储存和递送氨氧化细菌的系统和方法
阅读：1059发布：2020-06-10
专利汇可以提供储存和递送氨氧化细菌的系统和方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本公开尤其提供了用于储存和递送 氨 氧 化细菌，及包括氨氧化细菌的制剂的系统和方法。所述氨氧化细菌可与一种或多种可增强递送的其它组分一起在容器或 试剂 盒 中提供。本文的所述系统和方法可用于，例如 治疗 与低亚 硝酸 盐 水 平相关的 疾病 、 皮肤 疾病和致病性细菌引起的疾病。，下面是储存和递送氨氧化细菌的系统和方法专利的具体信息内容。
1.一种容器，其包括：
氨氧化细菌制剂置于其中的第一腔室；
活化剂置于其中的第二腔室，其中所述第一腔室和所述第二腔室被屏障隔开，提供所述屏障是为了防止所述第一腔室和所述第二腔室之间的流体连通。
2.根据权利要求1所述的容器，其中所述活化剂包含缓冲溶液。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的容器，其中所述活化剂包含氨、铵离子和尿素中的至少一种。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的容器，其配置为使得在所述容器致动后，所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂混合。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的容器，其中所述容器包括递送系统。
6.根据权利要求5所述的容器，其中所述递送系统包括泵。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的容器，其中所述第一腔室和所述第二腔室中的一个置于另一个内。
8.根据权利要求7所述的容器，其中所述第二腔室置于隔室内，并且所述隔室置于所述第一腔室内。
9.根据权利要求7所述的容器，其中所述第一腔室置于隔室内，并且所述隔室置于所述第二腔室内。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的容器，其中所述第二腔室包括，例如缓释材料，及包含氨、铵离子和尿素中的至少一种的所述活化剂，以在递送时向所述氨氧化细菌制剂提供氨、铵离子和尿素中的所述至少一种的控释，例如缓释。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的容器，其中所述容器包括一次性容器。
12.根据权利要求1-10中任一项所述的容器，其中所述容器包括多次用容器。
13.根据权利要求1-10中任一项所述的容器，其中所述容器包括双室注射器。
14.根据权利要求1-10中任一项所述的容器，其中所述容器包括双室瓶。
15.根据权利要求1-10中任一项所述的容器，其中所述容器包括双室安瓿。
16.根据权利要求1-10中任一项所述的容器，其中所述容器包括除臭剂施加器。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的容器，其还包括混合腔室。
18.根据权利要求17所述的容器，其使得在致动后所述氨氧化细菌和所述活化剂在所述混合腔室内相互混合或接触。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的容器，其中所述第一腔室或所述氨氧化细菌制剂，还包含赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂中的一种。
20.根据权利要求19所述的容器，其中所述赋形剂，例如所述药学上可接受的赋形剂和所述美容上可接受的赋形剂中的一种适于局部、鼻部、肺部和胃肠道施用中的一种。
21.根据权利要求19-20中任一项所述的容器，其中所述赋形剂，例如所述药学上可接受的赋形剂和所述美容上可接受的赋形剂中的一种为表面活性剂。
22.根据权利要求21所述的容器，其中所述表面活性剂选自由以下组成的组：椰油酰胺丙基甜菜碱(ColaTeric COAB)、聚乙烯山梨醇酯(例如，吐温80)、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf 6 NAT)、月桂基醚硫酸钠/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜碱(Plantapon
611 L UP)、月桂基醚硫酸钠(例如，RhodaPex ESB 70 NAT)、烷基聚葡糖苷(例如，Plantaren 2000N UP)、月桂基醚硫酸钠(Plantaren 200)、布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂、月桂胺氧化物(ColaLux Lo)、十二烷基硫酸钠(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷(PolySufanate 160 P)、月桂基硫酸钠(Stepanol-WA Extra K)及其组合。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的容器，其大体上不含其它生物体。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的容器，其置于粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带中。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的容器，其作为粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带提供。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的容器，其中所述氨氧化细菌制剂包含保湿剂、除臭剂、香味剂、着色剂、驱虫剂、清洁剂或紫外线阻隔剂。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的容器，其还包括保湿剂、除臭剂、香味剂、着色剂、驱虫剂、清洁剂或紫外线阻隔剂。
28.根据权利要求27所述的容器，其中所述保湿剂、除臭剂、香味剂、着色剂、驱虫剂、清洁剂或紫外线阻隔剂中的至少一种置于所述第一腔室、所述第二腔室和第三腔室中的一个或多个中。
29.根据权利要求21所述的容器，其中所述赋形剂，例如所述药学上可接受的赋形剂或所述美容上可接受的赋形剂，包含抗粘附剂、粘合剂、涂层剂、崩解剂、填充剂、调味剂、着色剂、润滑剂、助流剂、吸附剂、防腐剂或甜味剂。
30.根据权利要求1-29中任一项所述的容器，其中所述氨氧化细菌制剂包含约1010至约
1013CFU/L。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的容器，其中所述氨氧化细菌制剂包含介于约0.1毫克(mg)至约1000mg的氨氧化细菌。
32.根据权利要求1-31中任一项所述的容器，其中氨氧化细菌与所述药学上可接受的赋形剂或所述美容上可接受的赋形剂的质量比在约0.1克/升至约1克/升的范围内。
33.根据权利要求1-32中任一项所述的容器，其中所述容器的内容物用于治疗或预防皮肤病症，治疗或预防与低亚硝酸盐水平相关的疾病或病状，治疗或预防体臭，治疗以向受试者供给一氧化氮，或治疗以抑制微生物生长。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的容器，其中所述第一腔室和所述第二腔室中的至少一个包括至少一种混合指示剂组分以指示所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂的混合。
35.根据权利要求1-34中任一项所述的容器，其中所述容器，例如所述第一腔室和所述第二腔室中的至少一个，包括至少一种活化指示剂组分以指示所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂的活化。
36.根据权利要求34和35中任一项所述的容器，其中所述至少一种混合指示剂组分或所述至少一种活化指示剂组分包含颜色标志物。
37.根据权利要求36所述的容器，其中第一颜色标志物位于所述第一腔室内而第二颜色标志物位于所述第二腔室内，其中，在混合后，产生第三种颜色。
38.根据权利要求1-37中任一项所述的容器，其中所述容器配置为在所述第二腔室的所述活化剂之前将来自于所述第一腔室的所述氨氧化细菌制剂递送到表面。
39.根据权利要求1-38中任一项所述的容器，其中所述容器配置为在来自于所述第一腔室的所述氨氧化细菌制剂之前将所述第二腔室的所述活化剂递送到表面。
40.根据权利要求1-39中任一项所述的容器，其中所述容器配置为大体上同时递送来自于所述第一腔室的所述氨氧化细菌制剂和所述第二腔室的所述活化剂。
41.根据权利要求1-40中任一项所述的容器，其还包括经配置以向所述第一腔室和所述第二腔室中的至少一个提供稀释液的第三腔室。
42.根据权利要求1-41中任一项所述的容器，其中所述容器被构造成至少部分对气体交换、水和光中的至少一种有抗性。
43.根据权利要求1-42中任一项所述的容器，其中所述氨氧化细菌选自由亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属、亚硝化弧菌属及其组合组成的组。
44.根据权利要求1-43中任一项所述的容器，其中所述第一腔室和所述第二腔室中的一个还包括选自乳酸杆菌属、链球菌属、双歧杆菌属及其组合的生物体。
45.根据权利要求1-44中任一项所述的容器，其中所述氨氧化细菌制剂包含呈生长状态的氨氧化细菌。
46.根据权利要求1-45中任一项所述的容器，其中所述氨氧化细菌制剂包含呈储存状态的氨氧化细菌。
47.根据权利要求1-46中任一项所述的容器，其中所述氨氧化细菌制剂包含呈多磷酸盐负载状态的氨氧化细菌。
48.根据权利要求46或47所述的容器，其中在致动后，呈储存状态和多磷酸盐负载状态的至少一种氨氧化细菌与所述活化剂混合，例如，以提供活化氨氧化细菌，例如呈生长状态的氨氧化细菌。
49.根据权利要求1-48中任一项所述的容器，其适于递送美容产品。
50.根据权利要求1-48中任一项所述的容器，其适于递送治疗产品。
51.根据权利要求1-50中任一项所述的容器，其中所述容器的内容物用于治疗以下的至少一种：HIV皮炎、溃疡(例如静脉性溃疡，例如下肢溃疡，例如下肢静脉性溃疡)中的感染(例如糖尿病足溃疡中的感染)、过敏性皮炎、痤疮(例如寻常痤疮)、湿疹、接触性皮炎、过敏反应、银屑病、荨麻疹、酒渣鼻、皮肤感染、血管疾病、阴道酵母菌感染、性传播疾病、心脏病、动脉粥样硬化、脱发、继发于糖尿病或卧床的下肢溃疡、心绞痛(特别是慢性稳定型心绞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注损伤、蹄叶炎、高血压、肥厚性器官退化、雷诺氏现象、纤维化、纤维化器官退化、过敏、自身免疫性致敏、终末期肾病、肥胖、阳痿、肺炎、原发性免疫缺陷病、大疱性表皮松解症或癌症。
52.根据权利要求1-51中任一项所述的容器，其中所述容器的重量低于约50、100、200、
300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000克。
53.根据权利要求1-52中任一项所述的容器，其中所述第一腔室和所述第二腔室配置为使得所述屏障相对于所述第一腔室和所述第二腔室不固定。
54.根据权利要求1-52中任一项所述的容器，其中所述第一腔室和所述第二腔室配置为使得所述屏障至少部分为所述第一腔室和所述第二腔室共有。
55.根据权利要求1-54中任一项所述的容器，其中所述第一腔室包括第一壳体和第一内腔，并且所述第二腔室包括第二壳体和第二内腔。
56.根据权利要求55所述的容器，其中所述第一壳体和所述第二壳体彼此相对固定。
57.根据权利要求55-56中任一项所述的容器，其中所述第一壳体和所述第二壳体的一部分为所述第一腔室和所述第二腔室共用。
58.根据权利要求57所述的容器，其中所述部分包括屏障。
59.根据权利要求55所述的容器，其中所述第一壳体和所述第二壳体相互独立地移动。
60.一种试剂盒，其包括：
氨氧化细菌制剂；
用于活化所述氨氧化细菌的活化剂；和
用于将所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂中的至少一种递送给受试者的递送装置。
61.根据权利要求50所述的试剂盒，其包括根据权利要求1-59 中任一项所述的容器。
62.根据权利要求60所述的试剂盒，其中所述递送装置是根据权利要求1-59中任一项所述的容器。
63.根据权利要求60-62中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置包括第一腔室和第二腔室，其中所述第一腔室和所述第二腔室被屏障隔开，提供所述屏障是为了防止所述第一腔室和所述第二腔室之间的流体连通。
64.根据权利要求60-63中任一项所述的试剂盒，其中所述氨氧化细菌制剂置于所述第一腔室中，并且所述活化剂置于所述第二腔室中。
65.根据权利要求60-64中任一项所述的试剂盒，其中所述活化剂包含氨、铵离子和尿素中的至少一种。
66.根据权利要求60-65中任一项所述的试剂盒，其还包括为清洁要施加所述氨氧化细菌制剂的表面而提供的洗涤液或擦拭物。
67.根据权利要求60-66中任一项所述的试剂盒，其还包括稀释液以允许稀释所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂中的至少一种。
68.根据权利要求60-67中任一项所述的试剂盒，其还包括对测定所述氨氧化细菌制剂的活力的分析。
69.根据权利要求60-68中任一项所述的试剂盒，其还包括对测定要施加所述氨氧化细菌制剂的表面的特征的分析。
70.根据权利要求60-69中任一项所述的试剂盒，其中所述活化剂包含缓冲溶液。
71.根据权利要求60-70中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置配置为使得在致动后，所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂混合。
72.根据权利要求60-71中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置包括泵。
73.根据权利要求60-72中任一项所述的试剂盒，其中所述第一腔室和所述第二腔室中的一个置于彼此之内。
74.根据权利要求60-73中任一项所述的试剂盒，其中所述第二腔室置于隔室内，并且所述隔室置于所述第一腔室内。
75.根据权利要求60-73中任一项所述的试剂盒，其中所述第一腔室置于隔室内并且所述隔室置于所述第二腔室内。
76.根据权利要求60-75中任一项所述的试剂盒，其中所述第二腔室包括控释材料，例如缓释材料，及包含氨、铵离子和尿素中的至少一种的所述活化剂，以在递送时向所述氨氧化细菌制剂提供氨、铵离子和尿素中的所述至少一种的控释，例如缓释。
77.根据权利要求60-76中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置包括一次性递送装置。
78.根据权利要求60-76中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置包括多次用递送装置。
79.根据权利要求60-76中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置包括双室注射器。
80.根据权利要求60-76中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置包括瓶。
81.根据权利要求60-76中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置包括双室安瓿。
82.根据权利要求60-76中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置为除臭剂施加器。
83.根据权利要求60-82中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置混合腔室。
84.根据权利要求83所述的试剂盒，其使得在致动后所述氨氧化细菌和所述活化剂在所述混合腔室内相互混合或接触。
85.根据权利要求60-76中任一项所述的试剂盒，其中所述第一腔室或所述氨氧化细菌制剂，还包含赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂和美容上可接受的赋形剂中的一种。
86.根据权利要求85所述的试剂盒，其中所述赋形剂，例如所述药学上可接受的赋形剂或所述美容上可接受的赋形剂中的一种适于局部、鼻部和肺部施用中的一种。
87.根据权利要求85-86中任一项所述的试剂盒，其中所述赋形剂，例如所述药学上可接受的赋形剂和所述美容上可接受的赋形剂中的一种为表面活性剂。
88.根据任一权利要求87所述的试剂盒，其中所述表面活性剂选自由以下组成的组：椰油酰胺丙基甜菜碱(ColaTeric COAB)、聚乙烯山梨醇酯(例如，吐温80)、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf 6 NAT)、月桂基醚硫酸钠/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜碱(Plantapon
611 L UP)、月桂基醚硫酸钠(例如，RhodaPex ESB 70 NAT)、烷基聚葡糖苷(例如，Plantaren 2000 N UP)、月桂基醚硫酸钠(Plantaren 200)、布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂、月桂胺氧化物(ColaLux Lo)、十二烷基硫酸钠(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷(PolySufanate 160 P)、月桂基硫酸钠(Stepanol-WA Extra K)及其组合。
89.根据权利要求60-88中任一项所述的试剂盒，其中所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂中的至少一种大体上不含其它生物体。
90.根据权利要求60-89中任一项所述的试剂盒，其中所述氨氧化细菌制剂置于粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带中。
91.根据权利要求60-90中任一项所述的试剂盒，其中所述氨氧化细菌制剂作为粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带提供。
92.根据权利要求60-91中任一项所述的试剂盒，其还包括保湿剂、除臭剂、香味剂、着色剂、驱虫剂、清洁剂或紫外线阻隔剂。
93.根据权利要求92中任一项所述的试剂盒，其中所述保湿剂、除臭剂、香味剂、着色剂、驱虫剂、清洁剂和紫外线阻隔剂中的至少一种置于所述第一腔室、所述第二腔室和第三腔室中的一个或多个中。
94.根据权利要求85-86中任一项所述的试剂盒，其中所述赋形剂，例如所述药学上可接受的赋形剂或所述美容上可接受的赋形剂，包含抗粘附剂、粘合剂、涂层剂、崩解剂、填充剂、调味剂、着色剂、润滑剂、助流剂、吸附剂、防腐剂或甜味剂。
95.根据权利要求60-94中任一项所述的试剂盒，其中所述氨氧化细菌制剂包含约1010至约1013CFU/L。
96.根据权利要求60-95中任一项所述的试剂盒，其中所述氨氧化细菌制剂包含介于约
0.1毫克(mg)至约1000mg的氨氧化细菌。
97.根据权利要求60-96中任一项所述的试剂盒，其中氨氧化细菌与所述赋形剂，例如所述药学上可接受的赋形剂或所述美容上可接受的赋形剂的质量比，在约0.1克/升至约1克/升的范围内。
98.根据权利要求60-97中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒的内容物用于治疗或预防皮肤病症，治疗或预防与低亚硝酸盐水平相关的疾病或病状，治疗或预防体臭，治疗以向受试者供给一氧化氮，或治疗以抑制微生物生长。
99.根据权利要求90-98中任一项所述的试剂盒，其还包括至少一种混合指示剂组分以指示所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂的混合。
100.根据权利要求61-99中任一项所述的试剂盒，其中所述第一腔室和所述第二腔室中的至少一个包括至少一种活化指示剂组分以指示所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂的活化。
101.根据权利要求60-100中任一项所述的试剂盒，其还包括至少一种活化指示剂组分以指示所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂的活化。
102.根据权利要求99-101中任一项所述的试剂盒，其中所述至少一种混合指示剂组分或所述至少一种活化指示剂组分包含颜色标志物。
103.根据权利要求102所述的试剂盒，其中第一颜色标志物位于所述第一腔室内而第二颜色标志物位于所述第二腔室内，其中，在混合后，产生第三种颜色。
104.根据权利要求60-103中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置配置为在所述活化剂之前将所述氨氧化细菌制剂递送到表面。
105.根据权利要求60-104中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置配置为在所述氨氧化细菌制剂之前将所述活化剂递送到表面。
106.根据权利要求60-105中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置配置为大体上同时递送所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂。
107.根据权利要求60-106中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置包括第三腔室。
108.根据权利要求107所述的试剂盒，其中所述第三腔室包括稀释液。
109.根据权利要求60-108中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置被构造成至少部分对气体交换、水和光中的至少一种有抗性。
110.根据权利要求60-109中任一项所述的试剂盒，其中所述氨氧化细菌选自由亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属、亚硝化弧菌属及其组合组成的组。
111.根据权利要求60-110中任一项所述的试剂盒，其还包括选自由乳酸杆菌属、链球菌属、双歧杆菌属及其组合组成的组的生物体。
112.根据权利要求60-111中任一项所述的试剂盒，其中所述氨氧化细菌制剂包含呈生长状态的氨氧化细菌。
113.根据权利要求60-112中任一项所述的试剂盒，其中所述氨氧化细菌制剂包含呈储存状态的氨氧化细菌。
114.根据权利要求60-113中任一项所述的试剂盒，其中所述氨氧化细菌制剂包含呈多磷酸盐负载状态的氨氧化细菌。
115.根据权利要求60-114中任一项所述的试剂盒，其适于递送美容产品。
116.根据权利要求60-114中任一项所述的试剂盒，其适于递送治疗产品。
117.根据权利要求60-116中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒的内容物用于治疗以下的至少一种：HIV、皮炎、溃疡(例如静脉性溃疡，例如下肢溃疡，例如下肢静脉性溃疡)中的感染(例如糖尿病足溃疡中的感染)、过敏性皮炎、痤疮(例如寻常痤疮)、湿疹、接触性皮炎、过敏反应、银屑病、荨麻疹、酒渣鼻、皮肤感染、血管疾病、阴道酵母菌感染、性传播疾病、心脏病、动脉粥样硬化、脱发、继发于糖尿病或卧床的下肢溃疡、心绞痛(特别是慢性稳定型心绞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注损伤、蹄叶炎、高血压、肥厚性器官退化、雷诺氏现象、纤维化、纤维化器官退化、过敏、自身免疫性致敏、终末期肾病、肥胖、阳痿、肺炎、原发性免疫缺陷病、大疱性表皮松解症或癌症。
118.根据权利要求60-117中任一项所述的试剂盒，其还包括将所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂中的至少一种递送给所述受试者的使用说明书。
119.根据权利要求60-118中任一项所述的试剂盒，其中所述递送装置的重量低于约
50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000克。
120.根据权利要求61-119中任一项所述的试剂盒，其中所述第一腔室和所述第二腔室配置为使得所述屏障相对于所述第一腔室和所述第二腔室不固定。
121.根据权利要求61-119中任一项所述的试剂盒，其中所述第一腔室和所述第二腔室配置为使得所述屏障至少部分为所述第一腔室和所述第二腔室共有。
122.根据权利要求61-121中任一项所述的试剂盒，其中所述第一腔室包括第一壳体和第一内腔，并且所述第二腔室包括第二壳体和第二内腔。
123.根据权利要求122所述的试剂盒，其中所述第一壳体和所述第二壳体彼此相对固定。
124.根据权利要求122-123中任一项所述的试剂盒，其中所述第一壳体和所述第二壳体的一部分为所述第一腔室和所述第二腔室共用。
125.根据权利要求124所述的试剂盒，其中所述部分包括屏障。
126.根据权利要求122所述的试剂盒，其中所述第一壳体和所述第二壳体相互独立地移动。
127.一种试剂盒，其包括第一化妆品和第二化妆品，其中所述第一化妆品包含氨氧化细菌。
128.根据权利要求124所述的试剂盒，其中所述第二化妆品包含氨氧化细菌。
129.根据权利要求127-128中任一项所述的试剂盒，其中所述第一化妆品和第二化妆品中的至少一种包含下述产品中的至少一种：婴儿用品，例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜；浴用制剂，例如浴油、浴皂、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊；眼妆制剂，例如眉笔、眼线笔、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏；香料制剂，例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊；发用制剂，例如护发素、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液；染发制剂，例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂；化妆制剂，例如扑面粉、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂；美甲制剂，例如底部涂层和内部涂层、角质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂；口腔卫生用品，例如牙粉、漱口水和口气清新剂；浴用香皂和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂；剃须用制剂，例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂；护肤制剂，例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂；和晒黑制剂，例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
130.一种提供氨氧化细菌制剂或保存氨氧化细菌制剂的方法，其包括：
在足够低的二氧化碳浓度及足够高的氧浓度和氨基酸浓度下培养氨氧化细菌，使得所述氨氧化细菌积累多磷酸盐，
从而提供氨氧化细菌制剂或保存氨氧化细菌制剂。
131.根据权利要求128所述的方法，其中培养包括在二氧化碳浓度低于约200ppm且氧浓度介于约5％至约100％饱和度的环境中，使氨氧化细菌样品与pH为约7.4或更低，氨、铵离子和尿素中的至少一种的浓度介于约10微摩尔和约200毫摩尔之间的培养基接触。
132.根据权利要求131所述的方法，其中培养包括使所述氨氧化细菌样品与具有大于
10微摩尔磷酸盐的培养基接触。
133.根据权利要求131-132中任一项所述的方法，其中培养包括使所述氨氧化细菌样品与具有约0.1微摩尔至20微摩尔铁的培养基接触。
134.根据权利要求131-133中任一项所述的方法，其中接触所述样品包括接触所述样品达预定时间段。
135.根据权利要求134所述的方法，其中所述预定时间段至少部分基于约0.2-10倍、
0.3-5倍、0.5-3倍、0.5-1.5倍或0.5-1倍所述氨氧化细菌的倍增时间的时间段。
136.根据权利要求135所述的方法，其中所述预定时间段至少部分基于为所述氨氧化细菌约1个倍增时间的时间段。
137.根据权利要求134-136中任一项所述的方法，其中所述预定时间段介于约8小时和
12小时之间。
138.根据权利要求134-137中任一项所述的方法，其中所述预定时间段为约10小时。
139.根据权利要求131-138中任一项所述的方法，其中所述氨氧化细菌样品呈生长状态。
140.根据权利要求130-139中任一项所述的方法，其还包括在二氧化碳浓度低于约
400ppm且氧浓度介于约0％至约100％饱和度的环境中，使所述氨氧化细菌样品与pH为约
7.4或更低，氨、铵离子和尿素中的至少一种的浓度介于约10微摩尔和约100微摩尔之间的培养基接触。
141.一种组合物，其包含通过根据权利要求130-140中任一项所述的方法保存的氨氧化细菌。
142.一种使氨氧化细菌从储存状态复活以便使用的方法，其包括：
提供根据权利要求141所述的组合物；
在二氧化碳浓度为约200ppm至约5％饱和度且氧浓度介于约5％至约100％饱和度的环境中，使根据权利要求141所述的组合物样品与pH为至少约7.6，氨、铵离子和尿素中的至少一种的浓度介于约10微摩尔和约100毫摩尔之间的培养基接触。
143.根据权利要求142所述的方法，其中接触所述样品包括接触所述样品达预定时间段。
144.根据权利要求143所述的方法，其中所述预定时间段小于约72小时。
145.根据权利要求144所述的方法，其中所述预定时间段小于约70、65、60、55、50、45、
40、35、30、25、20、15、10、5、4、3、2、1、0.5、0.25、0.1小时。
146.根据权利要求142-145中任一项所述的方法，其中所述培养基还包含缓冲液和/或氨、铵离子和尿素中的至少一种。
147.一种组合物，其包含通过根据权利要求142-146中任一项所述的方法复活的氨氧化细菌。
148.一种将氨氧化细菌递送给受试者的方法，其包括：
提供氨氧化细菌制剂；
提供活化剂；并且
合并所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂。
149.根据权利要求148所述的方法，其还包括将所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂施用给所述受试者。
150.根据权利要求148所述的方法，其中所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂的合并发生在递送给所述受试者之前，例如在容器或递送装置中。
151.根据权利要求148所述的方法，其中所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂的合并发生在递送时，例如在所述受试者的表面。
152.根据权利要求148-151中任一项所述的方法，其中所述方法包括使用根据权利要求1-59中任一项所述的容器或根据权利要141和147中任一项所述的组合物。
153.根据权利要求148-151中任一项所述的方法，其中所述方法包括使用根据权利要求60-129中任一项所述的试剂盒。
154.一种提供氨氧化细菌制剂的方法，其包括：
提供根据权利要求1-59中任一项所述的容器；并且
转移所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂以提供活化氨氧化细菌，例如呈生长状态的氨氧化细菌。
155.根据权利要求154中任一项所述的方法，其还包括致动所述屏障。
156.根据权利要求155所述的方法，其中致动所述屏障包括破坏所述屏障。
157.根据权利要求155-156中任一项所述的方法，其使得在致动后，所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂相互混合或接触。
158.根据权利要求157所述的方法，其中所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂在混合腔室内相互混合或接触。
159.根据权利要求154-158中任一项所述的方法，其中所述活化氨氧化细菌，在致动后，沉积在身体表面上。
160.根据权利要求159所述的方法，其中在所述活化剂递送之前将所述氨氧化细菌制剂递送到所述表面。
161.根据权利要求159所述的方法，其中在所述氨氧化细菌制剂之前将所述活化剂递送到所述表面。
162.根据权利要求159所述的方法，其中所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂同时递送。
163.根据权利要求159-162中任一项所述的方法，其中所述身体表面为一部分皮肤。
164.根据权利要求163所述的方法，其中所述部分为面部区域。
165.根据权利要求164所述的方法，其中所述部分为唇。
166.根据权利要求163所述的方法，其中所述部分为腋下。
167.根据权利要求154-166中任一项所述的方法，其用于治疗以下的至少一种：HIV、皮炎、溃疡(例如静脉性溃疡，例如下肢溃疡，例如下肢静脉性溃疡)中的感染(例如糖尿病足溃疡中的感染)、过敏性皮炎、痤疮(例如寻常痤疮)、湿疹、接触性皮炎、过敏反应、银屑病、荨麻疹、酒渣鼻、皮肤感染、血管疾病、阴道酵母菌感染、性传播疾病、心脏病、动脉粥样硬化、脱发、继发于糖尿病或卧床的下肢溃疡、心绞痛(特别是慢性稳定型心绞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注损伤、蹄叶炎、高血压、肥厚性器官退化、雷诺氏现象、纤维化、纤维化器官退化、过敏、自身免疫性致敏、终末期肾病、肥胖、阳痿、肺炎、原发性免疫缺陷病、大疱性表皮松解症或癌症。
168.根据权利要求154-167中任一项所述的方法，其用于治疗或预防皮肤病症，治疗或预防与低亚硝酸盐水平相关的疾病或病状，治疗或预防体臭，治疗以向受试者供给一氧化氮，或治疗以抑制微生物生长。
169.一种制剂，其包含氨氧化细菌并且配制成使得在选定条件下储存后氧化NH4+的能力损失不超过10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％。
170.根据权利要求169所述的制剂，其包含根权利要求136或141所述的氨氧化细菌的组合物。
171.根据权利要求169所述的制剂，其通过根据权利要求154或167所述的方法制备。
172.根据权利要求169-171中任一项所述的制剂，其中所述选定条件包括pH小于约7.4的培养基。
173.根据权利要求169-172中任一项所述的制剂，其中所述选定条件包括在二氧化碳浓度低于约400ppm且氧浓度介于约0％至约100％饱和度的环境中，pH为约7.4或更低，氨、铵离子和尿素中的至少一种的浓度介于约10微摩尔和约100微摩尔之间的培养基；或在二氧化碳浓度低于约200ppm且氧浓度介于约5％至约100％饱和度的环境中，pH为约7.4或更低，氨、铵离子和尿素中的至少一种的浓度介于约10微摩尔和约200毫摩尔之间的培养基。
174.根据权利要求169-173中任一项所述的制剂，其具有少于约0.01％至约10％的表面活性剂。
175.根据权利要求169-173中任一项所述的制剂，其大体上不含表面活性剂。
176.根据权利要求169-174中任一项所述的制剂，其大体上不含十二烷基硫酸钠。
177.根据权利要求169-176中任一项所述的制剂，其包括螯合剂。
178.根据权利要求169-176中任一项所述的制剂，其大体上不含螯合剂。
179.根据权利要求169-178中任一项所述的制剂，其适于用作美容产品。
180.根据权利要求169-178中任一项所述的制剂，其适于用作治疗产品。
181.根据权利要求169-180中任一项所述的制剂，其中所述制剂置于下述产品中的至少一种中：婴儿用品，例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜；浴用制剂，例如浴油、浴皂、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊；眼妆制剂，例如眉笔、眼线笔、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏；香料制剂，例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊；发用制剂，例如护发素、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液；
染发制剂，例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂；化妆制剂，例如扑面粉、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂；美甲制剂，例如底部涂层和内部涂层、角质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂；口腔卫生用品，例如牙粉、漱口水和口气清新剂；浴用香皂和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂；剃须用制剂，例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂；护肤制剂，例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂；和晒黑制剂，例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
182.根据权利要求169-181中任一项所述的制剂，其用于治疗以下的至少一种：HIV皮炎、溃疡(例如静脉性溃疡，例如下肢溃疡，例如下肢静脉性溃疡)中的感染(例如糖尿病足溃疡中的感染)、过敏性皮炎、痤疮(例如寻常痤疮)、湿疹、接触性皮炎、过敏反应、银屑病、荨麻疹、酒渣鼻、皮肤感染、血管疾病、阴道酵母菌感染、性传播疾病、心脏病、动脉粥样硬化、脱发、继发于糖尿病或卧床的下肢溃疡、心绞痛(特别是慢性稳定型心绞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注损伤、蹄叶炎、高血压、肥厚性器官退化、雷诺氏现象、纤维化、纤维化器官退化、过敏、自身免疫性致敏、终末期肾病、肥胖、阳痿、肺炎、原发性免疫缺陷病、大疱性表皮松解症或癌症。
183.一种氨氧化细菌制剂，其包含含磷酸二钠和氯化镁的的缓冲溶液。
184.根据权利要求183所述的制剂，其中所述缓冲溶液包含50mM Na2HPO4和2mM MgCl2。
185.根据权利要求184所述的制剂，其中所述制剂可于容器中提供，所述容器构造为容纳约0.1至约100液量盎司、约0.2至约50液量盎司、约0.5至约25液量盎司、约1.0至约10液量盎司、约2.0 至约7液量盎司、约3至约5液量盎司。
186.根据权利要求185所述的制剂，其中所述制剂是构造为容纳约3.4液量盎司的容器。
187.根据权利要求183-186中任一项所述的制剂，其中所述制剂基本上由氨氧化细菌和所述缓冲溶液组成。
188.根据权利要求183-186中任一项所述的制剂，其中所述制剂由氨氧化细菌和所述缓冲溶液组成。
储存和递送氨氧化细菌的系统和方法
[0001] 本申请要求保护2014年5月22日提交的美国临时申请62/002056号的优先权，其内容通过引用整体并入本文。
[0002] 背景
[0003] 可以使用有益细菌来抑制致病性细菌的生长。细菌和其它微生物在环境中无处不在。致病性细菌的发现和疾病的病菌理论对于健康和疾病状况具有极大的影响。细菌是所有生物体的环境内的一个正常部分。在肠道内，这些细菌在正常条件下是不会致病的，并且实际上它们通过使正常的肠内容物较不适于致病生物体体存活来促进健康。由多种途径实现疾病预防：消耗营养物，留给病原体较少的营养物；产生不适于病原体存活的条件，如pH和氧张力；产生对病原体有毒性的化合物；病原体被这些微生物作为食物消耗掉；给病原体留有更小的物理空间；以及占据特异性结合位点，给病原体留下更少的可用结合位点。这些有益细菌的存在被视为可有效预防疾病状况。
[0004] 在本领域中需要可以抑制致病性细菌的生长的改良的有益细菌。
[0005] 概述
[0006] 本公开尤其提供了一种容器。该容器可包括氨氧化细菌制剂置于其中的第一腔室。该容器可包括活化剂置于其中的第二腔室，其中第一腔室和第二腔室被屏障隔开，提供所述屏障是为了防止第一腔室和第二腔室之间的流体连通。
[0007] 在一些实施方案中，活化剂包含缓冲溶液。在一些实施方案中，活化剂可包含氨、铵离子和尿素中的至少一种。所述容器可配置为使得在该容器致动后，氨氧化细菌制剂和活化剂混合。所述容器可包括递送系统。该递送系统可包括泵。
[0008] 在一些实施方案中，第一腔室和第二腔室可彼此置于另一个中。在某些方面，第二腔室置于隔室内，并且该隔室置于第一腔室内。在某些其它方面，第一腔室置于隔室内，并且该隔室置于第二腔室内。
[0009] 在一些实施方案中，第二腔室可包括控释材料，例如缓释材料，及包含氨、铵离子和尿素中的至少一种的活化剂，以在递送时向氨氧化细菌制剂提供氨、铵离子和尿素中的所述至少一种的控释，例如缓释。
[0010] 在一些实施方案中，所述容器包括一次性容器。在其它实施方案中，所述容器包括多次用容器。还有其它实施方案中，所述容器包括双室注射器。还有其它实施方案中，所述容器包括双室瓶。还有其它实施方案中，所述容器包括双室安瓿。还有其它实施方案中，所述容器包括除臭剂施加器。
[0011] 在一些实施方案中，所述容器还包括混合腔室。在一些实施方案中，致动后氨氧化细菌和活化剂在混合腔室内相互混合或接触。
[0012] 在一些实施方案中，第一腔室或氨氧化细菌制剂，还包含赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂中的一种。所述赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂和美容上可接受的赋形剂中的一种，可适于局部、鼻部、肺部和胃肠道施用中的一种。所述赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂和美容上可接受的赋形剂中的一种可为表面活性剂。
[0013] 在一些实施方案中，表面活性剂可选自由以下组成的组：
[0014] 椰油酰胺丙基甜菜碱(ColaTeric COAB)、聚乙烯山梨醇酯(例如，吐温80(Tween 80))、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf 6 NAT)、月桂基醚硫酸钠/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜碱(Plantapon 611 L UP)、月桂基醚硫酸钠(例如，RhodaPex ESB 70 NAT)、烷基聚葡糖苷(例如，Plantaren 2000 N UP)、月桂基醚硫酸钠(Plantaren 200)、布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂(Dr.Bronner's Castile soap)、月桂胺氧化物(ColaLux Lo)、十二烷基硫酸钠(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷(PolySufanate 160 P)、月桂基硫酸钠(Stepanol-WA Extra K)及其组合。
[0015] 在一些实施方案中，所述容器可大体上不含其它生物体。所述容器可置于粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带中。所述容器可以作为粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带提供。在一些实施方案中，所述氨氧化细菌制剂可包括保湿剂、除臭剂、香味剂、着色剂、驱虫剂、清洁剂或紫外线阻隔剂。在一些实施方案中，所述容器还可包括保湿剂、除臭剂、香味剂、着色剂、驱虫剂、清洁剂或紫外线阻隔剂。在一些实施方案中，提供一种容器，其中所述保湿剂、除臭剂、香味剂、着色剂、驱虫剂、清洁剂或紫外线阻隔剂中的至少一种置于第一腔室、第二腔室和第三腔室中的一个或多个中。
[0017] 在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂包含约109至约1013CFU/L。在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂包含约1010至约1013CFU/L。在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂包含约0.1毫克(mg)至约1000mg氨氧化细菌。氨氧化细菌与药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂的质量比在约0.1克/升至约1克/升的范围内。
[0019] 在一些实施方案中，第一腔室和第二腔室中的至少一个包括至少一种混合指示剂组分以指示氨氧化细菌制剂和活化剂的混合。在一些实施方案中，所述容器，例如第一腔室和第二腔室中的至少一个，包括至少一种活化指示剂组分以指示氨氧化细菌制剂和活化剂的活化。至少一种混合指示剂组分或所述至少一种活化指示剂组分包含颜色标志物。第一颜色标志物可位于所述第一腔室内而第二颜色标志物可位于所述第二腔室内，其中，在混合后，产生第三种颜色。
[0020] 在一些实施方案中，所述容器可配置为在第二腔室的活化剂之前将来自于第一腔室的氨氧化细菌制剂递送到表面。在一些实施方案中，所述容器可配置为在来自于第一腔室的氨氧化细菌制剂之前将第二腔室的活化剂递送到表面。在一些实施方案中，所述容器可配置为大体上同时递送来自于第一腔室的氨氧化细菌制剂和第二腔室的活化剂。
[0021] 在一些实施方案中所述容器可包括经配置以向第一腔室和第二腔室中的至少一个提供稀释液的第三腔室。在一些实施方案中，所述容器被构造成至少部分对气体交换、水和光中的至少一种有抗性。
[0022] 在一些实施方案中氨氧化细菌选自由亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas)、亚硝化球菌属(Nitrosococcus)、亚硝化螺菌属(Nitrosospira)、亚硝化囊菌属(Nitrosocystis)、亚硝化叶菌属(Nitrosolobus)、亚硝化弧菌属(Nitrosovibrio)及其组合组成的组。在一些实施方案中提供一种容器，其中第一腔室和第二腔室中的一个还包括选自乳酸杆菌属(Lactobacillus)、链球菌属(Streptococcus)、双歧杆菌属(Bifidobacter)及其组合的生物体。在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂包含呈生长状态的氨氧化细菌。在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂包含呈储存状态的氨氧化细菌。在一些实施方案中，氨氧化细菌包含呈多磷酸盐负载状态的氨氧化细菌。
[0023] 在一些实施方案中，在致动后，呈储存状态和多磷酸盐负载状态的至少一种氨氧化细菌与活化剂混合，例如，以提供活化氨氧化细菌，例如呈生长状态的氨氧化细菌。
[0024] 在一些实施方案中，所述容器可适于递送美容产品。在一些实施方案中，所述容器可适于递送治疗产品。
[0025] 在一些实施方案中，所述容器的内容物可用于治疗以下的至少一种：HIV皮炎、溃疡(例如静脉性溃疡，例如下肢溃疡，例如下肢静脉性溃疡)中的感染(例如糖尿病足溃疡中的感染)、过敏性皮炎、痤疮(例如寻常痤疮)、湿疹、接触性皮炎、过敏反应、银屑病、荨麻疹、酒渣鼻、皮肤感染、血管疾病、阴道酵母菌感染、性传播疾病、心脏病、动脉粥样硬化、脱发、继发于糖尿病或卧床的下肢溃疡、心绞痛(特别是慢性稳定型心绞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注损伤、蹄叶炎、高血压、肥厚性器官退化、雷诺氏现象(Raynaud's phenomenon)、纤维化、纤维化器官退化、过敏、自身免疫性致敏、终末期肾病、肥胖、阳痿、肺炎、原发性免疫缺陷病、大疱性表皮松解症或癌症。在实施方案中，所述病状是下肢静脉性溃疡。
[0026] 在一些实施方案中提供一种容器，其中该容器的重量低于约50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000克。
[0027] 在一些实施方案中，第一腔室和第二腔室配置为使得屏障相对于第一腔室和第二腔室不固定。在一些实施方案中，第一腔室和第二腔室配置为使得屏障至少部分为第一腔室和第二腔室共有。在一些实施方案中，第一腔室包括第一壳体和第一内腔，并且第二腔室包括第二壳体和第二内腔。在一些实施方案中，第一壳体和第二壳体彼此相对固定。在一些实施方案中，第一壳体和第二壳体的一部分为第一腔室和第二腔室共用。在一些实施方案中，该部分包括屏障。在一些实施方案中，第一壳体和第二壳体相互独立地移动。
[0028] 本公开尤其提供了一种试剂盒。该试剂盒可包括氨氧化细菌制剂和用于活化氨氧化细菌的活化剂。该试剂盒可包括用于将氨氧化细菌制剂和活化剂中的至少一种递送给受试者的递送装置。该试剂盒可包括如本文所述的容器。该递送装置可以是如本文所述的容器。
[0029] 该递送装置可包括第一腔室和第二腔室，其中第一腔室和第二腔室被屏障隔开，提供所述屏障是为了防止第一腔室和第二腔室之间的流体连通。氨氧化细菌制剂可置于所述第一腔室中，并且活化剂可置于所述第二腔室中。活化剂可包含氨、铵离子和尿素中的至少一种。
[0030] 在一些实施方案中，所述试剂盒可包括为清洁要施加氨氧化细菌制剂的表面而提供的洗涤液或擦拭物。所述试剂盒还可包括稀释液以允许稀释氨氧化细菌制剂和活化剂中的至少一种。
[0031] 在一些实施方案中，所述试剂盒可包括对测定所述氨氧化细菌制剂的活力的分析。在一些实施方案中，所述试剂盒还可包括对测定要施加所述氨氧化细菌制剂的表面的特征的分析。
[0032] 在一些实施方案中所述活化剂可包含缓冲溶液。在一些实施方案中，所述活化剂可包含介质。
[0033] 在一些实施方案中，所述递送装置配置为使得在致动后，氨氧化细菌制剂和活化剂混合。该递送装置可包括泵。
[0034] 在一些实施方案中，第一腔室和第二腔室中的一个置于彼此之内。在一些实施方案中，第二腔室置于隔室内，并且该隔室置于第一腔室内。在一些实施方案中，第一腔室置于隔室内，并且该隔室置于第二腔室内。在一些实施方案中，第二腔室可包括控释材料，例如缓释材料，及包含氨、铵离子和尿素中的至少一种的活化剂，以在递送时向氨氧化细菌制剂提供氨、铵离子和尿素中的所述至少一种的控释，例如缓释。
[0035] 在一些实施方案中，所述递送装置可包括一次性递送装置。在一些实施方案中，所述递送装置可包括多次用递送装置。在一些实施方案中，所述递送装置可包括双室注射器。在一些实施方案中，所述递送装置可包括双室瓶。在一些实施方案中，所述递送装置可包括双室安瓿。在一些实施方案中，所述递送装置可包括除臭剂施加器。
[0036] 在一些实施方案中，所述递送装置可包括混合腔室。在一些实施方案中，致动后氨氧化细菌和活化剂可在混合腔室内相互混合或接触。在一些实施方案中，第一腔室或氨氧化细菌制剂，还可包含赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂中的一种。在一些实施方案中，所述赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂中的一种适于局部、鼻部和肺部施用中的一种。
[0037] 在一些实施方案中，所述赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂和美容上可接受的赋形剂中的一种为表面活性剂。在一些实施方案中，所述表面活性剂可选自由以下组成的组：椰油酰胺丙基甜菜碱(ColaTeric COAB)、聚乙烯山梨醇酯(例如，吐温80)、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf 6 NAT)、月桂基醚硫酸钠/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜碱(Plantapon 611 L UP)、月桂基醚硫酸钠(例如，RhodaPex ESB 70 NAT)、烷基聚葡糖苷(例如，Plantaren 2000 N UP)、月桂基醚硫酸钠(Plantaren 200)、布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂、月桂胺氧化物(ColaLux Lo)、十二烷基硫酸钠(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷
(PolySufanate 160P)、月桂基硫酸钠(Stepanol-WA Extra K)及其组合。
(PolySufanate 160P)、月桂基硫酸钠(Stepanol-WA Extra K)及其组合。
[0038] 在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂和活化剂中的至少一种大体上不含其它生物体。在一些实施方案中氨氧化细菌制剂可置于粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带中。在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂可作为粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带提供。在一些实施方案中，所述试剂盒还可包括保湿剂、除臭剂、香味剂、着色剂、驱虫剂、清洁剂或紫外线阻隔剂。所述保湿剂、除臭剂、香味剂、着色剂、驱虫剂、清洁剂和紫外线阻隔剂中的至少一种置于第一腔室、第二腔室和第三腔室中的一个或多个中。
[0039] 在一些实施方案中，所述赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂，可包含抗粘附剂、粘合剂、涂层剂、崩解剂、填充剂、调味剂、着色剂、润滑剂、助流剂、吸附剂、防腐剂或甜味剂。
[0040] 在一些实施方案中，为所述试剂盒提供可包括约1010至约1013CFU/L的氨氧化细菌制剂。在一些实施方案中，氨氧化细菌的制剂可以包括约0.1毫克(mg)至约1000mg氨氧化细菌。在一些实施方案中，氨氧化细菌与赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂的质量比在约0.1克/升至约1克/升的范围内。
[0041] 在一些实施方案中，所述试剂盒的内容物可用于治疗或预防皮肤病症，治疗或预防与低亚硝酸盐水平相关的疾病或病状，治疗或预防体臭，治疗以向受试者供给一氧化氮，或治疗以抑制微生物生长。在一些实施方案中所述试剂盒还可包括至少一种混合指示剂组分以指示氨氧化细菌制剂和活化剂的混合。在一些实施方案中，第一腔室和第二腔室中的至少一个包括至少一种活化指示剂组分以指示氨氧化细菌制剂和活化剂的活化。在一些实施方案中，所述试剂盒可包括至少一种活化指示剂组分以指示氨氧化细菌制剂和活化剂的活化。在一些实施方案中，至少一种混合指示剂组分或所述至少一种活化指示剂组分包含颜色标志物。在一些实施方案中，第一颜色标志物位于所述第一腔室内而第二颜色标志物位于所述第二腔室内，其中，在混合后，产生第三种颜色。
[0042] 在一些实施方案中，所述递送装置可配置为在活化剂之前将氨氧化细菌制剂递送到表面。在一些实施方案中，所述递送装置可配置为在氨氧化细菌制剂之前将活化剂递送到表面。所述递送装置可配置为大体上同时递送氨氧化细菌制剂和活化剂。
[0043] 在一些实施方案中，所述递送装置可包括第三腔室。在一些实施方案中，第三腔室包括稀释液。
[0044] 在一些实施方案中，所述递送装置被构造成至少部分对气体交换、水和光中的至少一种有抗性。
[0045] 在一些实施方案中，所述试剂盒的氨氧化细菌选自由亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属、亚硝化弧菌属及其组合组成的组。在一些实施方案中，所述试剂盒还可包括选自乳酸杆菌属、链球菌属、双歧杆菌属及其组合的生物体。
[0046] 在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂包含呈生长状态的氨氧化细菌。在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂包含呈储存状态的氨氧化细菌。在一些实施方案中，氨氧化细菌包含呈多磷酸盐负载状态的氨氧化细菌。
[0047] 在一些实施方案中，所述试剂盒可适于递送美容产品。在一些实施方案中，所述试剂盒可适于递送治疗产品。
[0048] 在一些实施方案中，所述试剂盒的内容物可用于治疗以下的至少一种：HIV、皮炎、溃疡(例如静脉性溃疡，例如下肢溃疡，例如下肢静脉性溃疡)中的感染(例如糖尿病足溃疡中的感染)、过敏性皮炎、痤疮(例如寻常痤疮)、湿疹、接触性皮炎、过敏反应、银屑病、荨麻疹、酒渣鼻、皮肤感染、血管疾病、阴道酵母菌感染、性传播疾病、心脏病、动脉粥样硬化、脱发、继发于糖尿病或卧床的下肢溃疡、心绞痛(特别是慢性稳定型心绞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注损伤、蹄叶炎、高血压、肥厚性器官退化、雷诺氏现象、纤维化、纤维化器官退化、过敏、自身免疫性致敏、终末期肾病、肥胖、阳痿、肺炎、原发性免疫缺陷病、大疱性表皮松解症或癌症。在实施方案中，所述病状是下肢静脉性溃疡。
[0049] 在一些实施方案中，所述试剂盒还可包括将氨氧化细菌制剂和活化剂中的至少一种递送给受试者的使用说明书。在一些实施方案中，递送装置的重量低于约50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000克。
[0050] 在一些实施方案中，所述试剂盒可包括递送装置，其中第一腔室和第二腔室配置为使得所述屏障相对于第一腔室和第二腔室不固定。在一些实施方案中，所述试剂盒可包括递送装置，其中第一腔室和第二腔室配置为使得所述屏障至少部分为第一腔室和第二腔室共有。在一些实施方案中，所述试剂盒可包括递送装置，其中第一腔室包括第一壳体和第一内腔，并且第二腔室包括第二壳体和第二内腔。在一些实施方案中，第一壳体和第二壳体彼此相对固定。在一些实施方案中，第一壳体和第二壳体的一部分为第一腔室和第二腔室共用。在一些实施方案中，该部分包括屏障。在一些实施方案中，第一壳体和第二壳体相互独立地移动。
[0051] 在一些实施方案中，提供了一种试剂盒，其包括第一化妆品和第二化妆品，其中所述第一化妆品包含氨氧化细菌。在一些实施方案中，所述第二化妆品包含氨氧化细菌。
[0052] 在一些实施方案中，所述试剂盒可包括第一化妆品和第二化妆品中的至少一种，其包括下述产品中的至少一种：婴儿用品，例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜；浴用制剂，例如浴油、浴皂、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊；眼妆制剂，例如眉笔、眼线笔、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏；香料制剂，例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊；发用制剂，例如护发素、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液；染发制剂，例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂；化妆制剂，例如扑面粉、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂；美甲制剂，例如底部涂层和内部涂层、角质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂；口腔卫生用品，例如牙粉、漱口水和口气清新剂；浴用香皂和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂；剃须用制剂，例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂；护肤制剂，例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂；和晒黑制剂，例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
[0053] 在一些实施方案中，本公开尤其提供了一种提供氨氧化细菌制剂或保存氨氧化细菌制剂的方法(其包括)。该方法可包括在足够低的二氧化碳浓度及足够高的氧浓度和氨基酸浓度下培养氨氧化细菌，使得所述氨氧化细菌积累多磷酸盐，从而提供氨氧化细菌制剂或保存氨氧化细菌制剂。
[0054] 在一些实施方案中，培养可包括在二氧化碳浓度低于约200ppm且氧浓度介于约5％至约100％饱和度的环境中，使氨氧化细菌样品与pH为约7.4或更低，氨、铵离子和尿素中的至少一种的浓度介于约10微摩尔和约200毫摩尔之间的培养基接触。
[0056] 在一些实施方案中，接触所述样品可包括接触所述样品达预定时间段。所述预定时间段可至少部分基于约0.2-10倍、0.3-5倍、0.5-3倍、0.5-1.5倍或0.5-1倍所述氨氧化细菌的倍增时间的时间段。所述预定时间段可至少部分基于为所述氨氧化细菌约1个倍增时间的时间段。在一些实施方案中，预定时间段介于约8小时和12小时之间。在一些实施方案中，预定时间段为约10小时。
[0057] 在一些实施方案中，氨氧化细菌样品呈生长状态。
[0058] 在一些实施方案中，所述方法还可包括在二氧化碳浓度低于约400ppm且氧浓度介于约0％至约100％饱和度的环境中，使所述氨氧化细菌样品与pH为约7.4或更低，氨、铵离子和尿素中的至少一种的浓度介于约10微摩尔和约100微摩尔之间的培养基接触。
[0059] 在一些实施方案中可为组合物提供通过如本文所述的方法保存的氨氧化细菌。
[0060] 在一些实施方案中，本公开尤其提供了一种使氨氧化细菌从储存状态复活以便使用的方法，其包括：提供如上所述的组合物，并且在二氧化碳浓度为约200ppm至约5％饱和度且氧浓度介于约5％至约100％饱和度的环境中，使该组合物样品与pH为至少约7.6，氨、铵离子和尿素中的至少一种的浓度介于约10微摩尔和约100毫摩尔之间的培养基接触。
[0061] 在一些实施方案中，接触所述样品包括接触所述样品达预定时间段。在一些实施方案中，所述预定时间段小于约72小时。在一些实施方案中，所述预定时间段小于约70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、10、5、4、3、2、1、0.5、0.25、0.1小时。在一些实施方案中所述培养基还包含缓冲液和/或氨、铵离子和尿素中的至少一种。
[0062] 在一些实施方案中，提供了包含通过上述方法复活的氨氧化细菌的组合物。
[0063] 在一些实施方案中，本公开尤其提供了一种将氨氧化细菌递送给受试者的方法，其包括：提供氨氧化细菌制剂，提供活化剂并且合并氨氧化细菌制剂和活化剂。该方法还可包括将氨氧化细菌制剂和活化剂施用给受试者。在一些实施方案中，提供了一种方法，其中氨氧化细菌制剂和活化剂的合并发生在递送给受试者之前，例如在容器或递送装置中。在一些实施方案中，提供了一种方法，其中氨氧化细菌制剂和活化剂的合并发生在递送时，例如在受试者的表面。在一些实施方案中，该方法包括使用如本文所述的容器或如本文所述的组合物。在一些实施方案中，该方法包括使用如本文所述的试剂盒。
[0064] 在一些实施方案中，本公开尤其提供一种提供氨氧化细菌制剂的方法，其包括提供如本文所述的容器，并且转移所述氨氧化细菌制剂和所述活化剂以提供活化氨氧化细菌，例如呈生长状态的氨氧化细菌。该方法还可包括致动屏障。致动屏障可包括破坏屏障。在一些实施方案中，在致动后，氨氧化细菌制剂和活化剂可相互混合或接触。在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂和活化剂可在混合腔室内相互混合或接触。在一些实施方案中，活化氨氧化细菌，在致动后，沉积在身体表面上。在一些实施方案中，在活化剂递送之前将氨氧化细菌制剂递送到表面。在一些实施方案中，在氨氧化细菌制剂之前将活化剂递送到表面。
在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂和活化剂同时递送。
在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂和活化剂同时递送。
[0065] 在一些实施方案中，所述身体表面为一部分皮肤。该部分可以是面部区域。该部分可以是唇。该部分可以是腋下。
[0066] 在一些实施方案中，所述方法可用于治疗以下的至少一种：HIV、皮炎、溃疡(例如静脉性溃疡，例如下肢溃疡，例如下肢静脉性溃疡)中的感染(例如糖尿病足溃疡中的感染)、过敏性皮炎、痤疮(例如寻常痤疮)、湿疹、接触性皮炎、过敏反应、银屑病、荨麻疹、酒渣鼻、皮肤感染、血管疾病、阴道酵母菌感染、性传播疾病、心脏病、动脉粥样硬化、脱发、继发于糖尿病或卧床的下肢溃疡、心绞痛(特别是慢性稳定型心绞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注损伤、蹄叶炎、高血压、肥厚性器官退化、雷诺氏现象、纤维化、纤维化器官退化、过敏、自身免疫性致敏、终末期肾病、肥胖、阳痿、肺炎、原发性免疫缺陷病、大疱性表皮松解症或癌症。在实施方案中，所述病状是下肢静脉性溃疡。
[0067] 在一些实施方案中，所述方法可用于治疗或预防皮肤病症，治疗或预防与低亚硝酸盐水平相关的疾病或病状，治疗或预防体臭，治疗以向受试者供给一氧化氮，或治疗以抑制微生物生长。
[0068] 在一些实施方案中，本公开尤其提供了一种制剂，其包含氨氧化细菌并且配制成使得在选定条件下储存后氧化NH4+的能力损失不超过10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％。该制剂可包含如本文所述的氨氧化细菌的组合物。该制剂可通过本文所述的方法来制备。所述选定条件可包括pH小于约7.4的培养基。可选择所述制剂以提供降低水平的二氧化碳或无二氧化碳，例如呈多磷酸盐负载状态或储存状态的情况。
[0069] 在一些实施方案中，该选定条件包括在二氧化碳浓度低于约400ppm且氧浓度介于约0％至约100％饱和度的环境中，pH为约7.4或更低，氨、铵离子和尿素中的至少一种的浓度介于约10微摩尔和约100微摩尔之间的培养基；或在二氧化碳浓度低于约200ppm且氧浓度介于约5％至约100％饱和度的环境中，pH为约7.4或更低，氨、铵离子和尿素中的至少一种的浓度介于约10微摩尔和约200毫摩尔之间的培养基。
[0070] 在一些实施方案中，所述制剂可具有少于约0.01％至约10％的表面活性剂。在一些实施方案中，所述制剂可大体上不含表面活性剂。在一些实施方案中，所述制剂可大体上不含十二烷基硫酸钠。在一些实施方案中，所述制剂可包括螯合剂。在一些实施方案中，所述制剂可大体上不含螯合剂。
[0071] 在一些实施方案中，所述制剂可适于用作美容产品。在一些实施方案中，所述制剂可适于用作治疗产品。在一些实施方案中，所述制剂可置于下述产品中的至少一种中：婴儿用品，例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜；浴用制剂，例如浴油、浴皂、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊；眼妆制剂，例如眉笔、眼线笔、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏；香料制剂，例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊；发用制剂，例如护发素、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液；染发制剂，例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂；化妆制剂，例如扑面粉、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂；美甲制剂，例如底部涂层和内部涂层、角质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂；口腔卫生用品，例如牙粉、漱口水和口气清新剂；浴用香皂和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂；剃须用制剂，例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂；护肤制剂，例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂；和晒黑制剂，例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
[0072] 在一些实施方案中，所述制剂可用于治疗以下的至少一种：HIV、皮炎、溃疡(例如静脉性溃疡，例如下肢溃疡，例如下肢静脉性溃疡)中的感染(例如糖尿病足溃疡中的感染)、过敏性皮炎、痤疮(例如寻常痤疮)、湿疹、接触性皮炎、过敏反应、银屑病、荨麻疹、酒渣鼻、皮肤感染、血管疾病、阴道酵母菌感染、性传播疾病、心脏病、动脉粥样硬化、脱发、继发于糖尿病或卧床的下肢溃疡、心绞痛(特别是慢性稳定型心绞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注损伤、蹄叶炎、高血压、肥厚性器官退化、雷诺氏现象、纤维化、纤维化器官退化、过敏、自身免疫性致敏、终末期肾病、肥胖、阳痿、肺炎、原发性免疫缺陷病、大疱性表皮松解症或癌症。在实施方案中，所述病状是下肢静脉性溃疡。
[0073] 在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂可以包含缓冲液中的氨氧化细菌，基本上由或由缓冲液中的氧化细菌组成，所述缓冲液包含磷酸二钠和氯化镁，基本上由或由磷酸二钠和氯化镁(例如50mM Na2HPO4和2mM MgCl2)组成。所述制剂于容器中提供，该容器构造为容纳约0.1至约100液量盎司、约0.2至约50液量盎司、约0.5至约25液量盎司、约1.0至约10液量盎司、约2.0至约7液量盎司、约3至约5液量盎司。在一些实施方案中，所述制剂是构造为容纳约3.4液量盎司的容器。所述容器可以是单室容器，或本文公开的任何其它容器。
[0074] 氨氧化细菌是普遍存在的革兰氏阴性专性自养菌，其具有只从氨转化为亚硝酸盐产生能量的独特能力。
[0075] 在一些实施方案中，氨氧化细菌催化下列反应。
[0076] 在中性pH下，由接近中性pH的铵产生的氨是初始反应的底物。氨转化为亚硝酸盐分两个步骤进行，所述两个步骤分别由氨单加氧酶(Amo)和羟胺氧化还原酶(Hao)催化，具体如下：
[0077] NH3+2H++2e-+O2→NH2OH+H2O (A)
[0078] NH2OH+H2O→NO2-+4e-+5H+ (B)
[0079] 在一些情况下，反应B是如下所报道，指出在低pH下形成亚硝酸(HNO2)：
[0080] NH2OH+H2O→HNO2+4e-+4H+
[0081] 在某些实施方案中，NH4+和NH3可以在本公开的全文中互换使用。
[0082] 本公开预期了前述的方面和/或实施方案中的任何一个或多个的所有组合，以及与具体实施方式和实施例中所阐述的实施方案中的任何一个或多个的组合。
[0084] 图1示出了根据本公开的一些实施方式的容器的透视图。
[0085] 图2示出了根据本公开的一些实施方式的容器的透视图。
[0086] 图3示出了根据本公开的一些实施方式的容器的透视图。
[0087] 图4示出了根据本公开的一些实施方式的容器的透视图。
[0088] 图5示出了根据本公开的一些实施方式的容器的透视图。
[0089] 图6示出了根据本公开的一些实施方式的容器的透视图。
[0090] 图7示出了根据本公开的一些实施方式的容器的透视图。
[0091] 图8示出了根据本公开的一些实施方式的容器的透视图。
[0092] 图9A示出了亚硝化单胞菌(N.eutropha)D23不同浓度的 Terric COAB的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0093] 图9B示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的 Terric COAB的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0094] 图9C示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的 Terric COAB的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0095] 图9D示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的 Terric COAB的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0096] 图10A示出了亚硝化单胞菌D23在用 Terric COAB温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0097] 图10B示出了亚硝化单胞菌D23在用 Terric COAB温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0098] 图10C示出了亚硝化单胞菌D23在用 Terric COAB温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0099] 图10D示出了亚硝化单胞菌D23在用 Terric COAB温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0100] 图11A示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0101] 图11B示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0102] 图12A示出了亚硝化单胞菌D23用布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0103] 图12B示出了亚硝化单胞菌D23用布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0104] 图12C示出了亚硝化单胞菌D23用布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0105] 图12D示出了亚硝化单胞菌D23用布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0106] 图13A示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的Plantaren 2000NUP的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0107] 图13B示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的Plantaren 2000NUP的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0108] 图14A示出了亚硝化单胞菌D23用Plantaren 2000N UP温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0109] 图14B示出了亚硝化单胞菌D23用Plantaren 2000N UP温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0110] 图14C示出了亚硝化单胞菌D23用Plantaren 2000N UP温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0111] 图14D示出了亚硝化单胞菌D23用Plantaren 2000N UP温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0112] 图15A示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的十二烷基硫酸钠的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0113] 图15B示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的十二烷基硫酸钠的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0114] 图16A示出了亚硝化单胞菌D23用十二烷基硫酸钠温育后的OD600。绘制了OD600相对于时间的曲线图。
[0115] 图16B示出了亚硝化单胞菌D23用十二烷基硫酸钠温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0116] 图17A示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的PolySufanate 160P的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0117] 图17B示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的PolySufanate 160P的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0118] 图18A示出了亚硝化单胞菌D23用PolySufanate 160P温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0119] 图18B示出了亚硝化单胞菌D23用PolySufanate 160P温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0120] 图18C示出了亚硝化单胞菌D23用PolySufanate 160P温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0121] 图18D示出了亚硝化单胞菌D23用PolySufanate 160P温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0122] 图19A示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的Stepanol WA-Extra K的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0123] 图19B示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的Stepanol WA-Extra K的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0124] 图19C示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的Stepanol WA-Extra K的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0125] 图19D示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的Stepanol WA-Extra K的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0126] 图20A示出了亚硝化单胞菌D23用Stepanol WA-Extra K温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0127] 图20B示出了亚硝化单胞菌D23用Stepanol WA-Extra K温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0128] 图20C示出了亚硝化单胞菌D23用Stepanol WA-Extra K温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0129] 图20D示出了亚硝化单胞菌D23用Stepanol WA-Extra K温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0130] 图21A示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的Plantapon 611 L UP的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0131] 图21B示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的Plantapon 611 L UP的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0132] 图21C示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的Plantapon 611 L UP的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0133] 图21D示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的Plantapon 611 L UP的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0134] 图22A示出了亚硝化单胞菌D23用Plantapon 611 L UP温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0135] 图22B示出了亚硝化单胞菌D23用Plantapon 611 L UP温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0136] 图22C示出了亚硝化单胞菌D23用Plantapon 611 L UP温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0137] 图22D示出了亚硝化单胞菌D23用Plantapon 611 L UP温育后的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0138] 图23A示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的吐温80的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0139] 图23B示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的吐温80的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0140] 图24A示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的ColaLux LO的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0141] 图24B示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的ColaLux LO的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0142] 图25A示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的Plantaren 200的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0143] 图25B示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的Plantaren 200的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0144] 图26A示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的RhodaSurf 6的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0145] 图26B示出了亚硝化单胞菌D23用不同浓度的RhodaSurf 6的亚硝酸盐产量。绘制了亚硝酸盐浓度相对于时间的曲线图。
[0146] 图27是亚硝化单胞菌D23的表面活性剂恢复率汇总表。
[0147] 详述
[0148] 本公开的系统和方法尤其提供氨氧化细菌随氨、铵离子和尿素的递送。这可提供优化递送以加速细菌，例如活化细菌(例如，呈生长状态的氨氧化细菌)及其产物(例如，亚硝酸盐和/或一氧化氮和/或一氧化氮前体)的利用率。该系统和方法尤其可提供氨氧化细菌菌落的建立，例如提供氨氧化细菌的稳定复制菌落，例如在受试者表面上，例如局部地。该系统和方法可以在或将近氨氧化细菌递送至环境，例如受试者(例如受试者的表面)时，提供活化剂，例如氨、铵离子和尿素中的一种或多种。这可提升递送(施加或施用)效率，并且有助于在环境中建立菌落以促进菌落的有效建立。这还可以通过提供有利于氨氧化细菌的直接环境而提供氨氧化细菌增强的将氨转化成亚硝酸盐、NO和前体，以及与存在的其它细菌竞争的能力。
[0149] 1.定义
[0150] 氨氧化细菌是指能够将氨或铵氧化成亚硝酸盐的细菌。这可以一定速率实现。速率，例如预定速率，可以指铵离子(NH4+)(例如，约200mM)转化为亚硝酸盐(NO2-)的速率，为-至少50、75、125或150微摩尔NO2/分钟，例如约100-150、75-175、75-125、100-125、125-150或125-175微摩尔/分钟，例如约125微摩尔NO2-/分钟。氨氧化细菌的实例包括亚硝化单胞菌菌株，例如D23和C91，及亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属和亚硝化弧菌属的其它细菌。D23欧洲亚硝化单胞菌菌株是指被命名为AOB D23-100的菌株，其在2014年4月8日保藏于美国组织培养物保藏中心(ATCC)(10801
University Blvd.,Manassas,VA,USA)，登录号为PTA-121157。登录号PTA-121157的核酸序列(例如基因组序列)在此通过引用整体并入。在某些实施方案中，欧洲亚硝化单胞菌是通过引用整体并入本文的2015年4月15日提交的PCT申请第PCT/US2015/025909号中描述的菌株。
University Blvd.,Manassas,VA,USA)，登录号为PTA-121157。登录号PTA-121157的核酸序列(例如基因组序列)在此通过引用整体并入。在某些实施方案中，欧洲亚硝化单胞菌是通过引用整体并入本文的2015年4月15日提交的PCT申请第PCT/US2015/025909号中描述的菌株。
[0151] 如本文中所用，“纯性”是指包含生物体体的组合物大体上不含其它生物体。例如，氨氧化细菌的纯性培养物是大体上不含除氨氧化细菌以外的生物体的培养物。在一些实施方案中，“大体上不含”表示不能被用于检测其它生物体的方法(例如，平板接种培养物并检查菌落形态，或针对保守基因如16S RNA的PCR)检测到。纯性组合物可以包含不是生物体体的元素，例如，它可以包含营养物或赋形剂。本文所讨论的氨氧化细菌的任何实施方案、制剂、组合物或配制物可以包含任选纯性的氨氧化细菌、基本上由任选纯性的氨氧化细菌组成或由任选纯性的氨氧化细菌组成。
[0152] 如本文中所使用，“自养生物”例如自养细菌是能够通过使用无机材料作为营养源以及使用光合作用或化学合成作为能量来源进行自营养的任何生物体。自养细菌可由二氧+ +化碳和衍生自其它来源的ATP、使氨氧化成亚硝酸盐、使硫化氢氧化和使Fe2氧化成Fe3 合成有机化合物。本公开的自养细菌无法引起感染。
[0153] “培养”是指将一定量的所需细菌放置在促进其生长(即，促进细胞分裂)的条件下的过程。所述条件可以涉及特定培养基、设定温度的范围和/或搅拌速率。可以在液体培养基中或在平板例如琼脂平板上培养细菌。
[0154] “活化”，如本文中所用，是相对于自养细菌，例如，氨氧化细菌使用的。活化是指可使氨氧化细菌处于可能更活跃的状态，例如生长状态下的任何作用。活化可涉及自养细菌，例如氨氧化细菌的刺激，以某种方式帮助将氨、铵离子和尿素中的至少一种转化为亚硝酸盐、一氧化氮或一氧化氮前体。活化可涉及帮助建立细菌菌落，例如，以允许自养细菌例如氨氧化细菌与其它现有细菌竞争。活化可涉及提供可利于自养细菌，例如氨氧化细菌的持续性和/或生长的环境。活化可涉及加速自养细菌，例如氨氧化细菌对环境或表面的可利用率。“活化”可提供将呈“活化”或“生长状态”的氨氧化细菌。“活化”可随活化剂的使用而发生。氨氧化细菌可接触活化剂以提供呈“活化”或“生长”状态的氨氧化细菌。这可以在容器、递送装置或递送系统内或外部发生，例如在第一腔室、第二腔室、混合腔室、第三或另外的腔室或其组合内。活化剂可为氨、铵离子或尿素中的至少一种。活化剂可为铵盐，例如氯化铵或硫酸铵。活化剂，例如铵盐，例如氯化铵或硫酸铵的浓度可在约10微摩尔至约100毫摩尔的范围内。在某些方面，活化剂，例如铵盐，例如氯化铵或硫酸铵的浓度可在约0.5mM至约50mM的范围内。活化剂可呈溶液、悬浮液、粉末，例如结晶形式、培养基、缓冲液，或置于用于保持活化剂的合适载体中或作为载体提供。氨氧化细菌可呈任何合适形式，以保持AOB呈所需状态，例如储存状态，例如水溶液、凝胶或粉末形式。氨、铵离子或尿素中的至少一种可处于培养基或缓冲液中以促进氨氧化细菌的生长，例如AOB培养基或生长培养基。定时释放或控释尿素可用作活化剂。
[0155] “致动”，如本文中所用，意指正在采取的某种作用，例如，正在开始的过程或正投入运动的某物。在一些实施方案中，致动可指打破容器的屏障，混合容器的内容物，或开始容器一种或多种内容物的运动，例如将容器的一种或多种内容物递送到容器外，例如递送到表面或环境中。在一些实施方案中，致动屏障可包括会随时间推移而降解的一种或多种材料将接触第一腔室和第二腔室的内容物，例如第一腔室内容物的控释，或来自第二腔室的内容物的控释，或两者。
[0156] “屏障”，如本文中所用，可意指可以用于阻碍通道或保持分离，例如介于容器的第一腔室和第二腔室之间的任何结构或构造。屏障可呈阀门(例如止回阀)、过滤材料、薄膜、蜡、脂质、聚合物或控释材料(例如，缓释材料)的形式。屏障可以是在容器致动之后，可允许内容物从第一腔室通过进入第二腔室，内容物从第二腔室通过进入第一腔室，或两者情况的材料。可以在致动时，例如通过刺破、击穿、刺穿、穿孔、穿透、裂开、打开或撕裂屏障而破坏屏障。屏障可呈阀门(例如止回阀)、与容器的一种或多种内容物接触后无法降解的柔性或非柔性材料，或与容器的一种或多种内容物接触后可降解的柔性或非柔性材料、过滤材料的形式。屏障可由适于其目的的任何材料制成，例如，可用于阻碍通道或保持分离的材料，例如，聚合材料或金属材料。
[0157] 在一些实施方案中，与本公开最相关的状态是生长(例如，最大生长)的状态，其特征为至少约7.6的pH、氨、微量矿物质、氧和二氧化碳。另一种状态可以由约7.4或更小的pH表征以及由二氧化碳的缺乏表征。在低二氧化碳条件下，氨氧化细菌(例如，亚硝化单胞菌)继续将氨氧化成亚硝酸盐并产生ATP，但缺乏二氧化碳，例如，缺乏足够的二氧化碳来固定和生成蛋白质，其相反生成被其用作能量储存介质的多磷酸盐。这可以允许氨氧化细菌保持在“储存状态”下一段时间，例如预定的时间段，例如，至少1、2、3、4、5、6、7天；1、2、3、4周；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个月；1、2、3、4或5年。在一些实施方案中，氨氧化细菌可以保持在储存状态下至少约6个月至约1年。
[0158] 如本文中所用，“生长状态”是指在可以具有至少约7.6的pH的状态下或环境(例如介质，例如培养基，例如生长培养基)中的自养细菌(例如，氨氧化细菌)。氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平可以在约1微摩尔和1000毫摩尔之间。微量物质的水平在约0.01微摩尔的铁和200微摩尔的铁之间。氧的水平在约5％和100％氧饱和度(例如，培养基的氧饱和度)之间。二氧化碳的水平在约20ppm和10％饱和度(例如，培养基的饱和度)之间。在某些方面，氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平可以在约10微摩尔和100毫摩尔之间。微量物质的水平在约0.1微摩尔的铁和20微摩尔的铁之间。氧的水平在约5％和100％氧饱和度之间。二氧化碳的水平在约200ppm和5％饱和度(例如，培养基的饱和度)之间。
[0159] 如本文中所用，“多磷酸盐负载状态”是指在可以具有约7.4或更小的pH的状态下或环境(例如介质，例如培养基，例如生长培养基)中的自养细菌(例如，氨氧化细菌)。氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平在约1微摩尔和2000毫摩尔之间。微量物质的水平在0.01微摩尔铁和200微摩尔铁之间。氧的水平在约0％和100％O2饱和度(例如，培养基的氧饱和度)之间。二氧化碳的水平介于/小于约0和400ppm之间，且磷酸盐水平大于约1微摩尔。在某些方面，氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平在约10微摩尔和200毫摩尔之间。微量物质的水平在0.1微摩尔的铁和20微摩尔的铁之间。氧的水平在约5％和100％O2饱和度之间。二氧化碳的水平介于/小于约0和200ppm之间，且磷酸盐水平大于约10微摩尔。
[0160] 多磷酸盐负载状态的目的可以是向AOB提供充足的氨、铵离子和/或尿素和O2，以使得可以产生ATP，但不向AOB提供CO2和碳酸盐，以使得它们无法使用该ATP固定CO2，而是使用该ATP来生成可以由细菌储存的多磷酸盐。
[0161] 如本文中所用，术语“储存状态”是指在具有约7.4或更小的pH(在一些实施方案中，pH可以为7.6或更小)的状态下或环境(例如介质，例如培养基，例如生长培养基)中的自养细菌(例如，氨氧化细菌)。氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平在约1和1000微摩尔之间。微量物质的水平在约0.1和100微摩尔之间。氧的水平在约0％和100％饱和度(例如，培养基的饱和度)之间。二氧化碳的水平在约0和800ppm之间。在某些方面，氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平在约10和100微摩尔之间。微量物质的水平在约1和10微摩尔之间。氧的水平在约0％和100％饱和度(例如，培养基的饱和度)之间。二氧化碳的水平在约0和400ppm之间。
[0163] 如本文中所使用，“组合”施用意指在受试者罹患病症的过程中将两种(或更多种)不同的治疗递送给受试者，例如，在受试者已被诊断为患有所述病症之后以及在所述病症已经被治愈或消除之前递送所述两种或更多种治疗。在一些实施方案中，一种治疗的递送在第二治疗的递送开始时仍然在发生，从而存在重叠。这有时在本文中被称为“同时”或“伴随”或“共同递送”。在其它实施方案中，一种治疗的递送在开始另一种治疗的递送之前结束。这有时在本文中被称为“连续”或“顺序递送”或“依序递送”。在任一种情况的实施方案中，治疗都因为组合施用而更有效。例如，第二治疗是更有效的，例如，相比于如果在缺少第一治疗的情况下施用第二治疗将观察到的情况，利用更少的第二治疗观察到同等的效果，或第二治疗在更大程度上减少症状，或者对于第一治疗将观察到类似的情况。在一些实施方案中，递送使得症状或与病症相关的其它参数的减少比在递送一种治疗而缺少另一种治疗的情况下将会观察到的减少更大。两种治疗的作用可以部分相加、全部相加或比相加更大(即，协同)。所述递送可以使得递送的第一治疗的作用在递送第二治疗时仍然是可检测的。
[0164] “天然产品”是或者可包含可至少部分源自自然界的产品。它可以是任何事物，或包括由活生物体产生的任何事物，并且可包括生物体本身。天然产品可包括或包含整个生物体和生物体的一部分(例如，植物的一部分)、来自于生物体的提取物、来自于生物体的有机化合物、来自于生物体的纯化有机化合物。天然产品可以是或包含发现的有机物和细胞，包括初级代谢物(氨基酸、碳水化合物和核酸)和次级代谢产物(在有限范围的物种中找到的有机化合物，例如，聚酮、脂肪酸、萜类、类固醇、苯丙烷类、生物碱、专用氨基酸和肽、专用碳水化合物)。天然产品可以是或包含聚合有机材料，例如纤维素、木质素和蛋白质。
[0165] 天然产品可以是或包含商用产品，并且可以指由天然来源产生的化妆品、膳食补充剂和食品。天然产品可具有可能，例如在治疗疾病或病状中具有治疗益处的药理学或生物学活性。天然产品可包括在传统医学、用于美容目的的治疗和温泉疗法中。本文提到的天然产品可包含本文描述的任何一种或多种组分，其作为天然产品掺入包含一种或多种其它组分，例如赋形剂的制剂或配制物中。称为天然产品的制剂或配制物可包含本文定义的天然产品和一种或多种另外的组分或成分。本公开全篇所讨论的任何组合物、制剂或配制物可以是或包含一种或多种天然产品。
[0166] 术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”(如果为单链)在本文中可互换地用于指氨基酸聚合物。该聚合物可以是直链或支链，其可以包含修饰的氨基酸，并且其可以间杂有非氨基酸。该术语还包括已被修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作，诸如与标记组分缀合。该多肽可以从天然来源中分离，可以通过重组技术从真核或原核宿主产生，或者可以是合成程序的产物。
[0167] 如本文中所用，“存在”或“水平”可指组分，例如氨氧化细菌、氨、铵离子、尿素、亚硝酸盐或一氧化氮中的任何一种或多种的定性或定量的量。存在或水平可包括零值或缺乏组分的存在。
[0168] 如本文中所用，术语“表面活性剂”包括可降低两种液体之间或液体和固体之间的表面张力或界面张力的化合物。表面活性剂可作为洗涤剂、润湿剂、乳化剂、发泡剂和分散剂。表面活性剂可以包括下列中的一种或多种，单独的或与所列那些的组合，或其它表面活性剂或表面活性剂样化合物：椰油酰胺丙基甜菜碱(ColaTeric COAB)、聚乙烯山梨醇酯(例如，吐温80)、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf 6 NAT)、月桂基醚硫酸钠/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜碱(Plantapon 611 L UP)、月桂基醚硫酸钠(例如，RhodaPex ESB 70 NAT)、烷基聚葡糖苷(例如，Plantaren 2000 N UP)、月桂基醚硫酸钠(Plantaren 200)、布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂、布朗纳博士的婴儿肥皂、月桂胺氧化物(ColaLux Lo)、十二烷基硫酸钠(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷(PolySufanate 160 P)、月桂基硫酸钠(Stepanol-WA Extra K)及其组合。布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂和婴儿肥皂包括水、有机椰子油、氢氧化钾、有机橄榄油、有机fair deal麻油、有机荷荷巴油、柠檬酸和生育酚。
[0169] 如本文中所用，“转基因”意指包含DNA的一个或多个外源性部分。外源性DNA衍生自另一个生物体，例如，另一种细菌、噬菌体、动物或植物。
[0170] 如本文中所用，“疾病或病状的治疗”是指与类似的但未经治疗的患者相比，降低所述疾病或病状的至少一种症状的严重程度或频率。治疗还可以指与类似的但未经治疗的患者相比，阻止、减缓或逆转疾病或病状的进展。治疗可以包括解决疾病和/或一种或多种症状的根本原因。
[0171] 如本文中所使用，“治疗有效量”是指足以防止疾病或病状的推进或引起疾病或病状的消退，或能够缓解疾病或病状的症状，或能够实现所需结果的剂量。治疗有效剂量可以被测量为例如细菌的数量或活菌的数量(例如，以CFU计)或细菌的质量(例如，以毫克、克或千克计)，或细菌的体积(例如，以mm3计)。
[0172] 如本文中所使用，术语“活力”是指自养细菌(例如，氨氧化细菌)以预定速率将氨、铵或尿素氧化为亚硝酸盐的能力。在一些实施方案中，速率是指铵离子(NH4+)(例如，约200mM)转化为亚硝酸盐(NO2-)的速率，为至少50、75、125或150微摩尔NO2-/分钟，例如约
100-150、75-175、75-125、100-125、125-150或125-175微摩尔/分钟，例如约125微摩尔NO2-/分钟。
100-150、75-175、75-125、100-125、125-150或125-175微摩尔/分钟，例如约125微摩尔NO2-/分钟。
[0173] 如本文中所提及的“生长培养基”或“AOB培养基”包括表1或表2中的下列组分。
[0174] 表1.
[0175]
[0176] 表2.
[0177]
[0178]
[0179] 给每种溶液高压灭菌，并储存在室温下。
[0180] 2.氨氧化细菌(AOB)
[0181] 自养型氨氧化细菌(在本文中可以被称为AOB)是如以下文献所记录的专性自养菌：Alan B.Hooper和A.Krummel等人，Alan B.Hooper,Biochemical Basis of Obligate Autotrophy in Nitrosomonas europaea,Journal of Bacteriology，1969年2月，第776-
779页；Antje Krummel等人，Effect of Organic Matter on Growth and Cell Yield of Ammonia-Oxidizing Bacteria,Arch Microbiol(1982)133:50-54。这些细菌只从氨氧化为硝酸盐获得所有的代谢能量(一氧化氮(NO)作为其呼吸链中的中间产物)并且通过固定二氧化碳获得几乎所有的碳。它们不能利用除了一些简单分子外的其它碳源。
779页；Antje Krummel等人，Effect of Organic Matter on Growth and Cell Yield of Ammonia-Oxidizing Bacteria,Arch Microbiol(1982)133:50-54。这些细菌只从氨氧化为硝酸盐获得所有的代谢能量(一氧化氮(NO)作为其呼吸链中的中间产物)并且通过固定二氧化碳获得几乎所有的碳。它们不能利用除了一些简单分子外的其它碳源。
[0182] 氨氧化细菌(AOB)广泛存在于环境中，并且在氨、氧和微量金属的存在下将固定二氧化碳和增殖。AOB可以缓慢生长，并且在AOB可以增殖并使氨减少至无毒水平之前，毒性水平的氨可能会杀死鱼类和其它生物体。AOB的缓慢生长还可能会延迟AOB在施用于皮肤时所产生的NO和亚硝酸盐的健康效益。
[0183] 向鱼缸、皮肤或加工补充针对该目的而生长和储存的充足的活AOB是理想的。AOB不形成孢子，因此以高活力储存在干燥状态下是困难的，且储存在潮湿状态下使它们具有代谢活性。
[0184] 已经研究了在废水处理用AOB的储存期间的硝化能力的衰减，例如(Munz G,Lubello C,Oleszkiewicz JA.Modeling the decay of ammonium oxidizing
bacteria.Water Res.2011年1月；45(2):557-64.Oi:10.1016/j.watres.2010.09.022)。
bacteria.Water Res.2011年1月；45(2):557-64.Oi:10.1016/j.watres.2010.09.022)。
[0185] Cassidy等人(U.S.5,314,542)讨论了亚硝化单胞菌的生长、长期储存和活性恢复，其中他们公开了生长亚硝化单胞菌，去除有毒废物，在适当盐度的无菌水中储存长达一年的时间段，且然后通过添加缓冲液(CaCO3)和200ppm铵复活，所述复活需要72小时。
[0186] 本公开规定如果将AOB保持在低二氧化碳但具有足够氧和氨的条件下，在其中它们积累多磷酸盐约1个倍增时间的时间段(约10小时)，则它们积累了足够的多磷酸盐以大大扩充其储存活力、储存时间并且加速其添加和不添加缓冲液和氨时的复活。
[0187] 存在储存充足的多磷酸盐允许AOB(ATP资源)在甚至不存在氨和氧的情况下维持代谢活性，并在原本将会致命的攻击下存活。
[0188] 作为专性自养生物，AOB经由使用能量固定CO2以及还原由氨氧化为亚硝酸盐所生成的等效物来合成蛋白质。生长需要氨、氧、矿物质和二氧化碳。
[0189] 根据K.R.Terry和A.B.Hooper所著的“Polyphosphate and Orthophosphate Content of Nitrosomonas europaea as a Function of Growth”，Journal of
Bacteriology，1970年7月，第199-206页，第103卷，第I期，亚硝化单胞菌可以以几种代谢状态存在。
Bacteriology，1970年7月，第199-206页，第103卷，第I期，亚硝化单胞菌可以以几种代谢状态存在。
[0190] 在本公开中预期的AOB可以包含相对于野生型AOB的突变。这些突变可以例如自然发生、由随机诱变引入或由定点诱变引入。例如，AOB可以缺少野生型AOB通常包含的一个或多个基因或调控DNA序列。AOB还可以包含相对于测序菌株或野生型菌株的点突变、取代、插入、缺失和/或重排。AOB可以是优化AOB的纯化制品。
[0191] 在某些实施方案中，AOB是转基因的。例如，它可以包含野生型氨氧化细菌缺少的一个或多个基因或调控DNA序列。更具体地说，氨氧化细菌可以包含例如报告基因、选择标记、编码酶的基因或启动子(包括诱导型启动子或阻抑型启动子)。在一些实施方案中，额外的基因或调控DNA序列被整合到细菌染色体内；在一些实施方案中，额外的基因或调控DNA序列位于质粒上。
[0192] 在一些优选的实施方案中，AOB与天然存在的细菌的不同之处在于至少一种核苷酸。例如，AOB与天然存在的细菌的不同之处可以在于作为相关途径(例如，氨代谢途径、尿素代谢途径或用于产生一氧化氮或一氧化氮前体的途径)的一部分的基因或蛋白质。更具体地说，AOB可以包含提升所述途径的活性(例如，通过提高该途径的要素的水平或活性)的突变。
[0193] 上述突变可以使用任何合适的技术来引入。用于将突变引入给定位置中的许多方法是已知的。例如，可以使用定点诱变、寡核苷酸定向诱变或位点特异性诱变。具体诱变方案的非限制性实例描述于例如Mutagenesis，13.1-13.105页(Sambrook和Russell编辑，Molecular Cloning A Laboratory Manual，第3卷，第3增补版，2001)中。此外，可从商业供应商得到的充分表征的诱变方案的非限制性实例包括但不限于：Altered Sites.RTM.II体外诱变系统(Promega Corp.,Madison,Wis.)；Erase-a-Base.RTM.系统(Promega,Madison,Wis.)；GeneTailor.TM.定点诱变系统(Invitrogen,Inc.,Carlsbad,Calif.)；QuikChange.RTM.II定点诱变试剂盒(Stratagene,La Jolla,Calif.)；以及
Transformer.TM.定点诱变试剂盒(BD-Clontech,Mountain View,Calif.)。
Transformer.TM.定点诱变试剂盒(BD-Clontech,Mountain View,Calif.)。
[0194] 在本公开的一些实施方案中，所述氨氧化细菌可以是纯性的。氨氧化细菌的制剂(例如配制物，例如组合物)可以包括纯性氨氧化细菌、基本上由纯性氨氧化细菌组成或由纯性氨氧化细菌组成。氨氧化细菌可以来自选自由亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属、亚硝化弧菌属及其组合组成的组的属。
[0195] 在一些实施方案中，氨氧化细菌的制剂可以包含一定浓度或量的氨氧化细菌以至少部分治疗病状或疾病。氨氧化细菌的制剂可以包含一定浓度或量的氨氧化细菌，以改变(例如，减少或增加)表面(例如，皮肤表面)上的细菌或细菌属的量、浓度或比例。所述细菌可以是非致病性的或致病性的，或潜在致病性的。
[0196] 在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂可以包含约108至约1014CFU/L。所述制剂可以包含至少108、109、1010、1011、2x1011、5x1011、1012、2x1012、5x1012、1013、2x1013、5x1013或1014；或约108-109、109-1010、1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/L。在一些实施方案中，所述制剂可以包含至少108、109、1010、1011、2x1011、5x1011、1012、2x1012、5x1012、1013、2x1013、
5x1013或1014；或约108-109、109-1010、1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/ml。
5x1013或1014；或约108-109、109-1010、1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/ml。
[0197] 在某些方面，所述制剂可以包含约1x109CFU至约10x109CFU。在某些方面，所述制剂可以包含约1x109CFU/L至约10x109CFU/L。
[0198] 在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂可以包含约0.1毫克(mg)至约1000mg氨氧化细菌。在某些方面，所述制剂可以包含约50mg至约1000mg氨氧化细菌。所述制剂可以包含约0.1-0.5mg、0.2-0.7mg、0.5-1.0mg、0.5-2mg、0.5-5mg、2.5-5mg、2.5-7.0mg、5.0-10mg、7.5-
15mg、10-15mg、15-20mg、15-25mg、20-30mg、25-50mg、25-75mg、50-75mg、50-100mg、75-
100mg、100-200mg、200-300mg、300-400mg、400-500mg、500-600mg、600-700mg、700-800mg、
800-900mg、900-1000mg、100-250mg、250-500mg、100-500mg、500-750mg、750-1000mg或500-
1000mg。
15mg、10-15mg、15-20mg、15-25mg、20-30mg、25-50mg、25-75mg、50-75mg、50-100mg、75-
100mg、100-200mg、200-300mg、300-400mg、400-500mg、500-600mg、600-700mg、700-800mg、
800-900mg、900-1000mg、100-250mg、250-500mg、100-500mg、500-750mg、750-1000mg或500-
1000mg。
[0199] 在一些实施方案中，氨氧化细菌的制剂可以包含质量比在约0.1克/升至约1克/升的范围内的氨氧化细菌与赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂。所述制剂可以包含质量比在约0.1-0.2、0.2-0.3、0.1-0.5、0.2-0.7、0.5-1.0或0.7-1.0克/升的范围内的氨氧化细菌与赋形剂。
[0200] 在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂可以包含缓冲液中的氨氧化细菌，基本上由或由缓冲液中的氧化细菌组成，所述缓冲液包含磷酸二钠和氯化镁，基本上由或由磷酸二钠和氯化镁(例如50mM Na2HPO4和2mM MgCl2)组成。
[0201] 所述制剂可包含约0.1至约100液量盎司、约0.2至约50液量盎司、约0.5至约25液量盎司、约1.0至约10液量盎司、约2.0至约7液量盎司、约3至约5液量盎司的体积。在一些实施方案中，制剂可包含约3.4液量盎司的体积。
[0202] 所述制剂可于容器中提供，该容器构造为容纳约0.1至约100液量盎司、约0.2至约50液量盎司、约0.5至约25液量盎司、约1.0至约10液量盎司、约2.0至约7液量盎司、约3至约
5液量盎司。在一些实施方案中，所述制剂是构造为容纳约3.4液量盎司的容器。所述容器可以是单室容器，或本文公开的任何其它容器。
5液量盎司。在一些实施方案中，所述制剂是构造为容纳约3.4液量盎司的容器。所述容器可以是单室容器，或本文公开的任何其它容器。
[0203] 在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂可呈生长状态。生长状态可以通过使氨氧化细菌暴露于可以促进生长的环境来提供。生长状态可以是例如氨氧化细菌处于允许氨氧化细菌能够即时将铵离子(NH4+)转化为亚硝酸盐(NO2-)的环境中的状态。生长状态可以包括在具有大于约7.6的pH的环境中提供氨氧化细菌。生长状态还可以包括在如在部分1中所述的具有氨、铵离子和/或尿素、微量矿物质以及充足的氧和二氧化碳的环境中提供氨氧化细菌。
[0204] 在一些实施方案中，氨氧化细菌的制剂可以处于多磷酸盐负载状态，其中所述状态或环境(例如介质，例如培养基，例如生长培养基)可以具有小于约7.4的pH。氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平可以在约10微摩尔和200毫摩尔之间。微量物质的水平可在0.1微摩尔的铁和20微摩尔的铁之间。氧的水平可以在约5％和100％氧饱和度之间。二氧化碳的水平可以介于/小于约0和200ppm之间，且磷酸盐水平大于约10微摩尔。多磷酸盐负载状态的目的是向AOB提供氨和氧，以使得可以产生ATP，但不向AOB提供二氧化碳和碳酸盐，以使得它们无法使用该ATP固定二氧化碳，而是使用该ATP来生成可以储存的多磷酸盐。
[0205] 在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂可以呈储存状态。储存状态可以被定义为氨氧化细菌处于它们可以被储存至稍后复活的环境中。储存状态可以是例如氨氧化细菌处于允许氨氧化细菌在复活后(例如，在放置于促进生长状态的环境中预定时间段后)可用的环境中的状态。用于复活的预定时间段可以小于72小时。例如，预定时间段可以小于约75小时或小于约72小时。预定时间段可至少部分基于为氨氧化细菌倍增时间的约0.2-10倍、0.3-5倍、0.5-3倍、0.5-1.5倍或0.5-1倍的时间段。所述预定时间段可至少部分基于为所述氨氧化细菌约1个倍增时间的时间段。预定时间段可以在约8小时和12小时之间。预定时间段可以为约10小时。预定时间段可以小于约75小时、72小时、70小时、68小时、65小时、60小时、55小时、50小时、45小时、40小时、35小时、30小时、25小时、20小时、15小时、10小时、5小时、4小时、3小时、2小时或1小时。预定时间段可以在约5分钟和5小时之间。预定时间段可以为约5-10分钟、10-15分钟、15-20分钟、20-25分钟、25-30分钟、30-45分钟、45-60分钟、60分钟-1.5小时、1.5小时-2小时、2小时-2.5小时、2.5小时-3小时、3小时-3.5小时、3.5小时-4小时、4小时-4.5小时、4.5小时-5小时。在一些实施方案中，预定时间段可以为约2小时。
[0206] 储存状态可以包括在具有小于约7.4的pH的环境中提供氨氧化细菌。储存状态还可以包括在如在部分1中所述的具有氨、氨离子和/或尿素、微量矿物质、氧和低浓度二氧化碳的环境中提供氨氧化细菌。
[0207] 储存还可以通过在4℃下储存最多几个月来完成。储存缓冲液在一些实施方案中可以包含50mM Na2HPO4-2mM MgCl2(pH 7.6)。
[0208] 在一些实施方案中，氨氧化细菌可以低温保存。可以将1.25ml氨氧化细菌对数中期培养物添加到2ml的冻存管和0.75ml无菌的80％甘油中。管可以轻轻振荡，并在室温下培养15分钟，以允许细胞吸收冷冻保护剂。可以将所述管直接储存在-80℃冷冻器中用于冷冻和储存。
[0209] 对于培养物的复苏，可以使冷冻原液在冰上解冻10到20分钟，然后在4℃下，在8,000xg下离心3分钟。球团可以通过将它悬浮在2ml AOB培养基中进行洗涤，随后在4℃下，在
8,000xg下再离心3分钟，以降低冷冻保护剂的潜在毒性。可以使所述球团再悬浮于2mlAOB+
培养基中，接种到含50mM NH4的50ml AOB培养基中，并通过在200rpm下振荡，在30℃的黑暗环境中培养。
8,000xg下再离心3分钟，以降低冷冻保护剂的潜在毒性。可以使所述球团再悬浮于2mlAOB+
培养基中，接种到含50mM NH4的50ml AOB培养基中，并通过在200rpm下振荡，在30℃的黑暗环境中培养。
[0210] 在一些实施方案中，氨氧化细菌的制剂可以包括在储存状态下的氨氧化细菌和/或在多磷酸盐负载状态下的氨氧化细菌和/或在生长状态下的氨氧化细菌。
[0211] 在一些实施方案中，容器、递送系统或装置致动后，呈储存状态或多磷酸盐负载状态的氨氧化细菌可与活化剂混合。活化剂可以呈提供为至少约7.6的pH的形式。活化剂可以呈提供氨、铵离子和/或尿素、微量矿物质和足够的氧和二氧化碳的环境的形式。活化剂可以使呈储存状态或多磷酸盐负载状态的氨氧化细菌复活或至少部分复活为生长状态。使氨氧化细菌从储存状态(或多磷酸盐负载状态)复活所需要的时间可以是预定时间段。例如，预定时间段可以小于约75小时或小于约72小时。预定时间段可至少部分基于为氨氧化细菌倍增时间的约0.2-10倍、0.3-5倍、0.5-3倍、0.5-1.5倍或0.5-1倍的时间段。所述预定时间段可至少部分基于为所述氨氧化细菌约1个倍增时间的时间段。预定时间段可以在约8小时和12小时之间。预定时间段可以为约10小时。预定时间段可以小于约75小时、72小时、70小时、68小时、65小时、60小时、55小时、50小时、45小时、40小时、35小时、30小时、25小时、20小时、15小时、10小时、5小时、4小时、3小时、2小时或1小时。
[0212] 在一些实施方案中，容器可包括呈生长状态和呈储存状态和多磷酸盐负载状态中的至少一种状态的氧化细菌，以便立即向环境提供氨氧化细菌以开始将氨、铵离子和尿素中的至少一种转化为亚硝酸盐，同时允许呈储存状态和多磷酸盐负载状态中的至少一种状态的氧化细菌复活一段时间。这可以允许储存的氨氧化细菌在一段时间内控释。
[0213] 不希望受理论的束缚，通过将氨氧化细菌保持在具有低二氧化碳以及足够的氧和氨的条件下或环境中，它们可以积累多磷酸盐达预定的时期，例如，约1个倍增时间的时期，例如约8-12小时，例如约10小时。氨氧化细菌可以积累足够的多磷酸盐以延长其储存活力、储存时间，并加快其复活。这可以在添加或不添加缓冲液和氨的情况下发生。
[0214] 存在储存充足的多磷酸盐可以允许氨氧化细菌(ATP资源)在甚至不存在氨和氧的情况下维持代谢活性，并在原本将会致命的攻击下存活。
[0215] 氨氧化产生ATP的过程具有两个步骤。第一步骤是通过氨单加氧酶(Amo)使氨氧化为羟胺，然后通过羟胺氧化还原酶(Hao)使羟胺转化为亚硝酸盐。来自第二步骤(羟胺转化为亚硝酸盐)的电子被用来驱动第一步骤(氨氧化为羟胺)。
[0216] 如果氨氧化细菌不具有羟胺来生成用于Amo的电子，则羟胺不可用于Hao。例如，乙炔不可逆地抑制对于氨氧化为亚硝酸盐中的第一步骤(氨氧化为羟胺)而言关键的酶。一旦AOB暴露于乙炔，Amo即被不可逆地抑制，并且在可以产生羟胺之前必须合成新的酶。在正常的聚生体生物膜栖息地，AOB可以分享和接收来自其它AOB(甚至是对抑制剂具有不同易感性的不同菌株)的羟胺，因此生物膜趋于比单个生物体对抑制剂如乙炔更具抗性。AOB可以使用储存的多磷酸盐来合成新的Amo，即使在没有羟胺的情况下。
[0217] 本文所讨论的氨氧化细菌的任何实施方案、制剂、组合物或配制物可以包含任选纯性的氨氧化细菌、基本上由任选纯性的氨氧化细菌组成或由任选纯性的氨氧化细菌组成。
[0218] 3.生产氨氧化细菌的方法
[0219] 培养各种氨氧化细菌，例如亚硝化单胞菌属种类的方法是本领域中已知的。可以例如使用如以上表1或表2中所述的培养基来培养氨氧化细菌。
[0220] 氨氧化细菌可以生长在例如液体培养基中或平板上。合适的平板包括1.2％R2A琼脂、1.2％琼脂、1.2％琼脂糖和含有0.3g/L丙酮酸盐的1.2％琼脂糖。
[0221] 在一些实施方案中，可在无有机物培养基中培养氨氧化细菌。使用无有机物培养基的一个优点是除了由自养细菌产生的底物外它缺乏异养细菌进行代谢的底物。使用生长态培养物的另一个优点是大量的亚硝酸盐在培养基中积累，而该亚硝酸盐也抑制异养细菌且因此在储存期间作为防腐剂。
[0222] 在一些实施方案中，具有改善的(例如，优化的)性质的氨氧化细菌是通过繁殖和选出所需性质的迭代过程而产生。在一些实施方案中，选择和繁殖同时进行。在一些实施方案中，在包含50mM、75mM、100mM、125mM、150mM、175mM、200mM、225mM、250mM、275mM或300mM NH4+(例如，至少200mM NH4+)的反应介质(例如，完全欧洲亚硝化单胞菌培养基)中进行选择。在一些实施方案中，繁殖和/或选择的周期为至少1、2、3或6个月。在实施方案中，繁殖和/或选择的周期为至少1、2、4、6、8或10年。
[0223] 在一些方面，所述氨氧化细菌是以商业规模来生产。在一些实施方案中，商业规模是指具有至少10,000、20,000、30,000、50,000或100,000升(L)的培养基体积的液体培养方法。在一些实施方案中，在生物反应器中生产细菌。所述生物反应器可以使用例如绝缘热夹套、温度传感器以及加热或冷却元件将细菌维持在恒定温度例如约26℃-30℃下。所述生物反应器可以具有用于搅拌培养物以改善营养物如氨、尿素、氧、二氧化碳和各种矿物质的分布的装置。所述生物反应器还可以具有用于添加新培养基的进口管，以及用于收集细胞的出口管。所述生物反应器还可以具有用于将氧和/或二氧化碳分配至培养物中的曝气器。所述生物反应器可以是例如间歇式反应器、馈料分批反应器或连续反应器。在一些实施方案12
中，氨氧化细菌的商业规模生产以约10 CFU/升产生1,000至100,000L/天的批料。商业规模生产可以产生例如1,000-5,000L/天、5,000-10,000L/天、10,000-50,000L/天或50,000-
100,000L/天的批料。商业规模生产可以产生例如1,000-5,000L/批、5,000-10,000L/批、
10,000-50,000L/批或50,000-100,000L/批的批料。在一些实施方案中，生成物的浓度为至
8 9 10 11 11 11 12 10 11 11 12 12 13 13
少10 、10 、10 、10 、2x10 、5x10 或10 或约10 -10 、10 -10 、10 -10 或10 -
1014CFU/L。在一些实施方案中，生成物的浓度为至少108、109、1010、1011、2x1011、5x1011或1012或约1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/ml。
中，氨氧化细菌的商业规模生产以约10 CFU/升产生1,000至100,000L/天的批料。商业规模生产可以产生例如1,000-5,000L/天、5,000-10,000L/天、10,000-50,000L/天或50,000-
100,000L/天的批料。商业规模生产可以产生例如1,000-5,000L/批、5,000-10,000L/批、
10,000-50,000L/批或50,000-100,000L/批的批料。在一些实施方案中，生成物的浓度为至
8 9 10 11 11 11 12 10 11 11 12 12 13 13
少10 、10 、10 、10 、2x10 、5x10 或10 或约10 -10 、10 -10 、10 -10 或10 -
1014CFU/L。在一些实施方案中，生成物的浓度为至少108、109、1010、1011、2x1011、5x1011或1012或约1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/ml。
[0224] 在一些实施方案中，通常包括商业规模生产，进行质量控制(QC)测试步骤。QC的一般步骤通常包括：1)培养氨氧化细菌；2)对培养物或其等分试样执行测试步骤；以及3)从所述测试步骤获得值，并且任选地：4)将所获得的值与参考值或可接受值的范围进行比较，和5)如果所获得的值满足可接受的参考值或范围，则将培养物分类为合格，且如果所获得的值不满足可接受的参考值或范围，则将培养物分类为不合格。如果培养物被分类为合格，则可以例如允许培养物继续生长且/或可以收获培养物并将其加入商业产品中。如果培养物被分类为不合格，则可以例如安全地处置培养物或者可以补救缺陷。
[0225] 测试步骤可以包括测量培养物的光密度(OD)。OD是在分光光度计中进行测量，并且提供区别于吸收或散射的光关于透射通过样品的光的量的信息。在一些实施方案中，可以测定OD600(例如，具有600nm波长的光的光密度)。这种测量通常指示培养基中的细胞的浓度，其中较高的光密度对应于较高的细胞密度。
[0226] 测试步骤可以包括测量培养物的pH。氨氧化细菌培养物的pH指示氮氧化的速率，并且还可以指示培养物是否包含污染性生物体。pH可以使用例如包括电极(如氢电极、醌氢醌电极、锑电极、玻璃电极)的pH感测装置、包括半导体的pH感测装置或颜色指示试剂(如pH试纸)来测量。
[0227] 在某些实施方案中，生产氨氧化细菌包括进行各种质量控制步骤。例如，可以测试其中生长有氨氧化细菌的培养基，以例如确定它是否具有适当的pH，它是否具有足够低的废产物水平，和/或它是否具有足够高的营养物水平。还可以测试污染生物体的存在。污染性生物体通常为非氨氧化细菌的生物体，例如选自微杆菌属(Microbacterium)、产碱菌科(Alcaligenaceae)细菌、柄杆菌属(Caulobacter)、多噬伯克霍尔德氏菌(Burkodelia multivorans)、大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的生物体。可以通过例如提取DNA、扩增该DNA并对保守基因如16S rRNA进行测序来测试污染物。还可以通过将培养物接种在琼脂平板上并观察菌落形态来测试污染物。氨氧化细菌通常形成红色菌落，所以非红色菌落往往指示污染性生物体。
[0228] 4.容器和递送装置
[0229] 容器和/或递送装置，例如容器，例如递送装置，作为氨氧化细菌壳体，例如氨氧化细菌制剂，例如包含氨氧化细菌的组合物提供。在一些实施方案中，该容器或递送装置也可起到递送氨氧化细菌，例如氨氧化细菌制剂，例如包含氨氧化细菌的组合物的用途。氨氧化细菌可以来自选自由亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属、亚硝化弧菌属及其组合组成的组的属。容器和/或递送装置可以配置为储存和/或递送氨氧化细菌。可将氨氧化细菌、制剂或组合物递送到部位和环境或表面，有或无另外的组分。在某些实施方案中，可以同时或依序地，例如至少部分在开始递送氨氧化细菌之前或至少部分之后递送其它组分。在某些实施方案中，该容器或递送装置可包括或称为递送系统。在一些实施方案中，一种组分的递送在第二种的递送开始时仍然在发生，从而存在重叠。这有时在本文中被称为“同时”或“伴随”或“共同递送”。在其它实施方案中，一种组分的递送在开始另一种治疗的递送之前结束。这有时在本文中被称为“连续”或“顺序递送”或“依序递送”。
[0230] 在一些实施方案中，提供了一种容器。该容器可包括第一腔室和第二腔室。氨氧化细菌，例如氨氧化细菌制剂，例如包含氨氧化细菌的组合物可置于第一腔室中。氨氧化细菌，例如氨氧化细菌制剂，例如包含氨氧化细菌的组合物可包含呈生长状态的氨氧化细菌、呈储存状态的氨氧化细菌和呈多磷酸盐负载状态的氨氧化细菌中的至少一种。一种或多种其它组分可置于第二腔室中。例如，活化剂可置于第二腔室中。活化剂可包含在与第一腔室内的氨氧化细菌接触后可以提供呈生长状态的氨氧化细菌的一种或多种组分。
[0231] 本公开还考虑到了附加腔室，其中一个或多个附加腔室包括本公开全篇所讨论的相同或不同的组分或内容物。例如，容器可包括第三腔室。第三腔室可包括稀释液。稀释液可提供用于稀释第一腔室的内容物(例如，氨氧化细菌)和第二腔室的内容物(例如，活化剂)中的至少一种。
[0232] 容器的一个或多个腔室，例如第一腔室和/或第二腔室可包括控释材料，例如缓释材料，该材料可作为活化剂和/或氨氧化细菌制剂的一部分提供，或者可在一个或多个腔室中单独提供。该材料可以向环境提供例如氨氧化细菌(例如氨、铵离子和尿素中的至少一种)的控释(例如缓释)。在一些实施方案中，该材料可以向环境，向氨氧化细菌制剂提供氨、铵离子和尿素中的至少一种的控释(例如缓释)。这可以发生在容器内、递送部分或递送之后。
[0233] 屏障可作为容器的一部分或在容器内提供以防止第一腔室和第二腔室之间的流体连通。屏障可呈阀门(例如止回阀)、过滤材料、薄膜、蜡、脂质、聚合物、控释材料(例如，凝胶)及可以在第一腔室和第二腔室之间提供永久或临时性屏障的其它材料的形式。
[0234] 在一些实施方案中，第一腔室和第二腔室中的一个可置于另一个内，例如容器的第一腔室可置于第二腔室中，例如容器的第二腔室可置于第一腔室中。在一些实施方案中，多个第一腔室可置于第二腔室中，或多个第二腔室可置于第一腔室中。该容器致动后，屏障可被破坏以允许第一腔室的内容物与第二腔室的内容物接触。
[0235] 在一些实施方案中，第二腔室置于隔室内，并且该隔室置于第一腔室内。在其它实施方案中，第一腔室腔室置于隔室内，并且该隔室置于第一腔室内。隔室可以是珠粒。载体或其它封装系统。氨氧化细菌或活化剂之一或两者可呈这种形式。封装系统可包括可以提供如本文所述组分的控释的材料。
[0236] 所述容器还可包括活化剂，该活化剂可包含缓冲溶液和/或介质。缓冲溶液和/或介质可以提供在与氨氧化细菌接触后可提供活化氨氧化细菌(例如，呈生长状态的氨氧化细菌)的条件。
[0237] 在一些实施方案中，活化剂可包含氨、铵离子和尿素中的至少一种。在某些实施方案中，活化剂可包含氨，基本上由氨组成或由氨组成。在某些其它实施方案中，活化剂可包含铵离子，基本上由铵离子组成或由铵离子组成。在某些其它实施方案中，活化剂可包含尿素，基本上由尿素组成或由尿素组成。
[0238] 容器致动后，氨氧化细菌制剂和活化剂可相互接触。例如，如果致动容器以递送第一腔室和第二腔室的内容物，则内容物在从容器中排出后，可相互接触。相互接触可涉及或包括至少一定程度混合。在一些实施方案中，容器的屏障可在致动过程中保持完好。在其它实施方案中，致动后屏障可被打开，例如破裂、撕裂、打破、扯裂或刺破。
[0239] 所述容器可包括递送系统。该递送系统可以是施加器或可配置为递送第一腔室和第二腔室的内容物。该递送系统可以是施加器或可配置为同时或依序递送第一腔室和第二腔室的内容物。
[0240] 该递送系统可配置为将氨氧化细菌制剂递送到受试者的皮肤表面、受试者的鼻部通道和肺部区域，或受试者的胃肠道。该制剂可呈一种颗粒或多种颗粒的形式，所述颗粒具有会增强递送或增强定位或与预期靶部位(例如，皮肤、鼻部通道、肺部、肠胃系统)的接触的粒度。该制剂可呈液体、固体的形式，呈混悬剂或溶液。
[0241] 在某些实施方案中，所述递送系统可包括将腔室的内容物从容器递送至靶部位，例如环境，例如受试者的表面(例如受试者的皮肤)、胃肠道、肺部区域或鼻部通道的泵。
[0242] 在一些实施方案中，所述容器可以是一次性容器。该容器可以或可以不预先装载(例如，由生产商或使用者装载)内容物，例如氨氧化细菌及氨、铵离子和尿素，并且可以被使用者，例如消费者或医疗专业人员使用一次用于将容器的内容物递送到靶部位，例如环境，例如受试者的表面(例如受试者的皮肤)、胃肠道、肺部区域或鼻部通道。
[0243] 在其它实施方案中，所述容器可以是多次用容器，其中该容器可以或可以不预先装载(例如，由生产商或使用者装载)内容物，例如氨氧化细菌及氨、铵离子和尿素，并且可以被使用者，例如消费者或医疗专业人员使用一次用于将容器的内容物递送到靶部位，例如环境，例如受试者的表面(例如受试者的皮肤)、胃肠道、肺部区域或鼻部通道。该容器可以重新装载(例如，由生产商或使用者装载)内容物，例如氨氧化细菌及氨、铵离子和尿素，并且可以被相同或不同的使用者，例如消费者或医疗专业人员再次使用用于将容器的内容物递送到靶部位，例如环境，例如受试者的表面(例如受试者的皮肤)、胃肠道、肺部区域或鼻部通道。
[0244] 在一些实施方案中，所述容器可呈双室注射器形式，其中内容物可通过可同时或依序递送来自容器的内容物的一个或多个活塞来分配。注射器的尖端区域可包括两个隔室(例如腔室)以单独地将内容物递送至靶部位，例如环境，例如受试者的表面(例如受试者的皮肤)、胃肠道、肺部区域或鼻部通道，或者可包括一个隔室(例如腔室，例如混合腔室)，其允许容器的内容物在递送至靶部位之前混合。
[0245] 在一些实施方案中，所述容器可包括双室瓶。双室瓶可包括两个单独开口以单独地将容器的内容物递送至靶部位，例如环境，例如受试者的表面(例如受试者的皮肤)、胃肠道、肺部区域或鼻部通道，或者可包括附加隔室(例如腔室，例如混合腔室)，其允许容器的内容物在递送至靶部位之前混合。
[0246] 在一些实施方案中，可提供一种双室安瓿。该双室安瓿可包括具有本公开文中全篇所讨论的内容物的第一腔室和第二腔室。该安瓿在其每个隔室上可具有蚀刻区以易于打开安瓿递送至靶部位。
[0247] 在一些实施方案中所述容器呈施加器，例如除臭剂施加器的形式。这种配置可允许在施加器内提供第一腔室和第二腔室，并允许表盘区将内容物从腔室转移到施加器区域，以便将容器的内容物递送至靶部位。该容器的内容物可单独递送，可在容器内混合，或者可在施加器区域混合。
[0248] 在本公开的一个或多个实施方案中可提供混合腔室。可提供混合腔室以允许在将内容物递送至靶部位之前混合容器的内容物。递送装置致动后，氨氧化细菌和活化剂可相互接触。在一些实施方案中，递送装置致动后，氨氧化细菌可相互混合。
[0249] 在一些实施方案中，所述容器可大体上不含其它生物体。所述容器可置于粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带中。所述容器可以作为粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带提供。
[0250] 在一些实施方案中，所述容器可包括混合指示剂组分。可在第一腔室、第二腔室和混合腔室中的至少一个中提供混合指示剂组分。混合指示剂组分可作为氨氧化细菌制剂、活化剂或两者的一部分存在。混合指示剂组分可包括颜色标志物，该颜色标志物在容器的内容物接触或容器的内容物混合后可显色。
[0251] 在一些实施方案中，所述容器可包括活化指示剂组分。可在第一腔室、第二腔室和混合腔室中的至少一个中提供活化指示剂组分。活化指示剂组分可作为氨氧化细菌制剂、活化剂或两者的一部分存在。混合指示剂组分可包括颜色标志物，该颜色标志物在容器的内容物接触或容器的内容物混合后可显色。
[0252] 容器破碎可引起容器的组分接触，这可通过容器内容物的颜色变化提供混合指示。容器组分间的接触可通过在靶区(例如，皮肤表面)上滚动或摩擦容器，例如施加器(例如，施加器区域)提供。可在容器和靶区之间施加力、压力或摩擦力以引起容器内组分的接触。
[0253] 在一些实施方案中，第一颜色标志物可位于第一腔室内而第二颜色标志物可位于第二腔室内。混合后或活化后，可产生第三种颜色以指示混合或活化。
[0254] 在一些实施方案中，所述容器可配置为在第二腔室的活化剂之前将来自于第一腔室的氨氧化细菌制剂递送到表面。在其它实施方案中，所述容器可配置为在来自于第一腔室的氨氧化细菌制剂之前将第二腔室的活化剂递送到表面。还有其它实施方案中，所述容器可配置为大体上同时递送来自于第一腔室的氨氧化细菌制剂和第二腔室的活化剂。
[0255] 所述容器可由适于容纳内容物，例如氨氧化细菌，例如活化剂(例如，氨、铵离子和尿素)的任何材料构造而成。例如所述容器可被构造成至少部分对气体交换、水和光中的至少一种有抗性。例如所述容器可由玻璃或聚合材料构造而成。
[0256] 在一些实施方案中，除氨氧化细菌以外的一种或多种其它生物体可包括在容器中，例如第一腔室、第二腔室、氨氧化细菌制剂和活化剂中或作为其一部分。例如，可在第一腔室、第二腔室或其它腔室、氨氧化细菌制剂和活化剂中提供选自乳酸杆菌属、链球菌属、双歧杆菌属及其组合的属的生物体。
[0257] 本文所述的容器可适于递送一种或多种美容产品。本文所述的容器可适于递送一种或多种治疗产品。
[0258] 容器、递送系统或递送装置，包括或不包括容器内容物的重量可低于约50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000克。
[0259] 在一些实施方案中，所述容器可包括第一腔室和第二腔室，其配置为使得屏障相对于第一腔室和第二腔室不固定。在一些实施方案中，屏障可相对于第一腔室固定，但相对于第二腔室不固定。在其它实施方案中，屏障可相对于第二腔室固定，但相对于第一腔室不固定。
[0260] 在一些实施方案中，第一腔室和第二腔室可配置为使得屏障至少部分为第一腔室和第二腔室共有。在其它实施方案中，屏障不为第一腔室和第二腔室共有。
[0261] 在一些实施方案中，第一腔室可包括壳体和第一内腔，并且第二腔室可包括壳体和第二内腔。第一壳体和第二壳体可彼此相对固定。在一些实施方案中，第一壳体和第二壳体的一部分为第一腔室和第二腔室共用。该部分可包括屏障。在一些实施方案中，第一壳体和第二壳体相互独立，例如它们可相互独立地移动。
[0262] 图1-8中示出了本公开的实施方案。示出了容器，例如递送装置或系统。如图1所示，提供了容器10。容器10包括第一腔室110和第二腔室120。氨氧化细菌可置于第一腔室110中，而活化剂可置于第二腔室120中。在一些实施方案中，活化剂可置于第一腔室110，而自养细菌例如氨氧化细菌可置于第二腔室120中。提供屏障130以将第一腔室110和第二腔室120分隔开。提供屏障130以防止第一腔室110和第二腔室120之间的流体连通。容器10还包括开口140和开口150。开口140允许第一腔室110的内容物，例如自养细菌(例如，氨氧化细菌)从第一腔室110释放。开口150允许第二腔室120的内容物，例如活化剂从第二腔室120释放。活塞160允许第一腔室110和第二腔室120的内容物被推压通过每个腔室而通过开口
140和开口150释放。开口140和开口150可各自具有一个盖以容纳容器的内容物，或者可共用一个盖以容纳容器中的内容物。在图1的实施方案中，容器10的内容物可单独从容器10分配，并且同时或大体上同时施加到表面或环境。在这个实施方案中，屏障130相对于腔室110和腔室120固定。
140和开口150释放。开口140和开口150可各自具有一个盖以容纳容器的内容物，或者可共用一个盖以容纳容器中的内容物。在图1的实施方案中，容器10的内容物可单独从容器10分配，并且同时或大体上同时施加到表面或环境。在这个实施方案中，屏障130相对于腔室110和腔室120固定。
[0263] 如图2所示，提供了容器20。容器20包括第一腔室210和第二腔室220。自养细菌，例如氨氧化细菌可置于第一腔室210中，而活化剂可置于第二腔室220中。在一些实施方案中，活化剂可置于第一腔室210，而自养细菌，例如氨氧化细菌可置于第二腔室220中。提供屏障230以将第一腔室210和第二腔室220分隔开。提供屏障230以防止第一腔室210和第二腔室
220之间的流体连通。容器20还包括开口240和开口250。开口240允许第一腔室210的内容物，例如自养细菌(例如，氨氧化细菌)从第一腔室210释放。开口250允许第二腔室220的内容物，例如活化剂从第二腔室220释放。开口240和开口250可各自具有一个盖以容纳容器的内容物，或者可共用一个盖以容纳容器中的内容物。在图2的实施方案中，容器20的内容物可单独从容器20分配，并且同时或大体上同时施加到表面或环境。可选地，容器20的内容物可单独依序从容器20分配，例如第一腔室210的内容物可在第二腔室220之前施加到表面或环境，或第二腔室220的内容物可在第一腔室210之前施加到表面或环境。在这个实施方案中，屏障230相对于腔室210和腔室220固定。
220之间的流体连通。容器20还包括开口240和开口250。开口240允许第一腔室210的内容物，例如自养细菌(例如，氨氧化细菌)从第一腔室210释放。开口250允许第二腔室220的内容物，例如活化剂从第二腔室220释放。开口240和开口250可各自具有一个盖以容纳容器的内容物，或者可共用一个盖以容纳容器中的内容物。在图2的实施方案中，容器20的内容物可单独从容器20分配，并且同时或大体上同时施加到表面或环境。可选地，容器20的内容物可单独依序从容器20分配，例如第一腔室210的内容物可在第二腔室220之前施加到表面或环境，或第二腔室220的内容物可在第一腔室210之前施加到表面或环境。在这个实施方案中，屏障230相对于腔室210和腔室220固定。
[0264] 如图3所示，提供了容器30。容器30包括第一腔室310和第二腔室320。自养细菌，例如氨氧化细菌可置于第一腔室310中，而活化剂可置于第二腔室320中。在一些实施方案中，活化剂可置于第一腔室310中，而自养细菌，例如氨氧化细菌可置于第二腔室320中。腔室320置于腔室310中。提供屏障330以将第一腔室310和第二腔室320分隔开。提供屏障330以防止第一腔室310和第二腔室320之间的流体连通。容器30还包括开口275以允许第一腔室
310的内容物，例如自养细菌(例如，氨氧化细菌)释放，及第二腔室320的内容物，例如活化剂释放。在图3的实施方案中，可递送容器30的内容物，而屏障330完好。然后可将其施加到表面或环境，屏障完好。可选地，递送容器的内容物可使屏障330破坏或制动，使得容器的内容物混合并施加到表面或环境。
310的内容物，例如自养细菌(例如，氨氧化细菌)释放，及第二腔室320的内容物，例如活化剂释放。在图3的实施方案中，可递送容器30的内容物，而屏障330完好。然后可将其施加到表面或环境，屏障完好。可选地，递送容器的内容物可使屏障330破坏或制动，使得容器的内容物混合并施加到表面或环境。
[0265] 如图4所示，提供了容器40。容器40包括第一腔室410和第二腔室420。自养细菌，例如氨氧化细菌可置于第一腔室410中，而活化剂可置于第二腔室420中。在一些实施方案中，活化剂可置于第一腔室410中，而自养细菌，例如氨氧化细菌可置于第二腔室420中。提供屏障430以将第一腔室410和第二腔室420分隔开。提供屏障430以防止第一腔室410和第二腔室420之间的流体连通。容器40通常是双腔安瓿，未来打开其需要打破颈区475。容器40的内容物可单独从容器40分配，并且同时或大体上同时施加到表面或环境。可选地，容器40的内容物可单独依序从容器40分配，例如第一腔室410的内容物可在第二腔室420之前施加到表面或环境，或第二腔室420的内容物可在第一腔室410之前施加到表面或环境。在可以通过在第二腔室420之前打破第一腔室410，或在第一腔室410之前打破第二腔室420来实现。在这个实施方案中，屏障430相对于腔室410和腔室420固定。
[0266] 如图5所示，提供了容器50。容器50包括第一腔室510和第二腔室520。自养细菌，例如氨氧化细菌可置于第一腔室510中，而活化剂可置于第二腔室520中。在一些实施方案中，活化剂可置于第一腔室510中，而自养细菌，例如氨氧化细菌可置于第二腔室520中。该图将第一腔室510和第二腔室520显示为单独的，即不共用共有屏障，然而可以预见其它实施方案，其中第一腔室510和第二腔室520至少部分地共用共有屏障。容器50还包括第一腔室屏障515和第二腔室屏障525以防止第一腔室510和混合腔室585，及第二腔室520和混合腔室585之间的流体连通。混合腔室585允许第一腔室510和第二腔室520的内容物在通过开口
545离开容器50之前相互接触，例如相互混合。打破屏障515和屏障525之前，混合腔室可以是空的或装有本公开全篇所讨论的其它组分。容器50的内容物从混合腔室585分配到表面或环境。
545离开容器50之前相互接触，例如相互混合。打破屏障515和屏障525之前，混合腔室可以是空的或装有本公开全篇所讨论的其它组分。容器50的内容物从混合腔室585分配到表面或环境。
[0267] 如图6所示，活化剂690可作为一层提供，该层可放在或施加在自养细菌(例如氨氧化细菌)695附近、顶部或周围。活化剂690可制备成控释配制物，其可允许活化剂690在预定时间段内去除或暴露。这将使其根据需要或在预定时间段内接触自养细菌，例如氨氧化细菌。
[0268] 如图7和8所示，分别提供了容器(例如施加器)70和80。在图7中，容器70包括第一腔室710和第二腔室720。自养细菌，例如氨氧化细菌可置于第一腔室710中，而活化剂可置于第二腔室720中。在一些实施方案中，活化剂可置于第一腔室710中，而自养细菌，例如氨氧化细菌可置于第二腔室720中。提供屏障730以将第一腔室710和第二腔室720分隔开。提供屏障730以防止第一腔室710和第二腔室720之间的流体连通。容器70还包括开口740和开口750。开口740允许第一腔室710的内容物，例如自养细菌(例如，氨氧化细菌)从第一腔室710释放。开口750允许第二腔室720的内容物，例如活化剂从第二腔室720释放。在图7的实施方案中，容器70的内容物可单独从容器70分配，并且同时或大体上同时施加到表面或环境。可选地，容器70的内容物可单独依序从容器70分配，例如第一腔室710的内容物可在第二腔室720之前施加到表面或环境，或第二腔室720的内容物可在第一腔室710之前施加到表面或环境。在这个实施方案中，屏障730相对于腔室710和腔室720固定。表盘760允许第一腔室710和第二腔室720的内容物被推压通过每个腔室而通过开口740和开口750释放。容器
70可包括一个表盘以同时或大体上同时推动腔室的内容物，或包括一个以上的表盘以依序推动腔室的内容物。
70可包括一个表盘以同时或大体上同时推动腔室的内容物，或包括一个以上的表盘以依序推动腔室的内容物。
[0269] 在图8中，容器80包括第一腔室810和第二腔室820。自养细菌，例如氨氧化细菌可置于第一腔室810中，而活化剂可置于第二腔室820中。在一些实施方案中，活化剂可置于第一腔室810中，而自养细菌，例如氨氧化细菌可置于第二腔室820中。提供屏障830以将第一腔室810和第二腔室820分隔开。提供屏障830以防止第一腔室810和第二腔室820之间的流体连通。容器80还包括开口845。开口845允许第一腔室810的内容物和第二腔室820的内容物从容器80释放。在图8的实施方案中，容器80的内容物可在打破屏障830时相互接触。这可发生在表盘860致动后以推动组分通过腔室而通过开口845释放。这将提供容器80内组分的接触。在另一个实施方案中内容物可在通过开口释放后相互接触，例如，如果开口845可用于递送来自第一腔室810的内容物，并且开口848可用于递送来自第二腔室820的内容物时。
[0270] 5.试剂盒
[0271] 可通过本公开提供试剂盒。试剂盒可包括容器和/或递送装置。试剂盒，例如递送装置可作为氨氧化细菌壳体，例如氨氧化细菌制剂，例如包含氨氧化细菌的组合物提供。在一些实施方案中，该容器或递送装置也可起到递送氨氧化细菌，例如氨氧化细菌制剂，例如包含氨氧化细菌的组合物的用途。氨氧化细菌可以来自选自由亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属、亚硝化弧菌属及其组合组成的组的属。
[0272] 可为试剂盒提供可以配置为储存和/或递送氨氧化细菌的容器和/或递送装置。可将氨氧化细菌、制剂或组合物递送到部位、环境或表面，有或无另外的组分。在某些实施方案中，可随氨氧化细菌的递送同时或依序递送其它组分。在某些实施方案中，该容器或递送装置可包括或称为递送系统。
[0273] 本公开的试剂盒可包括氨氧化细菌制剂。所述试剂盒还可包括用于活化氨氧化细菌的活化剂。该试剂盒可包括用于将氨氧化细菌制剂和活化剂中的至少一种递送给受试者的递送装置。该试剂盒可包括如本公开全篇所描述的容器。试剂盒的递送装置可以是如本公开全篇所描述的容器。
[0274] 在一些实施方案中，所述试剂盒还可包括为清洁要施加氨氧化细菌制剂的表面而提供的洗涤液或擦拭物。所述试剂盒还可包括稀释液以允许稀释试剂盒的组分，例如氨氧化细菌制剂和活化剂中的至少一种。
[0275] 在一些实施方案中，所述试剂盒可包括测定容器的一种或多种组分的特征的测定法。例如，所述试剂盒可包括对测定所述氨氧化细菌制剂的活力的分析。
[0276] 活力可包括氨氧化细菌按一定速率(例如，预定速率)将氨、铵或尿素氧化为亚硝酸盐的能力。在一些实施方案中，速率是指铵离子(NH4+)(例如，约200mM)转化为亚硝酸盐(NO2-)的速率，为至少50、75、125或150微摩尔NO2-/分钟，例如约100-150、75-175、75-125、100-125、125-150或125-175微摩尔/分钟，例如约125微摩尔NO2-/分钟。
[0277] 所述试剂盒可包括测定要施加氨氧化细菌制剂的表面的特征的测定法。在所述测定法中要测试的特征可包括皮肤上亚硝酸盐的水平、皮肤pH、通过16S rRNA测序确定的丙酸杆菌的存在中的任何一项或多项。
[0278] 在一些实施方案中，所述试剂盒可用于提供美容产品。所述试剂盒可包括第一化妆品和第二化妆品，其中第一化妆品包含氨氧化细菌。在一些实施方案中，第一化妆品和第二化妆品两者均可包含氨氧化细菌。该化妆品可以是本文公开的任何化妆品。
[0279] 在一些实施方案中，所述试剂盒可用于提供治疗产品。所述试剂盒可包括第一治疗剂和第二治疗剂，其中第一治疗剂包含氨氧化细菌。在一些实施方案中，第一治疗剂和第二治疗剂两者均可包含氨氧化细菌。该治疗产品可以是本文公开的任何治疗产品。
[0280] 6.递送氨氧化细菌的方法
[0281] 在一些实施方案中，可向受试者递送氨氧化细菌，例如氨氧化细菌制剂，例如包含氨氧化细菌的组合物。所述方法可包括提供氨氧化细菌制剂和活化剂。该方法还可包括合并氨氧化细菌制剂和活化剂。可通过容器、递送装置或递送系统将氨氧化细菌制剂和活化剂递送给受试者。
[0282] 氨氧化细菌制剂和活化剂的合并或混合可发生在递送时，例如在受试者的表面，或者可在递送之前在受试者的表面发生。
[0283] 在一些实施方案中，可通过提供如本文所讨论的容器、递送装置或递送系统提供氨氧化细菌制剂。所述制剂和活化剂可转移(例如)到受试者的表面，以提供活化氨氧化细菌，例如呈生长状态的氨氧化细菌。在这个过程中可致动容器、递送装置或递送系统的屏障。这种致动可包括破坏屏障。这样可允许所述制剂和活化剂相互接触，或相互混合。致动也可以(或在替代方案中)允许所述制剂和活化剂同时或依序沉积，以在受试者的表面，例如在身体表面上提供活化氨氧化细菌。身体表面为一部分皮肤，如面部区域、唇或腋下。本公开也可考虑其它身体表面。
[0284] 7.保存氨氧化细菌的方法
[0285] 本公开提供了保存氨氧化细菌的方法。该方法可包括提供氨氧化细菌制剂。该方法还可包括保存氨氧化细菌制剂。保存或提供制剂的方法可提供呈多磷酸盐负载状态和/或储存状态的氨氧化细菌。
[0286] 在一些实施方案中，该方法可包括在pH小于约7.4的环境中培养氨氧化细菌。另外，或在替代方案中，该方法可包括在足够低的二氧化碳浓度及足够高的氧浓度和氨基酸浓度下培养氨氧化细菌，使得氨氧化细菌积累多磷酸盐。这样可以提供氨氧化细菌制剂或保存氨氧化细菌制剂。
[0287] 在一些实施方案中，培养可包括使氨氧化细菌样品与pH为约7.4或更低的培养基接触。在二氧化碳浓度低于约200ppm且氧浓度介于约5％至约100％饱和度的环境中，所述培养基的氨、铵离子和尿素中的至少一种的浓度介于约10微摩尔和约200毫摩尔之间。
[0288] 在一些实施方案中，培养可包括使氨氧化细菌样品与具有大于10微摩尔磷酸盐的培养基接触。在一些实施方案中，培养包括使氨氧化细菌样品与具有约0.1微摩尔至20微摩尔铁的培养基接触。
[0289] 在一些实施方案中，接触所述样品可包括接触所述样品达预定时间段。该预定时间段可以是允许在氨氧化细菌中积累足够的多磷酸盐的时间段。该预定时间段是适于提供充足的多磷酸盐负载以允许氨氧化细菌长时间储存的时间段。所述预定时间段可至少部分基于为所述氨氧化细菌倍增时间的约0.2-10倍、0.3-5倍、0.5-3倍、0.5-1.5倍或0.5-1倍的时间段。所述预定时间段可至少部分基于为所述氨氧化细菌约一个倍增时间的时间段。在一些实施方案中，预定时间段介于约8小时和12小时之间。在一些实施方案中，预定时间段为约10小时。在一些实施方案中，预定时间段为约24小时。
[0290] 在一些实施方案中，要接触培养基的氨氧化细菌样品呈生长状态。这种氨氧化细菌样品，通过与培养基接触可以被诱导成多磷酸盐负载状态。
[0291] 在一些实施方案中，所述方法还可包括使氨氧化细菌样品与pH为约7.4或更低，氨、铵离子和尿素中的至少一种的浓度介于约10微摩尔和约100微摩尔之间的培养基接触。所述培养基也可具有二氧化碳浓度低于约400ppm的环境。所述培养基还可具有氧浓度介于约0％至约100％饱和度之间的环境。这可作为“储存状态”提供。所述方法可包括，在呈多磷酸盐负载状态培养一段时间(例如，预定时间段)后，从氨氧化细菌中去除培养基。所述方法还可包括使氨氧化细菌重新悬浮在缓冲液中，例如，以提供“储存状态”的条件。这可允许氨氧化细菌保持呈“储存状态”一段时间，例如预定时间段，例如至少1、2、3、4、5、6、7天，1、2、
3、4周，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个月，1、2、3、4或5年。在一些实施方案中，氨氧化细菌可以保持在储存状态下至少约6个月至约1年。在复活后，氨氧化细菌的活力是氨氧化细菌在储存之前(例如，在生长状态下)的活力的至少约50％、60％、70％、80％、90％或100％。在一些实施方案中，可以制备氨氧化细菌制剂，以使得当在选定条件下储存时，使NH4+氧化的能力损失不超过10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％。
3、4周，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个月，1、2、3、4或5年。在一些实施方案中，氨氧化细菌可以保持在储存状态下至少约6个月至约1年。在复活后，氨氧化细菌的活力是氨氧化细菌在储存之前(例如，在生长状态下)的活力的至少约50％、60％、70％、80％、90％或100％。在一些实施方案中，可以制备氨氧化细菌制剂，以使得当在选定条件下储存时，使NH4+氧化的能力损失不超过10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％。
[0292] 在一些实施方案中，使样品与可诱导储存状态的环境，例如，可诱导储存状态(例如多磷酸盐加载状态)的培养基接触预定时间段。预定时间段可至少部分基于为氨氧化细菌倍增时间的约0.2-10倍、0.3-5倍、0.5-3倍、0.5-1.5倍或0.5-1倍的时间段。所述预定时间段至少部分基于为氨氧化细菌约一个倍增时间的时间段。预定时间段可以在约8小时和12小时之间。预定时间段可以为约10小时。预定时间段可为约24小时或小于约24小时。
[0293] 在一些实施方案中，样品在接触可诱导储存状态的环境之前，呈生长状态。
[0294] 在一些实施方案中，提供了一种使氨氧化细菌从储存状态复活的方法。该方法可包括使氨氧化细菌样品与可诱导复活，例如诱导生长状态的环境接触。该方法可包括使样品与pH高于约7.6的环境，例如培养基接触。另外或在替代方案中，该方法可包括使样品与氨、铵离子和尿素中的至少一种的浓度介于约10微摩尔和约100毫摩尔之间的环境，例如培养基接触。微量物质的水平在约0.1微摩尔的铁和20微摩尔的铁之间。该方法可包括使样品在二氧化碳浓度高于约5％至100％氧饱和度且氧浓度介于约200ppm和5％饱和度(例如，介质的)的环境中，与环境(例如培养基)接触。
[0295] 在一些实施方案中，使样品与可(例如)由储存状态诱导生长状态的环境，例如可诱导生长状态的培养基接触预定时间段。预定时间段，例如实现氨氧化细菌复活，例如与该细菌储存之前的活力相比实现氨氧化细菌的活力，例如至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或100％活力可能所需的时间，可至少部分基于为氨氧化细菌倍增时间的约0.2-10倍、0.3-5倍、0.5-3倍、0.5-1.5倍或0.5-1倍的时间段。所述预定时间段至少部分基于为氨氧化细菌约一个倍增时间的时间段。预定时间段可以在约8小时和12小时之间。预定时间段可以为约10小时。预定时间段可以小于约75小时、72小时、70小时、68小时、65小时、60小时、55小时、50小时、45小时、40小时、35小时、30小时、25小时、20小时、15小时、10小时、5小时、4小时、3小时、2小时或1小时。
[0296] 在一些实施方案中，通过以上讨论的方法提供了包含氨氧化细菌的制剂，例如组合物。可将制剂配制成使得在选定条件下，例如本文所述的条件下储存后，氧化氨、铵离子和尿素的氨氧化细菌损失不超过特定百分比。例如可将制剂配制成使得在选定条件下储存+后氧化NH4的能力损失不超过10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％。该制剂可适于用作产品，例如本文所讨论的美容产品，或治疗产品，或用于治疗本文所讨论的任一种疾病或病状。
[0297] 8.包含氨氧化细菌的组合物
[0298] 本公开尤其提供了包含氨氧化细菌的组合物，例如氨氧化细菌制剂或氨氧化细菌的纯化制剂。可以在美容产品或治疗产品中提供包含氨氧化细菌的组合物，例如，氨氧化细菌制剂或氨氧化细菌的纯化制剂。所述组合物可包括含氨氧化细菌的天然产品。
[0299] 在一些方面，本公开提供了具有限定数量的物种的组合物，例如制剂。例如，本发明提供了一种组合物，其具有氨氧化细菌，或更具体地具有一个属的氨氧化细菌，或更具体地具有一个种类的氨氧化细菌，例如亚硝化单胞菌和另一类型的生物体且无其它类型的生物体。在其它实例中，所述组合物具有氨氧化细菌，或更具体地具有一个属的氨氧化细菌，或更具体地具有一个种类的氨氧化细菌，例如亚硝化单胞菌和另外2、3、4、5、6、7、8、9或10个类型的生物体且无其它类型的生物体。适用于此目的的氨氧化细菌包括亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属或亚硝化弧菌属中的氨氧化细菌。
[0300] 在一些实施方案中，在氨氧化细菌的制剂中可以包括除了氨氧化细菌以外的一种或多种其它生物体。例如，可以在氨氧化细菌的制剂中提供选自乳酸杆菌属、链球菌属、双歧杆菌属及其组合的属的生物体。在一些实施方案中，所述制剂可大体上不含其它生物体。
[0301] 在一些实施方案中，包含氨氧化细菌的组合物(例如制剂)提供支持氨氧化细菌活力的条件。例如，所述组合物可以促进氨氧化细菌生长和代谢，或者可以促进本文所述的休眠状态(例如，冷冻)或储存状态，活的氨氧化细菌可以从所述休眠状态和储存状态恢复。当所述组合物促进生长或代谢时，其可以包含水和/或氨氧化细菌消耗的营养物，例如铵离子、氨、尿素、氧、二氧化碳或微量矿物质。
[0302] 氨氧化细菌的制剂可以包含约108CFU/L至约1014CFU/L。所述制剂可以包含至少约108、109、1010、1011、2x1011、5x1011、1012、2x1012、5x1012、1013、2x1013、5x1013或1014；或约108-
109、109-1010、1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/L。
109、109-1010、1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/L。
[0303] 氨氧化细菌的制剂可以包含约108至约1014CFU/ml。所述制剂可以包含至少约108、109、1010、1011、2x1011、5x1011、1012、2x1012、5x1012、1013、2x1013、5x1013或1014；或约108-109、
109-1010、1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/ml。
109-1010、1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/ml。
[0304] 在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂可以包含约0.1毫克(mg)至约100mg氨氧化细菌。在某些方面，所述制剂可以包含约50mg至约1000mg氨氧化细菌。所述制剂可以包含约0.1-0.5mg、0.2-0.7mg、0.5-1.0mg、0.5-2mg、0.5-5mg、2.5-5mg、2.5-7.0mg、5.0-10mg、7.5-
15mg、10-15mg、15-20mg、15-25mg、20-30mg、25-50mg、25-75mg、50-75mg、50-100mg、75-
100mg、100-200mg、200-300mg、300-400mg、400-500mg、500-600mg、600-700mg、700-800mg、
800-900mg、900-1000mg、100-250mg、250-500mg、100-500mg、500-750mg、750-1000mg或500-
1000mg。
15mg、10-15mg、15-20mg、15-25mg、20-30mg、25-50mg、25-75mg、50-75mg、50-100mg、75-
100mg、100-200mg、200-300mg、300-400mg、400-500mg、500-600mg、600-700mg、700-800mg、
800-900mg、900-1000mg、100-250mg、250-500mg、100-500mg、500-750mg、750-1000mg或500-
1000mg。
[0305] 在一些实施方案中，氨氧化细菌制剂可以包含质量比在约0.1克/升至约1克/升的范围内的氨氧化细菌与赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂。所述制剂可以包含质量比在约0.1-0.2、0.2-0.3、0.1-0.5、0.2-0.7、0.5-1.0或0.7-1.0克/升的范围内的氨氧化细菌与赋形剂。
[0306] 在一些实施方案中，氨氧化细菌的制剂可以是于缓冲液中的氧化细菌，所述缓冲液包含磷酸二钠和氯化镁，基本上由或由磷酸二钠和氯化镁(例如50mM Na2HPO4和2mM MgCl2)组成。所述制剂可于缓冲液中按例如约0.1至约100液量盎司、约0.2至约50液量盎司、约0.5至约25液量盎司、约1.0至约10液量盎司、约2.0至约7液量盎司、约3至约5液量盎司的预定体积提供。在一些实施方案中，所述制剂可于容器中提供。所述制剂可于构造为容纳约3.4液量盎司或本文公开的任何其它体积的容器中提供。所述制剂可以呈可能能够被喷雾、喷射或雾化的形式，即呈雾状形式的形式。
[0307] 氨氧化细菌可以与一种或多种赋形剂，例如一种或多种药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂组合。在一些实施方案中，“药学上可接受的赋形剂”是指药学上可接受的物质、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、溶剂或封装材料。在一些实施方案中，每种赋形剂从与药物配制物的其它成分相容的意义上说是“药学上可接受的”，并且适用于接触人类和动物的组织或器官，而没有过度的毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或与合理的效益/风险比相称的其它问题或并发症。参见Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第21版；Lippincott Williams&Wilkins:Philadelphia,Pa.,2005；Handbook of Pharmaceutical Excipients，第6版；Rowe等人编辑；The
Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association:2009；
Handbook of Pharmaceutical Additives，第3版；Ash和Ash编辑；Gower Publishing Company:2007；Pharmaceutical Preformulation and Formulation，第2版；Gibson编辑；
CRC Press LLC:Boca Raton,Fla.,2009。
Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association:2009；
Handbook of Pharmaceutical Additives，第3版；Ash和Ash编辑；Gower Publishing Company:2007；Pharmaceutical Preformulation and Formulation，第2版；Gibson编辑；
CRC Press LLC:Boca Raton,Fla.,2009。
[0308] 在一些实施方案中，美容上可接受的赋形剂是指美容上可接受的物质、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、溶剂或封装材料。在一些实施方案中，每种赋形剂从与美容制剂的其它成分相容的意义上说是美容上可接受的，并且适用于接触人类和动物的组织或器官，而没有过度的毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或与合理的效益/风险比相称的其它问题或并发症。
[0309] 可以在本公开的容器和试剂盒中，例如在氨氧化细菌制剂内，在活化剂内或在一个或多个腔室(例如容器的第一腔室、第二腔室或混合腔室)内提供赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂。
[0310] 虽然活性成分(例如，氨氧化细菌)可以单独施用，但在许多实施方案中，其存在于药物配制物、制剂或组合物，或美容配制物、制剂或组合物中。因此，本公开提供一种药物配制物(制剂或组合物)或美容配制物(制剂或组合物)，其包含氨氧化细菌和药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂。药物组合物和美容组合物可以呈如下所述的配制物的形式。
[0311] 本文所述的药物和美容配制物(例如，制剂或组合物)可包括那些适用于口服(例如，经由胃肠道或为了沉积在胃肠道中的目的)、肠胃外(包括皮下、皮内、肌内、静脉内和关节内)、吸入(包括可以通过各种类型的定量加压气雾剂、喷雾器或吹入器产生的细颗粒粉末或细雾，并且包括经鼻内(鼻部)或经肺(肺部))、直肠和局部(包括皮肤、经皮、经粘膜、口腔、舌下和眼内)施用的配制物，但最合适的途径可以取决于例如接受者的病状和病症。
[0312] 配制物(例如，制剂或组合物)可以方便地以单位剂型呈现，并且可以通过药学或美容学领域中已知的任何方法来制备。通常，方法包括使活性成分(例如，氨氧化细菌)与组成一种或多种辅助成分的药物或美容载体缔合的步骤。通常，所述配制物是通过使活性成分与液体载体或微细固体载体或两者均匀且紧密地缔合且然后在必要时使产品成型为所需配制物来制备。
[0313] 配制物可以呈现为离散单位如胶囊剂、扁囊剂或片剂，每个单位含有预定量的氨氧化细菌；呈现为粉剂或颗粒剂；呈现为在水性液体或非水性液体中的溶液或混悬剂；或呈现为水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。活性成分还可以呈现为大丸剂、药糖剂或糊剂。各种药学上可接受的载体及其配制物描述于标准配制论文例如E.W.Martin所著的Remington's Pharmaceutical Sciences中。E.W.Martin.还参见Wang,Y.J.和Hanson,
M.A.,Journal of Parenteral Science and Technology,Technical Report No.10,
Supp.42:2S,1988。
M.A.,Journal of Parenteral Science and Technology,Technical Report No.10,
Supp.42:2S,1988。
[0314] 所述氨氧化细菌组合物或制剂可以例如以适于立即释放或控释(长期释放)的形式来施用。合适的缓释系统的实例包括合适的聚合物材料，例如呈成形制品的形式(例如，薄膜或微胶囊)的半渗透性聚合物基质；合适的疏水性材料，例如作为在可接受的油中的乳剂；或离子交换树脂。控释(长期释放)系统的施用方式可以为：口服；经直肠；肠胃外；脑池内；阴道内；腹膜内；局部，例如作为粉末、软膏、凝胶、滴剂或透皮贴剂；口腔；或作为喷雾剂。
[0315] 可以适当地配制用于施用的制剂以引起氨氧化细菌的控释。例如，配制物、制剂或组合物可以为包含生物可降解聚合物、多糖胶凝和/或生物粘附聚合物或两亲性聚合物中的一种或多种的颗粒形式。这些组合物表现出允许活性物质控释的某些生物相容性特征。参见美国专利第5,700,486号。所述制剂可包括控释材料。
[0316] 在本公开的某些情况下可将持续释放或控释系统称为屏障。
[0317] 示例性组合物，例如，作为制剂，可包括混悬液，其可以含有例如用于赋予体积的微晶纤维素、藻酸或作为悬浮剂的藻酸钠、作为增粘剂的甲基纤维素、磷酸二钙、淀粉、硬脂酸镁和/或乳糖和/或其它赋形剂、粘合剂、增量剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂、甘露醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精。此类配制物中还可以包括高分子量赋形剂如纤维素(微晶纤维素(avicel))或聚乙二醇(PEG)。此类制剂还可以包括用于辅助粘膜粘附的赋形剂，如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)、马来酸酐共聚物(例如，Gantrez)，以及用于控制释放的试剂如聚丙烯酸类共聚物(例如，Carbopol 934)。还可以添加润滑剂、表面活性剂、助流剂、香料、着色剂和稳定剂以便于制造和使用。表面活性剂可以是两性离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂或阴离子型表面活性剂。
[0318] 可随本公开的实施方案使用的表面活性剂可包括下列一种或多种：椰油酰胺丙基甜菜碱(ColaTeric COAB)、聚乙烯山梨醇酯(例如，吐温80)、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf 6NAT)、月桂基醚硫酸钠/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜碱(Plantapon 611 L UP)、月桂基醚硫酸钠(例如，RhodaPex ESB 70 NAT)、烷基聚葡糖苷(例如，Plantaren 2000 N UP)、月桂基醚硫酸钠(Plantaren 200)、布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂、月桂胺氧化物(ColaLux Lo)、十二烷基硫酸钠(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷(PolySufanate 160P)、月桂基硫酸钠(Stepanol-WA Extra K)及其组合。布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂包含水、有机椰子油、氢氧化钾、有机橄榄油、有机fair deal麻油、有机荷荷巴油、柠檬酸和生育酚。
[0319] 在一些实施方案中，表面活性剂可以以允许亚硝酸盐产生发生的量与氨氧化细菌一起使用。在一些实施方案中，所述制剂可具有少于约0.01％至约10％的表面活性剂。在一些实施方案中，所用的表面活性剂的浓度可以在约0.0001％至约10％之间。在一些实施方案中，所述制剂可大体上不含表面活性剂。
[0320] 在一些实施方案中，配制物例如制剂可以包括可增强氨氧化细菌的效力或增强治疗或指示的其它组分。
[0321] 在一些实施方案中，制剂中可以包括螯合剂。螯合剂可以是可以与另一种化合物(例如，金属)结合的化合物。螯合剂可以帮助从环境中去除不想要的化合物，或可以以保护方式起到减少或消除特定化合物与环境(例如，氨氧化细菌，例如氨氧化细菌的制剂，例如赋形剂)的接触的作用。
[0322] 配制物(例如，制剂)还可以包含抗氧化剂、缓冲剂、防止非所需细菌生长的抑菌剂、溶质以及可以包括悬浮剂和增稠剂的水性和非水性无菌混悬液。所述配制物可以呈现在单位剂量或多剂量容器(例如，密封的安瓿和小瓶)中，并且可以储存在仅需要在使用前立即加入无菌液体载体(例如，盐水或注射用水)的冷冻干燥(冻干)条件下。临时性溶液和混悬液可以由先前所描述的种类的粉末、颗粒和片剂制备。示例性组合物包括溶液或混悬液，其可以含有例如合适的无毒的药学上可接受的稀释剂或溶剂，如甘露醇、1,3-丁二醇、水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液，或其它合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂，包括合成的单甘油酯或二甘油酯，以及脂肪酸，包括油酸或Cremaphor。水性载体可以是例如在约3.0至约8.0的pH、约3.5至约7.4(例如3.5至6.0，例如3.5至约5.0)的pH下的等渗缓冲溶液。有用的缓冲剂包括柠檬酸钠-柠檬酸和磷酸钠-磷酸，以及乙酸钠/乙酸缓冲剂。在一些实施方案中，组合物不包括氧化剂。
[0323] 可以包括的赋形剂是例如蛋白质，如人血清白蛋白或血浆制剂。必要时，药物组合物，例如制剂，还可以含有少量的无毒辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、表面活性剂、防腐剂和pH缓冲剂等，例如乙酸钠或山梨糖醇酐单月桂酸酯。在一些实施方案中，所述赋形剂，例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂，可包含抗粘附剂、粘合剂、涂层剂、崩解剂、填充剂、调味剂、着色剂、润滑剂、助流剂、吸附剂、防腐剂或甜味剂。在一些实施方案中，所述制剂可大体上不含赋形剂。
[0324] 用于气雾剂施用的示例性组合物包括盐水溶液，其可以含有例如苄醇或其它合适的防腐剂、用于提高生物利用度的吸收促进剂和/或其它增溶剂或分散剂。方便的是，在用于气雾剂施用的组合物中，氨氧化细菌可以呈从加压包装或喷雾器的气雾剂喷雾表现的形式，使用合适的推进剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体)来递送。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可以通过提供阀以递送计量的量来确定。可以将由例如明胶制成的胶囊和药盒配制成含有氨氧化细菌和合适的粉末基质(例如，乳糖或淀粉)的粉末混合物。在某些实施方案中，氨氧化细菌是作为气雾剂，通过气雾剂适配器(又称致动器)从定量阀施用。任选地，还包括稳定剂，且/或包括用于深肺递送的多孔颗粒(例如，参见美国专利第6,447,743号)。所述组合物或制剂可以呈可能能够被喷雾、喷射或雾化的形式，即呈雾状形式的形式。氨氧化细菌的制剂可以是于缓冲液中的氧化细菌，所述缓冲液包括磷酸二钠和氯化镁，基本上由或由磷酸二钠和氯化镁(例如50mM Na2HPO4和2mM MgCl2)组成。
[0325] 制剂可以与载体如可可脂、合成甘油酯或聚乙二醇一起呈现。此类载体在常温下通常为固体，但在体温下液化和/或溶解以释放氨氧化细菌。
[0326] 用于局部施用的示例性组合物包括局部载体如Plastibase(与聚乙烯一起胶化的矿物油)。在一些方面，所述组合物，例如制剂和/或赋形剂可以呈液体、固体或凝胶中的一种或多种形式。例如，液体混悬剂可以包括但不限于水、盐水、磷酸盐缓冲盐水或氨氧化储存缓冲液。
[0327] 凝胶配制物可以包括但不限于琼脂、二氧化硅、聚丙烯酸(例如 )、羧甲基纤维素、淀粉、瓜耳胶、藻酸盐或壳聚糖。在一些实施方案中，所述配制物，例如制剂可以补充有氨源，包括但不限于氨、铵离子(例如，氯化铵或硫酸铵)和尿素中的一种或多种。
[0328] 在一些实施方案中，可以配制氨氧化细菌组合物，例如制剂以提高NO渗透到皮肤中。凝胶形成材料如KY胶或各种发胶将形成NO损失到环境空气中的扩散屏障，从而提高NO的皮肤吸收。皮肤中的NO水平一般不会大大超过20nM/L，因为该水平活化GC并且将会引起局部血管舒张和过量NO的氧化破坏。
[0329] 应当理解的是，除了上文特别提到的成分，如本文所述的配制物(例如制剂)可以包括在涉及所讨论的配制物类型的领域中常用的其它试剂。
[0330] 所述配制物(例如，制剂，例如组合物)可以在容器、递送系统或递送装置中提供，所述容器、递送系统或递送装置包括或不包括容器的内容物的重量可小于约50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000克。
[0331] 合适的单位剂量配制物是含有如前文所述的有效剂量或其适当分数的氨氧化细菌的那些单位剂量配制物。
[0332] 治疗有效量的氨氧化细菌可以作为单脉冲剂量、作为单次剂量或作为随时间施用的脉冲剂量来施用。因此，在脉冲剂量中，提供氨氧化细菌的推注施用，在随后的时间段中将氨氧化细菌施用给受试者，接着进行第二次推注施用。在具体的非限制性实例中，在一天期间、在一周期间或在一个月期间施用脉冲剂量。
[0333] 在一些实施方案中，可以施加氨氧化细菌制剂(例如，配制物，例如组合物)预定的天数。这可以至少部分基于例如病状或疾病的严重程度、治疗反应、施用剂量和给药频率。例如，可施加所述制剂约1-3、3-5、5-7、7-9、5-10、10-14、12-18、12-21、21-28、28-35、35-
42、42-49、49-56、46-63、63-70、70-77、77-84、84-91天。在某些方面，可施加所述制剂约16天。
42、42-49、49-56、46-63、63-70、70-77、77-84、84-91天。在某些方面，可施加所述制剂约16天。
[0334] 在一些实施方案中，可以每天施加氨氧化细菌的制剂(例如，配制物，例如组合物)预定的次数。这可以至少部分基于例如病状或疾病的严重程度、治疗反应、施用剂量和给药频率。例如，可以每天施加所述制剂1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24次。
[0335] 在一些实施方案中，所述制剂可以每天施加一次。在其它实施方案中，所述制剂可以每天施加两次。在一些实施方案中，可以在某几天施加第一预定量的所述制剂，且在随后的某几天施加第二预定量的所述制剂。在一些实施方案中，可以施加所述制剂约16天。
[0336] 在一些实施方案中，施加氨氧化细菌约1-3天、3-5天、5-7天、7-9天、5-10天、10-14天、12-18天、12-21天、21-28天、28-35天、35-42天、42-49天、49-56天、46-63天、63-70天、70-77天、77-84天、84-91天，例如约1个月、约2个月、约3个月。在一些实施方案中，施加氨氧化细菌无限期的时间，例如，大于一年、大于5年、大于10年、大于15年、大于30年、大于50年、大于75年。
[0337] 氨氧化细菌可以与多种消费产品和治疗产品相关，且此类产品的实例如下所述。在一些实施方案中，将与产品相关的氨氧化细菌与所述产品混合，例如均匀地散布在整个产品中，并且在一些实施方案中，与产品相关的氨氧化细菌层叠在所述产品上。
[0338] 在一些实施方案中，氨氧化细菌与粉末相关。粉末通常是小颗粒固体，它们彼此不粘附并且在倾斜时可以自由流动。消费用途的示例性粉末包括滑石粉和一些化妆品(例如，粉底霜，包括粉饼)。可以考虑其它粉末，连同本公开的氨氧化细菌系统和方法一起使用。
[0339] 在一些实施方案中，氨氧化细菌与化妆品相关。化妆品可以是旨在改变个人的外观的供局部施用的物质，例如，粉底液、粉底霜、腮红或唇膏。化妆品可以是在食品和药物管理法规中例如根据21C.F.R.§720.4所列举的任何物质。
[0340] 所述制剂，例如化妆品，可以作为下述产品中的至少一种提供或置于下述产品中的至少一种中：婴儿用品，例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜；浴用制剂，例如浴油、浴皂、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊；眼妆制剂，例如眉笔、眼线笔、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏；香料制剂，例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊；发用制剂，例如护发素、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液；染发制剂，例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂；化妆制剂，例如扑面粉、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂；美甲制剂，例如底部涂层和内部涂层、角质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂；口腔卫生用品，例如牙粉、漱口水和口气清新剂；浴用香皂和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂；剃须用制剂，例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂；护肤制剂，例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂；和晒黑制剂，例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
[0341] 在一些实施方案中，制剂，例如化妆品可以作为下述产品中的至少一种提供或置于下述产品中的至少一种中：婴儿用品，例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜；浴用制剂，例如浴油、浴皂、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊；香粉(喷粉和滑石粉)、香囊；发用制剂，例如护发素、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、扑面粉、角质层软化剂、护甲霜和洗剂、口腔卫生用品、漱口水、浴用香皂、灌洗液、女性卫生除臭剂；剃须用制剂，例如剃须后洗剂；护肤制剂，例如清洁剂、面部和颈部、身体和手部、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂；和晒黑制剂，例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液。
[0342] 可以向药物配制物，例如制剂或美容制剂中添加由美容配制物领域的技术人员选择的其它组分，诸如(例如)水、矿物油、着色剂、香料、芦荟、甘油、氯化钠、碳酸氢钠、pH缓冲剂、紫外线阻隔剂、硅油、天然油、维生素E、草药浓缩物、乳酸、柠檬酸、滑石、粘土、碳酸钙、碳酸镁、氧化锌、淀粉、尿素和异抗坏血酸，或本领域技术人员已知的任何其它赋形剂(包括本文中所公开的那些)。
[0343] 在一些实施方案中，所述制剂可置于粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带中或作为它们提供。
[0344] 在一些实施方案中，氨氧化细菌与乳霜相关。乳霜可以是包含增稠剂的流体，且一般具有允许其均匀涂敷在皮肤上的稠度。示例性乳霜包括保湿洗剂、面霜和身体洗剂。
[0345] 在一些实施方案中，氨氧化细菌与棒状物相关。棒状物通常是当放置成与表面接触时将一些棒状物内容物转移到表面的固体。示例性棒状物包括香体棒、唇膏、棒状润唇膏和防晒霜涂抹棒。
[0346] 在一些实施方案中，氨氧化细菌与气雾剂相关。气雾剂通常是微细固体颗粒或微细液滴在气体如空气中的胶体。气雾剂可以通过将氨氧化细菌(和任选载体)放置在处于压力下的容器中，然后打开阀门以释放内容物来产生。所述容器可以被设计为仅施加与氨氧化细菌活力相容的压力水平。例如，仅可以短时间施加高压力，且/或压力可以足够低而不损害活力。气雾剂的消费用途的实例包括用于防晒霜、除臭剂、香水、发胶和驱虫剂。
[0347] 在一些实施方案中，氨氧化细菌与药膏相关。药膏可以是具有液体或霜样稠度的局部施用剂，其旨在保护皮肤或促进愈合。药膏的实例包括烧伤膏和润肤液。
[0348] 在一些实施方案中，氨氧化细菌与擦拭物相关。擦拭物可以是适于将液体或乳霜局部施加到皮肤上的柔性材料。擦拭物可以是例如纸基或布基的。示例性擦拭物包括纸巾和湿巾。
[0349] 包含氨氧化细菌的组合物还可以包含保湿剂、除臭剂、香味剂、着色剂、驱虫剂、清洁剂或紫外线阻隔剂中的一种或多种。
[0350] 例如，保湿剂可以是减少或防止皮肤干燥的试剂。示例性的保湿剂包括润湿剂(例如，尿素、甘油、α-羟基酸和聚二甲基硅氧烷)和润肤剂(例如，羊毛脂、矿物油和矿脂)。保湿剂可以包括在例如含有氨氧化细菌的乳霜、香脂、洗剂或防晒霜中。
[0351] 除臭剂可以是减少非所需的气味的试剂。除臭剂可以通过直接中和气味、防止排汗或防止产生气味的细菌的生长来起作用。示例性的除臭剂包括铝盐(例如，氯化铝或羟基氯化铝)、环甲硅油、滑石、小苏打、香精油、矿物离子、啤酒花和金缕梅。除臭剂通常存在于除臭喷雾或除臭棒中，并且还可以发现于一些皂类和服装中。
[0352] 驱虫剂可以是能够被施加至表面(例如，皮肤)以阻止昆虫和其它节肢动物停落在该表面上的试剂。驱虫剂包括DEET(N,N-二乙基-间-甲苯甲酰胺)、对-薄荷烷-3,8-二醇(PMD)、埃卡瑞丁(icaridin)、荆芥内酯(nepetalactone)、香茅油、印楝油、沼泽番石榴、肼基甲酸酯二甲酯、三环癸烯基烯丙醚和IR3535(3-[N-丁基-N-乙酰基]-氨基丙酸乙酯)。
[0353] 清洁剂可以是从表面如皮肤去除污物或非所需的细菌的试剂。示例性清洁剂包括条皂、液体皂和洗发剂。
[0354] 紫外线阻隔剂可以是能够被施加到表面上以减少表面的紫外光接收量的试剂。紫外线阻隔剂可以阻隔UV-A和/或UV-B光线。紫外线阻隔剂可以通过吸收、反射或散射紫外线而起作用。示例性紫外线阻隔剂包括吸收剂，例如，胡莫柳酯(homosalate)、奥替柳酯(octisalate)(又称水杨酸辛酯)、奥西诺酯(octinoxate)(又称甲氧基肉桂酸辛酯或OMC)、奥克立林(octocrylene)、羟苯甲酮和阿伏苯宗(avobenzone)；以及反射剂(例如，二氧化钛和氧化锌)。紫外线阻隔剂通常存在于防晒霜中，并且还可以发现于护肤霜和一些化妆品中。
[0355] 在一些实施方案中，氨氧化细菌与护发素相关。护发素通常是指可以施加于毛发以改善其外观、强度或顺滑性的具有霜样稠度的物质。
[0356] 在一些实施方案中，氨氧化细菌与布料相关。布料通常是指适用于制成服装的柔性材料，例如，其具有足够的材料强度来承受穿着者的日常运动。布料可以是纤维的、织造的或针织的；它可以由天然存在的材料或合成材料制成。示例性布料包括棉、亚麻、羊毛、苎麻、丝、牛仔布、皮革、尼龙、聚酯和氨纶及其共混物。
[0357] 在一些实施方案中，氨氧化细菌与纱相关。纱通常是指适合于针织或编织的细长柔性纺成材料。纱可以由例如羊毛、棉、聚酯和其共混物制成。
[0358] 在一些实施方案中，氨氧化细菌与线相关。线通常是指适合于缝纫的细长柔性纺成材料。线通常具有比纱更细的直径。线可以由例如棉、聚酯、尼龙、丝及其共混物制成。
[0359] 还可以用氨氧化细菌处理服装制品，如(例如)鞋类、鞋垫、睡衣、运动鞋、皮带、帽子、衬衫、内衣、运动服装、头盔、毛巾、手套、袜子、绷带等。还可以用氨氧化细菌处理床上用品，包括床单、枕头、枕套和毛毯。在一些实施方案中，氨氧化细菌还可以接触在一段时间内不能清洗的皮肤区域。例如，封闭在矫形铸件(其在愈合过程中固定受伤肢体)中的皮肤，以及为了适当愈合而必须保持干燥的接近受伤处的区域可以受益于与氨氧化细菌的接触。
[0360] 在一些方面，本公开提供了一种可穿戴制品，其包含氨氧化细菌或如本文所述的氨氧化细菌。可穿戴制品可以是能够与使用者的身体密切相连而不妨碍行走的轻质制品。可穿戴制品的实例包括手表、腕带、头带、头筋、发网、浴帽、帽子、假发和珠宝。包含本文所述的氨氧化细菌的可穿戴制品可以例如在提供下列中的一种或多种的浓度下提供：皮肤病症的治疗或预防、与低亚硝酸盐水平相关的疾病或病状的治疗或预防、体臭的治疗或预防、向受试者供给一氧化氮的治疗或抑制微生物生长的治疗。
[0361] 在一些实施方案中，氨氧化细菌与旨在接触毛发的产品(例如，刷子、梳子、洗发剂、护发素、头带、头筋、发网、浴帽、帽子和假发)相关。在头发上，远离皮肤表面形成的一氧化氮可以被捕获在帽子、头巾或面罩内并引导至吸入的空气中。
[0362] 接触人类受试者的表面的制品如尿布可以与氨氧化细菌相关。因为尿布被设计成保持和容纳由失禁个体产生的尿液和粪便，所以尿液和粪便中的尿素可以被皮肤和粪便细菌水解而形成游离氨，所述游离氨具有刺激性且可能导致尿布疹。掺入将尿素代谢成亚硝酸盐或硝酸盐的细菌(如氨氧化细菌)可以避免游离氨的释放，并且可以释放亚硝酸盐并最终释放NO，它们可以有助于维持儿童和失禁成人的健康皮肤。一氧化氮在尿布中的释放还可以对存在于人类粪便中的致病生物体具有抗微生物作用。这种作用即使在一次性尿布被作为废物处置后仍可以持续，并且可以通过接触弄脏的一次性尿布而减少疾病传播的发生。
[0363] 在一些实施方案中，包装含氨氧化细菌的产品。包装可以用于压缩产品或保护其免受损坏、污垢或降解。包装可以包括例如塑料、纸、纸板或木材。在一些实施方案中，包装是不透细菌的。在一些实施方案中，包装可渗透氧气和/或二氧化碳。
[0364] 9.用氨氧化细菌治疗的方法
[0365] 本公开提供了使用氨氧化细菌治疗疾病和病状的各种方法，例如通过施用氨氧化细菌，例如氨氧化细菌的制剂，例如天然产品或强化的天然产品(经氨氧化细菌，例如外源性氨氧化细菌强化的强化天然产品)或包含天然产品或强化的天然产品的组合物、制剂或配制物。
[0366] 可用于治疗疾病和病状的氨氧化细菌包括本申请中描述的所有氨氧化细菌组合物，例如氨氧化细菌的制剂、天然产品或强化的天然产品，或包含天然产品或强化的天然产品组合物、制剂或配制物。
[0367] 例如，本公开提供了氨氧化细菌的组合物用于治疗病状或疾病(例如，抑制受试者皮肤上的微生物生长)的用途。在实施方案中，氨氧化细菌可用于治疗溃疡或溃疡(例如静脉性溃疡，例如下肢溃疡，例如下肢静脉性溃疡，例如糖尿病性溃疡，例如糖尿病足溃疡)中的感染、慢性伤口、痤疮(例如，寻常痤疮)、酒渣鼻、湿疹、荨麻疹或银屑病。
[0368] 本公开的容器和试剂盒可以提供或含有可用于治疗或预防皮肤病症，治疗或预防与低亚硝酸盐水平有关的疾病或病状，治疗或预防体臭，治疗以向受试者供给一氧化氮，或治疗以抑制微生物生长的内容物。
[0369] 本公开的系统和方法可容器和试剂盒用于治疗以下的至少一种的内容物：HIV皮炎、溃疡(例如静脉性溃疡，例如下肢溃疡，例如下肢静脉性溃疡)中的感染(例如糖尿病足溃疡中的感染)、过敏性皮炎、痤疮(例如寻常痤疮)、湿疹、接触性皮炎、过敏反应、银屑病、荨麻疹、酒渣鼻、皮肤感染、血管疾病、阴道酵母菌感染、性传播疾病、心脏病、动脉粥样硬化、脱发、继发于糖尿病或卧床的下肢溃疡、心绞痛(特别是慢性稳定型心绞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注损伤、蹄叶炎、高血压、肥厚性器官退化、雷诺氏现象、纤维化、纤维化器官退化、过敏、自身免疫性致敏、终末期肾病、肥胖、阳痿、肺炎、原发性免疫缺陷病、大疱性表皮松解症或癌症。在实施方案中，所述病状是下肢静脉性溃疡。
[0371] 在一些实施方案中，本文所述的氨氧化细菌用于抑制其它生物体的生长。例如，氨氧化细菌可以良好地适于长期定植于人类皮肤，并且在一些实施方案中，它竞争过在皮肤上非所需的其它细菌。非所需的皮肤细菌包括例如那些可以感染伤口、提高疾病的风险或严重程度或产生气味的细菌。非所需的细菌可以被称为致病性细菌。某些非所需的皮肤细菌，例如潜在致病性细菌，例如致病性细菌，包括金黄色葡萄球菌(S.aureus)例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)、化脓性链球菌(S.pyogenes)、鲍曼不动杆菌(A.baumannii)、丙酸杆菌和寡养单胞菌。本文所述的氨氧化细菌可以通过例如消耗稀少的营养物或产生有害于其它生物体的副产物(例如，使皮肤的pH变成不利于非所需生物体生长的水平)竞争过其它生物体。
[0372] 因此，本公开尤其提供了一种抑制受试者皮肤上的微生物生长的方法，其包括向有需要的人局部施用有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌。类似地，本公开提供了用于抑制受试者皮肤上的微生物生长的如本文所述的氨氧化细菌。同样地，本公开提供了氨氧化细菌在生产用于抑制受试者皮肤上的微生物生长的药剂中的用途。
[0373] 本公开还提供了一种向受试者供给一氧化氮的方法，其包括将有效剂量的本文所述的氨氧化细菌放置在紧邻所述受试者处。类似地，本公开提供了用于向受试者供给一氧化氮的如本文所述的氨氧化细菌。同样地，本公开提供了氨氧化细菌在生产适于放置在紧邻受试者处的药剂或组合物中的用途。
[0374] 本公开还提供了一种减少体臭的方法，其包括向有需要的受试者局部施用有效剂量的本文所述的氨氧化细菌。类似地，本公开提供了用于减少受试者的体臭的如本文所述的氨氧化细菌。同样地，本公开提供了如本文所述的氨氧化细菌在生产用于减少体臭的药剂或组合物中的用途。
[0375] 本公开还提供了一种治疗或预防与低亚硝酸盐水平有关的疾病的方法，其包括向有需要的受试者局部施用治疗有效剂量的本文所述的氨氧化细菌。类似地，本公开提供了用于治疗与低亚硝酸盐水平有关的疾病的如本文所述的氨氧化细菌的局部用配制物。同样地，本公开提供了如本文所述的氨氧化细菌在生产用于治疗与低亚硝酸盐水平有关的疾病的局部用药剂中的用途。
[0376] 本公开还提供了一种治疗或预防皮肤病症或皮肤感染的方法，其包括向有需要的受试者局部施用治疗有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌。类似地，本公开提供了用于治疗受试者中的皮肤病症的如本文所述的氨氧化细菌。同样地，本公开提供了如本文所述的氨氧化细菌在生产用于治疗皮肤病症的药剂中的用途。在实施方案中，所述皮肤病症是痤疮(例如寻常痤疮)、酒渣鼻、湿疹、银屑病或荨麻疹；所述皮肤感染是脓疱病。
[0377] 虽然不希望受理论的束缚，但提出了用治疗有效剂量的氨氧化细菌治疗痤疮(例如寻常痤疮)；和/或通过酸化的亚硝酸盐和NO产生来限制和/或抑制与寻常痤疮有关的痤疮丙酸杆菌的扩散和增殖。
[0378] 虽然不希望受理论的束缚，但提出了用治疗有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌治疗酒渣鼻可以涉及由于NO生成所引起的下调。这可能是由于Kazal型KLK5/KLK7抑制剂的表达，其可以减少人抗菌肽(cathelicidin)LL-37从其前体前肽hCAP18的形成。
[0379] 虽然不希望受理论的束缚，但提出了用治疗有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌治疗湿疹和/或过敏性皮炎可以涉及由于NO生成所引起的炎症下调；和/或通过酸化的亚硝酸盐和NO产生来限制和/或抑制金黄色葡萄球菌和经常与过敏性皮炎中的极高的定植率和皮肤负荷有关的其它皮肤病原体的扩散和增殖。
[0380] 虽然不希望受理论的束缚，但提出了用治疗有效剂量的本文所述的氨氧化细菌治疗银屑病可以涉及由于NO生成所引起的炎症下调以及人抑菌肽LL-37形成的减少。
[0381] 虽然不希望受理论的束缚，但提出了用治疗有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌治疗银屑病可以涉及由于NO生成所引起的炎症下调。
[0382] 虽然不希望受理论的束缚，但提出了用治疗有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌治疗脓疱病或其它皮肤感染和软组织感染可以涉及限制和/或抑制金黄色葡萄球菌(S.aureus)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)、化脓性链球菌(S.pyogenes)、鲍曼不动杆菌(A.baumannii)、丙酸杆菌和寡养单胞菌的扩散和增殖。
[0383] 本公开还提供了一种促进伤口愈合的方法，其包括向伤口施用有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌。类似地，本公开提供了用于治疗伤口的如本文所述的氨氧化细菌。同样地，本公开提供了如本文所述的氨氧化细菌在生产用于治疗伤口的药剂或组合物中的用途。
[0384] 如本文所述的氨氧化细菌可以用于促进愈合能力受损的患者(例如，糖尿病患者)中的伤口愈合。
[0385] 在一些实施方案中，本公开提供了使用如本文所述的氨氧化细菌来预防疾病或病症(例如，皮肤病症)的方法。在某些实施方案中，预防意指相比于类似的未经治疗的受试者降低受试者发展疾病的风险。不必将风险降低至零。
[0386] 在一些实施方案中，提供了一种改变受试者的皮肤微生物组的组成的方法。该方法可包括向所述皮肤的表面施用(例如，施加)含有氨氧化细菌的制剂。施用(例如，施加)的量和频率足以减少所述皮肤表面上的致病性细菌的比例。所述受试者可以基于受试者需要减少皮肤表面上的致病性细菌的比例来选择。这可以使用本公开的容器、递送装置、递送系统或试剂盒中的任一种来提供。
[0387] 沐浴频率降低的个体(如宇航员、潜艇船员、战役期间的军事人员、偏远地区的民工、难民、卧床不起的个体和许多其它人)可以通过将氨氧化细菌保持在皮肤上来维持更健康的皮肤。关于卧床不起的个体，在一些实施方案中，氨氧化细菌通过扩张不充分循环来降低褥疮的频率或严重性。
[0388] 应当理解，许多现代的退行性疾病可能由缺乏NO种类所引起，且外部皮肤上的氨氧化细菌可以通过扩散供应那些种类，并且对皮肤施加氨氧化细菌解决长期的医疗状况。在某些实施方案中，向受试者施加氨氧化细菌以抵消现代的沐浴实践，尤其是阴离子去污剂从外部皮肤上除去氨氧化细菌。
[0389] 局部施加的一种合适的方法为施加足够的氨氧化细菌，然后穿上足够的衣物，以便诱导出汗。然而，许多人将希望得到氨氧化细菌的益处，同时维持他们当前的沐浴习惯，在这种情况下，可以连同足够的底物一起施加所述细菌的培养物以供它们产生NO。接近人类汗液的无机组成的营养液可以用于此目的。利用适于接近人类汗液的培养基的细菌使它们在被施用时适应的时间减至最少。由于汗液一旦分泌到皮肤表面上便蒸发，因此使用具有较高离子强度的培养基是理想的。约两倍于人类汗液的浓度是合适的，但还考虑了其它条件。NH3或尿素、O2、CO2和矿物质通常满足氨氧化细菌的营养需求。在一些实施方案中，所述底物包含微量矿物质，其包括铁、铜、锌、钴、钼、锰、钠、钾、钙、镁、氯化物、磷酸盐、硫酸盐或其任何组合。
[0390] 在一些实施方案中，本公开提供了一种通过将含有氨氧化细菌的绷带施加到伤口上来治疗所述伤口的方法。还提供了生产此类绷带的方法。所述绷带可以包括例如将绷带固定在伤口附近的未受损皮肤上的粘附部分以及包覆或覆盖伤口的柔软的柔性部分。在一些实施方案中，所述绷带不包含除氨氧化细菌以外的其它生物体。所述绷带可以由可渗透材料制成，所述可渗透材料在绷带被施加至伤口上时允许气体如氧气和二氧化碳触及氨氧化细菌。在某些实施方案中，所述绷带包含用于氨氧化细菌的营养物，如铵、氨、尿素或微量矿物质。在某些实施方案中，所述绷带包含氨氧化细菌耐受的抗生素。所述抗生素抗性可以产生自一个或多个内源性抗性基因或产生自一个或多个转基因。
[0391] 在一些实施方案中，氨氧化细菌例如氨氧化细菌制剂，按每次施加约108–109CFU、109–1010CFU、1010–1011CFU、1011-1012CFU、1012-1013CFU或1013-1014CFU的剂量施用。在一些实施方案中，按约109-1010CFU，约1x109–5x109、1x109–3x109或1x109–10x109CFU；或约1010-
1011CFU，例如约1x1010–5x1010,1x1010–3x1010,或1x1010–2x1010CFU；或约1011-1012CFU，例如约1x1011–5x1011、1x1011–3x1011或1x1011–2x1011CFU；或约1012-1013CFU，例如约1x1012–
5x1012、1x1012–3x1012或1x1012–2x1012CFU；或约1013-1014CFU，例如约1x1013–5x1013、1x1013–
3x1013或1x1013–2x1013CFU的剂量局部施用氨氧化细菌。
1011CFU，例如约1x1010–5x1010,1x1010–3x1010,或1x1010–2x1010CFU；或约1011-1012CFU，例如约1x1011–5x1011、1x1011–3x1011或1x1011–2x1011CFU；或约1012-1013CFU，例如约1x1012–
5x1012、1x1012–3x1012或1x1012–2x1012CFU；或约1013-1014CFU，例如约1x1013–5x1013、1x1013–
3x1013或1x1013–2x1013CFU的剂量局部施用氨氧化细菌。
[0392] 在一些实施方案中，以每剂约1-2、2-5、5-10、10-15、12-18、15-20、20-25或25-50的体积施用氨氧化细菌。在一些实施方案中，溶液的浓度为约108-109、109-1010或1010-1011CFU/ml。在一些实施方案中，每天以两个15ml剂量施用氨氧化细菌，其中每个剂量的浓度为109CFU/ml。
[0393] 在一些实施方案中，每天施用氨氧化细菌一次、两次、三次或四次。在一些实施方案中，每周施用氨氧化细菌一次、两次、三次、四次、五次或六次。在一些实施方案中，在沐浴后不久施用氨氧化细菌。在一些实施方案中，在睡觉前不久施用氨氧化细菌。
[0394] 在某些方面，本公开提供了组合疗法，其包括氨氧化细菌和第二治疗剂。例如，本公开提供了物理混合的两种(或更多种)疗法的物理混合物。在其它实施方案中，将两种(或更多种)疗法作为单独的配制物组合施用。第二疗法可以是例如药物制剂、手术或治疗有关疾病或病症的任何其它医疗方法。以下段落描述能够治疗溃疡(例如静脉性溃疡，例如下肢溃疡，例如下肢静脉性溃疡，糖尿病性溃疡)、慢性创伤、痤疮(例如寻常痤疮)、酒渣鼻、湿疹和银屑病的组合疗法。所述组合疗法可包括在如本文所述的容器或递送装置中，或者可使用单独的递送装置递送。所述组合疗法可包括在容器的第一腔室、第二腔室或第三腔室或递送装置中。组合疗法可以治疗下肢静脉性溃疡。
[0395] 例如，在能够治疗溃疡(例如，静脉性溃疡，例如下肢溃疡，例如下肢静脉性溃疡，例如糖尿病性溃疡)的组合疗法中，第二疗法可以包括例如伤口敷料(例如，吸收性填充剂、水凝胶敷料或水胶体)、血管紧张素、血管紧张素类似物、富血小板纤维蛋白疗法、高压氧疗法、负压伤口疗法、清创术、引流、动脉血管再生、高压氧疗法、低强度激光疗法和腓肠肌退缩术。组合疗法可以包含上述治疗中的一种或多种。
[0396] 在能够治疗慢性创伤的组合疗法中，第二疗法可以包括例如抗生素(例如，局部或全身性的，以及杀菌或抑菌的)，如青霉素、头孢菌素、多粘菌素、利福霉素(rifamycin)、台勾霉素(lipiarmycin)、喹诺酮类、磺胺类、大环内酯类、林可酰胺类、四环素类、环脂肽、甘氨酰环素类、恶唑烷酮类和台勾霉素；血管紧张素、血管紧张素类似物；清创术；引流；伤口冲洗；负压伤口疗法；加热；动脉血管再生；高压氧疗法；抗氧化剂，如抗坏血酸、谷胱甘肽、硫辛酸、胡萝卜素、α-生育酚或泛醇；低强度激光疗法；腓肠肌退缩术；生长因子，如血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子1-2、血小板源性生长因子、转化生长因子β或表皮生长因子；施加自体血小板，如那些分泌一种或多种生长因子如血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子1-2、血小板源性生长因子、转化生长因子β或表皮生长因子的自体血小板；角化细胞培养物的植入；同种异体移植物；胶原蛋白，例如包含胶原蛋白的敷料；或蛋白酶抑制剂如SLPI。
组合疗法可以包含上述治疗中的一种或多种。
组合疗法可以包含上述治疗中的一种或多种。
[0397] 在能够治疗痤疮(例如寻常痤疮)的组合疗法中，第二疗法可以包括例如药物治疗(例如，全身或局部的)，如过氧化苯甲酰、抗生素(如红霉素、克林霉素或四环素)、水杨酸、激素(例如，包括孕激素如去氧孕烯(desogestrel)、诺孕酯(norgestimate)或屈螺酮(drospirenone))；类视色素如维甲酸(tretinoin)、阿达帕林(adapalene)、他扎罗汀(tazarotene)或异维甲酸(isotretinoin)。第二疗法还可以是诸如粉刺摘除、皮质类固醇注射或手术切缝的程序。组合疗法可以包含上述治疗中的一种或多种。
[0398] 在能够治疗酒渣鼻的组合疗法中，第二疗法可以包括例如抗生素，例如，口服四环素抗生素如四环素、强力霉素或米诺环素，或局部抗生素如甲硝唑；壬二酸；α-羟基酸；可以开具处方的异维甲酸；檀香油；可乐定(clonidine)；β-阻断剂如纳多洛尔(nadolol)和普萘洛尔(propranolol)；抗组胺药(如氯雷他定(loratadine))；米氮平(mirtazapine)；甲基磺酰甲烷或水飞蓟素(silymarin)，任选地彼此组合；激光，如皮肤血管激光或CO2激光；或光疗法，如强脉冲光、低强度光疗法或光子嫩肤术。组合疗法可以包含上述治疗中的一种或多种。
[0399] 在能够治疗湿疹的组合疗法中，第二疗法可以包括例如皮质类固醇，如氢化可的松或丙酸氯倍他索；免疫抑制剂(局部或全身的)，如吡美莫司(pimecrolimus)、他克莫司(tacrolimus)、环孢素、硫唑嘌呤或甲氨蝶呤；或光疗法，如利用紫外光。组合疗法可以包含上述治疗中的一种或多种。
[0400] 在能够治疗银屑病的组合疗法中，第二疗法可以包括例如皮质类固醇，如去羟米松；类视色素；焦油；维生素D或其类似物，如帕立骨化醇(paricalcitol)或卡泊三醇(calcipotriol)；保湿剂和润肤剂，如矿物油、凡士林、卡泊三醇、decubal或椰子油；地蒽酚(dithranol)；或醋酸氟轻松(fluocinonide)。组合疗法可以包含上述治疗中的一种或多种。
[0401] 10.用于改善氨氧化细菌治疗的实验模型
[0402] 包含如本文所述的氨氧化细菌(其任选与另一种疗法组合)的治疗可以使用许多模型系统加以改善。这些模型系统可以用于确定合适的剂量和施用时间安排。
[0403] 例如，对于慢性创伤和溃疡(例如静脉性溃疡，例如糖尿病性溃疡或本文公开的其它溃疡)，可以使用小鼠皮肤穿刺模型。这些病症的其它模型包括豚鼠模型中的受控皮肤缺血、兔耳溃疡模型、对伤口施用钙或局部施用阿霉素(doxorubicin)。
[0404] 对于痤疮(例如寻常痤疮)，可以使用(例如)墨西哥无毛犬模型、犀鼠模型或兔耳分析。对于酒渣鼻，可以使用(例如)皮内注射LL-37至小鼠皮肤中或叙利亚仓鼠(Syrian hamster)模型。对于湿疹，可以使用(例如)对致敏豚鼠或NC/Nga小鼠的耳部施加粉尘螨(Dermatophagoides farina)的粗提取物，施加二硝基氯苯。对于银屑病，可以使用(例如)异种移植模型，其中将涉及和未涉及的银屑病皮肤移植到免疫缺陷小鼠上；对SCID小鼠的皮肤施加针对白介素15的抗体；以及Sharpincpdm/Sharpincpdm小鼠模型。
[0405] 11.治疗效益的机制
[0407] 为了理解这些细菌有益的方面，理解血管生成是有帮助的。所有的体细胞，除了那些暴露在几百微米外界空气中的细胞，都从血液供应中获取所有代谢氧气。氧气被肺中的血液吸收，作为氧合血红蛋白被血红细胞运载到外周组织，在那里和二氧化碳交换，二氧化碳然后被运回，从肺中呼出。氧气必须从红细胞中扩散，通过细胞质，穿过内皮，并穿过各种组织直到到达利用氧气的细胞线粒体。人体内含有约5升血液，所以循环系统的体积与身体的体积相比而言很小。氧气不能被主动运输。它被动的通过浓度梯度从空气扩散到红细胞中，从红细胞扩散到细胞中，再从细胞到消耗氧气的细胞色素氧化酶。消耗氧气部位的氧气浓度在体内是最低的，且O2通量由扩散阻力和浓度梯度决定。完成给所有的外周组织供应充足氧气需要对毛细血管的大小和位置进行敏锐的控制。如果毛细血管的空间增加，完成同样的氧气通量就需要更大的浓度差和因此更低的细胞色素氧化酶的O2浓度。毛细血管之间的细胞越多，O2的需求就会更大。如果毛细血管之间的空间减小，完成器官代谢功能的细胞的可利用的空间也减小。
[0408] 在某些方面，来自氨氧化细菌的NO容易被外皮肤所吸收，且由于外皮肤没有血红蛋白而转化成S-亚硝基硫醇。M.Stucker等人在“The cutaneous uptake of atmospheric oxygen contributes significantly to the oxygen supply of human dermis and epidermis”中已经表明，外皮肤从外界空气中接受所有的氧气。(Journal of Physiology(2002),538.3，第985–994页。)这是显然的，因为可以看到外皮肤基本上没有红细胞。因为它们是活的，且需要血液中的营养而不仅仅是氧气，所以这些层之间存在血浆循环。形成的S-亚硝基硫醇是稳定的，可以扩散通过身体，并构成可靠NO的体积源和使蛋白巯基转亚硝基的NO源。
[0409] 在一些方面，应该了解，毛细血管稀薄是NO水平不足的首要表现之一。F.T.Tarek等人表明，疏松的毛细血管或者说毛细血管稀薄在患有原发性高血压的人群中较为常见。(Structural Skin Capillary Rarefaction in Essential
Hypertension.Hypertension.1999；33:998-1001
Hypertension.Hypertension.1999；33:998-1001
[0410] 许多病状与毛细血管密度变得疏松有关。高血压是其中一种，且研究者报道稀疏的毛细血管也见于原发性高血压人群的孩童时期中以及糖尿病人群中。糖尿病的严重并发症是高血压、糖尿病性肾病，糖尿病性视网膜病，糖尿病性神经病。R.Candido等人已经发现，最后两种病状的特征是观察到症状之前流向受影响部位的血流量降低。(Haemodynamics in microvascular complications in type 1 diabetes.Diabetes
Metab Res Rev 2002；18:286-304。)降低的毛细血管密度和肥胖症相关，且普通体重降低增加毛细血管密度，如由A Philip等人在“Effect of Weight Loss on Muscle Fiber Type,Fiber Size,Capilarity,and Succinate Dehydrogenase Activity in Humans”中所示。The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism第84卷，第11期4185-4190,
1999。
Metab Res Rev 2002；18:286-304。)降低的毛细血管密度和肥胖症相关，且普通体重降低增加毛细血管密度，如由A Philip等人在“Effect of Weight Loss on Muscle Fiber Type,Fiber Size,Capilarity,and Succinate Dehydrogenase Activity in Humans”中所示。The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism第84卷，第11期4185-4190,
1999。
[0411] 研究者已表明，在原发性雷诺现象(PRP)中，甲襞毛细血管比正常对照组的稀薄(轻微的)，且比已经发展为全身硬化(SSc)的病人丰富的多。M.Bukhari，Increased Nailfold Capillary Dimensions In Primary Raynaud's Phenomenon And Systemic Sclerosis.British Journal of Rheumatology，第24卷，第35期：1127-1131,1996。他们发现毛细血管密度从35loops/mm2(正常对照组)降到33(PRP组)、17(SSc组)。对照组、PRP组、SSc组毛细血管支路之间的平均距离分别是18μ、18μ和30μ。
[0412] 在某些方面，应该了解，正常情况下身体用于感受“缺氧”的机制可影响到调节毛细血管密度的身体系统。根据本公开的这个方面，大量的“缺氧”组分被感受到，不是通过O2水平的降低，而是通过一氧NO水平的增加。NO基础水平的降低干扰了“缺氧”的感受，所以影响了许多通过“缺氧”调节的身体功能。例如，贫血通常被定义为“血红蛋白不足”，血红蛋白不足的一个后果就是“缺氧”，它被定义为“氧气不足”。根据一些方面，这些普通的定义不能解释两种病状的一氧化氮引起的方面。
[0413] 在休息状态时，急性等容贫血的耐受性良好。血细胞比容的2/3的减少对静脉回流的PvO2影响很小，这暗示了无论是O2压还是整个身体的运输都没有降低。Weiskopf等人，Human cardiovascular and metabolic response to acute,severe isovolemic anemia.JAMA 1998，第279卷，第3期，217-221。在降低50％时(从140到70g Hb/L)，平均PvO2饱和度(大于32个受试者)从大约77％降到74％。血液中O2容量的降低通过血管舒张和心率从63增加到85bpm的心动过速来补偿。补偿是有效而明显的，然而，机制却不是。典型的解释是“缺氧”感受器检测到了“缺氧”，并用血管舒张和心动过速的方式补偿。然而，却检测不到“缺氧“。血液乳酸(厌氧呼吸的标志物)轻微地从0.77降到0.62mM/L，暗示了较少厌氧呼吸和较少”缺氧”。静脉回流PvO2的3％的降低与人的海拔上升300米(通常不会产生心动过速)是同样水平的“缺氧”。静脉回流的O2浓度保持不变，且O2消耗保持不变，在体内没有O2浓度降低的空间。因为O2感应，等容贫血期间的代偿不会发生。
[0414] 因此，急性等容贫血中观察到的血管舒张可归因于血管壁处的NO浓度增加。NO响应剪切应力和其它因素介导血管扩张。观察到NO代谢水平没有改变，因为NO的产生速率没有改变，且继续等于起消耗速率。没有观察到“低氧症”的metHb代偿是很容易理解的，因为metHb就像Hb那样结合NO，因此当Hb降低导致metHb代偿时NO浓度并没有增加。
[0415] 一氧化氮在许多代谢途径中起重要作用。已经表明，NO的基本水平在色调抑制反应中发挥作用，并且这个基本水平的降低导致这些路径双重抑制。Zanzinger等人曾经报道NO抑制基本交感紧张和减弱兴奋反射。(Inhibition of basal and reflex-mediated sympathetic activity in the RVLM by nitric oxide.Am.J.Physiol.268(Regulatory Integrative Comp.Physiol.37):R958-R962,1995。)
[0416] 在一些方面，应该了解，NO体积源的一种组分为低分子量S-亚硝基硫醇，其在无红细胞皮肤上通过氨氧化细菌由外皮肤上产生的NO产生。这些低分子量S-亚硝基硫醇长期稳定，并且可以在血浆中自由扩散和循环。多种酶可从多种S-亚硝基硫醇裂解出NO，从而在酶切位点释放出NO。皮肤上的AOB的这个NO体积源的损失导致破坏正常生理。身体使用S-亚硝基硫醇远离毛细血管产生NO的优点在于从S-亚硝基硫醇生产NO无需O2。一氧化氮合成酶(NOS)产生NO需要O2。当有足够的S-亚硝基硫醇背景时，甚至在缺氧区域中也可以生成NO。也不需要游离NO，因为NO只有与另一个分子附接时才发挥作用，如半胱氨酸残基的巯基或血红素的铁，因此NO的作用可以被转亚硝基化所介导，甚至没有自由NO而只要有S-亚硝基硫醇和转亚硝基酶存在时也是可以的。
[0417] Frank等人已表明，伴随普通创伤恢复的血管生成部分是由提升的VEGF产生的，VEGF是由增加的一氧化氮诱导的。(Nitric oxide triggers enhanced induction of vascular endothelial growth factor expression in cultured keratinocytes(HaCaT)and during cutaneous wound repair.FASEB J.13,2002–2014(1999)。)
[0418] NO在形成癌症中起重要作用，表明本文所述细菌可用于癌症治疗和预防的方法中。根据某些方面，应该了解，在缺氧期间存在NO可阻止细胞在缺氧应激下分裂，这时细胞复制DNA的错误风险较大。一个相关的细胞功能是调控细胞周期。这是控制着细胞如何和何时复制DNA、组装成双染色体和分裂的调控程序。细胞周期的调控是非常复杂的，并且没有完全理解。但是，已知，在细胞周期的路径上存在许多点，在这些点上细胞周期可以被停止，且分裂可以被阻止直至发生这种情况的状态被改善。p53肿瘤抑制蛋白是细胞周期调控时的关键蛋白，且它通过包括DNA损伤的不同细胞压力信号启动细胞阻滞和凋亡，并且P53在超过一半以上的人类癌症中发生突变，如Ashcroft等人在“Stress Signals Utilize Multiple Pathways To Stabilize p53”中所报道。(Molecular And Cellular Biology，2000年5月，第3224–3233页。)缺氧启动p53的积累，而且当缺氧在调控细胞周期中佷重要时，缺氧单独不能诱导p53mRNA效应蛋白的下游表达，因此不能够引起细胞周期的停止。
Goda等人曾经报道到细胞阻滞的缺氧诱导需要缺氧-诱导因子-1(HIF-1α)。(Hypoxia-Inducible Factor 1αIs Essential for Cell Cycle Arrest during
Hypoxia.Molecular And C ellular Biology，2003年1月，第359–369页。)Britta等人曾经报道，NO是HIF-1α的主要刺激物之一。(Accumulation of HIF-1a under the influence of nitric oxide.Blood，2001年2月15日，第97卷，第4号。)相比之下，NO引起转录活性P53的积累，并且引起细胞周期的阻滞，和引起凋亡。Wang等人，P53Activation By Nitric Oxide Involves Down-Regulation Of Mdm2.THE JOURNAL OF BIOLOG ICAL CHEMISTRY第
277卷，第18期，发行期5月3日，第15697–15702页，2002。
Goda等人曾经报道到细胞阻滞的缺氧诱导需要缺氧-诱导因子-1(HIF-1α)。(Hypoxia-Inducible Factor 1αIs Essential for Cell Cycle Arrest during
Hypoxia.Molecular And C ellular Biology，2003年1月，第359–369页。)Britta等人曾经报道，NO是HIF-1α的主要刺激物之一。(Accumulation of HIF-1a under the influence of nitric oxide.Blood，2001年2月15日，第97卷，第4号。)相比之下，NO引起转录活性P53的积累，并且引起细胞周期的阻滞，和引起凋亡。Wang等人，P53Activation By Nitric Oxide Involves Down-Regulation Of Mdm2.THE JOURNAL OF BIOLOG ICAL CHEMISTRY第
277卷，第18期，发行期5月3日，第15697–15702页，2002。
[0419] 在本公开的某些方面，应该了解，通过阻止会导致缺氧性死亡的毛细血管稀薄来阻止细胞坏死性死亡可以防止自身免疫性疾病。当细胞暴露于慢性缺氧时，反应性氧物质(ROS)生产增加，且对细胞代谢机能的损伤增加，最终导致细胞DNA的损伤增加。降低的代谢能力，由于ROS和外源性致癌物质暴露，将会降低损伤恢复能力。随时间推移，损伤积累，并增加三个事件的概率：细胞将缺失抑癌基缺失，且细胞将变得癌化，细胞将通过坏死而死亡，或细胞通过细胞凋亡而死亡。当细胞死亡时，无论是坏死还是凋亡，细胞残骸必须从那个部位中清除。死亡细胞被免疫细胞，包括树枝状细胞和巨噬细胞所吞噬。当这些细胞吞噬主体，所述主体通过各种蛋白水解酶消化为抗原片段，然后将这些抗原附接至主要组织相容性复合物(MHC1、MHC2)，并将抗原-MHC复合物移动到细胞表面，在那里与它可与T细胞相互作用，并以各种方式激活T细胞。任何细胞损伤都会通过不同方式释放出刺激免疫系统的辅助因子。一般来说，坏死的细胞会比凋亡的细胞刺激更大的免疫反应。因此，将免疫细胞长期暴露于已经死亡或正在死亡的细胞有可能导致自身免疫性疾病。
[0420] 在某些方面，应该了解，低基本NO导致纤维性肥大。一旦清除死亡细胞后，新的细胞无法轻易取代其位置，因为没有足够O2的支持。任何此类新的细胞将遭遇相同宿命。空间可保持空置，其这种情况下，器官萎缩，毛细血管彼此靠的更紧，现在新的细胞被由正在死亡的细胞剥夺先前产生的VEGF，所以毛细血管消失，并重新形成缺氧区。这可导致受影响的组织全面萎缩。在支持纤维化的组织中，相对惰性的胶原纤维可填充空间。因为身体对正在讨论的特定器官的代谢需求没有降低，器官就试图变大，但现在有着大量纤维含量。这可导致纤维性肥大，例如心脏和肝脏的纤维化肥大。一些器官如脑无法变大或变小，因为神经和血管的三维连通性很重要，且无法连续并同时地映射到不对称萎缩的脑上。空间必须充满着物质，且β-淀粉可能会成为(不太惰性的)空间填充物。肾脏因为肾囊而无法变大，所以活细胞的数量变少，且它们被纤维化组织替代。如果死亡细胞被清除，组织萎缩，而且NO/O2的比例又下降，且毛细血管又变稀薄。这就形成以下疾病的恶性循环：终末期肾病、充血性心力衰竭/心脏肥大、原发性胆汁性肝硬化、阿尔茨海默病、动脉粥样硬化、发炎性肠病、瘢痕增生、和以雷诺现象开始并以全身性硬化和原发性干燥综合征结束的多种结缔组织疾病，其中还观察到毛细血管稀薄。Ferrini等人已表明，由于用L-NAME造成的NOS的慢性抑制引起的基础NO水平的降低导致了心脏和肾脏的全面纤维化。(Antifibrotic Role of Inducible Nitric Oxide Synthase.Nitirc Oxide:Biology and Chemistry第6卷，第3期，第283–294页(2002)。)可能是低基础NO导致了纤维性肥大。
[0421] 在某些方面，应该了解，毛细血管稀薄影响受试者控制食欲的能力。在老人和动物的脑中观察到毛细血管稀薄。毛细血管稀薄与循环生长因子(包括胰岛素样生长因子-1)的下降相关。成人脑中的神经形成与血管生成相配合。因为脑调节许多稳态功能，为控制脑成分，毛细血管间的扩散长度增加可“理解”为那些物质的血液浓度不足。脑中葡萄糖的通量相当接近正常代谢需求，其中葡萄糖通量只比葡萄糖消耗大50至75％，且跨血脑屏障的葡萄糖转运体可以是饱和的，甾类特异性的，且不依赖于能量或离子梯度。胃口的大部分调节通过脑介导，且毛细血管稀薄可导致“营养物质”(或与“营养物质”成比例的标记化合物)的充足血液浓度被解读为不充足。这可能是肥胖症的一个原因。
[0422] 根据某些方面，应该了解，毛细血管稀薄可以是非胰岛素依赖型糖尿病的原因。非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)也称为代谢综合征或第2型糖尿病，特征为胰岛素抗性。身体对胰岛素的敏感性降低，且胰岛素水平增加。患有NIDDM的人具有高血液葡萄糖、高血液三甘油酯，通常很肥胖，有高血压，且通常具有大量内脏脂肪。
[0423] NIDDM伴有其它症状，毛细血管稀薄可能为原因。在研究40名患有或未患NIDDM、肥胖症(BMI 29)和消瘦病(lean)(BMI 24)(每种10名)的男性时，Konrad等人报道，对于未患NIDDM的消瘦男性、未患NIDDM的肥胖男性、患有NIDDM的消瘦男性、患有NIDDM的肥胖男性，休息时的血液乳酸水平分别为1.78、2.26、2.42和2.76(mM/L)。(Α-Lipoic acid treatment decreases serum lactate and pyruvate concentrations and improves glucose effectiveness in lean and obese patients with type 2
diabetes.Diabetes Care 22:280-287,1999。)乳酸是无氧糖酵解的量度。当O2不足以通过氧化磷酸化生成ATP时，细胞可通过无氧糖酵解产生ATP。无氧糖酵解的产物之一是乳酸，乳酸必须从细胞排出，否则pH下降，且功能受损。血液乳酸通常在运动研究中测到，其中增加暗示了可完成最大氧化工作的工作负荷。在休息时较高的乳酸水平将指示休息时无氧糖酵解增加，这与毛细血管稀薄相一致。
diabetes.Diabetes Care 22:280-287,1999。)乳酸是无氧糖酵解的量度。当O2不足以通过氧化磷酸化生成ATP时，细胞可通过无氧糖酵解产生ATP。无氧糖酵解的产物之一是乳酸，乳酸必须从细胞排出，否则pH下降，且功能受损。血液乳酸通常在运动研究中测到，其中增加暗示了可完成最大氧化工作的工作负荷。在休息时较高的乳酸水平将指示休息时无氧糖酵解增加，这与毛细血管稀薄相一致。
[0424] 原发性胆汁性肝硬化与雷诺现象、瘙痒症、干燥综合征、骨质疏松、门静脉血压过高、神经病和胰功能不全相关，且肝功能异常与风湿性疾病相关。肝酶升高是肝炎症的症状，肝酶升高是作为“无症状”原发性胆汁性肝硬化的早期症状观察到。因此，本文所述细菌可用于治疗肝炎症。
[0425] Torre等人已经报道，阿尔茨海默病(AD)是微血管疾病，伴随着低灌注激发的神经性退化，这部分是由一氧化氮不足导致的。(Review:Evidence that Alzheimer's disease is a microvascular disorder:the role of constitutive nitric oxide,Brain Research Reviews 34(2000)119-136。)因此，本文所述细菌可用于治疗AD。
[0426] 与高血压相关的不利健康影响也可以是低基础NO的结果。对血管舒张的反应下降也与低基础NO相一致。NO是从来源扩散到传感器位置的可扩散分子，NO在传感器位置具有信号传递效果。因为NO水平低，每个NO来源必须产生较多NO来生成与某一距离的某一强度相等的NO信号。NO在三个维度扩散，且所述扩散范围内的全部体积必须提升至将在传感器位置给出适当信号的水平。这可在来源处和来源与传感器之间导致较高NO水平。接近来源的高NO的不利局部效果可由过低NO背景引起。有一些证据表明实际上发生这种情况。在大鼠胰岛中，Henningsson等人已报道，用L-NAME抑制NOS通过诱导iNOS增加总NO生产。(Chronic blockade of NO synthase paradoxically increases islet NO production and modulates islet hormone release.Am J Physiol Endocrinol Metab 279:E95–E107,2000。)通过增加NOS活性增加NO将只能在一定限度下起作用。当NOS被活化但未供应足够四氢生物喋呤(BH4)或L-精氨酸时，其“解偶联”并生成超氧化物(O2-)而非NO。这个O2-随即可以破坏NO。试图以超过供应BH4或L-精氨酸的速率生产NO反而降低NO水平。这可导致-
正反馈，低的NO水平由于NOS的刺激而变得更糟糕，且解偶联的NOS生成大量的O2，造成局部活性氧物质(ROS)损伤，如在动脉粥样硬化、终末期肾病、阿尔兹海默病和糖尿病中所观察到的那样。
正反馈，低的NO水平由于NOS的刺激而变得更糟糕，且解偶联的NOS生成大量的O2，造成局部活性氧物质(ROS)损伤，如在动脉粥样硬化、终末期肾病、阿尔兹海默病和糖尿病中所观察到的那样。
[0427] 本文所述细菌也可以用于延迟衰老迹象。热量限制延长寿命，且Holloszy报道，限制食物摄入至随意对照的70％，将静坐大鼠的寿命从858天延长至1,051天，延长几乎25％。(Mortality rate and longevity of food restricted exercising male rats:a
reevaluation.J.Appl.Physiol.82(2):399–403,1997。)热量限制与延长寿命之间的联系已被确立，然而，原因机制并不清楚。Lopez-Torres等人报道，检查大鼠中肝线粒体酶表明，H2O2的生产由于与热量限制相关的复合物I活性降低而减少。(Influence Of Aging And Long-Term Caloric Restriction On Oxygen Radical Generation And Oxidative DNA Damage In Rat Liver Mitochondria.Free Radical Biology&Medicine第32卷第9期第
882-8899页，2002。)H2O2是由O2-歧化产生，它是在呼气作用期间由线粒体生产的主要ROS。
Kushareva等人和其他人提出，O2-的主要来源是复合物I，它通过来自复合物III(琥珀酸盐还原位点)的电子逆流催化NAD/NADH氧化还原对。提出的老化自由基理论假定，自由基对细胞DNA、抗氧化剂系统和DNA修复系统的伤害随着年龄累积，且当关键系统的损伤到无法修复的程度，随即死亡。(The Free Radical Theory of Aging Matures.Physiol.Rev.78:
547–581,1998。)
reevaluation.J.Appl.Physiol.82(2):399–403,1997。)热量限制与延长寿命之间的联系已被确立，然而，原因机制并不清楚。Lopez-Torres等人报道，检查大鼠中肝线粒体酶表明，H2O2的生产由于与热量限制相关的复合物I活性降低而减少。(Influence Of Aging And Long-Term Caloric Restriction On Oxygen Radical Generation And Oxidative DNA Damage In Rat Liver Mitochondria.Free Radical Biology&Medicine第32卷第9期第
882-8899页，2002。)H2O2是由O2-歧化产生，它是在呼气作用期间由线粒体生产的主要ROS。
Kushareva等人和其他人提出，O2-的主要来源是复合物I，它通过来自复合物III(琥珀酸盐还原位点)的电子逆流催化NAD/NADH氧化还原对。提出的老化自由基理论假定，自由基对细胞DNA、抗氧化剂系统和DNA修复系统的伤害随着年龄累积，且当关键系统的损伤到无法修复的程度，随即死亡。(The Free Radical Theory of Aging Matures.Physiol.Rev.78:
547–581,1998。)
[0428] 作为另一机制，Vasa等人已经证实，NO激活端粒酶并延缓内皮细胞衰老。(Nitric Oxide Activates Telomerase and Delays Endothelial Cell Senescence.Circ Res.2000；87:540-542。)低基础NO将通过解除细胞色素氧化酶抑制来增加基础代谢速率。
增加的基础代谢还将增加细胞再生和生长速率。毛细血管稀薄通过诱导慢性缺氧可增加自由基损伤，且还可增加细胞再生，且因此通过两种机制加速老化。
增加的基础代谢还将增加细胞再生和生长速率。毛细血管稀薄通过诱导慢性缺氧可增加自由基损伤，且还可增加细胞再生，且因此通过两种机制加速老化。
[0429] 在一些方面，应该了解自养氨氧化细菌可产生过敏和自身免疫性疾病的保护方面。最为人所知的自身免疫疾病可能是第1型糖尿病，它是由通过免疫系统破坏胰腺中的产胰岛素细胞引起的。复发性流产也与自身免疫性疾病相关，其中阳性自体免疫抗体的数量与复发性流产的次数呈正相关。全身性硬化、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、和各种风湿病是自身免疫性疾病的其它实例。观察到，施用AOB减少过敏、枯草热，如WO/2005/030147中所述。
[0430] AOB借以对过敏和自身性免疫疾病发挥保护作用的一个机制是通过产生一氧化氮，主要是通过调节抑制NF-КB和防止免疫细胞活化和诱导炎症反应。NF-КB是上调基因表达的转录因子，且这些基因中的许多与炎症和免疫反应相关，包括导致释放细胞因子、趋化因子和各种粘附因子。这些各种免疫因子导致免疫细胞迁移到它们的释放位点，导致炎症反应。已显示，组成型NO生产通过防止IКBα降解稳定IКBα(NF-КB的抑制剂)而抑制NF-КB。
[0431] Xu等人已证实，施用NO供体防止大鼠中实验性过敏性脑脊髓炎的发展。(SIN-1,a Nitric Oxide Donor,Ameliorates Experimental Allergic Encephalomyelitis in Lewis Rats in the Incipient Phase:The Importance of the Time Window.The
Journal of Immunology,2001,166:5810–5816。)在此研究中，已证实，施用NO供体减少巨噬细胞浸润中枢神经系统，减少血液单核细胞增生，并增加血液单核细胞凋亡。所有这些结果都被认为降低了诱导免疫反应的程度和严重性。
Journal of Immunology,2001,166:5810–5816。)在此研究中，已证实，施用NO供体减少巨噬细胞浸润中枢神经系统，减少血液单核细胞增生，并增加血液单核细胞凋亡。所有这些结果都被认为降低了诱导免疫反应的程度和严重性。
[0432] 低基础NO可通过以下机制导致自闭症，所述机制为由于基础一氧化氮不足，不足以在脑中形成新的连接。尽管不希望限制于理论，但在一些实施方案中，通过NO调节神经连接的形成。在这些情况下，任何降低NO扩散范围的条件都可以减小可经历连接的脑要素的体积尺寸。在低基础NO水平条件下发育的脑可布置在小体积要素中，因为NO的有效范围减小。
[0433] 自闭症个体中呈现的其它症状也可以将低NO指定为病因，包括音高辨别增加、肠道紊乱、免疫系统异常、脑血流量减少、脑葡萄糖消耗增加、血浆乳酸增加、依附障碍和哼唱。这些症状中的每一种都可以归因于低基础NO水平。
[0434] Takashi Ohnishi等人已经报道，自闭症个体的血流量减少。Takashi Ohnishi等人，Abnormal regional cerebral blood flow in childhood autism.Brain(2000),123,1838-1844。J.M.Rumsey等人已报道，自闭症个体的葡萄糖消耗增加。Rumsey JM,Duara R,Grady C,Rapoport JL,Margolin RA,Rapoport SI,Cutler NR.自闭症的脑代谢。用正电子发射断层扫描测量静息脑葡萄糖利用率。Arch Gen Psychiatry，1985年5月；42(5):448-55(摘要)。D.C.Chugani已报道，自闭症个体的血浆乳酸水平增加。Chugani DC等人，Evidence of altered energy metabolism in autistic children.Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry.1999年5月；23(4):635-41。出现这些效果可能是脑中毛细血管稀薄的结果，脑中毛细血管稀薄可减少血流量和O2供应，使得脑的一些代谢负荷可通过糖酵解而非氧化磷酸化产生。
[0435] 已经由B.A.Klyachko等人证明一氧化氮通过离子通道的cGMP修饰增加后超极化而增加神经元的兴奋性。Vitaly A.Klyachko等人，cGMP-mediated facilitation in nerve terminals by enhancement of the spike after hyperpolarization.Neuron，第31卷，1015-1025，2001年9月27日。C.Sandie等人已经表明，抑制NOS减少吃惊。Carmen Sandi等人，Decreased spontaneous motor activity and startle response in nitric oxide synthase inhibitor-treated rats.European journal of pharmacology277
(1995)89-97。已经利用自发性高血压大鼠(SHR)和那不勒斯高兴奋(NHE)大鼠建立注意力缺陷多动障碍(ADHD)模型。Raffaele Aspide等人已经表明，这两个模型在急性NOS抑制期间的注意力缺陷加剧。Raffaele Aspide等人，Non-selective attention and nitric oxide in putative animal models of attention-deficit hyperactivity
disorder.Behavioral Brain Research 95(1998)123-133。因此，本文的细菌可用于治疗ADHD。
(1995)89-97。已经利用自发性高血压大鼠(SHR)和那不勒斯高兴奋(NHE)大鼠建立注意力缺陷多动障碍(ADHD)模型。Raffaele Aspide等人已经表明，这两个模型在急性NOS抑制期间的注意力缺陷加剧。Raffaele Aspide等人，Non-selective attention and nitric oxide in putative animal models of attention-deficit hyperactivity
disorder.Behavioral Brain Research 95(1998)123-133。因此，本文的细菌可用于治疗ADHD。
[0436] M.R.Dzoljic还表明R.抑制NOS可抑制睡眠。M.R.Dzoljic,R.de Vries,R.van Leeuwen.Sleep and nitric oxide:effects of 7-nitro indazole,inhibitor of brain nitric oxide synthase.Brain Research 718(1996)145-150。G.Zoccoli已经报道，当NOS受到抑制时，睡眠期间的多个生理作用被改变，包括眼球快速运动和脑循环的睡眠-清醒区别。G.Zoccoli等人，Nitric oxide inhibition abolishes sleep-wake differences in cerebral circulation.Am.J.Physiol.Heart Circ Physiol 280:H2598-2606,2001。
L.Kapas等人已表明，NO供体促进非-REM睡眠，然而，这些增加比NO供体的持续时间持续长得多的时间，暗示可能是反弹效应。Levente Kapas等人Nitric oxide donors SIN-1 and SNAP promote nonrapid-eye-movement sleep in rats.Brain Research Bullitin，第41卷，第5期，第293-298页，1996。M.Rosaria等人，Central NO facilitates both penile erection and yawning.Maria Rosaria Melis and Antonio Argiolas.Role of central nitric oxide in the control of penile erection and yawning.Prog Neuro-
Psychopharmacol&Biol.Phychiat.1997，第21卷，第899-922页。P.Tani等人已报道，失眠常见于患有亚斯伯格氏综合征(Asperger's)的成人中。Pekka Tani等人，Insomnia is a frequent finding in adults with Asperger's syndrome.BMC Psychiatry 2003,3:12。
Y.Hoshino还在自闭症儿童中观察到睡眠障碍。Hoshino Y,Watanabe H,Yashima Y,Kaneko M,Kumashiro H.An investigation on sleep disturbance of autistic
children.Folia Psychiatr Neurol Jpn.1984；38(1):45-51.(摘要)K.A.Schreck等人观察到，睡眠障碍的严重性与自闭症症状的严重性相关。Schreck KA等人，Sleep problems as possible predictors of intensified symptoms of autism.Res Dev Disabil.2004年1月-2月；25(1):57-66.(摘要)。因此，本文的细菌可用于治疗失眠。
L.Kapas等人已表明，NO供体促进非-REM睡眠，然而，这些增加比NO供体的持续时间持续长得多的时间，暗示可能是反弹效应。Levente Kapas等人Nitric oxide donors SIN-1 and SNAP promote nonrapid-eye-movement sleep in rats.Brain Research Bullitin，第41卷，第5期，第293-298页，1996。M.Rosaria等人，Central NO facilitates both penile erection and yawning.Maria Rosaria Melis and Antonio Argiolas.Role of central nitric oxide in the control of penile erection and yawning.Prog Neuro-
Psychopharmacol&Biol.Phychiat.1997，第21卷，第899-922页。P.Tani等人已报道，失眠常见于患有亚斯伯格氏综合征(Asperger's)的成人中。Pekka Tani等人，Insomnia is a frequent finding in adults with Asperger's syndrome.BMC Psychiatry 2003,3:12。
Y.Hoshino还在自闭症儿童中观察到睡眠障碍。Hoshino Y,Watanabe H,Yashima Y,Kaneko M,Kumashiro H.An investigation on sleep disturbance of autistic
children.Folia Psychiatr Neurol Jpn.1984；38(1):45-51.(摘要)K.A.Schreck等人观察到，睡眠障碍的严重性与自闭症症状的严重性相关。Schreck KA等人，Sleep problems as possible predictors of intensified symptoms of autism.Res Dev Disabil.2004年1月-2月；25(1):57-66.(摘要)。因此，本文的细菌可用于治疗失眠。
[0437] W.D.Ratnasooriya等人报道，抑制雄性大鼠中的NOS减少性交前活动，减少性欲，并降低能育性。W.D.Ratnasooriya等人，Reduction in libido and fertility of male rats by administration of the nitric oxide(NO)synthase inhibitor N-nitro-L-arginine methyl ester.International journal of andrology,23:187-191(2000)。
[0438] 许多看似截然不同的以ATP耗竭和最终器官衰竭为特征的病症实际上可能是由nitropenia“引起”，由基础一氧化氮的全身缺乏引起。当这种情况出现在心脏中时，结果是扩张型心肌病。当这种情况出现在脑中时，结果是白质高信号、阿尔茨海默病、血管性抑郁、血管性痴呆、帕金森氏症和路易体痴呆。当这种情况出现在肾脏中时，结果为终末期肾病，当这种情况出现在肝脏中时，结果为原发性胆汁性肝硬化。当这种情况出现在肌肉中时，结果为纤维肌痛、海湾战争综合征或慢性疲劳综合征。当这种情况出现在肠中时，结果为缺血性肠病。当这种情况出现在胰脏中时，结果为首先第2型糖尿病，接着为胰脏慢性炎症，接着为胰脏的自身免疫攻击(或胰脏癌)，接着为第1型糖尿病。当这种情况出现在结缔组织中时，结果为全身性硬化。
[0439] 在终末期肾病放入残肾模型中，部分肾被移除，(无论是外科手术或是毒素)，这样增加对剩余部分的代谢负荷。生成超氧化物以降低NO，并增加O2扩散至肾线粒体中。长期超负荷导致进行性肾毛细血管稀薄和进行性肾衰竭。在急性肾衰竭中，给人透析可让肾“休息”，并允许其恢复。在由横纹肌溶解(将肌红蛋白释放至血流中的肌肉损伤)诱导的急性肾衰竭中，肾损伤是以缺血性损伤为特征。肌红蛋白清除NO，就如同血红蛋白一样，且将在肾脏中引起血管收缩，导致局部缺血。肌红蛋白也将诱导local nitropenia和一连串事件，导致进一步ATP耗竭。
[0440] 在一些方面，低NO水平导致线粒体生物发生减少。在减少的线粒体密度下生产相同ATP将导致O2消耗增加，或基础代谢速率加快。在许多病状中观察到加快的基础代谢速率，包括：镰状细胞性贫血、充血性心力衰竭、糖尿病、肝硬化、克罗恩病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、肥胖症、终末期肾病、阿尔茨海默病和慢性阻塞性肺病。
[0441] 虽然一定程度增加的O2消耗可被高效利用，但在这些病状中的许多中，解偶联蛋白也向上调节，表明至少部分增加的代谢速率是由低效率引起。解偶联蛋白已知被向上调节的病状包括肥胖症和糖尿病。
[0442] 随着较少线粒体将O2消耗至较低O2浓度，驱动O2扩散的O2梯度较大，所以O2扩散路径长度可增加，导致毛细血管稀薄，在扩张型心肌病、高血压、第2型糖尿病和肾性高血压中观察到毛细血管稀薄。
[0443] 铜，不管作为Cu2+或血浆铜蓝蛋白(CP)(主要的含铜血清蛋白，在成人血清中以0.38g/L存在，也就是0.32％的Cu，且包含94％的血清铜)催化从NO和含硫巯基基团(RSH)形成S-NO-硫醇。血浆的Cu含量是可变的，且在感染条件下增加。Berger等人报道，烧伤渗出物的Cu和Zn含量相当多，1/3皮肤烧伤的患者在7天内损失20至40％正常身体Cu和5至10％的Zn含量。(Cutaneous copper and zinc losses in burns.Burns.1992年10月；18(5):373-
80.)如果患者皮肤被AOB寄居，包含AOB需要的尿素和Fe、Cu和Zn的伤口渗出物将被转化为NO和亚硝酸盐，通过iNOS大大增补NO的局部生产，而不消耗代谢激发伤口中的来源(诸如O2和L-精氨酸)。预期，伤口表面上的AOB造成的高NO和亚硝酸盐生产抑制感染，特别抑制厌氧细菌如梭菌感染，所述厌氧细菌导致破伤风、气性坏疽和肉毒中毒。
80.)如果患者皮肤被AOB寄居，包含AOB需要的尿素和Fe、Cu和Zn的伤口渗出物将被转化为NO和亚硝酸盐，通过iNOS大大增补NO的局部生产，而不消耗代谢激发伤口中的来源(诸如O2和L-精氨酸)。预期，伤口表面上的AOB造成的高NO和亚硝酸盐生产抑制感染，特别抑制厌氧细菌如梭菌感染，所述厌氧细菌导致破伤风、气性坏疽和肉毒中毒。
[0444] 除非另有指示，否则本公开的实施可采用本领域的技术范围内的常规免疫学、分子生物学方法和重组DNA技术。文献中全面阐释此类技术。参见例如Sambrook等人Molecular Cloning:A Laboratory Manual(最新版本)；和Current Protocols in
Molecular Biology(F.M.Ausubel等人编，最新版本)。
实施例
Molecular Biology(F.M.Ausubel等人编，最新版本)。
实施例
[0445] 表面活性剂实验
[0446] 出于这些实验的目的，1x亚硝化单胞菌D23细胞是指109CFU/ml。因此，结果是0.1x亚硝化单胞菌D23细胞为0.1x 109CFU/ml而0.001 1x亚硝化单胞菌D23细胞为0.001x 9
10CFU/ml/
10CFU/ml/
[0447] 109CFU/ml细胞(1x)用 Terric COAB表面活性剂温育不同时间段之后亚硝化单胞菌D23细胞的恢复率。
[0448] 1x亚硝化单胞菌D23细胞在10ml含有0％、0.01％、0.1％和1％非离子型表面活性剂 Terric的氨氧化细菌(AOB)培养基中温育。在温育1分钟、10分钟、60分钟和1天结束时取1ml样品。样品离心，并用上清液进行亚硝酸盐测量。
[0449] 如图9A和9B所示，在0.01％、0.11％和1％ Terric的存在下观察到亚硝酸盐积累。如图9C和9D所示，0.001x氨氧化细菌和0.1x氨氧化细菌温育时间越长与对照相比产生的亚硝酸盐积累越少。
[0450] 离心后获得的细胞团块用AOB培养基洗涤一次并悬浮在10ml含有50mM NH4+的新鲜AOB培养基中。通过测量亚硝酸盐来研究亚硝化单胞菌D23细胞的恢复。
[0451] 如图10A-10D所示，用0.1％至10％ Terric温育长达60分钟的亚硝化单胞菌D23细胞恢复类似于亚硝化单胞菌D23对照细胞。用1％和10％ Terric温育1天的
亚硝化单胞菌D23细胞相比于亚硝化单胞菌D23对照细胞恢复更缓慢。
亚硝化单胞菌D23细胞相比于亚硝化单胞菌D23对照细胞恢复更缓慢。
[0452] 1x细胞用布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂(0.1-10％)温育不同时间段之后亚硝化单胞菌D23细胞的恢复率。
[0453] 亚硝化单胞菌D23用布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂(“Dr.Bronner's”)温育并从中恢复，如以上关于 Terrric表面活性剂所示进行。
[0454] 如图11A至12D所示，测量了用Dr.Bronner's温育期间和从Dr.Bronner's中恢复期间的亚硝酸盐积累数据。如图11A和11B所示，对于1％和10％Dr.Bronner's样品而言，在60分钟结束时亚硝酸盐积累因Dr.Bronner's的存在而降低。60分钟后，与对照相比时对于0.1％样品而言亚硝酸盐积累极少降低(若存在)。1天后，每份含Dr.Bronner's的样品都没有像对照那么高的亚硝酸盐积累。
[0455] 如图12A和12B所示，用布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂温育1分钟和10分钟后恢复对于0.1％Dr.Bronners中的样品而言，允许与对照同等的恢复率。60分钟和1天后，如图13A和13B所示，这种样品的恢复率降低。对于含有较高浓度的Dr.Bronner's(1％和10％)的样品而言，在温育1分钟、10分钟、60分钟和1天时恢复率没那么高或者恢复是不可能的。
[0456] 1x细胞用Plantaren 2000 N UP(0.1-1％)温育不同时间段后亚硝化单胞菌D23细胞的恢复率。
[0457] 亚硝化单胞菌D23用Plantaren 2000 N UP(“Plantaren”)温育并从中恢复，如以上关于 Terrric表面活性剂所示进行。图13A-13B和图14A-14D中示出了用Plantaren温育期间和从Plantaren中恢复期间的亚硝酸盐积累数据。
[0458] 如图13A和13B所示，对于1％和10％Plantaren样品而言在60分钟结束时亚硝酸盐积累相比于对照因Plantaren的存在而降低，并且在0.1％样品中亚硝酸盐积累减少非常少。1天后，每份含Plantaren的样品都没有像对照那么高的亚硝酸盐积累。
[0459] 如图14A和14B所示，用Plantaren温育1分钟和10分钟后恢复对于0.1％Plantaren中的样品而言，允许恢复率相比于对照仅有略微降低。60分钟和1天后，如图14C和14D所示，这种样品的恢复率降低。对于含有较高浓度的Plantaren(1％和10％)的样品而言，在温育1分钟、10分钟、60分钟和1天时恢复率没那么高或者恢复是不可能的。
[0460] 各种浓度的SDS和其它表面活性剂中的亚硝化单胞菌D23培养物
[0461] 两种不同密度的亚硝化单胞菌D23细胞(0.001x和0.1x)在不同浓度的表面活性剂中温育：Plantapon 611 L UP(图21C-21D)、Stepanol WA-Extra K(图19C-19D)、吐温80(图23A-23B)、ColaLux LO(图24A-24B)、Plantaren 200(图25A-25B)、RhodaSurf 6(图26A-
26B)、ColaTerric COAB(图9C和9D)和SDS(图15A-15B)。
26B)、ColaTerric COAB(图9C和9D)和SDS(图15A-15B)。
[0462] 0.001x和0.1x细胞的细胞密度表示在分批培养实验开始和结束时的亚硝化单胞菌D23细胞密度。除了用吐温80温育之外(图23A-23B)，用6种不同表面活性剂(Plantapon 611 L UP(图21C-21D)、Stepanol WA-Extra K(图19C-19D)、Tween 80(图23A-23B)、
ColaLux LO(图24A-24B)、Plantaren 200(图25A-25B)、RhodaSurf 6(图26A-26B))温育
0.001x密度的亚硝化单胞菌D23细胞时，亚硝酸盐积累极少。
ColaLux LO(图24A-24B)、Plantaren 200(图25A-25B)、RhodaSurf 6(图26A-26B))温育
0.001x密度的亚硝化单胞菌D23细胞时，亚硝酸盐积累极少。
[0463] 用吐温80、ColaLux和Stepanol WA-Extra K温育0.1x密度的细胞时观察到亚硝酸盐积累增加。用0.01％至1％(0.35mM至35mM)SDS温育0.001x密度的细胞未引起亚硝酸盐增加。如图15A和15B所示，在0.0005％至0.005％SDS的存在下温育0.001x和0.1x两种密度的细胞，在较低SDS浓度下用0.1x细胞密度，导致亚硝酸盐积累。图16A和16B示出了OD600nm相对于时间和亚硝酸盐相对于时间的曲线图中所描绘的亚硝化单胞菌D23对不同浓度SDS的反应。
[0464] 1x细胞用PolySufanate 160P表面活性剂温育不同时间段后亚硝化单胞菌D23细胞的恢复率。
[0465] 亚硝化单胞菌D23细胞在10ml含有0％、0.1％、1％和10％表面活性剂PolySufanate 160P的氨氧化细菌培养基中温育。在温育1分钟、10分钟、60分钟和1天结束时取1ml样品。样品离心，并用上清液进行亚硝酸盐测量。如图17A和17B所示，在0.1％、1％和10％PolySufanate的存在下观察到亚硝酸盐积累。离心后获得的细胞团块用氨氧化细菌培养基洗涤一次并悬浮在10ml含有50mM NH4+的新鲜培养基中。通过测量亚硝酸盐来研究亚硝化单胞菌D23细胞的恢复。如图18A-18D所示，与对照相比，在1分钟、10分钟和60分钟后实现恢复。与对照相比，在1天后实现极少恢复。
[0466] 1x细胞用Stepanol WA-Extra K(0.1-10％)表面活性剂温育不同时间段后亚硝化单胞菌D23细胞的恢复率。
[0467] 亚硝化单胞菌D23细胞用Stepanol WA-Extra K表面活性剂温育并从中恢复，如以上关于PolySufanate 160P所示进行。图19A-19B中示出了用Stepanol温育期间的亚硝酸盐积累数据。具有表面活性剂的所有样品在温育60分钟和1天，以及温育3天时未积累亚硝酸盐，水平与对照样品相同。如图20A-20D所示，在Stepanol中的样品的恢复率未达到任何显著程度。
[0468] 1x用Plantapon 611 L UP(0.1–1％)温育不同时间段后亚硝化单胞菌D23细胞的恢复率。
[0469] 亚硝化单胞菌D23细胞用Plantapon 611 L UP温育并从中恢复，如以上所示进行。如图21A-21B所示，在用1x氨氧化细菌细胞溶液温育60分钟和1天时，具有表面活性剂的样品的亚硝酸盐积累比对照的亚硝酸盐积累略少。图21C和21D示出了0.001x和0.1x氨氧化细菌细胞溶液在不同表面活性剂浓度下的温育。如图22A-22D所示，样品的恢复在温育1分钟、
10分钟和60分钟后进行，但表明与对照样品相比，在温育1天后恢复极少。
10分钟和60分钟后进行，但表明与对照样品相比，在温育1天后恢复极少。
[0470] 图23A至26B进一步示出了对于如以上所讨论的不同表面活性剂而言，包括吐温80(图23A-23B)、ColaLux LO(图24A-24B)、Plantaren 200(图25A-25B)和RhodaSurf 6(图26A-26B)，亚硝酸盐积累相对于时间的结果。
[0471] 图27是具有1x细胞密度的亚硝化单胞菌D23在各种表面活性剂中温育1分钟、10分钟、60分钟和1天之后的恢复率汇总图。恢复良好表明亚硝酸盐产量与对照同等。恢复缓慢表明相比于对照恢复率降低。恢复极慢表明相比于对照恢复率大大降低。未恢复表明未测量到或大体上未测量到亚硝酸盐产生。
[0472] 引用并入
[0473] 本文所提及的所有出版物和专利在此通过引用整体并入，正如每个单独的出版物或专利被明确地和单独地指定为通过引用并入一样。
[0474] 虽然已讨论了本公开的特定实施方案，但上述说明是阐述性的而非限制性的。在回顾本说明书和以下权利要求书后，对本领域技术人员来说，本公开的很多变化将变得明显。应该参考权利要求书以及其等效权利要求的完整范围和说明书以及此类变型，确定本发明的完整范围。
[0475] 某些实施方案是在以下权利要求书的范围内。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种对于苹果腐烂病导致衰弱树体的快速更新复壮方法 | 2020-05-17 | 981 |
| 一种口蹄疫A型结构蛋白VP1抗原表位多肽及其应用 | 2020-05-18 | 524 |
| 一种楝树细根段扦插育苗方法 | 2020-05-18 | 464 |
| 一种红心薯品种优化和筛选的繁育方法 | 2020-05-20 | 568 |
| 一种日常防治湖羊黑蹄病的药剂 | 2020-05-21 | 185 |
| 口蹄疫A型结构蛋白VP1抗体酶联免疫检测试剂盒 | 2020-05-12 | 994 |
| 用于预防、治疗和管理肾脏疾病的草药-矿物制剂及其制备方法 | 2020-05-11 | 491 |
| 一种奶牛蹄浴液及其制备方法 | 2020-05-12 | 567 |
| 衝撃波アプリケータを用いた大動脈尖弁の修復 | 2020-05-13 | 196 |
| 一种白头翁提取物在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物中的用途 | 2020-05-13 | 60 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
腐蹄病热门专利
-
3 一种脂肪酸复合物
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈