抑制牙龈卟啉单胞菌的草果提取液、其制备方法和用途
| 专利类型 | 发明公开 | 法律事件 | 公开; 实质审查; |
| 专利有效性 | 实质审查 | 当前状态 | 实质审查 |
| 申请号 | CN202410648337.7 | 申请日 | 2024-05-23 |
| 公开(公告)号 | CN118453796A | 公开(公告)日 | 2024-08-09 |
| 申请人 | 中国热带农业科学院香料饮料研究所; 海南热作高科技研究院有限公司; | 申请人类型 | 科研院所 |
| 发明人 | 徐飞; 余文珍; 谷风林; 朱科学; 吉训志; 张彦军; 曾玖玲; 吴桂苹; | 第一发明人 | 徐飞 |
| 权利人 | 中国热带农业科学院香料饮料研究所,海南热作高科技研究院有限公司 | 权利人类型 | 科研院所 |
| 当前权利人 | 中国热带农业科学院香料饮料研究所,海南热作高科技研究院有限公司 | 当前权利人类型 | 科研院所 |
| 省份 | 当前专利权人所在省份：海南省 | 城市 | 当前专利权人所在城市：海南省万宁市 |
| 具体地址 | 当前专利权人所在详细地址：海南省万宁市兴隆热带植物园 | 邮编 | 当前专利权人邮编：571533 |
| 主IPC国际分类 | A61K36/9064 | 所有IPC国际分类 | A61K36/9064 ; A61P1/02 ; A61P31/02 ; A61K131/00 |
| 专利引用数量 | 0 | 专利被引用数量 | 0 |
| 专利权利要求数量 | 10 | 专利文献类型 | A |
| 专利代理机构 | 北京集佳知识产权代理有限公司 | 专利代理人 | 张柳; |
| 摘要 | 本 发明 涉及 口腔 护理技术领域，具体涉及草果提取液的制备方法。本发明公开了草果提取液的制备方法。用本发明制备的草果提取液具有提高抑制口腔主要致病菌( 牙龈 卟啉单胞菌)的作用。所述的草果提取液通过炮制的草果仁 粉碎 ，与 乙醇 混合后浸提，浸提后过滤，浓缩， 冷冻干燥 ，接着用20％二甲基亚砜复溶，用超声助溶后，离心取上清制备得到，炮制分为炒制和煨制，通过对比利用炒制草果仁、煨制草果仁和生草果仁后抑菌效果评价，整体而言，草果提取液对牙龈卟啉单胞菌的抑制效果为：煨制草果仁提取液>炒草果仁提取液＞生草果仁提取液。 | ||
| 权利要求 | 1.草果提取液的制备方法，其特征在于，取炒制和/或煨制后的草果仁粉碎，取草果仁粉与乙醇混合后浸提，浸提后过滤，浓缩，冷冻干燥，复溶，超声助溶，离心取上清，即得。 |
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| 说明书全文 | 抑制牙龈卟啉单胞菌的草果提取液、其制备方法和用途技术领域背景技术[0002] 草果(Amomum tsao‑ko Crevost et Lemaire)为姜科豆蔻属的干燥成熟果实。草果辛、温，胃经、归脾，具有截疟除痰、燥湿温中的功效，有关草果功效最早记载于宋代的《太平惠民和剂局方》，其中记载了草果饮主治疟疾脾寒。《中华人民共和国药典》记载了草果可用于脘腹胀痛，寒湿内阻，疟疾寒热，痞满呕吐，瘟疫发热等症。草果具有抗氧化、抗炎、抑菌、抗肿瘤、降血压、降血脂等多种药理作用。 [0003] 草果药材在临床上须经炮制成饮片后方可应用，对于草果的炮制加工方法，历代本草和中医经典古籍中有很多记载，清代《本草从新》中记载了草果的用法为面裹熟后，取仁使用。《扁鹊心书》记载了“去壳炒”，清代《温热暑疫全书》中记载了“炒黄”。其他炮制方法如净制、切制、烫制、姜制、盐制也有记载。但发展至今，除姜草果仁外，其余方法已不再被广泛应用。 [0004] 炮制是一种有效的改变药物性能、降低中药药物烈性、毒性或副作用的有效加工方法，并且炮制后便于贮藏和制剂。比如炒制后的草果可以缓和药性，增强健胃止呕的作用。但草果炮制方法及炮制品还未在现代研究中证明抑菌功效以及其他一些生理活性，也未被证明比起生品可以增强或者减弱某种作用。此外，煨制草果均是对带壳进行煨制，用时去壳取仁，但带壳炮制有效成分的浸出率和利用率不高。 [0005] 因此，需要提供一种工艺安全可靠，提高品质功效的草果仁炮制方法以便用于功效活性的研究。 发明内容[0006] 有鉴于此，本发明提供了抑制牙龈卟啉单胞菌的草果提取液、其制备方法和用途。本发明通过对草果仁进行炮制缓和了草果药性，提高了草果有效成分的浸出率和利用率。 本发明炮制工艺安全可靠，使草果在中药方面的应用提供基础，为草果提取液的原料品质提供了保障。 [0007] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案： [0009] 在本发明的一些具体实施方案中，所述草果仁粉与乙醇(乙醇浓度90～95％)的质量比为1：5； [0010] 所述浸提的温度为65～70℃，所述浸提的时间为2h； [0011] 作为优选，所述浸泡的时间为1h。 [0012] 在本发明的一些具体实施方案中，所述过滤的孔径为200目。 [0013] 在本发明的一些具体实施方案中，所述冷冻干燥(冷阱温度‑25℃，加热温度55℃，真空度75Mpa)时间为72h。 [0014] 在本发明的一些具体实施方案中，所述复溶采用的复溶剂包括20％的二甲基亚砜； [0015] 所述超声频率40kHz助溶的时间为30min。 [0016] 在本发明的一些具体实施方案中，所述离心的转速为12000rpm，所述离心的时间为8min。 [0017] 在本发明的一些具体实施方案中，所述炒制起始的温度为149～151℃； [0018] 所述炒制结束的温度为200～229℃； [0019] 所述炒制的时间为7min； [0020] 所述煨制起始的温度为170～175℃； [0021] 所述煨制结束的温度为215～224℃； [0022] 所述煨制的时间为18min。 [0023] 第二方面，本发明还提供了所述的制备方法制备的草果提取液。 [0024] 第三方面，本发明还提供了所述的草果提取液在抑菌中的应用； [0025] 作为优选，所述抑菌为抑制牙龈卟啉单胞菌。 [0026] 第四方面，本发明还提供了所述的草果提取液在制备抑菌制品中的应用； [0027] 作为优选，所述抑菌为抑制牙龈卟啉单胞菌。 [0028] 第五方面，本发明还提供了抑菌制品，包括所述的草果提取液。 [0029] 本发明提供了草果提取液的制备方法。本发明通过对干草果去壳取仁，对草果仁进行炮制，然后对炒制草果仁、煨制草果仁、生草果仁进行提取，得到提取液后进行抑菌功效评价，通过三种不同的草果提取液抑菌功效对比得出一种炮制方法下抑菌功效更好的提取液。附图说明 [0031] 图1示草果提取液对细菌形态的作用效果； [0032] 图2示草果仁提取液对牙龈卟啉单胞菌生长曲线的影响； [0033] 图3示草果仁提取液在24h内对牙龈卟啉单胞菌的抑菌率。 具体实施方式[0034] 本发明公开了抑制牙龈卟啉单胞菌的草果提取液、其制备方法和用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。 [0035] 研究表明，草果仁提取物对人体口腔内主要的致病菌有着良好的抑制效果。本发明应用草果的这一功效，通过对草果仁进行炮制和提取，得出抑菌功效较好的草果提取液。草果炮制后有利于功效成分的溶出，提高了草果有效成分的利用，使得草果的药理功效增强。 [0036] 本发明提供了一种抑制口腔主要致病菌的草果炮制方法。 [0037] 其创新之处在于本发明通过对干草果去壳取仁，对草果仁进行炮制，然后对炒制草果仁、煨制草果仁、生草果仁进行提取，得到提取液后进行抑菌功效评价，通过三种不同的草果提取液抑菌功效对比得出一种炮制方法下抑菌功效更好的提取液。 [0038] 本发明的技术方案是通过以下措施来实现的：一种草果仁炒制方法，首先，取草果果实，将草果自然晾干，得到干燥草果整果，然后，将干燥草果整果破壳取仁，得到生草果仁。将生草果仁置于锅中炒制处理，炒至草果仁表面显微黄火色，比原材料色泽加深，见草果仁表面鼓起，出现固有香气时，晾凉至室温，密封保存。一种草果仁煨制方法，将取适量湿面皮包裹生草果仁，埋入滑石粉中加热，拌炒煨至面皮焦黄，取出后，筛去滑石粉剥去面皮，晾至室温后密封保存。 [0039] 下面是对上述发明技术方案的进一步优化说明： [0040] 上述炒制草果仁时，每一次取200g草果仁，锅内初始温度为(150±1)℃，炒制共7min，对炒制温度严格控制，结束炒制时温度为200～229℃，炒制结束后晾至室温，筛去杂质，密封保存。 [0041] 表1炒制草果仁初始温度测量 [0042] [0043] 上述煨制草果仁时，取15～20g面皮包裹草果仁，煨制重量以面皮包裹为宜，煨制前将锅中滑石粉加热至170～175℃，然后埋入包裹好的草果仁，煨制时间为18min，对煨制温度严格控制，煨制结束后筛去滑石粉后剥去面皮，晾凉后筛去杂质密封保存。 [0044] 本发明中煨制草果仁时，严格控制煨制初始温度在170～175℃，结束温度在215～224℃，煨制时间18min。 [0045] 表2煨制草果初始温度测量表 [0046] [0047] 本发明是通过对传统草果炮制工艺的创新，从对带壳草果进行炮制到对去壳的草果进行炮制，草果中活性成分集中于草果仁中，通过对草果仁进行炮制，可以缓和药性，提高了草果有效成分的浸出率和利用率。本发明炮制工艺安全可靠，使草果在中药方面的应用提供基础，为草果提取液的原料品质提供了保障。 [0048] 本发明公开了一种抑制口腔主要致病菌的草果炮制方法。用此炮制的草果仁制备的提取液具有提升抑制口腔主要致病菌(牙龈卟啉单胞菌)的作用。所述的草果炒制方法为草果去壳取仁，经过(150±1)℃以及7min的制备得到炒制草果仁。所述的草果煨制方法为对草果去壳取仁，制备面皮，利用面皮包裹草果仁，加入温度为170～175℃的滑石粉的锅内拌炒煨至面皮焦黄，煨制共18min，取出筛去滑石粉后剥去面皮，得到煨制草果仁。通过对比利用炒制草果仁、煨制草果仁、生草果仁处理后抑菌效果评价，炒制、煨制草果仁提取液抑制牙龈卟啉单胞菌效果高于生草果仁。因此，本发明得出一种抑制口腔主要致病菌的草果仁炮制方法。 [0049] 本发明提供的抑制牙龈卟啉单胞菌的草果提取液、其制备方法和用途中所用原料及试剂均可由市场购得。 [0050] 下面结合实施例，进一步阐述本发明： [0051] 实施例1 [0052] 本实施例中炒制草果仁通过下述方法得到：将生草果仁置于锅中进行炒制，炒至草果仁表面鼓起，显微黄火色，比原材料色泽加深，出现固有香气时结束炒制，晾至室温，密封保存。 [0053] 本实施例中煨制草果仁通过下述方法得到：取适量湿面皮包裹生草果仁，煨制前锅内加入滑石粉加热至170℃，将包好的草果仁埋入热滑石粉中拌炒煨至面皮焦黄，煨制时间为18min，结束温度在215℃，取出筛去滑石粉剥去面皮，晾凉后密封保存。 [0054] 本实施例中草果仁是指自然晾干的草果整果破壳取仁，得到生草果仁。 [0055] 本实施例中炒制草果仁时，每一次取200g的草果仁，锅内初始温度为149℃，时间为7min，严格控制炒制温度，结束炒制温度200℃。 [0056] 本实施例中煨制草果仁时，以15～20g面皮包裹草果仁，重量以面皮包裹为宜。 [0057] 本实施例的炒制和煨制草果提取液通过下述方法得到：取炒制和煨制后的草果仁适量，用粉碎机粉碎后称量500g于多功能真空浓缩机中，以料液比(W/W)1:5加入乙醇(乙醇浓度90‑95％)，搅拌后用保鲜膜封口静置浸泡1h，进行浸提，提取条件为：提取温度为65‑70℃，提取时间为1h。提取结束后用200目滤布过滤，收集滤液，浓缩(20：1)后，冷冻干燥(冷阱温度‑25℃，加热温度55℃，真空度75Mpa)72h，接着用20％二甲基亚砜复溶，用超声频率40kHz助溶30min，在12000rpm下离心8min后取上清。 [0058] 实施例2 [0059] 本实施例中炒制草果仁通过下述方法得到：将生草果仁置于锅中进行炒制，炒至草果仁表面鼓起，显微黄火色，比原材料色泽加深，出现固有香气时结束炒制，晾至室温，密封保存。 [0060] 本实施例中煨制草果仁通过下述方法得到：将生草果仁取适量以湿面皮包裹，煨制前锅内加入滑石粉加热至175℃，将包好的草果仁埋入热滑石粉中拌炒煨至面皮焦黄，煨制时间为18min，结束温度在219℃，取出筛去滑石粉剥去面皮，晾凉后密封保存。 [0061] 本实施例中草果仁是指自然晾干的草果整果破壳取仁，得到生草果仁。 [0062] 本实施例中炒制草果仁时，每一次取草果仁200g，锅内起始温度为150℃7min，严格控制炒制温度，结束炒制温度223℃。 [0063] 本实施例中煨制草果仁时，以15～20g面皮包裹草果仁，重量以面皮包裹为宜。 [0064] 本实施例的炒制和煨制草果提取液通过下述方法得到：取炒制和煨制后的草果仁适量，用粉碎机粉碎后称量500g于多功能真空浓缩机中，以料液比(W/W)1:5加入乙醇(乙醇浓度90‑95％)，混匀后用保鲜膜封口，静置浸泡1h，进行浸提，提取条件为：提取温度65‑70℃，提取时间1h。提取结束后用200目滤布过滤，收集滤液，浓缩(20：1)后，冷冻干燥(冷阱温度‑25℃，加热温度55℃，真空度75Mpa)72h，接着用20％二甲基亚砜复溶，用超声频率40kHz助溶30min，在12000rpm下离心8min后取上清。 [0065] 实施例3 [0066] 本实施例中炒制草果仁通过下述方法得到：将生草果仁置于锅中进行炒制，炒至草果仁表面鼓起，显微黄火色，比原材料色泽加深，出现固有香气时结束炒制，晾至室温，密封保存。 [0067] 本实施例中煨制草果仁通过下述方法得到：取适量以湿面皮包裹生草果仁，煨制前锅内加入滑石粉加热至171℃，将包好的草果仁埋入热滑石粉中拌炒煨至面皮焦黄，煨制时间为18min，结束温度在224℃，取出筛去滑石粉剥去面皮，晾凉后密封保存。 [0068] 本实施例中草果仁是指自然晾干的草果整果破壳取仁，得到生草果仁。 [0069] 本实施例中炒制草果仁时，每一次取200g草果仁，锅内初始温度为151℃炒制7min，严格控制炒制温度，结束炒制温度229℃。 [0070] 本实施例中煨制草果仁时，取15～20g面皮包裹草果仁，重量以面皮包裹为宜。 [0071] 本实施例的炒制和煨制草果提取液通过下述方法得到：取炒制和煨制后的草果仁适量，用粉碎机粉碎后称量500g于多功能真空浓缩机中，以料液比(W/W)1:5加入乙醇(乙醇浓度90‑95％)，混匀后用保鲜膜封口，静置浸泡1h，进行浸提，提取条件为：提取温度65‑70℃，提取时间1h。提取结束后用200目滤布过滤，收集滤液，浓缩(20：1)后，冷冻干燥(冷阱温度‑25℃，加热温度55℃，真空度75Mpa)72h，接着用20％二甲基亚砜复溶，用超声频率40kHz助溶30min，在12000rpm下离心8min后取上清。 [0072] 实施例1‑3抑菌效果对比得到，实施例2得到的抑菌圈直径最大，说明实施例2抑菌效果最好，抑菌实验结果如下。因此，选择优选的实施例2进行后面相关实验。 [0073] 表3抑菌实验对比(mm) [0074] [0075] 对比例1 [0076] 本对比例中生草果仁通过下述方法得到：取草果果实，将草果自然晾干，得到干燥草果整果，然后，将干燥草果整果破壳取仁，得到生草果仁。 [0077] 生草果仁提取液通过下述方法得到：取生草果仁适量，用粉碎机粉碎后称量500g于多功能真空浓缩机中，以料液比1:5(W/W)加入乙醇，混匀后用保鲜膜封口，静置浸泡1h，提取条件为：温度65‑70℃，提取时间2h。提取结束后用200目滤布过滤，收集滤液，浓缩后冷冻干燥72h。 [0078] 实施例4 [0079] 为了证明所述草果提取液对牙龈卟啉单胞菌的抑菌功效，选取口腔内常见的致病菌牙龈卟啉单胞菌(ATCC BAA‑308)：广东省微生物菌种保藏中心，采用扫描电镜观察草果提取液处理后的牙龈卟啉单胞菌的菌体形态，验证所述提取液抑菌功效。 [0080] 1、实施例2、对比例1制备的草果提取液抑制牙龈卟啉单胞菌实验。 [0081] 配制5％脱纤维羊血TSA固体培养基→菌种活化→传代培养→制备菌悬液→草果提取液置于离心管中→加入等体积菌悬液→样品终浓度为MIC(最低抑菌浓度)→37℃恒温、严格厌氧条件孵育24h→离心后用无菌PBS洗涤2‑3次→用2.5％的戊二醛固定过夜→用PBS洗涤2次→依次用30％、50％、70％、90％以及100％的乙醇脱水后风干→喷金后置于扫描电镜中观察。详细实验步骤如下： [0082] (1)配制5％脱纤维羊血TSA固体培养基:称取9.5g TSA加入到装有250mL无菌水的锥形瓶中，封口，于121℃高压下灭菌20分钟，冷却至50℃时加入12.5mL的无菌脱纤维羊血，摇晃均匀倒平板，得到5％脱纤维羊血TSA固体培养基。 [0083] (2)配制BHI培养基:称取9.25g BHI加入装有250mL无菌水的锥形瓶中，封口，121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。 [0084] (3)菌种活化：吸取菌种复苏液至菌种冻干管中，振荡溶解，吸取全部菌液涂布到5％脱纤维羊血TSA平板上，于37℃恒温培养箱中厌氧培养72h。 [0085] (4)制备菌悬液：挑取单菌落于BHI培养基中，培养至对数生长期，取适量菌液于盛有无菌PBS的离心管中，振荡均匀后采用酶标仪测定菌液OD600≈0.1。 [0086] (4)将草果提取液与菌悬液等量混合于离心管中，放入厌氧袋，在37℃下恒温孵育24h，于6000rpm下离心10min，用PBS洗涤2‑3次，放置于4℃的冰箱中，用2.5％的戊二醛固定过夜，用PBS洗涤后，依次用30％、50％、70％、90％以及100％的乙醇脱水，自然风干后，粉末置于导电胶上，喷金后置于扫描电子显微镜中观察细菌形态。 [0087] 效果例1实施例4的实验结果 [0088] 所述草果提取液对细菌形态的作用效果如图1所示，所述草果提取液均能使牙龈卟啉单胞菌的细胞发生皱缩变形，甚至破裂，说明均有抑制作用。 [0089] 实施例5 [0090] 为了进一步证明所述草果提取液具有抑菌功效，通过提取液对牙龈卟啉单胞菌生长曲线影响的实验，进一步验证所述提取液抑菌功效。 [0091] 1、实施例2、对比例1制备的草果提取液抑制牙龈卟啉单胞菌实验。 [0092] 配制5％脱纤维羊血TSA固体培养基→菌种活化→传代培养→制备菌悬液→配制BHI液体培养基→草果提取液用BHI培养基稀释→加入菌悬液 [0093] →37℃恒温、严格厌氧条件培养72h→每隔6h测定OD600值。详细实验步骤如下： [0094] (1)配制5％脱纤维羊血TSA固体培养基:称取9.5g TSA加入到装有250mL无菌水的锥形瓶中，封口，于121℃高压下灭菌20分钟，冷却至50℃时加入12.5mL的无菌脱纤维羊血，摇晃均匀倒平板，得到5％脱纤维羊血TSA固体培养基。 [0095] (2)配制BHI培养基:称取9.25g BHI加入装有250mL无菌水的锥形瓶中，封口，121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。 [0096] (3)菌种活化：吸取菌种复苏液至菌种冻干管中，振荡溶解，吸取全部菌液涂布到5％脱纤维羊血TSA平板上，于37℃恒温培养箱中厌氧培养72h。 [0097] (4)制备菌悬液：挑取单菌落于BHI培养基中，培养至对数生长期，取适量菌液于盛有无菌PBS的离心管中，振荡均匀后采用酶标仪测定菌液OD600≈0.1。 [0098] (5)将制备好的草果提取液，用BHI稀释，取100μL稀释液置于96孔板中，并加入等量的菌悬液，使得草果提取液终浓度为MIC(最低抑菌浓度)，置于厌氧袋中，在37℃下恒温培养，间隔6h测定OD600。其中空白对照为100μLPBS加上100μL菌液，参比组为等浓度的草果提取液，以消除提取液颜色的影响，重复3次。通过牙龈卟啉单胞菌生长曲线实验，草果提取液具有抑制口腔细菌生长的效果，达到实验目的。 [0099] 效果例2实施例5的实验结果 [0100] 图2、表4为草果仁提取液对牙龈卟啉单胞菌生长曲线的影响。 [0101] 表4生长曲线实验 [0102] [0103] 结果见图2和表4，草果提取液在最低抑菌浓度下均能较好的抑制牙龈卟啉单胞菌的生长，而比起生草果仁提取液，炒草果仁提取液和煨草果仁提取液整体的OD600值更低，说明炮制后的草果仁提取液对抑制牙龈卟啉单胞菌生长的效果更优。并且在72h时炒草果仁提取液和煨草果仁提取液的OD600值更低，说明比起生草果仁提取液，炒草果仁提取液和煨草果仁提取液能更好地降低牙龈卟啉单胞菌的群体密度。此外，在18h‑60h，煨草果仁提取液处理后的OD600值要小于炒草果仁提取液，所以整体而言，抑制牙龈卟啉单胞菌效果排序为：煨草果仁提取液>炒草果仁提取液>生草果仁提取液。 [0104] 实施例6 [0105] 为了进一步对比所述草果提取液具有抑菌功效，通过测定提取液对牙龈卟啉单胞菌的抑菌率，进一步比较所述提取液抑菌功效。 [0106] 1、实施例2、对比例1制备的草果提取液抑制牙龈卟啉单胞菌实验。 [0107] 配制5％脱纤维羊血TSA固体培养基→菌种活化→传代培养→制备菌悬液→配制BHI液体培养基→草果提取液用BHI培养基稀释→加入菌悬液 [0108] →37℃恒温、严格厌氧条件培养24h→测定OD600值。详细实验步骤如下： [0109] (1)配制5％脱纤维羊血TSA固体培养基:称取9.5g TSA加入到装有250mL无菌水的锥形瓶中，封口，于121℃高压下灭菌20分钟，冷却至50℃时加入12.5mL的无菌脱纤维羊血，摇晃均匀倒平板，得到5％脱纤维羊血TSA固体培养基。 [0110] (2)配制BHI培养基:称取9.25g BHI加入装有250mL无菌水的锥形瓶中，封口，121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。 [0111] (3)菌种活化：吸取菌种复苏液至菌种冻干管中，振荡溶解，吸取全部菌液涂布到5％脱纤维羊血TSA平板上，于37℃恒温培养箱中厌氧培养72h。 [0112] (4)制备菌悬液：挑取单菌落于BHI培养基中，培养至对数生长期，取适量菌液于盛有无菌PBS的离心管中，振荡均匀后采用酶标仪测定菌液OD600≈0.1。 [0113] (5)将制备好的草果提取液，用BHI稀释，取100μL稀释液置于96孔板中，并加入等量的菌悬液，使得草果提取液终浓度为MIC(最低抑菌浓度)，置于厌氧袋中，在37℃下恒温培养24h后测定OD595。其中空白对照为100μLPBS加上100μL菌液，重复3次，采用公式[(OD空白(595)‑OD实验组(595))×100％]/OD空白(595)计算抑菌率。通过测定草果提取液对牙龈卟啉单胞菌的抑菌率，进一步对比草果提取液对口腔细菌生长的抑制效果，达到实验目的。 [0114] 效果例3实施例6的实验结果 [0115] 图3、表5为草果仁提取液在24h内对牙龈卟啉单胞菌的抑菌率。 [0116] 表5抑菌率实验(％) [0117] [0118] 结果见图3和表5，生草果仁提取液的抑菌率为60.57±5.67％，炒草果仁提取液的抑菌率为82.36±10.60％，煨草果仁提取液的抑菌率为91.46±7.51％。 [0119] 综合所述，以上所述炒制草果仁提取液、煨制草果仁提取液、生草果仁提取液牙龈卟啉单胞菌有很好的抑制效果，其中，抑菌效果排序为：煨制草果仁提取液>炒制草果仁提取液>生草果仁提取液。 [0120] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。 |
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