[0001] 本发明涉及化妆品领域，尤其涉及一种具有护肤活性的扁核木油及其制备方法、应用。

[0002] 滇西北地区高原地区早晚温差大、海拔高、日照长，水质硬度较大，皮肤易失水、开裂和晒伤，尤其是在冬天，皮肤易被冻裂和粗糙。扁核木油是由蔷薇科扁核木属扁核木种子榨出的油脂，该地区民间用扁核木油涂抹在皮肤上来修护以上的皮肤症状，距今已有500多年历史，尤其是用于婴儿身上袪湿疹。现代医学研究表明：扁核木种子榨出的油脂之中具有丰富的植物甾醇如β‑谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇等，这些具有环戊烷多氢菲骨架的甾体类化合物，能够帮助皮肤锁水、延缓皮肤衰老、促进细胞生长、抗炎等。这提示了扁核木油具有用于皮肤抗氧化、防衰老等功效的潜能。

[0003] 然而，扁核木油中不饱和脂肪酸含量高且种类多，易导致扁核木油产生不良的气味没能得到突破，有些脱臭工艺确实解决了扁核木油臭味的问题，同时也失去相关生物活性，导致扁核木油产业化应用受到限制。因此，在扁核木油精炼之后，同时保持相关护肤活性是急需解决的问题。

[0004] 现有技术中，油脂的除臭多采用蒸馏脱臭，例如CN115820338A公开了一种脱臭青刺果油的制备方法及其应用，所述将待脱臭油通过加热至45～250℃，操作压强为0.001～1MPa，脱臭时间为20～120min，离心转速为2000～10000r/min，离心时间为5～60min。并通过DPPH测试结果显示：脱臭青刺果脱臭流程对青刺果油的抗氧化能力影响较小。将青刺果脱臭油配制成的不同的组合物，分别在45℃、光照以及5℃的条件下对面霜组合物的稳定性有所提高。但现有技术中的研究多认为，通过蒸馏脱臭会部分去除有效组分，因此研究重点往往集中在除臭情况下保留活性组分，以保持活性。亦即本领域技术人员倾向于认为，除臭处理会脱除有效成分，降低活性。

[0005] 本发明所要解决的技术问题在于，提供一种具有护肤活性的扁核木油的制备方法，其可有效除去扁核木原油中的臭味组分，保留其活性组分，且有效优化自由基清除力，抗氧化效果。

[0006] 本发明还要解决的技术问题在于，提供一种具有护肤活性的扁核木油，其自由基清除能力强，具有良好的抗氧化效果，且能起到修复皮肤的作用。

[0007] 本发明还要解决的技术问题在于，提供一种上述的扁核木油在制备化妆品中的应用。

[0008] 本发明还要解决的技术问题在于，提供一种护肤品。

[0009] 为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种具有护肤活性的扁核木油的制备方法，其包括将扁核木原油在0.03～0.9MPa、150～170℃下通入水蒸气进行除臭处理的步骤；其中，除臭处理时间为1～5h。

[0010] 具体的，扁核木原油是指扁核木核压榨得到的油脂，其可经过简单的前处理，如脱酸处理、脱色处理等，但不限于此。

[0011] 具体的，除臭处理在负压条件下进行，操作压强为0.03～0.09MPa，示例性的为0.04MPa、0.05MPa、0.06MPa或0.07MPa，但不限于此。操作温度为150～170℃，示例性的为
152℃、154℃、156℃、158℃、160℃、162℃、165℃或168℃，但不限于此。除臭处理时间为1～
5h，示例性的为1.5h、2h、2.5h、3h、4h或4.5h，但不限于此。

[0012] 具体的，水蒸气的温度为95℃～110℃，优选的为99℃～102℃。本发明的水蒸气可采用本领域常见的饱和水蒸气，但不限于此。优选的，在一个实施例之中，将水在常温下加热至沸腾，以产生水蒸气，并将该水蒸气通入除臭设备，与待除臭扁核木原油混合。其中，水的用量与扁核木油的比例为200mL～300mL：100g，优选的为250mL～300mL：100g。

[0013] 具体的，水蒸气从扁核木原油的底部通入，或从扁核木原油高度的2/3～4/5之处通入，以加强水蒸气与扁核木原油的混合。

[0014] 优选的，在本发明的一个实施例之中，除臭处理的压强为0.05～0.08MPa，温度为155℃～165℃，除臭处理时间为1.5～3h。

[0015] 更优选的，除臭处理的压强为0.07MPa，温度为160℃，除臭处理时间为2h。

[0016] 相应地，本发明还公开了一种具有护肤活性的扁核木油，其由上述的具有护肤活性的扁核木油的制备方法制备而得。

[0017] 本发明的扁核木油的制备方法中引入了除臭处理步骤，该除臭处理很大程度上保留了扁核木原油中的主要甾体类化合物，其中，3‑O‑β‑D‑葡萄糖‑菜籽甾醇、菜油甾醇葡萄糖苷、咖啡酰环阿屯醇和(22R,23R)‑22,23‑二羟基菜油甾醇经过脱臭后含量明显增加，并且该扁核木油中主要甾体类化合物具有抗氧化、抗炎等生物活性。此外，脱臭处理后的扁核木油和未脱臭处理的扁核木原油代谢也具有差异，其差异代谢物为菜油甾醇葡萄糖苷。

[0018] 进一步的，发明人意外地发现，脱臭处理后的扁核木油在自由基清除，抑制弹性蛋白酶和透明质酸酶等方面的功效均优于未脱臭处理的扁核木原油。而且，脱臭处理之后的扁核木油还具备了扁核木原油所不具备的修复皮肤的功能。具体的，在DPPH和ABTS自由基清除力测试中，与未脱臭处理的扁核木原油相比，脱臭处理后的扁核木油的抗氧化能力较强，有抗氧化效果。在透明质酸酶抑制率测试中，相同浓度的条件下，脱臭处理后的扁核木油对透明质酸酶的抑制率高于未脱臭处理的扁核木原油，两者均表现出透明质酸酶抑制作用(IC50分别为3.36％和3.01％)，略低于阳性对照甘草酸二钾的抑制作用(IC50为1.03％)，但仍具有一定的透明质酸酶抑制率，具有保湿舒缓活性。在弹性蛋白酶抑制率测试中，未脱臭处理的扁核木原油的IC50值为0.64％，脱臭处理后的扁核木油的IC50值为
0.46％，与阳性对照茶多酚(IC50＝0.26％)相当，具有紧致抗皱效果。在斑马鱼胚胎尾鳍修护促进测试实验中，未脱臭处理的扁核木原油未能显著促进斑马鱼胚胎尾鳍再生，不具有促进修护效果，但合适浓度的、脱臭处理后的扁核木油能显著促进斑马鱼胚胎尾鳍再生，具有修护效果。

[0019] 需要说明的是，透明质酸是细胞外基质中含量最多、所占比例最大的成分，可维持细胞外基质体积，调控细胞生长因子和细胞因子的分泌，影响细胞的粘附、生长、增殖和分化，因而在维持皮肤水分有着重要的作用。而透明质酸酶能够降低体内透明质酸的活性，所以抑制透明质酸酶活性作为研究保湿的指标。

[0020] 由于紫外照射、压力、污染等一些环境因素的作用，会促进体内弹性蛋白酶产生。弹性蛋白酶是胰凝乳蛋白酶家族中的一员，会降解弹性蛋白，造成表皮中连接组织的丧失，从而导致皮肤衰老，皱纹和光老化的产生。弹性纤维由弹性蛋白和微原纤维构成，分布于真皮及皮下组织，使皮肤具有弹性。因此，弹性蛋白酶抑制率可以作为皮肤紧致抗皱功效的指标评价。

[0021] 斑马鱼在伤口修复过程中，除了不会形成凝血外，其余步骤和人类相同。斑马鱼伤口皮肤愈合非常迅速，紧接着炎症细胞迁移至伤口形成由巨噬细胞、纤维细胞、血管和胶原蛋白组成的肉芽组织。因此，斑马鱼和人类伤口愈合的主要步骤和原理十分一致，可以作为人体修护功效的检测筛查模型。

[0022] 因此，基于本发明上述的对自由基清除、透明质酸酶抑制、弹性蛋白酶抑制和斑马鱼胚胎尾鳍修护实验的结果，本发明提出了扁核木油在制备化妆品中的应用。更具体的，扁核木油可作为抗氧化剂、弹性蛋白酶抑制剂、透明质酸酶抑制剂和/或皮肤修复剂，应用在护肤品的制备过程中。

[0023] 进一步的，本发明还公开了上述的扁核木油作为抗氧化剂在制备抗氧化护肤品、抗氧化药品或抗氧化保健品中的应用。上述的扁核木油作为透明质酸酶抑制剂在制备保湿护肤品中的应用。上述的扁核木油作为弹性蛋白酶抑制剂在制备抗皱护肤品中的应用。上述的扁核木油作为皮肤修护剂在皮肤修护护肤品、皮肤修护药品或皮肤修护保健品中的应用。

[0024] 相应的，本发明还公开了一种护肤品，其包括上述的具有护肤活性的扁核木油。具体的，该护肤品中扁核木油的含量为5wt％～15wt％，示例性的为6wt％、7.5wt％、8wt％、9.5wt％、11wt％或14wt％，但不限于此。此外，该护肤品中还包括本领域常用的乳化剂等，但不限于此。

[0025] 优选的，在一个实施例中，上述的护肤品中还包括0.0000005～0.000002wt％的芦丁。

[0026] 优选的，在一个实施例之中，上述的护肤品包括以下重量百分比的组分：

[0027] 液体石蜡85～95％，扁核木油5～15％，芦丁0.0000008～0.0000012％。以上三种组分可有效协同，提升抗氧化能力，且无色无味，易被消费者接受。

[0028] 更优选的，护肤品由以下重量百分比的组分组成：

[0029] 液体石蜡90wt％，扁核木油9.999999wt％，芦丁0.000001wt％。

[0030] 实施本发明，具有如下有益效果：

[0031] 本发明的具有护肤活性的扁核木油的制备方法中，采用水蒸气在0.03～0.09MPa、150～170℃下将扁核木原油除臭处理1～5h。该除臭处理很大程度上保留了扁核木原油中的主要甾体类化合物，使得其具有抗氧化，抗炎等生物活性。此外，经本发明制备方法所制备得到的扁核木油具有抗氧化，透明质酸酶抑制、弹性蛋白酶抑制和皮肤修护作用，使得其在化妆品、保健品、药品的制备中具备应用前景。
附图说明

[0032] 图1为测试例1中未脱臭组、脱臭组主成分分析图；

[0033] 图2为测试例1中未脱臭组、脱臭组差异代谢物OPLS‑DA分析图；

[0034] 图3为测试例3中弹性蛋白酶抑制实验结果图；图中，crude oil为扁核木原油，refined oil为实施例1所得扁核木油，positive control为阳性对照组；

[0035] 图4为测试例4中透明质酸酶实验结果图；图中，crude oil为扁核木原油，refined oil为实施例1所得扁核木油，positive control为阳性对照组；

[0036] 图5为测试例5中斑马鱼胚胎尾鳍修护实验结果图。

[0037] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图、具体实施例对本发明进行进一步说明。

[0038] 下述实施例、对比例和应用例相应材料和原料的来源如下：SHZ‑D(Ⅲ)循环水式真空泵，PTHW型电热套，ZNCL‑T智能磁力电热套，扁核木油经脱酸和脱色工艺处理，其余使用到的试剂和材料，无特殊说明，均可从商业途径获得。

[0039] 实施例1

[0040] 本实施例提供一种具有护肤活性的扁核木油的制备方法，具体包括以下步骤：

[0041] 取待处理的扁核木油(160±0.01)g于三口瓶中，置于智能磁力电热套中，连接真空泵，操作压强为0.07MPa，将油加热到(160±5)℃后通入水蒸气进行处理，2h后关闭蒸汽，待油温降至室温后破除真空，取出处理后的油脂样品并置于锥形瓶中密封待用，得到脱臭组扁核木油。

[0042] 实施例2

[0043] 本实施例提供一种护肤品，其配方如下：

[0044] 液体石蜡90wt％，扁核木油9.999999wt％，芦丁0.000001wt％。

[0045] 对比例1

[0046] 本对比例提供一种护肤品，其配方如下：

[0047] 液体石蜡90wt％，扁核木油10wt％。

[0048] 对比例2

[0049] 本对比例提供一种护肤品，其配方如下：

[0050] 液体石蜡95wt％，扁核木油4.999999wt％扁核木油，芦丁0.000001wt％。

[0051] 对比例3

[0052] 本对比例提供一种护肤品，其配方如下：

[0053] 液体石蜡97.5wt％，扁核木油2.499999wt％扁核木油，芦丁0.000001wt％。

[0054] 对比例4

[0055] 本对比例提供一种护肤品，其配方如下：

[0056] 扁核木油99.99999wt％，芦丁0.00001wt％。

[0057] 对比例5

[0058] 本对比例提供一种护肤品，其配方如下：

[0059] 扁核木油99.9999wt％，芦丁0.0001wt％。

[0060] 对比例6

[0061] 本对比例提供一种护肤品，其配方如下：

[0062] 扁核木油99.999wt％，芦丁0.001wt％。

[0063] 对比例7

[0064] 本对比例提供一种护肤品，其配方如下：

[0065] 扁核木油99.99wt％，芦丁0.01wt％。

[0066] 测试例1脱臭组和未脱臭组扁核木油甾体类化学成分分析

[0067] 测试样本：未脱臭处理的扁核木原油(未脱臭组)和实施例1提供脱臭处理后的扁核木油(脱臭组)

[0068] 测试方法为：

[0069] (1)测试样本处理：取未脱臭组和脱臭组扁核木油各100μL，加入200μL色谱级甲醇和200μL二氯甲烷进行溶解，离心取上清，转移至进样小瓶。

[0070] (2)采用UPLC‑QTOF‑MS/MS方法对未脱臭组和脱臭组扁核木油进行甾体类化学成分分析，色谱柱为Waters ACQUITY UPLCr BEH C18 1.7μm。采用含0.1％(v/v)甲酸水(A)和乙腈(B)的二元体系进行梯度洗脱，洗脱程序为：0min，5％B；4分钟，10％B；0.5min，5％B；21.5min，100％B；23分钟，100％B；25min，5％B。流速为0.4mL/min，进样量为2μL。色谱柱和样品盘温度分别保持在30℃和15℃。

[0071] (3)ESI正离子模式检测时，毛细管电压为2.5kV，溶剂去除温度为450℃，溶剂去除气体(N2)为900L/h。ESI负离子模式检测时，毛细管电压为2.0kV，溶剂去除温度为450℃，溶剂去除气体(N2)为900L/h，质量扫描范围为m/z100～1200，收集方式为MSE，采用灵敏度模式。处理软件：Masslynx4.2(996)。

[0072] (4)运用Masslynx软件采集质谱原始数据，Progenesis QI软件对原始数据进行峰对齐、峰识别、归一化和去卷积分析；HMDB数据库鉴定代谢物并注释；采用MetaboAnalyst R工具对代谢组学数据进行主成分分析(PCA)，正交偏最小二乘法判别分析(OPLS‑DA)等，检测实验组间的差异和组内的重复性。

[0073] 实验结果如下：

[0074] (1)UPLC‑QTOF‑MS对脱臭前后的扁核木油中甾体类化学成分分析，初步鉴定出26种甾体类化学成分，所识别峰的详细信息结果见表1。

[0075] 表1未脱臭组、脱臭组扁核木油的化学成分分析表

[0076]

[0077]

[0078] 由表中可以看出：脱臭组和未脱臭组扁核木油共检出26种甾体类化合物，脱臭前后差异较大。其中胆固醇、6α‑羟基卡斯特酮、谷甾醇3‑O‑(6‑o‑硬脂‑β‑D‑葡萄糖苷)、四氢皮质酮、3‑O‑β‑d‑葡萄糖基‑油菜甾醇含量较高。其中3‑O‑β‑D‑葡萄糖‑菜籽甾醇、菜油甾醇葡萄糖苷、咖啡酰环阿屯醇和(22R,23R)‑22,23‑二羟基菜油甾醇经过脱臭后含量明显增加。

[0079] (2)主成分分析(PCA)(MY‑未脱臭组、JZDH‑脱臭组)：PCA分析消除了组间干扰，观察组内的差异，找出可能的异常值，判断组间差异大小，为发现不同的差异代谢物做准备。结果表明，两个组点云分布在不同的区域，各组代谢物组成结构略有不同，不同组分的样品存在差异。主成分变量1(PC1)和PC2的累积方差贡献率分别为69.8％和29.7％，如图1所示。

[0080] (3)正交偏最小二乘判别分析(OPLS‑DA)：为了更清楚地观察脱臭组和未脱臭组扁核木油中差异代谢物的区别，采用OPLS‑DA对差异化合物进行筛选。与PCA相比，OPLS‑DA可以通过去除与组无关的影响信息，最大程度地分离观察组，比较两组之间的不同成分。通过2 2
OPLS‑DA建模分析，得到脱臭组和未脱臭组扁核木油的OPLS‑DA评分图[R X＝0.315，RY＝
2 2 2
0.964，Q (cum)＝0.669]，如图2所示。R Y和Q 值可以评价OPLS‑DA模型的可预测性和可靠
2 2
性，RY和Q越接近1，模型的分化效果越好。不同组样本的点云分布在不同的区域，在聚类和分类上有一定的差异。此外，不同组的样本分离明显，没有交叉现象，代谢组信息发生了一定的变化。

[0081] (3)差异代谢物筛选：为了进一步寻找脱臭组和未脱臭组扁核木油之间的差异代谢物－甾体类化学成分，根据VIP≥1，P≤0.05的标准，从两组油中筛选出1种不同的代谢物，如表2所示，其化学结构如式(I)所示。

[0082] 表2

[0083]

[0084]

[0085] 结果表明，脱臭组和未脱臭组扁核木油的差异代谢物菜油甾醇葡萄糖苷含量差异显著(P<0.001)。结果表明，该脱臭工艺在很大程度上保留了原油中的植物甾醇。

[0086] 测试例2DPPH、ABTS自由基清除实验

[0087] 本测试例以未脱臭组扁核木油和实施例1提供的扁核木油为待测样品，通过对DPPH和ABTS自由基清除力来评价扁核木油脱臭前后的抗氧化活性。

[0088] 测试样本：未脱臭处理的扁核木原油和实施例1提供的扁核木油对DPPH和ABTS自由基清除力的实验方法如下：

[0089] (1)样品配置：用无水乙醇配制为5、10、20mg/mL的样品溶液备用，以抗坏血酸为阳性对照。

[0090] (2)DPPH‑无水乙醇的配置：称取适量的DPPH用无水乙醇溶解配置成0.0820mol/L的DPPH‑无水乙醇溶液。

[0091] (3)ABTS工作液的配置：称取适量的ABTS和过硫化钾用无水乙醇溶解分别配置成7mmol/L的ABTS溶液和1.4mmol/L的过硫化钾溶液，然后准确量取等配置好的ABTS溶液和过硫化钾溶液，超声使其混匀，避光静置12～16h得ABTS储备液。ABTS储备液使用前在734nm下用无水乙醇稀释至吸光度0.7±0.2即可获得ABTS工作液。

[0092] (4)DPPH自由基清除实验：分别取1mL样品溶液于试管中，加入1mL的DPPH‑无水乙醇溶液，混合均匀，避光反应30min后在517nm处测定吸光度。设立相应的空白和样品对照组。实验重复三次取平均值，通过公式I＝[A空白‑(A样品‑A对照)]/A空白×100％，计算DPPH清除率。

[0093] (5)ABTS自由基清除实验：分别取0.5mL样品溶液于试管中，加入1.5mL的ABTS工作液，混合均匀，避光反应10min后在734nm处测定吸光度。设立相应的空白和样品对照组。实验重复三次取平均值，通过公式I＝[A空白‑(A样品‑A对照)]/A空白×100％，计算ABTS清除率。

[0094] 实验结果如表3所示。

[0095] 表3DPPH和ABTS自由基清除能力实验结果表

[0096]

[0097] 由表中可以看出：随着浓度的增加，DPPH自由基清除率不断增加。未脱臭组在20mg/mL、10mg/mL和5mg/mL时对DPPH自由基的清除率较低，20mg/mL时脱臭油的活性最高，略低于阳性对照。根据DPPH测定，其抗氧化活性依次为：未脱臭组<脱臭组，这可能是由于脱臭后酚类等物质的溶出或美拉德产物的形成造成的，使得DPPH自由基清除率升高，表明脱臭后的扁核木油具有良好的DPPH自由基清除能力。

[0098] 随着浓度的增加，ABTS自由基清除率不断增加，脱臭组的抗氧化能力较强，与抗坏血酸阳性对照相当。且脱臭组的ABTS自由基清除率高于未脱臭组。由于ABTS自由基比DPPH自由基更具反应性，因此预期扁核木油在ABTS实验中的性能更高。这些结果可能与角鲨烯和甾醇有关，如谷甾醇3‑O‑(6'‑O‑硬脂‑β‑D‑葡萄糖苷)和3‑O‑β‑d‑葡萄糖基‑菜籽甾醇。

[0099] 测试例3弹性蛋白酶抑制实验

[0100] 测试样本：未脱臭扁核木油和实施例1提供的扁核木油。

[0101] 实验方法如下：

[0102] (1)样品配置：用DMSO配制为0.5％、1％、2％的样品溶液备用，以1mg/mL茶多酚为阳性对照。

[0103] (2)以0.1mmoL pH＝8.0的Tris‑HCl缓冲液为溶剂，配置2mmoL N‑琥珀酰‑丙氨酸‑丙氨酸‑丙氨酸‑p‑硝基苯胺(AAAPVN)底物溶液、0.171U/mL猪胰弹性蛋白酶液。

[0104] (3)实验分组：共分为4组，分别是样品组(A)、空白对照组(B)、模型对照组(C)、样品对照组(D)，同一组别同一浓度下设4个复孔。各溶液添加量和添加顺序及反应流程如表4所示：

[0105] 表4弹性蛋白酶抑制实验反应流程表

[0106]

[0107] 弹性蛋白酶抑制实验结果如图3所示：由图3可知，在相同浓度的条件下，脱臭组对弹性蛋白酶的抑制率高于未脱臭组，脱臭组对弹性蛋白酶的抑制活性IC50值更低为0.46％，与使用的标准茶多酚(IC50＝0.26％)相当。说明低剂量的脱臭组扁核木油可实现可观的弹性蛋白酶抑制效果，从而有效保证体内弹性蛋白水平，说明该扁核木油具有紧致抗皱效果。

[0108] 测试例4透明质酸酶抑制实验

[0109] 测试样本：未脱臭扁核木油和实施例1提供的扁核木油，以1mg/mL甘草酸钾为阳性对照。

[0110] 实验方法如下：

[0111] (1)样品配置：用DMSO配制为0.5％、1％、2％的样品溶液备用。

[0112] (2)采用透明质酸酶体外抑制实验Elson‑Morgan法，以pH＝5.6的醋酸缓冲液为溶剂，配置0.5mg/mL透明质酸钠底物溶液、500U/mL透明质酸酶溶液；用蒸馏水配置1.0mol/L碳酸钠溶液、2.5mol/L氯化钙溶液，5mol/L氢氧化钠溶液；配置乙酰丙酮溶液(1.5mL乙酰丙酮溶于50mL 1.0mol/L碳酸钠溶液中)；配置P‑DAB试剂(1.6g对二甲氨基苯甲醛溶于30mL浓盐酸和30mL无水乙醇)。

[0113] (3)实验分组：共分为4组，分别是样品组(A)、空白对照组(B)、模型对照组(C)、样品对照组(D)，同一组别同一浓度下设4个复孔。各溶液添加量和添加顺序及反应流程如表5所示。

[0114] 表5透明质酸酶抑制实验反应流程表

[0115]

[0116] 透明质酸酶抑制实验结果如图4所示：由图4可知，相同浓度的条件下，脱臭组对透明质酸酶的抑制率略高于未脱臭组，两者均表现出透明质酸酶抑制作用(IC50分别为3.36％和3.01％)，略低于阳性药物甘草酸二钾的抑制作用(IC50为1.03％)。且结果表明，扁核木油的浓度与抗透明质酸酶活性呈正相关，抗透明质酸酶活性随着油浓度的增加而增强。综上所述，说明脱臭后扁核木油仍能有效抑制透明质酸酶，该扁核木油具有保湿舒缓效果，可较好地维持肌肤中透明质酸的水平，使皮肤滋润光滑、细腻柔嫩。

[0117] 测试例5斑马鱼胚胎尾鳍修护促进测试实验

[0118] 测试样本：未脱臭扁核木油和实施例1提供的扁核木油。

[0119] 样品对斑马鱼胚胎尾鳍修护促进的实验方法如下：

[0120] (1)受试物准备：受试物测试浓度需保证对斑马鱼胚胎的死亡率≤10％，以1mg/mL的熟地黄提取物为阳性对照，未脱臭组测试浓度为1％，脱臭组测试浓度为1％、3％、5％、7％(DMSO配置)：

[0121] (2)测试分组：随机挑选24尾切尾鱼胚胎至96孔板中，设立模型对照组(每孔含一粒鱼胚胎和0.2mL鱼胚胎培养液)、阳性对照组(每孔含一粒鱼胚胎和0.2mL熟地黄提取物溶液)和受试物组(每孔含一粒鱼胚胎和0.2mL受试物溶液)。模型对照组、阳性对照组、受试物组处理结束后放置于28℃恒温箱中培养48h。

[0122] (3)显微分析：用三卡因将斑马鱼麻醉，然后放到体式显微镜下对鱼胚胎尾部进行侧面拍照。

[0123] (4)数据处理：按照尾鳍修护促进率＝[(A‑B)/B]×100％(A‑受试物处理组鱼胚胎尾鳍长度的平均值；B‑模型对照组鱼胚胎尾鳍长度的平均值)，计算各试验组的平均值及标准误，统计学处理结果用平均值±标准误表示。使用统计学软件对数据进行方差分析，对受试物组和模型对照组间尾鳍长度进行双尾T检验，取得p值，p<0.05表示有显著性差异。

[0124] (5)测试有效性验证：各测试组暴露完成后至少90％鱼胚胎存活，否则对应测试组结果无效；每批次测试须设置阳性对照组，要求每批次测试阳性对照组鱼胚胎尾鳍修护促进率为正数且p<0.05。

[0125] 各组扁核木油的斑马鱼胚胎尾鳍修护促进测试实验结果如图5和表6所示：

[0126] 表6扁核木油的斑马鱼胚胎尾鳍修护促进测试实验结果表

[0127]

[0128] 由表6可知，未脱臭组扁核木油未能显著促进斑马鱼胚胎尾鳍再生，不具有促进修护效果。与未脱臭组相比，脱臭组在1％、3％、5％的测试浓度下鱼胚胎尾鳍修护促进率为正数且p<0.05，能显著促进斑马鱼胚胎尾鳍再生，具有促进修护效果，但在7％的测试浓度下未能显著促进斑马鱼胚胎尾鳍再生，不具有促进修护效果，不可以作为修护功效的支持证据。以上结果显示出合适的浓度下的扁核木油能显著促进斑马鱼胚胎尾鳍再生，具有促进修护效果。

[0129] 测试例6护肤品对DPPH自由基清除能力实验

[0130] 测试样品：实施例2、对比例1～对比例7的护肤品

[0131] 测试方法：分别取1mL样品溶液于试管中，加入1mL 0.0820mol·L‑1的DPPH‑乙酸乙酯溶液，混合均匀，避光反应30min后在517nm处测定吸光度。设立相应的空白对照组。实验重复三次取平均值，通过公式I＝[A空白‑(A样品‑A对照)]/A空白×100％，计算实施例2和对比例1‑7的DPPH清除率。

[0132] DPPH自由基清除能力实验结果如表6所示：

[0133] 表6DPPH自由基清除能力实验结果表

[0134]

[0135] 清除率越大表明抗氧化能力越强，如表6所示，按照本申请所述特定比例的液体石蜡、芦丁、扁核木油组合物的抗氧化效果，优于其他比例的组合物及只使用液体石蜡和脱臭组扁核木油、脱臭组扁核木油和芦丁的抗氧化效果，表明上述三种成分经特定比例组合后具有协同增效的效果，并且添加了液体石蜡之后该扁核木油组合物无色无味，容易被消费者接受。

[0136] 以上所述是发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。