一种双阶马钱子炮制品提取物及其制备方法
技术领域
[0001] 本
发明涉及一种中药材提取物，更具体的说涉及一种马钱子炮制品德提取物。技术背景
[0002] 马钱子为马钱科
植物马钱子(S t r y c h o n s nux-vomica L.)及
云南长籽马钱(S.Wallichiana Steudex D.C.＝S.p ierriana.)的干燥成熟
种子。含
生物碱约2～5％，主要为士的宁及马钱子碱。马钱子味苦、性寒，有大毒。归肝、脾经。具有散结消肿、通络止痛功效；传统用于
治疗风湿顽痹、麻木瘫痪、疽痈肿痛、跌打损伤等症。《医学衷中参西录》中说马钱子“开通
经络,透达关节之功远胜于它药”。马钱子临床应用近千年不衰，说明它具有显著的疗效，可谓是“毒药猛剂善起沉疴”。但同时由于它是一味“毒药”，极大的限制了其临床应用。
[0003] 生马钱子的治疗量与中毒量十分接近，因此要使用马钱子，必需先进行炮制。中药炮制学经过近千年的经验积累，对马钱子已经形成了包括砂烫、油炸、甘草制、醋泡、爆压等多种各有特色的炮制方法，其共同目的就是为了“减毒”。现代的多项毒理实验研究证明了以上各种炮制方法具有确切的减毒作用。邢跃文等研究表明：炮制对马钱子士的宁、马钱子碱含量有一定影响。醋炙、油炸、甘草制均能降低毒性；醋泡品士的宁和马钱子碱含量大幅度下降，其毒性降低，但效价也可能减损。而沙烫品比生品所含士的宁、马钱子碱的量要高。丁氏等利用爆米花机对生马钱子进行炮制，证明了爆压法较砂烫法士的宁含量为低，从而提高了马钱子炮制品临床用药安全性和疗效。陈氏等使用了4种不同的麻黄炙方法炮制马钱子，测定不同马钱子炮制品中士的宁、马钱子碱的含量，并进行了急性毒性、
镇痛作用和消炎作用的研究。结果显示：4种不同方法炮制的麻黄炙马钱子，其毒性均小于生马钱子和药典法的砂烫品，大量研究表明马钱子经过炮制后毒性降低，与生品相比较，其安全性得到提高，扩大了马钱子在临床上的应用。以上研究结果均表明马钱子的炮制目的均是为了降低毒性、增加疗效和适用范围，传统的炮制方法虽然成本较低，但减毒效果并不理想，且操作繁琐、费时，因此有必要发明一种具有确切疗效且能极大降低其毒性的新炮制方法。
[0004] 马钱子含有生物碱、番木鳖甙、豆幽醇苷、
绿原酸、棕榈酸及脂肪油、
蛋白质、多糖等物质。其中总生物碱占2％-5％，为其主要成分。主要为士的宁(stryehnine)，约占总碱量的50％，马钱子碱(Brucine)含量为30％-40％。另含有异士的宁、异马钱子碱、伪马钱子碱、伪士的宁、士的宁氮
氧化物、马钱子碱氮氧化物、马钱子苷、马钱子次碱、可鲁勃林、诺法生、伊卡金、马钱子新碱、异番木鳖碱氮氧化物和2-羟基-3-甲氧基番木鳖碱等少量生物碱。其中马钱子碱和士的宁是主要的药效成分和有毒成分，也是目前研究较多的成分。有文献研究称生马钱子经过砂烫后，士的宁和马钱子碱含量降低，而异士的宁、异马钱子碱、士的宁氮氧化物和马钱子碱氮氧化物等含量增加，推断可能是士的宁和马钱子碱转化之故。因此有必要采用现代新的分析技术，对马钱子及其炮制品的化学成分变化迁移进行深入研究，能够更全面的去阐释不同炮制方法的物质
基础。
[0005] 现代药理学研究表明，马钱子具有中枢神经系统兴奋作用、心血管系统作用、抗炎及免疫系统的作用、抗
肿瘤、镇痛、镇咳、祛痰、平喘、抑菌、抗
心律失常等作用。治疗量的马钱子，能提高大脑皮质兴奋过程和抑制过程。中毒量则可使大脑皮质发生各种时相状态，中毒严重时可见全身肌肉强直性痉挛惊厥，渐至呼吸肌痉挛收缩窒息死亡。据有关报导证实，马钱子碱和士的宁极大剂量时均可阻止胆碱脂酶对乙酰胆碱的破坏活动。马钱子也可直接损害肾小管上皮细胞，导致急性肾功能衰竭、尿毒症。以上研究证明马钱子虽然疗效确切，但毒性较强，极大限制了其临床应用，因此有必要开发一种新的炮制方法，以达到减毒增效的目的。
[0006]
申请人及其研究团队针对马钱子炮制新工艺减毒增效机制进行了深入的研究，并研究得出一种马钱子双阶段炮制新工艺，并于2018年9月30日申请中国
专利“一种双阶马钱子炮制方法(申请号：201811157918.1)”；该研究是通过新的炮制工艺针对马钱子中的主要活性成分的士宁、马钱子碱的化学结构进行改造，达到减毒增效的目的。但是，上述马钱子炮制品中仍然含有少量的士宁和马钱子碱，并且传统的马钱炮制饮片也限制了马钱子的剂型开发和临床应用。
发明内容
[0007] 针对上述问题，本发明提供了一种双阶马钱子炮制品提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0008] 1)按照重量比称取马钱子、生姜和绿豆，加
水，大火煮沸60min；
[0009] 2)将马钱子捞出用烘箱80℃烘干，之后进行砂烫，得到炮制马钱子；
[0010] 3)炮制马钱子将炮制马钱子
粉碎，用pH5的
乙醇溶液，回流提取，得到提取液；
[0011] 4)提取液回收乙醇,用
盐酸调pH值至2～3,过滤,滤液用
氨水调pH值至9～10,水浴蒸干,干燥至恒重,即得双阶马钱子炮制品提取物。
[0012] 步骤1)所述马钱子、生姜、绿豆和水的
质量比为10:20:1:150。
[0013] 步骤3)所述为加6倍于马钱子量、pH＝5的50％乙醇溶液,加热回流提取3次,每次1h,合并乙醇提取液,得到提取液。
[0014] 一种双阶马钱子炮制品提取物，为上述任一项所述方法制备得到的双阶马钱子炮制品提取物。
[0015] 双阶马钱子炮制品提取物的活性成分为士的宁和马钱子碱与生姜中酚性或弱酸性成分发生反应生成的生物碱。
[0016] 本发明的有益技术效果是：1、本发明提供的双阶马钱子炮制品提取物克服了马钱子提取物留存少量士的宁和马钱子碱的
缺陷；
[0017] 2、减少了体积，为马钱子炮制品的剂型开发创造了条件。
附图说明
[0018] 图1质量亏损方法建立过程图；
[0019] 图2以士的宁、马钱子碱为母核质量亏损过滤图；
[0020] 图3造模前后得分图；
[0021] 图4造模前后opls-da图。
具体实施方式
[0022]
实施例1双阶马钱子炮制品提取物的制备
[0023] 以相同量马钱子(100g)，将生姜加入量、加水量、生姜煎煮时间、马钱子煎煮时间、烘干
温度作为主要考察因素，制备完成后按照优化后色谱条件进行检测，以马钱子碱和士的宁的含量作为指标对炮制工艺进行评价，具体如表1所示。最终获得优化的炮制方法为：100g马钱加生姜200g，绿豆10g，加水1.5kg，大火煮沸60min，放入马钱煮1.5小时，烘箱80℃烘干，之后进行砂烫，得到双阶马钱子炮制品。加6倍于马钱子量、pH＝5的50％乙醇溶液,加热回流提取3次,每次1h,合并乙醇提取液,过滤,回收乙醇,用盐酸调pH值至2～3,过滤,滤液用氨水调pH值至9～10,水浴蒸干,干燥至恒重,即得双阶马钱子炮制品提取物。由液相重叠图可以看出，双阶马钱子炮制品提取物的马钱子碱和的士宁没有检测出来。
[0024] 实施例2双阶马钱子炮制品提取物的成分检测
[0025] 分别以马钱子碱和士的宁为母核，构建生姜的化学成分
数据库(共120种化合物)，推测生姜中酚性或弱酸性成分与生物碱发生反应的类型，利用PeakView
软件的质量亏损筛选功能，对实施例1得到的双阶马钱子炮制品提取物的TOF数据进行分析，具体如图1所示、2。
[0026] 通过质量亏损，以士的宁为母核共鉴定出23个新化合物，以马钱子碱为母核共鉴定出17个新化合物，具体如表1、2所示。
[0027] 表1新化合物分析结果
[0028]
[0029]
[0030] 表2新化合物分析结果
[0031]
[0032] 实施例3双阶马钱子炮制品提取物的活性考察
[0033] 双阶马钱子炮制品提取物连续灌胃大鼠3d，末次
给药后采集血清样品，之后建立大鼠足趾肿胀模型，建模后30min，采集血清样品，12000r/min超高速离心，取上层血清与-80度
冰箱中备用。
[0034] 将新工艺造模前后样品的质谱数据代入SIMCA软件，建立OPLS-DA数学模型，通过S-PLOT、VIP值，筛选生物标志物，并以生物标志物数据结果为指标，导入已建立的代谢产物数据库筛选差异性成分。结果如图3、4所示。
[0035] 将ICR小鼠分为3组(空白组、双阶马钱子炮制品生药粉末270mg、双阶马钱子炮制品提取物11.5mg(相当于双阶马钱子炮制品生药270mg)、)共6只，雌雄各半。每天灌胃一次(0.5ml)，连续灌胃3天，末次给药1h后，各组小鼠右
耳暴露，除正常组外，其余组用移液枪在小鼠耳中部滴二
甲苯，滴后停5s，正反两面滴二甲苯共30ul，左耳作为空白对照。30min后颈椎脱臼处死，手术剪剪下双耳，用打孔器在左右耳对称部位打下耳片，用
电子天平称重，记录重量，计算肿胀度和肿胀率。实验结果具体如表3所示。
[0036] 表3小鼠耳肿胀实验
[0037]
