一种防治白粉病的复合微生物制剂及其制备方法
专利汇可以提供一种防治白粉病的复合微生物制剂及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种防治 白粉病 的复合 微 生物 制剂及其制备方法，具体是公开了一种防治黄瓜白粉病的复合微生物制剂及其制备方法。该复合微生物制剂的原料由褶皱链霉菌 发酵 液，生暗色链霉菌发酵液，莫海威芽孢杆菌发酵液，赖 氨 酸芽孢杆菌发酵液组成；本发明的菌种能产生多种抗菌素如生暗菌素，友菌素，友霉素B和褶皱菌素，能对黄瓜白粉病病原菌产生超强抑制效果；本发明中所使用的这4株菌株都是可从 土壤 中直接分离得到，都具有根迹促生作用，可在作物表面、植株内部或土壤中繁殖生长的同时，并定向 植物 根际 分泌某些次生代谢产物，能够提高植物对养分的吸收、刺激植株生长起到 肥料 的效果；本发明复合微生物制剂对人、畜安全，属于环境友好型。，下面是一种防治白粉病的复合微生物制剂及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种防治白粉病的复合微生物制剂，其特征在于，该微生物制剂的原料配比为：褶皱链霉菌发酵液20-40份，生暗色链霉菌发酵液20-40份，莫海威芽孢杆菌发酵液20-40份，赖氨酸芽孢杆菌发酵液20-40份。
2.根据权利要求1所述的一种防治白粉病的复合微生物制剂，其特征在于，其制备方法，包括以下步骤：
步骤一：褶皱链霉菌发酵液的制备
取出褶皱链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为褶皱链霉菌种子液；
发酵：将上述制备的褶皱链霉菌种子液以1%的接种量接种至装有灭菌的600L的褶皱链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中，控温28-32℃，开搅拌200r/min，前24小时，通气量为每分钟为200L空气，24-36小时，通气量为400L，36小时后，通气量为600L，培养40-48小时，待菌体含量达到60g/L，即可停罐，即得到褶皱链霉菌发酵液；
其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0.5克，硫酸镁：0.5克，氯化钠：0.5克，硫酸亚铁：0.01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml ，PH7.2～7.4；
其中，所述的褶皱链霉菌发酵培养基：豆粕粉3%，葡萄糖1%，石粉1%，大豆糖蜜2%，磷酸氢二钾0.04%，硫酸镁0.05%，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
步骤二：生暗色链霉菌发酵液的制备
取出生暗色链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为生暗色链霉菌种子液；
发酵：将上述制备的生暗色链霉菌种子液以1%的接种量接种至装有灭菌的600L的生暗色链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中，控温28-30℃，开搅拌200r/min，前18小时，通气量为每分钟为300L空气，18-32小时，通气量为500L，32小时后，通气量为700L，培养40-48小时，待菌体含量达到80g/L，即可停罐，即得到生暗色链霉菌发酵液；
其中，所述的高氏一号固体培养基与步骤一的高氏一号固体培养基相同；
其中，所述的生暗色链霉菌发酵培养基：芝麻粕粉3%，菜粕1%，玉米淀粉2%，石粉1%，甘蔗糖蜜3%，硫酸锰0.002%，磷酸氢二钾0.01%，硫酸镁0.02%，各培养基灭菌的条件为：0.10-
0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
步骤三，莫海威芽孢杆菌发酵液的制备
取出莫海威芽孢杆菌保藏管，用LB固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至装有LB固体培养基，在30℃培养箱中培养48小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L莫海威芽孢杆菌发酵培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前12小时通气量为200L/min，12小时后通气量为320L/min ，30℃培养26-36小时，待总芽孢含量不低于60亿cfu/ml，即可作为莫海威芽孢杆菌发酵液；
其中，所述LB固体培养基：酵母提取物5.0 g,蛋白胨10.0，NaCl10.0 g，琼脂20 g，水
1000mL，pH7.2；
其中，所述莫海威芽孢杆菌发酵培养基：葡萄糖5g/L，玉米淀粉25 g/L， 豆粕粉30 g/L，鱼粉5 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.5 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，碳酸钙5 g/L， pH7.0；
各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
步骤四，赖氨酸芽孢杆菌发酵液的制备
取出赖氨酸芽孢杆菌保藏管，用无氮固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养72小时，在平板下挑取单个菌落接种至装有无氮固体培养基，在30℃培养箱中培养72小时，用
3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L赖氨酸芽孢杆菌发酵培养基的
500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前8小时通气量为100L/min，8-24小时后通气量为200L/min ，24小时后通气量为300L/min ，30℃培养32-48小时，待芽孢数含量不低于40亿cfu/ml，即可作为赖氨酸芽孢杆菌发酵液；
其中，所述无氮固体培养基：蔗糖10g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸钙0.1g，碳酸钙5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH7.2；
其中，所述赖氨酸芽孢杆菌发酵培养基：糖蜜20g/L，玉米淀粉10 g/L， 棉粕粉40 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.6g/L，磷酸二氢钾0.6 g/L，碳酸钙10 g/L， pH7.0，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
步骤五，混合发酵液
将前四个步骤制备的菌液按褶皱链霉菌发酵液20-40份，生暗色链霉菌发酵液20-40份，莫海威芽孢杆菌发酵液20-40份，赖氨酸芽孢杆菌发酵液20-40份，混匀，即得到防治白粉病的复合微生物制剂。
3.根据权利要求1所述的一种防治白粉病的复合微生物制剂，其特征在于，该复合微生物制剂在防治黄瓜白粉病的方法为叶面喷施每次2-5L复合微生物制剂/亩，其稀释的倍数为100-200倍，连续使用2-3次，每7-10天使用一次。
一种防治白粉病的复合微生物制剂及其制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
本发明的第二目的在于提供一种防治白粉病的复合微生物制剂的制备方法，该方法步骤简单，确保微生物制剂的药肥效果突出。
取出褶皱链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为褶皱链霉菌种子液；
发酵：将上述制备的褶皱链霉菌种子液以1%的接种量接种至装有灭菌的600L的褶皱链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中，控温28-32℃，开搅拌200r/min，前24小时，通气量为每分钟为200L空气，24-36小时，通气量为400L，36小时后，通气量为600L，培养40-48小时，待菌体含量达到60g/L，即可停罐，即得到褶皱链霉菌发酵液；
其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0.5克，硫酸镁：0.5克，氯化钠：0.5克，硫酸亚铁：0.01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml ，PH7.2～7.4；
其中，所述的褶皱链霉菌发酵培养基：豆粕粉3%，葡萄糖1%，石粉1%，大豆糖蜜2%，磷酸氢二钾0.04%，硫酸镁0.05%，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
步骤二：生暗色链霉菌发酵液的制备
取出生暗色链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为生暗色链霉菌种子液；
发酵：将上述制备的生暗色链霉菌种子液以1%的接种量接种至装有灭菌的600L的生暗色链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中，控温28-30℃，开搅拌200r/min，前18小时，通气量为每分钟为300L空气，18-32小时，通气量为500L，32小时后，通气量为700L，培养40-48小时，待菌体含量达到80g/L，即可停罐，即得到生暗色链霉菌发酵液；
其中，所述的高氏一号固体培养基与步骤一的高氏一号固体培养基相同；
其中，所述的生暗色链霉菌发酵培养基：芝麻粕粉3%，菜粕1%，玉米淀粉2%，石粉1%，甘蔗糖蜜3%，硫酸锰0.002%，磷酸氢二钾0.01%，硫酸镁0.02%，各培养基灭菌的条件为：0.10-
0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
步骤三，莫海威芽孢杆菌发酵液的制备
取出莫海威芽孢杆菌保藏管，用LB固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至装有LB固体培养基，在30℃培养箱中培养48小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L莫海威芽孢杆菌发酵培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前12小时通气量为200L/min，12小时后通气量为320L/min ，30℃培养26-36小时，待总芽孢含量不低于60亿cfu/ml，即可作为莫海威芽孢杆菌发酵液；
其中，所述LB固体培养基：酵母提取物5.0 g,蛋白胨10.0 , NaCl10.0 g，琼脂20 g，水
1000mL，pH7.2；
其中，所述莫海威芽孢杆菌发酵培养基：葡萄糖5g/L，玉米淀粉25 g/L， 豆粕粉30 g/L，鱼粉5 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.5 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，碳酸钙5 g/L， pH7.0；
各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
步骤四，赖氨酸芽孢杆菌发酵液的制备
取出赖氨酸芽孢杆菌保藏管，用无氮固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养72小时，在平板下挑取单个菌落接种至装有无氮固体培养基，在30℃培养箱中培养72小时，用
3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L赖氨酸芽孢杆菌发酵培养基的
500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前8小时通气量为100L/min，8-24小时后通气量为200L/min ，24小时后通气量为300L/min ，30℃培养32-48小时，待芽孢数含量不低于40亿cfu/ml，即可作为赖氨酸芽孢杆菌发酵液；
其中，所述无氮固体培养基：蔗糖10g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸钙0.1g，碳酸钙5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH7.2；
其中，所述赖氨酸芽孢杆菌发酵培养基：糖蜜20g/L，玉米淀粉10 g/L， 棉粕粉40 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.6g/L，磷酸二氢钾0.6 g/L，碳酸钙10 g/L， pH7.0，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
步骤五，混合发酵液
将前四个步骤制备的菌液按褶皱链霉菌发酵液20-40份，生暗色链霉菌发酵液20-40份，莫海威芽孢杆菌发酵液20-40份，赖氨酸芽孢杆菌发酵液20-40份，混匀，即得到防治白粉病的复合微生物制剂。
具体实施方式
取出褶皱链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为褶皱链霉菌种子液；
发酵：将上述制备的褶皱链霉菌种子液以1%的接种量接种至装有灭菌的600L的褶皱链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中，控温28-32℃，开搅拌200r/min，前24小时，通气量为每分钟为200L空气，24-36小时，通气量为400L，36小时后，通气量为600L，培养44小时，检测其菌体含量为65g/L，即可停罐，即得到褶皱链霉菌发酵液；
其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0.5克，硫酸镁：0.5克，氯化钠：0.5克，硫酸亚铁：0.01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml ，PH7.2～7.4；
其中，所述的褶皱链霉菌发酵培养基：豆粕粉3%，葡萄糖1%，石粉1%，大豆糖蜜2%，磷酸氢二钾0.04%，硫酸镁0.05%，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。
发酵：将上述制备的生暗色链霉菌种子液以1%的接种量接种至装有灭菌的600L的生暗色链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中，控温28-30℃，开搅拌200r/min，前18小时，通气量为每分钟为300L空气，18-32小时，通气量为500L，32小时后，通气量为700L，培养46小时，检测其菌体含量为91g/L，即可停罐，即得到生暗色链霉菌发酵液；
其中，所述的高氏一号固体培养基与步骤一的高氏一号固体培养基相同；
其中，所述的生暗色链霉菌发酵培养基：芝麻粕粉3%，菜粕1%，玉米淀粉2%，石粉1%，甘蔗糖蜜3%，硫酸锰0.002%，磷酸氢二钾0.01%，硫酸镁0.02%，各培养基灭菌的条件为：0.10-
0.15MPa，121℃灭菌30分钟。
其中，所述LB固体培养基：酵母提取物5.0 g,蛋白胨10.0 , NaCl10.0 g，琼脂20 g，水
1000mL，pH7.2；
其中，所述莫海威芽孢杆菌发酵培养基：葡萄糖5g/L，玉米淀粉25 g/L， 豆粕粉30 g/L，鱼粉5 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.5 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，碳酸钙5 g/L， pH7.0；
各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。
3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L赖氨酸芽孢杆菌发酵培养基的
500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前8小时通气量为100L/min，8-24小时后通气量为200L/min ，24小时后通气量为300L/min ，30℃培养44小时，检测其芽孢数含量为50亿cfu/ml，即可作为赖氨酸芽孢杆菌发酵液；
其中，所述无氮固体培养基：蔗糖10g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸钙0.1g，碳酸钙5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH7.2；
其中，所述赖氨酸芽孢杆菌发酵培养基：糖蜜20g/L，玉米淀粉10 g/L， 棉粕粉40 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.6g/L，磷酸二氢钾0.6 g/L，碳酸钙10 g/L， pH7.0，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
步骤五，混合发酵液
将前四个步骤制备的菌液按褶皱链霉菌发酵液30份，生暗色链霉菌发酵液20份，莫海威芽孢杆菌发酵液30份，赖氨酸芽孢杆菌发酵液30份，混匀，即得到防治白粉病的复合微生物制剂。
(一)试验处理:
试验组：实施例1制备的该复合微生物制剂在防治黄瓜白粉病的方法为叶面喷施每次
4L/亩，其稀释的倍数为150倍，连续使用2次，每7天使用一次；
化学药剂：56%嘧菌酯百菌清600倍液，连续使用2次；
空白对照：清水
(二)试验方法：2015年1月-7月在河北省沧州市沧县某黄瓜大棚进行。开始试验时整个棚内黄瓜叶部白粉病中度发生。每小区三行，四次重复，随机区组排列。采用背负式电动喷雾器接种实施例1所制备的复合微生物制剂；另设对照药剂和空白对照。首次施药7天后再喷施1次，二次施药后的第7天调查各个处理小区的病指与采摘成熟果实，并计算防效与增产率；
结果：从表1可以看出，复合微生物制剂处理后，其黄瓜白粉病的单株病叶数显著低于空白对照和化学药剂对照，其防效达到94. 77%，说明本发明的复合微生物制剂对黄瓜白粉病有很好的防治效果；
另外，从表1可看出，施用本发明的复合微生物制剂的黄瓜产量远远高于空白对照组，增产率达到了43.33%，与化学药剂组对比也比其产量高25.24%，而且发现其果实大而饱满,结果数多，异形果少，口感好，着色鲜亮，其果实甜度也有明显提高。
复合微生物制剂 4. 33c 94.77 129 43.33
化学药剂 25.56b 69.18 103 14.44
空白对照 82.94a 90
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