一种厚朴精制饮片的质量控制方法
阅读：665发布：2023-02-24
专利汇可以提供一种厚朴精制饮片的质量控制方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及厚朴精制饮片的 质量 控制方法；包括以厚朴酚、和厚朴酚对照品为对照，高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量；以厚朴酚、和厚朴酚为参照物，以高效液相指纹图谱的共有峰相对保留时间相对保留峰面积为对照，采用高效液相指纹图谱法测定所含厚朴的道地性；不仅检测厚朴的存在与否和含量，并且还进一步检测厚朴的道地性；因为中医药的特殊性，原料道地与否直接影响到药物的功效和性能，这是本领域公认的。故本发明的质量控制方法可以保证厚朴精制饮片的质量更加稳定可靠。，下面是一种厚朴精制饮片的质量控制方法专利的具体信息内容。
1.一种厚朴精制饮片道地性的检测方法，采用高效液相指纹图谱法，具体步骤：
(1)色谱条件和系统适用性试验：色谱柱：大连依利特公司Hypersil BDS C18色谱柱，
4.6×200mm，5μm；流动相：甲醇-水＝60∶40；流速：1ml/min；柱温：室温；检测波长：
294nm；理论板数按厚朴酚峰计应不低于3500；
(2)供试品溶液的制备：取通过三号筛的本品粉末0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，在-10℃冷冻6～10分钟，恢复室温后精密加入甲醇25ml，在功率250W，频率40kHz的条件下超声处理30min，滤过，取续滤液，即得；
(3)参照物溶液的制备：精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每
1ml含厚朴酚40μg、和厚朴酚20μg的溶液，即得；
(4)指纹图谱获得：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录30分钟的色谱图，即得；以厚朴酚对照品的色谱峰S峰的相对保留时间和峰面积为1计算相对保留时间和峰面积比值；
(5)检测方法：按上述方法利用道地药材建立标准指纹图谱，然后待检样品的指纹图谱与标准指纹图谱经计算机模拟相似度计算软件计算。
2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于：所述的标准指纹图谱的技术参数为：
共有峰的相对保留时间为：峰1为0.1638～0.1680，峰2为0.2588～0.2645，峰3为
0.3052～0.3099，峰4为0.4283～0.4330，峰5为0.4701～0.4892，峰S为1.000，峰7为1.4708～1.4761；
共有指纹峰的相对保留面积为：峰1为0.3773～0.4132，峰2为1.1776～1.3647，峰S为1.000，峰7为1.4046～1.4274。
3.利用权利要求1所述方法的厚朴精制饮片中的有效成分分析方法，包括厚朴精制饮片的制备和检测，检测步骤包括：
(1)以厚朴显微特征为对照，显微鉴别厚朴精制饮片中是否含厚朴；
(2)以厚朴酚、和厚朴酚对照品为对照，薄层色谱方法鉴别厚朴精制饮片中是否含厚朴有效成分；
(3)以厚朴酚、和厚朴酚对照品为对照，高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量；
(4)采用如权利要求1所述高效液相指纹图谱法检测道地性。
4.根据权利要求3所述的分析方法，其特征在于：所述的显微鉴别方法为：取本品，置显微镜下观察，粉末棕色；纤维甚多，直径15～32μm，壁甚厚，有的呈波浪形或一边呈锯齿状，木化，孔沟不明显；石细胞类方形、椭圆形，卵圆形或不规则分枝状，直径11～65μm，有时可见层纹；油细胞椭圆形或类圆形，直径50～85μm，含黄棕色油状物。
5.根据权利要求3所述的分析方法，其特征在于：所述的薄层色谱鉴别厚朴精制饮片中是否含厚朴有效成分方法为：取过三号筛的本品粉末0.5g，加甲醇5ml，密塞，振摇30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，另取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照附录VIB的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各
5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲醇＝17∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
6.根据权利要求3所述的分析方法，其特征在于：所述的高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量方法为：
(1)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水＝
78∶22为流动相；检测波长为294nm；理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800；
(2)对照品溶液的制备：精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含厚朴酚40μg、和厚朴酚24μg的溶液，即得；
(3)供试品溶液的制备：取通过三号筛的本品粉末0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按8.5～9.5∶1混合的混合液25ml，摇匀，密塞，在36～42℃下浸渍16～20小时，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
(4)测定法：分别精密吸取上述两种对照品溶液各4μl与供试品溶液3～5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，含厚朴酚(C18H18O2)与和厚朴酚(C18H18O2)的总量不得少于1.6％。
一种厚朴精制饮片的质量控制方法
技术领域
[0001] 本发明涉及厚朴精制饮片的加工方法，尤其是加工过程中的质量控制方法。
背景技术
[0003] 中药指纹图谱的研究和建立正是为了解决药品质量控制和监督这一关键问题而采取的一种方法。虽然中药指纹图谱的概念和原理已经较为常见，其研究也成为中医药领域的热点课题之一。但是，具体到某种中药中如何具体实施却还是非常困难。原因在于：
[0004] 我国地域广阔，药用植物资源极为丰富，目前拥有中草药12807种，其中植物药11146种，动物药1581种，矿物药80种。由于药材品种繁多，地区用药习惯各异，古代本草记载简单，误传错用和用药演变等因素，导致药材同物异名、同名异物以及正品、非正品都入药的混乱现象非常严重。更为普遍的是，影响中药成分的因素复杂，即使是同一药材，其有效化学成分常因生态环境、采集时间、储存和炮制方法等不同而有差异。这些问题严重影响了中药的质量和用药的安全性与有效性。
[0005] 相应地，要稳定、可靠地进行中药指纹图谱检测，获得标准指纹图谱，进而检测待检样品是极其困难的。提取溶剂的选择、工艺流程、参数的选择等等都是难点技术，也没有先有技术或者标准可供参考。
[0006] 并且传统的中药质量控制方法与现代化学合成药品的质量控制技术有着根本区别。中药一般为复方制剂，中药理论讲究君、臣、佐、使；讲究药物组方配伍；讲究因人而异、天人合一、辨症施治，方剂中有效成份极为复杂，大部分结构、作用机理尚不清楚。在现有条件下，以单一化学成份分析的观点，不适合中药(天然药物)这一复杂成份分析体系。也就是中药部是混合物所以其实施指纹图谱识别和质量控制的难度又进一步增大。
[0007] 总体来说，中药材生产过程复杂，受多种因素的制约，这些都为其质量可控提出了新的课题。而药材、中成药质量标准现代化是中药现代化的一个重要组成部分。目前为止，在厚朴精制饮片生产和流通中，还没有一种质量控制手段能够全面、综合地反映出中药产品的质量变异，有效地进行全过程的质量控制。
[0008] 本领域的技术人员也无法由其它重要的指纹图谱和质量控制方法得到厚朴精制饮片的利用指纹图谱进行质量控制的方法，同时又不付出创造性劳动。
发明内容
[0009] 本发明的目的是提供了一种厚朴精制饮片生产的质量控制方法，以保障厚朴精制饮片的产品质量可靠。
[0010] 为了达到本发明的目的，采用的技术方案是：一种厚朴精制饮片的质量控制方法，包括厚朴精制饮片的制备和检测，检测步骤包括：
[0011] (1)以厚朴显微特征为对照，显微鉴别厚朴精制饮片中是否含厚朴；
[0012] (2)以厚朴酚、和厚朴酚对照品为对照，薄层色谱方法鉴别厚朴精制饮片中是否含厚朴有效成分；
[0013] (3)以厚朴酚、和厚朴酚对照品为对照，高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量；
[0014] (4)以厚朴酚、和厚朴酚为参照物，以高效液相指纹图谱的共有峰相对保留时间相对保留峰面积为对照，采用高效液相指纹图谱法测定所含厚朴的道地性。
[0015] 本发明的技术方案中，较现有技术的显著进步在在于：不仅检测厚朴的存在与否和含量，并且还进一步检测厚朴的道地性；因为中医药的特殊性，原料道地与否直接影响到药物的功效和性能，这是本领域公认的。但是现有的厚朴产品的质量控制过程中还没有进行道地性检测的技术，也没有相关的技术启示。
[0016] 进一步的改进是：所述的显微鉴别方法为：取本品，置显微镜下观察，粉末棕色。纤维甚多，直径15～32μm，壁甚厚，有的呈波浪形或一边呈锯齿状，木化，孔沟不明显。石细胞类方形、椭圆形，卵圆形或不规则分枝状，直径11～65μm，有时可见层纹。油细胞椭圆形或类圆形，直径50～85μm，含黄棕色油状物。
[0017] 进一步的，所述的薄层色谱鉴别厚朴精制饮片中是否含厚朴有效成分方法为：取过三号筛的本品粉末0.5g，加甲醇5ml，密塞，振摇30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，另取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲醇(17∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，在100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0018] 所述的高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量方法为：
[0020] (2)对照品溶液的制备：精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含厚朴酚40μg、和厚朴酚24μg的溶液，即得；
[0021] (3)供试品溶液的制备：取饮片制成粒径小于0.3毫米的粉末，取该粉末0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按8.5～9.5∶1混合的混合液25ml，摇匀，密塞，在36～42℃下浸渍16～20小时，精密量取滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
[0022] (4)测定法：分别精密吸取上述两种对照品溶液各4μl与供试品溶液3～5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含厚朴酚(C18H1802)与和厚朴酚(C18H1802)的总量不得少于1.6％。
[0023] 这样实际上是为了将饮片中的有效成分完全溶解和分散到甲醇溶剂中，然后和标准溶液对照测定单位体积中有效物质的含量。那么，如何使饮片粉末中的有效物质溶解到甲醇溶剂中就成了技术难题，直接影响检测结果的准确性。现有技术中例如申请号是2009110228360.6中介绍的，就是利用超声设备，进行超声处理半小时来促进物质的溶解。
但是这样的技术方案一方面超声设备成本高，使用维护成本和技术难度较大，不利于产品生产现场的推广和使用。同时本领域技术人员一直认为物料粉碎得越细，则其中的有效物质越容易溶解到溶剂中。例如上述的专利中也提供的实施例也证明必须要将药品粉碎到80目才能实现发明的目的。但是本发明反其道而行之，将物料粉碎到粒径在0.27-0.3毫米之间，大致也就是50目左右的细度，或者说能够过三号筛的程度；并利用静置溶解的方式反而取得了更好的技术效果，能够实现准确的目的。同时静置溶解的方式避免了有效物质受热挥发和分解，检测结果更加准确。
但是这样的技术方案一方面超声设备成本高，使用维护成本和技术难度较大，不利于产品生产现场的推广和使用。同时本领域技术人员一直认为物料粉碎得越细，则其中的有效物质越容易溶解到溶剂中。例如上述的专利中也提供的实施例也证明必须要将药品粉碎到80目才能实现发明的目的。但是本发明反其道而行之，将物料粉碎到粒径在0.27-0.3毫米之间，大致也就是50目左右的细度，或者说能够过三号筛的程度；并利用静置溶解的方式反而取得了更好的技术效果，能够实现准确的目的。同时静置溶解的方式避免了有效物质受热挥发和分解，检测结果更加准确。
[0024] 本发明改变了本领域技术人员的技术偏见，采用特定的粉碎细度指标实现了利用常规的静置溶解的方法，实现了准确可靠检测厚朴饮片中有效物质的含量的目的。
[0025] 进一步的改进是，所述的指纹图谱鉴别道地性的方法为：
[0026] (1)色谱条件和系统适用性试验：色谱柱：大连依利特公司HypersilBDS C18色谱柱，4.6×200mm，5μm；流动相：甲醇-水(60∶40)；流速：1ml/min；柱温：室温；检测波长：294nm。理论板数按厚朴酚峰计应不低于3500；
[0027] (2)供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，在-10℃冷冻6～10分钟，恢复室温后精密加入甲醇25ml，超声处理(功率250W，频率40kHz)30min，滤过，取续滤液，即得；
[0028] (3)参照物溶液的制备：精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含厚朴酚40μg、和厚朴酚20μg的溶液，即得；
[0029] (4)指纹图谱获得：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录30分钟的色谱图，即得。以厚朴酚对照品的色谱峰(S峰)的相对保留时间和峰面积为1计算相对保留时间和峰面积比值。
[0030] (5)检测方法：按上述方法利用道地药材建立标准指纹图谱，然后待检样品的指纹图谱与标准指纹图谱经计算机模拟相似度计算软件计算，待检品品指纹图谱应与标准指纹图谱相似度大于0.90可认定待检品为道地产品。附图说明
[0031] 图1是厚朴精制饮片粉末显微特征图；
[0033] 图3是厚朴精制饮片共有指纹图谱；
[0034] 图4是10批厚朴HPLC指纹图谱匹配结果图。
具体实施方式
[0035] 下面结合实施例，对本发明进行进一步说明。
[0036] 实施例一
[0037] 高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量：
[0038] 色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(78∶22)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。
[0039] 对照品溶液的制备，精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含厚朴酚40μg、和厚朴酚24μg的溶液，即得。
[0040] 供试品溶液的制备，取样品粉末(过三号筛)0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按8.5∶1混合的混合液25ml，摇匀，密塞，在36℃下浸渍16小时，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
[0041] 测定法：分别精密吸取上述两种对照品溶液各4μl与供试品溶液3～5μl，注入液相色谱仪，测定得有效物质含量占精制饮片干品的1.87％。
[0042] 实施例二
[0043] 高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量：
[0044] 色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(78∶22)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。
[0045] 对照品溶液的制备，精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含厚朴酚40μg、和厚朴酚24μg的溶液，即得。
[0046] 供试品溶液的制备，取样品粉末(过三号筛)0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按8.8∶1混合的混合液25ml，摇匀，密塞，在38℃下浸渍18小时，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
[0047] 测定法：分别精密吸取上述两种对照品溶液各4μl与供试品溶液3～5μl，注入液相色谱仪，测定得有效物质含量占精制饮片干品的1.94％，所得色谱图如图2所示。
[0048] 实施例三
[0049] 高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量：
[0050] 色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(78∶22)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。
[0051] 对照品溶液的制备，精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含厚朴酚40μg、和厚朴酚24μg的溶液，即得。
[0052] 供试品溶液的制备，取样品粉末(过三号筛)0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按9.0∶1混合的混合液25ml，摇匀，密塞，在39℃下浸渍20小时，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
[0053] 测定法：分别精密吸取上述两种对照品溶液各4μl与供试品溶液3～5μl，注入液相色谱仪，测定得有效物质含量占精制饮片干品的1.71％。
[0054] 实施例四
[0055] 高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量：
[0056] 色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(78∶22)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。
[0057] 对照品溶液的制备，精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含厚朴酚40μg、和厚朴酚24μg的溶液，即得。
[0058] 供试品溶液的制备，取样品粉末(过三号筛)0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按9.3∶1混合的混合液25ml，摇匀，密塞，在41℃下浸渍19小时，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
[0059] 测定法：分别精密吸取上述两种对照品溶液各4μl与供试品溶液3～5μl，注入液相色谱仪，测定得有效物质含量占精制饮片干品的1.84％。
[0060] 实施例五
[0061] 高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量：
[0062] 色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(78∶22)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。
[0063] 对照品溶液的制备，精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含厚朴酚40μg、和厚朴酚24μg的溶液，即得。
[0064] 供试品溶液的制备，取样品粉末(过三号筛)0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按9.2∶1混合的混合液25ml，摇匀，密塞，在37℃下浸渍17小时，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
[0065] 测定法：分别精密吸取上述两种对照品溶液各4μl与供试品溶液3～5μl，注入液相色谱仪，测定得有效物质含量占精制饮片干品的1.81％。
[0066] 实施例六
[0067] 高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量：
[0068] 色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(78∶22)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。
[0069] 对照品溶液的制备，精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含厚朴酚40μg、和厚朴酚24μg的溶液，即得。
[0070] 供试品溶液的制备，取样品粉末(过三号筛)0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按9.5∶1混合的混合液25ml，摇匀，密塞，在38℃下浸渍16小时，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
[0071] 测定法：分别精密吸取上述两种对照品溶液各4μl与供试品溶液3～5μl，注入液相色谱仪，测定得有效物质含量占精制饮片干品的1.83％。
[0072] 按照要求精制饮片的有效物质含量按干燥品计算，含厚朴酚(C18H18O2)与和厚朴酚(C18H18O2)的总量不得少于1.6％。实施例一到六的检测结果表明，样品中厚朴酚(C18H18O2)与和厚朴酚(C18H18O2)的总量实际都不少于1.6％，均符合中国药典2010版厚朴含量测定项下的规定。
[0073] 方法学研究：为了考察本发明的新检测方法的可靠性，则对其精密度、稳定性、试验方法的重复性进行考察。
[0074] 精密度试验：取与实施例四同批次按同样方法制备的供试品溶液重复进样6次比较含量，结果如表1所示，RSD＜3％，证明该方法精密度较好。
[0075] 表1：对同一供试样品重复6次测试的结果
[0076]序号 1 2 3 4 5 6 RSD/％
含量/％ 1.82 1.87 1.81 1.83 1.86 1.85 1.17
含量/％ 1.82 1.87 1.81 1.83 1.86 1.85 1.17
[0077] 稳定性试验：取与实施例四同批次同样制备的供试品溶液，分别在制备完成后1、3、6、9、12、15h进样，比较含量变化，RSD＜3％，见表2。结果表明，样品在15h内稳定。
[0078] 表2：对同一供试样品在制备完成后1、3、6、9、12、15h测试结果[0079]小时 1h 3h 6h 9h 12h 15h RSD/％
含量/％ 1.89 1.84 1.85 1.86 1.81 1.82 1.43
含量/％ 1.89 1.84 1.85 1.86 1.81 1.82 1.43
[0080] 重复性试验：取与实施例四同批次的厚朴精制饮片样品6份，按本发明方法分别制备供试品溶液，比较含量，结果表明，其RSD＜3％，含量稳定。
[0081] 表3：对同批次样品取样6份得测试结果
[0082]序号 样1 样2 样3 样4 样5 样6 RSD/％
含量/％ 1.82 1.87 1.81 1.82 1.84 1.85 1.12
含量/％ 1.82 1.87 1.81 1.82 1.84 1.85 1.12
[0083] 准确性试验：为验证新的检测方法的检测结果是否准确，采用中国药典2010版厚朴精制饮片含量测定项下的方法对实施例一到六中的样品进行重复三次的验证实验。数据结果如表4所示：
[0084] 表4：对每组实施例的待测样品进行验证实验的检测数据
[0085]
[0086] 因为现有的药典规定的标准方法是较为常用并且公认的较为准确的检测方法；而通过对实施例一到六中的产品进行验证检测的数据可见，本发明的方法检测结果与标准方法的结果吻合，是准确可靠的。
[0087] 由上述实施例和检测结果可见，本发明检测厚朴有效物质含量的方法结果准确、可靠。同时还大大缩短了浸渍处理的时间，这对于提高检测效率，及时发现和处理药品质量问题，保证产品质量具有极为重要的意义；也可以避免不合格产品的产生，避免生产成本的浪费。同时不需要昂贵复杂的检测设备，显著降低了成本，同时提高了效果。
[0088] 实施例七
[0089] 指纹图谱法鉴别厚朴的道地性：参照中国药典2010年版一部附录VID：高效液相色谱法，进行指纹图谱法对厚朴道地性的测定。
[0090] 色谱条件和系统适用性试验：色谱柱：大连依利特公司Hypersil BDS C色谱柱，4.6×200mm，5μm；流动相：甲醇-水(60∶40)；流速：1ml/min；柱温：室温；检测波长：
294nm。理论板数按厚朴酚峰计应不低于3500。
294nm。理论板数按厚朴酚峰计应不低于3500。
[0091] 供试品溶液的制备：取过三号筛的本品粉末0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中摊匀，在-10℃冷冻6～10分钟，恢复室温后精密加入甲醇25ml，超声处理(功率250W，频率40kHz)30min，滤过，取续滤液，即得。
[0092] 如何将厚朴中的有效物质成分提取出来，使得图谱形成得更加稳定，也是本发明的技术难点之一，通过先冷冻然后加入甲醇，超声处理的办法，意外地获得了良好的技术效果，使得厚朴样品的液相色谱图清晰稳定。并且其处理条件较为苛刻，除冷冻时间可在6到10分钟内波动外其余条件都是相对固定的情况下才能获得理想的指纹图谱。
[0093] 参照物溶液的制备：精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含厚朴酚40μg、和厚朴酚20μg的溶液，即得。
[0094] 测定法：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录30分钟的色谱图。以厚朴酚对照品的色谱峰(S峰)的相对保留时间和峰面积为1计算相对保留时间和峰面积比值。
[0095] 按上述方法对10批厚朴道地药材制成的精制饮片进行测定，以如图4所示的10批样品的指纹图谱为基础经国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价软件计算拟合获得如图3所示的标准图谱。具体就是：
[0096] 共有峰相对保留时间：取不同批次厚朴道地药材制成的精制饮片10批，按照供试品溶液的制备和检测方法进行检测，对数据进行分析，经国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价软件计算，不同批次样品相似度均大于0.9。选取指纹图谱中色谱峰分离良好的，峰面积较大的厚朴酚为参照峰。以参照峰的保留时间作为1，分别计算共有指纹峰的相对保留时间，结果见表5，并根据10批样品的指纹图谱的相对保留时间确定了7个共有特征峰，见图3、4。各共有峰的相对保留时间为：峰1(0.1638～0.1680)，峰2(0.2588～0.2645)，峰3(0.3052～0.3099)，峰4(0.4283～0.4330)，峰5(0.4701～0.4892)，对照峰：峰S(1.000)，峰7(1.4708～1.4761)。
[0097] 采用相对保留时间标定共有指纹峰：以图谱中厚朴酚为参照物(s)，将各色谱峰保留时间与同一图谱中参照物的保留时间比较，其比值为各色谱峰的相对保留时间。分别计算10批厚朴精制饮片的指纹图谱中各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，其中7个色谱峰为各样品所共有，见图3，因此，标定它们为共有指纹峰。根据《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》规定，各共有指纹峰的面积比值必须相对固定：单峰峰面积占总峰面积≥20％，其差值＜20％；单峰峰面积占总峰面积≥10％而＜20％，其差值＜25％；单峰峰面积占总峰面积＜10％，峰面积比值不作要求，仅需要标定相对保留时间。其共有指纹峰的相对保留面积为：峰1(0.3773～0.4132)，峰2(1.1776～1.3647)，峰S(1.000)，峰7(1.4046～1.4274)。
[0098] 依此指纹图谱为基准检测待检样品道地性时，只需按本发明的方法处理和检测待检样品，经计算机模拟相似度计算软件计算，待检样品指纹图谱应与所建立的道地药材标准指纹图谱相似度大于0.90，可认定其道地性。当然，确定标准图谱和将待检样品与标准图谱进行相似度对比时也可以采用其他公知的对比软件。
[0099] 表5 10批厚朴指纹图谱共有峰相对保留时间
[0100]
[0101] 表6 10批厚朴指纹图谱共有峰相对峰面积
[0102]
[0103] 为证明本发明的指纹图谱鉴别方法的可靠性，以下提供方法学研究资料。
[0104] 方法学研究：本文参考国家药品食品监督管理局颁发的《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》规定，对其仪器精密度、稳定性、试验方法的重复性进行考察，结果均符合规定。
[0105] 精密度试验：取同一份供试品溶液重复进样6次，比较共有指纹峰的相对保留时间、相对峰面积，结果表明，各共有指纹峰的相对保留时间、相对峰面积基本一致，RSD＜5％，见表7、表8。结果符合指纹图谱的检测要求。
[0106] 表7精密度试验相对保留时间考察结果
[0107]
[0108] 表8精密度试验相对峰面积考察结果
[0109]
[0110] 稳定性试验 取同一份厚朴精制饮片的供试品溶液，分别在制备后1、4、8、16、24、36h进样，比较各共有指纹峰的相对保留时间、相对峰面积，结果表明，各共有指纹峰的相对保留时间、相对峰面积基本一致，RSD＜5％，见表9、表10。结果表明，样品在24h内稳定，符合检测要求。
[0111] 表9稳定性试验相对保留时间考察结果
[0112]
[0113] 表10稳定性试验相对峰面积考察结果
[0114]
[0115] 重复性试验 取同一批厚朴精制饮片样品6份，按供试品溶液制备方法分别制备供试品溶液，比较各共有指纹峰的相对保留时间、和相对峰面积，结果表明，各共有指纹峰的相对保留时间、相对峰面积基本一致，RSD＜5％，见表11、表12。结果符合指纹图谱的检测要求。
[0116] 表11重复性试验相对保留时间考察结果
[0117]
[0118] 表12重复性试验相对峰面积考察结果
[0119]
[0120] 实施例八
[0121] 利用本发明的方法对厚朴精制饮片的质量进行全面检测。
[0122] 样品来源：
[0123] 样1-样10：按照《中国药典》2010年版收载的重庆武隆GAP基地道地药材厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮；
[0124] 对照样1：产地：陕西汉中，采样和方法同样1-样10；
[0125] 对照样2：产地：贵州铜仁，采样方法同样1-样10；
[0126] 制法：将12个样品的厚朴药材，刮去粗皮，洗净，润透，切丝，干燥。
[0127] (1)形状鉴别：
[0128] 片型：弯曲丝条状，丝宽3-5mm。
[0129] 色泽：外表面黄棕色，内表面深紫褐色，较平滑。
[0130] 质地：质硬，断面纤维性，有油性，有的可见多数小亮星。
[0131] 气味：气香，味辛辣、微苦。
[0132] (2)厚朴精制饮片的显微鉴别，如图1所示。取本品适量，置显微镜下观察：粉末棕色。
[0133] 纤维：甚多，直径15～32μm，壁甚厚，有的呈波浪形或一边呈锯齿状，木化，孔沟不明显。
[0134] 石细胞：类方形、椭圆形、卵圆形或不规则分枝状，直径11～65μm，有时可见层纹。
[0135] 油细胞：椭圆形或类圆形，直径50～85μm，含黄棕色油状物。
[0136] 薄壁细胞：含微细的颗粒状物及棕色物。
[0137] 筛管分子：筛孔明显，侧壁上有较小的椭圆形筛域。
[0138] 木栓细胞：淡黄色，表面观呈类多角形，壁稍波状弯曲，微木化。
[0139] (3)为厚朴精制饮片的薄层鉴别。参照中国药典2010年版一部厚朴项下的规定，进行薄层层析试验。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0140] (4)水分、灰分等检测。
[0141] 水分：照水分测定法(中国药典2010年版一部附录IX H第二法)测定，结果见表13。
[0142] 表13水分测定结果
[0143]
[0144] 对照样1水分：7.3％；对照样2水分：7.9％。
[0145] 总灰分：照灰分测定法(中国药典2010年版一部附录IX K第一法)测定，结果见表14。
[0146] 酸不溶性灰分：照灰分测定法(中国药典2010年版一部附录IX K)测定，结果见表14。
[0147] 表14总灰分及酸不溶性灰分测定结果
[0148]
[0149] 对照样1总灰分：3.7％，酸不溶性灰分：2.3％；
[0150] 对照样2总灰分：4.1％，酸不溶性灰分：2.5％。
[0151] 浸出物：照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法(中国药典2010年版一部附录X A)测定，以稀乙醇作溶剂。结果见表15。
[0152] 表15 10批厚朴饮片样品醇溶性浸出物测定结果
[0153]
[0154] 对照样1醇浸出物：10.71％，对照样2醇浸出物：11.32％。
[0155] 重金属：照重金属检查法(中国药典2010年版一部IX E第二法)进行检查，结果见表16。10批样品的重金属均小于20ppm，故未将重金属检查列入质量标准。
[0156] 砷盐：照砷盐检查法(中国药典2010年版一部IX F第一法)检查，结果见表16。10批样品的砷盐均小于1ppm，故末将砷盐检查列入质量标准。
[0157] 表16重金属、砷盐检查结果
[0158]
[0159] 对照样1重金属＜20ppm、砷盐＜1ppm；
[0160] 对照样2重金属＜20ppm、砷盐＜1ppm。
[0161] (5)按本发明的方法进行厚朴含量测定。
[0162] 10批道地药材的厚朴饮片样品和两个对照样依本发明的方法操作，测定含量，结果见表17。10批样品和两个对照样均符合规定。
[0163] 表17厚朴精制饮片含量测定结果
[0164]
[0165] 对照样1：1.7％；对照样2：1.8％。
[0166] (6)厚朴道地性检测
[0167] 按本发明的方法对10批次的道地药材和两个对照样进行处理和液相色谱检测，待检厚朴精制饮片的指纹图谱与标准指纹图谱经国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价软件计算的总体相似度结果如表18所示：
[0168] 表18 待检厚朴精制饮片样品的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度[0169]
[0170] 对照样1：0.89；对照样2：0.86。
[0171] 通过检测结果可见：武隆地道药材的检测结果均符合要求，而对照样1、2虽然在含量等其它基本待检指标中结果合格，但仍然难以通过指纹图谱检测，证明本发明的检测方法准确可靠。并且解决了长期以来本领域技术人员渴望检测检测厚朴精制饮片的道地性而末能实现的技术难题。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种产品质量安全追溯平台 | 2020-05-12 | 634 |
| 一种农产品质量安全监管系统 | 2020-05-12 | 505 |
| 作为服务的网络质量 | 2020-05-11 | 649 |
| 一种建筑工程质量平面度检测装置 | 2020-05-13 | 976 |
| 一种检测原煤质量的方法 | 2020-05-13 | 774 |
| 一种工程质量检测用切芯制样设备 | 2020-05-12 | 531 |
| 一种智能食品质量检测机器人 | 2020-05-12 | 128 |
| 一种工程质量检测用切芯制样设备 | 2020-05-12 | 481 |
| 煤矿钻杆质量检测装置 | 2020-05-11 | 334 |
| 一种生鲜奶质量分析仪 | 2020-05-11 | 814 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
质量热门专利
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈