本发明涉及一种具有免疫调节作用的药物组合物，具体地，是以海蛇为 原料提取制备的药物组合物，属药物领域。 背景技术
从古至今海蛇被民间所习用，被誉为"祛风燥湿、通络活血、攻毒和滋 补强壮等功效的良药"，常用于风湿痹症、四肢麻木、关节疼痛、疥癣恶疮、 体虚和小儿营养不良等症。首载于唐代陈藏器的《本草拾遗》，"主赤白毒痢， 五野鸡病，恶疮。灸食，亦烧末服一、二钱匕"。现代研究表明其在治疗心脑 血管疾病、抗风湿、免疫调节等方面，也有着其他药材无法比拟的疗效。目
前世界上己知海蛇约90种，而我国沿海分布有扁尾海蛇亚科和海蛇亚科的海 蛇多达15种，主要生活在南海、北部湾及海南、台湾、广西、广东和福建等 省沿海。尤其是我国的北部湾热带海域，最适于海蛇生长繁殖，年产量约75 吨，福建沿海也可达10吨。
海蛇主要含有脂肪酸类，甾类，蛋白质，肽类，游离氨基酸以及丰富的 微量元素等，其中脂肪酸、氨基酸总量、人体必需氨基酸含量、微量元素种 类和含量均比陆地蛇高；约有30多种，占总量的1.5%左右；其中软脂酸、 十六碳烯酸、十八碳烯酸、二十碳烯酸的含量较高，廿二碳六烯酸(DHA)、 廿碳五烯酸（EPA)、硬脂酸、豆蔻酸等也很丰富；脂肪含量比陆地蛇平均高 0.53%。海蛇的主要药理作用有：免疫调节作用、抗菌抗炎作用、对神经系 统的影响、祛痰镇咳作用、抗疲劳作用、改善记忆作用、抗肿瘤等。根据海
蛇的作用开发了多种产品，如：海王酒（海南椰岛海口酒厂）：复方海蛇胶囊
(上海世康特制药有限公司，华东医院）、海蛇祛风胜湿胶囊（泉州制药厂）、 海蛇风湿灵胶囊(福建省泉州中侨有限公司药业公司)、复方海蛇注射液（广 西北海人民医院）、复方海蛇酊（湛江中药厂）、海蛇天麻酒（福建省药材公 司中药研究所）、海蛇脂质软胶囊剂（保健品）、抗青环海蛇毒血清（广西医
科大学与日本蛇学研究所合作）、油针疗法（日本）：以海蛇脂质为主要原料 制成注射剂，在身体压痛点和硬结部位注射，治疗腰痛和颌，肩等部位疼痛。 虽然目前蛇资源的利用前景良好，但对于海蛇的基础研究却一直停滞不 前，尤其是对具体化学成分的探讨并不多，在质量控制方面也存在着很大的 空缺，这将会在一定程度上阻碍对海蛇的进一步开发和利用。即使是目前己 经上市的海蛇产品，并没有对有效成分或者指标成分的具体说明。发明内容
本发明的技术方案是提供了一种具有免疫调节的药物组合物，本发明的 另一技术方案是提供了该药物组合物的制备方法和用途。
本发明提供了一种具有免疫调节的药物组合物，它是由海蛇乙酸乙酯提 取物、水提取物中的一种或两种混合为活性成分，加入药学上可接受的辅料 或辅助性成分制备而成的药剂。
其中，所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比为：
海蛇乙酸乙酯提取物7—9份、水提取物0 — 3份。
进一步优选地，所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比为：
海蛇乙酸乙酯提取物8—9份、水提取物1一2份。
更进一步优选地，所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比为： 海蛇乙酸乙酯提取物8份、水提取物2份。
其中，所述的乙酸乙酯提取物和水提取物是由下述方法制备：海蛇用30
%〜70%乙醇提取、过滤、减压浓縮后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇
萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位，其中乙 酸乙酯部位为海蛇乙酸乙酯提取物、水部位为海蛇水提取物。所述的海蛇用
50%乙醇提取。
其中，所述的海蛇来源于：青环海蛇坊^ro/?力"cya/7oci/7c^/s和平颏 海蛇Z邻?e迈/s力aroVich7的干燥体。本发明使用的是海蛇的去掉头部的干 体。
其中，所述的药剂是口服制剂。
本发明还提供了一种药物组合物的制备方法，它包括如下步骤：
a、 海蛇用30%〜70%乙醇提取、过滤、减压浓縮后，依次用石油醚、 乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位 和水部位，其中乙酸乙酯部位为海蛇乙酸乙酯提取物、水部位为海蛇水提取 物；
b、 将海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物中的一种或两种混合为活性成分， 加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
其中，所述的a步骤海蛇用50X乙醇提取。
本发明药物组合物具有抗疲劳，调节免疫，祛风除湿、舒筋活络；活血 通络，滋补健身的功效，可用于制备成药品或保健食品；将其中的有效部位 乙酸乙酯部分、水溶性部分配伍使用，具有协同增效作用，制备的药品或保 健食品安全、质量稳定、可控、疗效可靠、携带方便、服用方便。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段， 在不脱离本发明的上述基本技术思想前提下，还可以作出其它多种形式的修改、替换和变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步 的详细说明。但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。 凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。 附图说明
图1海蛇有效部位提取流程图 具体实施方式
实施例1本发明药物的制备
取去除头部的海蛇干体5kg，粉碎。加入8倍量50%的乙醇回流提取2 次，每次2h。合并提取液，减压回收溶剂得到乙醇提取浸膏。将浸膏混悬于 1000ml水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，减压回收溶剂， 得到石油醚部分SS-P (105g)、乙酸乙酯部分SS-A (33g)、正丁醇部分SS-B (28g)和水溶性部分SS-W (127g)。
取乙酸乙酯部分32g、水溶性部分8g混合，加上药学上常用的辅料或辅 助性成分，制备成药学上常用的制剂。
实施例2本发明药物液体制剂的制备
酒剂：将乙酸乙酯部分8g、水溶性部位2g，加入适量的白酒溶解，再加 入100g蔗糖，搅拌溶解后，滤过，制成1000ml即得。 实施例3本发明药物液体制剂的制备
酒剂：将乙酸乙酯部分9g、水溶性部位lg，加入适量的白酒溶解，再加 入100g蔗糖，搅拌溶解后，滤过，制成1000ml即得。 实施例4本发明药物固体制剂的制备
① 片剂：将60g淀粉与50g糊精混匀，过筛，再与乙酸乙酯部位80g、 水溶性部位20g用适量乙醇稀释的浸膏混匀，制成颗粒，低温千燥，加入3 %滑石粉，混匀，整粒，压制成1000片，即得。
② 胶囊剂：将60g淀粉与50g糊精混匀，过筛，再与乙酸乙酯部位80g、 水溶性部位20g用适量乙醇稀释的浸膏混匀，过七号筛，于6(TC烘干，装胶 囊，共制成1000粒。
以下通过药效学试验进一步说明本发明的有益效果。 试验例l本发明海蛇活性部位的筛选 1、实验材料 1.1药材
海蛇药材由海南椰岛集团海口酒厂提供（产地广西北海），经成都中医药
大学李敏教授鉴定为眼镜蛇科海蛇亚科青环海蛇场^rO/7力/s C7S/70C//7"W^D平颏海蛇/:a/7e迈^5力arok/ch'i去除内脏后的干燥体。 1.2样品制备取去除头部的海蛇干体5kg，粉碎。加入8倍量50%的乙醇回流提取2次， 每次2h。合并提取液，减压回收溶剂得到乙醇提取浸膏。将浸膏混悬于1000ml 水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，减压回收溶剂，得到石油 醚部分SS-P (105g)、乙酸乙酯部分SS-A (33g)、正丁醇部分SS-B (28g) 和水溶性部分SS-W (127g)。1.3药物与试剂1.3.1试剂生理盐水（四川科伦药业股份有限公司） 中华墨汁(北京一德阁功贸公司） CMC-Na (中国医药集团上海化学试剂公司） 肝素（齐鲁制药厂） 1.3.2药物人参皂苷，配置浓度为lmg/ml。石油醚提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分、水溶性部分 1.4实验动物昆明种健康小白鼠（18-22g) 150只，雄性：2007年4月由成都中医药 大学实验动物中心提供。 1.5实验仪器UV-VIS分光光度仪（Perkin-Elmer Lambda35) DT500电子小鼠称(常熟市衡器厂）BP211S型（Max220g， d=0.1mg) Sartorius电子分析天平（瑞士） Finnpipette 25ul移液器等2、预实验与给予剂量的确定 2.1预实验剂量选择根据成人日剂量换算为小鼠给予剂量：低剂量组1.5g生药/Kg小鼠体重/d，中剂量组3.0g生药/Kg小鼠体重/d，高剂量组4.5g生药/Kg小鼠体重/d，以此三剂量进行预实验。 2.2药液的配制取50%乙醇总提取物，用0.5。/。CMC-Na水溶液分散，所配制浓度如下： 低剂量组溶液：4.395mg/ml (87.9mg/Kg小鼠），相当于1.5g生药/Kg小鼠体重。中剂量组溶液：8.790mg/ml (175.8mg/Kg小鼠），相当于3.0g生药/Kg小鼠体重。高剂量组溶液：13.185mg/ml (263.7mg/Kg小鼠），相当于4.5g生药/Kg 小鼠体重。2.3预实验取小鼠30只，随机分为5组：对照组、阳性药组（人参皂苷lmg/ml)、 低剂量组、中剂量组、高剂量组。每日灌胃给药l次（0.2ml/10g小鼠重量）， 连续给药7天，末次给药后禁食12小时，按碳廓清率试验法测定不同剂量组 对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响。结果如下：表l:海蛇50%乙醇总提取物提取物不同剂量对小鼠单核-巨噬细胞功能的影 响(x士s)组别 动物数（n) 齐懂（mg/kg) 校正廓清指数a(x土s)对照组 6 5.851±1.037阳性药组 6 20 8.288 ±0.956 **低剂量组 6 87.9 6.231 ±1.495中剂量组 6 175.8 8.023 ±1.426 **高剂量组 6 263.7 8.798±0. 984**注：与生理盐水组比较 **P<0.01 *P<0.052.4结论经方差分析实验数据，多重比较表明：与生理盐水组相比，50%乙醇提取物中、高剂量组（PO.01)，均显示显著性差异，小鼠单核一巨噬细胞吞噬活性增强。3、活性部位的筛选 3.1药液的配制取石油醚部分SS-P、乙酸乙酯部分SS-A、正丁醇部分SS-B和水溶性部分 SS-W，分别用0.5。/。CMC-Na水溶液分散，所配制浓度如下：SS-P溶液：3. 15mg/ml (63. Omg/Kg小鼠），相当于3.0g生药/Kg小鼠体重。 SS-A溶液：0.99mg/ml (19. 8mg/Kg小鼠），相当于3.0g生药/Kg小鼠体重。 SS-B溶液：0.84mg/ml (16. 8mg/Kg小鼠），相当于3.0g生药/Kg小鼠体重。 SS-W溶液：3.81mg/ml (76. 2mg/Kg小鼠），相当于3.0g生药/Kg小鼠体重。 3.2对小鼠免疫器官重量的影响取小鼠60只，随机分为6组：对照组、阳性药组、石油醚部分组、乙酸乙 酯部分组、正丁醇部分组、水溶性部分组。每日灌胃给药l次（0.2ml/10g小 鼠重量），对照组给予含O. 5。/。CMC-Na的生理盐水，阳性药组给人参皂苷。连 续给药7d，称体重后，处死，取其胸腺和脾脏称重，计算胸腺指数、脾脏指、K -数。胸腺指数（mg/g)=胸腺重量/体重 脾脏指数（mg/g)=脾脏重量/体重 3. 3对小鼠单核一巨噬细胞功能的影响取小鼠60只，随机分为6组：对照组、阳性药组、石油醚部分组、乙酸乙 酯部分组、正丁醇部分组、水溶性部分组。每日灌胃给药l次（0.2ml/10g小 鼠重量），对照组给予含O. 5%CMC-Na的生理盐水，阳性药组给人参皂苷。连续 给药7d,末次给药后禁食12小时，于次日给药1个小时后由尾静脉注射10%墨 汁O. lml/10g (体重），于注射后1分钟和6分钟分别用吸管（预先用肝素溶液 湿润）从小鼠眼眶后静脉丛取血O. 025ml,立刻吹入到盛有2mi0. 1%船20)3溶液 的试管中，吸管于该液中吸入、吹出数次以充分洗出吸管壁附着之血液，取血 完毕以O. 025ml空白组正常小鼠血溶于2m10. 1%胞20)3液校零，于分光光度计 (680nm)测定吸光度。并计算吞噬指数K及吞噬系数（校正廓清指数）a :K卄1gC，一lgCg - 1、 /y^WLS4/K其中C为血中碳粒浓度，T为时间，W为体重，WLS为肝脾合重（于第二次 取血后迅速剖取肝、脾并于天平称重） 3.4结果与讨论表2:海蛇提取物对小鼠免疫器官重量的影响(X士S)组别 动物数（n) 剂量（mg/kg) 胸腺指数 (mg/g) 脾脏指数 (mg/g)对照组 10 3.07土1. 13 5.11±0. 86阳性药组 10 20.0 5.08 ±0.32 ** 6. 90 ±0. 47**SS-P 10 63. 0 3.39±1.05 5.69 ±1. 34*SS-A 10 19.8 4.14±1.50 ** 5. 78±1. 21*SS-B 10 16. 8 3.18±0. 72 5. 15±0. 99ss-w 10 76.2 3.54±1, 45 * 6. 37 ±1.28**注：与生理盐水组比较 **P<0.01 *P<0.05表3:海蛇提取物对小鼠单核一巨噬细胞功能的影响(X土S)组别 动物数（n) 齐!J量（mg/kg) 校正廓清指数a(x土s)对照组 10 6.289±1. 113阳性药组 10 20.0 7.614± 1.083 *SS-P 10 63.0 6.977 ±1. 005SS-A 10 19.8 8.635 ±1.504 **SS-B 10 16.8 7.244 ±0. 663SS-W 10 76. 2 7.906 ±1. 005 *注：与生理盐水组比较 *冲<0.01 *P<0.05由表2、表3分析，乙酸乙酯部分组、水溶性部分组的脾指数和胸腺指数 与对照组比均有升高，经统计检验有显著性差异(p〈0.05或PO.01)，石油醚 部分组能使小鼠脾指数升高(P<0. 05)，但胸腺指数无显著性差异。与对照组相比，乙酸乙酯部分组的校正廓清指数升高(PO.Ol)，水溶性 部分组也有升高(P〈0.05)。综上可知，乙酸乙酯部分和水溶性部分为海蛇免 疫调节主要活性部位。4、乙酸乙酯部分不同剂量对小鼠免疫功能的影响4.1药液的配制取乙酸乙酯部分提取物SS-A，用0.5。/。CMC-Na水溶液分散，所配制浓度 如下：低剂量溶液：0.495mg/ml (9.9mg/Kg小鼠），相当于1.5g生药/Kg小鼠体重。中剂量溶液：0.990mg/ml (19. 8mg/Kg小鼠），相当于3.0g生药/Kg小鼠体重。高剂量溶液：1.485mg/ml (29.7mg/Kg小鼠），相当于4.5g生药/Kg小鼠体重。4.2实验方法4. 2. 1乙酸乙酯部分不同剂量对小鼠免疫器官重量的影响 取小鼠50只，随机分为5组：对照组、阳性药组、SS-A低剂量组、SS-A 中剂量组、SS-A高剂量组。每日灌胃给药1次（0.2ml/10g小鼠重量），连 续给药7天，称体重后，处死，取其胸腺和脾脏称重，计算胸腺指数、脾脏 指数。4. 2. 2乙酸乙酯部分不同剂量对小鼠单核一巨噬细胞功能的影响 取小鼠50只，随机分为5组：对照组、阳性药组、SS-A低剂量组、SS-A 中剂量组、SS-A高剂量组。每日灌胃给药1次（0.2ml/10g小鼠重量），连 续给药7天，末次给药后禁食12小时，按碳廓清率试验法测定不同剂量组 对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响。 4.3结果与结论表4:海蛇乙酸乙酯部分对小鼠免疫器官重量的影响table see original document page 9
注：与生理盐水组比较 **P<0.01 *P<0.05表5:海蛇乙酸乙酯部分对小鼠单核一巨噬细胞功能的影响table see original document page 10
注：与生理盐水组比较 **P<0.01 *P<0.05由表4、 5可知：与生理盐水组相比，乙酸乙酯部分高、中、低剂量均能 显著提高小鼠的胸腺指数、脾脏指数（PO.01或P〈0.05)。高、中剂量组显 示小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能显著增强（P<0.01)，而低剂量组无显著性 差异。5、结论a. 结合中医传统的用药方法和现代医学理论以及本实验室的研究基础， 对其石油醚提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分、水溶性部分采 用碳廓清率试验法和免疫器官重量测定法进行了小鼠免疫活性筛选。b. 乙酸乙酯提取部分、水溶性部分脾指数、胸腺指数以及校正廓清指数 相对对照组均升高，初步确定为主要活性部位。c. 对乙酸乙酯部位不同剂量考察，低、中、高剂量均能显著增加小鼠免 疫器官重量。中、高剂量能显著增强小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能，而低剂 量无显著影响。试验例2本发明药物组合物的药效学试验将实施例1制备乙酸乙酯提取部分、水溶性部分按重量配比为：7:3、8:2、 9:1的不同配比，按试验例1的方法进行试验，具体试验结果如下： 表6:不同组成对小鼠免疫器官重量的影响table see original document page 10
注：与生理盐水组比较**P<0.01 *P<0.05表7:不同组成对小鼠单核一巨噬细胞功能的影响
table see original document page 11

注：与生理盐水组比较 **P<0.01 *P<0.05
该试验证明，乙酸乙酯提取部分、水溶性部分分别以7: 3、 8: 2、 9: 1
不同配伍，均能发挥协同作用，其中以8-9: 2-l配伍时，效果较优，其中又以8: 2的重量配比的药效最佳。
综上所述，本发明药物是将乙酸乙酯部分、水溶性部分配伍使用，具有协同增效作用，制备的药品或保健食品安全、质量稳定、可控、疗效可靠、携带方便、服用方便。

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