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一种白头翁提取物在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物中的用途

阅读：451发布：2020-05-14

专利汇可以提供一种白头翁提取物在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物中的用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种如式Ⅰ所示的化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物中的用途。本发明的化合物白头翁皂苷B4具有较强的生物活性，对子宫内膜炎、腐蹄病、猫细小病毒、犬细小病毒、犬瘟热病、犬肾衰及犬急性肾炎具有优异的治疗效果。，下面是一种白头翁提取物在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物中的用途专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种如式Ⅰ所示的化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物中的用途：
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物是以权利要求1所述化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述制剂为注射液、子宫注入剂、散剂、膏剂、洗剂。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述制剂为注射液、子宫注入剂、散剂。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述疾病为子宫内膜炎、腐蹄病、细小病毒病、犬瘟热病、犬肾衰、犬急性肾炎。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述子宫内膜炎为临床型子宫内膜炎；所述细小病毒病为犬细小病毒病、猫细小病毒病。
7.一种治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物，其特征在于：它是以权利要求1所述化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于：所述制剂为注射液、子宫注入剂、散剂、膏剂、洗剂；优选地所述制剂为注射液、子宫注入剂、散剂。
9.根据权利要求7所述的药物，其特征在于：所述疾病为子宫内膜炎、腐蹄病、细小病毒病、犬瘟热病、犬肾衰、犬急性肾炎。
10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于：所述子宫内膜炎为临床型子宫内膜炎；所述细小病毒病为犬细小病毒病、猫细小病毒病。

说明书全文

一种白头翁提取物在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药

物中的用途

技术领域

[0001] 本发明涉及一种白头翁提取物在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物中的用途。

背景技术

[0002] 白头翁Pulsatilla Chinensis(Bge.)Regel是毛莨科(Ranunculaceae)白头翁属植物，主要的药用部位是其干燥根。最早关于白头翁的记录是《神农本草经》，其味苦，性凉，归胃、肾、大肠经，功效以消赘、凉血、止泻、去火等为主，传统用于细菌性痢疾的治疗，对寒热温症、眼目赤痛等也有较好的治疗效果。白头翁的药理活性多样，主要可提高机体识别和抵御外来异物入侵的能力，降低肿瘤细胞的繁殖速率，减少病原微生物的数量及有效抑制自由基的氧化反应等，其中，最具有潜力应用是在抗炎抗肿瘤的新药开发方面。

[0003] 冯秀芝等对白头翁在细胞凋亡方面的作用做了研究，认为白头翁对胃癌细胞有较好的诱导作用。此外，癌细胞增生及DNA复制与白头翁有效成分有关，可以对HL260细胞的生长起到抑制作用，并通过诱导凋亡来抑制乳腺癌(MCF-7)、肺癌(PG)、结肠癌(SW480)、恶性胶质瘤细胞(U87MG)等肿瘤细胞增生。李文超等将白头翁醇提物作用于各致病菌种，并研究了不同溶剂萃取物的抑菌作用，发现均有抑菌作用但效果不同。

[0004] 目前，未见关于本发明化合物用于治疗本发明的病毒性和/或细菌性疾病的报道。

发明内容

[0005] 为了解决上述技术问题，本发明提供了一种如式Ⅰ所示的化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物中的用途：

[0006]

[0007] 进一步地，所述药物是以前述化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

[0008] 进一步地，所述制剂为注射液、子宫注入剂、散剂、膏剂、洗剂。

[0009] 进一步地，所述制剂为注射液、子宫注入剂、散剂。

[0010] 进一步地，所述疾病为子宫内膜炎、腐蹄病、细小病毒病、犬瘟热病、犬肾衰、犬急性肾炎。

[0011] 进一步地，所述子宫内膜炎为临床型子宫内膜炎；所述细小病毒病为犬细小病毒病、猫细小病毒病。

[0012] 本发明还提供了一种治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物，它是以前述化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

[0013] 进一步地，所述制剂为注射液、子宫注入剂、散剂、膏剂、洗剂；优选地所述制剂为注射液、子宫注入剂、散剂。

[0014] 进一步地，所述疾病为子宫内膜炎、腐蹄病、细小病毒病、犬瘟热病、犬肾衰、犬急性肾炎。

[0015] 进一步地，所述子宫内膜炎为临床型子宫内膜炎；所述细小病毒病为犬细小病毒病、猫细小病毒病。

[0016] 本发明提供的白头翁提取物为化合物白头翁皂苷B4，其中文别名为白头翁皂甙B4，其英文名称为Anemoside B4。其CAS号为129741-57-7，其分子式为C59H96O26，其分子量为1221.38，其性状为白色结晶状粉末。

[0017] 本发明的化合物白头翁皂苷B4具有较强的生物活性，对子宫内膜炎、腐蹄病、猫细小病毒、犬细小病毒、犬瘟热病、犬肾衰及犬急性肾炎具有优异的治疗效果。

[0018] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

[0019] 以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。附图说明

[0020] 图1为白头翁皂苷B4含量测定的标准曲线。

具体实施方式

[0021] 实施例1、本发明化合物的制备

[0022] 取白头翁药材100kg，加10倍量70％乙醇加热回流提取2次，提取液75℃减压浓缩，4000r/min离心10min，上清液过极性大孔吸附树脂柱，依次用水、30％乙醇、70％乙醇洗脱，取70％乙醇洗脱部位75℃减压浓缩后，喷雾干燥得白头翁总皂苷提取物3450g；取提取物加水溶解后，滤液上动态轴向200制备色谱系统(填料为10μm的ODS)，采用50％甲醇洗脱，根据色谱峰收集相应的洗脱液，减压浓缩后，冷冻干燥得白头翁皂苷B4 1700g。

[0023] 实施例2、本发明化合物的含量测定

[0024] 1、仪器及试药

[0025] Agilent 1260型高效液相色谱仪、DAD紫外检测器购于安捷伦科技(中国)有限公司，BP211D型电子分析天平购自德国Sartorius公司，KQ-400DB型数控超声波清洗器购于昆山市超声仪器有限公司。

[0026] 白头翁皂苷B4样品，实施例1制备。

[0027] 白头翁皂苷B4对照品(批号：111766-201702，含量：94.7％)，购于中国食品药品检定研究院。

[0028] 2、色谱条件

[0029] 色谱柱：Sepax Bio-C18(4.6×250mm，5μm)；流动相：甲醇-水(64：36)；检测波长为201nm；流速：1.0mL/min。

[0030] 3、对照品溶液的配制

[0031] 取白头翁皂苷B4对照品适量，精密称定，置于10mL容量瓶中，加流动相溶解，定容至刻度，即得对照品溶液(每1mL含1mg白头翁皂苷B4)。

[0032] 4、样品溶液的配制

[0033] 取实施例1制备的白头翁皂苷B4样品10mg，精密称定，置于10mL容量瓶中，加流动相溶解，定容至刻度，即得样品溶液。

[0034] 5、测定法

[0035] 分别精密量取对照品溶液和样品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算含量。

[0036] 6、标准曲线和线性回归方程

[0037] 取白头翁皂苷B4对照品，精密称定，置于10mL容量瓶中，加流动相溶解，定容至刻度，依次配制浓度约为1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL和20mg/mL的对照品溶液，各精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

[0038] 表1白头翁皂苷B4含量测定线性回归方程

[0039]

[0040] 由实验结果可知，白头翁皂苷B4在浓度为1.04～20.80mg/mL范围内，线性关系良好，R＝0.9999，适用于白头翁皂苷B4的含量测定。

[0041] 7、白头翁皂苷B4样品含量测定

[0042] 按照前述“3”所述方法，取白头翁皂苷B4对照品2份，各10mg，精密称定，置于10mL容量瓶中，加流动相溶解，定容至刻度，即得对照品溶液1和对照品溶液2。

[0043] 按照前述“4”所述方法，取白头翁皂苷B4样品2份，各10mg，精密称定，置于10mL容量瓶中，加流动相溶解，定容至刻度，即得样品溶液1和样品溶液2。

[0044] 按照上述色谱条件各精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

[0045] 表2白头翁皂苷B4样品含量测定结果

[0046]

[0047] 由试验结果可知，本实验所得白头翁皂苷B4的含量为99.4％。

[0048] 实施例3、本发明白头翁皂苷B4注射液的制备

[0049] 1)处方：50g白头翁皂苷B4加水制备成1000mL的注射液。

[0050] 2)制备方法：称取实施例1制备的白头翁皂苷B4 50g，加注射用水800mL，使其完全溶解，过滤，调pH至7.0，加注射用水至1000mL，精滤，灌装，封口，100℃灭菌30min，即得。

[0051] 实施例4、本发明白头翁皂苷B4散剂的制备

[0052] 1)处方：1000g白头翁皂苷B4制备成1000g的散剂。

[0053] 2)制备方法：称取实施例1制备的白头翁皂苷B4 1000g，粉碎成细粉，过100目筛，混匀，即得。

[0054] 实施例5、本发明白头翁皂苷B4子宫注入剂的制备

[0055] 1)处方：50g白头翁皂苷B4制备成1000mL的子宫注入剂。

[0056] 2)制备方法：称取实施例1制备的白头翁皂苷B4 50g，加蒸馏水800mL，使其完全溶解，过滤，调pH至7.0，加蒸馏水至1000mL，精滤，灌装，封口，100℃灭菌30min，即得。

[0057] 以下通过试验例的方式来说明本发明的有益效果。

[0058] 试验例1、子宫内膜炎试验

[0059] 1、受试药物

[0060] 实施例3制备的白头翁皂苷B4注射液，浓度为50mg/mL；实施例5制备的白头翁皂苷B4子宫注入剂，浓度为50mg/mL。

[0061] 阳性药：盐酸多西环素子宫注入剂(24克/支，郑州百瑞动物药业有限公司生产，批号：170901)。

[0062] 2、受试动物

[0063] 选取患病奶牛130头，随机分成13组，每组10头奶牛。

[0064] 本实验研究所选取的患牛均为临床型子宫内膜炎奶牛，实验过程中，奶牛体温、精神、饮食正常。

[0065] 3、给药剂量与方式

[0066] 表3给药剂量与给药方式

[0067]

[0068]

[0069] 肌内注射给药：用白头翁皂苷B4注射液肌内注射给药，每天早晚各一次，连用4天；

[0070] 静脉注射给药：将白头翁皂苷B4注射液通过静脉注射给药，每天一次，连用4天；

[0071] 子宫注入给药：白头翁皂苷B4子宫注入剂和阳性药盐酸多西环素子宫注入剂采用子宫灌注给药，隔天给药1次，共给药4次。

[0072] 不同给药途径各设置一组空白对照组，以同等剂量生理盐水进行给药。

[0073] 4、子宫内膜炎诊断标准及治疗效果判断标准

[0074] 表4子宫内膜炎诊断标准及治疗效果判断标准

[0075]

[0076] 5、实验结果

[0077] 白头翁皂苷B4治疗奶牛临床型子宫内膜炎的实验结果如表5所示。

[0078] 表5白头翁皂苷B4注射液肌内注射治疗奶牛临床型子宫内膜炎实验结果( n＝10)

[0079]

[0080]

[0081] 注：*代表与空白对照组比有显著差异，p<0.05。

[0082] 表6头翁皂苷B4注射液静脉注射治疗奶牛临床型子宫内膜炎实验结果( n＝10)

[0083]

[0084] 注：*代表与空白对照组比有显著差异，p<0.05。

[0085] 表7白头翁皂苷B4子宫注入治疗奶牛临床型子宫内膜炎实验结果( n＝10)[0086]

[0087] 注：*代表与空白对照组比有显著差异，p<0.05。

[0088] 实验结果表明，白头翁皂苷B4注射液肌内注射高剂量组、白头翁皂苷B4注射液静脉注射高剂量组、白头翁皂苷B4子宫注入剂中剂量组、白头翁皂苷B4子宫注入剂高剂量组及阳性药组奶牛用药后发情率、产后3个情期受孕率显著高于空白对照组，表明白头翁皂苷B4在治疗奶牛临床型子宫内膜炎时其效果显著，且优于盐酸多西环素子宫注入剂。

[0089] 试验例2、腐蹄病试验

[0090] 1、受试药物

[0091] 实施例3制备的白头翁皂苷B4注射液，浓度为50mg/mL；实施例4制备的白头翁皂苷B4散剂，含量99.4％。

[0092] 阳性药：青霉素粉(华北制药股份有限公司)。

[0093] 2、受试动物

[0094] 选取患腐蹄病的奶牛130头，随机分成13组，每组10头奶牛。

[0095] 3、给药剂量与给药方式

[0096] 表8给药剂量与给药方式

[0097]

[0098] 皮下注射给药：用白头翁皂苷B4注射液在患肢系部皮下注射给药，每天一次，连用4天。

[0099] 静脉注射给药：将白头翁皂苷B4注射液通过静脉注射给药，每天一次，连用4天。

[0100] 外敷给药：白头翁皂苷B4散剂和阳性药青霉素粉采用包扎给药的方式，隔天给药1次，共给药4次。用5％KMnO4溶液冲洗干净创面，修理剔除坏死组织，至有鲜血渗出，将药粉敷于创面，再用8～10层消毒纱布包扎。

[0101] 不同给药方式各设置一组空白对照，用同等剂量生理盐水进行给药。

[0102] 4、患腐蹄病奶牛的症状及治疗评价标准

[0103] 4.1患腐蹄病奶牛的症状

[0104] 患腐蹄病奶牛喜卧，站立时间短，蹄子不愿完全着地，患肢有痛感，跛行；急性发作时，蹄冠、趾间发炎，红肿、敏感、增温，叩击或按压患部有痛感，随后可见创孔，扩创后流出黑色腐败液体，趾间形成溃疡面，其上覆盖恶臭坏死物，患牛食欲不振，逐渐消瘦，背毛粗乱，产奶量下降。

[0105] 4.2治疗评价标准

[0106] 完全治愈：患牛精神、饮食、体温恢复正常；患病区临床症状完全消失，泌乳恢复正常。临床治愈：患牛精神、饮食、体温恢复正常；患病区临床症状基本消失，泌乳基本恢复正常。无效：患病区临床症状无明显改善甚至加重，或者停药两周内复发，两者均视为无效。总治愈头数为完全治愈奶牛头数和临床治愈奶牛头数之和。

[0107] 5、实验结果

[0108] 表9白头翁皂苷B4注射液皮下注射治疗奶牛腐蹄病实验结果( n＝10)[0109]

[0110] 注：*代表与空白对照组比较有显著性差异，p<0.05。

[0111] 表10白头翁皂苷B4注射液静脉注射治疗奶牛腐蹄病实验结果( n＝10)[0112]

[0113] 注：*代表与空白对照组比较有显著性差异，p<0.05。

[0114] 表11白头翁皂苷B4散剂治疗奶牛腐蹄病实验结果( n＝10)

[0115]

[0116] 注：*代表与空白对照组比较有显著性差异，p<0.05。

[0117] 实验结果显示，白头翁皂苷B4用于奶牛腐蹄病的治疗，各治疗组奶牛的精神、饮食和体温均有较大改善，产奶量也有增加。其中，白头翁皂苷B4注射液皮下注射高剂量组、白头翁皂苷B4散剂中剂量组以及白头翁皂苷B4散剂高剂量组产奶量显著高于空白对照组，且效果优于阳性药物组，治愈率高达80％以上。

[0118] 试验例3、犬细小病毒试验

[0119] 1、受试药物

[0120] 实施例3制备的白头翁皂苷B4注射液，浓度为50mg/mL。

[0121] 2、受试动物

[0122] 患犬细小病毒的患病犬，来自成都市各宠物医院接诊病例。

[0123] 3、患病犬症状

[0124] 犬早期体温升高，剧烈呕吐，呕吐物变化由白变黄最后变成绿色，带少量血丝；眼结膜充血，流泪；喜饮水，饮后吐；粪便喷射状似番茄酱，腥臭难闻，喜卧；白细胞数量急剧下降，脱水严重，心力衰竭，休克至死。

[0125] 4、给药剂量与给药方式

[0126] 静脉注射白头翁皂苷B4注射液，低剂量组2mL/次，中剂量组4mL/次，高剂量组8mL/次，每日1次；或肌内注射白头翁皂苷B4注射液，低剂量组1mL/次，中剂量组2mL/次，高剂量组4mL/次，每日2次；连续治疗14天。

[0127] 5、实验结果

[0128] 表12白头翁皂苷B4治疗犬细小病毒研究结果( n＝10)

[0129]

[0130] 注：*代表与空白对照组比较有显著性差异，p<0.05。

[0131] 实验结果表明，白头翁皂苷B4对于犬细小病毒具有一定的治疗作用，随着治疗剂量的增加，患病犬死亡率呈降低趋势。

[0132] 试验例4、猫细小病毒试验

[0133] 1、受试药物

[0134] 实施例3制备的白头翁皂苷B4注射液，浓度为50mg/mL。

[0135] 2、受试动物

[0136] 患猫细小病毒的患病猫，来自成都市各宠物医院接诊病例。

[0137] 3、患病猫症状

[0138] 猫偶见发热，剧烈呕吐、腹泻，粪便变化由灰变黄最后变成乳白色，带果冻状粘液；粪便似番茄酱，腥臭难闻，喜卧；白细胞数量急剧下降，四肢发凉，精神高度沉郁，休克至死。

[0139] 4、给药剂量与给药方式

[0140] 静脉注射白头翁皂苷B4注射液，低剂量组2mL/次，中剂量组4mL/次，高剂量组8mL/次，每日1次；或肌内注射白头翁皂苷B4注射液，低剂量组1mL/次，中剂量组2mL/次，高剂量组4mL/次，每日2次；连续治疗14天。

[0141] 5、实验结果

[0142] 表13白头翁皂苷B4治疗猫细小病毒研究结果( n＝10)

[0143]

[0144] 注：*代表与空白对照组比较有显著性差异，p<0.05。

[0145] 实验结果表明，白头翁皂苷B4对猫犬细小病毒具有一定的治疗作用，可显著降低患病猫的死亡率、提高患病猫的存活率。

[0146] 试验例5、犬瘟热的治疗试验

[0147] 1、受试药物

[0148] 实施例3制备的白头翁皂苷B4注射液，浓度为50mg/mL。

[0149] 2、受试动物

[0150] 患犬瘟热的患病犬，来自成都市各宠物医院接诊病例。

[0151] 3、患病犬症状

[0152] 据犬瘟热临床症状，可分为早期、中期、晚期。早期：病犬精神沉郁，不喜动，有少量浆液性鼻液和浆液性眼分泌物；中期：表现为浆液性鼻液和浆液性眼分泌物增多，食欲减退；晚期：表现为脓性鼻液，鼻镜干燥甚至龟裂，口角上挂有粘液性分泌物，精神高度沉郁，食欲减退甚至废绝，但饮欲增加，体温39.5℃～41.5℃，呼吸加快，呼吸音粗粝，多伴心率不齐，甚至出现呕吐、腹泻，呕吐物为粘液或黄色液体，粪便为暗褐色或覆有粘液，随着病程的延长，犬瘟热病犬由于抵抗力下降，常常继发细菌感染。

[0153] 4、给药剂量与给药方式

[0154] 静脉注射白头翁皂苷B4注射液，低剂量组2mL次，中剂量组4mL次，高剂量组8mL次，每日1次；或肌内注射白头翁皂苷B4注射液，低剂量组1mL次，中剂量组2mL次，高剂量组4mL次，每日2次；连续治疗14天。

[0155] 5、实验结果

[0156] 表14白头翁皂苷B4治疗犬瘟热研究结果( n＝10)

[0157]

[0158] 实验结果表明，白头翁皂苷B4对犬瘟热具有较好的治疗作用。

[0159] 试验例6、犬肾衰

[0160] 1、受试药物

[0161] 实施例3制备的白头翁皂苷B4注射液，浓度为50mg/mL。

[0162] 2、受试动物

[0163] 患犬肾衰的患病犬，来自成都市各宠物医院接诊病例。

[0164] 3、患病犬症状

[0165] 患病犬食欲不振、精神沉郁，嗜睡，呕吐多次，口臭，体温下降，已接种疫苗免疫且CPV检测阴性，血液生化检查尿素、肌酐、无机磷均超过正常值2倍及以上，其他脏器生化指标正常，病犬腹部B超检查发现肾脏大小形态等均有变化。

[0166] 4、给药剂量与给药方式

[0167] 静脉注射白头翁皂苷B4注射液，低剂量组2mL/次，中剂量组4mL/次，高剂量组8mL/次，每日1次；或肌内注射白头翁皂苷B4注射液，低剂量组1mL/次，中剂量组2mL/次，高剂量组4mL/次，每日2次；连续治疗14天。

[0168] 5、实验结果

[0169] 表15白头翁皂苷B4治疗犬肾衰研究结果( n＝10)

[0170]

[0171] 注：*代表与空白对照组比较有显著性差异，p<0.05。

[0172] 实验结果表明，白头翁皂苷B4对于犬肾衰疾病具有一定的治疗作用，随着治疗剂量的增加，患病犬死亡率呈降低趋势。

[0173] 试验例7、犬急性肾炎

[0174] 1、受试药物

[0175] 实施例3制备的白头翁皂苷B4注射液，浓度为50mg/mL。

[0176] 2、受试动物

[0177] 患犬急性肾炎的患病犬，来自成都市各宠物医院接诊病例。

[0178] 3、患病犬症状

[0179] 患病犬主要表现为食欲减退，消化不良，精神沉郁，体温微升。肾区触诊，病犬有痛感，排尿次数明显增多，但尿量较少，呈少量多次，出现暗红色血尿。尿液检查，蛋白质呈阳性，镜检尿沉渣，可见白细胞，红细胞及多量的肾上皮细胞。

[0180] 4、给药剂量与给药方式

[0181] 静脉注射白头翁皂苷B4注射液，低剂量组2mL/次，中剂量组4mL/次，高剂量组8mL/次，每日1次；或肌内注射白头翁皂苷B4注射液，低剂量组1mL/次，中剂量组2mL/次，高剂量组4mL/次，每日2次；连续治疗14天。

[0182] 5、实验结果

[0183] 表16白头翁皂苷B4治疗犬急性肾炎研究结果( n＝10)

[0184]

[0185] 注：*代表与空白对照组比较有显著性差异，p<0.05。

[0186] 实验结果表明，白头翁皂苷B4对于犬急性肾炎具有一定的治疗作用，随着治疗剂量的增加，患病犬死亡率呈降低趋势。

[0187] 综上，本发明的化合物白头翁皂苷B4具有较强的生物活性，对子宫内膜炎、腐蹄病、猫细小病毒、犬细小病毒、犬瘟热病、犬肾衰及犬急性肾炎具有优异的治疗效果。

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