尽管有大量信息，流感仍是人、低等哺乳动物和鸟类的潜在的毁灭性疾 病。一旦开始传染，就没有有效的疫苗，也没有治疗方法。
流感病毒由8段单链RNA构成，它们被有序地包装在病毒粒子(virion)中。每 一段编码主病毒蛋白质中的一种。复制复合体被一层膜所包裹，该膜由与脂双 层相连的基质蛋白质所构成。包埋在脂双层中的是两个表面糖蛋白刺突，即血 凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。该病毒所有的基因都已被克隆，而且表面糖蛋白 的三维结构也已被确定。
流感病毒不断地在中和抗体所针对的两个表面抗原HA和NA中发生抗原变 异。因此，疫苗和主体的天然免疫系统并不十分有效。目前，注意力被转向寻 找作用于病毒粒子其他位点的其他潜在抗病毒剂。本发明涉及可用于抑制病毒 表面酶NA的新颖化合物。
此外，许多其他生物体携带NA。这些具有NA的生物体中的许多种类也是 人和/或哺乳动物的主要病原体，其中包括：霍乱弧菌(Vibraeo cholerae)、产气 荚膜梭状芽胞杆菌(Clostridium perfringes)、肺炎链球菌、Arthrobacter sialophilas，和其他病毒如副流感病毒、腮腺炎病毒、新城疫病毒、鸡瘟病毒 (fowl plague virus)和仙台病毒。本发明化合物也可用于抑制这些生物体的NA。
在病毒中，NA是四聚体，它由四个大致球形的亚基和中央相连杆(stalk)构 成，该杆具有疏水区并由此被包埋在生物体的膜中。已提出NA有数种功能。该 酶催化切割末端唾液酸和相邻糖基之间的α-酮苷键。去除唾液酸会减低粘度并 允许病毒进入上皮细胞。NA还摧毁宿主细胞上的HA受体，从而允许将子代病毒 颗粒从被感染的细胞中释放出来。
研究表明，对于主要的流感病毒株而言，流感的神经氨酸酶的活性位点基 本上没有改变。例如，通过A和B亚型流感的序列比较，显示出具有关键结构和 功能作用的保守残基。尽管序列同源性仅约30％，但是许多起催化的残基是保守 的。此外，A和B型流感的神经氨酸酶的三维结构已经被确定。将各种结构叠加 后，显示出活性位点的结构极其相似。因为在所有已知A型流感的目前已经被测 序的神经氨酸酶中，活性位点的氨基酸残基是保守的，因此可以根据神经氨酸 酶的三维结构，来设计有效针对不同A和/或B型流感病毒株的神经氨酸酶的抑制 剂。
一般，NA的作用被认为是与病毒移向和离开感染位点有关。可抑制神经氨 酸酶活性的化合物可以保护主体免受感染，和/或一旦被感染就治愈主体。本发 明的另一目的是提供一种使用本发明化合物用于治疗和/或治愈病毒性感染的方 法。
已知神经氨酸的类似物，如2-脱氧-2,3-二脱氢-N-乙酰基神经氨酸(DANA)及 其衍生物，可以在体外抑制HA；然而，这些化合物在体内是无活性的。Palese 和Schulman,CHEMOPROPHYLAXIS AND VIRUS INFECTION OF THE UPPER RESPIRATORY TRACT,Vol.1(J.S.Oxford编)，CRC Press,1977,ps 189-205。
Von Itzstein等人描述了下式的α-D-神经氨酸的环己烷类似物及其药物盐， 它们被用作抗病毒剂： 式中：
A在式(a)中是O、C、或S，在式(b)中为N或C；
R1是CO2H、PO3H2、NO2、SO2H、SO3H、四唑基-、CH2CHO、CHO或 CH(CHO)2；
R2是H、OR6、F、Cl、Br、CN、NHR6、SR6或CH2X，其中X是NHR6、卤原 子或OR6；
R3和R3′是H、CN、NHR6、SR6、=NOR6、OR6、胍基、NR6；
R4是NHR6、SR6、OR6、CO2R6、NO2、C(R6)3、CH2CO2R6、CH2NO2或 CH2NHR6；
R5是CH2YR6、CHYR6CH2YR6或CHYR6CHYR6CH2YR6；
R6是H、酰基、烷基、烯丙基或芳基；
Y是O、S、NH或H。
此外，在美国专利5,453,533中提出了可作为流感病毒神经氨酸酶抑制剂的 一类苯衍生物，其他各种化合物公开于美国专利申请08/413,886中。Yamamoto 等人描述了具有神经氨酸酶抑制活性的各种唾液酸异构体(Synthesis of Sialic Acid Isomers With Inhibitory Activity Against Neuraminidase,TETRAHEDRON LETTERS,vol.33,No.39,pp.5991-5794,1992)。
Gilead Sciences,Inc的WO 96/26933描述了可能作为神经氨酸酶抑制剂的某 些6元环化合物。
然而，这些文献中没有一篇公开过本发明的环戊烷衍生物。
发明概述
本发明一方面涉及下式化合物及其药学上可接受的盐： 式中 X是CH2、O或S； R1是H、OH、NH2或OR11； R9是CO2H、SO3H、PO3H2、NO2、其酯、或其盐； R2是H、 NHSO2R5、 SO2NHR5、 或 每个R3和R8独立地为H、(CH2)nCO2R10、(CH2)mOR10、CON(R10)m、(CH2)nN(R10)m、 CH(R10)m、(CH2)n(R10)m、CH2CH(OR10)CH2OR10、CH(OR10)CH(OR10)CH2OR10、 CH2OR10、CH(OR10)CH2NHR10、CH2CH(OR10)CH2NHR10、 CH(OR10)CH(OR10)CH2NHR10、或NR10C(=NR10)N(R10)m； 条件是R2、R3和R8中至少一个不是H； R4是H、(CH2)nOH、(CH2)nNH2、(CH2)nC(=NH)NH2、(CH2)nNHC(=NR7)NH2、 (CH2)nCN或(CH2)nN3； R5是H、低级烷基、支链烷基、环烷基或CF3； R7是H、OH、CN、NH2或NO2； 每个R10独立地为H、低级烷基、低级烯基(allkylene)、支链烷基、环烷基、取代的环 烷基、(CH2)n芳基、(CH2)n-取代芳基，而且当m是2时，两个R10基团还可相互连接形 成N-杂环； R11是低级烷基、支链烷基或(CH2)m芳基； m是1或2；和 n是0-4；而且 进一步的条件是，当X为O或S时，R3和R8不是CH(OR10)CH(OR10)CH2OR10。
本发明还涉及用于抑制流感病毒神经氨酸酶的组合物，它含有药学上可接 受的载体和抑制流感病毒神经氨酸酶有效量的上述化合物。
本发明的另一方面涉及一种抑制流感病毒的方法，它包括：向需要的病人 施用抑制流感病毒神经氨酸酶有效量的上述化合物。
本发明的又一方面涉及治疗流感病毒感染，它包括向需要病人施用抑制流 感病毒神经氨酸酶有效量的上述化合物。
本发明还涉及生产上述化合物的方法。
实施发明的最佳方式和各种方式
本发明一方面涉及下式化合物及其药学上可接受的盐： 式中 X是CH2、O或S； R1是H、OH、NH2或OR11； R9是CO2H、SO3H、PO3H2、NO2、其酯、或其盐； R2是H、 NHSO2R5、 SO2NHR5、 或 每个R3和R8独立地为H、(CH2)nCO2R10、(CH2)mOR10、CON(R10)m、(CH2)nN(R10)m、 CH(R10)m、(CH2)n(R10)m、CH2CH(OR10)CH2OR10、CH(OR10)CH(OR10)CH2OR10、 CH2OR10、CH(OR10)CH2NHR10、CH2CH(OR10)CH2NHR10、 CH(OR10)CH(OR10)CH2NHR10、或NR10C(=NR10)N(R10)m； 条件是R2、R3和R8中至少一个不是H； R4是H、(CH2)nOH、(CH2)nNH2、(CH2)nC(=NH)NH2、(CH2)nNHC(=NR7)NH2、 (CH2)nCN或(CH2)nN3； R5是H、低级烷基、支链烷基、环烷基或CF3； R7是H、OH、CN、NH2或NO2； 每个R10独立地为H、低级烷基、低级烯基(alkylene)、(CH2)n芳基、支链烷基、环烷 基、取代的环烷基、(CH2)n-取代芳基，而且当m是2时，两个R10基团还可相互连接形 成N-杂环； R11是低级烷基、支链烷基或(CH2)m芳基； m是1或2；和 n是0-4；而且 进一步的条件是，当X为O或S时，R3和R8不是CH(OR10)CH(OR10)CH2OR10。
对于R10，当m=2时，每个R10可以相同或不同。
所述低级烷基含有约1-8个碳原子，较佳地1-3个碳原子，它可以是直链、支 链或环状的饱和脂族烃基。
合适的烷基例子包括甲基、乙基和丙基。支链烷基的例子包括异丙基和叔 丁基。合适的环状脂族基团例子通常含有3-8个碳原子，而且包括环戊基和环己 基。芳基宜为苯基或烷基取代的芳基(芳烷基)如苯基C1-3烷基，如苄基。
取代的环烷基的例子包括在环中通常含有3-8个碳原子，并通常被具有1-6个 碳原子的烷基和/或羟基取代的环脂族基团。通常，存在1或2个取代基。
低级烯基(alkylene)可以是直链、支链或环状的不饱和烃基，而且含有2-8个 碳原子，较佳地含有2-3个碳原子。烯基的例子是乙烯基、1-丙烯基、烯丙基、 异丙烯基、2-甲基-2-丙烯基和环戊烯基。
N-杂环在环中含有3-7个碳原子。杂环可以是取代的，例如被低级烷基所取 代。合适的杂环基团的例子是1-吡咯烷基(pyrrolidino)、1-吖丁啶基(azetidino)、 哌啶子基、3,4-二脱氢哌啶子基、2-甲基哌啶子基和2-乙基哌啶子基。
式(Ⅰ)化合物的药学上可接受的盐包括那些衍生自药学上可接受的无机的和 有机的酸和碱的盐。酸的合适例子包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、 富马酸、马来酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、甲苯-p-磺酸、酒石 酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸、三氟乙酸和 苯磺酸。
盐可衍生自合适的碱性物质包括碱，如钠和氨。
在本发明范围内的某些具本化合物例子是：
顺式-3-[(甲基羰基氨基)甲基]环戊烷甲酸；
反式-3-氨基-c-4-(甲基羰基氨基)甲基-r-环戊烷甲酸；
反式-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(甲基羰基氨基)甲基]环戊烷-r-甲 酸；
4β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-3α-[(2-羟基-1-甲基羰基氨基)乙基]-1-环戊烷 甲酸；
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)乙基]环戊烷- r-甲酸钠；
反式-3-氨基-反式-1-羟基-顺式-4[(羟甲基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊烷-r-甲 酸；
反式-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-反式-1-羟基-顺式-4-[(2-羟甲基)(1-甲基 羰基氨基)乙基]环戊烷-r-甲酸；
3β-氨基-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2,3,4-三羟基)丁基]环戊烷甲酸；
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2,3,4-三羟基)丁基]-环 戊烷甲酸；
顺式-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-反式-1-羟基-反式-4-[(1-甲基羰基氨 基)(2-三氟甲基羰基氧基)乙基]-环戊烷-r-甲酸；
t-3-氨基-c-4-[(1-甲基羰基氨基)(2-苯基甲氧基)乙基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲 酸；
c-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基]}-t-1-羟基-t-4-{(甲基羰基氨基){[(甲基)-(甲 氧基)氨基]羰基}甲基}环戊烷-r-甲酸；
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-{{4-[(甲氧基)(甲基)氨基]-1-(甲基羰基氨 基)-2-氧}丁基}环戊烷甲酸；
t-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(二乙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸；
t-3-氨基-c-4-[(二正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲 酸；
t-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(二正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]-t-羟基环戊烷-r-甲酸；
c-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-t-4-[(二正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸；
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(二正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]环戊烷甲酸；
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(甲基羰基氨基)(3-戊基氨基羰基)甲基] 环戊烷甲酸；
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(二乙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基] 环戊烷甲酸；
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-{[(乙基)(丙基)氨基羰基](甲基羰基氨基) 甲基}环戊烷甲酸；
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-{[(乙基)(丙基)氨基羰基](甲基羰基氨基) 甲基}环戊烷甲酸；
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[1-(1-甲基羰基氨基)戊-2-烯基]环戊烷甲 酸；
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[1-(1-甲基羰基氨基)戊基]环戊烷甲酸。
此外，一种代表性的关键中间体，3-t-丁氧基羰基氨基-4-甲酰基环戊烷甲酸 甲酯6(流程4)，可以用3-羟基-4-羟甲基环戊烷甲酸甲酯1合成(在附页中给出合成 过程)。1的伯羟基可以用TBDMS(叔丁基二甲基甲硅烷基)进行保护；通过 Mitsunobu反应(Ph3P,DEAD(偶氮二羧酸二乙酯)，N3H)，仲羟基可形成叠氮基 3；叠氮基3被还原(H2,Pd/C，在(t-boc)2O存在下)，形成受保护的胺4；伯羟基 可以被去保护并且在氧化时形成关键的中间体醛6。
如流程5所示，醛6可以与合适的烯丙基或乙烯基三丁基锡化合物偶合，从 而引入乙二醇或丙三醇侧链部分。该流程是以乙烯基三丁基锡进行阐述的。在 化合物7中的t-boc基团可以被除去(三氟乙酸)，形成胺8，然后该胺与双 boc(-OC(=O)C(CH3)3)硫脲反应，形成受保护的胍9。9的羟基通过Mitsunobu反应可形 成叠氮化物10；该叠氮化物可以被还原成胺11，然后进一步用合适的烷基酸或 烷基磺酰氯进行酰化，形成所需的化合物12。侧链上烯丙基或乙烯基的双键， 通过锇催化的二羟基化而形成化合物13，该化合物通过进一步的去保护可产生 所需的靶化合物14。
在化合物13的去保护阶段之前，伯羟基可以被转变成甲苯磺酰基(4-CH3苯 基SO2)。将甲苯磺酰基转变为叠氮化物，并将叠氮化物转变为胺，可形成 R3=CH(OH)CH2NH2、CH(OH)CH(OH)CH2NH2或CH2CH(OH)CH2NH2的化合物。
在流程6中，给出了制备R7为OH、CN、NH2或NO2的化合物的合成途径。胺 8通过与溴化氰的反应而形或氰胺(cyanamine)15；侧链可以按流程5中所示的相 同方式进行操作，形成16；氰胺16与盐酸羟胺、肼或氰氨进一步反应，形成合 适的化合物17，该化合物在去保护后产生靶化合物18。
8与2-甲基-1-硝基-2-硫代假脲反应，形成化合物18(R7=NO2)。当R2是 时，12类型的化合物通过与P2S5或Lawsson氏试剂(2,4-二(4-甲氧基苯 基)-1,3-二噻-2,4-二phosphetane-2,4-二硫化物)，可形成化合物19，该化合物通过 进一步反应可被转变成所需的靶化合物。
制备关键化合物5的等价物的其他方法示于流程8和9中。中间体25可以用两 种不同方法进行制备：
ⅰ)流程8：丙二酸二甲酯与氢化钠反应，然后与顺式1,4-二氯-2-丁烯反应， 形成1,1-二甲基-3-环戊烯二羧酸酯20。化合物20被皂化、脱羧和酯化，形成3-环 戊烯的苄基酯22。化合物22通过与PhI=NTS的反应，形成氮丙啶23。用二苯硫基 甲烷(bisphenylthiomethane)和正丁基锂打开氮丙啶，形成化合物24。化合物24通 过与氧化铜和氯化铜的反应，可形成化合物25。化合物25可以用于流程5，并且 按化合物5相同方式精心制备，形成所需的靶化合物。
ⅱ)流程9：环戊烯酯22在OsO4存在下，通过与氯胺T的羟氨化 (hydroxyamination)反应形成化合物26；接着分离异构体。所需的异构体通过与4- 硝基苯磺酰氯反应，形成化合物27。接着，ONS基团可以用二苯硫基甲烷加以 取代，形成化合物24。按上面所述的方法将其转变为化合物25。
流程4 R是苄基、低级烷基、乙酰基、苄基羰基、或低级烷基羰基
流程5
流程5(续)
流程6 当R7是OH,CN,NH2，或NO2 R是低级烷基、低级烷基羰基、低级烷基磺酰基。
流程7 R5是低级烷基
流程8 Bn是苄基。 Ts是对甲苯磺酰基。
流程9 Bn是苄基。 Ts是对甲苯磺酰基。 Ns是4-硝基苯基磺酰基。
流程10 R6是H或低级烷基。
下面的流程11阐述了由下式表示的实施例6、7、20、26、27、 28和29化合物的制备方法： 实施例 6      R=胍；R′=CH2OH异构体A在C-6 7      R=胍；R′=CH2OH异构体B在C-6 20     R=胍； 26     R=胍； 27     R=胍； 28     R=胍； ；异构体A 29     R=胍； ；异构体B
流程11
下面的流程12A或流程12B阐述了由下式表示的实施例16、17、19、24 和25化合物的制备方法： 实施例 16    R=胍； 17    R=胍； 19    R=胍； 24    R=胍； 25    R=胍；
流程12A
流程12B 实施例16和17的产物取决于前体异构体。 F～实施例6和7的化合物 F～实施例26,27,28和29的化合物 R′=N(C3H7)2＞Ex.27 R′=N(C2H5)＞Ex.26 R′=NHCH(C2H5)2＞Ex.28 & 29 F～实施例20的化合物
下面的流程13阐述了由下式表示的实施例8、9、18、21、22和23化合 物的制备方法： 实施例 8       R=NH2,R′=CH2OH9       R=胍，R′=CH2OH18      R=NH2,R′=CH2OCH2C6H521      R=胍， 22      R=NH2, 23      R=胍，
流程13
流程13(续)
流程13(续)
流程13(续)
流程13(续)
流程13(续)
实施例22
 下面的流程14阐述了由下式表示的实施例10、11、12、13、14和 15化合物的制备方法：
流程14
流程15 流程15阐述了当X为O或S的化合物的制备方法。 给出下列不起限定作用的实施例，以进一步阐述本发明。 实施例1
顺式-3-[(甲基羰基氨基)甲基]环戊烷甲酸
在约-5℃和30分钟内，向顺式-3-(甲氧基羰基)环戊烷甲酸[按Tucjan J.J. Horonowski和Walter A.Szorek.Can.J.Chem.66 61-70(1988)中所公开的程序制 备；17.2克，0.1毫摩尔]和三乙胺(10.1克，0.1毫摩尔)在四氢呋喃(300毫升)中的 混合物中，加入氯甲酸乙酯(10.9克，0.1毫摩尔)。在约-5℃进一步搅拌混合物约 15分钟。过滤形成的粘稠浆料，固体用四氢呋喃洗涤。合并后的滤液被冷却至 约10℃，搅拌并一次加入硼氢化钠(14.5克，0.38摩尔)。进一步搅拌混合物约10 分钟，然后在约10℃，于约1小时内滴加甲醇(62毫升)。当添加甲醇结束时，缓 慢加入6N盐酸直至中和。收集有机层，用乙醚萃取水层2次。合并后的有机萃取 液被干燥，过滤和浓缩。残留物被溶解在乙醚(约300毫升)中，沉淀出的白色固 体通过过滤除去。滤液被浓缩，残留物通过硅胶柱(用约2％甲醇的氯仿溶液)。 适当的流份被合并和浓缩，形成12.5克(79％)顺式-3-羟甲基环戊烷甲酸甲酯。
向顺式-3-羟甲基环戊烷甲酸甲酯(4.74克，30毫摩尔)在无水苯(约250毫升)中 的混合物，加入三苯膦(7.86克，30毫摩尔)、偶氮二羧酸二乙酯(5.22克，30毫摩 尔)和叠氮酸(2.5M甲苯溶液，14.0毫升，35毫摩尔)。混合物在室温下搅拌约16 小时。反应混合物被浓缩，残留物溶解在乙酸乙酯中并加入己烷。放置约2小时 后形成沉淀，通过过滤去除沉淀。滤液被浓缩。以氯仿为洗脱液让残留物通过 硅胶柱。合适的流份被合并和浓缩，形成2.6克(47％)顺-3-叠氮甲基-环戊烷甲酸 甲酯。
在室温下，搅拌顺-3-叠氮甲基-环戊烷甲酸甲酯(1.2克，6.5毫摩尔)和1N氢 氧化钠(12.0毫升，12毫摩尔)的混合物约8小时。用氯仿萃取碱性混合物。水层 用盐酸进行酸化，用氯仿萃取2次。合并后的来自酸性混合物的氯仿萃取液用硫 酸钠干燥，过滤并浓缩，形成约1.0克(91％)顺式-3-叠氮甲基环戊烷甲酸。 分析：  C7H11N3O2的计算值： C,49.70；H,6.55；N,24.84
    测量值：                  C,49.92；H,6.49；N,24.58
将顺式-3-叠氮甲基环戊烷甲酸(0.9克,5.3毫摩尔)在甲醇(约30毫升)中的混 合物，在约50psi和室温下，在约10％钯-碳(约40毫克)存在下氢化约1小时。过滤 除去催化剂，浓缩滤液，形成浆状物。当浆状物溶解在二甲基甲酰胺和二氯甲 烷以便乙酰化(下一步骤)时，形成了一些白色沉淀物。过滤收集沉淀物，用二氯 甲烷洗涤，然后干燥，形成顺式-3-氨基甲基环戊烷甲酸，为白色粉末，熔点为 186-188℃。浆状物的产量为0.7克(100％)。获得的白色固体约为0.35克。来自二 甲基甲酰胺和二氯甲烷混合物的残留物质没有被回收，但是被用于乙酰化步 骤。 分析：C7H13NO2·0.1H2O的计算值： C,57.99；H,9.18；N,9.66
  测量值：                          C,57.70；H,9.01；N,9.50
向顺式-3-氨基甲基环戊烷甲酸(0.2克，1.4毫摩尔)在吡啶(约5毫升)中的混合 物，加入乙酸酐(约1毫升)。在约70℃搅拌混合物约2小时。减压除去溶剂，加入 数次水并真空蒸发。获得了淡的粘稠油状物，在真空下通过丙酮回流干燥，形 成0.25克(97％)顺式-3-[(甲基羰基氨基)甲基]环戊烷甲酸。 分析：  C9H15NO3的计算值：  C,58.36；H,8.16；N,7.56
    测量值：                 C,58.90；H,7.94；N,6.90
实施例2 t-3-氨基-c-4-(甲基羰基氨基)甲基-r-环戊烷甲酸 三氟乙酸[1∶1]
在约0℃和15分钟内，向c-2-乙酰氧基-c-4-甲氧基羰基-r-环戊烷甲酸[按 Tucjan J.J.Horonowski和Walter A.Szorek.Can.J.Chem.63 2787-2797(1985)中所 公开的程序制备；23.4克，101.64毫摩尔]在四氢呋喃(约250毫升)和三乙胺(约 14.96毫升，106.7毫摩尔)的混合物中，加入氯甲酸乙酯(约10.2毫升，106.7毫摩 尔)。在相同温度下再搅拌30分钟。混合物被吸滤，滤饼用四氢呋喃(3×10毫升) 洗涤。
向滤液中一次加入硼氢化钠(15.7克，406.56毫摩尔)。然后，在约10℃，于 约1小时内滴加甲醇(64毫升)。再搅拌30分钟后，用1N HCl小心地将反应混合物 淬灭至pH7。溶剂被真空除去，获得白色固体。将固体溶解在水中(约50毫升)， 加入1N盐酸以调节至约pH6。溶液是均质的。用乙酸乙酯(4×150毫升)萃取溶 液。有机层被合并，用盐水(约150毫升)洗涤，然后用硫酸钠干燥。溶剂被真空 除去，获得白色固体。将固体溶解在乙醚中(约200毫升)，过滤除去不溶杂质。 滤液被真空浓缩，形成21.5克(97％)c-4-甲基羰基氧基甲基-c-3-羟基环戊烷甲酸甲 酯、c-3-甲基羰基氧基-c-4-羟甲基环戊烷-r-甲酸甲酯和c-3-羟基-c-4-羟甲基环戊 烷-r-甲酸甲酯的混合物。
将上述混合物溶解在甲醇(约200毫升)中，在室温下滴加甲醇钠溶液(约7毫 升，25％(重量)甲醇溶液)。搅拌反应混合物约90分钟，真空除去溶剂。白色残留 物通过闪蒸塔色谱法(flash column chromatography){20-40％[氯仿/甲醇/浓氨水 (80∶18∶2)]的二氯甲烷溶液}，形成13.2克(76％)纯c-3-羟基-c-4-羟甲基环戊烷-r-甲 酸甲酯，为白色固体。
向c-3-羟基-c-4-羟甲基环戊烷-r-甲酸甲酯(13.2克，76.3毫摩尔)、三苯膦 (44.5克，167.86毫摩尔)和偶氮二羧酸二乙酯(27.82克，167.86毫摩尔)在无水苯 (约800毫升)中的混合物，在室温和氮气下，在约30分钟内搅拌滴加叠氮酸(1M甲 苯溶液，190.75毫升，190.74毫摩尔)。反应混合物在室温下搅拌过夜，并真空浓 缩至原来体积的一半。放置后形成的沉淀通过过滤去除。滤液被真空浓缩，形 成桔色残留物。残留物用乙酸乙酯/己烷进行结晶，以去除三苯膦氧化物和1,2-乙 氧基羰基肼。滤液被真空浓缩并通过闪蒸塔色谱法(5-25％乙酸乙酯的己烷溶液) 而纯化，形成8.8克(52％)t-3-叠氮基-c-4-叠氮基甲基环戊烷-r-甲酸甲酯。
在室温下，向t-3-叠氮基-c-4-叠氮基甲基环戊烷-r-甲酸甲酯(约8.4克，37.5 毫摩尔)中加入1N氢氧化钠(112.5毫升，112.5毫摩尔)，并搅拌过夜。用氯仿(3× 20毫升)萃取反应混合物。用浓乙酸将水层酸化至pH4，用氯仿(4×25毫升)萃 取。有机层被合并，用硫酸镁干燥，用氧化硅垫板(pad)过滤，并真空浓缩，形 成7.58克(96％)t-3-叠氮基-c-4-叠氮基甲基-c-环戊烷-r-甲酸，为无色油状物。 分析：  C7H10N6O2的计算值： C,40.00；H,4.80；N,39.98
    测量值：                  C,40.24；H,4.88；N,39.73
向t-3-叠氮基-c-4-叠氮基甲基环戊烷-r-甲酸(1.05克，5.0毫摩尔)、二环己基 碳二亚胺(2.5克，12毫摩尔)和4-二甲基氨基吡啶(60毫克，0.5毫摩尔)在二氯甲烷 (约25毫升)中的溶液，在室温下，在15分钟内滴加叔丁醇(0.97毫升，10.0毫摩 尔)。在室温下搅拌过夜之后，混合物被吸滤，滤饼用乙醚(3×5毫升)洗涤。滤 液被真空浓缩，将乙醚(约25毫升)加至残留物，有机层用冷HCl(1％,20毫升)、 饱和碳酸氢钠(2×20毫升)和水(20毫升)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，然后真空去 除溶剂，获得2.92克油状物。对粗产物通过闪蒸塔色谱法(2-5％乙醚的己烷溶液) 进行纯化，得到0.39克(29％)t-3-叠氮基-c-4-叠氮基甲基-r-1-叔丁氧基羰基环戊 烷，为无色油状物。 分析： C11H18N6O2的计算值：  C,49.61；H,6.81；N,31.56
   测量值：                    C,49.83；H,6.76；N,31.38
向t-3-叠氮基-c-4-叠氮基甲基-r-1-叔丁氧基羰基环戊烷(0.33克，1.22毫摩尔) 的甲醇溶液(约10毫升)中，在氮气下加入Pd/C(0.1克，钯含量为10％)，形成的混 合物在约50psi下氢化约20分钟。排空氢气，在添加新鲜氢气之后，形成的混合 物在约50psi下氢化约40分钟。催化剂通过硅藻土(Celite)过滤而除去。滤液被真 空浓缩，形成约0.25克(97％)t-3-氨基-c-4-氨基甲基-r-1-叔丁氧基羰基环戊烷。
向冷却至0℃的t-3-氨基-c-4-氨基甲基-r-1-叔丁氧基羰基环戊烷(0.25克，1.22 毫摩尔)的二氯甲烷(约10毫升)溶液中，在约5分钟内搅拌滴加乙酸酐(0.098毫 升，1.04毫摩尔)。在0℃搅拌约1小时后，反应混合物在室温下搅拌过夜。真空 除去溶剂，获得白色固体。粗产物通过闪蒸塔色谱法{30-100％[氯仿/甲醇/浓氨 水(80∶18∶2)]的二氯甲烷溶液}进行纯化，产生以下物质：
1．t-3-甲基羰基氨基-c-4-(甲基羰基氨基)甲基-r-叔丁氧基羰基环戊烷，0.04克 (11％)，为白色固体，熔点170-172℃。 分析：  C15H26N2O4·0.25H2O的计算值： C,59.48；H,8.82；N,9.25
    测量值：                              C,59.59；H,8.82；N,9.17
2．t-3-氨基-c-4-(甲基羰基氨基)甲基-r-1-叔丁氧基羰基环戊烷，0.12克 (39％)，为白色固体，熔点86-87℃。 分析：  C13H24N2O3的计算值：          C,60.91；H,9.44；N,10.93
    测量值：                            C,60.69；H,9.40；N,10.87
3．t-3-氨基-c-4-氨基甲基-r-1-叔丁氧基羰基环戊烷，0.05克(20％)，为无色油 状物。该油状物被溶解在二氯甲烷(2毫升)中，加入乙酸(3当量)。搅拌形成的溶 解15分钟，获得的固体被过滤，获得乙酸盐形式的产物，熔点124-127℃。 分析：C11H22N2O2·2C2H4O2·0.25H2O的计算值：C,53.16；H,9.07；N,8.27
  测量值：                                          C,53.34；H,8.81；N,8.46
向t-3-氨基-c-4-(甲基羰基氨基)甲基-r-1-叔丁氧基羰基环戊烷(0.99克，0.32 毫摩尔)的二氯甲烷(约3毫升)溶液中，滴加三氟乙酸(约0.67毫升，8.8毫摩尔)， 在室温下搅拌约2小时。真空除去溶剂，过量的三氟乙酸通过与二氯甲烷(约5毫 升)一起共蒸馏2次而除去，获得0.1克(99％)t-3-氨基-c-4-[(甲基羰基氨基)甲基]- 环戊烷-r-甲酸三氟乙酸，为吸湿性黄褐色固体。 分析： C9H16N2O3·CF3CO2H的计算值：  C,42.04；H,5.45；N,8.90
   测量值：                               C,41.75；H,5.58；N,8.59
实施例3
t-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(甲基羰基氨基)甲基]-环戊烷-r-甲酸三 氟乙酸[1∶1.25]
向搅拌的、实施例2的t-3-叠氮基-c-4-叠氮基甲基环戊烷-r-甲酸(约4.0克， 19.05毫摩尔)的二氯甲烷(约40毫升)溶液中，快速加入液态异丁烯(约20毫升)， 然后滴加磷酸(通过用P2O5使2.5毫升85％H3PO4饱和而制得)的二氯甲烷(2.5毫升) 溶液和醚合三氟化硼(0.9毫升)。混合物在约-78℃搅拌2小时并室温过夜之后，加 入冰水和饱和碳酸氢钠水溶液直至混合物变为碱性。用二氯甲烷(2×20毫升)萃 取水层。有机层被合并，用水(20毫升)和盐水(20毫升)洗涤，用无水硫酸镁干 燥，并真空浓缩，形成1.7克无色油状物。粗产物通过闪蒸塔色谱法(5-10％乙醚 的己烷溶液)进行纯化，形成1.2克(24％)t-3-叠氮基-c-4-叠氮基甲基-r-1-叔丁氧基 羰基环戊烷。
向t-3-叠氮基-c-4-叠氮基甲基-r-1-叔丁氧基羰基环戊烷(1.22克，4.6毫摩尔) 的甲醇(20毫升)溶液中，在氮气下加入Pd/C(0.1克，钯含量为10％)，形成的混合 物在约50psi下氢化约30分钟。排空氢气，在添加新鲜氢气之后，形成的混合物 在约50psi下氢化约30分钟。催化剂通过硅藻土(Celite)过滤而除去。滤液被真空 浓缩，形成约0.94克(96％)t-3-氨基-c-4-氨基甲基-r-1-叔丁氧基羰基环戊烷。
向冷却至-5℃的t-3-氨基-c-4-氨基甲基-r-1-叔丁氧基羰基环戊烷(0.63克， 2.95毫摩尔)的二氯甲烷(约30毫升)溶液中，在约5分钟内搅拌滴加乙酸酐(0.25毫 升，2.65毫摩尔)。在0℃搅拌约1小时后，反应混合物在室温下搅拌过夜。真空 除去溶剂，获得白色固体。粗产物通过闪蒸塔色谱法{30-100％[氯仿/甲醇/浓氨 水(80∶18∶2)]的二氯甲烷溶液}进行纯化，形成0.33克(44％)t-3-氨基-r-1-叔丁氧基 羰基-c-4-(甲基羰基氨基)甲基环戊烷。
向t-3-氨基-r-1-叔丁氧基羰基-c-4-(甲基羰基氨基)甲基环戊烷(0.33克，1.29 毫摩尔)的二甲基甲酰胺(约5毫升)溶液中，加入三乙胺(0.63毫升，4.52毫摩尔)和 二-boc硫脲(0.4克，1.42毫摩尔)。形成的混合物被冷却至0℃，然后加入二氯化 汞(0.39克，1.42毫摩尔)。反应混合物在0℃搅拌约30分钟，然后在室温下过夜。 加入乙酸乙酯(约50毫升)，浆料通过硅藻土过滤。滤液用水(2×20毫升)和盐水 (20毫升)洗涤，有机层被干燥(硫酸镁)，过滤，而溶剂被真空除去，形成约0.7克 粗产物。粗产物通过闪蒸塔色谱法{30-50％乙酸乙酯的己烷溶液}进行纯化，并 在乙醚/己烷中重结晶，获得0.51克(79％)无色油状物。油状物在石油醚中结晶， 获得t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-顺式-1-叔丁氧 基羰基-c-4-[(甲基羰基氨基)甲基]环戊烷，为白色固体，熔点145-146℃。 分析：  C24H42N4O7的计算值：     C,57.81；H,8.49；N,11.24
    测量值：                       C,57.70；H,8.52；N,10.98
向t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-顺式-1-叔丁 氧基羰基-c-4-[(甲基羰基氨基)甲基]环戊烷(0.44克，0.88毫摩尔)的二氯甲烷(约9 毫升)溶液中，滴加三氟乙酸(约1.7毫升，22.1毫摩尔)，在室温下搅拌约1小时。 真空除去溶剂，过量的三氟乙酸通过与二氯甲烷(约5毫升)一起共蒸馏3次而除 去，获得白色固体。该白色固体用乙醚研制，并在丙酮回流下进行真空干燥， 获得0.21克(67％)t-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(甲基羰基氨基)甲基]环戊 烷-r-甲酸三氟乙酸，为吸湿性固体。 分析： C9H16N2O3·1.25CF3CO2H的计算值： C,39.30；H,5.04；N,14.56
   测量值：                                  C,39.21；H,5.29；N,14.26
实施例4 c-3-{{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}甲基}环戊烷-r-甲酸
向实施例1的c-3-氨基甲基环戊烷甲酸(0.07克，0.5毫摩尔)和碳酸钾(0.07 克，0.5毫摩尔)在水(约1.5毫升)中的混合物，加入氨基亚氨基甲磺酸(0.06克，0.5 毫摩尔)。在室温下搅拌混合物约18小时。分离白色固体，通过过滤而收集，用 少量水洗涤并真空干燥，形成0.04克(49％)c-3-{{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}甲基} 环戊烷-r-甲酸，为白色粉末，熔点280℃(变暗)。 分析：  C3H15N3O2的计算值：  C,51.88；H,8.16；N,22.69
    测量值：                   C,51.79；H,8.09；N,22.63
实施例5
二盐酸t-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-c-4-{{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}甲 基}环戊烷-r-甲酸一水合物2-丙醇(5∶10∶5∶2)
向搅拌的，来自实施例2的t-3-叠氮基-c-4-叠氮基甲基环戊烷-r-甲酸(约4.0 克，19.05毫摩尔)的二氯甲烷(约40毫升)溶液中，快速加入液态异丁烯(约20毫 升)，然后滴加磷酸(通过用P2O5使2.5毫升85％H3PO4饱和而制得)的二氯甲烷(2.5 毫升)溶液和醚合三氟化硼(0.9毫升)。混合物在约-78℃搅拌2小时并室温过夜之 后，加入冰水和饱和碳酸氢钠水溶液直至混合物变为碱性。用二氯甲烷(2×20毫 升)萃取水层。有机层被合并，用水(20毫升)和盐水(20毫升)洗涤，用无水硫酸镁 干燥，并真空浓缩，形成1.7克无色油状物。粗产物通过闪蒸塔色谱法(5-10％乙 醚的己烷溶液)进行纯化，形成1.2克(24％)t-3-叠氮基-c-4-叠氮基甲基-r-1-叔丁氧 基羰基环戊烷。
向t-3-叠氮基-c-4-叠氮基甲基-r-1-叔丁氧基羰基环戊烷(1.22克，4.6毫摩尔) 的甲醇(约20毫升)溶液中，在氮气下加入Pd/C(0.1克，钯含量为10％)，形成的混 合物在约50psi下氢化约30分钟。排空氢气，在添加新鲜氢气之后，形成的混合 物在约50psi下氢化约30分钟。催化剂通过硅藻土(Celite)过滤而除去。滤液被真 空浓缩，形成约0.94克(96％)t-3-氨基-c-4-氨基甲基-r-1-叔丁氧基羰基环戊烷。
向t-3-氨基-c-4-氨基甲基-r-1-叔丁氧基羰基环戊烷(0.32克，1.5毫摩尔)的二 甲基甲酰胺(约5毫升)溶液中，加入三乙胺(1.5毫升，10.5毫摩尔)和二-boc硫脲 (0.91克，3.3毫摩尔)。形成的混合物被冷却至0℃，然后加入二氯化汞(0.9克， 3.3毫摩尔)。反应混合物在0℃搅拌约30分钟，然后在室温下过夜。加入乙酸乙 酯(约25毫升)，浆料通过硅藻土过滤。滤液用水(2×20毫升)和盐水(20毫升)洗 涤，有机层被干燥(硫酸镁)，过滤，而溶剂被真空除去，形成约1.22克粗产物。 粗产物通过闪蒸塔色谱法{25-36％乙醚的己烷溶液}进行纯化，形成0.75克(71％) 无色油状物。油状物在石油醚中重结晶，获得t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧 基羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-4{{[(叔丁氧基羰基氨基}}(叔丁氧基羰基亚氨基)甲 基]氨基}甲基}-r-叔丁氧基羰基环戊烷，为白色固体，熔点152-154℃。 分析：  C33H58N6O10的计算值：    C,56.72；H,8.37；N,12.03
    测量值：                      C,56.96；H,8.51；N,12.06
在室温下，搅拌t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨 基}-c-4{{[(叔丁氧基羰基氨基}}(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}甲基}-r-叔丁氧 基羰基环戊烷(0.56克，0.88毫摩尔)的5N盐酸(约1毫升)溶液约2小时。真空除去 溶剂，形成吸湿性残留物。用乙醚洗涤残留物数次，并在丙酮回流温度下进行 真空干燥，获得0.18克(64％)二盐酸t-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-c-4-{{[(氨 基)(亚氨基)甲基]氨基}甲基}环戊烷-r-甲酸 一水合物2-丙醇(5∶10∶5∶2)，为吸湿性 固体。 分析： C9H16N2O3·2HCl·H2O·0.4C3H8O的计算值：   C,34.29；H,7.11；N,23.52
   测量值：                                              C,34.38；H,6.84；N,23.94
实施例6
F.W.272.30
4β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-3α-[(2-羟基-1-甲基羰基氨基)乙基]-1-环戊烷 甲酸(C-6异构体A)
向冷却至0℃的叠氮化钠(2.12克，32.6毫摩尔)的二甲基甲酰胺(15毫升)溶液 中，在5分钟内搅拌滴加4-溴环戊-2-烯酮(DePuy,C.H.；Isaks,M.；Eilers,K.L.； Morris,G.F.J.Org.Chem.1964.29,3503；3.5克，21.7毫摩尔)的二甲基甲酰胺(5 毫升)溶液。反应混合物在0℃搅拌30分钟，用乙酸乙酯(20毫升)稀释。反应混合 物用水(2×20毫升)和盐水(20毫升)洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，形成 油状残留物。粗油状物通过闪蒸塔色谱法(10-15％乙酸乙酯的己烷溶液)进行纯 化，形成1.9克(71％)4-叠氮基环戊-2-烯酮，为淡黄色油状物。
在氮气下，向乙酰氨基丙二酸二乙酯(Aldrich,1.25克，5.7毫摩尔)的乙醇 (10毫升)溶液中加入新切下的钠金属(0.03克，1.4毫摩尔)。反应混合物在室温下 搅拌，直至所有的钠被溶解。将反应混合物冷却至-40℃(干冰/丙烯腈)，然后在 10分钟内滴加4-叠氮基环戊-2-烯酮(0.7克，5.7毫摩尔)的乙醇(5毫升)溶液。反应 混合物在-40℃搅拌30分钟，然后用三氟盐酸(0.1毫升，1.4毫摩尔)终止。真空去 除溶解，形成白色固体。粗产物通过闪蒸塔色谱法(60％乙醚的己烷溶液)进行纯 化，形成1.2克(63％)反式-3-叠氮基-4-[(甲基羰基氨基)二(乙氧基羰基)甲基]环戊 酮，为白色固体，熔点121-122℃。 分析： C14H20N4O6的计算值：            C,49.41；H,5.92；N,16.46
   测量值：                              C,49.47；H,5.95；N,16.48
在室温下，于5分钟内，向反式-3-叠氮基-4-[二(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基) 甲基]环戊酮(8.2克，24.1毫摩尔)在甲醇(100毫升)中的混合物中，分批地加入硼 氢化钠(0.46克，12.1毫摩尔)。再搅拌反应混合物10分钟，然后加入乙酸(1毫 升)，浓缩混合物。残留物被溶解在乙酸乙酯(100毫升)中，用水(1×100毫升)和 盐水(1×100毫升)洗涤，并干燥(硫酸镁)。在过滤之后，滤液被浓缩，产生8.2克 (100％)3β-叠氮基-4α-[二(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊醇，它是异构体 的混合物，为淡棕色油状物。 分析：C14H22N4O6的计算值：             C,49.12；H,6.48；N,16.37
  测量值：                               C,49.16；H,6.51；N,16.11
3β-叠氮基-4α-[二(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊醇(它是异构体的混 合物)(8.0克，23.4毫摩尔)和氢氧化钠(1N,72.0毫升，72.0毫摩尔)的混合物，在 室温下搅拌16小时。加入乙酸(冰乙酸，20毫升)，在温和的回流下加热2小时。 接着，用乙酸乙酯(3×100毫升)萃取混合物。合并的有机层用水(2×100毫升)和 盐水(1×100毫升)洗涤，并干燥(硫酸镁)。在过滤之后，滤液被浓缩，然后残留 物通过硅胶柱并用乙酸乙酯作为洗脱液，产生4.0克(63％)3β-叠氮基-4α-[(乙氧 基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊醇(它是异构体的混合物)，为无色浆状物。 分析：C11H18N4O4的计算值：             C,48.89；H,6.71；N,20.72
  测量值：                               C,48.76；H,6.72；N,20.65
上述醇(它是异构体的混合物)(3.8克，14.0毫摩尔)在乙酸乙酯(120毫升)中的 混合物，在Pd/C(250毫克，钯含量为10％)存在下，于40psi和室温下氢化16小 时。催化剂通过过滤而除去。滤液被浓缩，形成2.8克(82％)3β-氨基-4α-[(乙氧 基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊醇，为浆状物。
向3β-氨基-4α-[(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊醇(2.8克，11.5毫摩尔) 在二甲基甲酰胺(25毫升)中的混合物，加入三乙胺(4.06克，40.02毫摩尔)。混合 物在冰浴中冷却，然后加入二-boc硫脲(3.17克，11.5毫摩尔)。搅拌10分钟，加 入二氯化汞(Ⅱ)(3.12克，11.5毫摩尔)。反应混合物在冰浴温度下搅拌1小时，用 乙酸乙酯(100毫升)稀释，通过硅藻土过滤。滤液用水(1×100毫升)和盐水(1× 100毫升)洗涤并干燥(硫酸镁)。在过滤之后，滤液被浓缩，然后残留物通过硅胶 (100克)柱并用乙酸乙酯作为洗脱液，形成5.0克(89％)3β-{[(叔丁氧基羰基氨 基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊 醇(它是异构体的混合物)，为白色泡沫。通过在乙酸乙酯/己烷中重结晶而制备 分析样品。 分析：  C22H38N4O8的计算值：      C,54.31；H,7.87；N,11.51
    测量值：                        C,54.47；H,7.95；N,11.39
向3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙氧基 羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊醇(4.02克，8.27毫摩尔)在二氯甲烷(75毫升)中的 混合物中，加入氯铬酸吡啶鎓(5.3克，24.8毫摩尔)，并在室温下搅拌16小时。用 乙醚稀释混合物，反应物通过硅藻土过滤，并浓缩滤液。让残留物通过硅胶(200 克)柱并用乙酸乙酯/己烷(1∶1)为洗脱液，形成下列物质：
1．0.62克(15％)异构体A，它在乙酸乙酯TLC上移动点较高，它是白色粉 末，熔点175℃。通过在乙酸乙酯/己烷中重结晶，而制备3β-{[(叔丁氧基羰基氨 基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊 酮(异构体A)的分析样品。 分析：  C22H36N4O8的计算值：         C,54.53；H,7.49；N,11.56
    测量值：                           C,54.53；H,7.44；N,11.43
2．0.1克(2.5％)异构体B，它在乙酸乙酯TLC上移动点较低，是白色粉末，熔 点139℃。通过在乙酸乙酯/己烷中重结晶，而制备3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔 丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊酮(异 构体B)的分析样品。 分析：  C22H36N4O8的计算值：          C,54.53；H,7.49；N,11.56
    测量值：                            C,54.94；H,7.44；N,11.26
在0℃，向2-三甲基甲硅烷基-1,3-二噻烷(0.67克，3.5毫摩尔)在四氢呋喃(6 毫升)中的混合物，加入正丁基锂(1.6M,2.5毫升，3.7毫摩尔)，然后在0℃搅拌 混合物0.75小时。在混合物被冷却至-42℃后，加入4β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔 丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊酮(它 是异构体的混合物)(0.24克，0.5毫摩尔)在四氢呋喃(4毫升)中的混合物，然后混 合物在-42℃进一步搅拌2小时。混合物用饱和的氯化铵溶液(2毫升)终止，然后 温热至室温。分离有机层，将水(5毫升)加至水相并用乙酸乙酯(2×15毫升)萃 取。合并后的有机层用水(1×20毫升)和盐水(1×20毫升)洗涤，并干燥(硫酸 镁)。在过滤之后，滤液被浓缩，残留物通过硅胶(50克)柱并用乙酸乙酯/己烷 (1∶2)为洗脱液，形成下列物质：
1．0.15克(50％)异构体A，它在乙酸乙酯/己烷(1∶2)TLC上移动点较高，它 是白色粉末，熔点190-191℃。通过在乙酸乙酯/己烷中重结晶，而制备2-{3β- {[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙氧基羰基)(甲基 羰基氨基)甲基]亚环戊基}-1,3-二噻烷(异构体A)的分析样品。 分析：  C26H42N4O7S2的计算值：      C,53.22；H,7.21；N,9.55
    测量值：                           C,53.44；H,7.27；N,9.31
2．0.06克(20％)异构体B，它在乙酸乙酯/己烷(1∶2)TLC上移动点较低，是白 色粉末，熔点185-186℃。通过在乙酸乙酯/己烷中重结晶，而制备2-{3β-{[(叔丁 氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙氧基羰基)(甲基羰基氨 基)甲基]-1-亚环戊基}-1,3-二噻烷(异构体B)的分析样品。 分析：  C26H42N4O7S2的计算值：       C,53.22；H,7.21；N,9.55
    测量值：                            C,53.19；H,7.20；N,9.52
向2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙氧 基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]亚环戊基}-1,3-二噻烷(异构体A)(1.2克，2.0毫摩尔) 的四氢呋喃(40毫升)溶液中，在氮气下滴加硼氢化锂(Aldrieh,2M四氢呋喃溶液， 2.0毫升，4.0毫摩尔)和9-硼杂二环[3.3.1]壬烷氢化锂(lithium 9- borabicyco[3.3.1]nonane hydride)(Aldrich,1M四氢呋喃溶液，0.2毫升，0.2毫摩 尔)，然后反应混合物在室温下搅拌过夜。在36小时期间，再加入3份硼氢化锂 (2M四氢呋喃溶液，2.0毫升，4.0毫摩尔)和9-硼杂二环[3.3.1]壬烷氢化锂(1M四氢 呋喃溶液，0.2毫升，0.2毫摩尔)。反应用1N氢氧化钠(10毫升)和盐水(10毫升)终 止，并搅拌5分钟。用冰醋酸将反应酸化至pH4，加入乙醚，并分离水层。用乙 醚(2×20毫升)萃取水层，有机层被合并，干燥和真空浓缩，获得粗产物。粗产 物在Chromatotron上纯化(50-100％乙酸乙酯的己烷溶液)，形成0.34克(31％)2- {3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(2-羟基)(1-甲基 羰基氨基)乙基]亚环戊基}-1,3-二噻烷(异构体A)。在乙醚中重结晶，为白色固 体，熔点209-210℃。 分析：  C24H40N4O6S2的计算值：       C,52.92；H,7.40；N,10.29
    测量值：                            C,53.03；H,7.30；N,10.19
向2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(2-羟 基)(1-甲基羰基氨基)乙基]亚环戊基}-1,3-二噻烷(异构体A)(0.23克0.4毫摩尔)的甲 醇(6.7毫升)溶液中，加入6N盐酸(0.83毫升，4.99毫摩尔)，并在室温下搅拌直至 所有的原料消失(TLC分析，乙酸乙酯，约3小时)。溶剂被真空除去(水浴温度约 40℃)，形成粗3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)乙 基]-1-[(3-巯基丙基)硫代羰基]环戊烷{MS(ES+1)363.5[100％,(M+1)]}。
向上述粗产物中加入水(1.4毫升)和浓氨水(1.4毫升)，反应在室温下搅拌3小 时。真空除去溶剂，形成0.6克与盐混合的标题化合物，MS(ES+1)272.4[100％, (M+1)]。
实施例7
3β-{[氨基(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)乙基]-环戊烷-r- 甲酸钠∶乙醚∶水合物(12∶4∶3)，异构体B
向实施例6的2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}- 4α-[(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]亚环戊基}-1,3-二噻烷(异构体A)(6.74克， 11.5毫摩尔)的乙醇(57.5毫升)和四氢呋喃(115毫升)溶液中，加入1N氢氧化钠(23 毫升，23毫摩尔)和水(35毫升)。反应在室温下搅拌5小时。真空除去四氢呋喃， 水层用乙酸乙酯(2×10毫升)洗涤并用冰醋酸酸化至pH5。获得的固体被过滤收 集，形成5.95克(93％)2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨 基}-4α-[(羧基)(甲基羰基氨基)甲基]-1-亚环戊基}-1,3-二噻烷，为白色固体。 分析：C24H38N4O7S2·0.5C2H6O.1H2O的计算值：C,50.07；H,7.23；N,9.34
  测量值：                                         C,50.28；H,6.85；N,9.04
向冷却至0℃的上述酸(1.12克，2.0毫摩尔)的四氢呋喃(20毫升)溶液中，搅 拌滴加三乙胺(0.32毫升，2.2毫摩尔)和氯代甲酸乙酯(0.21毫升，2.1毫摩尔)。反 应混合物在0℃搅拌1小时。反应物通过硅藻土过滤，滤饼用四氢呋喃(2×5毫升) 洗涤。滤液被冷却至0℃，加入硼氢化钠(粉末，0.23克，6.0毫摩尔)，然后在1小 时内滴加甲醇(1.3毫升)。反应混合物用盐水(10毫升)终止，然后用冰醋酸酸化至 pH5。加入乙醚(10毫升)，分离有机层。用乙醚(2×10毫升)萃取水层。有机层被 合并，干燥和真空浓缩，形成1.1克(100％)2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧 基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)]-1-亚环戊基}-1,3-二噻 烷。
向上述固体(3.67克，6.75毫摩尔)的二甲基甲酰胺(16毫升)溶液中，加入叔 丁基二甲基氯代硅烷(1.15克，7.4毫摩尔)和咪唑(0.92克，13.5毫摩尔)。反应混 合物在室温下搅拌过夜，倒入水(20毫升)中并用乙醚(3×20毫升)萃取。有机层被 合并，用水(20毫升)和盐水(25毫升)洗涤，干燥，然后真空除去溶剂，形成4.4克 无色油状物。粗产物用闪蒸塔色谱(15-25％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，形成下列 物质：
1．异构体A,2.5克(57％)，为白色固体，熔点129-130℃(Rf=0.36,25％乙酸 乙酯的己烷溶液)；MS(ES+)444.9[100％,(M+1)-叔丁基二甲基甲硅烷基]。 分析：C30H54N4O5S2Si的计算值：           C,54.68；H,8.26；N,8.50
  测量值：                                   C,54.71；H,8.05；N,8.61
2．异构体B,1.21克(27％)2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基) 甲基]氨基}-4α-[(2-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)(1-甲基羰基氨基)乙基]亚环戊 基}-1,3-二噻烷(异构体B)，为白色固体，熔点94-96℃(Rf=0.28,25％乙酸乙酯的 己烷溶液)；MS(ES+)659.4[100％,(M+1)]。 分析：C30H54N4O5S2Si的计算值：          C,54.68；H,8.26；N,8.50
  测量值：                                  C,55.06；H,8.18；N,8.40
向上述1.21克(27％)异构体B(1.11克，1.68毫摩尔)的甲醇(50毫升)溶液中，加 入6N盐酸(4.2毫升，25.2毫摩尔)。混合物在室温下搅拌直至所有的原料消失 (TLC分析，乙酸乙酯，约30小时)。真空除去溶剂(水浴温度约35℃)，形成粗3β- {[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(2-羟基)(1-甲基羰基 氨基)乙基]-1-[(3-巯基丙基)硫代羰基]环戊烷{MS(ES+1)563.5[100％,(M+1)]， 463.5[80％,(M+1)-叔丁氧基羰基],363.4[50％,(M+1)-二叔丁氧基羰基]}。
真空干燥上述粗产物以除去痕量的水，然后溶解在二氯甲烷(25毫升)中。加 入三氟乙酸(1.29毫升，16.8毫摩尔)，混合物在室温下搅拌过夜。真空除去溶 剂，形成粗残留物3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基) 乙基]-1-[(3-巯基丙基)硫代羰基]环戊烷{MS(ES+1)363.4[100％,(M+1)]}。
上述粗产物被溶解在四氢呋喃(8.5毫升)中，加入甲醇(4.2毫升)和1N氢氧化 钠(8.4毫升，8.4毫摩尔)。反应混合物在室温下搅拌35分钟。真空除去四氢呋喃 和甲醇，水层用乙酸乙酯(2×10毫升)洗涤。过滤水层，滤液被酸化至pH6.5(1N 盐酸)。酸化后的水层用乙酸乙酯(2×10毫升)洗涤并真空浓缩，形成1.3克粗产 物。
上述粗产物(1.0克)被上样于硅胶柱(50克)，并用氯仿∶甲醇∶浓氨水(5∶ 4∶1)(1000毫升)洗脱以去除有机和无机杂质。然后用25％水的丙醇溶液洗脱柱， 得到0.21克(43％)油状物。该油状物用乙醇/乙醚和乙醚(5×10毫升)研制，得到标 题化合物，为白色固体，熔点65℃(熔化)(Rf=0.36,25％水在2-丙醇中的溶液， TLC板，喷洒KMnO4以显色)。 分析：C11H19N4NaO4·0.35C4H10O·0.25H2O的计算值：C,45.86；H,7.14；N,17.25
  测量值：                                             C,46.14；H,7.50；N,17.55 实施例8                  -CF3CO2H·0.5CF3CO2NH4
反式-3-氨基-反式-1-羟基-顺式-4-[(羟甲基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊烷-r-甲 酸三氟乙酸三氟乙酸铵(1∶1∶0.5)
反式-3-叠氮基-4-[二(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊酮(来自实施例6, 0.50克，1.5毫摩尔)、焦碳酸二叔丁酯(di-tert-butyl dicarbonate)(Aldrich,0.39克， 1.77毫摩尔)和Pd/C(10％,0.140克)在乙酸乙酯(25毫升)中的混合物，于45psi下氢 化1小时。催化剂通过过滤而除去。滤液被真空浓缩，形成0.69克粗产物。经闪 蒸塔色谱(硅胶，75％乙酸乙酯/己烷)纯化后，得到半固体。残留物在乙醚/己烷 中重结晶，得到0.275克(45％)反式3-叔丁氧基羰基氨基-4-[二(乙氧基羰基)(甲基 羰基氨基)甲基]环戊醇，为白色固体，熔点135-136℃。 分析：   C19H30N2O4的计算值：       C,55.06；H,7.30；N,6.76
     测量值：                         C,54.63；H,7.17；N,6.74
向0℃，搅拌的二(苯基硫代)甲烷(Aldrich,1.12克，4.84毫摩尔)的四氢呋喃 (10毫升)溶液中，滴加正丁基锂(1.6M,3.0毫升，4.84毫摩尔)。搅拌30分钟后， 反应混合物被冷却至-78℃，然后滴加反式3-叔丁氧基羰基氨基-4-[二(乙氧基羰 基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊酮(0.50克，1.2毫摩尔)的四氢呋喃(6毫升)溶液。搅 拌反应混合物1小时，然后用饱和的氯化铵水溶液(10毫升)终止。分离的水层用 乙醚(4×10毫升)萃取。合并后的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，用硅藻 土过滤，然后真空浓缩，形成1.25克粗产物。经闪蒸塔色谱(硅胶，75克，25％ 乙酸乙酯/己烷)纯化后，得到0.16克(20％)c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[二(乙氧基 羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[二(苯基硫代)甲基]环戊-r-1-醇，为白色固体，熔点 36-37℃。 分析：  C32H42N2O8S2的计算值：       C,59.42；H,6.54；N,4.33
    测量值：                            C,59.64；H,6.45；N,3.94
向c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[二(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[二 (苯基硫代)甲基]环戊-r-1-醇(0.63克，0.97毫摩尔)和氢氧化钾(1N,3.4毫升，3.4 毫摩尔)在50％乙醇的水溶液(24毫升)中形成的混合物，在室温下搅拌12小时。反 应混合物被真空浓缩，形成的残留物被溶解在乙酸乙酯(12毫升)中。该反应混合 物被回流加热1小时，然后冷却至室温。向该反应混合物中加入冰醋酸(0.2毫 升，3.4毫摩尔)。分离的水层用乙酸乙酯(4×10毫升)萃取。合并后的有机萃取物 用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，用硅藻土过滤，然后真空浓缩，得到0.54克粗产 物。经径向PLC(硅胶，25-50％乙酸乙酯/己烷)纯化后，得到0.35克(63％)c-3-(叔 丁氧基羰基氨基)-t-4-[(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[二(苯基硫代)甲基] 环戊-r-1-醇，为白色固体，熔点58-59℃。 分析：   C29H38N2O6S2的计算值：      C,60.60；H,6.66；N,4.87
     测量值：                           C,60.76；H,6.79；N,4.88
在室温下，向搅拌的c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[(乙氧基羰基)(甲基羰基氨 基)甲基]-t-1-[二(苯基硫代)甲基]环戊-r-1-醇(0.17克，0.29毫摩尔)的四氢呋喃(7毫 升)溶液中，加入硼氢化锂(2M,0.3毫升，0.6毫摩尔)。在搅拌12小时后，反应 混合物被加热至50℃45分钟。向该混合物中加入1N盐酸(6毫升)。分离的水层 用乙酸乙酯(4×5毫升)萃取。合并后的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)， 用硅藻土过滤，然后真空浓缩，得到0.16克粗产物。经径向PLC(硅胶，50％乙酸 乙酯/己烷)纯化后，得到0.08克(50％)c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[(2-羟基)(1-甲 基羰基氨基)乙基]-t-1-[二(苯基硫代)甲基]环戊-r-1-醇(异构体A)，为白色固体， 熔点66-67℃。 分析：   C27H36N2O5S2的计算值：       C,60.88；H,6.62；N,5.26
     测量值：                            C,60.95；H,6.94；N,5.14
在室温下，向搅拌的c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[二(乙氧基羰基)(甲基羰基 氨基)甲基]-t-1-[二(苯基硫代)甲基]环戊-r-1-醇(0.76克，1.2毫摩尔)的四氢呋喃(10 毫升)溶液中，加入硼氢化锂(0.03克，1.4毫摩尔)。反应混合物被回流加热12小 时，然后冷却至室温。向该混合物中加入1N盐酸(10毫升)。分离的水层用乙醚 (4×10毫升)萃取。合并后的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，用硅藻土过 滤，然后真空浓缩，得到0.54克粗产物。经径向PLC(硅胶，70％乙酸乙酯/己烷) 纯化后，得到0.15克(21％)c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基) 乙基]-t-1-[二(苯基硫代)甲基]环戊-r-1-醇(异构体B)，为白色固体，熔点176-177 ℃。 分析：   C27H36N2O5S2的计算值：       C,60.88；H,6.62；N,5.26
     测量值：                            C,60.85；H,6.72；N,5.03
在23℃，向搅拌的c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)乙 基]-t-1-[二(苯基硫代)甲基]环戊-r-1-醇的异构体A和B的混合物(5.65克，10.6毫摩 尔)的二丁基甲酰胺(100毫升)溶液，加入氢氧化钠(95％,0.345克，13.8毫摩尔) 和碘化四乙基铵(0.40克，1.1毫摩尔)。在搅拌30分钟后，滴加溴化苄(2.0毫升， 15.8毫摩尔)。反应混合物在-23℃搅拌3小时，然后用冰醋酸(2.5毫升)和水(100毫 升)终止。分离的水层用乙酸乙酯(7×15毫升)萃取。合并后的有机萃取物用盐水 洗涤，干燥(硫酸镁)，用硅藻土过滤，然后真空浓缩，得到9.1克粗产物。经闪 蒸塔色谱(硅胶，210克，50-75％乙酸乙酯/己烷)纯化后，得到2.98克(45％)c-3-(叔 丁氧基羰基氨基)-t-4-[(1-甲基羰基氨基)(2-苯基甲氧基)乙基]-t-1-[二(苯基硫代)甲 基]环戊-r-1-醇，为白色固体，熔点52-54℃。 分析：  C34H42N2O5S2的计算值：       C,65.57；H,6.79；N,4.49
    测量值：                            C,65.52；H,6.80；N,4.45
在室温下，搅拌c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[(1-甲基羰基氨基)(2-苯基甲氧 基)乙基]-t-1-[二(苯基硫代)甲基]环戊-r-1-醇(2.53克，4.1毫摩尔)、氧化汞(1.90 克，8.8毫摩尔)和醚合三氟化硼(1.1毫升，8.9毫摩尔)在15％四氢呋喃(70毫升)水 溶液中的混合物2小时。反应混合物通过硅藻土和硅酸镁载体(Florisil)板过滤。 滤液被真空浓缩，得到2.74克粗产物。向上述粗产物的甲醇(50毫升)溶液中，加 入碘(1.9克，7.5毫摩尔)。反应混合物被加热至50℃。向该混合物中滴加氢氧化 钾溶液(0.71M/甲醇，50毫升，35.7毫摩尔)。在50℃搅拌2小时后，反应混合物通 过硅藻土过滤。滤液被真空浓缩，形成的残留物溶解在乙酸乙酯(30毫升)和水 (20毫升)中。分离各层，水层用乙酸乙酯(4×10毫升)萃取。合并后的有机萃取物 用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，用硅藻土过滤，然后真空浓缩，得到3.6克粗产 物。经闪蒸塔色谱(硅胶，200克，50-100％乙酸乙酯/己烷)纯化后，得到0.224克 (14％)所需的醇酸，为白色固体。向该醇酸(0.244克，0.56毫摩尔)的二氯甲烷(15 毫升)溶液中，加入三氟乙酸(0.86毫升，11.2毫摩尔)，反应混合物在室温下搅拌 12小时。反应混合物被真空浓缩，得到粗产物。经闪蒸塔色谱(硅胶，60克，氯 仿/甲醇/氢氧化铵：80/18/2)纯化后，得到0.241克粘稠的黄色油状物。用乙醚研 制该黄色油状物，得到0.185克(51％)t-3-氨基-c-4-[(1-甲基羰基氨基)(2-苯基甲氧 基)乙基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸，为黄褐色固体，熔点37-39℃。 分析：C17H24N2O5·C2HF3O·1.5C2H4F3NO2的计算值：C,40.84；H,4.83；N,7.58
  测量值：                                               C,40.86；H,5.08；N,7.90
t-3-氨基-c-4-[(1-甲基羰基氨基)(2-苯基甲氧基)乙基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸 (0.09克，0.14毫摩尔)和氢氧化钯(0.15克)在乙醇(20毫升)中的混合物，在40psi下 氢化过夜。反应混合物通过硅藻土过滤，滤液被真空浓缩，得到0.078克粗产 物。搅拌上述粗产物胺和三氟乙酸(0.2毫升，2.6毫摩尔)在二氯甲烷(10毫升)中的 混合物过夜。混合物被真空浓缩，得到0.08克棕色固体。用乙醚研制之后，得到 0.045克(75％)标题化合物，为黄褐色固体，熔点83-85℃。 分析：C10H18N2O5·C2HF3O2·0.5C2H4F3NO2的计算值：C,36.67；H,4.97；N,8.22
  测量值：                                                  C,36.40；H,5.15；N,7.95
实施例9
反式-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-反式-1-羟基-顺式-4-[(2-羟甲基)(1-甲基 羰基氨基)乙基]环戊烷-r-甲酸三氟乙酸乙醚[20∶15∶2](在C-6处的异构体A)
在-78℃和氮气下，于10分钟内，向三(甲基硫代)甲烷(21.27克，138毫摩尔) 的四氢呋喃(350毫升)溶液中滴加正丁基锂(1.6M己烷溶液，90毫升，144毫摩 尔)。然后在-78℃下搅拌40分钟。在-78℃下和10分钟内，向该阴离子中加入实 施例6的3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊酮(异 构体A,8.34克，17.23毫摩尔)的四氢呋喃(50毫升)溶液。然后混合物在-78℃搅 拌1.5小时。反应用饱和的氯化铵溶液(50毫升)终止，然后升温至室温，加入乙 醚(50毫升)，分离有机层。水层用乙醚(2×50毫升)萃取，并合并有机层。用硫酸 镁干燥，并真空浓缩，形成油状物。该油状物被溶解在乙酸乙酯(50毫升)和已烷 (400毫升)中，在冰箱中存放过夜。过滤去除晶状固体。母液通过闪蒸塔色谱(硅 胶，240克，30-45％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，获得2.7克(24％)3β-{[(叔丁氧基 羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]-1-[(三甲基硫代)甲基]环戊醇，它是异构体的混合物。
向上述混合物(2.69克，4.22毫摩尔)的四氢呋喃(42毫升)溶液中，在氮气下 滴加硼氢化锂(0.74克，33.73毫摩尔)和9-硼杂二环[3.3.1]壬烷氢化锂(lithium 9- borabicyco[3.3.1]nonane hydride)(1M四氢呋喃溶液，0.84毫升，0.84毫摩尔)，然 后反应混合物在室温下搅拌过夜。反应用1N氢氧化钠(1毫升)和盐水(10毫升)终 止，并搅拌5分钟。用冰醋酸将反应酸化至pH4，加入乙醚(10毫升)，并分离水 层。水层用饱和碳酸氢钠水溶液中和，用乙酸乙酯(2×10毫升)萃取。有机层被 合并，干燥和真空浓缩，获得3.3克黄色油状物。该油状物通过闪蒸塔色谱[硅胶 (200克),10％氯仿∶甲醇∶浓氨水(80∶18∶2)的二氯甲烷溶液]纯化，得到1.5克 (60％)t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(2-羟 基)(1-甲基羰基氨基)乙基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环戊-r-醇，为白色固体 [Rf=0.17,20％氯仿∶甲醇∶浓氨水(80∶18∶2)的二氯甲烷溶液]。
向上述固体(1.2克，2.0毫摩尔)、二氯化汞(2.02克，7.45毫摩尔)和氧化汞 (0.65克，3.02毫摩尔)的混合物中，加入甲醇/水(46.2/3.8毫升)。然后在室温下搅 拌反应混合物30分钟。混合物通过硅藻土和硅酸镁载体(20克)板过滤。滤饼用甲 醇(20毫升)洗涤，滤液被真空浓缩，得到2.1克白色半固体。粗产物通过闪蒸塔 色谱[硅胶(60克)；75％乙酸乙酯的己烷溶液和10％甲醇的乙酸乙酯溶液]，得到 0.55克(55％)t-4-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-3-[(2- 羟基甲基)(1-甲基羰基氨基)乙基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸甲酯，为白色固体，熔 点94-96℃。
向上述固体(0.47克，0.93毫摩尔)的四氢呋喃(9.3毫升)溶液中，加入1N氢氧 化钾(1.68毫升，1.68毫摩尔)和水(7.4毫升)。反应混合物在室温下搅拌1小时。四 氢呋喃被真空除去，水层用乙醚(2×10毫升)洗涤。水层用冰醋酸酸化(pH=5)， 用氯化钠饱和，然后用乙酸乙酯(3×15毫升)萃取。有机层被合并和真空浓缩， 得到0.33克(73％)粗产物。该粗产物用乙醚/己烷研制，得到t-3-{[(叔丁氧基羰基 氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-t-1-羟基-c-4-[(2-羟基甲基)(1-甲基羰基氨 基)乙基]环戊烷-r-甲酸(异构体A)，为白色固体，熔点238-240℃。 分析：C21H36N4O9的计算值：                C,51.63；H,7.43；N,11.47
  测量值：                                  C,51.31；H,7.48；N,11.07
向t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-t-1-羟基-c-4- [(羟基甲基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊烷-r-甲酸(异构体A)(0.2克，0.41毫摩尔)的 二氯甲烷(10毫升)溶液中，加入三氟乙酸(0.63毫升，8.2毫摩尔)。反应在室温下 搅拌过夜。再加入三氟乙酸(0.32毫升，4.1毫摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。 溶剂被真空除去，过量的三氟乙酸通过与二氯甲烷(10毫升)一起共蒸馏2次而除 去。残留物被溶解在水(5毫升)中，并真空浓缩，获得油状残留物。该残留物用 乙醚研制，得到0.13克(83％)标题化合物，为白色固体，熔点162-166℃。 分析：C13H19F3N4O9·0.75C2HF3O2·0.1C4H10O的计算值：C,40.64；H,5.75；N,14.70
  测量值：                                                    C,40.77；H,5.80；N,14.67
实施例10
3β-氨基-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2,3,4-三羟基)丁基]环戊烷甲酸三氟乙酸(1∶ 1)(在C-6的异构体A)
在0℃和氮气下，于10分钟内，向2-三甲基甲硅烷基-1,3-二噻烷(Aldrich,7.88 克，41.5毫摩尔)的四氢呋喃(100毫升)溶液中，滴加正丁基锂(1.6M己烷溶液， 28.6毫升，45.7毫摩尔)，然后在0℃搅拌45分钟。该阴离子被冷却至-40℃，然后 在15分钟内滴加3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[二(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基] 环戊酮(来自实施例8,4.3克，10.4毫摩尔)的四氢呋喃(50毫升)溶液。反应混合物 在-42℃搅拌5小时，然后升温至-20℃。混合物用饱和的氯化铵溶液(50毫升)终 止，然后升温至室温。加入乙醚(20毫升)并分离有机层。水层用乙醚(2×25毫升) 萃取，有机层被合并，用硫酸镁干燥，并真空浓缩，形成粗产物。粗产物通过 闪蒸塔色谱(硅胶，320克，30-53％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到3.16克(59％) 2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[二(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]亚环戊基}- 1,3-二噻烷，为无色油状物。该油状物通过在丙酮回流温度下真空干燥而固化， 形成一固体，熔点66-68℃。 分析：C23H36N2O7S2的计算值：                  C,53.47；H,7.02；N,5.42
  测量值：                                       C,53.50；H,7.07；N,5.41
向2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[二(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]亚环 戊基}-1,3-二噻烷(7.5克，14.53毫摩尔)的乙醇(75毫升)溶液中，加入1N氢氧化钠 (50.9毫升，50.9毫摩尔)和水(25毫升)。反应混合物被回流加热2小时。反应被冷 却，加入冰醋酸(4.6毫升，76.3毫摩尔)，混合物在轻微回流下加热1小时并在室 温下搅拌过夜。分离的固体用过滤收集，用水洗涤，并在甲苯回流温度下真空 干燥，得到1.63克(27％)固体。滤液用乙酸乙酯(3×100毫升)萃取。有机层被合 并，干燥和真空浓缩，得到3.5克残留物。分析样品通过合并后的固体在乙醇中 结晶而制备，从而得到5.1克(85％)2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(羧基)(甲基羰 基氨基)甲基]亚环戊基}-1,3-二噻烷，为白色固体，熔点174-176℃。 分析：C18H28N2O5S2·0.75H2O的计算值：    C,50.27；H,6.91；N,6.51
  测量值：                                    C,50.03；H,6.54；N,6.41
向冷却至0℃的2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(羧基)(甲基羰基氨基)甲基]亚 环戊基}-1,3-二噻烷(5.13克，12.3毫摩尔)的四氢呋喃(120毫升)溶液中，加入氯代 甲酸甲酯(1毫升，13.5毫摩尔)和三乙胺(2.2毫升，15.4毫摩尔)。反应混合物在0 ℃搅拌40分钟，然后加入已在0℃搅拌过30分钟的盐酸N,O-二甲基羟胺(1.84克， 18.5毫摩尔)和三乙胺(3.5毫升，24.6毫摩尔)的四氢呋喃(5毫升)冷溶液。让反应 混合物的温度回升至室温并搅拌过夜。反应物通过硅藻土过滤，滤饼用四氢呋 喃(10毫升)洗涤。向滤液中加人已在0℃搅拌过30分钟的盐酸N,O-二甲基羟胺 (1.84克，18.5毫摩尔)和三乙胺(3.5毫升，24.66毫摩尔)的四氢呋喃(5毫升)冷溶 液，再次在室温下搅拌过夜。真空除去溶剂，然后向残留物中加入氢氧化钠 (0.1M,100毫升)和乙酸乙酯(100毫升)。分离有机层，水层用乙酸乙酯(2×75毫 升)萃取。合并有机层，用盐水(100毫升)洗涤，干燥并真空浓缩，得到4.73克酰 胺粗产物，为半固体。粗产物通过闪蒸塔色谱[200克硅胶，90％乙酸乙酯的己烷 溶液和25％氯仿/甲醇/氨水(80∶18∶2)的二氯甲烷溶液]纯化，得到4.2克(74％)2- {3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-{(甲基羰基氨基){[(甲基)(甲氧基)氨基]羰基}甲基} 亚环戊基}-1,3-二噻烷。通过在乙醚/己烷中重结晶而制备分析样品，为白色固 体，熔点122-126℃。 分析：C20H33N3O5S2的计算值：                  C,52.26；H,7.24；N,9.14
  测量值：                                       C,52.34；H,7.20；N,9.09
向冷却至0℃的2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-{(甲基羰基氨基){[(甲基)(甲 氧基)氨基]羰基}甲基}亚环戊基}-1,3-二噻烷(0.26克，0.57毫摩尔)的四氢呋喃(2.5 毫升)中，滴加氢化三叔丁氧基铝锂(lithium tri-tert-butoxyaluminohydride) (Aldrich,1.0M四氢呋喃溶液，1.4毫升，1.4毫摩尔)。反应混合物在室温下搅拌过 夜。反应用1N盐酸(1.0毫升，pH应不小于4.0)小心地终止，并搅拌5分钟。乙醚 (20毫升)和1.0M酒石酸钠钾盐的水溶液(10毫升)被加入，反应混合物在室温下搅 拌30分钟。分离有机层，水层用乙醚(2×10毫升)萃取。有机层被合并，用盐水 (20毫升)洗涤，干燥并真空浓缩，得到0.3克白色固体。粗产物通过闪蒸塔色谱 [20克硅胶，50-80％乙酸乙酯的己烷溶液]纯化，得到2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)- 4α-[(甲酰基)(甲基羰基氨基)甲基]亚环戊基}-1,3-二噻烷的2种异构体(在C-6处)：
1．0.09克(40％)异构体A(C-6处)，为白色固体，熔点188-192℃(分解)。 分析：C18H28N2O4S2的计算值：                    C,53.97；H,7.05；N,6.99
  测量值：                                         C,53.93；H,7.09；N,6.93
2．0.08克(35％)异构体B(C-6处)，为白色固体，熔点＞180℃(分解)。 分析：C18H28N2O4S2的计算值：                    C,53.97；H,7.05；N,6.99
  测量值：                                         C,54.03；H,7.05；N,6.97
向冷却至-78℃的2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(甲酰基)(甲基羰基氨基)甲 基]亚环戊基}-1,3-二噻烷(0.17克，0.43毫摩尔)的四氢呋喃(5毫升)溶液中，滴加 溴化乙烯基镁(Aldrich,1.0M的四氢呋喃溶液，2.2毫升，2.2毫摩尔)，然后在-78 ℃搅拌2小时。反应小心地用饱和的氯化铵水溶液(5.0毫升)终止。加入乙醚(10毫 升)、盐水(5毫升)，然后将反应混合物升温至室温。分离有机层，水层用乙醚(2 ×10毫升)萃取。有机层被合并，用盐水(20毫升)洗涤，干燥，并真空浓缩，形 成0.17克粗产物，为白色固体。粗产物通过闪蒸塔色谱(10克硅胶，50-100％乙酸 乙酯的己烷溶液)纯化，得到0.06克(33％)2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(2-羟 基)(1-甲基羰基氨基)-3-丁烯基]亚环戊基}-1,3-二噻烷(在C-6处的异构体A)，为白 色固体，熔点＞210℃(分解)。 分析：C20H32N2O4S2的计算值：                   C,56.05；H,7.53；N,6.54
  测量值：                                        C,56.18；H,7.50；N,6.47
向2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)-3-丁烯基]亚环 戊基}-1,3-二噻烷(异构体A,0.55克，1.28毫摩尔)的甲醇(19.3毫升)溶液中，加入 6N盐酸(3.2毫升，19.28毫摩尔)。混合物在室温下搅拌直至所有的原料消失 (TLC，乙酸乙酯和MS分析，约20小时)。反应混合物被冷却至0℃，加入氢氧化 钠(1.02克，25.7毫摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。反应用冰醋酸(0.8毫升， 12.85毫摩尔)终止，然后真空浓缩，得到粗残留物。向该残留物中加入乙酸乙酯 (10毫升)和水(10毫升)。分离水层，用乙酸乙酯(2×10毫升)萃取。有机层被合并 和真空浓缩，得到0.4克粗产物。
将上述粗产物溶解在无水甲醇(20毫升)中，并冷却至0℃。加入无水HCl的 乙醚(Aldrich,1.0M溶液，5毫升)溶液，反应混合物搅拌过夜。用1N氢氧化钠 的甲醇溶液将反应的pH调至6-7，从而终止反应，并真空浓缩以得到粗残留物。 该残留物被溶解在水(10毫升)中，用二氯甲烷(3×10毫升)萃取。有机层被合并， 干燥和真空干燥，得到0.2克粗产物。该粗产物通过闪蒸塔色谱[10-50％氯仿/甲 醇/浓氨水(80∶18∶2)的二氯甲烷溶液]进行纯化，得到0.12克(24％)3β-(叔丁氧基羰 基氨基)-4α-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)-3-丁烯基]环戊烷-甲酸甲酯(在C-6处的异 构体A)，为油状物，MS(ES+)371.4[100％,(M+1)]和353.4[100％,(M+1)- H2O]。
将上述油状物(0.1克，0.27毫摩尔)溶解在四氢呋喃/叔丁醇(2毫升，1∶1) 中，加入氧化N-甲基吗啉(50毫克)，四氧化锇(0.05重量％叔丁醇溶液，0.2毫升) 和水(1毫升)。反应混合物在室温下搅拌过夜。加入饱和的亚硫酸钠水溶液(2毫 升)，然后剧烈搅拌30分钟。加入盐水(2毫升)，水层用乙酸乙酯(3×10毫升)萃 取。有机层被合并，干燥和真空浓缩，的0.1克粗产物。该粗产物通过闪蒸塔色 谱[0,5,10,50,100％甲醇的乙酸乙酯溶液]进行纯化，得到0.06克(59％)三 醇，为半固体，MS(ES+)405.4[100％,(M+1)]和387.5[60％,(M+1)-H2O]。向上 述固体(0.06克，0.16毫摩尔)的四氢呋喃(1.6毫升)溶液中，加入1N氢氧化钠(1.0 毫升，1.0毫摩尔)并在室温下搅拌1.5小时。加入乙醚(5毫升)和水(1毫升)，并分 离有机层。水层用乙酸乙酯(2×5毫升)洗涤。然后用1N盐酸将水层酸化至pH 5- 4，用氯化钠进行饱和，并用乙酸乙酯(3×5毫升)萃取。有机层被合并，干燥和 真空干燥，得到0.027克(43％)3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(1-甲基羰基氨 基)(2,3,4-三羟基)丁基]环戊烷-甲酸(在C-6处的异构体A)，为白色固体，MS(ES+) 391.4[55％,(M+1)],373.6[40％(M+1)-H2O]和100％317.3[(M+1)-叔丁基]。
向上述酸(0.027克，0.07毫摩尔)的二氯甲烷(1.0毫升)溶液中，加入三氟乙酸 (0.11毫升，1.4毫摩尔)。反应在室温下搅拌过夜。再加入额外的三氟乙酸(0.11毫 升，1.4毫摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。真空去除溶剂，并通过将残留物与 二氯甲烷(10毫升)共蒸馏2次而去除痕量三氟乙酸。残留物溶解在水(0.5毫升) 中，真空浓缩，并在丙酮回流温度下干燥，得到0.017克(60％)标题化合物(异构 体A)，为黄褐色固体，MS(ES+)291.4[100％,(M+1)]。
实施例11
3β-氨基-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2,3,4-三羟基)丁基]环戊烷甲酸 三氟乙酸(1∶ 2)(在C-6的异构体B)
向冷却至-78℃，来自实施例10的2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(甲酰 基)(甲基羰基氨基)甲基]亚环戊基}-1,3-二噻烷(在C-6的异构体B)(0.45克，1.13毫 摩尔)的四氢呋喃(20毫升)溶液中，滴加溴化乙烯基镁(Aldrich,1.0M的四氢呋喃溶 液，5.6毫升，5.6毫摩尔)，然后在-78℃搅拌1小时。反应小心地用饱和的氯化铵 水溶液(5.0毫升)终止。加入乙醚(20毫升)和盐水(5毫升)，然后将反应混合物升温 至室温。分离有机层，水层用乙醚(2×10毫升)萃取。有机层被合并，用盐水(20 毫升)洗涤，干燥，并真空浓缩，形成0.5克白色固体。经闪蒸塔色谱(10克硅 胶，60-100％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化后，得到0.21克(44％)2-{3β-(叔丁氧基羰 基氨基)-4α-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)-3-丁烯基]亚环戊基}-1,3-二噻烷(在C-6处 的异构体B)，为白色固体，熔点＞210℃(分解)。 分析：C20H32N2O4S2·0.25H2O的计算值：          C,55.46；H,7.56；N,6.47
  测量值：                                          C,55.20；H,7.47；N,6.41
向2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)-3-丁烯基]亚环 戊基}-1,3-二噻烷(在C-6处的异构体B)(0.58克，1.36毫摩尔)的甲醇(21毫升)溶液 中，加入6N盐酸(3.4毫升，20.46毫摩尔)。混合物在室温下搅拌直至所有的原料 消失(约20小时)。反应混合物被冷却至0℃，加入氢氧化钠(1.1克，27.6毫摩尔)， 反应在室温下搅拌1小时。反应用冰醋酸(0.83毫升，13.79毫摩尔)终止，然后真 空浓缩。向残留物中加入乙酸乙酯(10毫升)和水(10毫升)。分离水层，用乙酸乙 酯(2×10毫升)萃取。有机层被合并和真空浓缩，得到0.41克残留物。
将上述粗产物溶解在无水甲醇(20毫升)中，并冷却至0℃。加入无水HCl的 乙醚(Aldrich,1.0M溶液，5毫升)溶液，搅拌反应混合物过夜。用1N氢氧化钠 的甲醇溶液将反应的pH调至6-7，从而终止反应，然后真空浓缩。残留物被溶解 在水(10毫升)中，用二氯甲烷(3×10毫升)萃取。有机层被合并，干燥和真空浓 缩，得到0.17克粗产物。该粗产物通过闪蒸塔色谱[10-50％氯仿/甲醇/浓氨水 (80∶18∶2)的二氯甲烷溶液]进行纯化，得到0.14克(28％)3β-(叔丁氧基羰基氨基)- 4α-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)-3-丁烯基]环戊烷-甲酸甲酯(在C-6处的异构体B)， 为油状物，MS(ES+)371.4[90％,(M+1)]。
将上述油状物(0.12克，0.32毫摩尔)溶解在四氢呋喃/叔丁醇(2毫升，1∶1) 中，加入氧化N-甲基吗啉(50毫克)，四氧化锇(0.05重量％叔丁醇溶液，0.2毫升) 和水(1毫升)。反应混合物在室温下搅拌过夜。加入饱和的亚硫酸钠水溶液(2毫 升)，然后剧烈搅拌30分钟。加人盐水(2毫升)，水层用乙酸乙酯(3×10毫升)萃 取。有机层被合并，干燥和真空浓缩，得到0.1克粗产物。该粗产物通过闪蒸塔 色谱[0,5,10,50,100％甲醇的乙酸乙酯溶液]进行纯化，得到0.08克(62％)三 醇，为半固体，MS(ES+)405.4[100％,(M+1)]。
向上述固体(0.08克，0.2毫摩尔)的四氢呋喃(2毫升)溶液中，加入1N氢氧化 钠(1.2毫升，1.2毫摩尔)并在室温下搅拌1.5小时。加入乙醚(5毫升)和水(2毫升)， 并分离有机层。水层用乙酸乙酯(2×5毫升)洗涤。用1N盐酸将水层酸化至pH 5- 4，并用氯化钠进行饱和，并用乙酸乙酯(3×5毫升)萃取。有机层被合并，干燥 和真空浓缩，得到0.02克(26％)3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(1-甲基羰基氨 基)(2,3,4-三羟基)丁基]环戊烷-甲酸(在C-6处的异构体B)，为白色固体，MS(ES+) 391.4[20％,(M+1)]和373.6[100％(M+1)-H2O]。
向上述酸(0.02克，0.05毫摩尔)的二氯甲烷(1.0毫升)溶液中，加入三氟乙酸 (0.08毫升，1.1毫摩尔)。反应在室温下搅拌过夜。再加入额外的三氟乙酸(0.08毫 升，1.1毫摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。真空去除溶剂，并通过将残留物与 二氯甲烷(10毫升)共蒸馏2次而去除痕量三氟乙酸。残留物溶解在水(0.5毫升) 中，真空浓缩，并在丙酮回流温度下干燥，得到0.2克(77％)标题化合物，为黄褐 色固体，熔点58-62℃。 分析：C12H22N2O6·2C2HF3O2的计算值：            C,37.08；H,4.67；N,5.40
  测量值：                                            C,37.50；H,4.43；N,5.28
实施例12
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2,3,4-三羟基)丁基]-环 戊烷甲酸三氟乙酸(1∶2)(在C-1的异构体A，在C-6的异构体A，在C-7的异构体 B)
向冷却至-78℃，来自实施例10的2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(甲酰 基)(甲基羰基氨基)甲基]亚环戊基}-1,3-二噻烷(在C-6的异构体A)(1.75克，4.4毫 摩尔)的四氢呋喃(100毫升)溶液中，滴加溴化乙烯基镁(Aldrich,1.0M的四氢呋喃 溶液，44毫升，44毫摩尔)，然后在-78℃搅拌2小时。反应小心地用饱和的氯化 铵水溶液(20毫升)终止。加入乙醚(100毫升)和盐水(20毫升)，然后将反应混合物 升温至室温。分离有机层，水层用乙醚(3×50毫升)和二氯甲烷(100毫升)萃取。 有机层被合并，干燥，并真空浓缩，得到2.0克白色固体。
向溶解于二甲基甲酰胺(20毫升)中的上述固体(2.0克，4.4毫摩尔)，加入氯 化叔丁基二甲基甲硅烷(0.86克，5.5毫摩尔)、咪唑(0.6克，8.8毫摩尔)和4-二甲基 氨基吡啶(0.14克，0.11毫摩尔)。反应混合物在室温下搅拌过夜，用水(20毫升)终 止反应，然后用乙醚(3×25毫升)萃取，干燥和真空浓缩，得到2.48克粗产物。 粗产物用闪蒸塔色谱(150克硅胶，10-30％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到2- {3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-{2-{[(叔丁基)(二甲基)甲硅烷基]氧基}3-丁烯基}亚 环戊基}-1,3-二噻烷的下列异构体：
1．0.22克(9％)在C-6的异构体A，在C-7的异构体A的物质，为白色固体，熔 点72-76℃(分解)。 分析：C26H46N2O4S2Si·0.5H2O的计算值：    C,56.59；H,8.59；N,5.08
  测量值：                                     C,56.61；H,8.43；N,4.97
2．0.86克(36％)在C-6的异构体A，在C-7的异构体B的物质，为白色固体，熔 点116-118℃。 分析：C26H46N2O4S2Si的计算值：             C,57.53；H,8.54；N,5.16
  测量值：                                     C,57.84；H,8.59；N,5.23
向上述在C-6为异构体A且在C-7为异构体B(0.58克，1.07毫摩尔)的甲醇(16.6 毫升)溶液中，加入6N盐酸(2.8毫升，16.6毫摩尔)。混合物在室温下搅拌过夜。 反应混合物被冷却至0℃，加入氢氧化钠(0.86克，10.7毫摩尔)，反应在室温下搅 拌1小时。反应用冰醋酸(0.64毫升，10.7毫摩尔)终止，然后真空浓缩。向残留物 中加入1N盐酸(2.14毫升，2.14毫摩尔)、乙酸乙酯(10毫升)和水(10毫升)。分离水 层，用氯化钠饱和，并用乙酸乙酯(2×10毫升)萃取。有机层被合并和真空浓 缩，得到0.33克(85％)粗产物。
将上述粗产物溶解在无水甲醇(8毫升)中，并冷却至0℃。加入无水HCl的乙 醚(Aldrich,1.0M溶液，1.6毫升)溶液，在室温搅拌反应混合物过夜。反应混合 物被真空浓缩(浴温为25℃)，获得3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(2-羟基)(1-甲基羰 基氨基)-3-丁烯基]环戊烷-甲酸甲酯的粗残留物，为油状物，MS(ES+)371.5 [100％,(M+1)]。
向上述化合物的二氯甲烷(8.0毫升)溶液中，加入三氟乙酸(1.26毫升，16.4毫 摩尔)。反应在室温下搅拌过夜。再加入额外的三氟乙酸(0.63毫升，8.2毫摩 尔)，反应在室温下搅拌1小时。真空去除溶剂，并通过将残留物与二氯甲烷(5毫 升)共蒸馏2次而去除痕量三氟乙酸。将残留物溶解在二甲基甲酰胺(5毫升)中， 加入三乙胺(0.58毫升，4.1毫摩尔)、1,3-二(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲 (0.29毫升，0.98毫摩尔)和二氯化汞(0.27克，0.98毫摩尔)，反应在室温下搅拌过 夜。用乙酸乙酯(20毫升)稀释反应混合物，并过滤以去除无机杂质。滤液用水(2 ×10毫升)和盐水(10毫升)洗涤，干燥，并真空浓缩，得到0.4克粗产物。该粗产 物经闪蒸塔色谱[硅胶(20克)，40-50％乙酸乙酯的己烷溶液]纯化，得到3β-{[(叔 丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨 基)-3-丁烯基]环戊烷甲酸甲酯的2种C-1异构体：
1．0.15克(27％)C-1异构体A，为半固体，MS(ES+)495.5[100％,(M+1)-H2O] 和513.6[10％,(M+1)]。
2．0.07克(13％)C-1异构体B，为半固体，MS(ES+)513.5[100％,(M+1)]。
将上述异构体A(0.15克，0.29毫摩尔)溶解在四氢呋喃/叔丁醇(2毫升，1∶1) 中，加入氧化N-甲基吗啉(50毫克)，四氧化锇(少量晶体)和水(1毫升)。反应混合 物在室温下搅拌过夜。加入饱和的亚硫酸钠水溶液(2毫升)和亚硫酸钠(1克)，然 后剧烈搅拌30分钟。加入盐水(2毫升)，水层用氯化钠饱和，再用乙酸乙酯(3× 10毫升)萃取。有机层被合并，干燥和真空浓缩，得到0.15克(94％)纯的3β-{[(叔 丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2,3,4- 三羟基)丁基]环戊烷甲酸甲酯(C-1异构体A),MS(ES+)529.4[100％,(M+1)-H2O] 和547.4[50％,(M+1)]。
向上述固体(0.15克，0.27毫摩尔)的四氢呋喃(1.5毫升)溶液中，加入1N氢氧 化钠(1.4毫升，1.4毫摩尔)，并在室温下搅拌2.0小时。加入乙醚(2毫升)和水(2毫 升)，并分离有机层。水层用乙醚(2×5毫升)洗涤。用1N盐酸将水层酸化至pH 4，用氯化钠饱和，并用乙酸乙酯(3×5毫升)萃取。有机层被合并，干燥和真空 浓缩，得到0.13克(84％)酸，为白色固体，MS(ES+)515.4[80％,(M+1)-H2O]和 533.5[30％(M+1)]。
向上述酸(0.13克，0.24毫摩尔)的二氯甲烷(2.0毫升)溶液中，加入三氟乙酸 (0.04毫升，0.48毫摩尔)。反应在室温下搅拌过夜。再加入额外的三氟乙酸(0.02 毫升，0.24毫摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。真空去除溶剂，并通过将残留物 与二氯甲烷(10毫升)共蒸馏2次而去除过量的痕量三氟乙酸。残留物溶解在水(1.0 毫升)中，真空浓缩，并在丙酮回流温度下干燥，得到0.07克(46％)标题化合物， 为黄褐色固体，熔点76-80℃。 分析：C13H24N4O6·2C2HF3O2的计算值：            C,36.44；H,4.67；N,9.99
  测量值：                                            C,36.81；H,4.24；N,9.55
实施例13
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2,3,4-三羟基)丁基]-环 戊烷甲酸三氟乙酸(1∶2)(在C-1为异构体B，在C-6为异构体A，在C-7为异构体 B)
将3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(2-羟 基)(1-甲基羰基氨基)-3-丁烯基]环戊烷甲酸甲酯(来自实施例12的C-1异构体B)(70 毫克，0.14毫摩尔)溶解在四氢呋喃/叔丁醇(2毫升，1∶1)中，加入氧化N-甲基吗 啉(50毫克)，四氧化锇(少量晶体)和水(1毫升)。反应混合物在室温下搅拌过夜。 加入饱和的亚硫酸钠水溶液(2毫升)和亚硫酸钠(1克)，然后剧烈搅拌30分钟。加 入盐水(2毫升)，水层用氯化钠饱和，再用乙酸乙酯(3×10毫升)萃取。有机层被 合并，干燥和真空浓缩，得到0.07克(86％)3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰 基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2,3,4-三羟基)丁基]环戊烷甲酸甲酯 (C-1异构体B),MS(ES+)547.4[100％,(M+1)]。
向上述固体(0.07克，0.13毫摩尔)的四氢呋喃(1.5毫升)溶液中，加入1N氢氧 化钠(0.64毫升，0.64毫摩尔)，并在室温下搅拌2小时。加入乙醚(2毫升)和水(2毫 升)，并分离有机层。水层用乙醚(2×5毫升)洗涤。用1N盐酸将水层酸化至pH 4，用氯化钠饱和，并用乙酸乙酯(3×5毫升)萃取。有机层被合并，干燥和真空 浓缩，得到0.017克(26％)酸，为白色固体，MS(ES+)533.2[60％(M+1)]。
向上述酸(0.017克，0.03毫摩尔)的二氯甲烷(2.0毫升)溶液中，加入三氟乙酸 (0.06毫升，0.6毫摩尔)。反应在室温下搅拌过夜。再加入额外的三氟乙酸(0.03毫 升，0.3毫摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。真空去除溶剂，并通过将残留物与 二氯甲烷(10毫升)共蒸馏2次而去除过量的痕量三氟乙酸。残留物溶解在水(1.0毫 升)中，真空浓缩，并在丙酮回流温度下干燥，得到0.01克(60％)标题化合物，为 黄褐色固体，熔点124-128℃。 分析：C13H24N4O6·2C2HF3O2的计算值：        C,36.44；H,4.67；N,10.00
  测量值：                                        C,35.84；H,4.24；N,10.51
实施例14
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2,3,4-三羟基)丁基]-环 戊烷甲酸三氟乙酸(4∶9)(在C-6为异构体B，在C-1、C-7和/或C-8为异构体A)
向冷却至-78℃，来自实施例10的2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(甲酰 基)(甲基羰基氨基)甲基]亚环戊基}-1,3-二噻烷(在C-6为异构体B)(2.58克，6.45毫 摩尔)的四氢呋喃(64毫升)溶液中，滴加溴化乙烯基镁(Aldrich,1.0M的四氢呋喃溶 液，64.5毫升，64.5毫摩尔)，然后在-78℃搅拌混合物1小时。反应小心地用饱和 的氯化铵水溶液(20毫升)终止。加入乙醚(100毫升)和盐水(20毫升)，然后将反应 混合物升温至室温。分离有机层，水层用乙醚(3×50毫升)萃取。有机层被合 并，干燥，并真空浓缩，得到3.7克白色固体。
向溶解于二甲基甲酰胺(30毫升)中的上述固体(2.0克，4.4毫摩尔)，加入氯 化叔丁基二甲基甲硅烷(1.31克，5.5毫摩尔)、咪唑(0.92克，13.5毫摩尔)和二甲 基氨基吡啶(0.21克，1.69毫摩尔)。反应混合物在室温下搅拌过夜，用水(30毫升) 终止反应，然后用乙醚(3×30毫升)萃取。有机层被合并，用水(30毫升)和盐水 (30毫升)洗涤，干燥和真空浓缩，得到3.8克粗产物。该粗产物经闪蒸塔色谱(210 克硅胶，25％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到1.44克(41％)2-{3β-(叔丁氧基羰基 氨基)-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2-{[(叔丁基)(二甲基)甲硅烷基]氧基}-3-丁烯基}亚环 戊基}-1,3-二噻烷(C-6异构体B，在C-7为85∶15的混合物)，为白色固体，熔点 76-84℃。 分析：C26H46N2O4S2Si的计算值：             C,57.53；H,8.54；N,5.16
  测量值：                                     C,57.29；H,8.52；N,5.09
向2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2-{[(叔丁基)(二甲基)甲 硅烷基]氧基}-3-丁烯基}亚环戊基}-1,3-二噻烷(1.4克，2.58毫摩尔)的甲醇(39.0毫 升)溶液中，加入6 N盐酸(6.5毫升，39.0毫摩尔)。混合物在室温下搅拌过夜。反 应混合物被冷却至0℃，加入氢氧化钠(2.07克，51.7毫摩尔)，反应在室温下搅拌 1小时。反应用冰醋酸(1.6毫升，27毫摩尔)终止，然后真空浓缩。向获得的残留 物中加入1N盐酸(5.2毫升，5.2毫摩尔)、乙酸乙酯(10毫升)和水(20毫升)。分离水 层，用氯化钠饱和，并用乙酸乙酯(2×10毫升)萃取。有机层被合并和真空浓 缩，得到0.68克(74％)粗产物。
将上述粗产物溶解在无水甲醇(19毫升)中，并冷却至0℃。加入无水HCl的 乙醚(Aldrich,1.0M溶液，3.8毫升)溶液，在室温下搅拌反应混合物过夜。反应 混合物被真空浓缩(浴温为25℃)，获得3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(2-羟基)(1-甲 基羰基氨基)-3-丁烯基]环戊烷-甲酸甲酯，为油状物，MS(ES+)371.5[100％, (M+1)]。
将上述酯的二氯甲烷(19毫升)溶液中，加入三氟乙酸(2.94毫升，38.0毫摩 尔)。反应在室温下搅拌过夜。再加入额外的三氟乙酸(1.5毫升，17毫摩尔)，反 应在室温下搅拌1小时。真空去除溶剂，并通过将残留物与二氯甲烷(5毫升)共蒸 馏2次而去除痕量三氟乙酸。将残留物溶解在二甲基甲酰胺(10毫升)中，加入三 乙胺(1.4毫升，10毫摩尔)、1,3-二(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(0.66毫升， 2.28毫摩尔)和二氯化汞(0.62克，2.28毫摩尔)。反应在室温下搅拌过夜。用乙酸 乙酯(30毫升)稀释反应混合物，并过滤以去除无机杂质。滤液用水(2×10毫升)和 盐水(10毫升)洗涤，干燥，并真空浓缩，得到0.78克粗产物。该粗产物经闪蒸塔 色谱[硅胶(40克)，40-50％乙酸乙酯的己烷溶液]纯化，得到3β-{[(叔丁氧基羰基 氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)-3-丁烯基] 环戊烷甲酸甲酯的2种异构体：
1．0.15克(16％)异构体A，为半固体，MS(ES+)495.5[100％,(M+1)-H2O]和 513.6[30％,(M+1)]。
2．0.12克(13％)异构体B，为半固体，MS(ES+)513.5[100％,(M+1)]。
将上述异构体A(0.13克，0.25毫摩尔)溶解在四氢呋喃/叔丁醇(2毫升，1∶1) 中，加入氧化N-甲基吗啉(50毫克)，四氧化锇(少量晶体)和水(1毫升)。反应混合 物在室温下搅拌过夜。加入饱和的亚硫酸钠水溶液(2毫升)和亚硫酸钠(1克)，然 后剧烈搅拌30分钟。加入盐水(2毫升)，水层用氯化钠饱和，再用乙酸乙酯(3× 10毫升)萃取。有机层被合并，干燥和真空浓缩，得到0.12克(92％)3β-{[(叔丁氧 基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2,3,4-三羟 基)丁基]环戊烷甲酸甲酯，MS(ES+)547.4[20％,(M+1)]和529.4[100％,(M+1)- H2O]。
向上述固体(0.12克，0.23毫摩尔)的四氢呋喃(1毫升)溶液中，加入1N氢氧化 钠(1.1毫升，1.1毫摩尔)，并在室温下搅拌混合物2.0小时。加入乙醚(2毫升)和水 (2毫升)，并分离有机层。水层用氯化钠饱和，并用乙酸乙酯(3×5毫升)萃取。有 机层被合并，干燥和真空浓缩，得到0.033克(25％)酸，为白色固体，MS(ES+) 515.4[25％,(M+1)-H2O]和533.4[5％(M+1)]。
向上述酸(0.033克，0.06毫摩尔)的二氯甲烷(2.0毫升)溶液中，加入三氟乙酸 (0.1毫升，1.2毫摩尔)。反应在室温下搅拌过夜。再加入额外的三氟乙酸(0.05毫 升，0.6毫摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。真空去除溶剂，并通过将残留物与 二氯甲烷(10毫升)共蒸馏2次而去除过量的痕量三氟乙酸。将残留物溶解在水(1.0 毫升)中，真空浓缩，并在丙酮回流温度下干燥，得到0.018克(49％)标题化合 物，为黄褐色固体，熔点125-135℃。 分析：C13H24N4O6·2.25C2HF3O2的计算值：         C,35.69；H,4.49；N,9.51
  测量值：                                            C,36.02；H,4.19；N,9.58
实施例15
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2,3,4-三羟基)丁基]-环 戊烷甲酸三氟乙酸(5∶13)(在C-6为异构体B，在C-1、C-7和/或C-8为异构体B)
将3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(2-羟 基)(1-甲基羰基氨基)-3-丁烯基]环戊烷甲酸甲酯(来自实施例14,C-6异构体B， 在C-1和C-7为异构体B)(0.12克，0.24毫摩尔)溶解在四氢呋喃/叔丁醇(2毫升，1∶ 1)中，加入氧化N-甲基吗啉(60毫克)，四氧化锇(少量晶体)和水(1毫升)。反应混 合物在室温下搅拌过夜。加入饱和的亚硫酸钠水溶液(2毫升)和亚硫酸钠(1克)， 然后剧烈搅拌30分钟。加入盐水(2毫升)，水层用氯化钠饱和，再用乙酸乙酯(3 ×10毫升)萃取。有机层被合并，干燥和真空浓缩，得到0.11克(87％)3β-{[(叔丁 氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(1-甲基羰基氨基)(2,3,4-三 羟基)丁基]环戊烷甲酸甲酯，MS(ES+)547.5[100％,(M+1)]。
向上述固体(0.11克，0.2毫摩尔)的四氢呋喃(1毫升)溶液中，加入1N氢氧化 钠(1.1毫升，1.1毫摩尔)，并在室温下搅拌混合物2小时。加入乙醚(2毫升)和水(2 毫升)，并分离有机层。水层用乙醚(2×5毫升)洗涤。水层用1N盐酸酸化至pH 4，用氯化钠饱和，并用乙酸乙酯(3×5毫升)萃取。有机层被合并，干燥和真空 浓缩，得到0.013克(12％)酸，为白色固体，MS(ES+)533.5[100％(M+1)]。
向上述酸(0.013克，0.24毫摩尔)的二氯甲烷(2.0毫升)溶液中，加入三氟乙酸 (0.04毫升，0.48毫摩尔)。反应在室温下搅拌过夜。再加入额外的三氟乙酸(0.02 毫升，0.24毫摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。真空去除溶剂，并通过将残留物 与二氯甲烷(10毫升)共蒸馏2次而去除过量的痕量三氟乙酸。将残留物溶解在水 (1.0毫升)中，真空浓缩，并在丙酮回流温度下干燥，得到0.01克标题化合物，熔 点140-145℃。 分析：C13H24N4O6·2.6C2HF3O2的计算值：          C,34.76；H,4.26；N,8.91
  测量值：                                            C,34.52；H,4.20；N,9.16
实施例16 顺式-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-反式-1-羟基-反式-4-[(1-甲基羰基氨 基)(2-三氟甲基羰基氧基)乙基]-环戊烷-r-甲酸 三氟乙酸(4∶1)(C-6异构体A)
在-78℃和氮气下，于2分钟内，向三(甲基硫代)甲烷(1.08克，7.0毫摩尔)的 四氢呋喃(15毫升)溶液中滴加正丁基锂(1.6M,4.4毫升，7.0毫摩尔)。然后在该 温度下再搅拌半小时，向其中加入3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨 基)甲基]氨基}-4α-[(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊酮(来自实施例6的异构 体A,0.49克，1.0毫摩尔)的四氢呋喃(5毫升)溶液。混合物在-78℃搅拌1小时 后，用饱和的氯化铵溶液(5毫升)终止反应。让混合物升温至室温，并分离有机 层。水层再用乙醚(10毫升)萃取。合并后的有机层用硫酸镁干燥，过滤。滤液被 浓缩，形成浆状物。该浆状物通过硅胶柱(25克)并以乙醚/己烷(3∶1)为洗脱液， 得到0.42克(66％)t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-4- [(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环戊-r-醇(C-6异构体 A)，为白色固体。通过在乙醚/己烷中重结晶而制得分析样品，熔点155℃(分 解)。 分析：C26H46N4O8S3的计算值：                  C,48.88；H,7.26；N,8.77
  测量值：                                       C,49.00；H,7.34；N,8.64
向上述化合物(1.5克，2.4毫摩尔)的四氢呋喃(25毫升)溶液中，在氮气下滴 加硼氢化锂(Aldrich,0.22克，9.6毫摩尔)和9-硼杂二环[3.3.1]壬烷氢化锂 (lithium 9-borabicyco[3.3.1]nonane hydride)(Aldrich,1M四氢呋喃溶液，0.24毫 升，0.24毫摩尔)，然后反应混合物在室温下搅拌过夜。再加入硼氢化锂(0.16 克，7.2毫摩尔)和9-硼杂二环[3.3.1]壬烷氢化锂(Aldrich,1M四氢呋喃溶液， 0.24毫升，0.24毫摩尔)，然后反应在室温下搅拌4小时。反应用1N氢氧化钠(3 毫升)和盐水(3毫升)终止，并搅拌5分钟。用冰醋酸将反应酸化至pH4。加入乙 醚(10毫升)，并分离水层。水层用饱和碳酸氢钠水溶液中和，用乙醚(2×10毫升) 萃取。有机层被合并，干燥和真空浓缩，获得1.55克黄色油状物。该油状物通过 闪蒸塔色谱[20％氯仿∶甲醇∶浓氨水(80∶18∶2)的二氯甲烷溶液]纯化。该油状 物在乙醚/己烷中结晶，得到0.6克(42％)t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基 亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)乙基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基] 环戊-r-醇(C-6异构体A)，为白色固体，熔点108-112℃。 分析：C24H44N4O7S3的计算值：             C,48.30；H,7.43；N,9.39
  测量值：                                  C,48.37；H,7.49；N,9.25
向上述化合物(1.0克，1.69毫摩尔)、二氯化汞(1.69克，6.23毫摩尔)和氧化 汞(0.48克，2.53毫摩尔)的混合物中，加入甲醇/水(40/3毫升)。然后在室温下搅 拌反应混合物30分钟。混合物通过硅藻土和硅酸镁载体(17克)板过滤。滤饼用甲 醇(20毫升)洗涤，滤液被真空浓缩，得到1.8克白色半固体。粗产物通过闪蒸塔 色谱[硅胶(33克)；75％乙酸乙酯的己烷溶液和10％甲醇的乙酸乙酯溶液]，得到 0.57克(68％)c-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-t-1-羟基 -t-4-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)乙基]环戊烷-r-甲酸甲酯(C-6异构体A)，为白色固 体，熔点72-74℃[Rf=0.47,5％甲醇的乙酸乙酯溶液]。 分析：C22H38N4O9的计算值：                   C,52.58；H,7.62；N,11.15
  测量值：                                     C,52.85；H,7.82；N,10.93
向上述酯(0.5克，1.0毫摩尔)的四氢呋喃(10毫升)溶液中，加入1N氢氧化钾 (2.0毫升，2.0毫摩尔)和水(3毫升)。反应混合物在室温下搅拌1小时。真空除去四 氢呋喃，水层用冰醋酸酸化(pH=5)。水层用氯化钠饱和，然后用乙酸乙酯(5×10 毫升)萃取。有机层被合并和真空浓缩，得到0.43克(88％)c-3-{[(叔丁氧基羰基氨 基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-t-l-羟基-t-4-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)乙基] 环戊烷-r-甲酸(C-6异构体A)，为白色固体，MS(ES+)489.5[50％,(M+1)]。
将上述酸(0.29克，0.6毫摩尔)溶解在二氯甲烷(12毫升)溶液中，加入三氟乙 酸(0.91毫升，11.8毫摩尔)。反应在室温下搅拌过夜。再加入三氟乙酸(0.45毫 升，5.9毫摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。溶剂被真空除去，通过与二氯甲烷 (10毫升)共蒸馏2次而除去痕量的过量三氟乙酸。残留物用乙醚研制，得到0.14 克(56％)标题化合物，为白色固体，熔点148-160℃。 分析：C13H19F3N4O9·0.25C2HF3O2的计算值：      C,39.28；H,4.70；N,13.57
  测量值：                                            C,39.34；H,5.00；N,13.26
实施例17
顺式-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-反式-1-羟基-反式-4-[(1-甲基羰基氨 基)(2-三氟甲基羰基氧基)乙基]-环戊烷-r-甲酸 三氟乙酸(4∶3)(C-6异构体B)
在-78℃和氮气下，于10分钟内，向三(甲基硫代)甲烷(Aldrich,18.9毫升， 142毫摩尔)的四氢呋喃(250毫升)溶液中滴加正丁基锂(1.6M己烷溶液，98毫升， 156毫摩尔)。然后在-78℃搅拌40分钟。在10分钟内，向-78℃的该阴离子滴加入 3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙氧基羰基)(甲 基羰基氨基)甲基]环戊酮(来自实施例6的异构体B)(8.58克，17.7毫摩尔)的四氢呋 喃(85毫升)溶液。混合物在-78℃搅拌1.5小时。用饱和的氯化铵溶液(50毫升)终 止反应，然后升温至室温。加入乙醚(50毫升)，有机层被合并，用硫酸镁干燥， 和真空浓缩，形成粗产物。该粗产物经闪蒸塔色谱(硅胶，660克，30-50乙酸乙 酯的己烷溶液)纯化，得到3.8克(34％)t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚 氨基)甲基]氨基}-c-4-[(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基] 环戊-r-醇(C-6异构体B)，为白色固体，熔点94-96℃。 分析：C26H46N4O8S3的计算值：                 C,48.88；H,7.26；N,8.77
  测量值：                                      C,49.08；H,7.05；N,8.75
向上述化合物(1.4克，2.2毫摩尔)的四氢呋喃(22毫升)溶液中，在氮气下滴 加硼氢化锂(Aldrich,0.38克，16.43毫摩尔)和9-硼杂二环[3.3.1]壬烷氢化锂 (lithium 9-borabicyco[3.3.1]nonane hydride)(Aldrich,1M四氢呋喃溶液，0.44毫 升，0.44毫摩尔)，然后反应混合物在室温下搅拌过夜。反应用1N氢氧化钠(3毫 升)和盐水(3毫升)终止，并搅拌5分钟。用冰醋酸将反应酸化至pH4。加入乙醚 (10毫升)，并分离水层。水层用饱和碳酸氢钠水溶液中和，用乙醚(2×10毫升)萃 取。有机层被合并，干燥和真空浓缩，获得1.44克黄色油状物。该油状物通过闪 蒸塔色谱[20％氯仿∶甲醇∶浓氨水(80∶18∶2)的二氯甲烷溶液]纯化。该油状物 在乙醚/己烷中结晶，得到0.47克(36％)t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚 氨基)甲基]氨基}-c-4-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)乙基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环 戊-r-醇(C-6异构体B)，为白色固体，熔点108-110℃。 分析：C24H44N4O7S3的计算值：               C,48.30；H,7.43；N,9.39
  测量值：                                    C,48.58；H,7.51；N,9.20
向上述化合物(0.78克，1.32毫摩尔)、二氯化汞(1.34克，4.9毫摩尔)和氧化 汞(0.43克，1.97毫摩尔)的混合物中，加入甲醇/水(29.5/2.5毫升)。然后在室温下 搅拌反应混合物30分钟。混合物通过硅藻土和硅酸镁载体(13克)板过滤。滤饼用 甲醇(20毫升)洗涤，滤液被真空浓缩，得到1.1克白色半固体。粗产物通过闪蒸 塔色谱[硅胶(30克)；75％乙酸乙酯的己烷溶液和10％甲醇的乙酸乙酯溶液]，得 到0.42克(63％)c-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-t-1-羟 基-t-4-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)乙基]环戊烷-r-甲酸甲酯(C-6异构体B)，为白色 固体，熔点194-198℃。 分析：C22H38N4O9·0.5H2O的计算值：           C,51.65；H,7.68；N,10.95
  测量值：                                       C,51.37；H,7.50；N,10.93
向上述酯(0.38克，0.76毫摩尔)的四氢呋喃(7.5毫升)溶液中，加入1N氢氧化 钾(1.5毫升，1.5毫摩尔)和水(2.25毫升)。反应混合物在室温下搅拌1小时。真空 除去四氢呋喃，水层用冰醋酸酸化(pH=5)。水层用氯化钠饱和，然后用乙酸乙 酯(5×10毫升)萃取。有机层被合并和真空浓缩，得到0.325克(87％)酸。该酸用 乙酸乙酯的己烷溶液进行研制，得到0.18克c-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基 羰基亚氨基)甲基]氨基}-t-1-羟基-t-4-[(2-羟基)(1-甲基羰基氨基)乙基]环戊烷-r-甲 酸(C-6异构体B)，为白色固体，MS(ES+)489.4[100％,(M+1)]。
将上述酸(0.15克，0.31毫摩尔)溶解在二氯甲烷(6毫升)中，加入三氟乙酸 (0.48毫升，6.3毫摩尔)。反应在室温下搅拌过夜。再加入三氟乙酸(0.24毫升， 3.2毫摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。溶剂被真空除去，通过与二氯甲烷(10毫 升)共蒸馏2次而除去痕量的过量三氟乙酸。残留物用乙醇/乙醚研制，得到0.125 克(86％)标题化合物，为白色固体，熔点210-220℃。 分析：C13H19F3N4O9·0.75C2HF3O2的计算值：     C,37.07；H,4.24；N,11.93
  测量值：                                           C,37.33；H,4.45；N,12.22
实施例18                      ·CF3CO2H·1.5CF3CO2NH4
t-3-氨基-c-4-[(1-甲基羰基氨基)(2-苯基甲氧基)乙基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸 三氟乙酸三氟乙酸铵(2∶2∶3)
在室温下，搅拌c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[(1-甲基羰基氨基)(2-苯基甲氧 基)乙基]-t-1-[二(苯基硫代)甲基]环戊-r-1-醇(来自实施例8)(2.53克，4.1毫摩尔)、 氧化汞(1.90克，8.8毫摩尔)和醚合三氟化硼(1.1毫升，8.9毫摩尔)在15％四氢呋喃 水溶液(70毫升)中的混合物2小时。反应混合物通过硅藻土和硅酸镁载体(Florisil) 板过滤。滤液被真空浓缩，得到2.74克粗产物。向上述粗产物的甲醇(50毫升)溶 液中，加入碘(1.9克，7.5毫摩尔)。反应混合物被加热至50℃。向该混合物中滴 加氢氧化钾溶液(0.71M/甲醇，50毫升，35.7毫摩尔)。在50℃搅拌2小时后，反应 混合物通过硅藻土过滤。滤液被真空浓缩，形成的残留物溶解在乙酸乙酯(30毫 升)和水(20毫升)中。分离各层，水层用乙酸乙酯(4×10毫升)萃取。合并后的有 机萃取物用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，用硅藻土过滤，然后真空浓缩，得到3.6 克粗产物。经闪蒸塔色谱(硅胶，200克，50-100％乙酸乙酯/己烷)纯化后，得到 0.224克(14％)所需的醇酸，为白色固体。向该醇酸(0.244克，0.56毫摩尔)的二氯 甲烷(15毫升)溶液中，加入三氟乙酸(0.86毫升，11.2毫摩尔)，反应混合物在室温 下搅拌12小时。反应混合物被真空浓缩，得到粗产物。经闪蒸塔色谱(硅胶，60 克，氯仿/甲醇/氢氧化铵：80/18/2)纯化后，得到0.241克粘稠的黄色油状物。用 乙醚研制该黄色油状物，得到0.185克(51％)标题化合物，为黄褐色固体，熔点 37-39℃。 分析：C17H24N2O5·C2HF3O·C2HF3O·1.5C2H4F3O2的计算值：C,40.84；H,4.83；N,7.58
  测量值：                                                         C,40.86；H,5.08；N,7.90
实施例19
c-3-{[(氨基(亚氨基)甲基)氨基]}-t-1-羟基-t-4-{(甲基羰基氨基){[(甲基)-(甲氧 基)氨基]羰基}甲基}环戊烷-r-甲酸三氟乙酸(1∶1)
向t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(乙氧基 羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环戊-r-醇(C-6异构体B)(来自实 施例17,2.1克，3.3毫摩尔)的乙醇(4毫升)和四氢呋喃(16.5毫升)溶液中，加入1N 氢氧化钠(6.6毫升)和水(4毫升)。反应混合物在室温下搅拌2小时。真空去除四氢 呋喃，用冰醋酸将水层酸化至pH 5-4。固体通过过滤收集，并在丙酮回流温度下 真空干燥，得到1.78克(87％)t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲 基]氨基}-c-4-[(羧基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环戊-r-醇，为 白色固体，MS(ES+)611.5。
向冷却至0℃的上述酸(0.92克，1.5毫摩尔)的二氯甲烷/四氢呋喃(12/3毫升) 溶液中，加入氯代甲酸甲酯(0.13毫升，1.58毫摩尔)和三乙胺(0.25毫升，1.8毫摩 尔)。反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后加入已在0℃搅拌过30分钟的盐酸N,O- 二甲基羟胺(0.22克，2.25毫摩尔)和三乙胺(0.42毫升，3.0毫摩尔)的二氯甲烷(5毫 升)冷溶液。让反应混合物的温度回升至室温并搅拌过夜。加入乙醚(20毫升)、 四氢呋喃(5毫升)和0.5N氢氧化钠(20毫升)，分离有机层。有机层用盐酸(20毫升) 洗涤，干燥并真空浓缩，得到酰胺粗产物，为油状物。该粗产物通过闪蒸塔色 谱[60克硅胶，50-100％乙酸乙酯的己烷溶液]纯化，得到0.63克(64％)t-3-{[(叔丁 氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-4-{(甲基羰基氨基){[(甲氧 基)(甲基)氨基]羰基)甲基}-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环戊-r-醇，为白色固体。通过 在乙醚中结晶而制备分析样品，熔点200℃。 分析：C26H47N5O8S3的计算值：                 C,47.76；H,7.25；N,10.71
  测量值：                                      C,47.96；H,7.28；N,10.63
向上述化合物(0.5克，0.77毫摩尔)、二氯化汞(0.78克，2.8毫摩尔)和氧化汞 (0.25克，1.15毫摩尔)的混合物中，加入甲醇/水(16.3/1.4毫升)。然后在室温下搅 拌反应混合物30分钟。混合物通过硅藻土和硅酸镁载体(7克)板过滤。滤饼用甲 醇(20毫升)洗涤，滤液被真空浓缩，得到1.8克白色半固体。粗产物通过闪蒸塔 色谱[硅胶(20克)；75％乙酸乙酯的己烷溶液和10％甲醇的乙酸乙酯溶液]，得到 0.35克(82％)c-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-t-1-羟基 -t-4-{(甲基羰基氨基){[(甲氧基)(甲基)氨基]羰基}甲基}环戊烷-r-甲酸甲酯，为白 色固体，熔点72-74℃[Rf=0.29和0.15，乙酸乙酯]；MS(ES+)560.6。
向上述固体(0.352克，0.63毫摩尔)的四氢呋喃(6.3毫升)溶液中，加入1N氢 氧化钾(1.3毫升，1.3毫摩尔)和水(5毫升)。反应混合物在室温下搅拌1小时。真空 除去四氢呋喃，水层用乙醚(2×10毫升)洗涤。然后水层用冰醋酸酸化至pH 5- 4，用氯化钠饱和，并用乙酸乙酯(3×10毫升)萃取。合并的有机层被干燥和真空 浓缩，得到0.23克(67％)c-4-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨 基}-t-1-羟基-t-4-{(甲基羰基氨基){[(甲氧基)(甲基)氨基]羰基}甲基}环戊烷-r-甲 酸，为白色固体，MS(ES+)546.6。
向上述酸(0.18克，0.33毫摩尔)的二氯甲烷(6.6毫升)溶液中，加入三氟乙酸 (0.51毫升，6.6毫摩尔)。反应在室温下搅拌过夜。再加入三氟乙酸(0.25毫升， 3.3毫摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。溶剂被真空除去，通过与二氯甲烷(10毫 升)共蒸馏2次而除去痕量的过量三氟乙酸。残留物被溶解在水中(5毫升)，并真 空浓缩，得到白色固体。该固体用乙醚研制，得到0.14克(92％)标题化合物，为 白色固体，熔点160-162℃。 分析：C13H23N5O6·C2HF2O2的计算值：             C,39.22；H,5.26；N,15.25
  测量值：                                           C,39.09；H,5.29；N,14.95
实施例20
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-{{4-[(甲氧基)(甲基)氨基]-1-(甲基羰基氨 基)-2-氧}丁基}环戊烷甲酸 三氟乙酸(1∶1)
向2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙氧 基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-1-亚环戊基}-1,3-二噻烷(来自实施例6,6.74克， 11.5毫摩尔)的乙醇(57.5毫升)和四氢呋喃(115毫升)溶液中，加入1N氢氧化钠(23 毫升，23毫摩尔)和水(35毫升)。反应混合物在室温下搅拌5小时。真空去除四氢 呋喃，水层用乙酸乙酯(2×10毫升)萃取。用冰醋酸将水层酸化至pH 5-4。获得 的固体通过过滤收集，并在丙酮回流温度下真空干燥，得到5.95克(93％)2-{3β- {[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(羧基)(甲基羰基氨 基)甲基]-1-亚环戊基}-1,3-二噻烷，为白色固体。通过在乙醇中结晶而制得分析 样品，熔点158℃。 分析：C24H38N4O7S2·0.75C2H6O的计算值：        C,51.63；H,7.22；N,9.44
  测量值：                                            C,51.70；H,7.26；N,9.18
向冷却至0℃的上述酸(0.63克，1.13毫摩尔)的二氯甲烷/四氢呋喃(8/2毫升) 溶液中，加入氯代甲酸甲酯(0.1毫升，1.24毫摩尔)和三乙胺(0.19毫升，1.36毫摩 尔)。反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后加入已在0℃搅拌过30分钟的盐酸N,O- 二甲基羟胺(0.17克，1.7毫摩尔)和三乙胺(0.32毫升，2.26毫摩尔)的二氯甲烷(5毫 升)冷溶液。让反应混合物的温度回升至室温并搅拌过夜。加入盐水(5毫升)、水 (5毫升)和饱和碳酸钠(5毫升)，并分离有机层。有机层被干燥和真空浓缩，得到 一油状物。该粗产物通过闪蒸塔色谱[34克硅胶，50-75％乙酸乙酯的己烷溶液]纯 化，得到0.48克(63％)2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨 基}-4α-{{[(甲氧基)(甲基)氨基]羰基}甲基}亚环戊基}-1,3-二噻烷。通过在乙醚/己 烷中结晶而制备分析样品，熔点190-192℃。 分析：C26H43N5O7S2的计算值：            C,51.89；H,7.20；N,11.64
  测量值：                                 C,52.32；H,7.24；N,11.33
在10分钟内，向上述化合物(3.4克，5.7毫摩尔)的四氢呋喃(50毫升)溶液 中，滴加溴化乙烯基镁(Aldrich,1.0M的四氢呋喃溶液，33.94毫升，33.94毫摩 尔)。反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后用饱和的氯化铵水溶液和盐水(1∶ 1,30毫升)终止。加入乙醚(25毫升)，分离有机层，水层用乙醚(25毫升)洗涤。有 机层被合并，干燥，和真空浓缩，形成一油状物。该粗产物通过闪蒸塔色谱(180 克硅胶，20-70％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到2.0克(56％)2-{3β-{[(叔丁氧基 羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-{{4-[(甲氧基)(甲基)氨基]-1-(甲基 羰基氨基)-2-氧}丁基}亚环戊基}-1,3-二噻烷，为白色固体，熔点99-101℃。 分析：C28H47N5O7S3的计算值：       C,53.40；H,7.52；N,11.12；S,10.18
  测量值：                            C,53.81；H,7.48；N,10.96；S,10.25
向上述化合物(0.55克，0.9毫摩尔)的甲醇(26.4毫升)溶液中，加入6N盐酸 (2.2毫升，13.0毫摩尔)。混合物在室温下搅拌直至所有的原料消失(TLC分析， 乙酸乙酯，约30小时)。反应混合物被冷却至0℃，加入氢氧化钠(0.72克，18毫 摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。用冰醋酸(0.5毫升)终止反应并真空浓缩，得到 一残留物。向该残留物中加入乙酸乙酯(10毫升)和水(10毫升)。分离水层并用乙 酸乙酯(10毫升)萃取。有机层被合并和真空浓缩，得到粗产物。粗产物经闪蒸塔 色谱[50-80乙酸乙酯的己烷溶液]纯化，得到0.29克(56％)3β-{[(叔丁氧基羰基氨 基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-{{4-[(甲氧基)(甲基)氨基]-1-(甲基羰基氨 基)-2-氧}丁基}环戊烷甲酸甲酯，为油状物。该油状物在乙醚中结晶后，为白色固 体。 分析：C26H45F3N5O9的计算值：                    C,54.63；H,7.93；N,12.25
  测量值：                                         C,54.66；H,7.87；N,11.94
向上述酯(0.2克，0.35毫摩尔)的四氢呋喃(3.5毫升)溶液中，加入1N氢氧化 钾(0.88毫升，0.88毫摩尔)和水(2毫升)。反应混合物在室温下搅拌2小时。真空除 去四氢呋喃，加入水(5毫升)，水层用乙醚(2×5毫升)洗涤，并用冰醋酸酸化至 pH 5-4。水层用氯化钠饱和，然后用乙酸乙酯(3×10毫升)萃取。合并的有机层 被干燥和真空浓缩，得到0.18克相应的环戊烷甲酸，为白色固体，MS(ES+) 558.3[100％,(M+1)]。
向上述酸(0.18克，0.33毫摩尔)的二氯甲烷(6.6毫升)溶液中，加入三氟乙酸 (0.51毫升，6.6毫摩尔)。反应在室温下搅拌过夜。再加入三氟乙酸(0.25毫升， 3.3毫摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。溶剂被真空除去，通过与二氯甲烷(10毫 升)共蒸馏2次而除去痕量的过量三氟乙酸。残留物用乙醚(2×10毫升)洗涤，用甲 醇/乙醚沉淀，在甲苯回流温度下真空干燥。获得标题化合物，为黄褐色固体， 熔点189-192℃。 分析：C15H27N5O5·C2HF3O2的计算值：         C,43.31；H,5.99；N,14.85
  测量值：                                       C,43.38；H,5.74；N,14.42
实施例21
t-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(二乙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸 三氟乙酸(3∶5)
在-78℃下，向三(甲基硫代)甲烷(1.6毫升，12毫摩尔)的四氢呋喃(20毫升)溶 液中滴加正丁基锂(2.5M,5.3毫升，13.3毫摩尔)。在搅拌30分钟后，滴加实施例 8的3β-叔丁氧基羰基氨基-4α-[二(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊酮(1.0 克，2.4毫摩尔)的四氢呋喃(15毫升)溶液。混合物在-78℃搅拌3小时，然后用饱 和的氯化铵水溶液(15毫升)终止。分离的水层用乙醚(4×10毫升)萃取。合并后的 有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，通过硅藻土过滤，并真空浓缩，形成粗产 物。经径向PLC(硅胶，25-35％乙酸乙酯/己烷)纯化后，得到0.48克(35％)c-3-(叔 丁氧基羰基氨基)-t-4-[二(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫代)甲 基]环戊-r-醇，为白色固体，熔点98-100℃。 分析：C23H40N2O8S3的计算值：               C,48.57；H,7.09；N,4.93
  测量值：                                    C,48.74；H,7.00；N,4.91
向上述化合物(1.71克，3.0毫摩尔)的乙醇(15毫升)混合物中，加入1N氢氧化 钠(15毫升)并回流加热2小时。混合物用乙酸酸化，并再回流加热1小时，然后浓 缩。向残留物中加入水(50毫升)，用二氯甲烷(3×50毫升)萃取混合物。合并后的 有机萃取物用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[(羧 基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环戊-r-醇(1.2克，85％)。
向-5℃的上述酸(1.2克，2.56毫摩尔)的四氢呋喃(15毫升)混合物中，加入三 乙胺(0.29毫升，2.8毫摩尔)和氯代甲酸乙酯(0.31毫升，2.8毫摩尔)，搅拌半小 时，然后向该混合物中加入二乙胺(0.38克，5.2毫摩尔)，在0℃搅拌1小时并在室 温下搅拌3小时。用乙酸乙酯(100毫升)和水(75毫升)稀释混合物。分离有机层， 用水(100毫升)和盐水(100毫升)洗涤，并用硫酸镁干燥。在过滤之后，滤液被浓 缩，得到1.1克(82％)粗产物c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[(二乙基氨基羰基)(甲基 羰基氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环戊-r-醇。
向上述酰胺粗产物(1.10克，2.10毫摩尔)在甲醇(12)∶水(1)混合物(51.0毫升) 中的混合物，加入二氯化汞(Ⅱ)(2.10克，7.75毫摩尔)和氧化汞(Ⅱ)(0.69克，3.18 毫摩尔)，搅拌2小时。固体通过硅藻土过滤而去除，并用二氯甲烷(100毫升)洗 涤。向滤液中加入水(100毫升)并分离有机层。水层用二氯甲烷(2×80毫升)进一 步萃取。合并后的有机层用硫酸镁干燥，过滤。滤液被浓缩，得到0.9克(100％) 浆状粗产物t-3-(叔丁氧基羰基氨基)-c-4-[(二乙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]- t-1-羟基环戊烷甲酸甲酯。
将上述酯粗产物(0.9克)在二氯甲烷(50毫升)的混合物与三氟乙酸(5.0毫升)一 起搅拌16小时。浓缩反应混合物并真空干燥，得到0.93克(100％)相应的粗产物t- 3-氨基-c-4-[(二乙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸甲酯。 它被原样用于下一步骤。
向上述胺(0.93克，2.1毫摩尔)的二甲基甲酰胺(20毫升)混合物中，加入三乙 胺(1.06克，10.5毫摩尔)、N,N′-二叔丁氧基羰基-S-甲基异硫脲(0.61克，2.1毫摩 尔)和二氯化汞(Ⅱ)(0.57克，2.1毫摩尔)。混合物在室温下搅拌2小时。混合物用 乙酸乙酯(100毫升)稀释并通过硅藻土过滤。滤液用水(2×100毫升)和盐水(1× 100毫升)洗涤。有机层用硫酸镁干燥，过滤和浓缩，得到浆状物。再通过硅胶柱 (50克)并用5％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脱，得到0.65克(54％)t-3-{[(叔丁氧基羰基 氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(二乙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸甲酯，为白色粉末，熔点＞120℃(分解)。 分析：C26H45N5O9的计算值：                C,54.63；H,7.93；N,12.25
  测量值：                                  C,54.56；H,7.97；N,12.04
在室温下，搅拌上述酯(0.88克，0.66毫摩尔)在0.1N氢氧化钠(13.0毫升， 水∶四氢呋喃∶乙醇(1∶1∶1)的混合物)的混合物2小时。在通过棉塞过滤之 后，用乙酸中和，并在室温下搅拌16小时。获得的沉淀通过过滤收集，用水洗 涤，并真空干燥，得到0.33克(90％)t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨 基)甲基]氨基}-c-4-[(二乙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲 酸，为白色固体，熔点＞235℃(分解)。 分析：C25H43N5O9的计算值：                   C,53.85；H,7.77；N,12.56
  测量值：                                     C,53.74；H,7.83；N,12.56
将t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(二乙基 氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸(0.9克，0.16毫摩尔)在二 氯甲烷(5.0毫升)中的混合物，与三氟乙酸(0.5毫升)一起搅拌48小时。然后浓缩和 真空干燥，得到0.8克(90％)标题化合物，为棕色固体，熔点为99-103℃(dec)。 分析：C15H27N5O5·1.67C2HF3O2的计算值：        C,40.23；H,5.27；N,12.79
  测量值：                                           C,40.38；H,5.28；N,12.38
实施例22
t-3-氨基-c-4-[(二正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲 酸 三氟乙酸(1∶1)(C-6异构体A)
向c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[二(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[三 (甲基硫代)甲基]环戊-r-醇(来自实施例21,1.46克，2.6毫摩尔)在乙醇(20毫升)和 水(10毫升)中的混合物，加入1N氢氧化钠(10毫升，10毫摩尔)并回流加热2小 时。混合物被真空浓缩并用冰醋酸(1.0毫升，17.5毫摩尔)酸化。向浓缩物中加入 乙酸乙酯(20毫升)并回流加热1小时。分离各层，水层用乙醚(4×10毫升)萃取。 合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，通过硅藻土过滤，并真空浓 缩，得到c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[(羧基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫 代)甲基]环戊-r-醇(0.98克，76％)。
向0℃的上述酸(0.97克，2.0毫摩尔)的四氢呋喃(25毫升)搅拌混合物中，加 入氯代甲酸乙酯(2.1毫升，2.2毫摩尔)和三乙胺(0.35毫升，2.5毫摩尔)。搅拌20 分钟后，让反应混合物升温至室温，再搅拌30分钟，并通过硅藻土过滤。滤液 被真空浓缩，得到0.85克(100％)混合酸酐粗产物。
向0℃的，上述混合酸酐(0.84克，1.56毫摩尔)的四氢呋喃(20毫升)混合物 中，加入二正丙基胺(0.6毫升，4.4毫摩尔)。反应混合物在0℃搅拌30分钟并在室 温下搅拌3小时。混合物用水(10毫升)稀释，然后分离各层。水层用乙酸乙酯(4 ×10毫升)萃取。合并后的有机物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，通过硅藻土过滤 并真空浓缩，得到1.0克粗产物。通过径向PLC(硅胶，35-50％乙酸乙酯/己烷)纯 化后，得到0.23克(27％)c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[(二正丙基氨基羰基)(甲基 羰基氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环戊-r-醇(C-6异构体A)，为单一异构体。
在室温下，向上述酰胺(0.17克，0.31毫摩尔)在甲醇(16.5毫升)和水(1.5毫升) 中的混合物中，加入氧化汞(0.10克，0.47毫摩尔)和二氯化汞(0.31克，1.2毫摩 尔)。在搅拌2小时后，反应混合物通过硅酸镁载体(Florisil)和硅藻土板过滤。滤 液被真空浓缩，得到0.26克粗产物。通过径向PLC(硅胶，50-75％乙酸乙酯/己烷) 纯化后，得到0.14克(96％)t-3-(叔丁氧基羰基氨基)-c-4-[(二正丙基氨基羰基)(甲 基羰基氨基)甲基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸甲酯。
在室温下，向上述酯(0.13克，0.29毫摩尔)在四氢呋喃(3.5毫升)和水(2.5毫升) 中的混合物，加入1N氢氧化钠(0.6毫升，0.6毫摩尔)。反应混合物在室温下搅拌 1小时并真空浓缩。用冰醋酸将浓缩物酸化至pH 5-4，并用乙酸乙酯(5×10毫升) 萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，通过硅藻土过滤和真空浓 缩，得到0.13克(100％)粗t-3-(叔丁氧基羰基氨基)-c-3-[(二正丙基氨基羰基)(甲基 羰基氨基)甲基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸。
将上述酸粗产物(0.13克，0.29毫摩尔)在二氯甲烷(10毫升)中混合物与三氟 乙酸(0.45毫升，5.8毫摩尔)在室温下搅拌过夜。反应混合物被真空浓缩，得到 0.16克粘稠油状物，用乙醚进行研制，得到0.083克(63％)标题化合物，为黄褐色 固体，熔点168-170℃。 分析：C16H29N3O5·C2HF3O2的计算值：             C,47.26；H,6.61；N,9.19
  测量值：                                            C,47.47；H,6.83；N,9.33
实施例23                  ·1.25CF3CO2H
t-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(二正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]-t-羟基环戊烷-r-甲酸 三氟乙酸(4∶5)
向c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[二(乙氧基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[三 (甲基硫代)甲基]环戊-r-醇(来自实施例21,1.46克，2.6毫摩尔)在乙醇(20毫升)和 水(10毫升)中的混合物，加入1N氢氧化钠(10毫升，10毫摩尔)，并回流加热2小 时。混合物被真空浓缩并用冰醋酸(1.0毫升，17.5毫摩尔)酸化。向浓缩物中加入 乙酸乙酯(20毫升)并回流加热1小时。分离各层，水层用乙醚(4×10毫升)萃取。 合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，通过硅藻土过滤，并真空浓 缩，得到c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-4-[(羧基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫 代)甲基]环戊-r-醇(0.98克，76％)。
向0℃的上述固体(0.97克，2.0毫摩尔)的四氢呋喃(25毫升)搅拌混合物中， 加入氯代甲酸乙酯(0.21毫升，2.2毫摩尔)和三乙胺(0.35毫升，2.5毫摩尔)。搅拌 20分钟后，让反应混合物升温至室温，再搅拌30分钟，并通过硅藻土过滤。滤 液被真空浓缩，得到0.85克(100％)混合酸酐粗产物。
向0℃的，上述混合酸酐(0.84克，1.56毫摩尔)的四氢呋喃(20毫升)混合物 中，加入二正丙基胺(0.6毫升，4.4毫摩尔)。反应混合物在0℃搅拌30分钟并在室 温下搅拌3小时。混合物用水(10毫升)稀释，然后分离各层。水层用乙酸乙酯(4 ×10毫升)萃取。合并后的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，通过硅藻土 过滤并真空浓缩，得到1.0克粗产物。通过径向PLC(硅胶，35-50％乙酸乙酯/己烷) 纯化后，得到0.58克(68％)c-3-(叔丁氧基羰基氨基)-t-3-[(二正丙基氨基羰基)(甲 基羰基氨基)]-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环戊-r-醇。
在室温下，向上述酰胺(0.34克，0.63毫摩尔)在甲醇(16.5毫升)和水(1.5毫升) 中的混合物中，加入氧化汞(0.210克，0.97毫摩尔)和二氯化汞(0.64克，2.4毫摩 尔)。在搅拌2小时后，反应混合物通过硅酸镁载体(Florisil)和硅藻土板过滤。滤 液被真空浓缩，得到0.44克粗产物。通过径向PLC(硅胶，50％乙酸乙酯/己烷)纯 化后，得到0.27克(94％)t-3-(叔丁氧基羰基氨基)-c-4-[(二正丙基氨基羰基)(甲基 羰基氨基)甲基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸甲酯。
在室温下，将上述酯(0.15克，0.32毫摩尔)在二氯甲烷(10毫升)的混合物和 三氟乙酸(0.5毫升，6.6毫摩尔)搅拌过夜。反应混合物被真空浓缩，得到0.16克t- 3-氨基-c-4-[(二正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸甲 酯，为粘稠油状物。
向上述胺(0.16克，0.33毫摩尔)的二甲基甲酰胺(3毫升)混合物中，加入N,N′- 二叔丁氧基羰基-S-甲基异硫脲(0.11克，0.37毫摩尔)、三乙胺(0.3克，2.2毫摩 尔)、和二氯化汞(0.10克，0.37毫摩尔)。混合物在室温下搅拌3小时。向该混合 物中加入水(5毫升)，然后分离各层。有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，通过 硅藻土过滤，并真空浓缩，得到0.22克黄色固体。通过径向PLC(硅胶，50-75％ 乙酸乙酯/己烷)纯化，得到0.13克(67％)t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基 亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(二正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-羟基环戊 烷-r-甲酸甲酯。
在室温下，向上述化合物(0.13克，0.22毫摩尔)在四氢呋喃(4毫升)和水(2毫 升)中的混合物，加入1N氢氧化钠(0.5毫升，015毫摩尔)。反应混合物在室温下 搅拌2小时并真空浓缩。用冰醋酸将浓缩物酸化至pH 5-4，然后用乙酸乙酯(5× 10毫升)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，通过硅藻土过 滤，并真空浓缩，得到0.13克(100％)粗产物t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基 羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(二正丁基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-羟基 环戊烷-r-甲酸。
在室温下，搅拌上述酸(0.13克，0.22毫摩尔)和三氟乙酸(0.5毫升，6.6毫摩 尔)在二氯甲烷(10毫升)中的混合物过夜。然后真空浓缩，得到0.2克粗产物。用 乙醚研制，得到0.08克(74％)标题化合物，为黄褐色固体，熔点为153-155℃。 分析：C17H31N5O5·1.25C2HF3O2的计算值：       C,44.36；H,6.16；N,13.26
  测量值：                                          C,44.34；H,6.17；N,13.19
实施例24
c-3-{[氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-t-4-[(二正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸 三氟乙酸(1∶1)(C-6异构体A)
向t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(乙氧基 羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环戊-r-醇(C-6异构体A)(来自实 施例16,2.55克，4.0毫摩尔)在四氢呋喃(20毫升)和乙醇(10毫升)的混合物中，加 入1N氢氧化钠(7.0毫升，7.0毫摩尔)。然后，在室温下搅拌4小时。用乙酸中和 之后，浓缩混合物。向混合物中加入水(50毫升)并搅拌4小时。产生的白色沉淀 物通过过滤加以收集，用水洗涤，并在60℃真空干燥24小时，得到2.1克(86％)t- 3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(羧基)(甲基羰基 氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环戊-r-醇(异构体的混合物)，为白色固体，熔 点228-230℃(分解)。 分析：C24H42N4O8S3·H2O的计算值：              C,45.84；H,7.05；N,8.91
  测量值：                                          C,45.31；H,6.64；N,9.05
向冷却至-5℃的上述酸(0.61克，1毫摩尔)的四氢呋喃(5毫升)混合物中，加 入三乙胺(0.1毫升，1毫摩尔)和氯代甲酸乙酯(0.11克，1毫摩尔)并搅拌半小时。 然后，向该混合物中加入二正丙胺(0.1克，1毫摩尔)。反应混合物在0℃搅拌1小 时并在室温下搅拌1小时。混合物用乙酸乙酯(40毫升)和水(40毫升)稀释。有机层 被分离，用水(50毫升)和盐水(50毫升)洗涤，用硫酸镁干燥。在过滤后，滤液被 浓缩，残留物通过硅胶柱(25克)并以乙酸乙酯/己烷(1∶1)为洗脱液，得到0.37克 (53％)t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(二正丙 基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环戊-r-醇(C-6异构体 A)，为白色固体，熔点88-90℃。 分析：C30H55N5O7S3的计算值：                   C,51.92；H,7.99；N,10.09
  测量值：                                        C,52.15；H,8.04；N,9.95
向上述酰胺(0.6克，0.9毫摩尔)在甲醇(12)∶水(1)混合物(22.0毫升)中的混合 物，加入二氯化汞(0.91克，3.35毫摩尔)和氧化汞(Ⅱ)(0.3克，1.40毫摩尔)，然后 搅拌半小时。固体通过硅藻土过滤而除去并用二氯甲烷(50毫升)洗涤。向滤液中 加入水(50毫升)并分离有机层。水层进一步用二氯甲烷(2×40毫升)萃取。合并的 有机层用硫酸镁干燥，过滤，并且滤液被浓缩，得到一浆状物。该浆状物通过 硅胶柱(50克)并以乙酸乙酯为洗脱液，得到0.07克(13％)c-3-{[(叔丁氧基羰基氨 基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-t-4-[(二正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸甲酯(C-6异构体A)，为白色固体，熔点128-130℃(分 解)。 分析：C28H49N5O9的计算值：                     C,56.08；H,8.23；N,11.68
  测量值：                                       C,56.20；H,8.10；N,11.84
将上述酯(0.13克，0.22毫摩尔)在四氢呋喃(2.0毫升)和乙醇(1.0毫升)的混合 物，与1N氢氧化钠(0.5毫升，0.5毫摩尔)一起搅拌1小时。用乙酸中和，产生的 沉淀物通过过滤收集，用水洗涤并真空干燥，得到0.08克(67％)c-3-{[(叔丁氧基 羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-t-4-[(二正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨 基)甲基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸(C-6异构体A)，为米色固体，熔点225-230℃(分 解)。 分析：C27H47N5O9·0.5H2O的计算值：             C,54.53；H,8.13；N,11.78
  测量值：                                         C,54.25；H,7.90；N,11.48
将上述酸(0.66克，0.10毫摩尔)的二氯甲烷(4.0毫升)混合物，与三氟乙酸(1.0 毫升)一起搅拌16小时。然后浓缩和真空干燥，得到0.04克(80％)标题化合物，为 白色固体，熔点128-130℃(分解)。 分析：C17H31N5O5·C2HF3O2的计算值：           C,45.69；H,6.46；N,14.02
  测量值：                                          C,46.37；H,6.69；N,14.13
实施例25
c-3-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-t-4-[(二正丙基氢基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸 三氟乙酸(1∶1)(C-6异构体B)
向t-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(二正丙 基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-[三(甲基硫代)甲基]环戊-r-醇(C-6异构体 B，它是通过实施例24中制备异构体A时作为副产物而分离出的)(0.51克，0.73毫 摩尔)在甲醇(12)∶水(1)混合物(18.0毫升)中的混合物，加入二氯化汞(0.75克， 2.75毫摩尔)和氧化汞(Ⅱ)(0.24克，1.12毫摩尔)，然后搅拌2小时。固体通过硅藻 土过滤而除去并用二氯甲烷洗涤(50毫升)。向滤液中加入水(50毫升)并分离有机 层。水层进一步用二氯甲烷(2×40毫升)萃取。合并的有机层用硫酸镁干燥，过 滤，并且滤液被浓缩，得到一白色固体。该固体在乙醚/己烷中重结晶，得到 0.35克(80％)c-3-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-t-4-[(二 正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-t-1-羟基环戊烷-r-甲酸甲酯(C-6异构体B)， 为白色固体，熔点170-172℃(分解)。 分析：C28H49N5O9的计算值：                  C,56.08；H,8.23；N,11.68
  测量值：                                    C,55.96；H,8.29；N,11.70
将上述酯(0.25克，0.42毫摩尔)在四氢呋喃(3.0毫升)和乙醇(1.3毫升)的混合 物，与1N氢氧化钠(1.0毫升，1.0毫摩尔)一起搅拌2小时。蒸发掉溶剂，将残留 物溶解在水(1毫升)中，用乙酸中和。产生的沉淀物通过过滤收集，用水洗涤并 真空干燥，得到0.20克(79％)相应的酸。
将上述酸(0.15克，0.26毫摩尔)的二氯甲烷(10毫升)混合物，与三氟乙酸(1.2 毫升)一起搅拌16小时。然后浓缩和真空干燥，得到0.11克(85％)标题化合物，为 白色固体，熔点202-205℃(分解)。 分析：C17H31N5O5·C2HF3O2的计算值：           C,45.69；H,6.46；N,14.02
  测量值：                                          C,45.84；H,6.51；N,13.82
实施例26
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(二乙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基] 环戊烷甲酸(C-6异构体A)
在0℃，向2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}- 4α-[(羧基)(甲基羰基氨基)甲基]-1-亚环戊基}-1,3-二噻烷(来自实施例20,0.56 克，1毫摩尔)的四氢呋喃(8毫升)混合物中，加入三乙胺(0.11克，1.1毫摩尔)和氯 代甲酸甲酯(0.1克，1.1毫摩尔)，并搅拌半小时。然后再向该混合物加入二乙胺 (0.11克，1.5毫摩尔)，在0℃搅拌1小时并在室温下搅拌1小时。混合物用乙酸乙 酯(40毫升)和水(40毫升)稀释。有机层被分离，用水(50毫升)和盐水(50毫升)洗 涤，用硫酸镁干燥。在过滤后，滤液被浓缩，残留物通过硅胶柱(50克)并以乙酸 乙酯/己烷(1∶1)为洗脱液，得到0.21克(34％)所需的2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨 基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(二乙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]- 1-亚环戊基}-1,3-二噻烷，为白色固体。
上述酰胺(0.1克，0.016毫摩尔)在0.5N HCl的甲醇(5.0毫升，2.5毫摩尔)中的 混合物，在室温下搅拌24小时并在45℃搅拌2小时。向该混合物中加入6.0N HCl(0.2毫升，1.2毫摩尔)，并在45℃再加热2小时。然后浓缩反应混合物，残留物与 0.1N氢氧化钠(5.0毫升，0.5毫摩尔)一起搅拌1小时，浓缩，然后再与1N氢氧化钠 (1.0毫升，1.0毫摩尔)搅拌0.5小时。接着通过棉塞过滤并用稀盐酸中和，从而得 到与氯化钠混合的标题化合物，MS(ES+)342.3(M+1,100％)。
实施例27
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(二正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]环戊烷甲酸(C-6异构体A)
在0℃，向2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}- 4α-[(羧基)(甲基羰基氨基)甲基]-1-亚环戊基}-1,3-二噻烷(异构体A)(来自实施例 20,0.56克，1毫摩尔)的四氢呋喃(8毫升)混合物中，加入三乙胺(0.11克，1.1毫 摩尔)和氯代甲酸甲酯(0.1克，1.1毫摩尔)，并搅拌半小时。然后再向该混合物加 入二正丙胺(0.15克，1.5毫摩尔)，在0℃搅拌1小时并在室温下搅拌1小时。混合 物用乙酸乙酯(40毫升)和水(40毫升)稀释。有机层被分离，用水(50毫升)和盐水 (50毫升)洗涤，用硫酸镁干燥。在过滤后，滤液被浓缩，残留物通过硅胶柱(50 克)并以乙酸乙酯/己烷(1∶1)为洗脱液，得到0.22克(34％)2-(3β-{[(叔丁氧基羰基 氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(二正丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]-1-亚环戊基}-1,3-二噻烷(异构体A)，为白色固体，熔点125-126℃。 分析：C30H51N5O6S2的计算值：                C,56.14；H,8.01；N,10.91
  测量值：                                     C,56.72；H,8.05；N,10.76
上述化合物(0.11克，0.016毫摩尔)在0.5N HCl的甲醇(5.0毫升，2.5毫摩尔)中 的混合物，在室温下搅拌24小时并在45℃搅拌2小时。向该混合物中加入6.0N HCl(0.2毫升，1.2毫摩尔)，并在45℃再加热2小时。然后浓缩反应混合物，残留 物与0.1N氢氧化钠(5.0毫升，0.5毫摩尔)一起搅拌1小时，浓缩，然后再与1N氢氧 化钠(1.0毫升，1.0毫摩尔)搅拌0.5小时。接着通过棉塞过滤，用稀盐酸中和，并 浓缩，得到与氯化钠混合的标题化合物，MS(ES+)370.4(M+1,100％)。
实施例28
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(甲基羰基氨基)(3-戊基氨基羰基)甲基] 环戊烷甲酸(C-6异构体A)
在0℃，向2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}- 4α-[(羧基)(甲基羰基氨基)甲基]-1-亚环戊基}-1,3-二噻烷(异构体A)(来自实施例 20,0.56克，1毫摩尔)的四氢呋喃(8毫升)混合物中，加入三乙胺(0.11克，1.1毫 摩尔)和氯代甲酸甲酯(0.1克，1.1毫摩尔)，并搅拌半小时。然后再向该混合物加 入3-戊胺(0.2克，2.3毫摩尔)，在0℃搅拌1小时并在室温下搅拌1小时。混合物用 乙酸乙酯(40毫升)和水(40毫升)稀释。有机层被分离，用水(50毫升)和盐水(50毫 升)洗涤，用硫酸镁干燥。在过滤后，滤液被浓缩，残留物通过硅胶柱(50克)并 以乙酸乙酯/己烷(1∶1)为洗脱液，得到0.28克(45％)2-(3β-{[(叔丁氧基羰基氨 基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(甲基羰基氨基)(3-戊基氨基羰基)甲基]- 1-亚环戊基}-1,3二噻烷(C-6异构体A)，为白色固体，熔点＞230℃(分解)。 分析：C29H49N5O6S2的计算值：                  C,55.48；H,7.86；N,11.15
  测量值：                                       C,55.96；H,7.92；N,10.99
上述化合物(0.1克，0.016毫摩尔)在0.5N HCl的甲醇(5.0毫升，2.5毫摩尔)中 的混合物，在室温下搅拌24小时并在45℃搅拌2小时。向该混合物中加入6.0N HCl(0.2毫升，1.2毫摩尔)，并在45℃再加热2小时。然后浓缩反应混合物，残留 物与0.1N氢氧化钠(5.0毫升，0.5毫摩尔)一起搅拌1小时，浓缩，然后再与1N氢氧 化钠(1.0毫升，1.0毫摩尔)搅拌0.5小时。接着通过棉塞过滤，用稀盐酸中和，并 浓缩，得到与氯化钠混合的标题化合物，MS(ES+)356.5(M+1,100％)。
实施例29
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(甲基羰基氨基)(3-戊基氨基羰基)甲基] 环戊烷甲酸(C-6异构体B)
在0℃，向2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}- 4α-[(羧基)(甲基羰基氨基)甲基]-1-亚环戊基}-1,3-二噻烷(异构体A)(来自实施例 20,0.56克，1毫摩尔)的四氢呋喃(8毫升)混合物中，加入三乙胺(0.11克，1.1毫 摩尔)和氯代甲酸甲酯(0.1克，1.1毫摩尔)，并搅拌半小时。然后再向该混合物加 入3-戊胺(0.2克，2.3毫摩尔)，在0℃搅拌1小时并在室温下搅拌1小时。混合物用 乙酸乙酯(40毫升)和水(40毫升)稀释。有机层被分离，用水(50毫升)和盐水(50毫 升)洗涤，用硫酸镁干燥。在过滤后，滤液被浓缩，残留物通过硅胶柱(50克)并 以乙酸乙酯/己烷(1∶1)为洗脱液，得到0.06克(10％)2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨 基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(甲基羰基氨基)(3-戊基氨基羰基)甲基]- 1-亚环戊基}-1,3-二噻烷(C-6异构体B)，为白色固体，熔点＞200℃(分解)。 分析：C29H49N5O6S2的计算值：                  C,55.48；H,7.86；N,11.15
  测量值：                                       C,55.21；H,7.72；N,11.06
上述化合物(异构体B,0.035克，0.005毫摩尔)在0.5N HCl的甲醇(3.0毫升， 1.5毫摩尔)中的混合物，在室温下搅拌24小时并在45℃搅拌2小时。向该混合物 中加入6.0N HCl(0.2毫升，1.2毫摩尔)，并在45℃再加热2小时。然后浓缩反应混 合物，与1N氢氧化钠(0.4毫升，0.4毫摩尔)一起搅拌4小时。接着通过棉塞过 滤，用稀盐酸中和，并浓缩，得到与氯化钠混合的标题化合物，MS(ES+) 356.4(M+1,100％)。
实施例30
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(二乙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基] 环戊烷甲酸(C-6异构体A,C-1异构体A)
向2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(羧基)(甲基羰基氨基)甲基]亚环戊基}- 1,3-二噻烷(来自实施例10,10克，24.0毫摩尔)的四氢呋喃(150毫升)混合物中， 加入三乙胺(3.03克，30.0毫摩尔)和氯代甲酸甲酯(2.84克，30.0毫摩尔)，并在室 温下搅拌1小时。向该混合物加入二乙胺(4.4克，60.0毫摩尔)并搅拌混合物16小 时。混合物用乙酸乙酯(200毫升)稀释，并用水(200毫升)洗涤。有机层被分离， 用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩，得到的残留物是9.1克(81％)C-6异构体的混合 物，该残留物在乙酸乙酯中重结晶，得到1.9克2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α- [(二乙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]亚环戊基}-1,3-二噻烷(C-6异构体B)。
向上述固体(1.88克，4.0毫摩尔)中，加入HCl甲醇溶液(100毫升，0.5N)，并 在50℃搅拌16小时。混合物用氢氧化钠甲醇溶液中和，并在室温下搅拌半小 时。浓缩混合物，残留物通过硅胶柱(100克)并以氯仿(90)∶甲醇(9)∶氨水(1)混 合物为洗脱液，得到0.6克(50％)3β-氨基-4α-[(二乙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲 基]亚环戊烷甲酸甲酯(C-6异构体B)，为米色固体，熔点95℃。 分析：C15H27N3O4的计算值：                    C,57.49；H,8.68；N,13.41
  测量值：                                      C,57.38；H,8.63；N,13.33
向上述胺(0.7克，2.23毫摩尔)的二甲基甲酰胺(13毫升)混合物中，加入三乙 胺(0.81克，8.01毫摩尔)、S-甲基N,N′-二叔丁氧基羰基异硫脲(714毫克，2.46毫 摩尔)和二氯化汞(665毫克，2.46毫摩尔)。混合物在室温下搅拌16小时。反应混 合物用乙酸乙酯(100毫升)稀释，通过硅藻土过滤。滤液用水(2×100毫升)和盐水 (1×100毫升)洗涤。有机层用硫酸镁干燥，过滤，并真空浓缩滤液。残留物通过 硅胶柱(100克)并以乙酸乙酯为洗脱液。合并所需的流份，并浓缩，得到0.7克 (56％)异构体混合物。该混合物在乙醚-己烷中重结晶2次，得到0.16克(13％)t-3β- {[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-c-4-[(二乙基氨基羰 基)(甲基羰基氨基)甲基]环戊烷-r-甲酸甲酯(在C-6和C-1为异构体A)，为白色固 体，熔点140℃。 分析：C26H45N5O8的计算值：                   C,56.20；H,8.16；N,12.60
  测量值：                                     C,55.50；H,8.16；N,12.48
在室温下，将上述酯(0.14克，0.25毫摩尔)的四氢呋喃(5毫升)混合物，与氢 氧化钠(1N,1.5毫升)一起搅拌4小时。浓缩混合物，将残留物溶解在水(2毫升) 中，通过棉塞过滤，滤液用乙酸酸化。产生的沉淀通过过滤收集，用水洗涤并 干燥，得到0.11克(81％)相应的酸。
在室温下，将上述酸(0.08克，0.15毫摩尔)的二氯甲烷(5毫升)混合物与三氟 乙酸(1.0毫升)一起搅拌16小时。反应混合物被浓缩，残留物用乙醚(2×20毫升) 洗涤。残留物被溶解在甲醇中，并加入乙醚。混合物在冰箱中放置24小时。倾 析掉溶剂，残留物用乙醚洗涤2次，并干燥，得到0.06克标题化合物的三氟乙酸 盐，为白色固体，熔点＞110℃(分解)。 分析：C15H27N5O4·CF3COOH的计算值：         C,44.83；H,6.20；N,15.38
  测量值：                                      C,44.71；H,6.37；N,14.77
实施例31
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-{[(乙基)(丙基)氨基羰基](甲基羰基氨基) 甲基}环戊烷甲酸(C-6异构体A)
向2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(羧 基)(甲基羰基氨基)甲基]-1-亚环戊基}-1,3-二噻烷(来自实施例7,0.5克，0.9毫摩 尔)的四氢呋喃(15毫升)混合物中，加入三乙胺(0.12克，1.15毫摩尔)和氯代甲酸 甲酯(0.11克，1.15毫摩尔)，并在室温下搅拌1小时。向该混合物加入乙基丙基胺 (0.32克，3.6毫摩尔)并在室温下搅拌3小时。混合物用乙酸乙酯(70毫升)稀释，并 用水(75毫升)和盐水(75毫升)洗涤。有机层被分离，用硫酸镁干燥，过滤，并浓 缩。残留物通过硅胶柱(50克)并以乙酸乙酯∶己烷(1∶1)混合物为洗脱液，得到 0.17克(30％)2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α- [(乙基丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-1-亚环戊基}-1,3-二噻烷(C-6异构体A)， 为白色固体，熔点115-116。 分析：C29H49N5O6的计算值：                     C,55.48；H,7.87；N,11.15
  测量值：                                       C,55.60；H,7.84；N,11.23
还分离出0.24克(43％)C-6异构体B的样品，为白色固体，熔点122-123℃。 分析：C29H49N5O6的计算值：                     C,55.48；H,7.87；N,11.15
  测量值：                                       C,55.57；H,7.89；N,11.21
在室温下，搅拌上述异构体A(0.14克，0.226毫摩尔)和HCl甲醇溶液 (0.75N,6.0毫升)的混合物24小时。混合物用1N氢氧化钠中和，再加入2滴1N氢 氧化钠，并搅拌混合物2小时。在用1N盐酸中和之后，混合物被浓缩，通过过滤 去除盐，并浓缩滤液。残留物通过硅胶柱(20克)并以乙酸乙酯∶己烷(3∶1)为洗 脱液，得到0.05克(39％)3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨 基}-4α-[(乙基丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-1-环戊烷甲酸甲酯(C-6异构体 A)。
在室温下，将上述酯(0.04克，0.07毫摩尔)与氢氧化钠(1N,0.5毫升)的混合 物一起搅拌2小时。反应混合物用水(2毫升)稀释，通过棉塞过滤。滤液用乙酸中 和。形成的沉淀通过过滤收集，用水洗涤并干燥，得到0.03克(77％)3β-{[(叔丁 氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙基丙基氨基羰基)(甲基羰 基氨基)甲基]环戊烷甲酸(C-6异构体A)。
在室温下，将上述酸(0.012克，0.02毫摩尔)的二氯甲烷(2毫升)混合物与三 氟乙酸(0.2毫升)一起搅拌24小时。反应混合物被浓缩，与二氯甲烷一起蒸发两 次，得到标题化合物的残留物，[MS(ES+):356.4]。
实施例32
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-{[(乙基)(丙基)氨基羰基](甲基羰基氨基) 甲基}环戊烷甲酸(C-6异构体B)
在室温下，搅拌2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨 基}-4α-[(乙基丙基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-1-亚环戊基}-1,3-二噻烷(C-6异构 体B，来自实施例31)(0.18克，0.288毫摩尔)和HCl甲醇溶液(0.75N,6.0毫升)的混 合物24小时。接着，混合物用1N氢氧化钠中和，再加入2滴1N氢氧化钠，并搅 拌混合物2小时。在用1N盐酸中和之后，混合物被浓缩，过滤去除盐分，并浓缩 滤液。残留物通过硅胶柱(20克)并以乙酸乙酯∶己烷(3∶1)为洗脱液，得到0.06 克(36％)3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙基丙 基氨基羰基)(甲基羰基氨基)甲基]-1-环戊烷甲酸甲酯(C-6异构体B)。
在室温下，将上述酯(0.06克，0.1毫摩尔)与氢氧化钠(1N,0.5毫升)的混合 物一起搅拌2小时。反应混合物用水(2毫升)稀释，通过棉塞过滤。滤液用乙酸中 和。形成的沉淀通过过滤收集，用水洗涤并干燥，得到0.045克(80％)3β-{[(叔丁 氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(乙基丙基氨基羰基)(甲基羰 基氨基)甲基]环戊烷甲酸(C-6异构体A)。
在室温下，将上述酸(0.03克，0.05毫摩尔)的二氯甲烷(2毫升)混合物与三氟 乙酸(0.3毫升)一起搅拌24小时。反应混合物被浓缩，与二氯甲烷一起蒸发两 次，得到标题化合物的残留物，[MS(ES+):356.4(100％)]。
实施例33-64
通过平行合成，制备酰胺的通用程序导致形成C-1和C-6异构体的混合物。
向2-{3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[(羧 基)(甲基羰基氨基)甲基]-1-亚环戊基}-1,3-二噻烷(来自实施例7,0.093克，0.16毫 摩尔)的四氢呋喃(3.0毫升)混合物中，加入三乙胺(35微升，0.25毫摩尔)和氯代甲 酸甲酯(20微升，0.25毫摩尔)，并在室温下搅拌1小时。向该混合物加入合适的 胺(0.8毫摩尔)并搅拌16小时。混合物用乙酸乙酯(20毫升)稀释，并用水(20毫升) 洗涤。有机层被分离，用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩。
向该残留物中加入HCl甲醇溶液(4.5毫升，0.75N)，在室温下搅拌20小时。 用1N氢氧化钠碱化，并在室温下搅拌4小时。混合物再用盐酸中和，浓缩至干 燥，并与二氯甲烷(5毫升)和三氟乙酸(1毫升)一起搅拌4小时。然后浓缩混合物至 干燥，残留物通过质谱分析加以表征。通过这种方法，分离出下列酰胺：
实施例65
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[1-(1-甲基羰基氨基)戊-2-烯基]环戊烷甲 酸
向-78℃，溴化丙基三苯基鏻(0.28克，0.73毫摩尔)的四氢呋喃(10毫升)悬浮 液中，滴加二(三甲基甲硅烷基)氨基钠(1M/四氢呋喃，0.73毫升，0.73毫摩尔)。 在搅拌10分钟后，让反应混合物升温至0℃，搅拌20分钟，然后冷却至-78℃。向 该混合物中加入2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[(甲酰基)(甲基羰基氨基)甲基]亚 环戊基}-1,3-二噻烷(0.097克，0.24毫摩尔，来自实施例10)的四氢呋喃(6毫升)溶 液，然后搅拌反应混合物1小时。加人水(10毫升)并分离各层。水层用乙醚(4× 10毫升)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，通过硅藻土过 滤，并真空浓缩，得到0.16克粗产物。通过径向PLC纯化(SiO2,50-75％乙酸乙 酯/己烷)，得到0.093克(91％)2-{3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[1-(1-甲基羰基氨基) 戊-2-烯基]亚环戊基}-1,3-二噻烷，为白色固体，熔点175-177℃。 分析：C21H34N2O3S2的计算值：                    C,59.12；H,8.03；N,6.57
  测量值：                                         C,59.21；H,8.04；N,6.51
在室温下，向搅拌的上述固体(0.64克，1.5毫摩尔)的甲醇(44毫升)溶液中， 加入6N盐酸(3.8毫升，22.8毫摩尔)，并搅拌反应混合物25小时。将反应混合物 被冷却至0℃，加入氢氧化钠(1.0克，25毫摩尔)，反应在室温下搅拌50分钟后， 反应混合物用冰醋酸(0.41毫升，7.0毫摩尔)终止，然后真空浓缩，得到残留物。 向该残留物中加入乙酸乙酯(15毫升)和水(10毫升)并分离各层。水层用乙酸乙酯 (4×15毫升)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，通过硅藻土 过滤，并真空浓缩，得到0.37克(66％)3β-(叔丁氧基羰基氨基)-4α-[1-(1-甲基羰基 氨基)戊-2-烯基]环戊烷甲酸甲酯。
将上述酯(0.28克，0.66毫摩尔)和三氟乙酸(1.0毫升，13.0毫摩尔)在二氯甲 烷中的混合物，在室温下搅拌5.5小时。真空浓缩反应混合物，得到0.29克(100％) 3β-氨基-4α-[1-(1-甲基羰基氨基)戊-2-烯基]环戊烷甲酸甲酯。
向上述胺(0.29克，0.66毫摩尔)的二甲基甲酰胺(7毫升)混合物中，加入N,N′- 二叔丁氧基羰基-S-甲基异硫脲(0.24克，0.81毫摩尔)、三乙胺(3.0克，21.5毫摩尔) 和二氯化汞(0.22克，0.81毫摩尔)。混合物在室温下搅拌过夜。向反应混合物中 加入乙酸乙酯(20毫升)和水(15毫升)，并分离各层。有机层用盐水洗涤，用硫酸 镁干燥，通过硅藻土过滤，并真空浓缩，得到0.35克粗产物。通过径向 PLC(SiO2,50-75％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到0.214克(64％)3β-{[(叔丁氧基羰基 氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[1-(1-甲基羰基氨基)戊-2-烯基]环戊烷 甲酸甲酯。
在室温下，向上述酯(0.116克，0.23毫摩尔)在四氢呋喃(3.5毫升)和水(2毫升) 的混合物中，加入1N氢氧化钠(0.6毫升，0.6毫摩尔)。搅拌反应混合物2小时并 真空浓缩。浓缩物用冰醋酸酸化，并用乙酸乙酯(4×10毫升)萃取。合并的有机 萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，通过硅藻土过滤，并真空浓缩，得到0.114 克(100％)3β-{[(叔丁氧基羰基氨基)(叔丁氧基羰基亚氨基)甲基]氨基}-4α-[1-(1-甲 基羰基氨基)戊-2-烯基]环戊烷甲酸。
在室温下，搅拌上述酸(0.114克，0.23毫摩尔)与三氟乙酸(0.35毫升，4.5毫 摩尔)在二氯甲烷(8毫升)中的混合物24小时。反应混合物被真空浓缩，得到粗产 物。用乙醚研制，得到0.064克(59％)标题化合物，为黄褐色固体，熔点62-64 ℃。 分析：C14H24N4O3·1.5CF3CO2H的计算值：             C,43.68；H,5.50；N,11.99
  测量值：                                              C,43.48；H,5.84；N,12.03
实施例66
3β-{[(氨基)(亚氨基)甲基]氨基}-4α-[1-(1-甲基羰基氨基)戊基]环戊烷甲酸
将实施例65的混合物(0.021克，0.045毫摩尔)和氧化铂(0.05克)的乙醇(6毫升) 混合物，在50psi下氢化过夜。反应混合物通过硅藻土过滤，滤液被真空浓缩， 得到粗产物。用乙醚研制，得到0.020克(95％)标题化合物，为棕色固体，熔点 65-67℃。 分析：C14H26N4O3·1.5CF3CO2H的计算值：     C,43.50；H,5.91；N,11.95
  测量值：                                      C,43.63；H,6.16；N,12.20
生物化学
体外分析根据von Itzstein等人(欧洲申请92309634.6)中所报道的方法。用 Laver等人(Virology 1984,137,p.314-323)所述的方法获得流感HIN9病毒株的神经 氨酸酶。使用荧光底物2′-(4-甲基繖形基)-α-D-乙酰神经氨酸(2′-(4- methylumbelliferyl)-α-D-acetylneuramic acid)，通过分光荧光测量技术测量IC50 值。该底物可被神经氨酸酶切割，产生可定量分析的荧光产物。分析混合物在 32.5mM MES[2-(N-吗啉代)乙烷磺酸]缓冲液，4mM氯化钙，pH6.5(总体积80微 升)中，含有各种浓度(4-6数据点)的抑制剂和酶。通过加入20微升底物至终浓度 为75微升而开始反应。在37℃10分钟后，向0.1毫升反应混合物中加入2.4毫升 0.1M甘氨酸/氢氧化钠(pH10.2)以中止反应。空白为相同的底物溶液但没有酶。 用Aminco-Bowman荧光分光光度计(激发：360纳米，发射：450纳米)读取荧光， 并从读数中减去底物空白。通过抑制百分比对抑制剂浓度的作图而计算出IC50， 每个点的测定都重复一次。
晶体学
通过将HlN9神经氨酸酶转入2毫升磷酸盐缓冲液(其中溶解有抑制剂)中，制 备神经氨酸酶和抑制剂分子的复合物。调节抑制剂化合物的浓度至2mM。让晶 体在缓冲液中平衡约1天，然后从溶液中取出，并安装在玻璃毛细管中以收集X 光衍射数据。所有的X光强度测量值都用Siemens X-100多线区域检测仪，在 Rigaku RU-300旋转阳极发生器(在100mA和50kV下工作)和铜阳极上记录。晶体 到检测仪的距离为160毫米，调节检测仪偏差以收集2.4埃米数据。强度数据在 0.1度振荡框和每个框暴露240秒的条件下测量。在辐射破坏晶体从而不能再收集 数据之前，每个晶体产生了600-700个数据框。
用XENGEN程序包处理强度数据。累积强度被划分(scaled)并合并，产生最 终仅含有唯一反射(unique reflections)的数据集。最终数据集具有完备的2.5埃米 分辨率。所有的修正(refinement)都用XPLOR程序进行。修正的起始模型是2.0埃 米修正的天然N9结构。2.5埃米的傅立叶差分图(Difference Fourier map)是用精细 模型的计算相加以计算的。电子强度图的分析是在Silicon Graphics Indigo Extreme 2计算机图像工作站上，用QUANTA图像程序进行。用人工方式，将理 想化的抑制剂分子模型拟合到差分电子密度。这些抑制剂模型随后被包括在 XPLOR修正中。
生物数据
    实施例编号            对H1N9流感神经氨酸酶的抑制作用
                                     IC50(μm)
        3                               115
        5                               280
        6                                90
        7                              3800
        9                               600
       10                               600
       12                               7.5
       13                               4.3
       14                                40
       15                                50
       16                                70
       17                              2000
       19                                16
       20                                 8
       21                               1.6
       23                              0.47
       24                               4.9
       25                              2300
       26                             0.041
剂量和制剂
本发明的抗病毒化合物可通过任何方式进行施用，以治疗病毒感染，其中 该方式使活性成分的作用位点与人、哺乳动物、鸟类或其他动物体内的病毒神 经氨酸酶接触。它们可以通过现有的用于药物的常规方式进行给药，或者作为 单独的治疗剂，或者用于治疗剂组合。它们可以单独施用，但通常是与药物载 体一起施用，其中该载体可根据选定的给药途径和标准化药物实践而加以选 择。
当然，给药剂量应根据已知的各种因素而变化，例如具体药物的药效特 性，给药方式和途径；服药者的年龄、健康和体重；症状的性质和程度，同时 进行的治疗类型；治疗频率；以及所需的治疗效果。活性成分的每天剂量可约 为0.001-1000毫克(mg)/千克(kg)体重，较佳的剂量是0.1-30毫克/千克体重。
剂型(适用于给药的组合物)含有约1-100毫克活性成分/单元。在这些药物组 合物中，活性成分的数量通常为组合物总重量约0.5-95％(重量)。
活性成分可口服给药，其中作为固体剂型如胶囊、片剂和粉末，或作为液 体剂型如酏剂、糖浆剂和混悬液。也可以无菌液体剂型非肠胃道给药。活性成 分还可鼻内给药(滴鼻液)或通过吸入方式给药。其他剂型也是可行的，例如通过 膏药或软膏形式透皮给药。
胶囊含有活性成分和粉末状载体，如乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸 镁、硬脂酸等。可以使用类似的稀释剂来制备压缩片剂。片剂和胶囊可被制成 缓释剂产品形式，以便在数小时内持续释放药物。压缩片剂可以是包有糖衣和 涂有薄膜的，以便掩盖令人不快的味道并保护片剂与大气隔开，或者涂有肠溶 衣以便选择性地在肠胃道内崩解。
口服给药的液体剂型可含有着色剂和调味剂，以便被病人接受。
通常，水、合适的油、盐水、右旋糖(葡萄糖)水溶液，和相关的糖溶液和二 醇如丙二醇或聚乙二醇等都是非肠胃溶液的合适载体。非肠胃给药的溶液宜含 有活性成分的水溶性盐，合适的稳定剂以及，如果需要，缓冲成分。抗氧化剂 如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠和抗坏血酸都是合适的稳定剂，它们可单独使用或组 合使用。还可使用柠檬酸及其盐，以及EDTA钠盐。此外，非肠胃溶液可含有防 腐剂，例如苯扎氯铵、羟苯甲酸甲酯或羟苯甲酸丙酯，和氯丁醇。
合适的药物载体在Remington′s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company中有描述，这是本领域的标准参考书籍。
下面说明用于施用本发明化合物的有用药物剂型：
胶囊
如下制得大量单元胶囊：在标准的拼合式硬胶囊中填入100毫克粉末状活性 成分，150毫克乳糖，50毫克纤维素，和6毫克硬脂酸镁。
软胶囊
制备活性成分在食用油如豆油、棉籽油或橄榄油中的混合物，用容积式泵 将其注入明胶中，形成含有100mu活性成分的软胶囊。胶囊被洗涤和干燥。
片剂
用常规方式制得大量片剂，使得剂量单元是100毫克活性成分，0.2毫克胶体 氧化硅，5毫克硬脂酸镁，275毫克微晶纤维素，11毫克淀粉和98.8毫克乳糖。可 施涂合适的涂层以便于服用或延迟吸收。
此外，本发明化合物可以以滴鼻液或鼻吸人剂形式给药。
除了此处所显示和描述的内容之外，本发明的各种变动形式是本领域技术 人员在阅读上述内容之后显而易见的。这些变动形式也落于所附权利要求书的 范围之内。
上述公开内容包括了本领域技术人员实施所述发明所需的所有必要信息。 因为引用的申请可能会提供进一步的有用信息，因此这些材料都在此全部引用 作为参考。