一种苏丹黑B染色液及其制备方法和用途
| 专利类型 | 发明授权 | 法律事件 | 公开; 实质审查; 授权; |
| 专利有效性 | 有效专利 | 当前状态 | 授权 |
| 申请号 | CN201110037185.X | 申请日 | 2011-02-14 |
| 公开(公告)号 | CN102181173B | 公开(公告)日 | 2015-08-19 |
| 申请人 | 复旦大学附属妇产科医院; | 申请人类型 | 企业 |
| 发明人 | 张晓金; 陈允钦; | 第一发明人 | 张晓金 |
| 权利人 | 复旦大学附属妇产科医院 | 权利人类型 | 企业 |
| 当前权利人 | 复旦大学附属妇产科医院 | 当前权利人类型 | 企业 |
| 省份 | 当前专利权人所在省份：上海市 | 城市 | 当前专利权人所在城市：上海市黄浦区 |
| 具体地址 | 当前专利权人所在详细地址：上海市黄浦区方斜路419号 | 邮编 | 当前专利权人邮编： |
| 主IPC国际分类 | C09B67/10 | 所有IPC国际分类 | C09B67/10 ; G01N27/447 |
| 专利引用数量 | 4 | 专利被引用数量 | 0 |
| 专利权利要求数量 | 8 | 专利文献类型 | B |
| 专利代理机构 | 上海专利商标事务所有限公司 | 专利代理人 | 张睿; |
| 摘要 | 本 发明 公开了一种苏丹黑B 染色 液及其制备方法和用途。本发明提供的苏丹黑B染色液中含有异丙醇和乙二醇，以异丙醇和乙二醇的总体积计，其中含有的异丙醇的体积百分比大于等于60％并小于等于80％。 | ||
| 权利要求 | 1.一种苏丹黑B染色液，其中含有异丙醇和乙二醇，以异丙醇和乙二醇的总体积计，其中含有的异丙醇的体积百分比为大于等于60％并小于等于80％。 |
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| 说明书全文 | 一种苏丹黑B染色液及其制备方法和用途技术领域背景技术[0002] 苏丹黑B是一种脂溶性染料，应用于生物医学对脂质进行定性和定量分析。通常使用的苏丹黑B染色液由于其溶解其中的溶剂比重轻、易挥发，造成溶液浓度不稳定，加入染色液时漂浮在待染血清的表面，出现苏丹黑B析出，部分会残留在管壁上。染色液容易出现溶质分散不均一，使溶液浓度会出现不稳定现象，如观察到保存的染色液会出现沉渣，以及染色效果的不均匀，从而最终导致脂质染色分析出现严重误差。 [0003] 因此本领域迫切需要提供一种新的苏丹黑B染色液。 发明内容[0004] 本发明旨在提供一种全新的苏丹黑B染色液及其制备方法和用途。 [0005] 在本发明的第一方面，提供了一种苏丹黑B染色液，其中含有异丙醇和乙二醇，以异丙醇和乙二醇的总体积计，其中含有的异丙醇的体积百分比范围为大于等于60％并小于等于80％。 [0006] 上述提供的苏丹黑B染色液中，以染色液的总体积计，其中含有苏丹黑B0.5-1.0w/v％(g/100ml)。 [0007] 在本发明的第二方面，提供了一种如上所述的本发明提供的苏丹黑B染色液的制备方法，所述的方法包括步骤： [0008] (a)将苏丹黑B与异丙醇和乙二醇混合，得到如上所述的本发明提供的苏丹黑B染色液； [0009] 以异丙醇和乙二醇的总体积计，其中含有的异丙醇的体积百分比范围为大于等于60％并小于等于80％。 [0010] 在另一优选例中，所述的方法包括步骤： [0011] (1)将苏丹黑B与异丙醇和乙二醇混合，得到混合溶液1； [0012] 以异丙醇和乙二醇的总体积计，其中含有的异丙醇的体积百分比范围为大于等于60％并小于等于80％； [0013] (2)将混合溶液1在30-40℃20-30小时；和 [0014] (3)离心得到如上所述的本发明提供的苏丹黑B染色液。 [0015] 在另一优选例中，所述的方法中，以染色液的总体积计，其中含有苏丹黑B0.5-1.0w/v％(g/100ml)。 [0016] 在另一优选例中，所述的混合在避光条件下进行。 [0017] 在另一优选例中，得到的苏丹黑B染色液室温下(15-25℃)保存在避光容器内。 [0018] 在本发明的第三方面，提供了一种如上所述的本发明提供的苏丹黑B染色液的用途，用于血脂电泳分析。 [0020] 图1是凝胶电泳法检测血脂的染色效果；其中 [0021] A：1.0％苏丹黑B-异丙醇，即溶剂为异丙醇的苏丹黑B染色液，以下同； [0022] B：1.0％苏丹黑B-异丙醇∶乙二醇(4∶1)，即溶剂为异丙醇和乙二醇的苏丹黑B染色液，并且异丙醇和乙二醇的体积比为4∶1，以下同； [0023] C：0.5％苏丹黑B-异丙醇； [0024] D：0.5％苏丹黑B-异丙醇∶乙二醇(4∶1)。 [0025] 图2是凝胶电泳法检测血脂的定量扫描图谱，横坐标示电泳迁移距离，单位毫米，纵坐标示吸光度。 [0026] 图3是异丙醇占有机溶剂体积比对苏丹黑B染色效果的影响。 具体实施方式[0028] 具体地，本发明提供的苏丹黑B染色液中含有苏丹黑B和用于溶解苏丹黑B的溶剂；所述的溶剂由异丙醇和乙二醇构成，以该溶剂的总体积计，其中异丙醇的体积百分比范围为大于等于60％并小于等于80％。以染色液的总体积计，其中含有苏丹黑B0.5-1.0w/L％(g/100ml)。 [0029] 本发明提供的苏丹黑B染色液可以通过下述步骤制备得到： [0030] 第一步，将苏丹黑B与用于溶解苏丹黑B的溶剂混合，得到混合溶液1；所述的溶剂由异丙醇和乙二醇构成，以该溶剂的总体积计，其中异丙醇的体积百分比范围为大于等于60％并小于等于80％； [0031] 第二步，使混合溶液1在30-40℃下20-30小时；和 [0032] 第三步，离心得到本发明提供的苏丹黑B染色液。 [0033] 第一步中的溶解需在避光情况下进行，并且第三步得到的本发明提供的苏丹黑B染色液也必须在避光容器中存放。 [0034] 如本发明所用，“苏丹黑B”是指2，3-二氢-2，2-二甲基-6-[[4-(苯基偶氮)-1-萘]偶氮]萘嵌间二氮杂苯，其英文名称为Sudan Black B，CAS NO：4197-25-5，分子量：456.55，分子式：C29H24N6。 [0035] 如本发明所用，“避光”是指操作条件或存放物品的容器等是阻隔了光线的，或具有光线阻隔性。 [0036] 本发明提供的苏丹黑B染色液可用于生物医学血脂电泳分析，所述的血脂包括极低密度脂蛋白(VLDL)；中间密度脂蛋白(IDL)；脂蛋白(a)(Lp(a))；低密度脂蛋白(LDL)；高密度脂蛋白(HDL)；和白蛋白-游离脂肪酸(ALB-FFA)。 [0037] 本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。 [0038] 本发明的主要优点在于： [0039] 1、获得了稳定性高的苏丹黑B染色液。 [0040] 2、获得了苏丹黑B在溶剂中分散度好的苏丹黑B染色液。 [0041] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。 [0042] 本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。 [0043] 除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。 [0044] 实施例1-9 [0045] 苏丹黑B染色液1-9 [0046] 称取0.125g或0.25g苏丹黑B，再根据下表量取有机溶剂25ml，避光溶解，经过37℃水浴24小时，离心去渣，室温下密封保存于棕色瓶内。 [0047] [0048] [0049] 实施例10 [0050] 稳定性测试 [0051] 将实施例1-9得到的染色液1-9保存半年(避光，室温20-25℃条件保存)，其中的染色液1、2、3、4、5、6和9有很好的均质性，不会出现沉渣残留现象。说明具有良好的稳定性。 [0052] 实施例11 [0053] 染色效果试验 [0054] 血脂预染色、电泳分离后、定性、定量检测的方法： [0055] 血脂和苏丹黑B染色液的体积比为10∶1，将100μl的血清和10μl的染色液震荡混匀，于37℃水浴45分钟。按照专利CN200510026460.2介绍的方法电泳分离预染色的血清脂蛋白。电泳分离后，应用双波段飞点扫描仪(CS-9000，Shimadzu)和光学扫描仪(PowerLook III，UMAX)分别对凝胶管进行扫描和成像。飞点扫描单色光波长为604nm。扫描时沿凝胶管的中央轴线，从空白区向原点的方向进行。定量分析用Shimadzu CS-9000自动分析软件，取电泳峰下面积计算出相对百分含量。 [0056] 结果见图1。结果表明，本发明提供的苏丹黑B染色液对电泳法检测血脂的染色效果好，克服高密度脂蛋白的拖尾现象，倍比稀释浓度后对极低密度脂蛋白染色偏差降低，总体提高了电泳区带的分辨效果。 [0057] 定量扫描分析结果见图2。结果表明，本发明提供的苏丹黑B染色液将总峰下面积在1.0％和0.5％浓度下分别提高了25％和7％，说明本发明提供的苏丹黑B染色液提高了苏丹黑B对血脂的染色能力，同时倍比浓度的定量结果有对应关系，说明苏丹黑B在混合溶剂中的分散度和稳定性优于现有技术。 [0058] 附图3的结果表明，本发明提供的苏丹黑B染色液中异丙醇所占有机溶剂的体积百分比不低于60％，可达到优良的染色效果。随着苏丹黑B染色液的比重增大(乙二醇含量升高)，异丙醇含量降低＜60％，染色效果明显降低，脂蛋白着色变浅，LDL分散不均而区带扭曲。通过降低异丙醇所占溶剂的体积比，增加乙二醇的含量，虽然可以提高有机溶剂比重，但是容易造成脂蛋白染色定量分析偏差。丙三醇同样是一种高比重有机溶剂，若用丙三醇与异丙醇混合有机溶剂，同样可以提高溶剂比重。 |
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