧杂-15-氮杂十七烷-1-基]琥珀酰亚胺(1:1)
在氩气下，将15.0mg (22.9μmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十五烷-
15-酸(中间体C78)最初装入1.0ml DMF中，并添加8.0μl (45.8μmol) N,N-二异丙基乙胺和
10.4mg (27.4μmol) HATU。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加溶解于4.0μl
(22.9μmol) N,N-二异丙基乙胺和1.0ml DMF中的13.4mg (27.4μmol)三氟乙酸/N-(14-氨
基-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:
1)(中间体L85)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC
(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发
溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到15.8mg (理论值的68%)化合物[23-{(1R)-1-[1-苄
基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-
吡咯-1-基)-2,19,22-三氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18,23-三氮杂二十六烷-26-基]氨基
甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
2,2-二甲基丙基}-N’-[17-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-16-氧代-3,6,9,12-四
氧杂-15-氮杂十七烷-1-基]琥珀酰亚胺(1:1)
在氩气下，将15.0mg (22.9μmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十五烷-
15-酸(中间体C78)最初装入1.0ml DMF中，并添加8.0μl (45.8μmol) N,N-二异丙基乙胺和
10.4mg (27.4μmol) HATU。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加溶解于4.0μl
(22.9μmol) N,N-二异丙基乙胺和1.0ml DMF中的13.4mg (27.4μmol)三氟乙酸/N-(14-氨
基-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺(1:
1)(中间体L85)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物直接通过制备型RP-HPLC
(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发
溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到15.8mg (理论值的68%)化合物[23-{(1R)-1-[1-苄
基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-
吡咯-1-基)-2,19,22-三氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18,23-三氮杂二十六烷-26-基]氨基
甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0798] LC-MS (方法1): Rt = 1.35 min; MS (ESIpos): m/z = 1011 (M+H)+。
[0799] 将15.1mg (14.9μmol)[23-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,19,22-三氧代-6,9,
12,15-四氧杂-3,18,23-三氮杂二十六烷-26-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解
于2.0ml三氟乙醇中，并添加12.2mg (89.6μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌1小
时。向该反应混合物添加26.2mg (89.6μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然
后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：
50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
10.3mg (理论值的70%)标题化合物。
12,15-四氧杂-3,18,23-三氮杂二十六烷-26-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解
于2.0ml三氟乙醇中，并添加12.2mg (89.6μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌1小
时。向该反应混合物添加26.2mg (89.6μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然
后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：
50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
10.3mg (理论值的70%)标题化合物。
[0800] LC-MS (方法1): Rt = 0.88 min; MS (ESIpos): m/z = 867 (M+H)+。
[0801] 中间体F273三氟乙酸/N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,19-二氧代-6,9,12,15-四
氧杂-22-硫杂-3,18-二氮杂二十四烷-24-酰胺(1:1)
在氩气下，将20.0mg (28.5μmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅
杂十七烷-17-酸(中间体C69)最初装入1.0ml DMF中，并添加10.0μl (57.0μmol) N,N-二异
丙基乙胺和13.0mg (34.2μmol) HATU。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加溶解
于5.0μl (28.5μmol) N,N-二异丙基乙胺和1.0ml DMF中的16.7mg (34.2μmol)三氟乙酸/
N-(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙
酰胺(1:1)(中间体L85)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物直接通过制备型
RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到18.6mg (理论值的62%)化合物[25-{(1R)-1-
[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二
氢-1H-吡咯-1-基)-2,19,24-三氧代-6,9,12,15-四氧杂-22-硫杂-3,18,25-三氮杂二十八
烷-28-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,19-二氧代-6,9,12,15-四
氧杂-22-硫杂-3,18-二氮杂二十四烷-24-酰胺(1:1)
在氩气下，将20.0mg (28.5μmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅
杂十七烷-17-酸(中间体C69)最初装入1.0ml DMF中，并添加10.0μl (57.0μmol) N,N-二异
丙基乙胺和13.0mg (34.2μmol) HATU。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后添加溶解
于5.0μl (28.5μmol) N,N-二异丙基乙胺和1.0ml DMF中的16.7mg (34.2μmol)三氟乙酸/
N-(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙
酰胺(1:1)(中间体L85)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物直接通过制备型
RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到18.6mg (理论值的62%)化合物[25-{(1R)-1-
[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二
氢-1H-吡咯-1-基)-2,19,24-三氧代-6,9,12,15-四氧杂-22-硫杂-3,18,25-三氮杂二十八
烷-28-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0802] LC-MS (方法1): Rt = 1.37 min; MS (ESIpos): m/z = 1057 (M+H)+。
[0803] 将17.1mg (16.2μmol)[25-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,19,24-三氧代-6,9,
12,15-四氧杂-22-硫杂-3,18,25-三氮杂二十八烷-28-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)
乙酯溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加13.2mg (97.0μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃
下搅拌1小时。向该反应混合物添加28.4mg (97.0μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10
分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，
流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余
物。这得到9.80mg (理论值的59%)标题化合物。
12,15-四氧杂-22-硫杂-3,18,25-三氮杂二十八烷-28-基]氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)
乙酯溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加13.2mg (97.0μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃
下搅拌1小时。向该反应混合物添加28.4mg (97.0μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10
分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，
流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余
物。这得到9.80mg (理论值的59%)标题化合物。
[0804] LC-MS (方法1): Rt = 0.88 min; MS (ESIpos): m/z = 913 (M+H)+。
[0805] 中间体F274N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-S-{2-
[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨
基]-2-氧代乙基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将13.9mg (0.0167mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)最初与7.07mg (0.0217mmol) N-[(2,5-
二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸(中间体L86)一起装入
2.0ml乙腈中。然后添加23μl (0.13mmol) N,N-二异丙基乙胺，且逐滴添加13μl
(0.022mmol) T3P (50%，在乙酸乙酯中)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直
接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1%
TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到3.70mg (理论值的19%)化
合物N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-S-(11-
{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,
12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸。
[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨
基]-2-氧代乙基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将13.9mg (0.0167mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)最初与7.07mg (0.0217mmol) N-[(2,5-
二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸(中间体L86)一起装入
2.0ml乙腈中。然后添加23μl (0.13mmol) N,N-二异丙基乙胺，且逐滴添加13μl
(0.022mmol) T3P (50%，在乙酸乙酯中)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直
接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1%
TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到3.70mg (理论值的19%)化
合物N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-S-(11-
{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,
12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸。
[0806] LC-MS (方法1): Rt = 1.34 min; MS (ESIpos): m/z = 1024 (M+H)+。
[0807] 将10.6mg (10.3μmol) N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二
甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半
胱氨酸溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加8.46mg (62.1μmol)二氯化锌。将反应混合物在50
℃下搅拌1小时。向该反应混合物添加18.1mg (62.1μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌
10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10
μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到5.60mg (理论值的54%)标题化合物。
甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半
胱氨酸溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加8.46mg (62.1μmol)二氯化锌。将反应混合物在50
℃下搅拌1小时。向该反应混合物添加18.1mg (62.1μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌
10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10
μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到5.60mg (理论值的54%)标题化合物。
[0808] LC-MS (方法12): Rt = 1.69 min; MS (ESIpos): m/z = 880 (M+H)+。
[0809] 中间体F275N-[3-({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)丙酰基]-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-
1-基)乙酰基]氨基}乙基)-L-α-谷氨酰胺/三氟乙酸(1:1)
将39.0mg (55.6μmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-
17-酸(中间体C69)最初装入4.0ml DMF中，添加41.6mg (111μmol) L-谷氨酸1-苄基酯5-
[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]酯盐酸盐(1:1)(中间体L89)、29μl (170μmol) N,N-二异丙基
乙胺和42.3mg (111μmol) HATU并在室温下继续搅拌1小时。将反应混合物在室温下搅拌1
小时，用乙酸淬灭且直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到53.1mg
(理论值的93%)化合物N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七
烷-17-基)-L-谷氨酸1-苄基酯5-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]酯。
二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)丙酰基]-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-
1-基)乙酰基]氨基}乙基)-L-α-谷氨酰胺/三氟乙酸(1:1)
将39.0mg (55.6μmol) 11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-
17-酸(中间体C69)最初装入4.0ml DMF中，添加41.6mg (111μmol) L-谷氨酸1-苄基酯5-
[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]酯盐酸盐(1:1)(中间体L89)、29μl (170μmol) N,N-二异丙基
乙胺和42.3mg (111μmol) HATU并在室温下继续搅拌1小时。将反应混合物在室温下搅拌1
小时，用乙酸淬灭且直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到53.1mg
(理论值的93%)化合物N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七
烷-17-基)-L-谷氨酸1-苄基酯5-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]酯。
[0810] LC-MS (方法1): Rt = 1.71 min; MS (ESIpos): m/z = 1021 [M+H]+。
[0811] 在氩气下，将7.60mg (33.9μmol)乙酸钯(II)最初装入3.0ml二氯甲烷中，并添加14μl (100μmol)三乙胺和110μl (680μmol)三乙基甲硅烷。将反应混合物在室温下搅拌5分
钟，并添加溶解于3.0ml二氯甲烷中的69.2mg (67.7μmol) N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,
5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-
14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-基)-L-谷氨酸1-苄基酯-5-[2-(三甲基甲硅烷
基)乙基]酯。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过纸板过滤器过滤且滤饼
用二氯甲烷继续洗涤。在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空
下干燥残余物。这得到38.4mg (理论值的61%)化合物(19S)-11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-
二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-19-{3-氧代-
3-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]丙基}-5-氧杂-14-硫杂-7,11,18-三氮杂-2-硅杂二十烷-
20-酸。
钟，并添加溶解于3.0ml二氯甲烷中的69.2mg (67.7μmol) N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,
5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-
14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-基)-L-谷氨酸1-苄基酯-5-[2-(三甲基甲硅烷
基)乙基]酯。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过纸板过滤器过滤且滤饼
用二氯甲烷继续洗涤。在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil
250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空
下干燥残余物。这得到38.4mg (理论值的61%)化合物(19S)-11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-
二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-19-{3-氧代-
3-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]丙基}-5-氧杂-14-硫杂-7,11,18-三氮杂-2-硅杂二十烷-
20-酸。
[0812] LC-MS (方法1): Rt = 1.53 min; MS (ESIpos): m/z = 931 (M+H)+。
[0813] 将10.0mg (10.7μmol)(19S)-11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-19-{3-氧代-3-[2-(三甲基甲硅烷
基)乙氧基]丙基}-5-氧杂-14-硫杂-7,11,18-三氮杂-2-硅杂二十烷-20-酸最初装入1.0ml
DMF中，添加6.73mg (21.5μmol) N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-
基)乙酰胺/2,2,2-三氟乙烷-1,1-二醇(1:1)(中间体L1)、5.6μl (32μmol) N,N-二异丙基
乙胺和8.17mg (21.5μmol) HATU并在室温下继续搅拌1小时。将反应混合物在室温下搅拌3
小时，用乙酸淬灭且直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到6.90mg
(理论值的58%)化合物N2-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七
烷-17-基)-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙基)-L-α-谷氨
酰胺2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
基)乙氧基]丙基}-5-氧杂-14-硫杂-7,11,18-三氮杂-2-硅杂二十烷-20-酸最初装入1.0ml
DMF中，添加6.73mg (21.5μmol) N-(2-氨基乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-
基)乙酰胺/2,2,2-三氟乙烷-1,1-二醇(1:1)(中间体L1)、5.6μl (32μmol) N,N-二异丙基
乙胺和8.17mg (21.5μmol) HATU并在室温下继续搅拌1小时。将反应混合物在室温下搅拌3
小时，用乙酸淬灭且直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到6.90mg
(理论值的58%)化合物N2-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七
烷-17-基)-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙基)-L-α-谷氨
酰胺2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0814] LC-MS (方法1): Rt = 1.57 min; MS (ESIpos): m/z = 1110 [M+H]+。
[0815] 将6.90mg (6.21μmol) N2-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-
硅杂十七烷-17-基)-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙基)-
L-α-谷氨酰胺2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加5.1mg (37.2μ
mol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。添加5.1mg (37.2μmol)二氯化锌并将反
应混合物在50℃下搅拌3小时。添加5.1mg (37.2μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃下
搅拌3小时。添加10.1mg (74.4μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃下搅拌过夜并在室温
下搅拌72小时。向该反应混合物添加54.5mg (186μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10
分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，
流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余
物。这得到2.4mg (理论值的39%)标题化合物。
硅杂十七烷-17-基)-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙基)-
L-α-谷氨酰胺2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加5.1mg (37.2μ
mol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。添加5.1mg (37.2μmol)二氯化锌并将反
应混合物在50℃下搅拌3小时。添加5.1mg (37.2μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃下
搅拌3小时。添加10.1mg (74.4μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃下搅拌过夜并在室温
下搅拌72小时。向该反应混合物添加54.5mg (186μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10
分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，
流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余
物。这得到2.4mg (理论值的39%)标题化合物。
[0816] LC-MS (方法1): Rt = 0.86 min; MS (ESIpos): m/z = 866 (M+H)+。
[0817] 中间体F276S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-{3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰
基]氨基}乙氧基)乙氧基]丙酰基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
在氩气下，将9.08mg (28.9μmol) 3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]丙酸(中间体L87)最初装入1.0ml DMF中，并添加8.33μl
(48.2μmol) N,N-二异丙基乙胺和11.0mg (28.9μmol) HATU。将反应混合物在室温下搅拌
10分钟。然后添加溶解于4.67μl (24.1μmol) N,N-二异丙基乙胺和1.0ml DMF中的20.0mg
(27.7μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸/
三氟乙酸(1:1)(中间体C71)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物直接通过制备
型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到4.70mg (理论值的19%)化合物S-(11-
{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,
12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-{3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,
5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]丙酰基}-L-半胱氨酸。
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-{3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰
基]氨基}乙氧基)乙氧基]丙酰基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
在氩气下，将9.08mg (28.9μmol) 3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]丙酸(中间体L87)最初装入1.0ml DMF中，并添加8.33μl
(48.2μmol) N,N-二异丙基乙胺和11.0mg (28.9μmol) HATU。将反应混合物在室温下搅拌
10分钟。然后添加溶解于4.67μl (24.1μmol) N,N-二异丙基乙胺和1.0ml DMF中的20.0mg
(27.7μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-L-半胱氨酸/
三氟乙酸(1:1)(中间体C71)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物直接通过制备
型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到4.70mg (理论值的19%)化合物S-(11-
{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,
12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-{3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,
5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]丙酰基}-L-半胱氨酸。
[0818] LC-MS (方法12): Rt = 2.47 min; MS (ESIpos): m/z = 1013 (M+H)+。
[0819] 将13.9mg (13.7μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-N-{3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧
基]丙酰基}-L-半胱氨酸溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加5.6mg (41.2μmol)二氯化锌。将
反应混合物在50℃下搅拌1小时。添加5.6mg (41.2μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃
下搅拌30分钟。向该反应混合物添加24.1mg (82.4μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸并搅拌
10分钟，且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10
μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到10.8mg (理论值的80%)标题化合物。
13-基)-N-{3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧
基]丙酰基}-L-半胱氨酸溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加5.6mg (41.2μmol)二氯化锌。将
反应混合物在50℃下搅拌1小时。添加5.6mg (41.2μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃
下搅拌30分钟。向该反应混合物添加24.1mg (82.4μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸并搅拌
10分钟，且然后添加水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10
μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残
余物。这得到10.8mg (理论值的80%)标题化合物。
[0820] LC-MS (方法12): Rt = 1.58 min; MS (ESIpos): m/z = 869 (M+H)+。
[0821] 中间体F277N-[3-({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)丙酰基]-3-[(溴乙酰基)氨基]-D-丙氨酸/三氟乙酸
(1:1)
将8.90mg (8.88μmol)三氟乙酸/3-氨基-N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯
基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,
11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-基)-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)(中间体C80)
和2.31mg (9.77μmol) 1-(2-溴乙酰氧基)吡咯烷-2,5-二酮溶解于1ml二甲基甲酰胺中，并
添加2.9μl (27μmol) N-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物直接通
过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯
化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到5.80mg (理论值的65%)化合物N-
(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲
基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-基)-3-[(溴乙酰
基)氨基]-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)丙酰基]-3-[(溴乙酰基)氨基]-D-丙氨酸/三氟乙酸
(1:1)
将8.90mg (8.88μmol)三氟乙酸/3-氨基-N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯
基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,
11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-基)-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)(中间体C80)
和2.31mg (9.77μmol) 1-(2-溴乙酰氧基)吡咯烷-2,5-二酮溶解于1ml二甲基甲酰胺中，并
添加2.9μl (27μmol) N-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物直接通
过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯
化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到5.80mg (理论值的65%)化合物N-
(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲
基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-基)-3-[(溴乙酰
基)氨基]-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0822] LC-MS (方法1): Rt = 1.57 min; MS (ESIpos): m/z = 1008 (M+H)+。
[0823] 将5.80mg (5.75μmol) N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅
杂十七烷-17-基)-3-[(溴乙酰基)氨基]-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于2.0ml
三氟乙醇中，并添加4.70mg (34.5μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。添加
4.70mg (34.5μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃下搅拌5小时。向该反应混合物添加
20.2mg (69.0μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸并搅拌10分钟，且然后添加水(0.1% TFA)。
纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，
0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到1.70mg (理论值的
34%)标题化合物。
杂十七烷-17-基)-3-[(溴乙酰基)氨基]-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于2.0ml
三氟乙醇中，并添加4.70mg (34.5μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。添加
4.70mg (34.5μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃下搅拌5小时。向该反应混合物添加
20.2mg (69.0μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸并搅拌10分钟，且然后添加水(0.1% TFA)。
纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，
0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到1.70mg (理论值的
34%)标题化合物。
[0824] LC-MS (方法1): Rt = 0.90 min; MS (ESIpos): m/z = 764 (M+H)+。
[0825] 中间体F278N-[3-({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)丙酰基]-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-
基)乙酰基]氨基}-D-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
将10.0mg (9.98μmol)三氟乙酸/3-氨基-N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯
基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,
11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-基)-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)(中间体C80)
和2.77mg (11.0μmol) 1-{2-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-2-氧代乙基}-1H-吡咯-2,
5-二酮溶解于1ml二甲基甲酰胺中，并添加3.3μl (30μmol) N-甲基吗啉。将反应混合物在
室温下搅拌过夜。向该反应混合物添加2.0μl (35μmol)乙酸，且直接通过制备型RP-HPLC
(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发
溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到5.50mg (理论值的54%)化合物N-(11-{(1R)-1-[1-
苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧
代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-基)-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)丙酰基]-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-
基)乙酰基]氨基}-D-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
将10.0mg (9.98μmol)三氟乙酸/3-氨基-N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯
基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,
11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-基)-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)(中间体C80)
和2.77mg (11.0μmol) 1-{2-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-2-氧代乙基}-1H-吡咯-2,
5-二酮溶解于1ml二甲基甲酰胺中，并添加3.3μl (30μmol) N-甲基吗啉。将反应混合物在
室温下搅拌过夜。向该反应混合物添加2.0μl (35μmol)乙酸，且直接通过制备型RP-HPLC
(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发
溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到5.50mg (理论值的54%)化合物N-(11-{(1R)-1-[1-
苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧
代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十七烷-17-基)-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0826] LC-MS (方法1): Rt = 1.51 min; MS (ESIpos): m/z = 1024 (M+H)+。
[0827] 将5.50mg (5.36μmol) N-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12,17-三氧代-5-氧杂-14-硫杂-7,11-二氮杂-2-硅
杂十七烷-17-基)-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}-D-丙氨酸2-
(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于1.0ml三氟乙醇中，并添加4.39mg (32.2μmol)二氯化锌。将
反应混合物在50℃下搅拌1小时。添加4.39mg (32.2μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃
下搅拌1小时。添加4.39mg (32.2μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃下搅拌4小时。向该
反应混合物添加28.2mg (96.5μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸并搅拌10分钟，且然后添加
水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到2.70mg
(理论值的56%)标题化合物。
杂十七烷-17-基)-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}-D-丙氨酸2-
(三甲基甲硅烷基)乙酯溶解于1.0ml三氟乙醇中，并添加4.39mg (32.2μmol)二氯化锌。将
反应混合物在50℃下搅拌1小时。添加4.39mg (32.2μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃
下搅拌1小时。添加4.39mg (32.2μmol)二氯化锌并将反应混合物在50℃下搅拌4小时。向该
反应混合物添加28.2mg (96.5μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸并搅拌10分钟，且然后添加
水(0.1% TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/
min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到2.70mg
(理论值的56%)标题化合物。
[0828] LC-MS (方法1): Rt = 0.89 min; MS (ESIpos): m/z = 781 (M+H)+。
[0829] 中间体F279N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-[3-({(1R)-1-
[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}[({(2R)-2-羧基-2-[(3-羧
基丙酰基)氨基]乙基}硫基)乙酰基]氨基)丙基]-L-丙氨酰胺
将12.2mg (14μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-
N-(4-叔丁氧基-4-氧代丁酰基)-L-半胱氨酸(中间体C77)溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加
11.4mg (83.8μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。向该反应混合物添加
24.5mg (83.8μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯
化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到4.60mg (理论值的42%)化
合物4-{[(1R)-2-({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)-1-羧基乙基]氨基}-4-氧代丁酸/三氟乙
酸(1:1)。
[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}[({(2R)-2-羧基-2-[(3-羧
基丙酰基)氨基]乙基}硫基)乙酰基]氨基)丙基]-L-丙氨酰胺
将12.2mg (14μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-
N-(4-叔丁氧基-4-氧代丁酰基)-L-半胱氨酸(中间体C77)溶解于2.0ml三氟乙醇中，并添加
11.4mg (83.8μmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。向该反应混合物添加
24.5mg (83.8μmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。纯
化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到4.60mg (理论值的42%)化
合物4-{[(1R)-2-({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)-1-羧基乙基]氨基}-4-氧代丁酸/三氟乙
酸(1:1)。
[0830] LC-MS (方法1): Rt = 0.88 min; MS (ESIpos): m/z = 673 (M+H)+。
[0831] 将10.0mg (12.7μmol) 4-{[(1R)-2-({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)-1-羧基乙基]氨
基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)和7.41mg (12.7μmol) N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-
吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(中间体L88)溶解于
1.5ml二甲基甲酰胺中，并添加4.4μl (25μmol) N,N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温
下搅拌2小时。向该反应混合物添加2.0μl (35μmol)乙酸，且直接通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂
并在高真空下干燥残余物。这得到5.20mg (理论值的39%)标题化合物。
基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)和7.41mg (12.7μmol) N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-
吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(中间体L88)溶解于
1.5ml二甲基甲酰胺中，并添加4.4μl (25μmol) N,N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温
下搅拌2小时。向该反应混合物添加2.0μl (35μmol)乙酸，且直接通过制备型RP-HPLC(柱：
Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水/0.1% TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂
并在高真空下干燥残余物。这得到5.20mg (理论值的39%)标题化合物。
[0832] LC-MS (方法1): Rt = 1.11 min; MS (ESIpos): m/z = 1036 (M+H)+。
[0833] 中间体F280三氟乙酸/N-[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)苯甲酰胺(1:1)
标题化合物从中间体C64通过如下来制备：与市售1-(3-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)
氧基]羰基}苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮偶联且随后用氯化锌脱保护。
2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-
1H-吡咯-1-基)苯甲酰胺(1:1)
标题化合物从中间体C64通过如下来制备：与市售1-(3-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)
氧基]羰基}苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮偶联且随后用氯化锌脱保护。
[0834] LC-MS (方法1): Rt = 0.88 min; MS (ESIpos): m/z = 755 (M+H)+。
[0835] 中间体F281N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[N-(溴乙酰基)-β-丙氨酰基]氨基}-D-丙氨酸/三氟
乙酸(1:1)
首先，改性的氨基酸基本单元N-(溴乙酰基)-β-丙氨酸和3-氨基-N-(叔丁氧基羰基)-
D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯通过肽化学的经典方法制备。然后这些在HATU和吗啉存
在的情况下相互偶联。然后使用在二氯甲烷中的10%三氟乙酸移除叔丁氧基羰基保护基，得
到中间体3-{[N-(溴乙酰基)-β-丙氨酰基]氨基}-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[N-(溴乙酰基)-β-丙氨酰基]氨基}-D-丙氨酸/三氟
乙酸(1:1)
首先，改性的氨基酸基本单元N-(溴乙酰基)-β-丙氨酸和3-氨基-N-(叔丁氧基羰基)-
D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯通过肽化学的经典方法制备。然后这些在HATU和吗啉存
在的情况下相互偶联。然后使用在二氯甲烷中的10%三氟乙酸移除叔丁氧基羰基保护基，得
到中间体3-{[N-(溴乙酰基)-β-丙氨酰基]氨基}-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯。
[0836] 最终，标题化合物通过如下来制备：在HATU和4-甲基吗啉存在的情况下将该中间体与中间体C58偶联，随后用氯化锌脱保护。
[0837] LC-MS (方法1): Rt = 0.87 min; MS (ESIpos): m/z = 791和793 (M+H)+。
[0838] 中间体F282三氟乙酸/(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-(3-{[N-(溴乙酰基)甘氨酰基]氨基}丙基)丁酰胺(1:
1)
首先，中间体三氟乙酸/N-(3-氨基丙基)-N2-(溴乙酰基)甘氨酰胺(1:1)从甘氨酸叔丁
酯和溴乙酸酐通过肽化学的经典方法制备。
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-(3-{[N-(溴乙酰基)甘氨酰基]氨基}丙基)丁酰胺(1:
1)
首先，中间体三氟乙酸/N-(3-氨基丙基)-N2-(溴乙酰基)甘氨酰胺(1:1)从甘氨酸叔丁
酯和溴乙酸酐通过肽化学的经典方法制备。
[0839] 最终，标题化合物通过如下来制备：将该中间体与中间体C58在HATU和4-甲基吗啉存在的情况下偶联，随后用氯化锌脱保护。
[0840] LC-MS (方法1): Rt = 0.83 min; MS (ESIpos): m/z = 747和749 (M+H)+。
[0841] 中间体F283N-[(2R)-2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
2
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)-2-羧基乙基]-N -(溴乙酰基)-L-α-
天冬酰胺/三氟乙酸(1:1)
首先，改性的氨基酸基本单元(2S)-2-[(溴乙酰基)氨基]-4-氧代-4-[2-(三甲基甲硅
烷基)乙氧基]丁酸从(2S)-2-氨基-4-氧代-4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]丁酸和溴乙酸
酐制备且氨基酸基本单元3-氨基-N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙基
酯从市售3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酸/N-环己基环己胺(1:
1)制备。两种基本单元在HATU和吗啉存在的情况下相互偶联且然后使用在二氯甲烷中的5%
三氟乙酸移除叔丁氧基羰基保护基，但保持甲硅烷基乙酯保护基，因此得到中间体三氟乙
酸/N-{(2R)-2-氨基-3-氧代-3-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]丙基}-N2-(溴乙酰基)-L-α-
天冬酰胺2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)。
2
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)-2-羧基乙基]-N -(溴乙酰基)-L-α-
天冬酰胺/三氟乙酸(1:1)
首先，改性的氨基酸基本单元(2S)-2-[(溴乙酰基)氨基]-4-氧代-4-[2-(三甲基甲硅
烷基)乙氧基]丁酸从(2S)-2-氨基-4-氧代-4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]丁酸和溴乙酸
酐制备且氨基酸基本单元3-氨基-N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙基
酯从市售3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酸/N-环己基环己胺(1:
1)制备。两种基本单元在HATU和吗啉存在的情况下相互偶联且然后使用在二氯甲烷中的5%
三氟乙酸移除叔丁氧基羰基保护基，但保持甲硅烷基乙酯保护基，因此得到中间体三氟乙
酸/N-{(2R)-2-氨基-3-氧代-3-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]丙基}-N2-(溴乙酰基)-L-α-
天冬酰胺2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)。
[0842] 最终，标题化合物通过如下来制备：在HATU和4-甲基吗啉存在的情况下将该中间体与中间体C58偶联，随后用氯化锌脱保护。
[0843] LC-MS (方法1): Rt = 0.84 min; MS (ESIpos): m/z = 835和837 (M+H)+。
[0844] 中间体F284N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,18-
二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十八烷-18-基]氨基}-D-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
首先，在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将中间体L80与市售(2,5-二氧代-2,
5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸偶联，且然后使用二氯甲烷中的16%三氟乙酸移除叔丁氧基羰
基保护基，但保持甲硅烷基乙酯保护基。
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2,18-
二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十八烷-18-基]氨基}-D-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
首先，在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将中间体L80与市售(2,5-二氧代-2,
5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸偶联，且然后使用二氯甲烷中的16%三氟乙酸移除叔丁氧基羰
基保护基，但保持甲硅烷基乙酯保护基。
[0845] 最终，标题化合物通过如下来制备：在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将该中间体与中间体C58偶联，随后用氯化锌脱保护。
[0846] LC-MS (方法12): Rt = 1.46 min; MS (ESIpos): m/z = 984.45 (M+H)+。
[0847] 中间体F285N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-[(18-溴-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-16-氮杂十八
烷-1-酰基)氨基]-D-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
首先，将中间体L80与市售溴乙酸酐偶联，且然后使用二氯甲烷中的20%三氟乙酸移除
叔丁氧基羰基保护基，但保持甲硅烷基乙酯保护基。
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-[(18-溴-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-16-氮杂十八
烷-1-酰基)氨基]-D-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
首先，将中间体L80与市售溴乙酸酐偶联，且然后使用二氯甲烷中的20%三氟乙酸移除
叔丁氧基羰基保护基，但保持甲硅烷基乙酯保护基。
[0848] 最终，标题化合物通过如下来制备：在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将该中间体与中间体C58偶联，随后用氯化锌脱保护。
[0849] LC-MS (方法1): Rt = 0.85 min; MS (ESIpos): m/z = 967和969 (M+H)+。
[0850] 中间体F2861-[(N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰
基]氨基}-D-丙氨酰基)氨基]-3,6,9,12-四氧杂十四烷-15-酸/三氟乙酸(1:1)
首先，在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将中间体L91与(2,5-二氧代-2,5-二
氢-1H-吡咯-1-基)乙酸偶联，且然后使用DCM中的12.5%TFA移除Boc保护基。在HATU和N,N-
二异丙基乙胺存在的情况下将所得中间体与中间体C58偶联且然后通过用氯化锌脱保护而
转化为标题化合物。
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰
基]氨基}-D-丙氨酰基)氨基]-3,6,9,12-四氧杂十四烷-15-酸/三氟乙酸(1:1)
首先，在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将中间体L91与(2,5-二氧代-2,5-二
氢-1H-吡咯-1-基)乙酸偶联，且然后使用DCM中的12.5%TFA移除Boc保护基。在HATU和N,N-
二异丙基乙胺存在的情况下将所得中间体与中间体C58偶联且然后通过用氯化锌脱保护而
转化为标题化合物。
[0851] LC-MS (方法1): Rt = 0.84 min; MS (ESIpos): m/z = 984 (M+H)+。
[0852] 中间体F2871-[(N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}(乙醇酰)氨基]丁酰}-3-[(溴乙酰)氨基]-D-丙氨酰)氨基]-3,6,9,12-四氧杂
十五烷-15-酸/三氟乙酸(1:1)
首先，在DMC中将中间体L91用溴乙酸酐酰化，然后使用在DCM中的10%的TFA移除Boc保
护基。以这种方式所得的中间体与中间体C58在HATU和吗啉存在下偶联，然后通过用氯化锌
脱保护而转化成标题化合物。
二甲基丙基}(乙醇酰)氨基]丁酰}-3-[(溴乙酰)氨基]-D-丙氨酰)氨基]-3,6,9,12-四氧杂
十五烷-15-酸/三氟乙酸(1:1)
首先，在DMC中将中间体L91用溴乙酸酐酰化，然后使用在DCM中的10%的TFA移除Boc保
护基。以这种方式所得的中间体与中间体C58在HATU和吗啉存在下偶联，然后通过用氯化锌
脱保护而转化成标题化合物。
[0853] LC-MS (方法1): Rt = 0.87 min; MS (ESIpos): m/z = 967和969 (M+H)+。
[0854] 中间体F288N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-({N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰
基]-L-丝氨酰基}氨基)-D-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下35mg (39μmol)中间体C74与N-[(2,5-二氧
代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-丝氨酸(其事先从O-叔丁基-L-丝氨酸叔丁酯和
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸制备)偶联。用氯化锌脱保护和通过HPLC纯化
后得到14mg (理论值的38%)标题化合物。
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-({N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰
基]-L-丝氨酰基}氨基)-D-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下35mg (39μmol)中间体C74与N-[(2,5-二氧
代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-丝氨酸(其事先从O-叔丁基-L-丝氨酸叔丁酯和
(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸制备)偶联。用氯化锌脱保护和通过HPLC纯化
后得到14mg (理论值的38%)标题化合物。
[0855] LC-MS (方法12): Rt = 1.43 min; MS (ESIpos): m/z = 824.34 (M+H)+。
[0856] 中间体F289N2-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二
甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-N6-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰
基]-D-赖氨酸/三氟乙酸盐(1:1)
首先，三氟乙酸/N6-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-D-赖氨酸2-(三
甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)通过肽化学的经典方法从N6-[(苄基氧基)羰基]-N2-(叔丁氧基羰
基)-D-赖氨酸制备。
甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-N6-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰
基]-D-赖氨酸/三氟乙酸盐(1:1)
首先，三氟乙酸/N6-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-D-赖氨酸2-(三
甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)通过肽化学的经典方法从N6-[(苄基氧基)羰基]-N2-(叔丁氧基羰
基)-D-赖氨酸制备。
[0857] 在HATU和4-甲基吗啉存在的情况下将12.5mg (25μmol)该中间体与15mg (23μmol)中间体C58偶联。用氯化锌脱保护和通过HPLC纯化后得到14mg (理论值的53%)标题化
合物。
合物。
[0858] LC-MS (方法1): Rt = 0.83 min; MS (ESIpos): m/z = 779 (M+H)+。
[0859] 中间体F290N2-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二
甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-N6-(溴乙酰基)-D-赖氨酸/三氟乙酸(1:1)
首先，三氟乙酸/N6-(溴乙酰基)-D-赖氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)通过肽化学
6 2
的经典方法从N-[(苄基氧基)羰基]-N-(叔丁氧基羰基)-D-赖氨酸制备。
甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-N6-(溴乙酰基)-D-赖氨酸/三氟乙酸(1:1)
首先，三氟乙酸/N6-(溴乙酰基)-D-赖氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1:1)通过肽化学
6 2
的经典方法从N-[(苄基氧基)羰基]-N-(叔丁氧基羰基)-D-赖氨酸制备。
[0860] 在HATU和4-甲基吗啉存在的情况下将12mg (25μmol)该中间体与15mg (23μmol)中间体C58偶联。用氯化锌脱保护且通过HPLC纯化后得到7mg (理论值的36%)标题化合物。
[0861] LC-MS (方法1): Rt = 0.86 min; MS (ESIpos): m/z = 762和764 (M+H)+。
[0862] 中间体F291N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-N-{3-[{(1R)-1-[1-
苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丙基}-L-丙
氨酰胺
标题化合物从实施例M9首先通过在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与N-[(苄
基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸偶联来制备。在下一步骤中，Z保护基通过如下来移
除：在10%活性炭载钯上在室温下在氢气标准压力下氢化1小时，且然后通过在HATU和N,N-
二异丙基乙胺存在的情况下与(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸偶联将脱保护
的中间体转化为标题化合物。
苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丙基}-L-丙
氨酰胺
标题化合物从实施例M9首先通过在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与N-[(苄
基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酸偶联来制备。在下一步骤中，Z保护基通过如下来移
除：在10%活性炭载钯上在室温下在氢气标准压力下氢化1小时，且然后通过在HATU和N,N-
二异丙基乙胺存在的情况下与(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸偶联将脱保护
的中间体转化为标题化合物。
[0863] LC-MS (方法1): Rt = 1.21 min; MS (ESIpos): m/z = 777 (M+H)+。
[0864] 中间体 F292(2S)-2-氨基-4-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}{5-[(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰]氨基}乙基)氨基]-5-氧代戊
酰}氨基)丁酸/三氟乙酸(1:1)
5 mg。
丙基}{5-[(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰]氨基}乙基)氨基]-5-氧代戊
酰}氨基)丁酸/三氟乙酸(1:1)
5 mg。
[0865] 中间体F293N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)苯甲酰基]
氨基}-D-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
将35mg (39μmol)中间体C74溶解于4ml DMF中，并在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下
与13.5mg (43μmol)市售1-(3-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}苯基)-1H-吡咯-2,
5-二酮偶联。用氯化锌脱保护且通过HPLC纯化后得到12mg (理论值的34%)标题化合物。
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-3-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)苯甲酰基]
氨基}-D-丙氨酸/三氟乙酸(1:1)
将35mg (39μmol)中间体C74溶解于4ml DMF中，并在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下
与13.5mg (43μmol)市售1-(3-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}苯基)-1H-吡咯-2,
5-二酮偶联。用氯化锌脱保护且通过HPLC纯化后得到12mg (理论值的34%)标题化合物。
[0866] LC-MS (方法12): Rt = 0.93 min; MS (ESIpos): m/z = 799 (M+H)+。
[0867] 中间体F294N-{5-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-5-氧代戊酰基}-L-缬氨酰基-N-{(1S)-3-
[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨
基]-1-羧基丙基}-L-丙氨酰胺
将溶解于12ml甲醇中的41mg (0.05mmol)中间体C76在10mg 10%活性炭载钯上在室温
下在氢气标准压力下氢化1小时。然后滤出催化剂并在真空中移除溶剂。这得到32mg (理论
值的92%)脱保护的中间体。
[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨
基]-1-羧基丙基}-L-丙氨酰胺
将溶解于12ml甲醇中的41mg (0.05mmol)中间体C76在10mg 10%活性炭载钯上在室温
下在氢气标准压力下氢化1小时。然后滤出催化剂并在真空中移除溶剂。这得到32mg (理论
值的92%)脱保护的中间体。
[0868] 将15mg (0.022mmol)该中间体溶解于DMF中，并添加13mg (0.039mmol) 1,1’-[(1,5-二氧代戊-1,5-二基)双(氧基)]二吡咯烷-2,5-二酮和7μl N,N-二异丙基乙胺。在室
温下搅拌1小时后，浓缩该混合物且残余物通过HPLC纯化。这得到9mg (理论值的45%)标题
化合物。
温下搅拌1小时后，浓缩该混合物且残余物通过HPLC纯化。这得到9mg (理论值的45%)标题
化合物。
[0869] LC-MS (方法1): Rt = 1.08 min; MS (ESIpos): m/z = 895 (M+H)+。
[0870] 中间体F295N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-N-{(1S)-3-[{(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-1-羧
基丙基}-L-丙氨酰胺
将溶解于12ml甲醇中的41mg (0.05mmol)中间体C76在10mg 10%活性炭载钯上在室温
下在氢气标准压力下氢化1小时。然后滤出催化剂并在真空中移除溶剂。这得到32mg (理论
值的92%)脱保护的中间体。
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-1-羧
基丙基}-L-丙氨酰胺
将溶解于12ml甲醇中的41mg (0.05mmol)中间体C76在10mg 10%活性炭载钯上在室温
下在氢气标准压力下氢化1小时。然后滤出催化剂并在真空中移除溶剂。这得到32mg (理论
值的92%)脱保护的中间体。
[0871] 将15mg (0.022mmol)该中间体溶解于4ml DMF中，并添加10mg (0.039mmol) 1-{2-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-2-氧代乙基}-1H-吡咯-2,5-二酮和7μl N,N-二异丙
基乙胺。在室温下搅拌2小时后，浓缩该混合物且残余物通过HPLC纯化。这得到10mg (理论
值的56%)标题化合物。
基乙胺。在室温下搅拌2小时后，浓缩该混合物且残余物通过HPLC纯化。这得到10mg (理论
值的56%)标题化合物。
[0872] LC-MS (方法1): Rt = 1.08 min; MS (ESIpos): m/z = 821 (M+H)+。
[0873] 中间体F296三氟乙酸/(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-{2-[(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙
酰基]氨基}乙基)磺酰基]乙基}丁酰胺(1:1)
标题化合物从中间体L81通过在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与中间体C58
偶联来制备。在下一步骤中，Z保护基通过在10%活性炭载钯上在DCM/甲醇1:1中在室温下在
氢气标准压力下氢化30分钟来移除。然后脱保护的中间体通过在HATU和N,N-二异丙基乙胺
存在的情况下与(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸偶联且最终通过用氯化锌脱
保护来转化为标题化合物。
2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-{2-[(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙
酰基]氨基}乙基)磺酰基]乙基}丁酰胺(1:1)
标题化合物从中间体L81通过在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下与中间体C58
偶联来制备。在下一步骤中，Z保护基通过在10%活性炭载钯上在DCM/甲醇1:1中在室温下在
氢气标准压力下氢化30分钟来移除。然后脱保护的中间体通过在HATU和N,N-二异丙基乙胺
存在的情况下与(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸偶联且最终通过用氯化锌脱
保护来转化为标题化合物。
[0874] LC-MS (方法1): Rt = 0.83 min; MS (ESIpos): m/z = 785 (M+H)+。
[0875] 中间体F297S-{2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(吡咯
烷-3-基甲基)氨基]-2-氧代乙基}-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-
L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(异构体1)
在氩气下，将15mg (0.11mmol)氯化锌添加至36mg (0.03mmol，68%纯) S-[2-({(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡
咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰
基]-L-半胱氨酸(中间体C92)于0.74ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液，并将反应混合物在50℃
下搅拌7小时。然后添加32mg (0.11mmol) EDTA并将混合物搅拌15分钟。将乙酸乙酯添加至
反应混合物且有机相用水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发
溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到6.4mg (理论值的25%)标题化合物。
烷-3-基甲基)氨基]-2-氧代乙基}-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-
L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(异构体1)
在氩气下，将15mg (0.11mmol)氯化锌添加至36mg (0.03mmol，68%纯) S-[2-({(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡
咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰
基]-L-半胱氨酸(中间体C92)于0.74ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液，并将反应混合物在50℃
下搅拌7小时。然后添加32mg (0.11mmol) EDTA并将混合物搅拌15分钟。将乙酸乙酯添加至
反应混合物且有机相用水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发
溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到6.4mg (理论值的25%)标题化合物。
[0876] LC-MS (方法1): Rt = 0.95 min; MS (ESIpos): m/z = 792 (M+H-CF3CO2H)+。
[0877] 中间体F298S-{2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(吡咯
烷-3-基甲基)氨基]-2-氧代乙基}-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-
L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(异构体2)
在氩气下，将19mg (0.14mmol)氯化锌添加至45mg (0.04mmol，71%纯) S-[2-({(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡
咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰
基]-L-半胱氨酸(中间体C96)于0.94ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液，并将反应混合物在50℃
下搅拌3小时。然后添加42mg (0.14mmol) EDTA并将混合物搅拌15分钟。将乙酸乙酯添加至
反应混合物且有机相用水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发
溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到5.7mg (理论值的18%)标题化合物。
烷-3-基甲基)氨基]-2-氧代乙基}-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-
L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(异构体2)
在氩气下，将19mg (0.14mmol)氯化锌添加至45mg (0.04mmol，71%纯) S-[2-({(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[1-(叔丁氧基羰基)吡
咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰
基]-L-半胱氨酸(中间体C96)于0.94ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液，并将反应混合物在50℃
下搅拌3小时。然后添加42mg (0.14mmol) EDTA并将混合物搅拌15分钟。将乙酸乙酯添加至
反应混合物且有机相用水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发
溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到5.7mg (理论值的18%)标题化合物。
[0878] LC-MS (方法1): Rt = 0.96 min; MS (ESIpos): m/z = 791 (M+H-CF3CO2H)+。
[0879] 中间体F299S-(2-{(3-氨基丙基)[(R)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲
基]氨基}-2-氧代乙基)-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-半胱氨
酸/三氟乙酸(1:1)
将76.8mg (0.57mmol)氯化锌添加至88.0mg (0.09mmol) S-{11-[(R)-[1-苄基-4-(2,
5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基]-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二
氮杂-2-硅杂十三烷-13-基}-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-半
胱氨酸(中间体C85)于1.88ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液，并将反应混合物在50℃下搅拌3
小时。然后添加164.6mg (0.57mmol) EDTA并将混合物搅拌15分钟。将乙酸乙酯添加至反应
混合物且有机相用水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸钠干燥并在真空中蒸发溶
剂。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到31mg (理论值的35%)标题化合物。
基]氨基}-2-氧代乙基)-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-半胱氨
酸/三氟乙酸(1:1)
将76.8mg (0.57mmol)氯化锌添加至88.0mg (0.09mmol) S-{11-[(R)-[1-苄基-4-(2,
5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基]-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二
氮杂-2-硅杂十三烷-13-基}-N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-半
胱氨酸(中间体C85)于1.88ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液，并将反应混合物在50℃下搅拌3
小时。然后添加164.6mg (0.57mmol) EDTA并将混合物搅拌15分钟。将乙酸乙酯添加至反应
混合物且有机相用水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸钠干燥并在真空中蒸发溶
剂。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到31mg (理论值的35%)标题化合物。
[0880] LC-MS (方法12): Rt = 1.82 min; MS (ESIpos): m/z = 792 (M+H)+。
[0881] 中间体F300(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-(2-{[(2R)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]
氨基}乙基)丁酰胺
在氩气下，将11mg (0.08mmol)氯化锌添加至7mg (0.08mmol) {(2S)-4-[{(1R)-1-[1-
苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-1-[(2-
{[(2R)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙基)氨基]-1-氧代丁-2-
基}氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(中间体100)于0.2ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液，并
将反应混合物在50℃下搅拌8小时。然后添加14mg (0.05mmol)EDTA并将混合物搅拌15分
钟。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸
镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到1.6mg (理论值的27%)标
题化合物。
丙基}(乙醇酰基)氨基]-N-(2-{[(2R)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]
氨基}乙基)丁酰胺
在氩气下，将11mg (0.08mmol)氯化锌添加至7mg (0.08mmol) {(2S)-4-[{(1R)-1-[1-
苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]-1-[(2-
{[(2R)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙基)氨基]-1-氧代丁-2-
基}氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(中间体100)于0.2ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液，并
将反应混合物在50℃下搅拌8小时。然后添加14mg (0.05mmol)EDTA并将混合物搅拌15分
钟。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机相用水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸
镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到1.6mg (理论值的27%)标
题化合物。
[0882] LC-MS (方法1): Rt = 0.88 min; MS (ESIpos): m/z = 707 (M+H-CF3CO2H)+。
[0883] 中间体 F3013-[(2-{(3-氨基丙基)[(R)-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲
基]氨基}-2-氧代乙基)硫基]-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰]氨基}
乙基)丙酰胺/三氟乙酸(1:1) (异构体1)
37.32 mg (0.27 mmol)氯化锌加入41.40 mg (0.04 mmol) {13-[(R)-[1-苄基-4-(2,
5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基]-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-
2,7,12-三氧代-10-硫杂-3,6,13-三氮杂十六烷-16-基}氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙
酯(中间体 C88)在0.92 ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液中，并将反应混合物在50°C下搅拌3
h。然后加入80.02 mg (0.27 mmol) EDTA并将该混合物搅拌15分钟。将乙酸乙酯加入反应
混合物中，并用水和饱和NaCl溶液反复洗涤有机相。经硫酸钠干燥该有机相，在真空中蒸发
溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。得到9.6 mg (理论值的24%)标题化合物。
基]氨基}-2-氧代乙基)硫基]-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰]氨基}
乙基)丙酰胺/三氟乙酸(1:1) (异构体1)
37.32 mg (0.27 mmol)氯化锌加入41.40 mg (0.04 mmol) {13-[(R)-[1-苄基-4-(2,
5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基](环己基)甲基]-1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-
2,7,12-三氧代-10-硫杂-3,6,13-三氮杂十六烷-16-基}氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙
酯(中间体 C88)在0.92 ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液中，并将反应混合物在50°C下搅拌3
h。然后加入80.02 mg (0.27 mmol) EDTA并将该混合物搅拌15分钟。将乙酸乙酯加入反应
混合物中，并用水和饱和NaCl溶液反复洗涤有机相。经硫酸钠干燥该有机相，在真空中蒸发
溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。得到9.6 mg (理论值的24%)标题化合物。
[0884] LC-MS (方法12): Rt = 1.58 min; MS (ESIpos): m/z = 763 (M+H)+。
[0885] 中间体F302S-{2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(吡咯
烷-3-基甲基)氨基]-2-氧代乙基}-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-
半胱氨酸/三氟乙酸盐(1:1)(异构体1)
在氩气下，将31.7mg (0.23mmol)氯化锌添加至56.9mg (58.2mmol，85%纯) S-[2-
({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[(1-(叔丁氧基
羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
乙酰基]-L-半胱氨酸(中间体C99)于1.4ml 2,2,2-三氟乙醇中的混合物，并将反应混合物
在50℃下搅拌3小时。然后添加68.0mg (0.23mmol) EDTA并将混合物搅拌15分钟。将乙酸乙
酯添加至反应混合物且有机相用水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真
空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到7mg (理论值的13%)标题化合物。
烷-3-基甲基)氨基]-2-氧代乙基}-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-
半胱氨酸/三氟乙酸盐(1:1)(异构体1)
在氩气下，将31.7mg (0.23mmol)氯化锌添加至56.9mg (58.2mmol，85%纯) S-[2-
({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}{[(1-(叔丁氧基
羰基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]-N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)
乙酰基]-L-半胱氨酸(中间体C99)于1.4ml 2,2,2-三氟乙醇中的混合物，并将反应混合物
在50℃下搅拌3小时。然后添加68.0mg (0.23mmol) EDTA并将混合物搅拌15分钟。将乙酸乙
酯添加至反应混合物且有机相用水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真
空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。这得到7mg (理论值的13%)标题化合物。
[0886] LC-MS (方法1): Rt = 0.91 min; MS (ESIpos): m/z = 736 (M+H-CF3CO2H)+。
[0887] 中间体 F3033-({2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(吡
咯烷-3-基甲基)氨基]-2-氧代乙基}硫基)-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-
基)乙酰]氨基}乙基)丙酰胺/三氟乙酸(1:1) (异构体2)
16.7 mg (0.12 mmol)氯化锌加入26.4 mg (0.03 mmol) 3-[2-{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-14-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-
1-基)-3,8,13-三氧代-5-硫杂-2,9,12-三氮杂十四烷-1-基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间
体 C103)于0.80 ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液中，并将反应混合物在50°C下搅拌8 h。然后
加入35.76 mg (0.12 mmol) EDTA并将该混合物搅拌15分钟。将乙酸乙酯加入反应混合物
中，并用水和饱和NaCl溶液反复洗涤有机相。经硫酸钠干燥该有机相，在真空中蒸发溶剂。
残余物通过制备型HPLC纯化。得到3.8 mg (理论值的14%)标题化合物。
咯烷-3-基甲基)氨基]-2-氧代乙基}硫基)-N-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-
基)乙酰]氨基}乙基)丙酰胺/三氟乙酸(1:1) (异构体2)
16.7 mg (0.12 mmol)氯化锌加入26.4 mg (0.03 mmol) 3-[2-{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-14-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-
1-基)-3,8,13-三氧代-5-硫杂-2,9,12-三氮杂十四烷-1-基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间
体 C103)于0.80 ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液中，并将反应混合物在50°C下搅拌8 h。然后
加入35.76 mg (0.12 mmol) EDTA并将该混合物搅拌15分钟。将乙酸乙酯加入反应混合物
中，并用水和饱和NaCl溶液反复洗涤有机相。经硫酸钠干燥该有机相，在真空中蒸发溶剂。
残余物通过制备型HPLC纯化。得到3.8 mg (理论值的14%)标题化合物。
[0888] LC-MS (方法1): Rt = 2.98 min; MS (ESIpos): m/z = 763 (M+H-CF3CO2H)+。
[0889] 中间体F304N-(2-{[3-({2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙
基}(吡咯烷-3-基甲基)氨基]-2-氧代乙基}硫基)丙酰基]氨基}乙基)-6-(2,5-二氧代-2,
5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺/三氟乙酸(1:1)(异构体2)
将13.2mg (0.10mmol)氯化锌添加至22.3mg (0.02mmol) 3-[2-{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-18-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-
1-基)-3,8,13-三氧代-5-硫杂-2,9,12-三氮杂十八烷-1-基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间
体105)于0.64ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液，并将反应混合物在50℃下搅拌8小时。然后添
加28.36mg (0.10mmol)EDTA并将混合物搅拌15分钟。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机
相用水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物通过
制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。
这得到5mg (理论值的23%)标题化合物。
基}(吡咯烷-3-基甲基)氨基]-2-氧代乙基}硫基)丙酰基]氨基}乙基)-6-(2,5-二氧代-2,
5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺/三氟乙酸(1:1)(异构体2)
将13.2mg (0.10mmol)氯化锌添加至22.3mg (0.02mmol) 3-[2-{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-18-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-
1-基)-3,8,13-三氧代-5-硫杂-2,9,12-三氮杂十八烷-1-基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间
体105)于0.64ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液，并将反应混合物在50℃下搅拌8小时。然后添
加28.36mg (0.10mmol)EDTA并将混合物搅拌15分钟。将乙酸乙酯添加至反应混合物且有机
相用水和饱和NaCl溶液重复洗涤。有机相经硫酸镁干燥并在真空中蒸发溶剂。残余物通过
制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 250x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)纯化。
这得到5mg (理论值的23%)标题化合物。
[0890] LC-MS (方法5): Rt 3.05 min; MS (ESIpos): m/z = 819 (M+H-CF3CO2H)+。
[0891] 中间体F305N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-22-(2,5-
二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-6,17-二氧代-N-(吡咯烷-3-基甲基)-10,13-二氧杂-3-
硫杂-7,16-二氮杂二十二烷-1-酰胺/三氟乙酸(1:1)(异构体2)
13.42 mg (0.10 mmol)氯化锌加入24.80 mg (0.02 mmol) 3-[2-{(1R)-1-[1-苄基-
4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-24-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡
咯-1-基)-3,8,19-三氧代-12,15-二氧杂-5-硫杂-2,9,18-三氮杂二十四烷-1-基]吡咯烷-
1-甲酸叔丁酯(中间体C107)于0.65 ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液中，并将反应混合物在
50°C下搅拌8 h。然后加入28.78 mg (0.10 mmol) EDTA并将该混合物搅拌15分钟。将乙酸
乙酯加入反应混合物中，并用水和饱和NaCl溶液反复洗涤有机相。经硫酸镁干燥该有机相，
在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。LS-MS (方法5): Rt = 3.11 min; MS
(ESIpos): m/z = 907 (M+H-CF3CO2H)+。
二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-6,17-二氧代-N-(吡咯烷-3-基甲基)-10,13-二氧杂-3-
硫杂-7,16-二氮杂二十二烷-1-酰胺/三氟乙酸(1:1)(异构体2)
13.42 mg (0.10 mmol)氯化锌加入24.80 mg (0.02 mmol) 3-[2-{(1R)-1-[1-苄基-
4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-24-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡
咯-1-基)-3,8,19-三氧代-12,15-二氧杂-5-硫杂-2,9,18-三氮杂二十四烷-1-基]吡咯烷-
1-甲酸叔丁酯(中间体C107)于0.65 ml 2,2,2-三氟乙醇中的溶液中，并将反应混合物在
50°C下搅拌8 h。然后加入28.78 mg (0.10 mmol) EDTA并将该混合物搅拌15分钟。将乙酸
乙酯加入反应混合物中，并用水和饱和NaCl溶液反复洗涤有机相。经硫酸镁干燥该有机相，
在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。LS-MS (方法5): Rt = 3.11 min; MS
(ESIpos): m/z = 907 (M+H-CF3CO2H)+。
[0892] B：抗体活性物质缀合物(ADC)的制备B-1. 生成抗B7H3抗体的一般方法
US 6,965,018描述了由杂交瘤PTA-4058分泌的鼠抗B7H3抗体。我们已通过标准方法测
定了这一抗体的氨基酸序列(精密抗体)并将Fv部分与人IgG1的Ch1、Ch2和Ch3区融合。为此
目的，将编码各个范围的DNA序列插入哺乳动物IgG表达载体中，然后如B-2下描述那样表
达。结果是在此被称为TPP5706的来自鼠PTA-4058的Fv部分与人IgG1的Ch1、Ch2和Ch3区的
嵌合体。
US 6,965,018描述了由杂交瘤PTA-4058分泌的鼠抗B7H3抗体。我们已通过标准方法测
定了这一抗体的氨基酸序列(精密抗体)并将Fv部分与人IgG1的Ch1、Ch2和Ch3区融合。为此
目的，将编码各个范围的DNA序列插入哺乳动物IgG表达载体中，然后如B-2下描述那样表
达。结果是在此被称为TPP5706的来自鼠PTA-4058的Fv部分与人IgG1的Ch1、Ch2和Ch3区的
嵌合体。
[0893] B-2. 在哺乳动物细胞中表达抗B7H3抗体的一般方法如Tom等人，Methods Express: Expression Systems中的第12章，Micheal R. Dyson
和Yves Durocher编辑, Scion Publishing Ltd, 2007(参见AK-实施例1)中所述在哺乳动
物细胞的短期培养物中产生抗体，例如TPP-3803和TPP-5706。
和Yves Durocher编辑, Scion Publishing Ltd, 2007(参见AK-实施例1)中所述在哺乳动
物细胞的短期培养物中产生抗体，例如TPP-3803和TPP-5706。
[0894] B-3.从细胞上清液中纯化抗体的一般方法抗体，例如TPP-3803和TPP-5706获自细胞培养上清液。该细胞上清液通过细胞离心来
澄清化。该细胞上清液然后通过在MabSelect Sure (GE Healthcare)色谱柱上的亲和色谱
法纯化。为此，该柱在DPBS pH 7.4(Sigma/Aldrich)中平衡，施加细胞上清液，该柱用约10
柱体积的DPBS pH 7.4 + 500 mM氯化钠洗涤。抗体在50 mM乙酸钠pH 3.5 + 500 mM氯化钠
中洗脱，然后通过在Superdex 200柱(GE Healthcare)上在DPBS pH 7.4中的凝胶渗透色谱
法进一步纯化。
澄清化。该细胞上清液然后通过在MabSelect Sure (GE Healthcare)色谱柱上的亲和色谱
法纯化。为此，该柱在DPBS pH 7.4(Sigma/Aldrich)中平衡，施加细胞上清液，该柱用约10
柱体积的DPBS pH 7.4 + 500 mM氯化钠洗涤。抗体在50 mM乙酸钠pH 3.5 + 500 mM氯化钠
中洗脱，然后通过在Superdex 200柱(GE Healthcare)上在DPBS pH 7.4中的凝胶渗透色谱
法进一步纯化。
[0895] B-4. 偶联至半胱氨酸侧链的一般方法下列抗体用于该偶联反应：
抗B7H3 AK1A (TPP-3803)
抗B7H3 AK1B (TPP-5706)
偶联反应通常在氩气下进行。
抗B7H3 AK1A (TPP-3803)
抗B7H3 AK1B (TPP-5706)
偶联反应通常在氩气下进行。
[0896] 将溶解在PBS缓冲液中的2至5当量的三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)添加至在5 mg/ml至20 mg/ml浓度范围内，优选约10 mg/ml至15 mg/ml范围内的相应抗体在PBS缓冲液
中的溶液中，并在室温下搅拌1小时。为此目的，所用的各种抗体的溶液可以以实施例中所
示的浓度使用，或还可以任选用PBS缓冲液稀释至大约所示起始浓度的一半，以达到优选的
浓度范围。随后，根据所需载量，添加作为在DMSO中的溶液的2至12当量，优选约5-10当量的
待偶联的马来酰亚胺前体化合物或卤化物前体化合物。在此，DMSO的量不应超过总体积的
10%。该混合物在马来酰亚胺前体的情况下在室温下搅拌60-240分钟，在卤化物前体的情况
下在室温下搅拌8至24小时，然后施加至PBS平衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE
Healthcare)上并用PBS缓冲液洗脱。通常，除非另行指明，在PBS缓冲液中的5 mg相应抗体
用于还原和随后偶联。在PD10柱上的纯化后，因此在每种情况下提供相应ADC在3.5 ml PBS
缓冲液中的溶液。然后通过超离心进行浓缩并任选用PBS缓冲液再稀释该样品。如果需要，
为了更好分离出低分子量成分，在用PBS缓冲液再稀释后重复通过超滤进行浓缩。对于生物
测试，如果需要，任选通过再稀释将最终ADC样品的浓度调节至0.5-15 mg/ml的范围。对于
ADC浓度，测定在实施例中各自所示的蛋白浓度。此外，使用B-7下描述的方法测定抗体载量
(药物/mAb比)。
中的溶液中，并在室温下搅拌1小时。为此目的，所用的各种抗体的溶液可以以实施例中所
示的浓度使用，或还可以任选用PBS缓冲液稀释至大约所示起始浓度的一半，以达到优选的
浓度范围。随后，根据所需载量，添加作为在DMSO中的溶液的2至12当量，优选约5-10当量的
待偶联的马来酰亚胺前体化合物或卤化物前体化合物。在此，DMSO的量不应超过总体积的
10%。该混合物在马来酰亚胺前体的情况下在室温下搅拌60-240分钟，在卤化物前体的情况
下在室温下搅拌8至24小时，然后施加至PBS平衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE
Healthcare)上并用PBS缓冲液洗脱。通常，除非另行指明，在PBS缓冲液中的5 mg相应抗体
用于还原和随后偶联。在PD10柱上的纯化后，因此在每种情况下提供相应ADC在3.5 ml PBS
缓冲液中的溶液。然后通过超离心进行浓缩并任选用PBS缓冲液再稀释该样品。如果需要，
为了更好分离出低分子量成分，在用PBS缓冲液再稀释后重复通过超滤进行浓缩。对于生物
测试，如果需要，任选通过再稀释将最终ADC样品的浓度调节至0.5-15 mg/ml的范围。对于
ADC浓度，测定在实施例中各自所示的蛋白浓度。此外，使用B-7下描述的方法测定抗体载量
(药物/mAb比)。
[0897] 除非另外说明，通过这一方法制备实施例中所示的免疫缀合物。根据接头，实施例中所示的ADC也可以任选地在更低或更高的程度上以连接至抗体的水解开链琥珀酰胺的形
式存在。
式存在。
[0898] 特别地，通过接头亚结构连接至抗体的硫醇基团的KSP-I-ADC也可任选经由经开链琥珀酰胺连接的ADC根据方
案28通过在偶联后再缓冲和在pH 8下搅拌约20-24小时而以靶向方式制备，
#1代表与抗体的硫桥，且#2是与改性KSP抑制剂的连接点
其中接头经水解开链琥珀酰胺连接至抗体的此类ADC也可任选通过如下的示例性规程
以靶向方式制备：
在氩气下，将0.344 mg TCEP于100 µl PBS缓冲液中的溶液添加至5 ml PBS缓冲液中
的60 mg所涉抗体(c 12 mg/ml)中。将该混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加溶解于600
~
µl DMSO中的0.003 mmol马来酰亚胺前体化合物。在室温下搅拌另外1.5小时-2小时后，用
已预先调节至pH 8的1075 µl PBS缓冲液稀释该混合物。
案28通过在偶联后再缓冲和在pH 8下搅拌约20-24小时而以靶向方式制备，
#1代表与抗体的硫桥，且#2是与改性KSP抑制剂的连接点
其中接头经水解开链琥珀酰胺连接至抗体的此类ADC也可任选通过如下的示例性规程
以靶向方式制备：
在氩气下，将0.344 mg TCEP于100 µl PBS缓冲液中的溶液添加至5 ml PBS缓冲液中
的60 mg所涉抗体(c 12 mg/ml)中。将该混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加溶解于600
~
µl DMSO中的0.003 mmol马来酰亚胺前体化合物。在室温下搅拌另外1.5小时-2小时后，用
已预先调节至pH 8的1075 µl PBS缓冲液稀释该混合物。
[0899] 然后将该溶液施加至已用PBS缓冲液pH 8平衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。洗脱物用PBS缓冲液pH 8稀释至14 ml的总体积。将
该溶液在室温下在氩气下搅拌过夜。任选地，然后将该溶液再缓冲至pH 7.2。该ADC溶液通
过超离心浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释，然后任选地再次浓缩至约10 mg/ml的浓度。
该溶液在室温下在氩气下搅拌过夜。任选地，然后将该溶液再缓冲至pH 7.2。该ADC溶液通
过超离心浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释，然后任选地再次浓缩至约10 mg/ml的浓度。
[0900] 在实施例中至抗体的其它可能水解敏感的硫杂环己烷琥珀酰亚胺桥含有下列接头亚结构，其中#1代表与抗体的硫醚键且#2代表与改性KSP抑制剂的连接点：
这些接头亚结构代表与抗体的连接单元并且(除其它接头组成外)对在肿瘤细胞中形
成的代谢物的结构和概况具有显著影响。
这些接头亚结构代表与抗体的连接单元并且(除其它接头组成外)对在肿瘤细胞中形
成的代谢物的结构和概况具有显著影响。
[0901] 在所示结构式中，AK1A具有下列含义：1
AK1A = 抗B7H3 AK1A (部分还原) - S§
AK1B = 抗B7H3 AK1B (部分还原)- S§
其中
§1代表与琥珀酰亚胺基团或与任选由其产生的异构水解开链琥珀酰胺或亚烷基的键，
且
S代表部分还原的抗体的半胱氨酸残基的硫原子。
AK1A = 抗B7H3 AK1A (部分还原) - S§
AK1B = 抗B7H3 AK1B (部分还原)- S§
其中
§1代表与琥珀酰亚胺基团或与任选由其产生的异构水解开链琥珀酰胺或亚烷基的键，
且
S代表部分还原的抗体的半胱氨酸残基的硫原子。
[0902] B-5. 偶联至赖氨酸侧链的一般方法下列抗体用于该偶联反应：
抗B7H3 AK1A (TPP-3803)
抗B7H3 AK1B (TPP-5706)
该偶联反应通常在氩气下进行。
抗B7H3 AK1A (TPP-3803)
抗B7H3 AK1B (TPP-5706)
该偶联反应通常在氩气下进行。
[0903] 根据所需载量，将作为DMSO中的溶液的2至8当量的待偶联的前体化合物添加在1 mg/ml至20 mg/ml、优选约10 mg/ml浓度范围内的相应抗体于PBS缓冲液中的溶液中。在室
温下搅拌30分钟至6小时后，再次添加相同量的DMSO中的前体化合物。在此，DMSO的量不应
超过总体积的10%。在室温下搅拌另外30分钟至6小时后，将该混合物施加至用PBS平衡的PD
10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液洗脱。通常，除非另行指明，否则
PBS缓冲液中的5 mg相应抗体用于还原和随后偶联。在PD10柱上的纯化后，因此在每种情况
下提供相应ADC于3.5 ml PBS缓冲液中的溶液。然后通过超离心进行浓缩，并将样品任选地
用PBS缓冲液再稀释。如果需要，为了更好地分离出低分子量成分，在用PBS缓冲液再稀释后
重复通过超滤进行浓缩。对于生物测试，如果需要，任选地通过再稀释将最终ADC样品的浓
度调节至0.5-15 mg/ml的范围。
温下搅拌30分钟至6小时后，再次添加相同量的DMSO中的前体化合物。在此，DMSO的量不应
超过总体积的10%。在室温下搅拌另外30分钟至6小时后，将该混合物施加至用PBS平衡的PD
10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液洗脱。通常，除非另行指明，否则
PBS缓冲液中的5 mg相应抗体用于还原和随后偶联。在PD10柱上的纯化后，因此在每种情况
下提供相应ADC于3.5 ml PBS缓冲液中的溶液。然后通过超离心进行浓缩，并将样品任选地
用PBS缓冲液再稀释。如果需要，为了更好地分离出低分子量成分，在用PBS缓冲液再稀释后
重复通过超滤进行浓缩。对于生物测试，如果需要，任选地通过再稀释将最终ADC样品的浓
度调节至0.5-15 mg/ml的范围。
[0904] 对于ADC溶液，测定在实施例中所示各自的蛋白浓度。此外，使用B-7下描述的方法测定抗体载量(药物/mAb比)。
[0905] 在所示结构式中，AK2A具有下列含义：AK2A = 抗B7H3 AK1A - NH§2
2
AK2B = 抗B7H3 AK1B- NH§
其中
§2代表与羰基的键
且
NH代表该抗体的赖氨酸残基的侧链氨基。
2
AK2B = 抗B7H3 AK1B- NH§
其中
§2代表与羰基的键
且
NH代表该抗体的赖氨酸残基的侧链氨基。
[0906] B-6a. 制备封闭琥珀酰亚胺-半胱氨酸加合物的一般方法：在一个示例性实施方案中，将10 µmol上述马来酰亚胺前体化合物置于3-5 ml DMF中
并添加2.1 mg (20 µmol) L-半胱氨酸。将反应混合物在室温下搅拌2小时至24小时，然后
在真空下浓缩，然后通过制备型HPLC纯化。
并添加2.1 mg (20 µmol) L-半胱氨酸。将反应混合物在室温下搅拌2小时至24小时，然后
在真空下浓缩，然后通过制备型HPLC纯化。
[0907] B-6aa. 制备异构开放琥珀酰胺-半胱氨酸加合物的一般方法：在一个示例性实施方案中，将68 µmol上述马来酰亚胺前体化合物置于15 mlDMF中，并
添加36 mg (136 µmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸。将反应混合
物在室温下搅拌 20小时，然后在真空下浓缩，然后通过制备型HPLC纯化。合并相应级分和
~
在真空下蒸发溶剂后，将残余物溶解于15 ml THF/水1:1中。添加131 µl 2M氢氧化锂水溶
液，并将该混合物在室温下搅拌1小时。该混合物然后用1M盐酸中和，在真空中蒸发溶剂，且
残余物通过制备型HPLC纯化。这产生理论值的 50%的作为无色泡沫的区域异构的受保护的
~
中间体。
添加36 mg (136 µmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸。将反应混合
物在室温下搅拌 20小时，然后在真空下浓缩，然后通过制备型HPLC纯化。合并相应级分和
~
在真空下蒸发溶剂后，将残余物溶解于15 ml THF/水1:1中。添加131 µl 2M氢氧化锂水溶
液，并将该混合物在室温下搅拌1小时。该混合物然后用1M盐酸中和，在真空中蒸发溶剂，且
残余物通过制备型HPLC纯化。这产生理论值的 50%的作为无色泡沫的区域异构的受保护的
~
中间体。
[0908] 在最后步骤中，将0.023 mmol这些区域异构的水解产物溶解于3 ml 2,2,2-三氟乙醇中。添加12.5 mg(0.092 mmol)氯化锌并将该混合物在50℃下搅拌4小时。然后添加27
mg(0.092 mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC
纯化。相应级分的浓缩和残余物从乙腈/水中冻干后，产生作为区域异构体混合物的水解开
放硫烷基琥珀酰胺。
mg(0.092 mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC
纯化。相应级分的浓缩和残余物从乙腈/水中冻干后，产生作为区域异构体混合物的水解开
放硫烷基琥珀酰胺。
[0909] 根据本发明的缀合物的进一步纯化和表征在反应后，在一些情况下，例如通过超滤浓缩反应混合物，然后通过色谱法，例如使用
Sephadex® G-25柱脱盐和纯化。例如用磷酸盐缓冲盐水(PBS)进行洗脱。然后将该溶液无
菌过滤并冷冻。或者，可以将该缀合物冻干。
Sephadex® G-25柱脱盐和纯化。例如用磷酸盐缓冲盐水(PBS)进行洗脱。然后将该溶液无
菌过滤并冷冻。或者，可以将该缀合物冻干。
[0910] B-7. 抗体、毒簇载量和开放半胱氨酸加合物含量的测定为了鉴定蛋白，除分子量测定外，在去糖基化和/或变性后进行胰蛋白酶消化，其在变
性、还原和衍生化后通过发现的胰蛋白酶肽证实蛋白的身份。
性、还原和衍生化后通过发现的胰蛋白酶肽证实蛋白的身份。
[0911] 如下测定实施例中描述的缀合物在PBS缓冲液中所得溶液的毒簇载量：通过各缀合物种类的分子量的质谱测定，进行赖氨酸连接的ADC的毒簇载量的测定。在
此，该抗体缀合物首先用PNGaseF去糖基化，并将样品酸化并在HPLC分离/脱盐后，使用ESI-
ESI-MicroTofQ (Bruker Daltonik)通过质谱法分析。将TIC(总离子色谱图)中的信号上的
所有波谱相加并基于MaxEnt去卷积计算不同缀合物种类的分子量。然后在不同种类的信号
积分后计算DAR(= 药物/抗体比)。
此，该抗体缀合物首先用PNGaseF去糖基化，并将样品酸化并在HPLC分离/脱盐后，使用ESI-
ESI-MicroTofQ (Bruker Daltonik)通过质谱法分析。将TIC(总离子色谱图)中的信号上的
所有波谱相加并基于MaxEnt去卷积计算不同缀合物种类的分子量。然后在不同种类的信号
积分后计算DAR(= 药物/抗体比)。
[0912] 通过还原和变性的ADC的反相色谱法测定半胱氨酸连接的缀合物的毒簇载量。将盐酸胍(GuHCl)(28.6 mg)和DL-二硫苏糖醇(DTT)溶液(500 mM, 3 µl)添加至ADC溶液(1
mg/ml, 50 µl)中。将该混合物在55℃下孵育1小时并通过HPLC分析。
mg/ml, 50 µl)中。将该混合物在55℃下孵育1小时并通过HPLC分析。
[0913] 在Agilent 1260 HPLC系统上用在220 nm的检测进行HPLC分析。在1 ml/min的流速下以下列梯度使用Polymer Laboratories PLRP-S聚合反相柱(目录号PL1912-3802)
(2.1 x150 mm, 8微米粒度, 1000 Å)：0 min, 25%B；3 min, 25%B；28 min, 50%B。流动相A
由水中的0.05%三氟乙酸(TFA)组成，流动相B由乙腈中的0.05%三氟乙酸组成。
(2.1 x150 mm, 8微米粒度, 1000 Å)：0 min, 25%B；3 min, 25%B；28 min, 50%B。流动相A
由水中的0.05%三氟乙酸(TFA)组成，流动相B由乙腈中的0.05%三氟乙酸组成。
[0914] 通过与非缀合抗体的轻链(L0)和重链(H0)的保留时间比较，指定检测的峰。将仅在缀合样品中检测到的峰指定为具有一个毒簇的轻链(L1)和具有一个、两个和三个毒簇的
重链(H1、H2、H3)。
重链(H1、H2、H3)。
[0915] 具有毒簇的抗体的平均载量由通过积分测定的峰面积计算，其作为所有峰的毒簇数加权积分结果的总和的两倍除以所有峰的单加权积分结果的总和测得。在个别情况下，
由于一些峰的共洗脱，可能无法精确测定毒簇载量。
由于一些峰的共洗脱，可能无法精确测定毒簇载量。
[0916] 在通过HPLC无法充分分离轻链和重链的情况下，通过轻链和重链处的各缀合物种类的分子量的质谱测定进行半胱氨酸连接的缀合物的毒簇载量的测定。
[0917] 将盐酸胍(GuHCl)(28.6 mg)和DL-二硫苏糖醇(DTT)溶液(500 mM, 3 µl)添加至ADC溶液(1 mg/ml, 50 µl)中。将该混合物在55℃下孵育1小时并在使用ESI-MicroTofQ
(Bruker Daltonik)在线脱盐后通过质谱法分析。
(Bruker Daltonik)在线脱盐后通过质谱法分析。
[0918] 对于DAR测定，将TIC(总离子色谱图)中的信号上的所有波谱相加并基于MaxEnt去卷积计算轻链和重链处的不同缀合物种类的分子量。具有毒簇的抗体的平均载量由通过积
分测定的分子量面积计算，其作为所有LC峰的毒簇数加权积分结果的总和的两倍除以所有
峰的单加权积分结果的总和。
分测定的分子量面积计算，其作为所有LC峰的毒簇数加权积分结果的总和的两倍除以所有
峰的单加权积分结果的总和。
[0919] 为了测定开放半胱氨酸加合物的含量，测定所有单缀合的轻链和重链变体的封闭与开放半胱氨酸加合物(分子量Δ18道尔顿)的分子量面积比。所有变体的平均值得出开放
半胱氨酸加合物的含量。
半胱氨酸加合物的含量。
[0920] B-8. 检查ADC的抗原-结合在已发生偶联后检查结合剂结合至靶分子上的能力。本领域技术人员熟悉可用于此目
的的各种方法；例如，可以使用ELISA技术或表面等离子体共振分析(BIAcore™测量)检查
缀合物的亲和力。本领域技术人员可以使用常用方法测量缀合物浓度，例如对抗体缀合物
而言通过蛋白测定法(也参见Doronina等人; Nature Biotechnol. 2003; 21:778-784和
Polson等人, Blood 2007; 1102:616-623)。
的的各种方法；例如，可以使用ELISA技术或表面等离子体共振分析(BIAcore™测量)检查
缀合物的亲和力。本领域技术人员可以使用常用方法测量缀合物浓度，例如对抗体缀合物
而言通过蛋白测定法(也参见Doronina等人; Nature Biotechnol. 2003; 21:778-784和
Polson等人, Blood 2007; 1102:616-623)。
[0921] 代谢物实施方案实施例M1
S-[1-(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)-2,5-二氧
代吡咯烷-3-基]-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将1.8mg (2μmol)中间体F104溶于1ml DMF中，并添加2.7mg (22μmol) L-半胱氨酸。将
反应混合物在室温下搅拌20小时，然后在真空中浓缩且然后通过制备型HPLC纯化。剩余
0.6mg (理论值的26%)标题化合物作为无色泡沫。
S-[1-(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)-2,5-二氧
代吡咯烷-3-基]-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将1.8mg (2μmol)中间体F104溶于1ml DMF中，并添加2.7mg (22μmol) L-半胱氨酸。将
反应混合物在室温下搅拌20小时，然后在真空中浓缩且然后通过制备型HPLC纯化。剩余
0.6mg (理论值的26%)标题化合物作为无色泡沫。
[0922] LC-MS (方法1): Rt = 0.80 min; MS (EIpos): m/z = 814 [M+H]+。
[0923] 实施例M24-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-3-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
和
4-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-2-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
LC-MS (方法1): Rt = 0.80 min; MS (EIpos): m/z = 814 [M+H]+。
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-3-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
和
4-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-2-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
LC-MS (方法1): Rt = 0.80 min; MS (EIpos): m/z = 814 [M+H]+。
[0924] 首先，在DMF中在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将L-半胱氨酸用1-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮转化为N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧
基]羰基}-L-半胱氨酸。
基]羰基}-L-半胱氨酸。
[0925] 将406mg (1.53mmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸溶解于10ml DMF中，添加157.5mg (1.606mmol)顺丁烯二酸酐并将混合物在室温下搅拌1小时。
将7.5mg (0.01mmol)中间体C66添加至130μl该溶液，并将混合物在室温下搅拌5分钟。然后
在真空中浓缩混合物，且残余物通过制备型HPLC纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干
燥残余物。这得到10mg (89%)保护的中间体；其中通过HPLC和通过LC-MS均不能分离区域异
构体。
将7.5mg (0.01mmol)中间体C66添加至130μl该溶液，并将混合物在室温下搅拌5分钟。然后
在真空中浓缩混合物，且残余物通过制备型HPLC纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干
燥残余物。这得到10mg (89%)保护的中间体；其中通过HPLC和通过LC-MS均不能分离区域异
构体。
[0926] LC-MS (方法1): Rt = 1.38 min; MS (EIpos): m/z = 1120 [M+H]+。
[0927] 在最后步骤中，将10mg该中间体溶解于2ml 2,2,2-三氟乙醇中。添加12mg (0.088mmol)氯化锌，并将混合物在50℃下搅拌30分钟。然后添加26mg (0.088mmol)乙二
胺-N,N,N’,N’-四乙酸，并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分
并从乙腈/水冻干残余物后，得到8.3mg (理论值的99%)作为区域异构体混合物的标题化合
物，比率为87：13。
胺-N,N,N’,N’-四乙酸，并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分
并从乙腈/水冻干残余物后，得到8.3mg (理论值的99%)作为区域异构体混合物的标题化合
物，比率为87：13。
[0928] LC-MS (方法5): Rt = 2.3 min和2.43 min; MS (ESIpos): m/z = 832 (M+H)+。1H-NMR主要区域异构体: (500 MHz, DMSO-d6): δ = 8.7 (m, 1H), 8.5 (m, 2H),
8.1 (m, 1H), 7.6 (m, 1H), 7.5 (s, 1H) 7.4-7.15 (m, 6H), 6.9-7.0 (m, 1H), 6.85
(s, 1H), 5.61 (s, 1H), 4.9和5.2 (2d, 2H), 4.26和4.06 (2d, 2H), 3.5-3.8 (m,
5H), 3.0-3.4 (m, 5H), 2.75-3.0 (m, 3H), 2.58和2.57 (dd, 1H), 0.77和1,5 (2m,
2H), 0.81 (s, 9H)。
8.1 (m, 1H), 7.6 (m, 1H), 7.5 (s, 1H) 7.4-7.15 (m, 6H), 6.9-7.0 (m, 1H), 6.85
(s, 1H), 5.61 (s, 1H), 4.9和5.2 (2d, 2H), 4.26和4.06 (2d, 2H), 3.5-3.8 (m,
5H), 3.0-3.4 (m, 5H), 2.75-3.0 (m, 3H), 2.58和2.57 (dd, 1H), 0.77和1,5 (2m,
2H), 0.81 (s, 9H)。
[0929] 或者，区域异构型标题化合物如下制备：为此，首先将L-半胱氨酸在DMF中在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下用1-({[2-(三甲
基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮转化为N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧
基]羰基}-L-半胱氨酸。
基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮转化为N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧
基]羰基}-L-半胱氨酸。
[0930] 将55mg (0.068mmol)中间体F104和36mg (0.136mmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸溶解于15ml DMF中，并将混合物在室温下搅拌20小时。然后浓缩
且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分且溶剂在真空中蒸发后，将残余物溶解于
15ml THF/水1:1中。添加131μl 2M氢氧化锂水溶液并将混合物在室温下搅拌1小时。然后混
合物用1M盐酸中和，在真空中蒸发溶剂且残余物通过制备型HPLC纯化。这得到37mg (理论
值的50%)作为无色泡沫的区域异构的受保护的中间体。
且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分且溶剂在真空中蒸发后，将残余物溶解于
15ml THF/水1:1中。添加131μl 2M氢氧化锂水溶液并将混合物在室温下搅拌1小时。然后混
合物用1M盐酸中和，在真空中蒸发溶剂且残余物通过制备型HPLC纯化。这得到37mg (理论
值的50%)作为无色泡沫的区域异构的受保护的中间体。
[0931] LC-MS (方法5): Rt = 3.33 min和3.36 min; MS (ESIpos): m/z = 976 (M+H)+。
[0932] 在最后步骤中，将25mg (0.023mmol)该中间体溶解于3ml 2,2,2-三氟乙醇中。添加12.5mg (0.092mmol)氯化锌，并将混合物在50℃下搅拌4小时。然后添加27mg
(0.092mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC纯
化。浓缩相应级分并从乙腈/水冻干残余物后，得到18.5mg (理论值的85%)作为区域异构体
混合物的标题化合物，比率为21:79。
(0.092mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC纯
化。浓缩相应级分并从乙腈/水冻干残余物后，得到18.5mg (理论值的85%)作为区域异构体
混合物的标题化合物，比率为21:79。
[0933] LC-MS (方法5): Rt = 2.37 min和3.44 min; MS (ESIpos): m/z = 832 (M+H)+。
[0934] 标题化合物的各个区域异构体的靶向制备如下进行：实施例M3
4-[(2-{[(2R)-2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)-2-羧基乙基]氨基}-2-氧代乙基)
氨基]-3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
和
4-[(2-{[(2R)-2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)-2-羧基乙基]氨基}-2-氧代乙基)
氨基]-2-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
首先，将L-半胱氨酸在DMF中在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下用1-({[2-(三甲基甲
硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮转化为N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰
基}-L-半胱氨酸。
4-[(2-{[(2R)-2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)-2-羧基乙基]氨基}-2-氧代乙基)
氨基]-3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
和
4-[(2-{[(2R)-2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)-2-羧基乙基]氨基}-2-氧代乙基)
氨基]-2-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
首先，将L-半胱氨酸在DMF中在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下用1-({[2-(三甲基甲
硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮转化为N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰
基}-L-半胱氨酸。
[0935] 将11mg (0.013mmol)中间体F193和8mg (0.016mmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸溶解于3ml DMF中，并将混合物在室温下搅拌20小时。然后浓缩
且残余物通过制备型HPLC纯化。
且残余物通过制备型HPLC纯化。
[0936] 合并相应级分且溶剂在真空中蒸发后，将残余物溶解于2ml THF/水1:1中。添加19μl 2M氢氧化锂水溶液并将混合物在室温下搅拌1小时。然后添加另外19μl 2M氢氧化锂水
溶液并将混合物在室温下搅拌过夜。然后将混合物用1M盐酸中和，在真空中蒸发溶剂且残
余物通过制备型HPLC纯化。这得到4.1mg (理论值的38%)作为无色泡沫的区域异构的受保
护的中间体。
溶液并将混合物在室温下搅拌过夜。然后将混合物用1M盐酸中和，在真空中蒸发溶剂且残
余物通过制备型HPLC纯化。这得到4.1mg (理论值的38%)作为无色泡沫的区域异构的受保
护的中间体。
[0937] LC-MS (方法1): Rt = 1.03 min (宽); MS (ESIpos): m/z = 1020 (M+H)+。
[0938] 在最后步骤中，将4.1mg (0.004mmol)该中间体溶解于3ml 2,2,2-三氟乙醇中。添加3mg (0.022mmol)氯化锌，并将混合物在50℃下搅拌1小时。然后添加6mg (0.022mmol)乙
二胺-N,N,N’,N’-四乙酸和2ml 0.1%三氟乙酸水溶液，并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制
备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙腈/水冻干残余物后，得到5mg (定量)作为区域异构体
混合物的标题化合物，比率为20：80。
二胺-N,N,N’,N’-四乙酸和2ml 0.1%三氟乙酸水溶液，并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制
备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙腈/水冻干残余物后，得到5mg (定量)作为区域异构体
混合物的标题化合物，比率为20：80。
[0939] LC-MS (方法1): Rt = 0.78 min (宽); MS (ESIpos): m/z = 876 (M+H)+。LC-MS (方法5): Rt = 2.36 min和2.39 min; MS (ESIpos): m/z = 876 (M+H)+。
[0940] 实施例M4S-(1-{2-[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙氧基]乙基}-2,5-二氧代吡咯烷-
3-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将3mg (4μmol)中间体F248置于2ml DMF中，并添加0.9mg (8μmol) L-半胱氨酸。将反
应混合物在室温下搅拌18小时且然后在真空中浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化。浓缩相
应级分，在从乙腈/水冻干残余物后得到1.1mg (理论值的32%)作为白色固体的标题化合
物。
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙氧基]乙基}-2,5-二氧代吡咯烷-
3-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)
将3mg (4μmol)中间体F248置于2ml DMF中，并添加0.9mg (8μmol) L-半胱氨酸。将反
应混合物在室温下搅拌18小时且然后在真空中浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化。浓缩相
应级分，在从乙腈/水冻干残余物后得到1.1mg (理论值的32%)作为白色固体的标题化合
物。
[0941] LC-MS (方法1): Rt = 0.78 min; MS (EIpos): m/z = 801 [M+H]+。
[0942] 实施例M5(3R,7S)-7-氨基-17-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-3-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯
基)-1H-吡咯-2-基]-4-乙醇酰基-2,2-二甲基-8,16-二氧代-12-氧杂-4,9,15-三氮杂十九
烷-19-酸/三氟乙酸(1:1)
和
(3R,7S)-7-氨基-18-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-3-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯
基)-1H-吡咯-2-基]-4-乙醇酰基-2,2-二甲基-8,16-二氧代-12-氧杂-4,9,15-三氮杂十九
烷-19-酸/三氟乙酸(1:1)
将8mg (0.010mmol)中间体F248的保护的中间体和5.1mg (0.02mmol) N-{[2-(三甲基
甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸溶解于3ml DMF中，并将混合物在室温下搅拌18小时
且然后在超声波浴中处理2小时。然后浓缩且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分且
溶剂在真空中蒸发后，将残余物溶解于2ml THF/水1:1中。添加15μl 2M氢氧化锂水溶液并
将混合物在室温下搅拌15分钟。然后混合物用1M盐酸调节至 3的pH值，用20ml氯化钠溶液
~
稀释，并用20ml乙酸乙酯萃取两次。有机相经硫酸镁干燥并浓缩，且残余物从乙腈/水冻干。
这得到8.4mg (经2个步骤，理论值的78%)作为无色泡沫的区域异构的受保护的中间体。
基)-1H-吡咯-2-基]-4-乙醇酰基-2,2-二甲基-8,16-二氧代-12-氧杂-4,9,15-三氮杂十九
烷-19-酸/三氟乙酸(1:1)
和
(3R,7S)-7-氨基-18-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-3-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯
基)-1H-吡咯-2-基]-4-乙醇酰基-2,2-二甲基-8,16-二氧代-12-氧杂-4,9,15-三氮杂十九
烷-19-酸/三氟乙酸(1:1)
将8mg (0.010mmol)中间体F248的保护的中间体和5.1mg (0.02mmol) N-{[2-(三甲基
甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸溶解于3ml DMF中，并将混合物在室温下搅拌18小时
且然后在超声波浴中处理2小时。然后浓缩且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分且
溶剂在真空中蒸发后，将残余物溶解于2ml THF/水1:1中。添加15μl 2M氢氧化锂水溶液并
将混合物在室温下搅拌15分钟。然后混合物用1M盐酸调节至 3的pH值，用20ml氯化钠溶液
~
稀释，并用20ml乙酸乙酯萃取两次。有机相经硫酸镁干燥并浓缩，且残余物从乙腈/水冻干。
这得到8.4mg (经2个步骤，理论值的78%)作为无色泡沫的区域异构的受保护的中间体。
[0943] LC-MS (方法1): Rt = 1.44 min和3.43 min; MS (ESIpos): m/z = 1107 (M+H)+。
[0944] 在最后步骤中，将8mg (0.007mmol)该中间体溶解于5ml 2,2,2-三氟乙醇中。添加9.8mg (0.072mmol)氯化锌，并将混合物在50℃下搅拌1.5小时。然后添加乙二胺-N,N,N’,
N’-四乙酸，并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙腈/水
冻干残余物后，得到4mg (理论值的59%)作为区域异构体混合物的标题化合物，比率为31:
67。
N’-四乙酸，并在真空中蒸发溶剂。残余物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙腈/水
冻干残余物后，得到4mg (理论值的59%)作为区域异构体混合物的标题化合物，比率为31:
67。
[0945] LC-MS (方法1): Rt = 0.79 min和0.81 min; MS (ESIpos): m/z = 819 (M+H)+。
[0946] 实施例M62-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-({(14R)-13-(3-氨基丙基)-14-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-15,15-二甲基-2,7,12-三氧代-10-硫杂-3,6,13-三氮杂
十六烷-1-基}氨基)-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:2)
和
3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-({(14R)-13-(3-氨基丙基)-14-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-15,15-二甲基-2,7,12-三氧代-10-硫杂-3,6,13-三氮杂
十六烷-1-基}氨基)-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:2)
将18mg (0.021mmol)中间体F213和11.2mg (0.04mmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙
氧基]羰基}-L-半胱氨酸溶解于2ml DMF中，并将混合物在室温下搅拌18小时。在真空中浓
缩反应混合物。将残余物(21.2mg)溶解于3ml THF/水1:1中。添加0.04ml 2M氢氧化锂水溶
液并将混合物在室温下搅拌3小时。添加0.02ml 2M氢氧化锂水溶液并将混合物在室温下搅
拌1小时。然后使用7.2mg (0.12mmol)乙酸将反应物调节至 7的pH值。反应混合物直接通过
~
制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水；0.1% TFA)纯化。
在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到13mg (经2个步骤，57%)区域异构的受
保护的中间体。
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-15,15-二甲基-2,7,12-三氧代-10-硫杂-3,6,13-三氮杂
十六烷-1-基}氨基)-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:2)
和
3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-({(14R)-13-(3-氨基丙基)-14-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-15,15-二甲基-2,7,12-三氧代-10-硫杂-3,6,13-三氮杂
十六烷-1-基}氨基)-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:2)
将18mg (0.021mmol)中间体F213和11.2mg (0.04mmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙
氧基]羰基}-L-半胱氨酸溶解于2ml DMF中，并将混合物在室温下搅拌18小时。在真空中浓
缩反应混合物。将残余物(21.2mg)溶解于3ml THF/水1:1中。添加0.04ml 2M氢氧化锂水溶
液并将混合物在室温下搅拌3小时。添加0.02ml 2M氢氧化锂水溶液并将混合物在室温下搅
拌1小时。然后使用7.2mg (0.12mmol)乙酸将反应物调节至 7的pH值。反应混合物直接通过
~
制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水；0.1% TFA)纯化。
在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到13mg (经2个步骤，57%)区域异构的受
保护的中间体。
[0947] LC-MS (方法1): Rt = 1.03 min; MS (ESIpos): m/z = 1020 (M+H)+。
[0948] 在最后步骤中，将13mg (0.01mmol)该中间体溶解于2ml 2,2,2-三氟乙醇中。添加6.2mg (0.05mmol)氯化锌，并将混合物在50℃下搅拌7小时。然后添加13.3mg (0.05mmol)
乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，且产物(Lösemitte)通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从
乙腈/水冻干残余物后，得到10.3mg (81.4%)作为区域异构体混合物的标题化合物。
乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，且产物(Lösemitte)通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从
乙腈/水冻干残余物后，得到10.3mg (81.4%)作为区域异构体混合物的标题化合物。
[0949] LC-MS (方法1): Rt = 1.03 min; MS (ESIpos): m/z = 875 (M+H)+。
[0950] 实施例M7S-(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-
2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)-L-半胱氨酸/
三氟乙酸(1:1)
将6mg (8μmol)中间体F1l9置于3ml DMF中，并添加1.8mg (15μmol) L-半胱氨酸。将反
应混合物在室温下搅拌6小时且然后将其静置在室温下3天。然后在真空中浓缩反应物，且
产物通过制备型HPLC纯化。
2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)-L-半胱氨酸/
三氟乙酸(1:1)
将6mg (8μmol)中间体F1l9置于3ml DMF中，并添加1.8mg (15μmol) L-半胱氨酸。将反
应混合物在室温下搅拌6小时且然后将其静置在室温下3天。然后在真空中浓缩反应物，且
产物通过制备型HPLC纯化。
[0951] LC-MS (方法1): Rt = 0.81 min; MS (ESIpos): m/z = 717 (M+H)+。
[0952] 实施例M8(3R)-6-{(11S,15R)-11-氨基-15-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-14-乙
醇酰基-16,16-二甲基-2,5,10-三氧代-3,6,9,14-四氮杂十七烷-1-基}-5-氧代硫代吗啉-
3-甲酸/三氟乙酸(1:1)
将4mg (0.004mmol)来自实施例135的化合物溶解于4ml THF/水中，并添加48μl 2摩尔
浓度氢氧化锂水溶液。将混合物在室温下搅拌1小时且然后浓缩且通过制备型HPLC纯化。合
并，浓缩并从乙腈/水冻干相应级分后，得到2.4mg (理论值的60%)标题化合物。
醇酰基-16,16-二甲基-2,5,10-三氧代-3,6,9,14-四氮杂十七烷-1-基}-5-氧代硫代吗啉-
3-甲酸/三氟乙酸(1:1)
将4mg (0.004mmol)来自实施例135的化合物溶解于4ml THF/水中，并添加48μl 2摩尔
浓度氢氧化锂水溶液。将混合物在室温下搅拌1小时且然后浓缩且通过制备型HPLC纯化。合
并，浓缩并从乙腈/水冻干相应级分后，得到2.4mg (理论值的60%)标题化合物。
[0953] LC-MS (方法1): Rt = 0.86 min; MS (EIpos): m/z = 814 [M+H]+。
[0954] 实施例M9N-(3-氨基丙基)-N-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}-2-羟基乙酰胺
将150.0mg (0.42mmol)(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二
甲基丙-1-胺(中间体C52)最初装入2.0ml二氯甲烷中，并添加29.2mg (0.49mmol) HOAc和
125.6mg (0.59mmol)三乙酰氧基硼氢化钠并在室温下搅拌5分钟。添加98.9mg (0.49mmol)
3-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)丙醛。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应
混合物用乙酸乙酯稀释且有机相用饱和碳酸钠溶液洗涤两次并用饱和NaCl溶液洗涤一次。
经硫酸镁干燥后，在真空中蒸发溶剂且残余物在硅胶(流动相：二氯甲烷/甲醇100：1)上纯
化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到188.6mg (74%)化合物2-[3-
({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基)丙基]-1H-
异吲哚-1,3(2H)-二酮。
基丙基}-2-羟基乙酰胺
将150.0mg (0.42mmol)(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二
甲基丙-1-胺(中间体C52)最初装入2.0ml二氯甲烷中，并添加29.2mg (0.49mmol) HOAc和
125.6mg (0.59mmol)三乙酰氧基硼氢化钠并在室温下搅拌5分钟。添加98.9mg (0.49mmol)
3-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)丙醛。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应
混合物用乙酸乙酯稀释且有机相用饱和碳酸钠溶液洗涤两次并用饱和NaCl溶液洗涤一次。
经硫酸镁干燥后，在真空中蒸发溶剂且残余物在硅胶(流动相：二氯甲烷/甲醇100：1)上纯
化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到188.6mg (74%)化合物2-[3-
({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基)丙基]-1H-
异吲哚-1,3(2H)-二酮。
[0955] LC-MS (方法1): Rt = 1.00 min; MS (ESIpos): m/z = 541 [M+H]+。
[0956] 将171.2mg (0.32mmol) 2-[3-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基)丙基]-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮最初装入5.0ml二氯甲烷
中，并添加73.6mg (0.73mmol)三乙胺。在0℃下，添加94.9mg (0.70mmol)乙酰氧基乙酰氯，
并将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释且有机相用饱和碳酸氢钠
溶液洗涤两次并用饱和NaCl溶液洗涤一次。经硫酸镁干燥后，在真空中蒸发溶剂且残余物
使用Biotage Isolera(硅胶，柱10g SNAP，流动速率12ml/min，乙酸乙酯/环己烷1:3)纯化。
在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到159.0mg (77%)化合物乙酸2-({(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}[3-(1,3-二氧代-1,3-二
氢-2H-异吲哚-2-基)丙基]氨基)-2-氧代乙酯。
中，并添加73.6mg (0.73mmol)三乙胺。在0℃下，添加94.9mg (0.70mmol)乙酰氧基乙酰氯，
并将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释且有机相用饱和碳酸氢钠
溶液洗涤两次并用饱和NaCl溶液洗涤一次。经硫酸镁干燥后，在真空中蒸发溶剂且残余物
使用Biotage Isolera(硅胶，柱10g SNAP，流动速率12ml/min，乙酸乙酯/环己烷1:3)纯化。
在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到159.0mg (77%)化合物乙酸2-({(1R)-
1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}[3-(1,3-二氧代-1,3-二
氢-2H-异吲哚-2-基)丙基]氨基)-2-氧代乙酯。
[0957] LC-MS (方法1): Rt = 1.35 min; MS (ESIpos): m/z = 642 [M+H]+。
[0958] 将147.2mg (0.23mmol)乙酸2-({(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}[3-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)丙基]氨基)-2-氧代
乙酯最初装入4.0ml乙醇中，并添加356.2mg (4.59mmol)甲胺(40%，在水中)。将反应混合物
在50℃下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂且残余物与甲苯共蒸馏三次。将残余物在硅胶上纯
化(流动相：二氯甲烷/甲醇=10：1)。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
67.4mg (63%)标题化合物。
乙酯最初装入4.0ml乙醇中，并添加356.2mg (4.59mmol)甲胺(40%，在水中)。将反应混合物
在50℃下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂且残余物与甲苯共蒸馏三次。将残余物在硅胶上纯
化(流动相：二氯甲烷/甲醇=10：1)。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到
67.4mg (63%)标题化合物。
[0959] LC-MS (方法1): Rt = 0.91 min; MS (ESIpos): m/z = 470 [M+H]+。
[0960] 实施例M10(2R,28R)-28-氨基-2-[({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)甲基]-25-(羧基甲基)-4,20,24-
三氧代-7,10,13,16-四氧杂-26-硫杂-3,19,23-三氮杂二十九烷-1,29-二酸/三氟乙酸(1:
2)和
(1R,28R,34R)-1-氨基-33-(3-氨基丙基)-34-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-35,35-二甲基-6,10,26,32-四氧代-14,17,20,23-四氧杂-3,30-二硫杂-7,11,27,
33-四氮杂三十六烷-1,4,28-三甲酸/三氟乙酸(1:2)
将20mg (0.018mmol)R-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡
咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-16-氮杂十九烷-1-酰基]-L-半胱氨酸/三氟乙酸
(1:1)(中间体F209)和9.78mg (0.036mmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半
胱氨酸溶解于2ml DMF中，并将混合物在室温下搅拌18小时。在真空中浓缩反应混合物。将
残余物(47.7mg)溶解于3ml THF/水1:1中。添加0.08ml 2M氢氧化锂水溶液并将混合物在室
温下搅拌1小时。然后使用9.26mg (0.15mmol)乙酸将混合物调节至 7的pH值。反应混合物
~
直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水；0.1%
TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到15.3mg (经2个步骤29%)区
域异构的受保护的中间体。
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)甲基]-25-(羧基甲基)-4,20,24-
三氧代-7,10,13,16-四氧杂-26-硫杂-3,19,23-三氮杂二十九烷-1,29-二酸/三氟乙酸(1:
2)和
(1R,28R,34R)-1-氨基-33-(3-氨基丙基)-34-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-35,35-二甲基-6,10,26,32-四氧代-14,17,20,23-四氧杂-3,30-二硫杂-7,11,27,
33-四氮杂三十六烷-1,4,28-三甲酸/三氟乙酸(1:2)
将20mg (0.018mmol)R-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡
咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-16-氮杂十九烷-1-酰基]-L-半胱氨酸/三氟乙酸
(1:1)(中间体F209)和9.78mg (0.036mmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半
胱氨酸溶解于2ml DMF中，并将混合物在室温下搅拌18小时。在真空中浓缩反应混合物。将
残余物(47.7mg)溶解于3ml THF/水1:1中。添加0.08ml 2M氢氧化锂水溶液并将混合物在室
温下搅拌1小时。然后使用9.26mg (0.15mmol)乙酸将混合物调节至 7的pH值。反应混合物
~
直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水；0.1%
TFA)纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到15.3mg (经2个步骤29%)区
域异构的受保护的中间体。
[0961] LC-MS (方法6): Rt = 12.26 min和12.30min; MS (ESIpos): m/z = 1254 (M+H)+。
[0962] 在最后步骤中，将15.3mg (0.01mmol)该中间体溶解于2ml 2,2,2-三氟乙醇中。添加6.1mg (0.05mmol)氯化锌，并将混合物在50℃下搅拌2小时。然后添加13.1mg
(0.05mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，且产物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙
腈/水冻干残余物后，得到11.9mg (79.5%)作为区域异构体混合物的标题化合物。
(0.05mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，且产物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙
腈/水冻干残余物后，得到11.9mg (79.5%)作为区域异构体混合物的标题化合物。
[0963] LC-MS (方法1): Rt = 0.85 min; MS (ESIpos): m/z = 1110 (M+H)+。
[0964] 实施例M11S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:2)
将15.0mg (0.018mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)溶解于1.0ml三氟乙醇中，并添加7.4mg
(0.054mmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌过夜。向该反应混合物添加15.8mg
(0.054mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。直接通过
制备型进行RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)
纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到11.1mg (77%)标题化合物。
基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:2)
将15.0mg (0.018mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C71)溶解于1.0ml三氟乙醇中，并添加7.4mg
(0.054mmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌过夜。向该反应混合物添加15.8mg
(0.054mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1% TFA)。直接通过
制备型进行RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/水，0.1% TFA)
纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到11.1mg (77%)标题化合物。
[0965] LC-MS (方法1): Rt = 0.83 min; MS (ESIpos): m/z = 573 (M+H)+。
[0966] 实施例M124-{[(1R)-2-({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)-1-羧基乙基]氨基}-4-氧代丁酸/三氟乙
酸(1:1)
将12.2mg (0.014mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-N-(4-叔丁氧基-4-氧代丁酰基)-L-半胱氨酸(中间体Cx)溶解于2.0ml三氟乙醇中，
并添加11.4mg (0.084mmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。向该反应混合物
添加24.5mg (0.084mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1%
TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/
水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到4.6mg (42%)标题
化合物。
基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)-1-羧基乙基]氨基}-4-氧代丁酸/三氟乙
酸(1:1)
将12.2mg (0.014mmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-
13-基)-N-(4-叔丁氧基-4-氧代丁酰基)-L-半胱氨酸(中间体Cx)溶解于2.0ml三氟乙醇中，
并添加11.4mg (0.084mmol)二氯化锌。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。向该反应混合物
添加24.5mg (0.084mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸，搅拌10分钟且然后添加水(0.1%
TFA)。纯化直接通过制备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流动速率：50ml/min，MeCN/
水，0.1% TFA)进行。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。这得到4.6mg (42%)标题
化合物。
[0967] LC-MS (方法1): Rt = 0.88 min; MS (ESIpos): m/z = 673 (M+H)+。
[0968] 实施例M134-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-2-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
区域异构体1，差向异构体1(2R)或(2S)
LC-MS (方法5): Rt = 2.44 min; MS (ESIpos): m/z = 832 [M+H]+。
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-2-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
区域异构体1，差向异构体1(2R)或(2S)
LC-MS (方法5): Rt = 2.44 min; MS (ESIpos): m/z = 832 [M+H]+。
[0969] 首先，在DMF中在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将L-半胱氨酸甲酯盐酸盐(1:1)用1-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮转化为N-{[2-(三甲基
甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸甲酯。
甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸甲酯。
[0970] 将408mg (1.93mmol)市售3-溴-4-甲氧基-4-氧代丁酸和180mg (0.644mmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸甲酯溶解于8ml DMF中，并添加147mg
(0.97mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯。在室温下搅拌18小时后，添加另外136mg
(0.64mmol) 3-溴-4-甲氧基-4-氧代丁酸和147mg (0.97mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十
一-7-烯，并将混合物在室温下再搅拌12小时且然后在真空中浓缩。残余物通过制备型HPLC
纯化。合并相应级分并在真空中蒸发溶剂后，得到151mg (理论值的57%) 4-甲氧基-3-
{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-
氧代丁酸。
(0.97mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯。在室温下搅拌18小时后，添加另外136mg
(0.64mmol) 3-溴-4-甲氧基-4-氧代丁酸和147mg (0.97mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十
一-7-烯，并将混合物在室温下再搅拌12小时且然后在真空中浓缩。残余物通过制备型HPLC
纯化。合并相应级分并在真空中蒸发溶剂后，得到151mg (理论值的57%) 4-甲氧基-3-
{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-
氧代丁酸。
[0971] LC-MS (方法12): Rt = 1.74 min; MS (ESIneg): m/z = 408 (M-H)-。
[0972] 在该中间体中，145mg通过超临界流体色谱法经由手性柱分离成单独非对映异构体(SFC；柱：DAICEL，AD-H 5u 250x20mm；流动速率：80ml/min；方法：AD-25% ETOH-80ml；压
力：100巴；波长：210nM)，得到63mg (43%)差向异构体1和58mg (40%)差向异构体2。
力：100巴；波长：210nM)，得到63mg (43%)差向异构体1和58mg (40%)差向异构体2。
[0973] 差向异构体1如下表征：。
[0974] 差向异构体2如下表征：在30mg (0.079mmol) HATU和13.4mg (0.132mmol) 4-甲基吗啉存在的情况下将
32.5mg (0.079mmol)差向异构体1与50mg (0.066mmol)中间体C66偶联，在HPLC纯化后得到
43mg (理论值的57%)完全保护的中间体4-{[(8S)-8-{2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟
苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]乙基}-2,2-二甲基-6,9,14-三
氧代-5-氧杂-7,10,13-三氮杂-2-硅杂十五烷-15-基]氨基}-2-{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-
2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸甲酯。
32.5mg (0.079mmol)差向异构体1与50mg (0.066mmol)中间体C66偶联，在HPLC纯化后得到
43mg (理论值的57%)完全保护的中间体4-{[(8S)-8-{2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟
苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]乙基}-2,2-二甲基-6,9,14-三
氧代-5-氧杂-7,10,13-三氮杂-2-硅杂十五烷-15-基]氨基}-2-{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-
2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸甲酯。
[0975] 然后将40mg (0.035mmol)该中间体在室温下与0.9ml 2摩尔浓度氢氧化锂溶液一起在11ml甲醇中搅拌20分钟，导致两个甲酯基均裂解。通过HPLC纯化，得到12mg (理论值的
31%)二甲酸衍生物。
31%)二甲酸衍生物。
[0976] LC-MS (方法5): Rt = 4.74 min; MS (ESIpos): m/z = 1120 [M+H]+。
[0977] 最终，10mg (0.009mmol)该中间体如上述在三氟乙醇中用氯化锌完全脱保护。残余物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙腈/水冻干残余物后，得到2.6mg (理论值
的30%)标题化合物。
的30%)标题化合物。
[0978] LC-MS (方法5): Rt = 2.44 min; MS (ESIpos): m/z = 832 [M+H]+。
[0979] 实施例M144-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-2-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
区域异构体1，差向异构体2(2R或2S)
LC-MS (方法5): Rt = 2.44 min; MS (EIpos): m/z = 832 [M+H]+。
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-2-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
区域异构体1，差向异构体2(2R或2S)
LC-MS (方法5): Rt = 2.44 min; MS (EIpos): m/z = 832 [M+H]+。
[0980] 实施例M13中所述的中间体差向异构体2类似于实施例M13中的描述反应：在30mg (0.079mmol) HATU和13.4mg (0.132mmol) 4-甲基吗啉存在的情况下将
32.5mg (0.079mmol)差向异构体2与50mg (0.066mmol)中间体C66偶联，在HPLC纯化后得到
43mg (理论值的57%)完全保护的中间体4-{[(8S)-8-{2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟
苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]乙基}-2,2-二甲基-6,9,14-三
氧代-5-氧杂-7,10,13-三氮杂-2-硅杂十五烷-15-基]氨基}-2-{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-
2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸甲酯。
32.5mg (0.079mmol)差向异构体2与50mg (0.066mmol)中间体C66偶联，在HPLC纯化后得到
43mg (理论值的57%)完全保护的中间体4-{[(8S)-8-{2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟
苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]乙基}-2,2-二甲基-6,9,14-三
氧代-5-氧杂-7,10,13-三氮杂-2-硅杂十五烷-15-基]氨基}-2-{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-
2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸甲酯。
[0981] 然后将40mg (0.035mmol)该中间体在室温下与0.9ml 2摩尔浓度氢氧化锂溶液一起在11ml甲醇中搅拌20分钟，导致两个甲酯基均裂解。通过HPLC纯化后，得到11mg (理论值
的28%)二甲酸衍生物。
的28%)二甲酸衍生物。
[0982] LC-MS (方法5): Rt = 4.74 min; MS (ESIpos): m/z = 1120 [M+H]+。
[0983] 最终，10mg (0.009mmol)该中间体如上述在三氟乙醇中用氯化锌完全脱保护。残余物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙腈/水冻干残余物后，得到4.4mg (理论值
的52%)标题化合物。
的52%)标题化合物。
[0984] LC-MS (方法5): Rt = 2.44 min; MS (ESIpos): m/z = 832 [M+H]+。
[0985] 实施例M154-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-3-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
区域异构体2，差向异构体1(3R或3S)
LC-MS (方法5): Rt = 2.45 min; MS (EIpos): m/z = 832 [M+H]+。
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-3-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
区域异构体2，差向异构体1(3R或3S)
LC-MS (方法5): Rt = 2.45 min; MS (EIpos): m/z = 832 [M+H]+。
[0986] 将742.8mg (3.3mmol)市售2-溴-4-乙氧基-4-氧代丁酸和802mg (2.87mmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸甲酯溶解于32ml DMF中，并添加655.4mg
(4.31mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯。在室温下搅拌20小时后，在真空中浓缩该
混合物且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分并在真空中蒸发溶剂后，得到521mg
(理论值的43%) 4-乙氧基-2-{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧
基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸。
(4.31mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯。在室温下搅拌20小时后，在真空中浓缩该
混合物且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分并在真空中蒸发溶剂后，得到521mg
(理论值的43%) 4-乙氧基-2-{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧
基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸。
[0987] LC-MS (方法5): Rt = 3.13 min; MS (ESIpos): m/z = 424 (M+H)+。
[0988] 在该中间体中，510mg通过超临界流体色谱法经由手性柱分离成单独非对映异构体(SFC；柱：DAICEL，AD-H 5u 250x20mm；流动速率：80ml/min；方法：AD-10% ETOH-80ml；压
力：100巴；波长：210nM)，得到100mg (20%)差向异构体1和141mg (28%)差向异构体2。
力：100巴；波长：210nM)，得到100mg (20%)差向异构体1和141mg (28%)差向异构体2。
[0989] 差向异构体1如下表征：。
[0990] 差向异构体2如下表征：。
[0991] 将33.6mg (0.079mmol)差向异构体1在30mg (0.079mmol) HATU和13.4mg (0.132mmol) 4-甲基吗啉存在的情况下与50mg (0.066mmol)中间体C66偶联，在HPLC纯化
后得到51mg (理论值的63%)完全保护的中间体4-{[(8S)-8-{2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,
5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]乙基}-2,2-二甲基-6,9,
14-三氧代-5-氧杂-7,10,13-三氮杂-2-硅杂十五烷-15-基]氨基}-3-{[(2R)-3-甲氧基-3-
氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸乙酯。
后得到51mg (理论值的63%)完全保护的中间体4-{[(8S)-8-{2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,
5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]乙基}-2,2-二甲基-6,9,
14-三氧代-5-氧杂-7,10,13-三氮杂-2-硅杂十五烷-15-基]氨基}-3-{[(2R)-3-甲氧基-3-
氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸乙酯。
[0992] 然后将49mg (0.042mmol)该中间体在室温下与0.5ml 2摩尔浓度氢氧化锂溶液一起在12ml THF/水1:1中搅拌30分钟，导致两个甲酯基均裂解。酸化且通过HPLC纯化后，得到
11mg (理论值的24%)二甲酸衍生物。
11mg (理论值的24%)二甲酸衍生物。
[0993] LC-MS (方法5): Rt = 4.68 min; MS (ESIpos): m/z = 1120 [M+H]+。
[0994] 最终，11mg (0.01mmol)该中间体如上述在三氟乙醇中用氯化锌完全脱保护。残余物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙腈/水冻干残余物后，得到3.7mg (理论值的
39%)标题化合物。
39%)标题化合物。
[0995] LC-MS (方法5): Rt = 2.45 min; MS (ESIpos): m/z = 832 [M+H]+。
[0996] 实施例M164-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-3-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
区域异构体2，差向异构体2(3R或3S)
LC-MS (方法5): Rt = 2.44 min; MS (EIpos): m/z = 832 [M+H]+。
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-3-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸/三氟乙酸(1:1)
区域异构体2，差向异构体2(3R或3S)
LC-MS (方法5): Rt = 2.44 min; MS (EIpos): m/z = 832 [M+H]+。
[0997] 实施例M15中所述的中间体差向异构体2类似于实施例M15中的描述反应：将33.6mg (0.079mmol)差向异构体2在30mg (0.079mmol) HATU和13.4mg
(0.132mmol) 4-甲基吗啉存在的情况下与50mg (0.066mmol)中间体C66偶联，在HPLC纯化
后得到51mg (理论值的63%)完全保护的中间体4-{[(8S)-8-{2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,
5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]乙基}-2,2-二甲基-6,9,
14-三氧代-5-氧杂-7,10,13-三氮杂-2-硅杂十五烷-15-基]氨基}-3-{[(2R)-3-甲氧基-3-
氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸乙酯。
(0.132mmol) 4-甲基吗啉存在的情况下与50mg (0.066mmol)中间体C66偶联，在HPLC纯化
后得到51mg (理论值的63%)完全保护的中间体4-{[(8S)-8-{2-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,
5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]乙基}-2,2-二甲基-6,9,
14-三氧代-5-氧杂-7,10,13-三氮杂-2-硅杂十五烷-15-基]氨基}-3-{[(2R)-3-甲氧基-3-
氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸乙酯。
[0998] 然后将49mg (0.042mmol)该中间体在室温下与0.5ml 2摩尔浓度氢氧化锂溶液一起在12ml THF/水1:1中搅拌30分钟，导致两个甲酯基均裂解。酸化且通过HPLC纯化后，得到
13.4mg (理论值的28%)二甲酸衍生物。
13.4mg (理论值的28%)二甲酸衍生物。
[0999] LC-MS (方法5): Rt = 4.66 min; MS (ESIpos): m/z = 1120 [M+H]+。
[1000] 最终，13.4mg (0.012mmol)该中间体如上述在三氟乙醇中用氯化锌完全脱保护。残余物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙腈/水冻干残余物后，得到7.5mg (理论
值的66%)标题化合物。
值的66%)标题化合物。
[1001] LC-MS (方法5): Rt = 2.44 min; MS (ESIpos): m/z = 832 [M+H]+。
[1002] 实施例M17(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基
丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酸盐酸盐(1:1)
将150mg (0.2mmol)中间体C53溶解于15ml DMF中，并添加2.29g (20.39mmol) DABCO。
将混合物在超声波浴中处理30分钟。然后通过添加1.17ml乙酸，将混合物调节至pH 3-4，且
在真空中浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化且相应级分在室温下在真空中浓缩。将残余物
置于溶于乙腈/水(1:1)中，添加5ml 4N盐酸且然后冻干。这得到81mg (理论值的68%)标题
化合物。
丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酸盐酸盐(1:1)
将150mg (0.2mmol)中间体C53溶解于15ml DMF中，并添加2.29g (20.39mmol) DABCO。
将混合物在超声波浴中处理30分钟。然后通过添加1.17ml乙酸，将混合物调节至pH 3-4，且
在真空中浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化且相应级分在室温下在真空中浓缩。将残余物
置于溶于乙腈/水(1:1)中，添加5ml 4N盐酸且然后冻干。这得到81mg (理论值的68%)标题
化合物。
[1003] LC-MS (方法5): Rt = 2.69 min; MS (EIpos): m/z = 514 [M+H]+。
[1004] 实施例M18N-[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]-L-谷氨酰胺/三氟乙酸(1:1)
首先，三氟乙酸/N-(2-氨基乙基)-N2-[(苄基氧基)羰基]-L-谷氨酰胺苄酯(1:1)使用
肽化学的经典方法制备。然后在HATU存在的情况下，该中间体与中间体C58偶联。随后，首先
苄基氧基羰基保护基和苄酯通过氢解裂解来移除，且然后使用氯化锌移除2-(三甲基甲硅
烷基)乙氧基羰基保护基。
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]-L-谷氨酰胺/三氟乙酸(1:1)
首先，三氟乙酸/N-(2-氨基乙基)-N2-[(苄基氧基)羰基]-L-谷氨酰胺苄酯(1:1)使用
肽化学的经典方法制备。然后在HATU存在的情况下，该中间体与中间体C58偶联。随后，首先
苄基氧基羰基保护基和苄酯通过氢解裂解来移除，且然后使用氯化锌移除2-(三甲基甲硅
烷基)乙氧基羰基保护基。
[1005] LC-MS (方法6): Rt = 1.91 min; MS (EIpos): m/z = 685 [M+H]+。
[1006] 实施例M19N6-(N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)-L-赖氨酸/三氟乙酸(1:1)
最初，三氟乙酸/2-(三甲基甲硅烷基)乙基-N2-[(苄基氧基)羰基]-L-赖氨酸酯(1:1)
使用肽化学中已知的经典保护基操作来制备。然后在HATU存在的情况下，该中间体与中间
体C61偶联。随后，首先2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基保护基和2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
使用氯化锌裂解。最终，标题化合物通过苄基氧基羰基保护基的氢解裂解和通过制备型
HPLC纯化来获得。
二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基)-L-赖氨酸/三氟乙酸(1:1)
最初，三氟乙酸/2-(三甲基甲硅烷基)乙基-N2-[(苄基氧基)羰基]-L-赖氨酸酯(1:1)
使用肽化学中已知的经典保护基操作来制备。然后在HATU存在的情况下，该中间体与中间
体C61偶联。随后，首先2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基保护基和2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
使用氯化锌裂解。最终，标题化合物通过苄基氧基羰基保护基的氢解裂解和通过制备型
HPLC纯化来获得。
[1007] HPLC (方法11): Rt = 1.65 min；。
[1008] 实施例M20(1R,4R,27R,33R)-1-氨基-32-(3-氨基丙基)-33-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡
咯-2-基]-34,34-二甲基-6,9,25,31-四氧代-13,16,19,22-四氧杂-3,29-二硫杂-7,10,
26,32-四氮杂三十五烷-1,4,27-三甲酸/三氟乙酸(1:2)
首先，在DMF中在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将L-半胱氨酸甲酯盐酸盐(1:1)用1-
({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮转化为N-{[2-(三甲基甲硅
烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸甲酯。
咯-2-基]-34,34-二甲基-6,9,25,31-四氧代-13,16,19,22-四氧杂-3,29-二硫杂-7,10,
26,32-四氮杂三十五烷-1,4,27-三甲酸/三氟乙酸(1:2)
首先，在DMF中在N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将L-半胱氨酸甲酯盐酸盐(1:1)用1-
({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氧基)吡咯烷-2,5-二酮转化为N-{[2-(三甲基甲硅
烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸甲酯。
[1009] 将408mg (1.93mmol)市售3-溴-4-甲氧基-4-氧代丁酸和180mg (0.644mmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸甲酯溶解于8ml DMF中，并添加147mg
(0.97mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯。在室温下搅拌18小时后，添加另外136mg
(0.64mmol) 3-溴-4-甲氧基-4-氧代丁酸和147mg (0.97mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十
一-7-烯，并将混合物在室温下再搅拌12小时且然后在真空中浓缩。残余物通过制备型HPLC
纯化。合并相应级分并在真空中蒸发溶剂后，得到151mg (理论值的57%) 4-甲氧基-3-
{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-
氧代丁酸。
(0.97mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯。在室温下搅拌18小时后，添加另外136mg
(0.64mmol) 3-溴-4-甲氧基-4-氧代丁酸和147mg (0.97mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十
一-7-烯，并将混合物在室温下再搅拌12小时且然后在真空中浓缩。残余物通过制备型HPLC
纯化。合并相应级分并在真空中蒸发溶剂后，得到151mg (理论值的57%) 4-甲氧基-3-
{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-
氧代丁酸。
[1010] LC-MS (方法12): Rt = 1.74 min; MS (ESIneg): m/z = 408 (M-H)-。
[1011] 将3.66mg (8.93μmol) 4-甲氧基-3-{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸在3.66mg (8.93μmol) HATU和1.6μ
l (15μmol) 4-甲基吗啉存在的情况下与13.0mg (7.44μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,
11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[15-(甘氨酰基氨基)-4,7,10,13-四氧杂十五烷-1-
酰基]-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C80)偶联，在HPLC纯化后得到3.9mg (理论值的
37%)完全保护的中间体S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-
[15-({N-[(8R,11R)-8,11-双(甲氧基羰基)-2,2-二甲基-6,13-二氧代-5-氧杂-10-硫杂-
7-氮杂-2-硅杂十三烷-13-基]甘氨酰基}氨基)-4,7,10,13-四氧杂十五烷-1-酰基]-L-半
胱氨酸。
l (15μmol) 4-甲基吗啉存在的情况下与13.0mg (7.44μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,
11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[15-(甘氨酰基氨基)-4,7,10,13-四氧杂十五烷-1-
酰基]-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C80)偶联，在HPLC纯化后得到3.9mg (理论值的
37%)完全保护的中间体S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-
[15-({N-[(8R,11R)-8,11-双(甲氧基羰基)-2,2-二甲基-6,13-二氧代-5-氧杂-10-硫杂-
7-氮杂-2-硅杂十三烷-13-基]甘氨酰基}氨基)-4,7,10,13-四氧杂十五烷-1-酰基]-L-半
胱氨酸。
[1012] 然后3.90mg (2.76μmol)该中间体在室温下与35μl 2摩尔浓度氢氧化锂溶液一起在1.0ml THF/水3：1中搅拌15分钟，导致两个甲酯基均裂解。通过HPLC纯化后，得到3.60mg
(理论值的94%)二甲酸衍生物。
(理论值的94%)二甲酸衍生物。
[1013] LC-MS (方法5): Rt = 4.83 min; MS (ESIpos): m/z = 1385 [M+H]+。
[1014] 最终，3.60mg (2.60μmol)该中间体如上述在三氟乙醇中用氯化锌完全脱保护。残余物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙腈/水冻干残余物后，得到1.92mg (理论值
的55%)标题化合物。
的55%)标题化合物。
[1015] LC-MS (方法5): Rt = 2.72 min; MS (ESIneg): m/z = 1094 [M-H]-。
[1016] 实施例M21(2R,24S,27R)-27-氨基-2-[({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯
基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)甲基]-24-(羧基甲基)-4,
20,23-三氧代-7,10,13,16-四氧杂-25-硫杂-3,19,22-三氮杂二十八烷-1,28-二酸/三氟
乙酸(1:2)
将742.8mg (3.3mmol)市售2-溴-4-乙氧基-4-氧代丁酸和802mg (2.87mmol) N-{[2-
(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸甲酯溶解于32ml DMF中，并添加655.4mg
(4.31mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯。在室温下搅拌20小时后，在真空中浓缩混
合物且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分并在真空中蒸发溶剂后，得到521mg (理
论值的43%) 4-乙氧基-2-{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰
基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸。
基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)甲基]-24-(羧基甲基)-4,
20,23-三氧代-7,10,13,16-四氧杂-25-硫杂-3,19,22-三氮杂二十八烷-1,28-二酸/三氟
乙酸(1:2)
将742.8mg (3.3mmol)市售2-溴-4-乙氧基-4-氧代丁酸和802mg (2.87mmol) N-{[2-
(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-半胱氨酸甲酯溶解于32ml DMF中，并添加655.4mg
(4.31mmol) 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯。在室温下搅拌20小时后，在真空中浓缩混
合物且残余物通过制备型HPLC纯化。合并相应级分并在真空中蒸发溶剂后，得到521mg (理
论值的43%) 4-乙氧基-2-{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰
基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸。
[1017] LC-MS (方法5): Rt = 3.13 min; MS (ESIpos): m/z = 424 (M+H)+。
[1018] 将4.36mg (10.3μmol) 4-乙氧基-2-{[(2R)-3-甲氧基-3-氧代-2-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}氨基)丙基]硫基}-4-氧代丁酸在3.92mg (10.3μmol) HATU和1.9μ
l (17μmol) 4-甲基吗啉存在的情况下与15.0mg (8.59μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,
11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[15-(甘氨酰基氨基)-4,7,10,13-四氧杂十五烷-1-
酰基]-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C80)偶联，在HPLC纯化后得到3.6mg (理论值的
26%)完全保护的中间体S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-
[15-({N-[(8R,11S)-11-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-8-(甲氧基羰基)-2,2-二甲基-6,12-二
氧代-5-氧杂-10-硫杂-7-氮杂-2-硅杂十二烷-12-基]甘氨酰基}氨基)-4,7,10,13-四氧杂
十五烷-1-酰基]-L-半胱氨酸。
l (17μmol) 4-甲基吗啉存在的情况下与15.0mg (8.59μmol) S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-
(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,
11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-[15-(甘氨酰基氨基)-4,7,10,13-四氧杂十五烷-1-
酰基]-L-半胱氨酸/三氟乙酸(1:1)(中间体C80)偶联，在HPLC纯化后得到3.6mg (理论值的
26%)完全保护的中间体S-(11-{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-
二甲基丙基}-2,2-二甲基-6,12-二氧代-5-氧杂-7,11-二氮杂-2-硅杂十三烷-13-基)-N-
[15-({N-[(8R,11S)-11-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-8-(甲氧基羰基)-2,2-二甲基-6,12-二
氧代-5-氧杂-10-硫杂-7-氮杂-2-硅杂十二烷-12-基]甘氨酰基}氨基)-4,7,10,13-四氧杂
十五烷-1-酰基]-L-半胱氨酸。
[1019] 然后将6.20mg (2.82μmol)该中间体在室温下与35μl 2摩尔浓度氢氧化锂溶液一起在1.0ml THF/水1:1中搅拌15分钟，使得两个酯基均裂解。酸化且通过HPLC纯化后，得到
3.60mg (理论值的92%)二甲酸衍生物。
3.60mg (理论值的92%)二甲酸衍生物。
[1020] LC-MS (方法5): Rt = 4.71 min; MS (ESIpos): m/z = 1385 [M+H]+。
[1021] 最终，3.60mg (1.69μmol)该中间体如上述在三氟乙醇中用氯化锌完全脱保护。残余物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙腈/水冻干残余物后，得到0.88mg (理论值
的39%)标题化合物。
的39%)标题化合物。
[1022] LC-MS (方法5): Rt = 2.72 min; MS (ESIneg): m/z = 1094 [M-H]-。
[1023] 实施例M22(2R,27R)-27-氨基-2-[({2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)甲基]-24-(羧基甲基)-4,20,23-
三氧代-7,10,13,16-四氧杂-25-硫杂-3,19,22-三氮杂二十八烷-1,28-二酸-三氟乙酸(1:
2)和
(1R,27R,33R)-1-氨基-32-(3-氨基丙基)-33-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-34,34-二甲基-6,9,25,31-四氧代-13,16,19,22-四氧杂-3,29-二硫杂-7,10,26,
32-四氮杂三十五烷-1,4,27-三甲酸-三氟乙酸(1:2)
将16.5mg (0.015mmol) S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-
1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-[1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-
吡咯-1-基)-2,18-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十八烷-18-基]-L-半胱氨酸-三氟乙
酸(1:1)(中间体F257)和8.18mg (0.031mmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-
半胱氨酸溶解于2ml DMF中且混合物在室温下搅拌18小时。反应混合物在真空下蒸发。将残
余物(28.9mg)溶解于3mL THF/水1:1中。添加0.046mL 2M氢氧化锂水溶液且混合物在室温
下搅拌3小时。随后，混合物用5.2μl (0.092mmol)乙酸调节至 7的pH值。反应混合物通过制
~
备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流速：50mL/min，MeCN/水；0.1% TFA)立即纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。获得12.1mg (经2个阶段，58%)区域异构的受保
护的中间体。
吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}硫基)甲基]-24-(羧基甲基)-4,20,23-
三氧代-7,10,13,16-四氧杂-25-硫杂-3,19,22-三氮杂二十八烷-1,28-二酸-三氟乙酸(1:
2)和
(1R,27R,33R)-1-氨基-32-(3-氨基丙基)-33-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-
2-基]-34,34-二甲基-6,9,25,31-四氧代-13,16,19,22-四氧杂-3,29-二硫杂-7,10,26,
32-四氮杂三十五烷-1,4,27-三甲酸-三氟乙酸(1:2)
将16.5mg (0.015mmol) S-{2-[(3-氨基丙基){(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-
1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲基丙基}氨基]-2-氧代乙基}-N-[1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-
吡咯-1-基)-2,18-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十八烷-18-基]-L-半胱氨酸-三氟乙
酸(1:1)(中间体F257)和8.18mg (0.031mmol) N-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]羰基}-L-
半胱氨酸溶解于2ml DMF中且混合物在室温下搅拌18小时。反应混合物在真空下蒸发。将残
余物(28.9mg)溶解于3mL THF/水1:1中。添加0.046mL 2M氢氧化锂水溶液且混合物在室温
下搅拌3小时。随后，混合物用5.2μl (0.092mmol)乙酸调节至 7的pH值。反应混合物通过制
~
备型RP-HPLC(柱：Reprosil 125x30；10μ，流速：50mL/min，MeCN/水；0.1% TFA)立即纯化。在真空中蒸发溶剂并在高真空下干燥残余物。获得12.1mg (经2个阶段，58%)区域异构的受保
护的中间体。
[1024] LC-MS (方法12): Rt = 1.82 min; MS (ESIpos): m/z = 1240 (M+H)+。
[1025] 在最终步骤中，将12.1mg (0.009mmol)该中间体溶解于2ml 2,2,2-三氟乙醇中。添加7.3mg (0.054mmol)氯化锌并将混合物在50℃下搅拌2小时。随后，添加15.7mg
(0.054mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸且产物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙
腈/水冻干残余物后，获得6.4mg (59%)标题化合物作为区域异构体混合物。
(0.054mmol)乙二胺-N,N,N’,N’-四乙酸且产物通过制备型HPLC纯化。浓缩相应级分并从乙
腈/水冻干残余物后，获得6.4mg (59%)标题化合物作为区域异构体混合物。
[1026] LC-MS (方法1): Rt = 0.86 min; MS (ESIpos): m/z = 1096 (M+H)+。
[1027] 实施例M23N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基-L-谷氨酸-三氟乙酸(1:1)
首先，在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将L-谷氨酸二叔丁酯盐酸盐(1:1)与
中间体C61偶联。随后，将保护的中间体置于三氟乙醇中且通过在50℃下在氯化锌存在的情
况下搅拌过夜来完全脱保护。EDTA添加后，通过制备型HPLC纯化来进行后处理。
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基-L-谷氨酸-三氟乙酸(1:1)
首先，在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将L-谷氨酸二叔丁酯盐酸盐(1:1)与
中间体C61偶联。随后，将保护的中间体置于三氟乙醇中且通过在50℃下在氯化锌存在的情
况下搅拌过夜来完全脱保护。EDTA添加后，通过制备型HPLC纯化来进行后处理。
[1028] LC-MS (方法12): Rt = 1.45 min; MS (ESIpos): m/z = 714 [M+H]+。
[1029] 实施例M24N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基-D-谷氨酸-三氟乙酸(1:1)
首先，在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将D-谷氨酸二叔丁酯盐酸盐(1:1)与
中间体C61偶联。随后，将保护的中间体置于三氟乙醇中且通过在50℃下在氯化锌存在的情
况下搅拌来完全脱保护。EDTA添加后，通过制备型HPLC纯化来进行后处理。
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-β-丙氨酰基-D-谷氨酸-三氟乙酸(1:1)
首先，在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将D-谷氨酸二叔丁酯盐酸盐(1:1)与
中间体C61偶联。随后，将保护的中间体置于三氟乙醇中且通过在50℃下在氯化锌存在的情
况下搅拌来完全脱保护。EDTA添加后，通过制备型HPLC纯化来进行后处理。
[1030] LC-MS (方法12): Rt = 1.41 min; MS (ESIpos): m/z = 714 [M+H]+。
[1031] 实施例M25N-{(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-基]-2,2-二甲
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-L-谷氨酸-三氟乙酸(1:1)
首先，在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将L-谷氨酸二叔丁酯盐酸盐(1:1)与
中间体C61偶联。在下一步骤中，通过在10%活性炭载钯上在甲醇中在室温下在标准氢压力
下氢化45分钟来移除Z保护基。随后，将部分保护的中间体置于三氟乙醇中且通过在50℃下
在氯化锌存在的情况下搅拌7小时来完全脱保护。EDTA添加后，通过制备型HPLC纯化来进行
后处理。
基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}-L-谷氨酸-三氟乙酸(1:1)
首先，在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在的情况下将L-谷氨酸二叔丁酯盐酸盐(1:1)与
中间体C61偶联。在下一步骤中，通过在10%活性炭载钯上在甲醇中在室温下在标准氢压力
下氢化45分钟来移除Z保护基。随后，将部分保护的中间体置于三氟乙醇中且通过在50℃下
在氯化锌存在的情况下搅拌7小时来完全脱保护。EDTA添加后，通过制备型HPLC纯化来进行
后处理。
[1032] LC-MS (方法12): Rt = 1.44 min; MS (ESIpos): m/z = 643 [M+H]+。
[1033] 实施例M264-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-2-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸-三氟乙酸(1:1)
区域异构体1，差向异构体混合物
本实施例描述实施例13和实施例14的化合物的差向异构体混合物。该合成类似于实施
例13进行，其中省略两种差向异构体通过超临界流体色谱法的分离且标题化合物作为差向
异构体混合物来制备。
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-2-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸-三氟乙酸(1:1)
区域异构体1，差向异构体混合物
本实施例描述实施例13和实施例14的化合物的差向异构体混合物。该合成类似于实施
例13进行，其中省略两种差向异构体通过超临界流体色谱法的分离且标题化合物作为差向
异构体混合物来制备。
[1034] LC-MS (方法5): Rt = 2.43 min; MS (ESIpos): m/z = 832 [M+H]+。
[1035] 实施例M274-[(2-{[2-({(2S)-2-氨基-4-[{(1R)-1-[1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-1H-吡咯-2-
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-3-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸-三氟乙酸(1:1)
区域异构体2，差向异构体混合物
本实施例描述实施例15和实施例16的化合物的差向异构体混合物。该合成类似于实施
例15进行，其中省略两种差向异构体通过超临界流体色谱法的分离且标题化合物作为差向
异构体混合物来制备。
基]-2,2-二甲基丙基}(乙醇酰基)氨基]丁酰基}氨基)乙基]氨基}-2-氧代乙基)氨基]-3-
{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫基}-4-氧代丁酸-三氟乙酸(1:1)
区域异构体2，差向异构体混合物
本实施例描述实施例15和实施例16的化合物的差向异构体混合物。该合成类似于实施
例15进行，其中省略两种差向异构体通过超临界流体色谱法的分离且标题化合物作为差向
异构体混合物来制备。
[1036] LC-MS (方法5): Rt = 2.45 min; MS (EIpos): m/z = 832 [M+H]+。
[1037] 实施例ADC经由顺丁烯二酰亚胺基团偶联至抗体的半胱氨酸侧链的如实施例的结构式中所示的
ADC，根据接头和偶联程序，主要以各自所示的开环或闭环形式存在。然而，制备物可包含小
含量的各自的其它形式。
ADC，根据接头和偶联程序，主要以各自所示的开环或闭环形式存在。然而，制备物可包含小
含量的各自的其它形式。
[1038] 实施例104L1在氩气下，将0.229 mg TCEP于395 µl PBS缓冲液中的溶液添加至4124 µl PBS缓冲液
中的40 mg抗B7H3 AK1A (c=9.7 mg/ml)中。将该混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加溶解
于400 µl DMSO中的1.72 mg (0.00027 mmol)中间体F104。在室温下搅拌另外90 min后，将
®
该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 7.2平衡的PD 10柱(Sephadex G-25, GE Healthcare)
并用PBS缓冲液pH 7.2洗脱。然后，洗脱物用超离心浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释，然
后再次浓缩。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度: 11.67 mg/ml
药物/mAb比: 3.3
该ADC还可以部分为结合抗体的水解开环琥珀酰胺的形式。
中的40 mg抗B7H3 AK1A (c=9.7 mg/ml)中。将该混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加溶解
于400 µl DMSO中的1.72 mg (0.00027 mmol)中间体F104。在室温下搅拌另外90 min后，将
®
该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 7.2平衡的PD 10柱(Sephadex G-25, GE Healthcare)
并用PBS缓冲液pH 7.2洗脱。然后，洗脱物用超离心浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释，然
后再次浓缩。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度: 11.67 mg/ml
药物/mAb比: 3.3
该ADC还可以部分为结合抗体的水解开环琥珀酰胺的形式。
[1039] 实施例173L1在此，PBS中的5 mg抗B7H3 AK1A (c=9.7 mg/ml)用于与中间体F173偶联，且在
Sephadex纯化后，该混合物通过超离心进行浓缩并用PBS再稀释。
Sephadex纯化后，该混合物通过超离心进行浓缩并用PBS再稀释。
[1040] 蛋白浓度: 1.57 mg/ml药物/mAb比: 3.4。
[1041] 实施例194在此，515 µl PBS中的5 mg抗B7H3 AK1A (c=9.7 mg/ml)用于与中间体F194偶联。首
先，加入溶解在50 µl DMSO中的5 eq中间体F194，在室温下搅拌1 h后，再次加入相同量，该
混合物然后在室温下搅拌另外一小时。该混合物随后在Sephadex柱上纯化，然后通过超离
心进行浓缩并用PBS再稀释。
先，加入溶解在50 µl DMSO中的5 eq中间体F194，在室温下搅拌1 h后，再次加入相同量，该
混合物然后在室温下搅拌另外一小时。该混合物随后在Sephadex柱上纯化，然后通过超离
心进行浓缩并用PBS再稀释。
[1042] 蛋白浓度: 0.51 mg/ml药物/mAb比: 2.4。
[1043] 实施例194L2在此，510 µl PBS中的5 mg抗B7H3 AK1A (c=9.8 mg/ml)用于与中间体F194偶联。首
先，加入溶解在50 µl DMSO中的5 eq中间体F194，在室温下搅拌1 h后再次加入相同量，该
混合物在室温下搅拌另外一小时。该反应随后在Sephadex柱上纯化，然后通过超离心进行
浓缩并用PBS再稀释。
先，加入溶解在50 µl DMSO中的5 eq中间体F194，在室温下搅拌1 h后再次加入相同量，该
混合物在室温下搅拌另外一小时。该反应随后在Sephadex柱上纯化，然后通过超离心进行
浓缩并用PBS再稀释。
[1044] 蛋白浓度: 1.02 mg/ml药物/mAb比: 2.9。
[1045] 实施例208L2在氩气下，将0.287 mg TCEP于0.5 ml PBS缓冲液中的溶液添加至4.9 ml PBS缓冲液
中的50 mg抗B7H3 AK1B (c=10.2 mg/ml)中。将该混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加溶
解于500 µl DMSO中的2.15 mg (0.00267 mmol)中间体F104。在室温下搅拌另外90 min后，
将该混合物用已预先调节至pH 8的4100 µl PBS缓冲液稀释。
中的50 mg抗B7H3 AK1B (c=10.2 mg/ml)中。将该混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加溶
解于500 µl DMSO中的2.15 mg (0.00267 mmol)中间体F104。在室温下搅拌另外90 min后，
将该混合物用已预先调节至pH 8的4100 µl PBS缓冲液稀释。
[1046] 将该溶液然后施加至已用PBS缓冲液pH 8平衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。然后，洗脱物用PBS缓冲液pH 8稀释至15 ml的总体
积。这一溶液在氩气下在室温下搅拌过夜，然后再使用PD-10柱再缓冲至pH 7.2。然后通过
超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释，然后再次浓缩。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度: 14.98 mg/ml
药物/mAb比: 2.9。
积。这一溶液在氩气下在室温下搅拌过夜，然后再使用PD-10柱再缓冲至pH 7.2。然后通过
超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释，然后再次浓缩。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度: 14.98 mg/ml
药物/mAb比: 2.9。
[1047] 实施例240L1在氩气下，将0.029 mg TCEP于50 µl PBS缓冲液中的溶液添加至516 µl PBS缓冲液中
的5 mg抗B7H3 AK1A (c=9.7 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的1834 µl PBS缓
冲液稀释并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解于100 µl DMSO中的0.199 mg (0.00023
mmol)中间体F240。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。洗脱物在氩气
下在室温下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩并用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些条
件下，ADC的一部分还可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度: 0.89 mg/ml
药物/mAb比: 2.7。
的5 mg抗B7H3 AK1A (c=9.7 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的1834 µl PBS缓
冲液稀释并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解于100 µl DMSO中的0.199 mg (0.00023
mmol)中间体F240。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。洗脱物在氩气
下在室温下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩并用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些条
件下，ADC的一部分还可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度: 0.89 mg/ml
药物/mAb比: 2.7。
[1048] 实施例240L2在氩气下，将0.029 mg TCEP于50 µl PBS缓冲液中的溶液添加至510 µl PBS缓冲液中
的5 mg抗B7H3 AK1B抗体(c=9.8 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的1840 µl PBS
缓冲液稀释，并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解在100 µl DMSO中的0.199 mg (0.00023
mmol)中间体F240。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室
温下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些
条件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.35 mg/ml
药物/mAb比:3.5。
的5 mg抗B7H3 AK1B抗体(c=9.8 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的1840 µl PBS
缓冲液稀释，并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解在100 µl DMSO中的0.199 mg (0.00023
mmol)中间体F240。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室
温下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些
条件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.35 mg/ml
药物/mAb比:3.5。
[1049] 实施例257L1在氩气下，将0.029 mg TCEP于50 µl PBS缓冲液中的溶液添加至516 µl PBS缓冲液中
的5 mg抗B7H3 AK1A抗体(c=9.7 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的1834 µl PBS
缓冲液稀释，并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解在100 µl DMSO中的0.250 mg (0.00023
mmol)中间体F257。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室
温下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些
条件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:0.91 mg/ml
药物/mAb比:2.4。
的5 mg抗B7H3 AK1A抗体(c=9.7 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的1834 µl PBS
缓冲液稀释，并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解在100 µl DMSO中的0.250 mg (0.00023
mmol)中间体F257。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室
温下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些
条件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:0.91 mg/ml
药物/mAb比:2.4。
[1050] 实施例257L2在氩气下，将0.29 mg TCEP于500 µl PBS缓冲液中的溶液添加至4810 µl PBS缓冲液
中的50 mg抗B7H3 AK1B抗体(c=10.4 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的4100 µl
PBS缓冲液稀释，并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解在500 µl DMSO中的2.856 mg (0.007
mmol)中间体F257。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室
温下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些
条件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:10.81 mg/ml
药物/mAb比:4.5。
中的50 mg抗B7H3 AK1B抗体(c=10.4 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的4100 µl
PBS缓冲液稀释，并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解在500 µl DMSO中的2.856 mg (0.007
mmol)中间体F257。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室
温下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些
条件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:10.81 mg/ml
药物/mAb比:4.5。
[1051] 实施例259L1在此，515 µl PBS中的5 mg抗B7H3 AK1A(c=9.7 mg/ml)用于与中间体F259偶联。抗体
的还原时间为30 min，在添加0.245 mg (0.267 µmol) F259后，将该混合物在室温下搅拌
20 h并然后在 Sephadex上纯化。最终通过超离心进行浓缩并用PBS再稀释。
的还原时间为30 min，在添加0.245 mg (0.267 µmol) F259后，将该混合物在室温下搅拌
20 h并然后在 Sephadex上纯化。最终通过超离心进行浓缩并用PBS再稀释。
[1052] 蛋白浓度:1.43 mg/ml药物/mAb比:3.0。
[1053] 实施例260L2在氩气下，将0.029 mg TCEP于50 µl PBS缓冲液中的溶液添加至510 µl PBS缓冲液中
的5 mg抗B7H3 AK1B抗体(c=9.8 mg/ml)中。该混合物在室温下搅拌30 min，然后加入溶解在
50 µl DMSO中的0.302 mg (0.00027 mmol)中间体F260。在室温下搅拌另外90 min后，将该
混合物用已预先调节至pH 8的1890 µl PBS缓冲液稀释。
的5 mg抗B7H3 AK1B抗体(c=9.8 mg/ml)中。该混合物在室温下搅拌30 min，然后加入溶解在
50 µl DMSO中的0.302 mg (0.00027 mmol)中间体F260。在室温下搅拌另外90 min后，将该
混合物用已预先调节至pH 8的1890 µl PBS缓冲液稀释。
[1054] 将该溶液然后施加至已用PBS缓冲液pH 8平衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室温下在氩气下搅拌过夜，然后通过超
离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些条件下，ADC的一部分也可以闭环形式
存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.05 mg/ml
药物/mAb比:3.6。
离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些条件下，ADC的一部分也可以闭环形式
存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.05 mg/ml
药物/mAb比:3.6。
[1055] 实施例263L2在氩气下，将0.029 mg TCEP于50 µl PBS缓冲液中的溶液添加至481 µl mlPBS缓冲液
中的5 mg抗B7H3 AK1B抗体(c=10.4 mg/ml)中，并在室温下搅拌30 min。然后加入溶解在50
µl DMSO中的0.209 mg (0.00023 mmol)中间体F263。在室温下搅拌另外90 min后，将该混
合物用已预先调节至pH 8的1910 µl PBS缓冲液稀释，然后施加至已用PBS缓冲液pH 8平衡
®
的PD 10柱(Sephadex G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室温
下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些条
件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.50 mg/ml
药物/mAb比:3.6。
中的5 mg抗B7H3 AK1B抗体(c=10.4 mg/ml)中，并在室温下搅拌30 min。然后加入溶解在50
µl DMSO中的0.209 mg (0.00023 mmol)中间体F263。在室温下搅拌另外90 min后，将该混
合物用已预先调节至pH 8的1910 µl PBS缓冲液稀释，然后施加至已用PBS缓冲液pH 8平衡
®
的PD 10柱(Sephadex G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室温
下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些条
件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.50 mg/ml
药物/mAb比:3.6。
[1056] 实施例270L1在氩气下，将0.029 mg TCEP于50 µl PBS缓冲液中的溶液添加至516 µl PBS缓冲液中
的5 mg抗B7H3 AK1A抗体(c=9.7 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的1834 µl PBS
缓冲液稀释，并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解在100 µl DMSO中的0.188 mg (0.00023
mmol)中间体F270。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室
温下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些
条件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.02 mg/ml
药物/mAb比:2.8。
的5 mg抗B7H3 AK1A抗体(c=9.7 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的1834 µl PBS
缓冲液稀释，并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解在100 µl DMSO中的0.188 mg (0.00023
mmol)中间体F270。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室
温下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些
条件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.02 mg/ml
药物/mAb比:2.8。
[1057] 实施例274L1在氩气下，将0.029 mg TCEP于50 µl PBS缓冲液中的溶液添加至516 µl PBS缓冲液中
的5 mg抗B7H3 AK1A抗体(c=9.7 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的1834 µl PBS
缓冲液稀释，并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解在100 µl DMSO中的0.232 mg (0.00023
mmol)中间体F274。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室
温下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些
条件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.13 mg/ml
药物/mAb比:2.9。
的5 mg抗B7H3 AK1A抗体(c=9.7 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的1834 µl PBS
缓冲液稀释，并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解在100 µl DMSO中的0.232 mg (0.00023
mmol)中间体F274。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室
温下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些
条件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.13 mg/ml
药物/mAb比:2.9。
[1058] 实施例275L2在氩气下，将0.029 mg TCEP于50 µl PBS缓冲液中的溶液添加至510 µl PBS缓冲液中
的5 mg抗B7H3 AK1B抗体(c=9.8 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的1840 µl PBS
缓冲液稀释，并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解在100 µl DMSO中的0.229 mg (0.00023
mmol)中间体F275。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室
温下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些
条件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.18 mg/ml
药物/mAb比:3.8。
的5 mg抗B7H3 AK1B抗体(c=9.8 mg/ml)中。将该混合物用已预先调节至pH 8的1840 µl PBS
缓冲液稀释，并在室温下搅拌1 h。然后添加溶解在100 µl DMSO中的0.229 mg (0.00023
mmol)中间体F275。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物施加至已用PBS缓冲液pH 8平
衡的PD 10柱(Sephadex® G-25, GE Healthcare)并用PBS缓冲液pH 8洗脱。该洗脱物在室
温下在氩气下搅拌过夜，然后通过超离心进行浓缩，用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。在这些
条件下，ADC的一部分也可以闭环形式存在。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.18 mg/ml
药物/mAb比:3.8。
[1059] 实施例281L2在此，pH 7.2的510 µl PBS 中的5 mg抗B7H3 AK1B(c=9.8 mg/ml)用于与中间体F281
偶联。在0.029 mg TCEP存在下，抗体的还原时间为30 min。在添加50 µl DMSO中的0.22 mg
(0.23 µmol) F281后，将混合物然后在室温下搅拌20 h并随后在 Sephadex上纯化。最终通
过超离心进行浓缩并用PBS再稀释。
偶联。在0.029 mg TCEP存在下，抗体的还原时间为30 min。在添加50 µl DMSO中的0.22 mg
(0.23 µmol) F281后，将混合物然后在室温下搅拌20 h并随后在 Sephadex上纯化。最终通
过超离心进行浓缩并用PBS再稀释。
[1060] 蛋白浓度:1.32 mg/ml药物/mAb比:2.4。
[1061] 实施例284L2在氩气下，将0.029 mg TCEP于50 µl PBS缓冲液中的溶液添加至510 µl PBS缓冲液中
的5 mg抗B7H3 AK1B (c=9.8 mg/ml)中，并在室温下搅拌30 min。然后加入溶解在50 µl
DMSO中的0.26 mg (0.23 µmol)中间体F284。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物用
PBS缓冲液pH 8补足至2.5 ml，然后施加至用PBS缓冲液pH 8平衡的PD 10柱(Sephadex® G-
25, GE Healthcare)，用PBS缓冲液pH 8洗脱并然后在室温下搅拌过夜。洗脱物然后通过超
离心浓缩并用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.34 mg/ml
药物/mAb比:3.0。
的5 mg抗B7H3 AK1B (c=9.8 mg/ml)中，并在室温下搅拌30 min。然后加入溶解在50 µl
DMSO中的0.26 mg (0.23 µmol)中间体F284。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物用
PBS缓冲液pH 8补足至2.5 ml，然后施加至用PBS缓冲液pH 8平衡的PD 10柱(Sephadex® G-
25, GE Healthcare)，用PBS缓冲液pH 8洗脱并然后在室温下搅拌过夜。洗脱物然后通过超
离心浓缩并用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.34 mg/ml
药物/mAb比:3.0。
[1062] 实施例296L2在氩气下，将0.029 mg TCEP于50 µl PBS缓冲液中的溶液添加至510 µl PBS缓冲液中
的5 mg抗B7H3 AK1B (c=9.8 mg/ml)中，并在室温下搅拌30 min。然后加入溶解在50 µl
DMSO中的0.21 mg (0.23 µmol)中间体F296。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物用
PBS缓冲液pH 8补足至2.5 ml，然后施加至用PBS缓冲液pH 8平衡的PD 10柱(Sephadex® G-
25, GE Healthcare)，用PBS缓冲液pH 8洗脱并然后在氩气下在室温下搅拌过夜。洗脱物然
后通过超离心进行浓缩并用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.31 mg/ml
药物/mAb比:3.2。
的5 mg抗B7H3 AK1B (c=9.8 mg/ml)中，并在室温下搅拌30 min。然后加入溶解在50 µl
DMSO中的0.21 mg (0.23 µmol)中间体F296。在室温下搅拌另外90 min后，将该混合物用
PBS缓冲液pH 8补足至2.5 ml，然后施加至用PBS缓冲液pH 8平衡的PD 10柱(Sephadex® G-
25, GE Healthcare)，用PBS缓冲液pH 8洗脱并然后在氩气下在室温下搅拌过夜。洗脱物然
后通过超离心进行浓缩并用PBS缓冲液(pH 7.2)再稀释。所得的ADC批次如下表征：
蛋白浓度:1.31 mg/ml
药物/mAb比:3.2。
[1063] 实施例297L1 (异构体1)在此，pH 7.2的510 µl PBS 中的5 mg抗B7H3 AK1A(c=9.7 mg/ml)用于与中间体F297
偶联。在0.029 mg TCEP存在下，抗体的还原时间为30 min。在添加50 µl DMSO中的0.23 mg
(0.26 µmol) F297后，将该混合物然后在室温下搅拌2 h并随后在 Sephadex上纯化。最终
通过超离心进行浓缩并用PBS再稀释。
偶联。在0.029 mg TCEP存在下，抗体的还原时间为30 min。在添加50 µl DMSO中的0.23 mg
(0.26 µmol) F297后，将该混合物然后在室温下搅拌2 h并随后在 Sephadex上纯化。最终
通过超离心进行浓缩并用PBS再稀释。
[1064] 蛋白浓度:0.97 mg/ml药物/mAb比:2.4。
[1065] 实施例297L2 (异构体1)在此，pH 7.2的515 µl PBS 中的5 mg抗B7H3 AK1B(c=9.8 mg/ml)用于与中间体F297
偶联。在0.029 mg TCEP存在下，抗体的还原时间为30 min。在添加50 µl DMSO中的0.23 mg
(0.26 µmol) F297后，在室温下搅拌2 h并随后在 Sephadex上纯化。最终通过超离心进行
浓缩并用PBS再稀释。
偶联。在0.029 mg TCEP存在下，抗体的还原时间为30 min。在添加50 µl DMSO中的0.23 mg
(0.26 µmol) F297后，在室温下搅拌2 h并随后在 Sephadex上纯化。最终通过超离心进行
浓缩并用PBS再稀释。
[1066] 蛋白浓度:1.43 mg/ml药物/mAb比:3.1。
[1067] C：生物学功效的评估根据本发明的化合物的生物作用可通过下述测定进行显示：
a. C-1a ADC针对B7H3的细胞毒性作用的测定
用多种细胞系进行抗B7H3 ADC的细胞毒性作用的分析：
A498：人肾癌细胞，ATCC-CRL-HTB-44，标准培养基：RPMI 1640；(Biochrom；# FG 1215，
具有稳定谷氨酰胺) +10% FCS (Biochrom；# S0415)，B7H3-阳性。
a. C-1a ADC针对B7H3的细胞毒性作用的测定
用多种细胞系进行抗B7H3 ADC的细胞毒性作用的分析：
A498：人肾癌细胞，ATCC-CRL-HTB-44，标准培养基：RPMI 1640；(Biochrom；# FG 1215，
具有稳定谷氨酰胺) +10% FCS (Biochrom；# S0415)，B7H3-阳性。
[1068] MCF-7：人乳腺癌细胞，标准培养基：RPMI 1640；(Biochrom；# F 1275，不具有酚红) +E2(最终：1E-10M；ß-雌二醇，Sigma # E2758或ZK 5018，于CLL中) +10% CCS，+2mU/ml
胰岛素(牛，Biochrom；# K 3510) +L-丙氨酰基-L-谷氨酰胺；(最终：2mM，Biochrom；# K
0302)，B7H3-阳性。
胰岛素(牛，Biochrom；# K 3510) +L-丙氨酰基-L-谷氨酰胺；(最终：2mM，Biochrom；# K
0302)，B7H3-阳性。
[1069] Caki-2：人肾癌细胞，ATCC-HTB-27，标准培养基：DMEM/Ham’s F12 (#FG4815，Biochrom AG) +10% FCS (#F2442，Sigma)，B7H3-阳性。
[1070] Raji：人伯基特氏淋巴瘤细胞，DMSZ-ACC-319，标准培养基：RPMI 1640；(Biochrom；# FG 1215，具有稳定谷氨酰胺) +10% FCS(Biochrom；# S0415)，B7H3-阴性。
[1071] NCI-H292：人黏液表皮样肺癌细胞，ATCC-CRL-1848，标准培养基：RPMI 1640 (Biochrom；#FG1215，稳定谷氨酰胺)+10% FCS(Biochrom；#S0415)。
[1072] 细胞通过如美国组织培养物保藏中心(American Tissue Culture Collection；ATCC)针对各种细胞系所述的标准方法进行培养。
[1073] CTG测定使用C-1 下所列的生长培养基根据标准方法培养细胞。如下进行测试：将细胞用胰蛋
白酶(0.05%)和EDTA(0.02%)于PBS中的溶液(Biochrom AG #L2143)分离，造粒，再悬浮于培
养基中，计数且接种于具有白色底的96孔培养板(Costar #3610)(75μl/孔，每孔的细胞数
目如下：NCI-H292：2500个细胞/孔，BxPC3 2500个细胞/孔)中，并在孵育箱中在37℃下在5%
二氧化碳中孵育。24小时之后，向细胞中添加25μl培养基中的抗体活性物质缀合物(四倍浓
缩)，以使得细胞上的抗体活性物质缀合物的最终浓度达到3 x 10-7 M至3 x 10-11 M(一式
三份)。然后将细胞在孵育箱中在37℃和5%二氧化碳下孵育。在平行板中，在开始活性物质
处理时(第0天)，使用Cell Titer Glow (CTG)发光细胞存活测定(Promega #G7573和#
G7571)测定细胞活力。为此，每批细胞添加100μl底物，然后用铝箔覆盖板，在板振荡器上以
180rpm振荡2分钟，在实验台上放置8分钟且然后使用光度计(Victor X2，Perkin Elmer)测
量。底物检测活细胞中的ATP内容物，由此产生发光信号，其高度与细胞活力直接成正比。与
抗体活性物质缀合物一起孵育72小时之后，也使用如上文所述的Cell Titer Glow发光细
胞存活测定来测定这些细胞中的活力。根据测量数据，使用DRC(剂量反应曲线)分析电子表
格用4参数拟合来计算相比于第0天的生长抑制的IC50。DRC分析电子表格为Bayer Pharma
AG和Bayer Business Services在IDBS E-WorkBook Suite平台上开发的Biobook电子表格
(IDBS：ID Business Solutions Ltd., Guildford,UK)。
白酶(0.05%)和EDTA(0.02%)于PBS中的溶液(Biochrom AG #L2143)分离，造粒，再悬浮于培
养基中，计数且接种于具有白色底的96孔培养板(Costar #3610)(75μl/孔，每孔的细胞数
目如下：NCI-H292：2500个细胞/孔，BxPC3 2500个细胞/孔)中，并在孵育箱中在37℃下在5%
二氧化碳中孵育。24小时之后，向细胞中添加25μl培养基中的抗体活性物质缀合物(四倍浓
缩)，以使得细胞上的抗体活性物质缀合物的最终浓度达到3 x 10-7 M至3 x 10-11 M(一式
三份)。然后将细胞在孵育箱中在37℃和5%二氧化碳下孵育。在平行板中，在开始活性物质
处理时(第0天)，使用Cell Titer Glow (CTG)发光细胞存活测定(Promega #G7573和#
G7571)测定细胞活力。为此，每批细胞添加100μl底物，然后用铝箔覆盖板，在板振荡器上以
180rpm振荡2分钟，在实验台上放置8分钟且然后使用光度计(Victor X2，Perkin Elmer)测
量。底物检测活细胞中的ATP内容物，由此产生发光信号，其高度与细胞活力直接成正比。与
抗体活性物质缀合物一起孵育72小时之后，也使用如上文所述的Cell Titer Glow发光细
胞存活测定来测定这些细胞中的活力。根据测量数据，使用DRC(剂量反应曲线)分析电子表
格用4参数拟合来计算相比于第0天的生长抑制的IC50。DRC分析电子表格为Bayer Pharma
AG和Bayer Business Services在IDBS E-WorkBook Suite平台上开发的Biobook电子表格
(IDBS：ID Business Solutions Ltd., Guildford,UK)。
[1074] 下表1a列举来自该测定的抗B7H3抗体的代表性实施例的IC50值：表1a
[1075] 所示的活性数据是指本实验部分中所述的实施例，其中示出药物/mAB比。该值可能由于不同的药物/mAB比而任选地偏离。IC50值是几个独立实验的平均值或单个值。B7H3抗
体活性物质缀合物的作用相比于包含各自相应接头和毒簇的各自同种型对照而言是选择
性的且相比于不表达B7H3的肿瘤细胞是靶标特异性的。未缀合的B7H3抗体同样对上述细胞
系未显示作用。
体活性物质缀合物的作用相比于包含各自相应接头和毒簇的各自同种型对照而言是选择
性的且相比于不表达B7H3的肿瘤细胞是靶标特异性的。未缀合的B7H3抗体同样对上述细胞
系未显示作用。
[1076] MTT测定使用C-1下所列的生长培养基根据标准方法培养细胞。如下进行测试：将细胞用
Accutase于PBS中的溶液(Biochrom AG #L2143)分离，造粒，再悬浮于培养基中，计数且接
种于具有白色底的96孔培养板(Costar #3610)(NCI H292：2500个细胞/孔，在100μl的总体
积中)中。然后将细胞在孵育箱中在37℃和5%二氧化碳下孵育。48小时之后，更换培养基。然
后将浓度为10-5M至10-13M的10μl培养基中的代谢物移液至细胞(一式三份)，然后将该混合
物在孵育箱中在37℃和5%二氧化碳下孵育。96小时之后，使用MTT测定(ATCC, Manassas,
Virginia, USA；目录号30-1010K)检测细胞增殖。为此，将MTT试剂与细胞一起孵育4小时，
然后通过添加去垢剂来将细胞裂解过夜。在570nm下检测所形成的染料(Infinite M1000
pro, Tecan公司)。使用DRC(剂量反应曲线)由测量的数据来计算生长抑制的IC50值。未用测
试物质、但在其它方面相同处理的细胞的增殖被定义为100%的值。
Accutase于PBS中的溶液(Biochrom AG #L2143)分离，造粒，再悬浮于培养基中，计数且接
种于具有白色底的96孔培养板(Costar #3610)(NCI H292：2500个细胞/孔，在100μl的总体
积中)中。然后将细胞在孵育箱中在37℃和5%二氧化碳下孵育。48小时之后，更换培养基。然
后将浓度为10-5M至10-13M的10μl培养基中的代谢物移液至细胞(一式三份)，然后将该混合
物在孵育箱中在37℃和5%二氧化碳下孵育。96小时之后，使用MTT测定(ATCC, Manassas,
Virginia, USA；目录号30-1010K)检测细胞增殖。为此，将MTT试剂与细胞一起孵育4小时，
然后通过添加去垢剂来将细胞裂解过夜。在570nm下检测所形成的染料(Infinite M1000
pro, Tecan公司)。使用DRC(剂量反应曲线)由测量的数据来计算生长抑制的IC50值。未用测
试物质、但在其它方面相同处理的细胞的增殖被定义为100%的值。
[1077] C-1b 所选实施例对纺锤体驱动蛋白KSP/Eg5的抑制的测定在室温下，将人类纺锤体驱动蛋白KSP/Eg5的马达结构域(tebu-bio/Cytoskeleton
Inc公司，编号027EG01-XL)在10nM的浓度下与用50μg/ml紫杉酚(Sigma公司，编号T7191-
5MG)稳定化的微管(牛或猪，tebu-bio/Cytoskeleton Inc公司)一起在15mM PIPES pH 6.8
(5 mM MgCl2和10 mM DTT，Sigma公司)中孵育5分钟。将新鲜制备的混合物等分至384 MTP
(Greiner bio-one REF 781096)中。然后添加浓度为1.0 x 10-6 M至1.0 x 10-13 M的待
检查的抑制剂以及ATP (最终浓度500μM，Sigma公司)。在室温下孵育2小时。通过使用孔雀
绿(Biomol公司)检测所形成的无机磷酸盐来检测ATP酶活性。添加试剂之后，在室温下孵育
50分钟，然后在620nm的波长下检测吸收。所用的阳性对照是单星素(Monastrol) (Sigma公
司，M8515-1mg)和伊斯平斯(Ispinesib)(AdooQ Bioscience公司A10486)。剂量-效应曲线
的各个数据是八倍测定。IC50值是两次独立实验的平均值。100%对照是未用抑制剂处理的样
品。
Inc公司，编号027EG01-XL)在10nM的浓度下与用50μg/ml紫杉酚(Sigma公司，编号T7191-
5MG)稳定化的微管(牛或猪，tebu-bio/Cytoskeleton Inc公司)一起在15mM PIPES pH 6.8
(5 mM MgCl2和10 mM DTT，Sigma公司)中孵育5分钟。将新鲜制备的混合物等分至384 MTP
(Greiner bio-one REF 781096)中。然后添加浓度为1.0 x 10-6 M至1.0 x 10-13 M的待
检查的抑制剂以及ATP (最终浓度500μM，Sigma公司)。在室温下孵育2小时。通过使用孔雀
绿(Biomol公司)检测所形成的无机磷酸盐来检测ATP酶活性。添加试剂之后，在室温下孵育
50分钟，然后在620nm的波长下检测吸收。所用的阳性对照是单星素(Monastrol) (Sigma公
司，M8515-1mg)和伊斯平斯(Ispinesib)(AdooQ Bioscience公司A10486)。剂量-效应曲线
的各个数据是八倍测定。IC50值是两次独立实验的平均值。100%对照是未用抑制剂处理的样
品。
[1078] 下表2列举来自所述测定的代表性实施例的IC50值和相应的细胞毒性数据(MTT测定)。
[1079] 所示的活性数据是指本实验部分中所述的实施例。
[1080] C-2 内化测定内化是能够经由抗体药物缀合物(ADC)在表达抗原的癌细胞中特异性且有效提供细胞
毒性有效负载的关键过程。经由特异性B7H3抗体和同种型对照抗体的荧光标记来监测该过
程。为此，首先将荧光染料与抗体的赖氨酸缀合。使用两倍摩尔过量的CypHer 5E单NHS酯
(批次357392，GE Healthcare)在pH 8.3下进行缀合。偶联之后，反应混合物通过凝胶色谱
(Zeba旋转脱盐柱，40K，Thermo Scientific公司，编号87768；洗脱缓冲液：DULBECCO’S
PBS，Sigma-Aldrich公司，编号D8537)纯化，以消除过量染料和调节pH值。使用VIVASPIN
500柱(Sartorius stedim biotec公司)浓缩蛋白溶液。抗体的染料载量通过分光光度分析
(NanoDrop公司)和随后计算(D: P =A染料ε蛋白: (A280-0.16A染料)ε染料)测定。在此检查的B7H3抗体和同种型对照的染料载量具有可比拟的数量级。在细胞结合测定中测得缀合不会导致抗
体亲和力的变化。
毒性有效负载的关键过程。经由特异性B7H3抗体和同种型对照抗体的荧光标记来监测该过
程。为此，首先将荧光染料与抗体的赖氨酸缀合。使用两倍摩尔过量的CypHer 5E单NHS酯
(批次357392，GE Healthcare)在pH 8.3下进行缀合。偶联之后，反应混合物通过凝胶色谱
(Zeba旋转脱盐柱，40K，Thermo Scientific公司，编号87768；洗脱缓冲液：DULBECCO’S
PBS，Sigma-Aldrich公司，编号D8537)纯化，以消除过量染料和调节pH值。使用VIVASPIN
500柱(Sartorius stedim biotec公司)浓缩蛋白溶液。抗体的染料载量通过分光光度分析
(NanoDrop公司)和随后计算(D: P =A染料ε蛋白: (A280-0.16A染料)ε染料)测定。在此检查的B7H3抗体和同种型对照的染料载量具有可比拟的数量级。在细胞结合测定中测得缀合不会导致抗
体亲和力的变化。
[1081] 在内化测定中使用标记的抗体。在起始该处理前，100μl培养基中的细胞(2 x 104/孔)接种于96-MTP (粗，黑色，透明底部，编号4308776，Applied Biosystems公司)中。
在37℃/5% CO2下孵育18小时之后，更换培养基并以各种浓度(10、5、2.5、1、0.1μg/ml)添加
标记的抗B7H3抗体。对标记的同种型对照(阴性对照)使用相同处理方案。选择的孵育时间
为0小时、0.25小时、0.5小时、1小时、1.5小时、2小时、3小时、6小时和24小时。使用
InCellAnalyzer 1000 (GE Healthcare公司)进行荧光测量。经由测量参数颗粒计数/细胞
和总颗粒强度/细胞来进行动力学评估。
在37℃/5% CO2下孵育18小时之后，更换培养基并以各种浓度(10、5、2.5、1、0.1μg/ml)添加
标记的抗B7H3抗体。对标记的同种型对照(阴性对照)使用相同处理方案。选择的孵育时间
为0小时、0.25小时、0.5小时、1小时、1.5小时、2小时、3小时、6小时和24小时。使用
InCellAnalyzer 1000 (GE Healthcare公司)进行荧光测量。经由测量参数颗粒计数/细胞
和总颗粒强度/细胞来进行动力学评估。
[1082] 在结合B7H3之后，检查B7H3抗体的内化能力。为此，选择表达B7H3的两个不同的细胞系(A498、786-O)。可以观察到B7H3抗体的靶标介导的特异性内化，而同种型对照未显示
内化(图2实施例A498细胞)。
内化(图2实施例A498细胞)。
[1083] C-3 用于测定细胞渗透性的体外测试物质的细胞渗透性可借助于体外测试在使用Caco-2细胞的通量测定中进行研究[M.D.
Troutman和D.R. Thakker, Pharm. Res. 20 (8), 1210-1224 (2003)]。为此，将细胞在24
孔过滤板上培养15-16天。为了测定渗透，将各种测试物质于HEPES缓冲液中施加至细胞顶
端(A)或基底(B)上并孵育2小时。0小时之后和2小时之后，从顺式和反式隔室中获取样品。
通过使用反相柱的HPLC (Agilent 1200, Böblingen, 德国)分离样品。HPLC系统经由
Turbo离子喷雾界面与三重四极质谱仪API 4000 (AB SCIEX Deutschland GmbH,
Darmstadt, 德国)联用。基于Papp值来评估渗透性，该值使用Schwab等人[D. Schwab等人,
J. Med. Chem. 46, 1716-1725 (2003)]公开的公式计算。当Papp (B-A)相对于Papp (A-B)
的比率(流出比率)>2或<0.5时，物质被分类为主动输送。
Troutman和D.R. Thakker, Pharm. Res. 20 (8), 1210-1224 (2003)]。为此，将细胞在24
孔过滤板上培养15-16天。为了测定渗透，将各种测试物质于HEPES缓冲液中施加至细胞顶
端(A)或基底(B)上并孵育2小时。0小时之后和2小时之后，从顺式和反式隔室中获取样品。
通过使用反相柱的HPLC (Agilent 1200, Böblingen, 德国)分离样品。HPLC系统经由
Turbo离子喷雾界面与三重四极质谱仪API 4000 (AB SCIEX Deutschland GmbH,
Darmstadt, 德国)联用。基于Papp值来评估渗透性，该值使用Schwab等人[D. Schwab等人,
J. Med. Chem. 46, 1716-1725 (2003)]公开的公式计算。当Papp (B-A)相对于Papp (A-B)
的比率(流出比率)>2或<0.5时，物质被分类为主动输送。
[1084] 对于细胞内释放的毒簇至关重要的是B至A的渗透率[Papp (B-A)]和Papp (B-A)相对于Papp (A-B)的比率(流出比率)：该渗透率越低，物质通过Caco-2细胞单层的主动和被动
输送过程越慢。如果流出比率未另外指示主动输送，则物质在细胞内释放之后可较长时间
保留于细胞中。因此，可用于与生物化学靶标(在该情况下：纺锤体驱动蛋白，KSP/Eg5)相互
作用的时间也越多。
输送过程越慢。如果流出比率未另外指示主动输送，则物质在细胞内释放之后可较长时间
保留于细胞中。因此，可用于与生物化学靶标(在该情况下：纺锤体驱动蛋白，KSP/Eg5)相互
作用的时间也越多。
[1085] 下表5记载来自该测定的代表性实施例的渗透率数据：表3
[1086] C-4 用于测定P-糖蛋白(P-gp)的底物特性的体外测试许多肿瘤细胞表达用于活性物质的转运蛋白，这经常伴随着针对细胞抑制剂的抗性发
展。不是此类转运蛋白(诸如P-糖蛋白(P-gp)或BCRP)的底物的物质因此可展现改善的活性
概况。
展。不是此类转运蛋白(诸如P-糖蛋白(P-gp)或BCRP)的底物的物质因此可展现改善的活性
概况。
[1087] 用于P-gp的物质(ABCB1)的底物特性借助于使用过表达P-gp的LLC-PK1细胞(L-MDR1细胞)的通量测定[A.H. Schinkel等人, J. Clin. Invest. 96, 1698-1705 (1995)]
来测定。为此目的，将LLC-PK1细胞或L-MDR1细胞在96孔过滤板上培养3-4天。为了测定渗
透，将单独或在抑制剂(诸如伊维菌素(Ivermectin)或维拉帕米(Verapamil))存在的情况
下的各自的测试物质于HEPES缓冲液中施加于细胞顶端(A)或基底(B)并孵育2小时。0小时
之后和2小时之后，从顺式和反式隔室中获取样品。通过使用反相柱的HPLC分离样品。HPLC
系统经由Turbo离子喷雾界面与三重四极质谱仪API 3000 (Applied Biosystems
Applera, Darmstadt, 德国)联用。基于Papp值来评估渗透性，该值使用Schwab等人 [D.
Schwab等人, J. Med. Chem. 46, 1716-1725 (2003)]公开的公式计算。当Papp (B-A)与
Papp (A-B)的流出比率>2时，物质被分类为P-gp底物。
来测定。为此目的，将LLC-PK1细胞或L-MDR1细胞在96孔过滤板上培养3-4天。为了测定渗
透，将单独或在抑制剂(诸如伊维菌素(Ivermectin)或维拉帕米(Verapamil))存在的情况
下的各自的测试物质于HEPES缓冲液中施加于细胞顶端(A)或基底(B)并孵育2小时。0小时
之后和2小时之后，从顺式和反式隔室中获取样品。通过使用反相柱的HPLC分离样品。HPLC
系统经由Turbo离子喷雾界面与三重四极质谱仪API 3000 (Applied Biosystems
Applera, Darmstadt, 德国)联用。基于Papp值来评估渗透性，该值使用Schwab等人 [D.
Schwab等人, J. Med. Chem. 46, 1716-1725 (2003)]公开的公式计算。当Papp (B-A)与
Papp (A-B)的流出比率>2时，物质被分类为P-gp底物。
[1088] 作为评估P-gp底物特性的另外标准，可相互比较L-MDR1和LLC-PK1细胞中的流出比率或在抑制剂存在或不存在的情况下的流出比率。如果这些值相差大于2倍，则所涉物质
为P-gp底物。
为P-gp底物。
[1089] C-6 体内功效测试例如借助于异种移植模型，体内测试根据本发明的缀合物的功效。本领域技术人员从
现有技术已知可用于测定根据本发明的化合物的功效的方法(参见例如WO 2005/081711;
Polson等人, Cancer Res. 2009 Mar 15;69(6):2358-64)。为此目的，例如，将表达结合剂
的靶分子的肿瘤细胞系植入啮齿动物(例如小鼠)中。随后将根据本发明的缀合物、同种型
抗体对照缀合物或对照抗体或等张盐溶液施用于植入动物。所述施用进行一次或更经常。
几天的孵育时间之后，测定肿瘤尺寸，其与缀合物处理的动物和对照组进行比较。缀合物处
理的动物显示更小的肿瘤尺寸。
现有技术已知可用于测定根据本发明的化合物的功效的方法(参见例如WO 2005/081711;
Polson等人, Cancer Res. 2009 Mar 15;69(6):2358-64)。为此目的，例如，将表达结合剂
的靶分子的肿瘤细胞系植入啮齿动物(例如小鼠)中。随后将根据本发明的缀合物、同种型
抗体对照缀合物或对照抗体或等张盐溶液施用于植入动物。所述施用进行一次或更经常。
几天的孵育时间之后，测定肿瘤尺寸，其与缀合物处理的动物和对照组进行比较。缀合物处
理的动物显示更小的肿瘤尺寸。
[1090] C-6a. 小鼠中实验肿瘤的生长抑制/消退将表达抗体活性物质缀合物的抗原的人肿瘤细胞皮下接种于免疫抑制小鼠，例如NMRi
裸小鼠或SCID小鼠的侧腹中。从细胞培养物中移除1-10百万个细胞，离心且用培养基或培
养基/基质胶再悬浮。将细胞悬浮液注射于小鼠的皮肤下。
裸小鼠或SCID小鼠的侧腹中。从细胞培养物中移除1-10百万个细胞，离心且用培养基或培
养基/基质胶再悬浮。将细胞悬浮液注射于小鼠的皮肤下。
[1091] 在几天内，肿瘤生长。在肿瘤确定为约40 mm²的肿瘤尺寸后开始处理。为了检查对较大肿瘤的作用，可在50-100 mm²的肿瘤尺寸下才开始处理。
[1092] 通过静脉内(i.v.)施用于小鼠尾静脉中进行使用ADC的处理。ADC以5mL/kg的体积施用。
[1093] 处理方案取决于抗体的药代动力学。标准处理为每四天进行连续三次。对于缓慢生长的肿瘤，一周处理一次。对于尽快评估，具有单次处理的方案也可能是合适的。然而，也
可以进一步进行处理，或者可然后在随后时间点进行具有三天处理的第二周期。
可以进一步进行处理，或者可然后在随后时间点进行具有三天处理的第二周期。
[1094] 作为标准，每个处理组使用8只动物。除了接收活性物质的组以外，作为对照组的一组根据相同方案仅用缓冲液处理。
[1095] 在实验过程期间，使用卡尺以二维(长度/宽度)定期测量肿瘤面积。肿瘤面积被测定为长度×宽度。处理组与对照组的平均肿瘤面积的比较被记载为T/C面积。
[1096] 如果所有实验组在处理结束时同时终止，则可移除肿瘤并称重。处理组与对照组的平均肿瘤重量的比较被记载为T/C重量。
[1097] C-6b. 各种肿瘤模型中的抗B7H3抗体活性物质缀合物的功效将肿瘤细胞皮下接种在雌性NMRI裸鼠(Janvier)的侧腹中。在 40 mm²的肿瘤尺寸时，
~
静脉内用抗体活性物质缀合物处理。处理后，任选进一步跟踪肿瘤生长。
~
静脉内用抗体活性物质缀合物处理。处理后，任选进一步跟踪肿瘤生长。
[1098] 用抗B7H3抗体活性物质缀合物的处理导致与对照组和未缀合的抗B7H3抗体相比显著且持久的肿瘤生长抑制。表8显示最佳T/C值，其经由开始处理后计算的各天的肿瘤面
积确定。
积确定。
[1099] AK-实施例1: TPP5706 及其人源化衍生物TPP5706如上所述合成。使用ELISA表征TPP5706与人B7H3和与人B7H2和B7H4的结合。在
37℃下将黑色384孔Maxisorp板(Nunc)用单包被缓冲液(Candor)中的抗人IgG Fc (Sigma，
I2316；1:440稀释)包被一小时。用PBS、0.05% Tween洗涤一次后，将板在37℃下用100%
Smart Block (Candor)封闭一小时。然后将待测试的抗体(例如TPP5706或其衍生物之一)
结合至该板(2μg/ml IgG，于PBS中、0.05% Tween、10% Smart Block中；1小时，室温)。洗涤
三次后，将该板与相关抗原或仅与缓冲液(37ng/ml，于PBS中、0.05% Tween、10% Smart
block中；B7H2：RnDSystems，8206-B7；B7H3：RnDSystems，2318-B3-050/CF；B7H4：
RnDSystems，6576-B7；1小时，室温)一起孵育。洗涤三次后，将该板与抗His HRP抗体
(Novagen，71840-3；1:10000稀释；1小时，室温)一起孵育。洗涤三次之后，将该板与Amplex
Red一起孵育30分钟且然后读数。表AK-1中的数据显示TPP5706结合B7H3，但不结合B7H2或
B7H4。
37℃下将黑色384孔Maxisorp板(Nunc)用单包被缓冲液(Candor)中的抗人IgG Fc (Sigma，
I2316；1:440稀释)包被一小时。用PBS、0.05% Tween洗涤一次后，将板在37℃下用100%
Smart Block (Candor)封闭一小时。然后将待测试的抗体(例如TPP5706或其衍生物之一)
结合至该板(2μg/ml IgG，于PBS中、0.05% Tween、10% Smart Block中；1小时，室温)。洗涤
三次后，将该板与相关抗原或仅与缓冲液(37ng/ml，于PBS中、0.05% Tween、10% Smart
block中；B7H2：RnDSystems，8206-B7；B7H3：RnDSystems，2318-B3-050/CF；B7H4：
RnDSystems，6576-B7；1小时，室温)一起孵育。洗涤三次后，将该板与抗His HRP抗体
(Novagen，71840-3；1:10000稀释；1小时，室温)一起孵育。洗涤三次之后，将该板与Amplex
Red一起孵育30分钟且然后读数。表AK-1中的数据显示TPP5706结合B7H3，但不结合B7H2或
B7H4。
[1100] 表AK-1：TPP5706和TPP3803与B7H2、B7H3和B7H4的结合B7 蛋白 B7H2 B7H3 B7H4
商 信号(B7)/信号 (缓冲液) TPP5706 < 1.5 294 < 1.5
商 信号(B7)/ 信号 (缓冲液) TPP3803 < 1.5 51 < 1.5
商 信号(B7)/信号 (缓冲液) TPP5706 < 1.5 294 < 1.5
商 信号(B7)/ 信号 (缓冲液) TPP3803 < 1.5 51 < 1.5
[1101] 凭借其特异性结合B7H3，TPP5706是适于开发用于治疗疾病和涉及表达B7H3的细胞的其它不良作用的治疗剂的候选者。因为该抗体是鼠源性的，其通过使用标准你方法进
行人源化(参见例如Almagro和Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008))。特别
是TPP6642和TPP6850适于进一步优化，因为其与B7H3的接合基本上未受影响(表AK-2)。根
据本发明，可通过以下列出的氨基酸替换来实现TPP6642和TPP6850与人种系序列的还进一
步的相似性：
对于TPP6642，轻链中的氨基酸替换为：E27Q、N28S、N30S、N31S、T34N、F36Y、Q40P、S43A、
Q45K、H50A、K52S、T53S、A55Q、E56S、H90Q、H91S、G93S、P96L。对于TPP6642，重链中的氨基酸替换为：I31S、N33Y、V34M、T50I、F52N、G54S、N55G、D57S、N61A、K65Q、D66G、K67R、T72R、A79V。
对于TPP6850，轻链中的氨基酸替换为：E27Q、N28S、N30S、N31S、T34N、F36Y、V48I、H50A、
K52S、T53S、A55Q、E56S、Q70D、H90Q、H91S、G93S。对于TPP6850，重链中的氨基酸替换为：
I31S、N33G、V34I、H35S、I37V、T50W、F52S、P53A、G54Y、D57N、S59N、N61A、F64L、K65Q、D66G、A68V、L70M、K74T、K77S、A107Q。
行人源化(参见例如Almagro和Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008))。特别
是TPP6642和TPP6850适于进一步优化，因为其与B7H3的接合基本上未受影响(表AK-2)。根
据本发明，可通过以下列出的氨基酸替换来实现TPP6642和TPP6850与人种系序列的还进一
步的相似性：
对于TPP6642，轻链中的氨基酸替换为：E27Q、N28S、N30S、N31S、T34N、F36Y、Q40P、S43A、
Q45K、H50A、K52S、T53S、A55Q、E56S、H90Q、H91S、G93S、P96L。对于TPP6642，重链中的氨基酸替换为：I31S、N33Y、V34M、T50I、F52N、G54S、N55G、D57S、N61A、K65Q、D66G、K67R、T72R、A79V。
对于TPP6850，轻链中的氨基酸替换为：E27Q、N28S、N30S、N31S、T34N、F36Y、V48I、H50A、
K52S、T53S、A55Q、E56S、Q70D、H90Q、H91S、G93S。对于TPP6850，重链中的氨基酸替换为：
I31S、N33G、V34I、H35S、I37V、T50W、F52S、P53A、G54Y、D57N、S59N、N61A、F64L、K65Q、D66G、A68V、L70M、K74T、K77S、A107Q。
[1102] 这些替换导致进一步降低在人类中的免疫源性，这是对于基于根据本发明的抗体的治疗剂开发而言有利的特性。
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