| 专利类型 | 发明公开 | 法律事件 | 公开; 实质审查; |
| 专利有效性 | 实质审查 | 当前状态 | 实质审查 |
| 申请号 | CN202210638632.5 | 申请日 | 2017-10-26 |
| 公开(公告)号 | CN114853755A | 公开(公告)日 | 2022-08-05 |
| 申请人 | 达米安制药股份公司; | 申请人类型 | 企业 |
| 发明人 | C·舒马赫; W·富尔; R·E·斯蒂尔; | 第一发明人 | C·舒马赫 |
| 权利人 | 达米安制药股份公司 | 权利人类型 | 企业 |
| 当前权利人 | 达米安制药股份公司 | 当前权利人类型 | 企业 |
| 省份 | 当前专利权人所在省份： | 城市 | 当前专利权人所在城市： |
| 具体地址 | 当前专利权人所在详细地址：瑞士瓦尔希维尔 | 邮编 | 当前专利权人邮编： |
| 主IPC国际分类 | C07D471/04 | 所有IPC国际分类 | C07D471/04 ; A61K31/437 ; A61P9/04 ; A61P5/38 ; A61P9/12 ; A61P13/12 ; A61P3/04 ; A61P9/10 |
| 专利引用数量 | 0 | 专利被引用数量 | 0 |
| 专利权利要求数量 | 15 | 专利文献类型 | A |
| 专利代理机构 | 北京市金杜律师事务所 | 专利代理人 | 陈文平; 黄海波; |
| 摘要 | 本 发明 涉及选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其药学上可接受的盐的化合物，并且特别涉及(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的 磷酸 盐 ，两者都优选为(R)形式的对映体过量高于或等于97％。此外，本发明涉及包含它们的药物组合物，它们作为药物以及在 治疗 人的 疾病 和病症的方法中的用途，所述人包括生育潜 力 女性和儿科患者，其中 醛 固 酮 过度暴露导致所述疾病或病症的有害作用，并且还涉及制备所述本发明化合物的方法。 | ||
| 权利要求 | 1.一种选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其药学上可接受的盐的化合物，其中，所述化合物的(R)形式的对映体过量高于或等于97％。 |
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| 说明书全文 | 醛固酮合酶抑制剂技术领域[0002] 本发明涉及选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其药学上可接受的盐的化合物，并且特别是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的磷酸盐，两者都优选具有高于或等于97％的对映体过量的(R)形式。此外，本发明涉及包含它们的药物组合物，它们作为药物以及在治疗疾病和病症的方法中的用途，其中醛固酮过度暴露导致包括绝经前妇女和儿科患者中所述疾病或病症的有害作用，并且还涉及制备所述本发明化合物的方法。 背景技术[0003] 除盐皮质激素受体(MR)阻断之外，醛固酮合酶(CYP11B2)抑制已成为治疗高血压、心力衰竭和肾脏疾病的新选择。目的是降低血浆和组织中的醛固酮浓度，从而降低心脏、血管和肾靶器官中的MR依赖性和MR非依赖性作用。醛固酮通过醛固酮合酶(CYP11B2)对脱氧皮质酮的酶促作用在肾上腺的带状肾小球中产生(M.Azizi等人，Nephrol Dial Transplant(2013)28：36‑43)。 [0004] 抑制醛固酮合成的最初尝试涉及使用各种类固醇生成的非选择性抑制剂，但同样是主要的安全性问题。通过发现盐酸法倔唑(CGS16949A，INN：法倔唑；US 4,617,307；US 4,728,645；US 5,098,911)，已知作为对晚期乳腺癌治疗的非甾体芳香酶抑制剂而影响醛固酮水平，开始了针对醛固酮合成的特异性抑制的靶向药理学方法的概念。随后的临床前研究表明，R‑对映体(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶氯化物是CYP11B2的有效抑制剂，而S‑对映体负责CGS16949A的强烈和有效的芳香酶(CYP19)抑制活性(J.Ménard等人，J Hypertens(2006)24：993；Fiebeler等人，Circulation(2005)111： 3078‑94)；Furet等人，J Med Chem(1993)36：1393‑1400；US 5,057,521)。 [0005] 另一方面，尽管早期发现，人体内的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶氯化物的临床开发从未报道过，既没有公开商业上可行的合成，也没有公开令人满意的手性纯度(US 4,889,861)。此外，已发现(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶氯化物具有高度吸湿性(Browne LJ等人，J Med Chem(1991)34：725‑36；Furet等人，J Med Chem(1993)36：1393‑1400；US 4,889,861)。 [0006] 由于在临床试验中对芳香酶抑制剂的广泛评价已经揭示了芳香酶抑制的许多有害后果，因而鉴于相应的(S)对映体的强力和强效芳香酶抑制活性，(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶氯化物的手性纯度特别重要。因此，系统评价和荟萃分析由30023名绝经后乳腺癌女性并用芳香化酶抑制剂治疗的7项试验组成，显示骨折和心血管疾病的发生率显著增加(Amir等人，J Natl Cancer Inst(2011)103：1299‑1309)。此外，芳香酶抑制的持续时间越长，与心血管疾病和骨折的关联性越强。此外，在绝经前妇女中，即在生育潜力女性中，暴露于芳香酶抑制可能导致生殖障碍，而在哺乳期妇女中，新生儿可能通过分泌到母乳中而暴露于芳香酶抑制化合物。此外，在儿科患者中，芳香酶抑制可能导致发育障碍。因此，需要非常高的纯度和避免这些药物的污染物和杂质，这些药物通常长期使用或甚至终生使用。 [0007] 此外，除了所需的非常高的手性纯度和避免芳香酶抑制作为不利影响，在水中的溶解度和稳定性，包括在延长的时间段内的对映体稳定性，以排除任何转化为芳香酶抑制部分，以及这种药物的可加工性，特别是适于口服施用如片剂的施用形式，是这种药物的药物制剂的进一步组合的先决条件。 发明内容[0008] 本发明人现在令人惊讶地提供了具有前所未有的手性纯度程度的式(I)的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶，即对映体过量(ee)，通常且优选其(R)形式的ee高于或等于97％，进一步优选甚至其(R)形式的ee高于或等于99％或甚至高于或等于99.5％。此外，本发明人还惊奇地发现(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的磷酸盐，特别是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐在很长一段时间内是非吸湿性和稳定的，特别是在纯度、水含量以及对映体纯度方面。此外，重要的是，本发明人惊奇地发现(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的磷酸盐，并且特别是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐是一种稳定形式的结晶。此外，本发明化合物还具有降低的和非常低的芳香酶活性，并因此具有增加的和非常高的醛固酮合酶活性，这使得本发明化合物非常适合作为人类临床开发的候选物，特别是对于绝经前妇女和儿科患者。非常低的芳香酶活性被认为甚至是临床开发和注册用作治疗与醛固酮过度暴露有关的疾病和病症的药物的先决条件，特别是对于绝经前妇女，并因此对于生育潜力女性和儿科患者。后者尤其如此，虽然芳香化酶的量和雄激素转化为雌激素的百分比在性腺外组织中可能在数量上很小，在任何组织中通常低于1％，但在激素作用方面的影响仍然可能是大量的(Blakemore和Naftolin，Physiology(2016)31：258‑269)。因此，本发明的化合物提供了终生治疗由醛固酮产生负面影响的病症的可能性，这是由于使有效的芳香酶抑制(S)‑对映体引起的污染以及负面和不需要的效应最小化所致。 [0009] 因此，在第一方面，本发明提供了一种化合物，选自式(I)的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶，以及其药学上可接受的盐，其中所述化合物的(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，并且再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％。 [0010] [0011] 特别地，在第二方面，本发明提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，通常且优选其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，并且再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于 99.8％，例如99.9％，并且令人惊讶地发现其在长时间内是非吸湿性和稳定的，因此特别是在纯度、水含量和手性纯度方面。这尤其重要，因为吸湿性通常对活性药物成分的稳定性产生负面影响。此外，重要的是，(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的磷酸盐，特别是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐是一种稳定形式的结晶。不稳定的多晶型通常会影响药效效果。 [0012] 此外，本发明在其它方面提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其磷酸盐，优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，通常且优选其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％，其用作药物并用于治疗人疾病或病症的方法，包括生育潜力女性和儿科患者，其中醛固酮过度暴露导致所述疾病或病症的有害作用，其中所述疾病或病症通常且优选选自原发性和继发性醛固酮增多症，心力衰竭，慢性肾衰竭，高血压，再狭窄，肥胖，肾病，心肌梗塞后，肾纤维化和冠心病；并且其中进一步优选地，所述疾病或病症选自原发性和继发性醛固酮过多症。进一步优选地，所述方法特别适用于人，包括优选用于有生育潜力女性和儿科患者。 [0013] 所得的本发明手性拆分和合成具有如此高的手性纯度的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶和(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐现在允许制备用于抑制醛固酮的药物组合物，通常且优选通过抑制醛固酮合成中的限速酶，即醛固酮合酶(CYP11B2)，具有尽可能少的不需要的污染芳香酶活性。对所述疾病和病症进行终身治疗的典型需要增强了本发明在减少有益醛固酮合酶抑制(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶或其药学上可接受的盐，特别是其磷酸盐，进一步优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，来自有效的芳香酶抑制(S)‑(‑)‑对映体的污染方面的优点。如实施例8、表10和11所示，本发明的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的磷酸盐，优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐通过NCI‑H295R肾上腺细胞抑制醛固酮产生(醛固酮合酶活性)和雌二醇产生(芳香酶活性)，IC50分别为8.1nM和5760nM；因此证明与芳香酶活性相比，醛固酮合酶活性的抑制超过700倍，证明了本发明的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的磷酸盐，以及(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的高度有益的安全性。 因此，本发明特别适用于人，特别是绝经前妇女和儿科患者。非常低的芳香酶活性被认为甚至是临床开发和用作醛固酮相关疾病和病症的药物的先决条件，特别是对于绝经前妇女，并因此对于生育潜力女性和儿科患者。 [0014] 本发明人已发现通过本发明的方法制备的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶，以及其磷酸盐，特别是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐对芳香酶具有前所未有的低抑制活性。因此，在另一方面，本发明提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶或其药学上可接受的盐，特别是其磷酸盐，更优选为(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其具有通过实施例8中描述的无细胞人重组芳香酶酶测定法测定芳香酶的IC50值高于或等于700nM，其中发现(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的磷酸盐，优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐抑制芳香酶活性，IC50为1640nM。 [0015] 此外，本发明人已发现通过本发明的方法制备的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶，以及其磷酸盐，优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐对醛固酮合酶表现出前所未有的高抑制活性。因此，在另一方面，本发明提供了一种化合物，选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶和其药学上可接受的盐的化合物，特别是其磷酸盐，更优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其中所述化合物在实施例8中描述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中抑制醛固酮合酶，IC50为100nM或更低。 [0016] 另一方面，本发明提供了用于制备选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其药学上可接受的盐的化合物的方法，其特征在于(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的(‑)‑O,O'‑二苯甲酰基‑L‑酒石酸盐的对映选择性结晶，并且其中非常优选地，所述药学上可接受的盐是其磷酸二氢盐。 [0017] 另一方面，本发明提供了选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,20 5‑a]吡啶及其药学上可接受的盐的化合物，其中所述化合物具有比旋光度[α]D (CH3CN：H2O 20 25 20 1：1(v/v))，[α]D (乙醇)或[α]D (乙醇)，优选[α]D (CH3CN：H2O 1：1(v/v))，至少+95°，优选至少+96°，更优选至少+97°，甚至更优选至少+98°，并且其中优选所述化合物式(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，并且其中进一步优选所述化合物在实施例8中描述的无细胞人重组芳香酶酶测定中抑制芳香酶活性，IC50为700nM或更高，优选1000nM或更高，并且更优选1500nM或更高；并且其中进一步优选地，所述化合物在实施例8中描述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中抑制醛固酮合成，IC50为100nM或更低，优选 50nM或更低，并且更优选10nM或更低。在非常优选的实施方式中，所述化合物是(R)‑(+)‑5‑ 20 (对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐并具有比旋光度[α]D(CH3CN：H2O 1：1(v/v))至少+95°，优选至少+96°，更优选至少+97°，甚至更优选至少+98°，并且其中优选所述化合物在实施例8中描述的无细胞人重组芳香酶酶测定中抑制芳香酶活性，IC50为700nM或更高，优选1000nM或更高，并且更优选1500nM或更高；并且其中进一步优选所述化合物在实施例8中描述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中抑制醛固酮合成，IC50为 100nM或更低，优选50nM或更低，并且更优选10nM或更低。 [0018] 另一方面，本发明提供了选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,20 5‑a]吡啶和其药学上可接受的盐的化合物，其中所述化合物具有比旋光度[α]D (CH3CN：H2O 20 25 20 1：1(v/v))，[α]D (乙醇)或[α]D (乙醇)，优选[α]D (CH3CN：H2O 1：1(v/v))，至少+95°，优选至少+96°，更优选至少+97°，甚至更优选至少+98°，并且其中优选所述化合物式(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，并且其中进一步优选所述化合物对醛固酮合酶相比于芳香酶具有选择性为50或更高，优选100或更高，最优选700或更高；其中所述选择性由抑制芳香酶和醛固酮合酶的IC50值之比确定；其中，在实施例8中描述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中，优选同时测量抑制芳香酶和醛固酮合酶两者的IC50值。在非常优选的实施方式中，所述化合物是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1, 20 5‑a]吡啶磷酸二氢盐，具有比旋光度[α]D (CH3CN：H2O 1：1(v/v))。至少+95°，优选至少+ 96°，更优选至少+97°，甚至更优选至少+98°，并且其中优选所述化合物对醛固酮合酶相比于芳香酶具有选择性为50或更高，优选100或更多，最优选700或更多；其中所述选择性由抑制芳香酶和醛固酮合酶的IC50值之比确定；其中，在实施例8中描述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中，优选同时测量抑制醛固酮合酶和芳香酶两者的IC50值。 [0019] 另一方面，本发明提供了选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶和其药学上可接受的盐的化合物。在实施例8中描述的无细胞人重组芳香酶酶测定中，所述化合物抑制芳香酶活性，IC50为700nM或更高，优选1000nM或更高，更优选1500nM或更高；其中优选所述化合物的对映体过量(R)形式高于或等于97％，并且其中进一步优选所述化合物为(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6，7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐。 [0020] 另一方面，本发明提供了选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶和其药学上可接受的盐的化合物，其中所述化合物在实施例8中所述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中抑制醛固酮合酶，IC50为100nM或更低，优选50nM或更低，更优选10nM或更低；其中优选所述化合物(R)形式的对映体过量高于或等于97％，并且其中进一步优选所述化合物为(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐。 [0021] 另一方面，本发明提供了选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶和其药学上可接受的盐的化合物，其中所述化合物对醛固酮合酶相比于芳香酶具有选择性为50或更高，优选100或更高，最优选700或更高；其中所述选择性由抑制芳香酶和醛固酮合酶的IC50值之比确定；其中，在实施例8中描述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中，优选同时测量抑制醛固酮合酶和芳香酶两者的IC50值；其中优选所述化合物的(R)形式的对映体过量高于或等于97％，并且其中进一步优选所述化合物为(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5, 6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐。 附图说明 [0022] 图1：(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的X射线粉末衍射(XRPD)衍射图。衍射图的Y轴以每秒计数记录强度，而X轴记录度数2θ。 [0023] 图2：(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的热重分析(TGA)/差示扫描量热法(DSC)。上图显示了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的TGA热分析图。下图显示了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的DSC热分析图。热分析图表明，在225℃(上图)的温度下，质量损失为1.4％，超过189℃的熔点(下图)。热分析图显示熔点的起点为188℃，峰值为189℃。 [0024] 图3：通过高压液相色谱(HPLC)测定的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的手性纯度。色谱图显示R‑(+)对映体的对映体过量(保留时间14.459分钟)高于99.9％ee(S‑(‑)‑对映体的保留时间：9.814分钟)。 [0026] 动态等温线图显示质量增加，吸湿性分别高达1％。 [0027] 图5：(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的动态蒸汽吸附(DVS)质量变化(虚线曲线：质量的相对变化；虚线曲线：目标相对湿度(RH))。质量图表明可逆水吸收率高达1％。 [0028] 图6：DVS循环之前(上图)和之后(下图)测量的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的X射线粉末衍射(XRPD)衍射图。叠加的衍射图表明DVS处理不会分别影响反射图案的晶体形式。 [0029] 图7：通过单晶X射线分析测定的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的晶体结构和绝对构型。单次X射线测定证实了碳5上的(R)‑(+)‑构型。 具体实施方式[0030] 除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。 [0031] 如果没有另外说明，术语“约”在使用时特别意味着±10％，±5％或±3％(分别参考给定的数值)。在每个本发明实施方式中，可以删除“约”。 [0032] 如本文所用的术语“手性纯度”由通过手性HPLC测定的对映体过量(ee)定义(详细参见实施例)并通过以下等式计算： [0033] ee＝(AR‑AS)/(AR+AS)×100％， [0034] 其中AR是样品溶液的HPLC色谱图中(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶峰的面积，AS是样品溶液的HPLC色谱图中(S)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶峰的面积。 [0035] 如本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的并且具有母体化合物的所需药理学活性的盐。这些盐包括与本领域技术人员已知的无机酸或有机酸形成的酸加成盐(P.Heinrich Stahl(编辑)，Camille G.Wermuth(编辑)；Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use，第2次修订版，2011年3月，Wiley‑VCH，ISBN：978‑3‑90639‑051‑2)。本发明中特别优选的药学上可接受的盐是与磷酸形成的酸加成盐，即磷酸二氢盐。 [0036] 本申请中使用的术语“磷酸盐”是指包含质子化形式的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶，即(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1, 5‑a]吡啶阳离子，还包含衍生自磷酸的阴离子且其中所述阴离子通常且优选选自磷酸二氢‑ 2‑ 盐[H2PO4]和磷酸氢盐[HPO4] 的化合物。优选地，本申请中使用的术语“磷酸盐”是指式(I)‑ 的磷酸二氢盐，即其中式(I)的化合物质子化一次且抗衡离子为[H2PO4] (参见图7为单晶X射线结构)，因此，单质子化(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶与磷酸二氢盐的化学计量比为1：1。后一种化合物在本文中称为(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5, 6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐。 [0037] 术语“芳香酶”是指CYP19，细胞色素P450超家族的成员，也称为雌激素合酶。 [0038] 术语“醛固酮合酶”是指类固醇羟化酶细胞色素P450酶CYP11B2。 [0040] 本文中可互换使用并且与本发明化合物相关的术语“结晶”和“结晶纯度”是指具有规则重复的分子排列或外表面平面的固体。优选地，当提及(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐时，术语“结晶”和“结晶纯度”包含(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐是指结晶形式I，其中所述结晶形式I存在总重量的至少60％，优选总重量的至少70％，进一步优选总重量的至少80％，再进一步优选总重量的至少90％，并且再进一步优选总重量的至少95％。其它组分可以是例如无定形(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐。结晶纯度可通过本文所述的XRPD测定。因此，在优选实施方式中，可以使用以下装置，参数和测量条件来确定所述XRPD： [0041] 仪器：Bruker AXS D2 PHASER；照射：CuKα(30kV，10mA)；扫描范围：5至45°(2θ值)，样品旋转5rpm，0.5s/步，0.010°/步，3.0mm探测器狭缝。 [0042] 本文所用的术语“结晶形式I”是指(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的X射线粉末衍射图案包含使用CuKα辐射测得的以下2θ值：19.504； 21.919和24.159，其中每个峰可以变化±1度或优选变化±0.5度，或进一步优选变化±0.2度。在优选实施方式中，本文所用的“结晶形式I”是指(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐具有包含使用CuKα辐射测得的以下2θ值的X‑射线粉末衍射图案：19.504；21.919和24.159，其中每个峰可以变化±1度或优选变化±0.5度，或进一步优选变化±0.2度。在另一个优选实施方式中，本文所用的“结晶形式I”是指(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐具有包含使用CuKα辐射测得的以下2θ值的X‑射线粉末衍射图：19.504；21.919和24.159，其中每个峰可以变化±0.5度，或优选变化±0.2度。在另一个优选的实施方式中，本文所用的术语“结晶形式I”是指(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐具有包含使用CuKα辐射测得的以下2θ值的X‑射线粉末衍射图：19.504；21.919和24.159，其中每个峰值可以变化±0.2度。在另一个优选的实施方式中，本文所用的“结晶形式I”是指(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐具有包含使用CuKα辐射测得的以下2θ值的X‑射线粉末衍射图： 19.504；21.919；24.159；16.003；26.101；27.168；27.542和29.029，其中每个峰可以变化± 1度或优选变化±0.5度，或进一步优选变化±0.2度。在另一个优选的实施方式中，本文所用的“结晶形式I”是指(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐具有包含使用CuKα辐射测得的以下2θ值的X‑射线粉末衍射图：19.504；21.919；24.159； 16.003；26.101；27.168；27.542和29.029，其中每个峰可以变化±0.5，或优选地±0.2度。 [0043] 本文所用的术语“无水”是指含有少于3％，优选少于2.5％，更优选少于2％，更优选少于1.5％，最优选少于1％化合水的结晶形式。 [0044] 术语“非吸湿性”是指本发明的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的药学上可接受的盐，特别是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的磷酸盐，更优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，当它们以粉末或颗粒存在时，能够承受暴露于环境中的水蒸气大气24小时，数周，数月或数年作为商业用途的前提，而不会产生聚集，团聚，吸水或潮解的不利现象的能力。通常且优选地，术语“非吸湿性”如本文所用且是指(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5]‑a]吡啶的磷酸盐，并且优选在提及(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7, 8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐时，意指在正常环境条件下，通常且优选在20‑25℃和相对湿度在20％和80％之间，优选在30％和60％之间开放储存时，它保持其稠度作为(优选自由流动的)粉末或颗粒至少一天，优选一周，进一步优选一个月，再进一步优选至少3个月，再进一步优选至少6个月，再进一步优选或至少1年或更长时间，特别是以满足监管ICH标准。进一步优选地，术语“非吸湿性”如本文所用且是指(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7, 8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的磷酸盐，并且优选在提及(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐时，意指在正常环境条件下，通常且优选在20‑25℃，相对湿度为20％至80％，优选30％至60％开放储存24小时时，通常且优选如实施例5中测定，它显示重量增加小于5％，优选小于3％，进一步优选小于2％，再进一步优选小于1％。再进一步优选地，术语“非吸湿性”如本文所用且是指(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的磷酸盐，并且优选在提及(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐时，意指在正常环境条件下，通常且优选在室温下，最优选在 20‑25℃，相对湿度在20％和80％之间，优选在30％和60％之间开放储存24小时时，通常且优选如实施例5中测定，所述磷酸盐，优选所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的吸水率小于5％ [0045] (wt/wt)，优选小于3％(wt/wt)，进一步优选小于2％(wt/wt)，再进一步优选小于1％(wt/wt)。或者优选的是，术语“非吸湿性”如本文所用且是指(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑ 5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的磷酸盐，并且优选在提及(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5, 6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐时，意指在正常环境条件下，通常且优选在25℃和相对湿度为约60％之间开放储存24小时，优选一个月，进一步优选至少3个月，再进一步优选至少6个月，再进一步优选或至少1年时，通常且优选如实施例9中测定，水含量小于 0.5w/w％，优选小于0.4w/w％，更优选等于或小于0.3w/w％。 [0048] [0049] 如本文所用的术语“生育潜力女性”是指能够怀孕的绝经前女性。 [0050] 本文所用的术语“儿科患者”是指0‑18岁，优选0‑16岁的患者，包括早产儿和足月新生儿(0‑27天)，婴儿和幼儿(28天至23个月)，儿童(2‑11岁)和青少年(2至16/18岁)。 [0051] 因此，在一个实施方式中，提供了选自式(I)的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其药学上可接受的盐，特别是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6, 7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的化合物，其具有溶解性水量超过50％v/v。 [0052] 表达“IC50”是指本领域公知的半数最大抑制浓度。芳香酶的IC50由实施例8中所述的无细胞的人重组芳香测定法测定。醛固酮合酶的IC50由实施例8中描述的人NCI‑H295R细胞测定法测定。当提及“对醛固酮合酶相比于芳香酶的选择性”，是指以下比率： [0053] [0054] 其中，醛固酮合酶的IC50和芳香酶的IC50两者均由实施例8中描述的人NCI‑H295R细胞测定法测定，优选同时测定。 [0055] 如上所述，(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的磷酸盐，优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，通过NCI‑H295R肾上腺细胞抑制醛固酮的产生(醛固酮合酶活性)和雌二醇的产生(芳香酶活性)，IC50分别为8.1nM和5760nM(实施例8，表10和11)；因此证明了醛固酮合酶相对于芳香酶的选择性约为700。 [0056] 如本文所用，术语“病症”或“疾病”是指功能的任何紊乱或异常；病态的身体或精神状态。参见Dorland的Illustrated Medical Dictionary(VSIB.Saunders Co.，第27版，1988)。 [0057] 如本文所用，表述“醛固酮过度暴露导致所述疾病或病症的有害作用的疾病或病症”优选是指由醛固酮合酶的异常或不适当活性/表达引起的疾病和病症以及与醛固酮合酶的异常或不适当表达相关的生物活性或过程。由醛固酮合酶的异常或不适当活性/表达引起的疾病或病症的典型实例是原发性和继发性醛固酮增多症，心力衰竭，慢性肾衰竭，高血压，再狭窄，肥胖，肾病，心肌梗塞后，肾纤维化和冠状动脉心脏病。 [0058] 如本文所用，术语“醛固酮合酶的异常活性”是指醛固酮合酶的活性，其不同于野生型或天然基因或蛋白质的活性，或者不同于健康受试者中的基因或蛋白质的活性。异常活性可能比正常活性更强或更弱。 [0059] 如本文所用，术语“醛固酮合酶的不适当活性”是指野生型或天然基因或蛋白质的醛固酮合酶活性或健康受试者中基因或蛋白质的活性，其在健康受试者中被认为是合适的，但同样的所述活性对患病受试者被认为是不适合的，即所述活性对于患病受试者太强或太弱。 [0060] 如本文所用，术语“治疗”任何疾病或病症是指改善疾病或病症(即阻止或减少疾病的发展或其至少一种临床症状)。 [0061] 如本文所用，术语“比旋光度”是指相应化合物在溶剂中的溶液的比旋光度，其中所述溶剂通常且优选乙醇或CH3CN：H2O 1：1(v/v)，进一步优选CH3CN：H2O 1：1(v/v)，并且其中所述比旋光度通过下式计算：100×α/(l×c)，其中α＝观察到的旋转度数；l＝以分米为单位的单元路径长度；c＝以克/100ml为单位的浓度，其中测量在室温下在钠D线(即20 25 589.3nm)下进行，通常且优选在20℃或25℃下进行。术语“比旋光度”缩写为[α]D 或[α]D 。 20 25 通常，对于[α]D 或[α]D ，本文指示旋转符号(+或‑)及其实际值，或者通过以度(°)表示的 20 25 其旋转符号(+或‑)及其实际值提供[α]D 或[α]D 。为清楚起见，通常省略如上确定的完整‑1 3 ‑1 单位(deg dm cm g )。 [0062] 在第一方面，本发明提供了选自式(I)的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其药学上可接受的盐的化合物，其中(R)形式的对映体过量(ee)高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，并且更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％。 [0063] 特别地，在第二方面，本发明提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，通常且优选其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％,并且令人惊讶地发现其在长时间内是非吸湿性和稳定的，特别是在纯度、水含量和手性纯度方面。此外，重要的是，(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的磷酸盐，特别是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐是一种稳定形式的结晶，通常且优选为所述结晶形式I. [0064] 通过动态蒸汽吸附研究测量的本发明的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的吸水量在湿度大于90％时小于1％(图4)，另外水的吸收是可逆的(图5)。此外，加热至225℃的温度下的质量损失仅为1.4％(图2)。总之，本发明的磷酸盐，优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐是不吸湿的。因此，本发明的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐可以在常规药物容器中在环境条件下大量储存。此外，已发现本发明的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐具有高度结晶性和高结晶纯度水平。此外，并且令人惊讶地，本发明的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐具有所述的特殊手性纯度，以一种单晶结构存在，并且在碳5(其手性中心)上具有明确的X射线结构和R‑(+)‑的绝对构型(图1和表1；图7)。 [0065] 多种结晶形式‑所谓的多晶型‑使药物制剂的制造复杂化，因为这种形式可以相互转化，需要额外的规定来防止这种相互转化。不同的多晶型物在药物制剂的配方中表现不同；它们可以影响微粉化，片剂形成，溶解度和生物利用度。由于即使是最小的化合物也可能在固体晶体中有数十万种可能的分子排列，预测晶体结构及其性质是巨大的科学挑战，并且不可能事先了解给定分子是否会发生多态性。因此，当寻求提供安全有效的药物形式时，多态性是严重的问题。尽管如此，本发明人已发现(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的结晶形式I是物理稳定的，即未观察到多态性(实施例6，表8；实施例7，表9和图6，实施例9)，并且可以可预测且可靠地获得(实施例3，步骤4)。此外，(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐(图1和表1)的XRPD分析表明该物质基本上不含无定形物质(即无法检测到无定形物质)。如果没有另外描述，则进行XRPD，如实施例部分中所述。 [0066] 因此，在一个实施方式中，本发明提供了结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，优选无水结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，更优选无水结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％。 [0067] (R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐(结晶形式I)的晶体通过XRPD表征(图1)，其中它们的X射线粉末图案的角度，晶格间距(d值)和相对线强度(强度)如下(表1)。 [0068] 表1.(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐结晶形式I的XRPD峰列表 [0069] [0070] [0071] [0072] 在一个实施方式中，提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的结晶形式I，其特征在于：X射线粉末衍射图案包括如实施例部分中所述测量的以下2θ值：19.504；21.919和24.159。在一个实施方式中，提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的结晶形式I，其特征在于：X射线粉末衍射图案包括如实施例部分中所述测量的以下2θ值：19.504；21.919和24.159，其中每个峰可以变化±1度或优选变化±0.5度，或进一步优选变化±0.2度。在一个优选实施方式中，所述X射线粉末衍射图还包含以下2θ值：16.003；26.101；27.168；27.542和29.029。在一个优选实施方式中，所述X射线粉末衍射图案还包含以下2θ值：16.003；26.101；27.168；27.542和29.029，其中每个峰可以变化±1度或优选变化±0.5度，或进一步优选变化±0.2度。在一个特别优选的实施方式中，提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的结晶形式I，其特征在于X射线粉末衍射图案包含至少一种，更优选2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16种或以下全部2θ值：6.023129；9.969034； 11.26224；11.22848；11.96566；12.77761；13.79347；14.39314；15.3394；16.00317； 16.27337；17.07502；17.27593；17.9904；18.38238；18.65471；18.96096；19.14281； 19.504；20.01265；20.58808；20.43302；20.72112；21.12683；21.91906；22.59202； 24.44788；24.15917；24.48119；25.70071；26.10094；26.58127；27.16767；27.54165； 27.71408；28.27603；28.09725；28.54909；29.02939；29.71314；30.07578；30.68808； 30.92867；31.6379；32.27005；32.79806；33.20638；33.23304；33.65808；34.41793； 34.35512；35.02142；35.06671；35.68978；35.93622；36.50305；36.56591；36.92023； 37.14021；39.60815；37.89624和40.22464。在另一个特别优选的实施方式中，提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的结晶形式I，其特征在于X射线粉末衍射图案包含至少一种，更优选2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16种或以下全部2θ值：6.023129；9.969034；11.26224；11.22848；11.96566；12.77761； 13.79347；14.39314；15.3394；16.00317；16.27337；17.07502；17.27593；17.9904； 18.38238；18.65471；18.96096；19.14281；19.504；20.01265；20.58808；20.43302； 20.72112；21.12683；21.91906；22.59202；24.44788；24.15917；24.48119；25.70071； 26.10094；26.58127；27.16767；27.54165；27.71408；28.27603；28.09725；28.54909； 29.02939；29.71314；30.07578；30.68808；30.92867；31.6379；32.27005；32.79806； 33.20638；33.23304；33.65808；34.41793；34.35512；35.02142；35.06671；35.68978； 35.93622；36.50305；36.56591；36.92023；37.14021；39.60815；37.89624和40.22464，其中每个峰可以变化±1度或优选变化±0.5度，或进一步优选变化±0.2度。 [0073] 在另一个特别优选的实施方式中，提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的结晶形式I，其特征在于X射线粉末衍射图案包含至少一种，更优选2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16种或以下全部2θ值：6.023129；9.969034；11.26224；11.22848；11.96566；12.77761；13.79347；14.39314；15.3394； 16.00317；16.27337；17.07502；17.27593；17.9904；18.38238；18.65471；18.96096； 19.14281；19.504；20.01265；20.58808；20.43302；20.72112；21.12683；21.91906； 22.59202；24.44788；24.15917；24.48119；25.70071；26.10094；26.58127；27.16767； 27.54165；27.71408；28.27603；28.09725；28.54909；29.02939；29.71314；30.07578； 30.68808；30.92867；31.6379；32.27005；32.79806；33.20638；33.23304；33.65808； 34.41793；34.35512；35.02142；35.06671；35.68978；35.93622；36.50305；36.56591； 36.92023；37.14021；39.60815；37.89624和40.22464，其中每个峰可以变化±0.5，或优选地±0.2度。在一个实施方式中，XRPD衍射图中结晶形式I的三个最大峰的相对强度为1比 0.85比0.55，淘宝是1比0.9比0.6，更特别是1比0.95比0.65，例如1比0.97比0.68(可通过XRPD图中每个峰的积分获得)。在一个特定实施方式中，分别是最大峰值的2‑theta(θ)值约为21.919，第二大峰值的2‑theta(θ)值约为19.504，并且第三大峰值的2‑theta(θ)值约为 24.159。在另一特定实施方式中，分别是最大峰值的2‑theta(θ)值约为21.919±0.5度，或优选±0.2度，并且第二大峰值的2‑theta(θ)值约为19.504±0.5度，或优选±0.2度，并且第三大峰值的2‑theta(θ)值约为24.159±0.5度，或优选±0.2度。优选的是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，显示如图1所示的XRPD衍射图。 [0074] 进一步令人惊讶地发现，(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐(结晶形式I)具有通过DSC测量的单一尖锐和高的熔点189℃(图2)，再次表明高物理稳定性，并且对于药物制剂、储存和加工成药物制剂进一步非常有益。因此，在一个实施方式中，提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其熔点等于184℃或193℃或者在其之间，并且其中优选地，所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的熔点等于188℃或190℃或者在其之间，通常且优选使用热重分析/差示扫描量热法(TGA/DSC)。在另一个实施方式中，提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其熔点为184℃，185℃，186℃，187℃，188℃，189℃，190℃，191℃，192℃，193℃或194℃，最优选189℃。在进一步的实施方式中，提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其熔点为189±5℃，189±2℃，189±1℃或189±0.5℃。如果没有另外说明，本文中的熔融温度通过如实施例部分中所述的TGA/DSC获得。 [0075] 此外，本发明人已发现(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐(结晶形式I)在许多非水溶剂(实施例6，表7)中的溶解度低，因此它们是盐的抗溶剂，因此可以实现良好的沉淀，从而获得良好的产率和良好的纯度。另一方面，结晶形式I极易溶于水(实施例6，表8)，这有利于提供口服或肠胃外制剂。 [0076] 发现本文所述的且因此ee>99.9％的由对映体纯的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶游离碱制备的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪 20 唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐具有比旋光度([α]D )为+98.1°(CH3CN：H2O 1：1(v/v)；实施例 3)。 [0077] 因此，在本发明的一个非常优选的实施方式和方面，提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯20 基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其具有比旋光度([α]D )(CH3CN：H2O 1： 1(v/v))为至少+94°，优选至少+95°，更优选至少+96°，更优选至少+97°，甚至更优选至少+ 98°。 [0078] 在另一个实施方式中，本发明提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪25 唑并[1,5‑a]吡啶，其具有比旋光度[α]D (乙醇)为至少+120°，优选至少+121°，进一步优选至少+122°，再进一步优选至少+123°，再进一步优选至少+124°，再进一步优选至少+125°，再进一步优选至少+126°，再进一步优选至少+127°。在另一个实施方式中，本发明提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶氯化物，其具有比旋光度 20 [α]D (乙醇)为至少+95°，优选至少+96°，进一步优选至少+97°，更优选至少+98°，甚至更优选至少+99°，进一步优选至少+100°，更优选至少+101°，甚至更优选至少+102°，再更优选至少+103°，甚至更优选至少+104°。 [0079] 在一个非常优选的方面，本发明提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，优选结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，更优选无水结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐。 [0080] 在另一个非常优选的实施方式和方面，本发明提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，优选结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7, 8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，更优选无水结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7, 8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于 98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％。 [0081] 在另一个非常优选的实施方式和方面，本发明提供了结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，优选无水结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％，并且其中优选地，所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的结晶形式I，其中所述结晶形式I具有包含使用CuKα辐射测量的以下2θ值的X‑射线粉末衍射图案：19.504；21.919和24.159，其中每个峰可以变化±0.5度，或优选变化±0.2度。 [0082] 在另一个非常优选的实施方式和方面，本发明提供了结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，优选无水结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％，并且其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的结晶形式I，其中所述晶形I具有包含使用CuKα辐射测量的以下2θ值的X射线粉末衍射(XRPD)图案：19.504；21.919和24.159，其中每个峰可以变化±0.5度，或优选变化± 0.2度，其中优选地，所述XRPD可以使用以下装置、参数和测量条件来确定：仪器：Bruker AXS D2 PHASER；照射：CuKα(30kV，10mA)；扫描范围：5至45°(2θ值)，样品旋转5rpm，0.5s/步，0.010°/步，3.0mm探测器狭缝。 [0083] 在另一个非常优选的实施方式和方面，本发明提供了结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，优选无水结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％，并且其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的结晶形式I，其中所述结晶形式I具有包含使用CuKα辐射测量的以下2θ值的X‑射线粉末衍射图案：19.504；21.919和24.159，其中每个峰可以变化±0.5度，或优选变化±0.2度，所述XRPD可以使用以下装置、参数和测量条件来确定：仪器：Bruker AXS D2PHASER；照射：CuKα(30kV，10mA)；扫描范围：5至45°(2θ值)，样品旋转5rpm，0.5s/步，0.010°/步，3.0mm探测器狭缝。 [0084] 进一步已发现(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐是无水的(实施例3和5)。因此，在一个实施方式中，本发明提供了无水(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐。在一个特别优选的实施方式中，本发明提供了无水(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％。 [0085] 在另一个特别优选的实施方式中，本发明提供了无水(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐结晶形式I。 [0086] 在另一个特别优选的实施方式中，本发明提供了无水(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐如本文所定义的结晶形式I，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，并且再更优选高于或等于 99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％。 [0087] 如上所述，本发明人惊奇地已发现通过本发明的方法制备的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶(实施例3)，以及其磷酸盐，优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐对芳香酶具有前所未有的低抑制活性(实施例8)，当在治疗与增强的醛固酮合酶活性和/或增强的醛固酮水平相关的疾病或病症的方法中使用本发明化合物时，这对于避免与芳香酶抑制相关的副作用是至关重要的，特别是用于生育潜力女性和儿科患者。因此，在另一方面，本发明提供了选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶和其药学上可接受的盐的化合物，特别是其磷酸盐，进一步优选为(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其中在实施例8中描述的无细胞人重组芳香酶酶测定中，所述化合物抑制芳香酶活性，其IC50为700nM或更高，优选750nM或更高，更优选800nM或更高，更优选850nM或更高，更优选900nM或更高，更优选950nM或更高，更优选1000nM或更高，更优选1050nM或更高，更优选1100nM或更高，更优选1150nM或更高，更优选1200nM或更高，更优选1250nM或更高，更优选1300nM或更高，更优选1350nM或更高，更优选1400nM或更高，更优选1450nM或更高，更优选1500nM或更高，更优选1550nM或更高，最优选至少1600nM，例如1610nM或1620nM或1630nM或1640nM或至少1650nM。 [0088] 在又一方面，本发明提供了选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶和其药学上可接受的盐，特别是其磷酸盐的化合物，进一步优选为(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其中在实施例8中所述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中，所述化合物抑制醛固酮合酶，IC50为100nM或更低。在一个实施方式中，在实施例8中描述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中，本发明化合物抑制醛固酮合酶，IC50为90nM或更低，80nM或更低，70nM或更低，60nM或更低，50nM或更低，40nM或更低，35nM或更低，30nM或更低，25nM或更低，或20nM或更低；特别是15nM或更低，例如15nM，14nM， 13nM，12nM，11nM，10nM，9nM，8nM，7nM，6nM，5nM，4nM，3nM，2nM或1nM或更低。在优选的实施方式中，在实施例8中描述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中，本发明化合物抑制醛固酮合酶，IC50为10nM或更低。 [0089] 在又一方面，本发明提供了选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶和其药学上可接受的盐的化合物，其中所述化合物对醛固酮合酶相比于芳香酶的选择性为30或更高，优选50或更高，更优选100或更高，更优选150或更高，更优选200或更高，更优选250或更高，更优选300或更高，更优选350或更高，更优选400或更高，更优选450或更高，更优选500或更高，更优选550或更高，更优选600或更高，更优选650或更高，最优选700或更高，其中所述选择性由抑制芳香酶和醛固酮合酶的IC50值之比确定；其中，在实施例8中描述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中，测量抑制醛固酮合酶和芳香酶两者的IC50值，优选同时测量。 [0090] 因此，在又一个非常优选的实施方式和方面，本发明提供了结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，优选无水结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％，其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的结晶形式I，其中所述晶形I具有包含使用CuKα辐射测量的以下2θ值的X射线粉末衍射图案：19.504；21.919和24.159，其中每个峰可以变化±0.5度，或优选变化±0.2度，所述XRPD通常并且优选地使用以下装置，参数和测量条件来确定：仪器：Bruker AXS D2PHASER；照射：CuKα(30kV，10mA)；扫描范围：5至45°(2θ值)，样品旋转5rpm，0.5s/步，0.010°/步， 3.0mm检测器狭缝，并且其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐在实施例8中描述的无细胞人重组芳香酶酶测定中抑制芳香酶活性，IC50为 700nM或更高，优选750nM或更高，更优选800nM或更高，更优选850nM或更高，更优选900nM或更高，更优选950nM或更高，更优选1000nM或更高，更优选1050nM或更高，更优选1100nM或更高，更优选1150nM或更高，更优选1200nM或更高，更优选1250nM或更高，更优选1300nM或更高，更优选1350nM或更高，更优选1400nM或更高，更优选1450nM或更高，更优选1500nM或更高，更优选1550nM或更高，最优选至少1600nM，例如1610nM或1620nM或1630nM或1640nM或至少1650nM。 [0091] 在另一个非常优选的实施方式和方面，本发明提供了结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，优选无水结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％，其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的结晶形式I，其中所述晶形I具有包含使用CuKα辐射测量的以下2θ值的X射线粉末衍射图案：19.504；21.919和24.159，其中每个峰可以变化±0.5度，或优选变化±0.2度，所述XRPD通常并且优选地使用以下装置，参数和测量条件来确定：仪器：Bruker AXS D2PHASER；照射：CuKα(30kV，10mA)；扫描范围：5至45°(2θ值)，样品旋转5rpm，0.5s/步，0.010°/步， 3.0mm检测器狭缝，并且其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐在实施例8中描述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中抑制醛固酮合酶，IC50为 90nM或更低，80nM或更低，70nM或更低，60nM或更低，50nM或更低，40nM或更低，35nM或更低， 30nM或更低，25nM或更低，或20nM或更低；特别是15nM或更小，例如15nM，14nM，13nM，12nM， 11nM，10nM，9nM，8nM，7nM，6nM，5nM，4nM，3nM，2nM或1nM或更低。在优选的实施方式中，本发明的化合物在实施例8中描述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中抑制醛固酮合酶，IC50为10nM或更低。 [0092] 在另一个非常优选的实施方式和方面，本发明提供了结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，优选无水结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％，其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐是(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的结晶形式I，其中所述晶形I具有包含使用CuKα辐射测量的以下2θ值的X射线粉末衍射图案：19.504；21.919和24.159，其中每个峰可以变化±0.5度，或优选变化±0.2度，所述XRPD通常并且优选地使用以下装置，参数和测量条件来确定：仪器：Bruker AXS D2PHASER；照射：CuKα(30kV，10mA)；扫描范围：5至45°(2θ值)，样品旋转5rpm，0.5s/步，0.010°/步， 3.0mm检测器狭缝，并且其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐对醛固酮合酶相比于芳香酶的选择性为30或更高，优选50或更高，更优选 100或更高，更优选150或更高，更优选200或更高，更优选250或更高，更优选300或更高，更优选350或更高，更优选400或更高，更优选450或更高，更优选500或更高，更优选550或更高，更多优选600或更高，更优选650或更高，最优选700或更高，其中所述选择性由抑制芳香酶和醛固酮合酶的IC50值的比值确定；并且其中，在实施例8中描述的NCI‑H295R肾上腺细胞测定中，优选同时测量抑制醛固酮合酶和芳香酶两者的IC50值。 [0093] 在一个方面，本发明提供了用作药物的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％。 [0094] 另一方面，本发明提供了用作药物的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其中优选所述磷酸二氢盐的(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再次更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％。 [0095] 本发明进一步提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其磷酸盐，优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，通常且优选其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％，其用于治疗人疾病或病症的方法，包括生育潜力女性和儿科患者，其中醛固酮过度暴露导致所述疾病或病症的有害作用，通常且优选地，其中所述疾病或病症选自原发性和继发性醛固酮增多症，心力衰竭，慢性肾衰竭，高血压，再狭窄，肥胖，肾病，心肌梗塞后，肾纤维化和冠心病。 [0096] 此外，本发明提供了(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其磷酸盐，优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，通常且优选其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％，其用于在疾病或病症的治疗方法，其中所述疾病或病症选自初级和次级醛固酮过多症，心脏衰竭，慢性肾功能衰竭，高血压，再狭窄，肥胖症，肾病，心肌梗塞后，肾功能选择使用纤维化和冠心病。 进一步优选地，所述方法特别适用于人，包括优选用于生育潜力女性和儿科患者。 [0097] 在另一个非常优选的实施方式和方面，本发明提供了结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，优选无水结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％，其用于治疗人的疾病或病症的方法，其中所述疾病或病症选自初级和次级醛固酮过多症，心脏衰竭，慢性肾功能衰竭，高血压，再狭窄，肥胖症，肾病，心肌梗塞后选择，肾纤维化和冠心病，其中优选所述人是生育潜力女性或儿科患者。 [0098] 在另一个非常优选的实施方式和方面，本发明提供了结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，优选无水结晶(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％，其用于治疗人疾病或病症的方法，其中所述疾病或病症选自原发性和继发性醛固酮增多症，心力衰竭，慢性肾衰竭，高血压，再狭窄，肥胖，肾病，心肌梗塞后，肾纤维化和冠心病，其中优选所述人是生育潜力女性或儿科患者，并且其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐在实施例8中描述的无细胞人重组芳香酶酶测定中抑制芳香酶活性，IC50为700nM或更高，优选750nM或更高，更优选 800nM或高，更优选850nM或更高，更优选900nM或更高，更优选950nM或更高，更优选1000nM或更高，更优选1050nM或更高，更优选1100nM或更高，更优选1150nM或更高，更优选1200nM或更高，更优选1200nM或更高，更优选1250nM或更高，更优选1300nM或更高，更优选1350nM或更高，更优选1400nM或更高，更优选1450nM或更高，更优选1500nM或更高，更优选1550nM或更高，最优选至少1600nM，例如1610nM或1620nM或1630nM或1640nM或至少1650nM。 [0099] 另一方面，本发明提供了制备选自(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其药学上可接受的盐的化合物的方法，其中非常优选地，所述药学上可接受的盐是其磷酸盐，并且进一步优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐。本发明的方法包括以下步骤：(i)使外消旋5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶与(‑)‑O,O'‑酰化L‑酒石酸，特别是(‑)‑O,O'‑二苯甲酰基‑L‑酒石酸反应，以形成非对映异构体(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶二苯甲酰基‑L‑酒石酸盐；(ii)使步骤i中得到的酒石酸盐至少重结晶一次；以及(iii)通过向步骤ii中得到的所述酒石酸盐溶液中加入碱，释放出游离碱(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶；以及任选地(iv)通过使所述游离碱与酸，优选与磷酸(H3PO4)反应形成药学上可接受的盐。在一个实施方式中，所述(i)使外消旋5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶与(‑)‑O,O'‑酰化L‑酒石酸特别是(‑)‑O,O'‑二苯甲酰基‑L‑酒石酸反应酸以形成非对映异构体(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶二苯甲酰基‑L‑酒石酸盐在醇溶液中，优选在乙醇溶液中，在低于约50℃，优选低于约45℃，更优选低于约40℃的温度下进行。在一个实施方式中，所述(ii)使步骤(i)中得到的酒石酸盐至少重结晶一次在水性醇溶液中进行，优选在水性乙醇溶液中进行，其中优选水：乙醇的比例为约2.4：约10。 [0100] 在一个实施方式中，用于制备选自本发明的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶和药学上可接受的盐的化合物的方法不包括通过手性制备型HPLC手性拆分5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶(法倔唑)的步骤，其中优选用于制备选自本发明的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其药学上可接受的盐的化合物的方法不包括通过手性HPLC手性拆分5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶(法倔唑)的步骤。通过手性HPLC手性拆分的这种步骤通常可包括：(i)低容量柱上的重复手性HPLC或(ii)高容量柱上的制备型HPLC。 [0101] 在优选的实施方式中，本发明的方法得到(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其药学上可接受的盐，特别是其磷酸盐，进一步优选为(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其(R)形式的ee高于或等于97％，优选高于或等于98％，更优选高于或等于99％，再更优选高于或等于99.5％，再更优选高于或等于99.8％，例如99.9％。 [0102] 在另一个优选的实施方式中，本发明的方法得到(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其药学上可接受的盐，特别是其磷酸盐，进一步优选为(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，其中所述(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其药学上可接受的盐在实施例8中描述的无细胞人重组芳香酶酶测定中抑制芳香酶活性，IC50为700nM或更高，优选750nM或更高，更优选800nM或更高，更优选850nM或更高，更优选900nM或更高，更优选950nM或更高，更优选1000nM或更高，更优选1050nM或更高，更优选1100nM或更高，更优选1150nM或更高，更优选1200nM或更高，更优选1250nM或更高，更优选1300nM或更高，更优选1350nM或更高，更优选1400nM或更高，更优选1450nM或更高，更优选1500nM或更高，更优选1550nM或更高，最优选至少1600nM，例如1610nM或1620nM或1630nM或1640nM或1650nM或更高。 [0103] 因此，本发明方法利用结晶得到(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶及其药学上可接受的盐，非常优选其磷酸盐，并且进一步优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，特别是用于商业药物用途的高手性纯度。在商业规模上，通过允许更大批量制备，更便宜的设备和设施以及不需要专业技术，结晶更有利于比色谱分离更经济。 [0104] 在一个方面，提供了一种药物组合物，其包含如本文所述的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶或其药学上可接受的盐，特别是磷酸盐，更优选(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐，与至少一种药学上可接受的赋形剂混合。 [0105] 在一个实施方式中，所述药物组合物以片剂，丸剂，可分散颗粒，扁囊剂，胶囊，粉末，锭剂，栓剂或保留灌肠剂的形式提供。 [0106] 实施例 [0107] 设备，材料和方法 [0108] 比旋光度[α]D [0109] 使用标准Perkin Elmer Polarimeter 343的589.3nm处的钠D‑线在溶液中进行比旋光度[α]D测量。对于测量，将1克(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)将‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐溶于100ml各溶剂中，将该溶液转移到1分米长的光学比色杯中。测量分别在20℃或25℃的温度下进行。比旋光度[α]D由公式100×α/(l×c)计算，其中：α＝观察到的旋转度(以度为单位)；l＝以分米为单位的单元路径长度；c＝每100毫升的克数浓度。 [0110] 元素分析 [0111] 在标准设备(例如vario EL立方体元素分析仪)上进行元素分析，并测定碳，氢和氮的值。 [0112] 手性HPLC [0113] 手性HPLC在Agilent 1100系列LC22仪器上进行，具有以下色谱柱规格和条件： [0114] 柱：Chiralpack AD‑H，粒度：5μm，250×4.6mm；n°ADH0CE‑TF087 [0115] 流动相：乙醇+0.1％二乙胺(DEA) [0116] 检测器波长：230nm [0117] 烤箱温度：25℃ [0118] 流速：0.5mL/min [0119] 注射量：5μL [0120] 样品制备：0.5mg/mL在乙醇中+0.1％DEA [0121] XRPD [0122] 使用Bruker AXS D2 PHASER在Bragg‑Brentano配置中进行X射线粉末衍射研究。使用30kV，10mA的Cu阳极；样品台标准旋转；通过Kβ‑过滤器(0.5％Ni)进行单色化。狭缝：固定发散狭缝1.0mm(＝0.61°)，主轴向Soller狭缝2.5°，次级轴向Soller狭缝2.5°。探测器： 线性探测器LYNXEYE，带有接收狭缝5°探测器开口。标准样品架(0.1mm腔在(510)硅晶片中)对背景信号的贡献最小。测量条件：扫描范围5至45°2θ，样品旋转5rpm，0.5s/步，0.010°/步，3.0mm探测器狭缝；并且所有测量条件都记录在仪器控制文件中。作为系统适用性，每天测量刚玉样品A26‑826‑S(NIST标准)。 [0124] 单晶X射线分析 [0125] 使用正丙醇/水混合物作为溶剂使(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的单晶生长。从母液中取出合适的单晶，立即涂上高粘度油，切成一定尺寸并安装在Mitagen Microloop上并冲击冷冻至150K。测量在具有MoKα辐射的Bruker D8 Quest仪器上进行，使用 扫描和ω扫描。随后通过直接方法(SHELXT软件)解析分子结构。用各向异性温度因子精制所有非氢原子。在完成的模型上，执行Bijovet分析以确定绝对构型。 [0126] TGA/DSC [0127] 使用具有34位自动取样器的Mettler Toledo TGA/DSC1 STARe系统进行热重分析和差示扫描量热法(TGA/DSC)研究。使用AI坩埚(40μL；穿孔)制备样品。通常将5‑10mg样品装入预先称重的Al坩埚中，并在30℃下保持5分钟， [0128] 然后将其以10℃/分钟从30℃加热至350℃。在样品上保持40ml/min的氮气吹扫。用于数据收集和评估的软件是STARe Software v12.10 build 5937。没有对热谱图进行校正。 [0129] DSC [0130] 使用Mettler Toledo DSC1 STARe系统进行DSC研究。使用Al坩埚(40μL；穿孔)制备样品。通常将1‑8mg样品加载到预先称重的Al坩埚上并在30℃下保持5分钟，之后将其以10℃/min从30℃加热至350℃并保持在350℃达1分钟。在样品上保持40ml/min的氮气吹扫。 作为系统适用性检查，使用铟和锌作为参考。用于数据收集和评估的软件是STARe Software v12.10 build 5937。没有对热谱图进行校正。 [0131] DVS [0132] 使用Surface Measurement Systems Ltd.DVS‑1 No Video进行动态蒸汽吸附(DVS)研究。将样品加载到平衡盘中，通常为20‑30mg，并在0％RH下平衡。在材料干燥后，RH每步增加10％以每次增加1小时，在95％RH下结束。在吸附循环完成后，使用相同的方法干燥样品。用于数据收集的软件是DVSWin v3.01 No Video。使用DVS Standard Analysis Suite v6.3.0(标准)进行数据分析。 [0133] 可溶性 [0134] 使用摇瓶法测定溶解度；在20℃下目测测定溶解度。将所列出的溶剂逐步加入到10mg化合物中，在加入之间加入15分钟，直至获得完全溶解或达到小于0.05mg/ml的溶解度。 [0135] 高吞吐量实验 [0136] 使用配备有用于冷却控制结晶实验温度的Julabo FPSO的结晶配置的Freeslate Core Module 2以孔板形式进行高通量实验，。 [0137] 固体分配系统 [0138] 使用Freeslate CoreModuleProtégé固体分配系统在经典和SV‑hopper配置中使用Sartorius天平分配固体。使用的料斗是25ml经典料斗，其中阀门尺寸为8mm且漏斗尺寸为4至3mm，10mol经典料斗，其中阀门尺寸为8mm且漏斗尺寸为4至3mm，以及带有标准4ml玻璃瓶的SV料斗。 [0139] 外消旋5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶 [0140] 标题化合物(法倔唑)可以根据L.J.Browne等人(J.Med.Chem.1991,34,725.)描述的方法制备或由商业供应商如Sigma‑Aldrich获得。 [0141] 实施例1 [0142] 外消旋5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶的非对映体盐筛选[0143] 将100mg(1.0当量)标题化合物溶于异丙醇中，然后加入手性酸(0.5当量)的异丙醇(0.5mL)溶液。筛选结果总结在表2中。 [0144] 表2‑对映选择性盐结晶实验的总结 [0145] [0146] 实施例2 [0147] 用(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶进行盐筛选[0148] 通用方法：将标题化合物(游离碱)在35℃下溶于乙醇(100g/L)中，然后在相同温度下加入酸。将所得混合物以‑20℃/h的冷却速率冷却至10℃，滤出沉淀物(如果有的话)，用乙醇洗涤并在减压下(50℃)干燥。 [0149] 盐筛选的结果总结在表3至5中。 [0150] 表3‑用乙醇作为溶剂的盐筛选实验的总结 [0151] [0152] *浆液 [0153] 表4‑用甲醇作为溶剂的盐筛选实验的总结 [0154] [0155] [0156] *浆液 [0158] 表5‑固态表征 [0159] [0160] 实施例3 [0161] (R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐(结晶形式I)的制备 [0162] 步骤1：制备(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶二苯甲酰基‑L‑酒石酸盐 [0163] 在20℃下，在10L反应器中加入外消旋5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶(328g，＝1.0当量)和乙醇(2.3L)。将混合物加热至40℃，然后加入(‑)‑O,O'‑二苯甲酰基‑L‑酒石酸(276.4g，0.5当量)在乙醇(1L)中的溶液。将混合物在40℃保持1小时，然后在2小时内冷却至20℃，在该温度下保持1小时，然后在0.5小时内冷却至10℃，最后在10℃保持过夜。随后滤出沉淀物，并将滤饼用冷(0℃)乙醇(1L)洗涤，得到标题化合物，为白色潮湿粉末(485g，＝413.7g估计干燥物，干燥失重，48.4％，ee＝87％)。 [0164] 步骤2：(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶二苯甲酰基‑L‑酒石酸盐的重结晶 [0165] 在20℃下，在10L反应器中加入从步骤1得到的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶二苯甲酰基‑L‑酒石酸盐(485g，ee＝87％，＝413.7g估计干燥物，干燥损失，＝1.0当量)，乙醇(10L，24V)和水(2.4L，6V)。将所得混合物加热至回流，随后形成溶液。然后将溶液冷却至50℃并在该温度下保持1小时。随后，使混合物在2小时内冷却至10℃，然后在该温度下保持过夜。滤出沉淀物，并将滤饼用冷(0℃)乙醇(1.2L)洗涤。将产物在减压下在40℃下干燥，得到标题化合物，为白色粉末(294.8g，71％，单一对映体)。 [0166] 对映体过量：通过HPLC测定>99.9％ [0167] 步骤3：(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶(游离碱)的制备 [0168] 在2L反应器中加入从步骤2得到的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶二苯甲酰基‑L‑酒石酸盐(177g，单一对映体)和二氯甲烷(1.77L，10V)。然后，加入Na2CO3(71g，2.2当量)的水(875mL)溶液。在室温下搅拌0.25小时后，倾析混合物。由此获得的液相是透明的，水相的pH为8‑9。将有机相用水(2×875mL)洗涤，然后在真空下浓缩。将残余物溶于乙醇中，再次真空浓缩，得到标题化合物(70g，定量)，为油状物，静置后固化。 [0169] 步骤4：(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐[0170] 在1L反应器中加入(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶(94g，1.0当量)和乙醇(564mL)并将混合物加热至35℃。过滤溶液，并用乙醇(94mL)冲洗反应器。在相同温度下加入H3PO4(97g，85％wt/wt，在H2O中)的乙醇(235mL)溶液，用乙醇(47mL)冲洗。在35℃下搅拌1小时后，将混合物冷却至10℃(以‑20℃/h的速率)并在该温度下保持10小时。滤出所得固体，并将滤饼用冷(10℃)乙醇(3×94mL)洗涤。在50℃下减压干燥后，得到标题化合物，为白色结晶自由流动的粉末(100g，74％)。 [0171] XRPD：参见图1和表1 [0172] 熔点：通过TGA/DSC测定的189℃(图2)。 [0173] 对映体过量：>99.9％(图3)。用于测定制剂的对映体过量的手性HPLC的特征在于R‑(+)‑对映体的保留时间(tr)为14.459分钟，S‑(‑)‑对映体为9.814分钟。 [0174] 绝对构型：由单晶X射线测定的在碳5上的R‑(+)‑。 [0175] 比旋光度(CH3CN：H2O 1：1(v/v))：[α]D20＝+98.1 [0176] 吸湿性：由DVS测定，在≥90％相对湿度(RH)下为1.0％。吸水是可逆的，并且在DVS处理时结晶形式不会改变(图4至6)。通过TGA/DSC测定，加热至225℃时的质量损失为1.4％(图2)。(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的晶体的进一步特征在于它们的元素分析，其与由分子式C14H16N3O4P(MW：321.27)计算的值一致：C 52.4％；H 5.1％；N 13.03％。 [0177] 实施例4 [0178] 从(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐通过游离碱制备(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶氯化物[0179] 将实施例3中制备的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐(1000mg，3.11mmol)悬浮于Et2O(30ml)中，并用饱和NaHCO3水溶液(30ml)萃取。水层用乙醚(2×20ml)萃取，合并的有机层用盐水(10ml)和蒸馏水(10ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发，得到游离碱(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶，为白色固体，将其在50℃下真空干燥过夜(530mg)。 [0180] 熔点：101‑102℃；比旋光度(乙醇)：[α]D25＝+127.3； [0181] 将如此得到的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶(100mg，0.447mmol，1当量)溶解于亚甲基氯化物(2.2ml)和HCl(2M在二乙醚中，0.34ml，0.76mmol，1.5当量)，将混合物在室温下搅拌30分钟，然后蒸发并在80℃下真空干燥。分离(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶氯化物，为结晶固体。 [0182] 熔点：240‑243℃；比旋光度(乙醇)：[α]D20＝+104.8；比旋光度(CH3CN：H2O 1：1(v/20 v))：[α]D ＝+124.4。 [0183] 实施例5 [0184] 与(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑并[1,5‑a]吡啶氯化物相比，(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的吸湿性[0185] 将100mg两种结晶盐样品在室温下在无条件的环境空气中并排存放在开口烧瓶中24小时，并在时间0和24小时后进行重量测量(表6)。(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐显示重量增加0.57％，与相应的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶氯化物的由13.1％重量增加证明的显著吸湿性相比，被认为是非吸湿性的。 [0186] 表6.吸湿性的比较 [0187] [0188] 实施例6 [0189] (R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的摇瓶溶解度研究 [0190] 根据美国药典(USP)规范对该材料进行摇瓶溶解度研究。已经使用一组具有不同官能团的药学上可接受的处理溶剂来确定摇瓶溶解度。使溶剂在0‑100mbar下在室温下蒸发过夜。随后使用XRPD分析所有固体。该研究的结果可以在下面的表7中找到。 [0191] 表7.不同批次的摇瓶溶解度结果 [0192] [0193] [0194] 该物质非常易溶于水，易溶于甲醇和乙酸，非常微溶于乙醇，几乎不溶于其它试验溶剂。在表8中，给出了对浆液固体或溶液蒸发后固体进行的XRPD结果。 [0195] 表8.溶解度测定后的XRPD结果 [0196] 样品码 XRPDDF1181‑5‑S1 形式I‑符合初始材料 DF1181‑5‑S2 形式I‑符合初始材料 DF1181‑5‑S3 形式I‑符合初始材料 DF1181‑5‑S4 形式I‑符合初始材料 DF1181‑5‑S5 形式I‑符合初始材料 DF1181‑5‑S6 形式I‑符合初始材料 DF1181‑5‑S7 形式I‑符合初始材料 DF1181‑5‑S8 形式I‑符合初始材料 DF1181‑5‑S9 形式I‑符合初始材料 DF1181‑5‑S10 形式I‑符合初始材料 DF1181‑5‑S11 无定形 [0197] 除乙酸(无定形)外，溶剂蒸发后未获得新的多晶型，证实了结晶形式I的优异稳定性。 [0198] 实施例7 [0199] (R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的多晶型研究 [0200] 以不同比例添加溶剂和共溶剂。不同的比例随后是100％溶剂和0％共溶剂，80％溶剂和20％共溶剂，60％溶剂和40％共溶剂，40％溶剂和60％共溶剂，20％溶剂和80％，以及共溶剂和5％溶剂和95％共溶剂。表9显示了研究条件的布局以及关于多晶型的相应XRPD结论。 [0201] 表9. 96孔多晶型研究主板的布局 [0202] 孔位置 溶剂 共溶剂 XRPD1‑6 甲酸 水 形式I 7‑12 2‑丁酮 正庚烷 形式I 13‑18 醋酸 水 形式I 19‑24 环己酮 正庚烷 形式I 25‑30 甲醇 水 形式I 31‑36 乙酸乙酯 正庚烷 形式I 37‑42 乙醇 水 形式I 43‑48 乙酸异丙酯 正庚烷 形式I 49‑54 2‑丙醇 水 形式I 55‑60 环戊基甲基醚 正庚烷 形式I 61‑66 丙酮 水 形式I 67‑72 甲苯 正庚烷 形式I 73‑78 乙腈 水 形式I 79‑84 环乙烷 正庚烷 形式I 85‑90 四氢呋喃 水 形式I 91‑96 氯苯 正庚烷 形式I [0203] 使用Freeslate CM Protégé固体分配系统将初始材料分配(30mg)在96孔板(“主板”)中。固体分配后，将孔板转移至Freeslate Core Module 2进行液体分配(溶剂+共溶剂总量＝800μL)。将主板在50℃下搅拌2小时。将主板中的等分试样通过热过滤板转移到冷却结晶板中。然后使冷却板中的样品在5小时内使用立方冷却速率从50℃冷却至10℃。没有一个孔含有固体，因此为了模拟蒸发结晶，使溶剂在室温下在0‑100mbar下蒸发。使用XRPD分析所有形成的固体。通过重叠相应的衍射图，将所有衍射图与参考衍射图进行比较，如图1所示(图6)。在该研究中，只能鉴定出形式I的标题化合物的一种多晶型物，其具有所述的非常有益和令人惊讶的性质。该发现似乎证实结晶不仅是根据盐选择，而且是根据结晶工艺条件，导致本发明的(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的形式I(P.Heinrich Stahl(编辑)，Camille G.Wermuth(编辑)；Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use，第2次修订版，2011年3月，Wiley‑VCH，ISBN：978‑3‑90639‑051‑2)。 [0204] 实施例8 [0205] (R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐对芳香化酶和醛固酮合酶抑制的评估 [0206] 对醛固酮合酶(CYP11B2)和芳香酶(CYP19)活性的人NCI‑H295R细胞测定 [0207] NCI‑H295R细胞是源自侵袭性原发性肾上腺皮质癌的连续细胞系，获自CLS细胞系服务有限公司(目录号300483)。因为NCI‑H295R细胞同时产生醛固酮和雌二醇，所以它们能够在相同条件下测量醛固酮合酶活性和芳香酶活性。在用于测定之前，将细胞维持在含有15mM HEPES和1.2g NaHCO3的DMEM/Ham培养基中，补充有5％无类固醇血清替代品，Panexin BMM(PAN Biotech，Aldenbach，Germany；目录号PO4‑9515A2)，1％青霉素/链霉素，1.25％L‑谷氨酰胺和6.25μg/ml胰岛素，6.25ng/ml硒，5.35μg/ml亚油酸和1.25mg/ml牛血清白蛋白。 5 将细胞在95％空气/5％CO2的气氛下保持在37℃。对于测定，将细胞以每孔5×10个细胞的密度在24孔板中进行传代培养，并生长至50‑60％汇合(48小时)。然后将生长培养基替换为 500μl无血清DMEM：Ham's F12，其含有溶于乙醇/水1：1(v/v)中的测试化合物，使得测定中的最终浓度由0.5％乙醇组成。评估六种浓度，并且不含化合物的对照样品补充有0.5％乙醇。将含有化合物的细胞在37℃，95％空气/5％CO2下温育6小时。之后，除去上清液并储存在‑20℃直至分析。除去上清液后，通过利用相差显微镜检查形态学变化的光学评价和通过测量刃天青转化为荧光终产物试卤灵的刃天青方法评价细胞以确保活力。非活细胞缺乏进行转化的代谢能力。通过使用Wallac 1420 Multiple Counter Victor Fluorometer/Luminator(Perkin Elmer，Wlatham，MA)分别测量544nm/590nm处的荧光(消光/发射)来量化转化率。 [0208] 醛固酮浓度的量化作为醛固酮合酶活性的量度通过LC‑MS如下完成。在分析之前，使用乙腈沉淀样品蛋白质，并且在离心后，将无颗粒上清液进行LC‑MS。HPLC系统由Accela U‑HPLC泵和Accela Open自动进样器(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)组成。使用配备有加热电喷雾(H‑ESI)接口的Q‑Exactive MS(Orbitrap)进行质谱分析，所述接口连接至运行标准Xcalibur软件2.2(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)的PC。LC使用乙腈与0.1％甲酸(溶剂A)和水性0.1％甲酸溶剂B以梯度模式进行。泵流速设定为600μl/min，并在Kinetex Phenyl‑Hexyl 2.6μm，具有C6‑Phenyl的50x2.1mm分析柱(Phenomenex，德国)，用于定量的4x2.0mm ID预柱上进行分离。作为MS调谐文件，使用通用调谐文件并且作为用于内部校准的锁定质量，使用溶剂系统中存在的邻苯二甲酸二辛酯(m/z 391.28492)的[M++ TMH]离子。应用完整的MS‑SIM分析(m/z：250‑400)，Orbitrap 的质量分辨率设置为35000。所有样品的样品进样体积均为20μl。结果以ng/ml表示，醛固酮产生的抑制表示为相对于未处理对照的抑制百分比，即不存在任何抑制剂(表10)。使用测试化合物的浓度和直接高于和低于50％的相应百分比抑制，使用线性插值计算IC50值，如下所示： [0209] IC50＝(50％‑低inh％)/(高inh％‑低inh％)x(高conc‑低conc)+低conc[0210] 其中“inh”是抑制，“conc”是浓度。 [0211] 表10.NC‑H295R细胞中(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐对醛固酮产生的抑制。 [0212] [0213] a高conc＝抑制至少50％(10nM)的测试项目的最低浓度 [0214] b低conc＝抑制低于50％(1nM)的测试项目的最高浓度 [0215] c高inh＝测试项目的高conc达到的抑制百分比(60.8％) [0216] d低inh＝测试项目的低conc达到的抑制百分比(8.7％) [0217] IC50＝(50％‑8.7％)/(60.8％‑8.7％)×(10nm‑1nM)+1nM＝8.1nM [0218] 抑制醛固酮产生的IC50＝8.1nM(醛固酮合酶活性) [0219] 通过如上测定醛固酮合酶活性所述，定量来自NCI‑H295R细胞温育的上清液中雌二醇浓度来测量芳香酶活性，不同之处在于使用如下所示的更高浓度的抑制剂来获得IC50。使用来自IBL‑Hamburg(Hamburg，Germany)的17‑β‑雌二醇ELISA试剂盒，根据制造商的说明书完成雌二醇浓度的定量。通过绘制每个参考标准品(y轴)的吸光度与相应的对数浓度(x轴)绘制标准曲线。使用GraphPad Prism 5.04软件(GraphPad Software Inc.，San Diego，CA)，通过从标准曲线插值，使用每个样品的吸光度来确定相应的值。使用上述表11中公开的用于醛固酮合酶数据的公式计算IC50。 [0220] 表11.NCI‑H295R细胞中(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐对雌二醇产生的抑制。 [0221] [0222] a高conc＝抑制至少50％(10μM)的测试项目的最低浓度 [0223] b低conc＝抑制低于50％(1μM)的测试项目的最高浓度 [0224] c高inh＝测试项目的高conc达到的抑制百分比(68.6％) [0225] d低inh＝测试项目的低conc达到的抑制百分比(29.1％) [0226] IC50＝(50％‑29.1％)/(68.6％‑29.1％)×(10μM‑1μM)+1μM＝5.76μM或5760nM[0227] 抑制雌二醇产生的IC50＝5760nM(芳香酶活性) [0228] 无细胞人重组芳香酶酶测定 [0229] 根据制造商的说明书，使用人CYP19测定试剂盒( Corning，NY；产品#456260)测量芳香酶(CYP19)活性。该测定系统使用重组人酶，荧光底物MFC(7‑甲基‑4‑三氟+ 甲基‑香豆素)和由葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶，NADP和葡萄糖‑6‑磷酸盐组成的NADPH再生系统。为了测定抑制酶活性50％的试验化合物的浓度(IC50)，测试了8个试验浓度。将测试化合物以1：1(v/v)溶解在乙醇/水中，使得测定中的最终乙醇浓度为1％。将各种浓度的测试化合物与NADPH再生系统一起加入96孔板中。预温育10分钟后，通过加入预热的酶底物混合物开始反应，并在37℃下再继续30分钟。然后通过加入80％乙腈溶液和20％0.5M Tris碱(终止溶液)终止反应。为了控制背景荧光，还测定了空白孔(不含测试样品)，但是这些孔在加入酶底物混合物之前加入终止溶液。使用Wallac 1420 Multiple Counter Victor Fluorometer/Luminator(Perkin Elmer，Wlatham，MA)检测形成的荧光产物7‑羟基‑4‑三氟甲基‑香豆素(HFC)。用于激发和发射的波长分别为405nm和535nm。数据使用标准软件Wallac 1420 Manager 3.0编译。除了如上所述减去空白孔样品之外，预先测试每种测试物质的自发荧光。为此目的，用对照蛋白、测定缓冲液和测试化合物溶剂的相当混合物代替NADPH产生系统(辅因子混合物)和酶/底物混合物。然后将这些对照样品如上所述预温育并测定。IC50的三次独立测定由％抑制对抑制剂浓度的最佳拟合图的线进行(表12)。 [0230] 表12.(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐对人重组芳香酶活性的抑制。 [0231] [0232] 实施例9 [0233] 评估(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐的稳定性数据 [0234] 已经测量了与监管考虑因素相关且重要的长期稳定性数据。至此，如下表13至15所示的各种试验在25℃和60％RH(表13)，30℃和65％RH(表14)，以及40℃和75％RH(表15)下进行，在各种时间点(初始，1个月，3个月和6个月后甚至更长)进行每次测试。 [0235] 已经表明，(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐在长期和长时间段内非常稳定，并且特别是在评估的稳定性条件和时间段内，已经显示出纯度、水含量和吸湿性以及手性纯度方面的长期稳定性。而且，重要的是，在评估的条件和时间段内都没有观察到多态性的变化。 [0236] 表13.(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐在25℃/60％RH的稳定性条件下的稳定性数据。 [0237] [0238] 表14.(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐在30℃/65％RH的稳定性条件下的稳定性数据。 [0239] [0240] [0241] 表15.(R)‑(+)‑5‑(对氰基苯基)‑5,6,7,8‑四氢咪唑鎓[1,5‑a]吡啶磷酸二氢盐在40℃/75％RH的稳定性条件下的稳定性数据。 [0242] |
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