聚乙二醇化卡非佐米化合物
阅读：399发布：2020-05-11
专利汇可以提供聚乙二醇化卡非佐米化合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供式I的 聚合物 聚乙二醇化 卡非佐米化合物，和其药学上可接受的盐，其中R1、R2、连接体、PEG、n和o如本文所定义。本发明还提供制备和使用这些化合物来 治疗 癌症并且特别地治疗包括多发性骨髓瘤在内的血液学 恶性 肿瘤 的方法。，下面是聚乙二醇化卡非佐米化合物专利的具体信息内容。
1.一种具有式I结构的聚乙二醇化卡非佐米化合物，
式I
或其药学上可接受的盐，其中
1
R为C1-10烷基或C3-7环烷基；
各R2独立地为C1-6烷基、-OCH3或卤素；
o为选自0、1、2或3的整数；
连接体为具有以下结构的部分
3
其中R为H或CH3；
n为选自1、2、3或4的整数；
p为选自0、1、2、3或4的整数；
q为选自1、2、3、4、5、6、7、8或9的整数；
r为选自0、1、2、3、4或5的整数；和
PEG为具有介于约500至约20,000范围内的分子量的聚乙二醇聚合物部分。
2.如权利要求1所述的化合物，其中R1为C1-10烷基。
3.如权利要求1和2中任一项所述的化合物，其中各o为0或1并且R2为CH3或卤素。
4. 如权利要求1、2和3中任一项所述的化合物，其中各o为0或1并且R2为CH3或F。
5.如权利要求1、2、3和4中任一项所述的化合物，其中所述连接体为具有以下结构的部分
其中R3为H或CH3；
q为选自1、2、3、4或5的整数；和
r为选自0、1、2、3或4的整数。
6.如权利要求1、2、3、4和5中任一项所述的化合物，其中所述连接体为其中R3为H或CH3；
q为4；和
r为2。
1
7. 如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中R为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基或庚基。
8. 如权利要求1、2、3、4、5、6和7中任一项所述的化合物，其中
R1为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基或庚基；并且所述连接体为。
9.如权利要求1所述的聚乙二醇化卡非佐米化合物，其具有式II结构
式II
其中
R1为C1-10烷基或C3-7环烷基；
R2为C1-6烷基、-OCH3或卤素；
连接体为具有以下结构的部分
其中R3为H或CH3；
n为选自1、2、3或4的整数；
p为选自0、1、2、3或4的整数；
q为选自1、2、3、4、5、6、7、8或9的整数；
r为选自0、1、2、3、4或5的整数；
X为选自氯化物、硫酸氢盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、烷基-磺酸盐或芳基-磺酸盐的抗衡离子盐；和
PEG为具有介于约2000至约20,000范围内的分子量的聚乙二醇聚合物部分。
10.如权利要求9所述的化合物，其中R1为C1-10烷基。
11.如权利要求9和10中任一项所述的化合物，其中R2为H、CH3或卤素。
12. 如权利要求9、10和11中任一项所述的化合物，其中R2为H、CH3或F。
13.如权利要求9、10、11和12中任一项所述的化合物，其中所述连接体为具有以下结构的部分
其中R3为H或CH3；
q为选自1、2、3、4或5的整数；和
r为选自0、1、2、3或4的整数。
14.如权利要求9-13中任一项所述的化合物，其中所述连接体为
其中R3为H或CH3；
q为4；和
r为2。
1
15. 如权利要求9-14中任一项所述的化合物，其中R为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基或庚基。
16. 如权利要求9-15中任一项所述的化合物，其中
R1为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基或庚基；并且所述连接体为
。
17.如权利要求1-16中任一项所述的化合物，其具有以下结构
。
18.如权利要求1-16中任一项所述的化合物，其中所述PEG具有介于约2K至约20K范围内的重量。
19.如权利要求1-16中任一项所述的化合物，其中所述PEG具有2K、3K、5K或20K的重量。
20.如权利要求1-16中任一项所述的化合物，其为包含选自氯化物阴离子、硫酸氢盐阴离子、硫酸盐阴离子、硝酸盐阴离子、磷酸盐阴离子、烷基-磺酸盐阴离子或芳基-磺酸盐阴离子的抗衡阴离子的药学上可接受的盐。
21.如权利要求20所述的化合物，其中所述抗衡阴离子为氯化物阴离子或烷基-磺酸盐阴离子。
22.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-21中任一项所述的化合物和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
23.如权利要求22所述的药物组合物，其口服或通过输注或注射施用。
24.一种治疗多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的如权利要求1-20中任一项所述的化合物或如权利要求22-23中任一项所述的组合物。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述多发性骨髓瘤为复发性、难治性或复发性并且难治性多发性骨髓瘤。
26. 如权利要求24所述的方法，其中所述多发性骨髓瘤为新近经诊断的多发性骨髓瘤。
27.一种制备根据权利要求1-16中任一项所述的化合物的方法，所述方法包括以下步骤
其中X-为选自由氯化物阴离子、硫酸氢盐阴离子、硫酸盐阴离子、硝酸盐阴离子、磷酸盐阴离子、烷基-磺酸盐阴离子或芳基-磺酸盐阴离子组成的组的抗衡离子盐，并且PEG具有介于约2K至约20K范围内的重量，以制备式I化合物。
聚乙二醇化卡非佐米化合物
技术领域
背景技术
[0003] 多发性骨髓瘤(MM)为源于浆细胞的进行性并且恶性赘瘤类型的癌症。其特征在于骨髓内恶性浆细胞的异常积聚，并且其占所有血液学癌症的大约13％(Palumbo和Anderson,2011)。在美国，在2015年预期约26,850个新病例经诊断患有MM，并且预期约11,
240人死于所述疾病(ACS,2015)。在美国，MM的发病率已归因于一般人群的增加的预期寿命而稳定地增加(Warren等人,2013)。所述疾病最通常影响老年人群，其中中值发病年龄大约为69岁(Howlander等人,2013；ACS,2015)。
240人死于所述疾病(ACS,2015)。在美国，MM的发病率已归因于一般人群的增加的预期寿命而稳定地增加(Warren等人,2013)。所述疾病最通常影响老年人群，其中中值发病年龄大约为69岁(Howlander等人,2013；ACS,2015)。
[0004] MM管理的治疗目标在于提供症状减轻、实现疾病控制和提供延长缓解(Kurtin,2013)。惯常地，高剂量化学治疗剂(美法仑、长春新碱、环磷酰胺、阿霉素、脂质体阿霉素、苯达莫司汀)、随后自体干细胞移植(ASCT)的组合已用于治疗年轻、初治和体检合格患者(不足65岁)(Palumbo等人,2011)。年龄、合并症病况和老年医学评估为决定患者有资格耐受高剂量疗法(HDT)、随后ASCT的主要准则(Palumbo等人,2014)。关于无资格用于HDT和ASCT的老年患者，美法仑加上强体松已为数十年来的标准疗法(Palumbo等人,2011； 等
人,2012)。在最近十年期间，MM的治疗流程经历了通过引入新颖免疫调节剂(如沙利度胺、来那度胺和泊马度胺)和靶向蛋白酶体抑制剂(硼替佐米和卡非佐米)实现的范例改变
(Richardson等人,2007；Dmoszyńska,2008；Gupta等人,2013)。
人,2012)。在最近十年期间，MM的治疗流程经历了通过引入新颖免疫调节剂(如沙利度胺、来那度胺和泊马度胺)和靶向蛋白酶体抑制剂(硼替佐米和卡非佐米)实现的范例改变
(Richardson等人,2007；Dmoszyńska,2008；Gupta等人,2013)。
[0005] 卡非佐米为选择性地并且不可逆地结合于组成性蛋白酶体和免疫蛋白酶体的四肽环氧酮蛋白酶体抑制剂。更特别地，所述环氧酮亲电子弹头结合于所述蛋白酶体蛋白的β
5次单元的催化性苏氨酸残基。CFZ充分耐受可接受的毒性概况。卡非佐米、多形形式、制造方法、制剂、其用途和其他卡非佐米属性描述于US20050245435、US20140105921和PCT公布WO2006017842、WO2009045497、WO2014169897、WO2013169282、WO2014011695、
WO2006063154、WO2014015016和WO2010048298中，所述文献的各说明书由此以引用的方式整体并入本文中。
5次单元的催化性苏氨酸残基。CFZ充分耐受可接受的毒性概况。卡非佐米、多形形式、制造方法、制剂、其用途和其他卡非佐米属性描述于US20050245435、US20140105921和PCT公布WO2006017842、WO2009045497、WO2014169897、WO2013169282、WO2014011695、
WO2006063154、WO2014015016和WO2010048298中，所述文献的各说明书由此以引用的方式整体并入本文中。
[0006] 卡非佐米已在具有复发性并且难治性MM的患者和新近经诊断患有MM的患者中显示振奋人心的反应率。为此，卡非佐米最初在2012年7月获批 作为单一试剂疗
法用于治疗具有复发性并且难治性MM的患者。最近，Kyprolis获批与来那度胺和地塞米松组合(2015年7月)并且与地塞米松组合(2016年1月)用于治疗已接受第一线至第三线疗法
的具有复发性并且难治性MM的患者。关于卡非佐米的获批治疗方案在于通过输注经短暂10分钟时期或经较慢、较长30分钟持续时间将其施用于患者。这一输注是在28天周期中，每周连续2天发生，持续连续三周。因此，为了遵守这一治疗方案，患者需要每周两次在连续日子驱车或乘车至授权药物施用中心，如医生办公室、诊所或医院，其中卡非佐米可适当地并且安全地经施用。对一些患者而言，此举可为不方便或不实际的，或可简单地为负担，从而增加对开立处方的卡非佐米治疗方案的完整并且完全过程的顺应性降低或减少的可能性，或甚至完全无顺应性。
法用于治疗具有复发性并且难治性MM的患者。最近，Kyprolis获批与来那度胺和地塞米松组合(2015年7月)并且与地塞米松组合(2016年1月)用于治疗已接受第一线至第三线疗法
的具有复发性并且难治性MM的患者。关于卡非佐米的获批治疗方案在于通过输注经短暂10分钟时期或经较慢、较长30分钟持续时间将其施用于患者。这一输注是在28天周期中，每周连续2天发生，持续连续三周。因此，为了遵守这一治疗方案，患者需要每周两次在连续日子驱车或乘车至授权药物施用中心，如医生办公室、诊所或医院，其中卡非佐米可适当地并且安全地经施用。对一些患者而言，此举可为不方便或不实际的，或可简单地为负担，从而增加对开立处方的卡非佐米治疗方案的完整并且完全过程的顺应性降低或减少的可能性，或甚至完全无顺应性。
[0007] 卡非佐米在人类中快速地代谢并且清除。卡非佐米(一种小型四肽化合物)在人类中展现约60分钟或更短的体内短暂半衰期。一种卡非佐米清除机制是经由肝血流，导致卡非佐米的相对简短半衰期。具有短暂半衰期或快速清除的药物产品一般来说倾向于展现降低的靶标覆盖，导致减少和/或缩短的生物抑制活性。为了克服所述不足，典型地施用额外药物以在生物作用位点处提供更多药物和延长功效。因此，卡非佐米的快速清除和每周两次给药频率为功效、递送和/或患者顺应性的可能改进留下空间。
[0008] 目前获批的卡非佐米 为包含磺丁基醚β环糊精(SBECD)和柠檬酸钠缓冲液的无菌冻干制剂。所述冻干物用无菌水复原，并且输注或注射至患者中。所述SBECD赋形剂主要充当卡非佐米的增溶添加剂，并且与卡非佐米形成复合物，由此改进卡非佐米水溶性。
[0009] 史实已披露，解决药物产品的弱点的尝试已导致制备这些医药化合物的替代形式，包括产生前药型式，以尝试增强其药物pK和/或PD性质。例如，Greenwald等人公开了含胺化合物的前药(J.Med.Chem.,1999,42,3657-3667)。WO2005063777公开了用于治疗肺部发炎的磷酸苯甲酯和经取代磷酸苯甲酯前药。WO20090152160公开了用于治疗动脉高血压的卡巴前列环素和前列环素前药。美国专利公布号20040100225公开了伊马替尼的酰氧基甲基前药 另外，PCT公布WO2011084846公开了利培酮的酰氧基甲基前药。这些
前药公开内容教导了烷基-酰氧基甲基连接的前药。另一实例美国专利申请公布号
US20140105921描述了卡非佐米和其他环氧酮蛋白酶体抑制剂前药，所述前药具有连接所述抑制剂至聚乙二醇单元(PEG)的酰氧基甲基连接体。然而，已发现这些卡非佐米前药化合物在体内代谢期间释放亚甲基醌副产物，所述副产物可潜在地有毒并且可提供安全风险。
为此，将需要鉴别卡非佐米的替代形式和/或替代方式以递送活性药物成分卡非佐米至患者，同时保持或可能改进目前获批卡非佐米治疗的功效和/或安全性。
前药公开内容教导了烷基-酰氧基甲基连接的前药。另一实例美国专利申请公布号
US20140105921描述了卡非佐米和其他环氧酮蛋白酶体抑制剂前药，所述前药具有连接所述抑制剂至聚乙二醇单元(PEG)的酰氧基甲基连接体。然而，已发现这些卡非佐米前药化合物在体内代谢期间释放亚甲基醌副产物，所述副产物可潜在地有毒并且可提供安全风险。
为此，将需要鉴别卡非佐米的替代形式和/或替代方式以递送活性药物成分卡非佐米至患者，同时保持或可能改进目前获批卡非佐米治疗的功效和/或安全性。
发明内容
[0010] 本发明提供向患者递送治疗性抗癌益处、同时维持可相当或较长卡非佐米血浆浓度和蛋白酶体暴露的新颖聚合物卡非佐米化合物，即卡非佐米的经修饰结构。为此，这些聚合物卡非佐米化合物提供可与目前获批卡非佐米环糊精IV制剂的蛋白酶体抑制活性相当的蛋白酶体抑制活性。
[0011] 特别地，本发明提供聚乙二醇化卡非佐米化合物，其具有改进水溶性，并且其适用于治疗多种类型的癌症，包括而不限于多发性骨髓瘤。更特别地，此处所提供的聚乙二醇化化合物维持或展现合适生物可用性并且降低或完全地消除对如磺丁基醚-β-环糊精的增溶赋形剂或试剂的需求。本发明进一步提供一种制备所述聚乙二醇化卡非佐米化合物的方法、包含所述化合物的药物组合物和使用所述化合物和组合物治疗多种形式的癌症(如多发性骨髓瘤)的方法。
[0012] 在本发明的一方面，本文所述的聚乙二醇化卡非佐米化合物包括一种或多种共价连接的PEG部分，所述部分(i)当与不含所述聚合物部分的相应获批卡非佐米产品相比时可向卡非佐米赋予增强的溶解性、渗透性、药物动力学(pK)和/或药效学(PD)性质；和(ii)在施用于个体之后可体内裂解或去除，由此进一步提供游离卡非佐米，所述卡非佐米已证明安全性和功效性能以治疗多种癌症，包括而不限于多发性骨髓瘤。
[0013] 由本发明提供的聚乙二醇化卡非佐米化合物进一步提供潜在益处，包括而不限于当与目前获批卡非佐米产品相比时延长释放从而允许降低的给药频率、较低C最大和因而可能降低副作用。本发明化合物的改进安全概况还可由增强的水溶性引起，所述水溶性可能促进目前获批的输注施用模式的替代施用模式，如皮下施用。本发明的聚乙二醇化卡非佐米化合物的经修饰pK和/或生物分布概况可导致治疗癌症的改进功效，所述癌症包括而不限于多发性骨髓瘤和实体肿瘤。此外，本发明的聚乙二醇化卡非佐米化合物提供具有潜在改进的化学和温度稳定性、较低给药体积和消除冻干步骤(用于目前获批卡非佐米药物产品的制造程序的一部分)的潜力的配制选项。附图说明
[0014] 图1为通过人类血浆中数种所示例的聚乙二醇化卡非佐米化合物与游离卡非佐米的比率产生的曲线图(代表人类pK)；
[0015] 图2为反映大鼠血浆中的代表性聚乙二醇化卡非佐米化合物的pK的图；
[0017] 图4为本发明的实施例13、26和34的平均卡非佐米血浆浓度随时间的图示说明；
[0019] 图6为来自图5中所说明的研究的小鼠存活的图示说明；
[0020] 图7为说明在小鼠异种移植物癌症模型中实施例13对CFZ-磺丁基醚β环糊精制剂的第二功效研究的图；
[0021] 图8为实施例23的NMR谱图；
[0022] 图9为卡非佐米的细胞CT-L活性的图；
[0023] 图10为化合物实施例5的细胞CT-L活性的图；
[0024] 图11为化合物实施例35的细胞CT-L活性的图；
[0025] 图12为化合物实施例36的细胞CT-L活性的图；
[0026] 图13为化合物实施例37的细胞CT-L活性的图；
[0027] 图14为化合物实施例38的细胞CT-L活性的图；和
[0028] 图15为化合物实施例35和36的体内CT-L活性的图。
具体实施方式
[0029] 本发明提供新颖聚乙二醇化卡非佐米化合物、包含所述化合物的药物组合物、制备所述化合物的方法和所述化合物和包括所述化合物的组合物用于治疗癌症的用途，包括治疗血液学恶性肿瘤(如多发性骨髓瘤、淋巴瘤、白血病)和治疗如实体肿瘤的其他癌症。特别地，聚乙二醇(PEG)连接的卡非佐米的聚合物单元具有可与目前获批IV施用的(卡非佐米)相当或改进的多种药物动力学(pK)和/或药效学(PD)性质。
[0030] 卡非佐米为尤其描述于美国专利号7,417,042和7,737,112中的环氧酮蛋白酶抑制剂。本发明所述的聚乙二醇化卡非佐米化合物(i)一般赋予相对于不含所述PEG部分的游离药物卡非佐米增强的溶解性、渗透性、pK和/或PD性质；和(ii)可体内裂解，由此释放自由活性药物卡非佐米。在由本发明提供的实施方案中，卡非佐米的N端“帽”(例如，N-吗啉基帽)转化为季盐(例如，通过添加N-酰氧基苯基甲基)。在一些实施方案中，所述季盐含有PEG部分。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化化合物可通过pH改变和/或酶裂解，所述酶如但不限于酯酶、细胞色素P450、磷酸二酯酶、磷酰胺酶、磷酸酶和DT-黄递酶、或其任何组合。在一些实施方案中，所述PEG为线性PEG。在一些实施方案中，所述PEG为双官能PEG，其可结合每个PEG 1-2种化合物。在一些实施方案中，所述PEG为四臂PEG，其可结合每个PEG 1-4种化合物。在一些实施方案中，所述PEG为具有六聚甘油核心的八臂PEG，其可结合每个PEG 1-8种化合物。在一些实施方案中，所述PEG为具有三新戊四醇核心的八臂PEG，其可结合每个PEG 1-8种化合物。在一些实施方案中，所述PEG为分支两臂PEG。在一些实施方案中，所述PEG为分支四臂PEG。另外，所述化合物可进一步包括增溶剂、渗透增强剂、遮蔽剂、巨分子载体、靶向部分和改进半衰期和疾病特异性的生物制剂，其直接地连接于所述化合物或经由间隔剂部分间接地连接。
[0031] 术语“方面”和实施方案”在本文中可互换使用。
[0032] 在本发明的方面1中，本发明提供一种具有式I结构的聚乙二醇化卡非佐米化合物[0033]
[0034] 或其药学上可接受的盐，其中
[0035] R1为C1-10烷基或C3-7环烷基；
[0036] 各R2独立地为C1-6烷基、-OCH3或卤素；
[0037] o为选自0、1、2或3的整数；
[0038] 连接体为具有以下结构的部分
[0039]
[0040] 其中R3为H或CH3；
[0041] n为选自1、2、3或4的整数；
[0042] p为选自0、1、2、3或4的整数；
[0043] q为选自1、2、3、4、5、6、7、8或9的整数；
[0044] r为选自0、1、2、3、4或5的整数；和
[0045] PEG为具有介于约500至约20,000范围内的分子量的聚乙二醇聚合物部分。
[0046] 在本发明的方面1a中，本发明提供一种具有式I结构的聚乙二醇化卡非佐米化合物
[0047]
[0048]
[0049] 或其药学上可接受的盐，其中
[0050] R1为C1-10烷基或C3-7环烷基；
[0051] 各R2独立地为C1-6烷基、-OCH3或卤素；
[0052] o为选自0、1、2或3的整数；
[0053] 连接体为具有以下结构的部分
[0054]
[0055] 其中R3为H或CH3；和
[0056] p为选自0、1、2、3或4的整数；
[0057] n为选自1、2、3或4的整数；和
[0058] PEG为具有介于约500至约20,000范围内的分子量的聚乙二醇聚合物部分。
[0059] 在本发明的方面2中，本发明提供具有式II结构的方面1的聚乙二醇化卡非佐米化合物
[0060]
[0061] 其中
[0062] R1为C1-10烷基或C3-7环烷基；
[0063] R2为C1-6烷基、-OCH3或卤素；
[0064] 连接体为具有以下结构的部分
[0065]
[0066] 其中R3为H或CH3；
[0067] n为选自1、2、3或4的整数；
[0068] p为选自0、1、2、3或4的整数；
[0069] q为选自1、2、3、4、5、6、7、8或9的整数；
[0070] r为选自0、1、2、3、4或5的整数；
[0072] PEG为具有介于约2000至约20,000范围内的分子量的聚乙二醇聚合物部分。
[0073] 在本发明的方面3中，本发明提供方面1、1a和2的化合物，其中R1为C1-10烷基。
[0074] 在本发明的方面4中，本发明提供方面1、1a、2和3中任一者的化合物，其中各R2独立地为H、CH3或卤素。
[0075] 在本发明的方面5中，本发明提供方面1、1a、2、3和4中任一者的化合物，其中各R2独立地为H、CH3、Cl或F。
[0076] 在本发明的方面5a中，本发明提供方面1、1a、2、3和4中任一者的化合物，其中各R2独立地为H、CH3或F。
[0077] 在本发明的方面6中，本发明提供方面1、1a、2、3、4和5中任一者的化合物，其中所述连接体为具有以下结构的部分
[0078]
[0079] 其中R3为H或CH3；
[0080] q为选自1、2、3、4或5的整数；和
[0081] r为选自0、1、2、3或4的整数。
[0082] 在本发明的方面6a中，本发明提供方面1、1a、2、3、4和5中任一者的化合物，其中所述连接体为具有以下结构的部分
[0083]
[0084] 其中R3为H或CH3。
[0085] 在本发明的方面7中，本发明提供方面1、1a、2、3、4、5和7中任一者的化合物，其中所述连接体为
[0086]
[0087] 其中R3为H或CH3；
[0088] q为4；和
[0089] r为2。
[0090] 在本发明的方面7a中，本发明提供方面1、1a、2、3、4、5和7中任一者的化合物，其中所述连接体为
[0091]
[0092] 其中R3为H或CH3。
[0093] 在本发明的方面8中，本发明提供方面1、1a、2、3、4、6、6a、7和7a中任一者的化合物，其中R3为H。
[0094] 在本发明的方面9中，本发明提供方面1-8中任一者的化合物，其中R1为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基或庚基。
[0095] 在本发明的方面10中，本发明提供方面1-9中任一者的化合物，其中R1为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基或庚基；并且所述连接体为
[0096]
[0097] 在本发明的方面10a中，本发明提供方面1-9中任一者的化合物，其中R1为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基或庚基；并且所述连接体为
[0098]
[0099] 应注意在方面1、1a、2和方面3-10中，术语“或其药学上可接受的盐”可包括季氮阳离子电荷的抗衡离子盐，如方面2的式II中所说明者，或下文方面11-24中所说明的那些盐。进一步，应注意预期术语“方面1-X中任一者”还包括本文所公开的1-X的所有子方面，包括而不限于子方面1a、5a、6a、7a和10a。
[0100] 在本发明的方面11中，本发明提供根据方面1-10中任一者的聚乙二醇化卡非佐米化合物，其具有以下结构
[0101]
[0102] 其中R1为C1-10烷基；
[0103] R2为C1-6烷基、-OCH3或卤素；
[0104] R3为H或CH3；
[0105] X-为选自氯化物阴离子和烷基-磺酸盐阴离子的抗衡阴离子；
[0106] n为4；和
[0107] PEG为具有介于约2000至约20,000范围内的分子量的聚乙二醇聚合物部分。
[0108] 在本发明的方面12中，本发明提供方面1-11中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0109] 其中X为卤化物、磺酸盐或烷基-磺酸盐抗衡离子盐。
[0110] 在本发明的方面12a中，本发明提供方面1-11中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0111] 其中X为卤化物、磺酸盐或烷基-磺酸盐抗衡离子盐。
[0112] 在本发明的方面13中，本发明提供方面1-11中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0113] 其中X为卤化物、磺酸盐或烷基-磺酸盐抗衡离子盐。
[0114] 在本发明的方面14中，本发明提供方面1-11中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0115]
[0116] 在本发明的方面15中，本发明提供方面1和2中任一者的化合物，其中R1为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基或庚基；
[0117] 各R2独立地为CH3或卤素；
[0118] 连接体为具有以下结构的部分
[0119]
[0120] 其中R3为H或CH3；和
[0121] PEG为具有2000、3000、5000或20,000的分子量的聚乙二醇聚合物部分。
[0122] 在本发明的方面16中，本发明提供方面15的化合物，其中R1为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基或庚基；
[0123] 各R2独立地为CH3；
[0124] 连接体为具有以下结构的部分
[0125]
[0126] 其中R3为H；和
[0127] PEG为具有3000、5000或20,000的分子量的聚乙二醇聚合物部分。
[0128] 在本发明的方面17中，本发明提供方面1-16中任一者的化合物，其中所述化合物为下文表2中所述的如实施例1-34所表示的个别化合物，或其药学上可接受的盐。
[0129] 在本发明的方面18中，本发明提供方面1-17中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0130]
[0131]
[0132] 或其药学上可接受的盐。
[0133] 在本发明的方面19中，本发明提供方面1-18中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0134]
[0135] 在本发明的方面19a中，本发明提供方面1-18中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0136]
[0137] 在本发明的方面20中，本发明提供方面1-18中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0138]
[0139] 在本发明的方面21中，本发明提供方面1-18中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0140]
[0141] 在本发明的方面22中，本发明提供方面1-18中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0142]
[0143] 在本发明的方面23中，本发明提供方面1-18中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0144]
[0145] 在本发明的方面24中，本发明提供方面1-18中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0146]
[0147] 在本发明的方面25中，本发明提供方面1-18中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0148]
[0149] 在本发明的方面26中，本发明提供方面1-18中任一者的化合物，其中所述化合物为
[0150]
[0151] 在本发明的方面27中，本发明提供方面1-16中任一者的化合物，其中PEG具有介于约2K至约20K范围内的重量。
[0152] 在本发明的方面28中，本发明提供方面1-16中任一者的化合物，其中PEG具有3K、5K或20K的重量。
[0153] 在本发明的方面29中，本发明提供方面1-16中任一者的化合物，所述化合物为包含选自氯化物阴离子、硫酸氢盐阴离子、硫酸盐阴离子、硝酸盐阴离子、磷酸盐阴离子、烷基-磺酸盐阴离子或芳基-磺酸盐阴离子的抗衡阴离子的药学上可接受的盐。
[0154] 在本发明的方面30中，本发明提供方面29的化合物，其中所述抗衡阴离子为氯化物阴离子或烷基-磺酸盐阴离子。
[0155] 在本发明的方面31中，本发明提供方面29的化合物，其中所述抗衡阴离子为氯化物阴离子或甲烷-磺酸盐阴离子。
[0156] 在本发明的方面32中，本发明提供一种药物组合物，其包含根据方面1-26中任一者的化合物和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
[0157] 在本发明的方面33中，本发明提供方面32的药物组合物，其口服施用或可通过输注或注射肠胃外施用。
[0158] 在本发明的方面34中，本发明提供根据方面32-33中任一者的药物组合物，其包含一种或多种根据方面1-26中任一者的化合物以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
[0159] 在本发明的方面35中，本发明提供根据方面32-34中任一者的药物组合物，其包含至少两种根据方面1-28中任一者的化合物以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
[0160] 在本发明的方面36中，本发明提供一种治疗多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的方面1-31中任一者的化合物或方面32-35中任一者的药物组合物。
[0161] 在本发明的方面37中，本发明提供方面34的方法，其中所述多发性骨髓瘤为复发性、难治性或复发性并且难治性多发性骨髓瘤。
[0162] 在本发明的方面38中，本发明提供方面36的方法，其中所述多发性骨髓瘤为新近诊断的多发性骨髓瘤。
[0163] 在本发明的方面39中，本发明提供一种制备根据方面1-16中任一者的化合物的方法，所述方法包括以下步骤
[0164]
[0165] 其中X-为选自由氯化物阴离子、硫酸氢盐阴离子、硫酸盐阴离子、硝酸盐阴离子、磷酸盐阴离子、烷基-磺酸盐阴离子或芳基-磺酸盐阴离子组成的组的抗衡离子盐，并且PEG具有介于约2K至约20K范围内的重量，以制备式I化合物
[0166] 在本发明的方面40中，本发明提供一种制备根据方面1的式I化合物的方法，所述方法包括以下步骤
[0167]
[0168] 其中
[0169] X-为氯化物阴离子、硫酸氢盐阴离子、硫酸盐阴离子、硝酸盐阴离子、磷酸盐阴离子、烷基-磺酸盐阴离子或芳基-磺酸盐阴离子的抗衡离子盐；
[0170] PEG具有介于约2K至约20K范围内的重量；和
[0171] R1、R2、R4和o如方面1中所定义，以制备式I化合物。
[0172] 在其他方面中，本发明提供具有式(SM)m-PEG的化合物或其药学上可接受的盐，其中各SM为独立地选择的如上文和本文中无论何处所定义的式I或式II化合物并且在n个位置处连接于规定重量的PEG，其中n为2-10(例如在方面14的化合物中n＝4；还参见下文表I)。
[0174] 在本发明的一些方面中，本文所述的化合物当与所述相应环氧酮蛋白酶抑制剂相比时本身展现较低治疗活性并且当与所述相应环氧酮蛋白酶抑制剂相比时体内展现增强的溶解性、渗透性、药物动力学和/或药效学性质。
[0175] 在本发明的一些方面中，所述聚合物部分或聚乙二醇部分通过pH改变和/或酶从卡非佐米活性成分裂解，所述酶如但不限于酯酶、细胞色素P450、磷酸二酯酶、磷酰胺酶、磷酸酶和DT-黄递酶、或其任何组合。
[0176] 在本发明的一些方面中，所述PEG为线性PEG。在本发明的一些方面中，所述PEG为双官能PEG，其可结合每个PEG 1-2种化合物。在本发明的一些方面中，所述PEG为四臂PEG，其可结合每个PEG 1-4种化合物。在本发明的一些方面中，所述PEG为具有六聚甘油核心的八臂PEG，其可结合每个PEG 1-8种化合物。在本发明的一些方面中，所述PEG为具有三新戊四醇核心的八臂PEG，其可结合每个PEG 1-8种化合物。在本发明的一些方面中，所述PEG为分支两臂PEG。在本发明的一些方面中，所述PEG为分支四臂PEG。另外，所述化合物可进一步包括增溶剂、渗透增强剂、遮蔽剂、巨分子载体、靶向部分和改进半衰期和疾病特异性的生物制剂，其直接地连接于所述化合物或经由间隔剂部分间接地连接。
[0177] 虽然不希望受理论束缚，但有可能本发明化合物可暂时地遮蔽或部分遮蔽蛋白酶抑制活性，直至所述聚乙二醇化连接部分已裂解，从而释放游离卡非佐米(经测试并且监管批准的活性药物部分)至全身循环中，这可降低不需要的副作用，所述副作用可在其他方面与多种施用途径有关。为此，本发明的聚乙二醇化卡非佐米化合物可充当卡非佐米的前药。或者，由于所述聚乙二醇化部分定位于卡非佐米四肽骨架结构的吗啉末端附近，本发明化合物在聚乙二醇裂解之前可很好地具有活性蛋白酶抑制活性。
[0178] 本发明化合物的有益性质还可促进皮下施用并且展现例如超出四小时的卡非佐米半衰期。在本发明的方面41中，本发明化合物的人类血浆半衰期长于0.5h。在本发明的方面42中，所述化合物的人类血浆半衰期在0.5与5h之间。在本发明的方面43中，所述化合物的人类血浆半衰期长于5h。在本发明的方面44中，所述化合物的人类血浆半衰期在5与100h之间。在本发明的方面45中，所述化合物的人类血浆半衰期长于100h。在本发明的方面46中，所述化合物的人类血浆半衰期在100与836h之间。在本发明的方面47中，所述化合物的人类血浆半衰期在200与300h之间。在本发明的方面48中，所述化合物的人类血浆半衰期为约267h。在本发明的方面49中，所述化合物的人类血浆半衰期长达836h。由于延长卡非佐米的半衰期，本发明在用卡非佐米治疗时潜在地改进给药以及患者便利性和顺应性。
[0179] 在本发明的方面50中，本发明提供一种药物组合物，其包括如本文中无论何处所述的PEG卡非佐米化合物和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
[0180] 在本文中稍后描述的本发明的其他方面或实施方案中，提供用于治疗选自由癌症、自体免疫疾病、移植相关病况、神经退行性疾病、纤维变性相关病况、缺血相关病况、感染(病毒性、寄生虫性或原核)和与骨损失有关的疾病组成的组的疾病或病况的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的如本文中无论何处所述的化合物。在进一步方面中，由本发明提供用于治疗患者中的癌症(例如多发性骨髓瘤，例如复发性和/或难治性多发性骨髓瘤)的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的如本文所述的化合物。
[0181] 除非另外规定，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有如本公开所属领域的技术人员通常所理解的相同意义。本文中描述用于本发明的方法和材料；还可使用所属领域中已知的其他合适方法和材料。所述材料、方法和实施例仅为说明性的，并且不意图为限制性的。本文所提及的所有公布、专利申请、专利、序列、数据库入口和其他参考文献均以引用的方式整体并入，就如同此处书写一般。如果有冲突，那么将以本说明书(包括定义)为准。本发明的其他特征和优势将由具体实施方式和权利要求书显而易知。
[0182] 如本文所用，术语“方面”与术语“实施方案”同义使用。
[0183] 定义
[0184] 以下定义应进一步帮助理解如本文所用的术语和本文所述的发明的范围。
[0185] 术语“Cx-y烷基”是指链中含有x至y个碳的经取代或未经取代饱和烃基，包括直链烷基和分支链烷基。术语“卤烷基”是指其中至少一个氢原子由卤基(例如，氟、氯、溴、碘)置换的烷基，例如CH2F、CHF2、三氟甲基和2,2,2-三氟乙基。
[0186] 术语“C2-y烯基”和“C2-y炔基”是指长度和可能取代类似于上文所述的烷基、但分别含有至少一个双键或三键的经取代或未经取代不饱和脂族基团。在一些实施方案中，二价基团亚烯基和亚炔基包括2至12个碳原子。在某些实施方案中，亚烷基和亚炔基包括2至10个碳原子。在某些实施方案中，亚烷基和亚炔基包括2至6个碳原子(例如，2、3、4、5或6个碳原子)。
[0187] 术语“烷氧基”是指其中连接氧的烷基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。“醚”为通过氧共价连接的两个烃。因此，使烷基成为醚的那一烷基的取代基为或类似烷氧基。
[0188] 如本文所用，术语“C3-y环烷基”是指完全饱和、经取代或未经取代环，其中所述环的各原子为碳，并且所述环含有3至γ个碳原子大小。例如，术语C3-7环烷基意图意指含有大约3至7个碳原子大小的碳环。所述环包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基环。这些环可进一步如所规定经取代。
[0189] 术语“癌症”和“癌的”当用于本文中时是指或描述个体中的生理学病况，其特征典型地在于未调节细胞生长。癌症的实例包括而不限于血液学恶性肿瘤或血源性癌症(如多发性骨髓瘤和白血病)，和其他癌症(如癌瘤、淋巴瘤、肉瘤和胚细胞瘤)。所述癌症的更特定实例包括鳞状细胞癌瘤、肺癌、胰脏癌、子宫颈癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、结肠癌瘤和头颈部癌。虽然如本文所用的术语“癌症”不限于所述疾病的任一特定形式，但相信本发明方法将对于个体中在某种程度上已变得抵抗使用抗癌剂(包括而不限于化学治疗剂、抗有丝分裂剂、蒽环类等)的治疗的癌症和对于已在使用所述抗癌剂的治疗后复发的癌症尤其有效。
[0190] 术语“包含”意图为开放式，包括所指示的组分但不排除其他要素。
[0191] 如本文所用的术语或缩写“例如(eg)”或“例如(eg.)”意图意指“例如(example)”。
[0192] 术语“抑制剂”意图描述阻断或降低酶、受体或其他药理学靶标的酶或系统活性的化合物(例如，抑制如suc-LLVY-AMC、Box-LLR-AMC和Z-LLE-AMC的标准荧光肽底物的蛋白水解裂解、抑制20S蛋白酶体的多种催化活性)。抑制剂可以竞争性、无竞争或非竞争性抑制起作用。抑制剂可以可逆地或不可逆地结合，并且因此所述术语包括作为酶的自杀底物的化合物。抑制剂可修饰在酶的活性位点上或附近的一个或多个位点，或其可在酶上别处引起构象改变。术语抑制剂在本文中比科学文献更广泛地使用以便还涵盖其他类别的药理学上或治疗上适用试剂，如激动剂、拮抗剂、刺激剂、辅助因子等。
[0193] 术语“耐药性”和“多重耐药性”当用于本文中时是指已发展和/或抵抗药物的癌细胞。这些术语包括展现极少至无功效或从所述药物的初始剂量下所展现的功效减少的功效的癌细胞。所述癌细胞可抵抗一种药物或不同化学结构的多种药物，所述药物经引导以作用于癌细胞内的不同生物靶标。
[0194] 术语“药学上可接受的盐”涵盖通常用于形成碱金属盐和形成游离酸或游离碱的加成盐的盐。所述盐的性质不关键，只要其为药学上可接受的。所述化合物的合适药学上可接受的酸加成盐可由无机酸或由有机酸制备。所述无机酸的实例包括而不限于盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、碳酸、硫酸和磷酸。有机酸的实例包括而不限于脂族、环脂族、芳族、芳基脂族、杂环、羧酸和磺酸类别的有机酸，其实例为甲酸、乙酸、己二酸、丁酸、丙酸、丁二酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、葡糖醛酸、顺丁烯二酸、反丁烯二酸、丙酮酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸、邻氨苯甲酸、甲磺酸、4-羟基苯甲酸、苯基乙酸、杏仁酸、扑酸(embonic/pamoic)、甲烷磺酸、乙烷磺酸、乙烷二磺酸、苯磺酸、泛酸、2-羟基乙烷磺酸、甲苯磺酸、磺胺酸、环己基氨基磺酸、樟脑酸、樟脑磺酸、二葡糖酸、环戊烷丙酸、十二烷基磺酸、葡糖庚酸、甘油膦酸、庚酸、己酸、2-羟基-乙烷磺酸、烟碱酸、2-萘磺酸、草酸、扑酸(palmoic)、果胶酯酸、过硫酸、2-苯基丙酸、苦味酸、新戊酸、丙酸、丁二酸、酒石酸、硫氰酸、甲磺酸、十一烷酸、硬脂酸、褐藻酸、β-羟基丁酸、水杨酸、半乳糖二酸和半乳糖醛酸。
[0195] 所述化合物的合适药学上可接受的碱加成盐包括而不限于金属盐(如由铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制得的盐)，或由有机碱制得的盐，所述有机碱包括伯胺、仲胺、叔胺和经取代胺，包括环胺，如咖啡因、精氨酸、二乙胺、N-乙基哌啶、组氨酸、葡糖胺、异丙胺、赖氨酸、吗啉、N-乙基吗啉、哌嗪、哌啶、三乙胺、三甲胺。本文所涵盖的所有盐均可通过常规方式由相应化合物通过使例如适当酸或碱与所述化合物反应来制备。
[0196] 如本文所用，术语“蛋白酶体”意图包括免疫和组成性蛋白酶体。
[0197] 术语“难治性”当用于此处时意图指未屈服于、抵抗或非回应于治疗、刺激(疗法)或治愈，包括抵抗多种治疗性治愈剂。“难治性”当用于本文中表征癌症或肿瘤的情形中时意图指所述癌症或肿瘤对使用一种或多种抗癌剂的治疗为非响应性的或具有抵抗或减弱的反应。所述治疗典型地在一段时期内为连续的、延长的和/或重复的，导致所述癌症或肿瘤复发或发展耐性或对于那一极其相同治疗变为难治性。
[0199] 短语“治疗有效”或“治疗有效量”意图定量本发明化合物的量，所述量根据用于欲治疗的病症或病况或美容目的的临床上可接受的标准当作为所需给药方案的一部分施用(至患者，例如人类)时会缓解症状、改善病况、或减慢疾病病况的发作，例如在可应用于任何医学治疗的合理效益/风险比率下。因此，其为本发明化合物可治疗癌症的量，无论所述癌症为多发性骨髓瘤或其他血液学恶性肿瘤或实体肿瘤。
[0200] 如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”是指疗法，包括而不限于治愈性疗法、预防性疗法(prophylactic therapy)和预防性疗法(preventative therapy)并且一般包括以改进或稳定化患者的病况的方式逆转、降低或阻止病况的症状、临床病征和潜在病理学。预防性治疗一般构成完全地预防病症的发作或延迟个体中病症的临床前证据阶段的发作。术语“预防性或治疗性”治疗为公认的并且包括向宿主施用一种或多种本发明组合物。如果其在不需要病况(例如，宿主动物的疾病或其他不需要状态)的临床显现之前、或在所述病况已消退之后施用，那么所述治疗为预防性的(即，其保护宿主免于发展不需要病况)，而如果其在不需要病况的显现之后施用，那么所述治疗为治疗性的(即，其意图减弱、改善或稳定化现有不需要病况或其副作用)。
[0201] 术语“经取代”是指具有置换分子的一个或多个非氢原子上的氢的取代基的部分。应理解“取代”或“经取代”包括暗含限制条件，即所述取代与经取代原子和取代基的允许价态一致，并且所述取代产生稳定化合物，例如所述化合物不会自发地经历如通过重排、环化、消除等导致的转化。如本文所用，术语“经取代”预期包括有机化合物的所有可允许取代基。在一个广泛方面，所述可允许取代基包括有机化合物的无环和环状、分支和未分支、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。所述可允许取代基可为用于适当有机化合物的一者或多者并且相同或不同。出于本公开的目的，如氮的杂原子可具有氢取代基和/或本文所述的有机化合物的满足杂原子价态的任何可允许取代基。取代基可包括例如卤素、羟基、羰基(如羧基、烷氧羰基、甲酰基或酰基)、硫羰基(如硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸酯、膦酸酯、亚膦酸酯、氨基、酰胺基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸酯、磺酸酯、氨磺酰基、磺酰胺基、磺酰基、杂环基、芳烷基或芳族或杂芳族部分。所属领域的技术人员应理解，烃链上取代的部分适当时可本身经取代。
[0202] 如本文所用，术语PEG意图具有其通常理解和传统意义。特别地，PEG为由重复聚(乙二醇)聚合物单元构成的部分，其精确数目确定了其分子量。例如，用于本发明的PEG部分可具有如本文所述以及例如如表I中所示的式A-I所描绘的架构中任一者。这一分子量的单位为道尔顿。因此，预期对如本文(本说明书、权利要求书和摘要)所用的PEG的分子量的提及，例如关于给定PEG的“2K”、“3K”、“5K”和“20K”或“2000”、“3000”、“5000”或“20000”提及分别意指2000道尔顿(或2千道尔顿)、3000道尔顿(或3千道尔顿)、5000道尔顿(或5千道尔顿)和20000道尔顿(或20千道尔顿)PEG重量。此外，如本文所用的“KDa”意指千道尔顿。应理解，表I中的式A、B、C、D、E、F、G、H和I所示的卡非佐米化合物说明本文中经由如本发明所述和定义的连接体共价连接的不同PEG部分。为了帮助理解表I中的各式，
[0203]
[0204] 其中R1和R2如本文中式I和II所定义。抗衡阴离子X-如本文中式I和II所定义。例如，抗衡阴离子X-可为Cl-、HSO4-、SO4-2、NO3-、H2PO4-、烷基/芳基-SO3-，如甲苯磺酸酯(甲苯磺酰基磺酸)、甲磺酸酯(甲烷磺酸)或苯甲酸酯(苯甲基磺酸)阴离子。所述卡非佐米化合物的PEG部分典型地具有在约400道尔顿至约50,000道尔顿范围内的分子量。以下式A-I所说明的化合物的连接体部分还如本文中式I和II所定义。例如，所述连接体可为
[0205]
[0206] 其中R3为H或Me。
[0207] 表I
[0208]
[0209]
[0210] 在实施方案51中，PEG具有大于1kDa的分子量。
[0211] 在实施方案52中，PEG具有约1kDa的分子量。
[0212] 在实施方案53中，PEG具有大于2kDa的分子量。
[0213] 在实施方案54中，PEG具有约2kDa的分子量。
[0214] 在实施方案55中，PEG具有大于5kDa的分子量。
[0215] 在实施方案56中，PEG具有约5kDa的分子量。
[0216] 在实施方案57中，PEG具有大于10kDa的分子量。
[0217] 在实施方案58中，PEG具有约10kDa的分子量。
[0218] 在实施方案59中，PEG具有大于20kDa的分子量。
[0219] 在实施方案60中，PEG具有约20kDa的分子量。
[0220] 在实施方案61中，PEG具有大于30kDa的分子量。
[0221] 在实施方案62中，PEG具有约30kDa的分子量。
[0222] 在实施方案63中，PEG具有大于40kDa的分子量。
[0223] 在实施方案64中，PEG具有约40kDa的分子量。
[0224] 在实施方案65中，PEG具有大于50kDa的分子量。
[0225] 在实施方案66中，在结合于环氧酮蛋白酶抑制剂之前，PEG具有多个反应性官能团(例如，叠氮基)。
[0226] 在一些实施方案中，在结合于环氧酮蛋白酶抑制剂之前，PEG具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个反应性官能团(例如，叠氮基)。
[0227] 本发明的PEG卡非佐米化合物具有结合于卡非佐米活性药物成分(API)的聚乙二醇(PEG)聚合物链。为此，本发明在方面67中提供式I或式II的卡非佐米PEG化合物，其中n为
1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，例如2、3、4、5、6、7、8、9或10。在实施方案68中，n为8。在实施方案
69中，n为4。在实施方案70中，n为2。在实施方案71中，n为1
1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，例如2、3、4、5、6、7、8、9或10。在实施方案68中，n为8。在实施方案
69中，n为4。在实施方案70中，n为2。在实施方案71中，n为1
[0228] 本发明的一般合成和代表性实施例
[0229] 如所述，式I和II中的聚乙二醇化卡非佐米化合物为活性药物成分卡非佐米的可裂解聚合物PEG载体(式I和II)并且体内释放游离卡非佐米。所述增溶性聚合物载体，即所需大小和/或重量的聚乙二醇(PEG)可在市面上购得并且可例如购自ThermoFisher
Scientific、Sigma-Aldrich和聚合物材料的类似商业供货商。所述PEG基团可以多种连接体，包括经由如本文所述的自降解对烷酰基氧基取代的苯甲基连接体附接于呈吗啉环上的季盐形式的卡非佐米。所述连接体含有隐蔽亲核苯酚基团，所述基团在生物或化学触发机制之后变成供电子并且接着起始电子级联，最终导致卡非佐米的释放。增溶性聚合物载体和季盐形成的独特组合导致具有异常高的水溶性的结合物。卡非佐米以酶促方式经由酯酶或以化学方式通过氢氧化物催化的水解从所述结合物释放。应注意，这一PEG结合物单独/本身具活性作为蛋白酶体抑制剂，并且当所述结合物暴露于适当酯酶或略微碱性环境时快速地释放更具活性的药物成分卡非佐米。位移速率可在一定时间范围内通过在式I和II中的位置R2处引入限制酶接近的空间庞大基团、和/或电子密度调节基团而变化。
Scientific、Sigma-Aldrich和聚合物材料的类似商业供货商。所述PEG基团可以多种连接体，包括经由如本文所述的自降解对烷酰基氧基取代的苯甲基连接体附接于呈吗啉环上的季盐形式的卡非佐米。所述连接体含有隐蔽亲核苯酚基团，所述基团在生物或化学触发机制之后变成供电子并且接着起始电子级联，最终导致卡非佐米的释放。增溶性聚合物载体和季盐形成的独特组合导致具有异常高的水溶性的结合物。卡非佐米以酶促方式经由酯酶或以化学方式通过氢氧化物催化的水解从所述结合物释放。应注意，这一PEG结合物单独/本身具活性作为蛋白酶体抑制剂，并且当所述结合物暴露于适当酯酶或略微碱性环境时快速地释放更具活性的药物成分卡非佐米。位移速率可在一定时间范围内通过在式I和II中的位置R2处引入限制酶接近的空间庞大基团、和/或电子密度调节基团而变化。
[0230] 缩写：用于一般流程和实施例中的以下缩写意图意指以下：
[0231] DCM 二氯甲烷(dichloromethane/methylene dichloride)
[0232] DMF 二甲基甲酰胺
[0233] DMSO 二甲亚砜
[0234] EtOAc 乙酸乙酯
[0235] MeOH 甲醇
[0236] mpk 毫克每千克；mg/kg
[0237] RT,rt 室温
[0238] NaCl 氯化钠
[0239] tBuOH 叔丁醇(t-butanol/t-butyl alcohol)
[0240] 用于制备本发明化合物的起始材料卡非佐米描述于PCT公布WO2006017842、WO2009045497、WO2014169897、WO2013169282、WO2014011695、WO2006063154、
WO2014015016、WO2010048298和美国专利号7,714,042和7,737,112中，所述文献的各说明书由此以引用的方式整体并入本文中。
WO2014015016、WO2010048298和美国专利号7,714,042和7,737,112中，所述文献的各说明书由此以引用的方式整体并入本文中。
[0241] 方案1：苯甲基消除季盐的裂解
[0242]
[0243] 所述苯基酯的酶和/或化学水解提供羧酸(II)和酚盐中间物(I)，所述中间物经历快速1,6消除以提供游离卡非佐米和亚甲基醌，所述亚甲基醌保持共价连接于所述增溶性PEG聚合物。已知亚甲基醌为反应性迈克尔受体并且相信其提供与潜在基因毒性有关的风险。在本发明中，亚甲基醌连接体副产物永久连接于所述聚合物可通过防止细胞接近并且降低与血清亲核试剂的反应性而减弱毒性。体内中间物III的最可能命运为与水反应以形成苯甲基醇-聚合物加合物，所述加合物通过排泄快速地从身体去除。
[0244] 方案2：先前描述的卡非佐米-聚合物结合物的裂解
[0245]
[0246] 方案2说明一种用于WO2014011695中所述的卡非佐米聚合物化合物的代谢途径。此处，如上文所说明，所述卡非佐米-聚合物结合物与酯酶相互作用或经受如箭头所示的化学攻击。这一攻击导致在酯水解时释放游离亚甲基醌(上文经封装)。这一亚甲基中间物自由地进一步与细胞亲核试剂反应，其可能导致毒性。本发明的聚乙二醇化卡非佐米化合物避免了如方案1中所述的这一潜在毒性副产物。
[0247] 方案3：两步PEG聚合物结合程序
[0248]
[0249] 由本发明提供的卡非佐米-PEG化合物以两步程序制备，如方案3中所示。卡非佐米首先与经适当取代的对烷酰基氧基取代的苯甲基卤(1)反应以生成季盐中间物(2)。季盐溴化物或碘化物阴离子可经由离子交换树脂交换为药学上可接受的盐离子，如硫酸氢盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸二氢盐或烷基/芳基磺酸盐，以生成中间物(3)。这一中间物便利地附接有适于与互补官能化聚合物试剂(4)反应的反应性基团以提供所需产物5。可在市面上购得大量PEG试剂，呈多种分子量、架构、端基化学和反应性端基(臂)数目(参见表1)。其可直接地与本公开中所述的连接体化学相容或可需要由已知方法进行一些进一步化学操纵。分支链和多臂PEG可提供优于线性PEG的优势，如较高药物负载、改进的稳定性和/或较低配制粘度的潜力。
[0250] 方案4：经由叠氮化物/炔点击化学实现的两步聚合物结合
[0251]
[0252] 方案4说明“点击”化学(如Huisgen 1,3-偶极叠氮化物/炔环加成和氨基氧基/醛肟化)，其归因于高化学产率、无害副产物、大的热力学驱动力和起始材料可用性尤其适用于聚合物和聚合物PEG连接。
[0253] Huisgen 1,3-偶极叠氮化物/炔环加成需要苯甲基经能够与如PEG-叠氮化物(-N3)的叠氮化物官能化聚合物载体反应的炔基(A1-(1-6))取代以生成1,2,3-三唑连接的结合物(A4-(1-6))。所述炔部分可直接连接或经由烷基间隔剂(A1-1)连接，经由醚(A1-2,3)、硫醚、亚砜或砜(A1-4)键连接，或经由酰胺键(A1-5,6)连接。多种叠氮基取代的PEG试剂现可呈多种大小和结构在市面上购得，而且可容易地由任何可购得PEG-醇经由通过甲磺酰化或甲苯磺酰化活化、随后与叠氮化物盐反应而制备。所述环加成反应可使用在市面上可购得的亚铜盐催化剂执行，但更有效地使用铜(II)(例如硫酸铜(II)、甲烷磺酸铜(II))和还原剂(例如，抗坏血酸钠)的混合物执行以原位产生Cu(I)。由于铜(I)在水性环境中并且在氧存在下不稳定，可任选地添加稳定化配体，如三-(苯甲基三唑基甲基)胺(TBTA)、三(3-羟基丙基三唑基甲基)胺(THPTA)、2-[4-({双[(1-叔丁基-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基]氨基}甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]乙醇硫酸氢酯(BTTES)或2-[4-({双[(1-叔丁基-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基]氨基}甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]乙酸(BTTAA)。所述反应可在RT下或在高温下在多种溶剂、和水与多种可混溶有机溶剂(包括醇、DMSO、DMF、tBuOH和丙酮)的混合物中进行。最终PEG-卡非佐米产物(A4-(1-6))可便利地通过用水或盐水稀释反应混合物、用如DCM的有机溶剂萃取、和从异丙醇或乙醚/异丙醇混合物再沉淀直至获得所需纯度的产物而经处理。中间物或产物暴露于处理程序期间的阴离子(如盐水中的氯化物阴离子)典型地导致最终产物中的阴离子的混合物，并且可必需最终阴离子交换树脂处理以确保产物盐均质性。
[0254] 中间物季卤化物盐(溴化物或碘化物，(A2-(1-6))可转化为不用如甲烷磺酸盐、硫酸氢盐或硫酸盐的铜(I)催化剂沉淀的阴离子(A3-(1-6))以实现高反应产率。另外，可需要交换卤化物阴离子以防止环氧化物开环和可能形成溴醇或碘醇副产物。
[0255] 方案4A1-2
[0256]
[0257] 合成乙酸4-(溴甲基)-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(方案4中的中间物A1-2)
[0258] 步骤1：4-羟基-3-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(1)
[0259] 在20℃下向NaOtBu于DMF(150mL)中的混合物中添加含3,4-二羟基苯甲醛(10g，72.5mmol)的DMF(50mL)。所述混合物用冰浴冷却并且搅拌，同时逐份添加3-溴丙-1-炔
(8.62g，72.5mmol)，试图保持内部温度在15-20℃之间。所述反应混合物在RT下搅拌2小时。
所述混合物用水(300mL)稀释并且用EtOAc(200mL×3)萃取。组合的有机层用水洗涤以去除DMF，经无水Na2SO4干燥，并且浓缩为棕色固体。残留物重复地从DCM/石油醚(30mL/500mL)结晶以提供化合物1。1H NMR(CDCl3,300MHz,):δ9.87(s,1H),7.54(d,J＝1.2Hz,1H),7.49
(dd,J1＝1.5Hz,J2＝8.1Hz,1H),7.09(d,J＝8.1Hz,1H),4.82(m,2H),2.62(m,1H)。
(8.62g，72.5mmol)，试图保持内部温度在15-20℃之间。所述反应混合物在RT下搅拌2小时。
所述混合物用水(300mL)稀释并且用EtOAc(200mL×3)萃取。组合的有机层用水洗涤以去除DMF，经无水Na2SO4干燥，并且浓缩为棕色固体。残留物重复地从DCM/石油醚(30mL/500mL)结晶以提供化合物1。1H NMR(CDCl3,300MHz,):δ9.87(s,1H),7.54(d,J＝1.2Hz,1H),7.49
(dd,J1＝1.5Hz,J2＝8.1Hz,1H),7.09(d,J＝8.1Hz,1H),4.82(m,2H),2.62(m,1H)。
[0260] 步骤2：乙酸4-甲酰基-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(2)
[0261] 在0℃下向化合物1(10.00g，56.82mmol)于DCM(150mL)中的溶液中添加Et3N(11.48g，113.64mmol)、随后乙酰氯(5.35g，68.18mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌2小时。所述混合物用饱和2N HCl水溶液(100mL)和水(50mL)洗涤，经无水MgSO4干燥，并且浓缩以提供化合物2，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤中。1H NMR(CDCl3,400MHz):δ
9.96(s,1H),7.63(d,J＝1.6Hz,1H),7.54(dd,J1＝1.6Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.25(d,J＝
8.0Hz,1H),4.79(d,J＝2.4Hz,2H),2.57(t,J＝2.4Hz,1H),2.35(s,3H)。
9.96(s,1H),7.63(d,J＝1.6Hz,1H),7.54(dd,J1＝1.6Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.25(d,J＝
8.0Hz,1H),4.79(d,J＝2.4Hz,2H),2.57(t,J＝2.4Hz,1H),2.35(s,3H)。
[0262] 步骤3：乙酸4-(羟基甲基)-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(3)
[0263] 在0℃下分成小份向化合物2(12.00g，55.05mmol)于DCM/MeOH(150mL/15mL)中的溶液中添加NaBH4(3.06g，82.57mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌30min。所述混合物通过丙酮(5mL)淬灭，并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1)纯化以提供
1
化合物3。H NMR(CDCl3,400MHz):δ7.16(d,J＝1.6Hz,1H),7.04(d,J＝8.0Hz,1H),6.98(dd,J1＝1.6Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.72(d,J＝2.4Hz,2H),4.69(s,2H),2.53(t,J＝2.4Hz,1H),
2.32(s,3H)。
1
化合物3。H NMR(CDCl3,400MHz):δ7.16(d,J＝1.6Hz,1H),7.04(d,J＝8.0Hz,1H),6.98(dd,J1＝1.6Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.72(d,J＝2.4Hz,2H),4.69(s,2H),2.53(t,J＝2.4Hz,1H),
2.32(s,3H)。
[0264] 步骤4：乙酸4-(溴甲基)-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(4)
[0265] 在0℃下向化合物3(11.50g，52.27mmol)于DCM(150mL)中的溶液中添加PPh3(20.50g，78.41mmol)和NBS(11.04g，62.73mmol)。所述反应混合物在室温下搅拌0.5小时。
浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1)纯化以提供化合物4(7.82g，53％产率)。1H NMR(CDCl3,400MHz):δ7.14(m,1H),7.02(m,2H),4.73(d,J＝2.4Hz,
2H),4.48(s,2H),2.55(t,J＝2.4Hz,1H),2.32(s,3H)。
浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1)纯化以提供化合物4(7.82g，53％产率)。1H NMR(CDCl3,400MHz):δ7.14(m,1H),7.02(m,2H),4.73(d,J＝2.4Hz,
2H),4.48(s,2H),2.55(t,J＝2.4Hz,1H),2.32(s,3H)。
[0266] 方案5：季盐阴离子交换
[0267]
[0268] 离子交换可通过使中间物季卤化物与银盐反应或更实际地传递通过离子交换树脂而实现，如方案5中所述。存在于中间物或最终产物中的卡非佐米季盐阴离子可经由阴离子交换树脂有效地转化为不同强酸阴离子，如硫酸氢盐、硫酸盐、磷酸二氢盐、硝酸盐或烷基/芳基磺酸盐。如Amberlyst A26(OH-形式)的阴离子交换树脂用所需酸或铵盐预处理，并且接着使所述季卤化物盐传递通过。由如乙酸盐、甲酸盐或乳酸盐的弱酸阴离子制备的结合物归因于所述季盐的增加的碱性和与酯触发基团不相容而不稳定。
[0269] 方案6：经由氨基氧基/羰基化学实现的两步聚合物结合
[0270]
[0271]
[0272] 或者，苯甲基(B1-(1-6))可经能够与如PEG-氨基氧基(-ONH2)的氨基氧基官能化聚合物载体反应的羰基(醛或酮)取代以提供稳定肟连接的结合物(B4-(1-6))。所述羰基部分可直接连接或经由烷基间隔剂(B1-1)连接，经由醚(B1-2,3)、硫醚、亚砜或砜(B1-4)键连接，或经由酰胺键(B1-5,6)连接。使卡非佐米和苯甲基卤(B1-(1-6))在RT下或在高温下在如乙腈的合适有机溶剂中反应以提供呈溴化物或碘化物盐形式的季中间物(B2-(1-6))。可需要交换这一卤化物阴离子以防止环氧化物开环和可能形成溴醇或碘醇副产物。阴离子交换可通过使中间物季卤化物与银盐反应或更实际地传递通过离子交换树脂而实现，如先前(方案5)中所述。接着使卡非佐米季盐中间物(B3-(1-6))和PEG-ONH3+Y-聚合物试剂在RT下或在高温下在如DCM或混合水性有机溶剂的合适有机物中反应。如苯胺、对苯二胺或5-甲氧基邻氨基苯甲酸的肟化催化剂可任选地添加，但通常非必需。注意卡非佐米季盐中间物
(B3-(1-6))和PEG-氨基氧基试剂阴离子盐为同一的以避免形成混合阴离子盐最终产物和
需要任何进一步阴离子操纵。最终PEG-卡非佐米产物可便利地通过蒸发反应溶剂和从异丙醇或乙醚/异丙醇混合物再沉淀残留物直至获得所需纯度的产物而经处理。
(B3-(1-6))和PEG-氨基氧基试剂阴离子盐为同一的以避免形成混合阴离子盐最终产物和
需要任何进一步阴离子操纵。最终PEG-卡非佐米产物可便利地通过蒸发反应溶剂和从异丙醇或乙醚/异丙醇混合物再沉淀残留物直至获得所需纯度的产物而经处理。
[0273] 方案7：合成PEG-氨基氧基试剂
[0274]
[0275] PEG-氨基氧基试剂可在市面上购得或可容易地由甲磺酰基或甲苯磺酰基活化的PEG-醇、PEG-卤化物(A)或PEG-胺(B)起始材料制备，如方案7中所描绘。叔丁基氧基羰基保护的中间物可用如氯化氢、甲烷磺酸、三氟乙酸或硫酸的强酸脱除保护基以生成呈氯化物、三氟乙酸盐或硫酸盐形式的PEG-氨基氧基试剂。PEG-氨基氧基试剂阴离子可任选地经由阴离子交换树脂交换为不同阴离子。
[0276] 方案8：肟异构体
[0277]
[0278] 所属领域的技术人员容易理解，肟可呈两种几何异构体形式存在：顺式(Z)-异构体和反式(E)-异构体，如方案8中所描绘。本公开中的多个实施例为芳族醛肟并且仅呈(E)-异构体形式存在。非芳族醛肟和酮肟可通常完全经分离并且呈(Z)-异构体和(E)-异构体形式获得。本发明中所述的聚乙二醇化非芳族醛肟和酮肟可呈独立(Z)和(E)-异构体形式或呈(Z)和(E)-异构体的混合物形式存在。
[0279] 方案9：直接聚合物结合以形成季盐
[0280]
[0281] 或者，本发明中所述的卡非佐米-聚合物结合物可在卡非佐米和预附接有所需聚合物链的对烷酰基氧基取代的苯甲基卤化物的一步反应中制备，如方案9中所示。所述聚合物链可经由多种已知化学或先前所述的炔/叠氮化物或羰基/氨基氧基化学经附接。这一途径可归因于难以分离含PEG产物与未反应的聚乙二醇化起始材料而不太需要。
[0282] 本发明的代表性实施例
[0283] 以下聚乙二醇化卡非佐米化合物为本发明的代表性实施例并且不意图解释为限制本发明的范围。所述聚乙二醇化卡非佐米化合物使用以下两种一般PEG连接方法(A和B)制备。
[0284] PEG三唑-连接体方法A：
[0285]
[0286] 卡非佐米季盐中间物A3-(1-6)(1.5eq)、PEG-叠氮化物(1eq)和(L)-抗坏血酸(0.75eq)混合于DMF(50mL/mmol PEG-叠氮化物)中以生成奶油色悬浮液。所述混合物剧烈地搅拌5分钟并且快速地逐滴添加硫酸铜(II)五水合物(0.3eq)于水(10mL/mmol PEG-叠氮化物)中的溶液。所述反应立即变暗为黄棕色并且所述悬浮液在5min内变得澄清。1小时之后，添加第二份抗坏血酸(0.75eq)并且反应混合物搅拌60分钟。添加第三份抗坏血酸
(0.38eq)并且反应混合物在RT下搅拌过夜。添加水(100mL/mmol PEG-叠氮化物)和NaCl
(15g/mmol PEG-叠氮化物)并且搅拌所述混合物直至NaCl溶解。产物用DCM(3X35mL/mmol PEG-叠氮化物)萃取。萃取物经无水硫酸钠干燥，过滤，并且在真空下在40℃下浓缩。残留物在40℃下溶解于异丙醇(125mL/mmol PEG-叠氮化物)中。一旦固体完全溶解，即添加二乙醚(90mL/mmol PEG-叠氮化物)并且所述溶液在冰浴中冷却。过滤所得固体并且滤饼用2-丙醇和二乙醚各洗涤两次。滤饼溶解于DCM中并且在真空下浓缩。残留物溶解于温(40℃)异丙醇(200mL/mmol PEG-叠氮化物)中并且接着使其在冰浴中冷却。.过滤所得固体并且滤饼用2-丙醇和二乙醚各洗涤两次并且接着在真空下干燥。
(0.38eq)并且反应混合物在RT下搅拌过夜。添加水(100mL/mmol PEG-叠氮化物)和NaCl
(15g/mmol PEG-叠氮化物)并且搅拌所述混合物直至NaCl溶解。产物用DCM(3X35mL/mmol PEG-叠氮化物)萃取。萃取物经无水硫酸钠干燥，过滤，并且在真空下在40℃下浓缩。残留物在40℃下溶解于异丙醇(125mL/mmol PEG-叠氮化物)中。一旦固体完全溶解，即添加二乙醚(90mL/mmol PEG-叠氮化物)并且所述溶液在冰浴中冷却。过滤所得固体并且滤饼用2-丙醇和二乙醚各洗涤两次。滤饼溶解于DCM中并且在真空下浓缩。残留物溶解于温(40℃)异丙醇(200mL/mmol PEG-叠氮化物)中并且接着使其在冰浴中冷却。.过滤所得固体并且滤饼用2-丙醇和二乙醚各洗涤两次并且接着在真空下干燥。
[0287] PEG肟-连接体方法B
[0288]
[0289] DCM(15mL/mmol B3-(1-6))中的卡非佐米季盐中间物B3-(1-6)(1eq)、PEG-ONH3+MsO-(0.8eq)和5-甲氧基邻氨基苯甲酸(肟化催化剂，0.3eq)在RT下搅拌直至通过HPLC(ELS检测器)观察到所述PEG试剂的完全消耗。所述反应混合物蒸发至干并且残留物在40℃下溶解于异丙醇(15mL/mmol B3-(1-6))中。所述澄清溶液冷却至RT并且添加乙醚(5mL/mmol
B3-(1-6))以诱导结晶。所述混合物在冰浴中冷却5-10分钟并且通过过滤收集所形成的固体。从异丙醇/乙醚再结晶再重复一或两次直至如通过HPLC所检测，所有未反应卡非佐米季盐中间物B3-(1-6)均去除。最终固体在真空下在30℃下干燥。典型产率：60-80％；典型反应时间：关于含有醛官能的中间物为10-30min，关于具有酮官能的中间物为24h。
B3-(1-6))以诱导结晶。所述混合物在冰浴中冷却5-10分钟并且通过过滤收集所形成的固体。从异丙醇/乙醚再结晶再重复一或两次直至如通过HPLC所检测，所有未反应卡非佐米季盐中间物B3-(1-6)均去除。最终固体在真空下在30℃下干燥。典型产率：60-80％；典型反应时间：关于含有醛官能的中间物为10-30min，关于具有酮官能的中间物为24h。
[0290] 所制备的PEG-卡非佐米化合物、PEG架构和PEG连接体方法的实施例列于表2中。表2进一步包括PEG加合物的大小和重量(道尔顿)和用于附接PEG部分至卡非佐米骨架的方
法。
法。
[0291] 表2
[0292]
[0293]
[0294]
[0295]
[0296]
[0297]
[0298] 实施例1：甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-((1-(PEG20K-4臂)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
[0299]
[0300] 4-羟基-3-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(1)
[0301] 在20℃下向NaH于DMSO(300mL)中的混合物中添加含3,4-二羟基苯甲醛(30g，217.39mmol)的DMSO(50mL)。所述混合物搅拌30min并且添加3-溴丙-1-炔(25.87g，
217.39mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌一小时。所述混合物倾入冰水(800mL)中并且所得溶液经调节至pH＝2。所述混合物用EtOAc(500mL×3)萃取，经无水MgSO4干燥，并且浓缩。
残留物重复地从DCM/石油醚(30mL/500mL)结晶以提供化合物1(30g，78％产率)；1H NMR
(CDCl3,300MHz,):δ9.87(s,1H),7.54(d,J＝1.2Hz,1H),7.49(dd,J1＝1.5Hz,J2＝8.1Hz,
1H),7.09(d,J＝8.1Hz,1H),4.82(m,2H),2.62(m,1H)。
217.39mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌一小时。所述混合物倾入冰水(800mL)中并且所得溶液经调节至pH＝2。所述混合物用EtOAc(500mL×3)萃取，经无水MgSO4干燥，并且浓缩。
残留物重复地从DCM/石油醚(30mL/500mL)结晶以提供化合物1(30g，78％产率)；1H NMR
(CDCl3,300MHz,):δ9.87(s,1H),7.54(d,J＝1.2Hz,1H),7.49(dd,J1＝1.5Hz,J2＝8.1Hz,
1H),7.09(d,J＝8.1Hz,1H),4.82(m,2H),2.62(m,1H)。
[0302] 乙酸4-甲酰基-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(2)
[0303] 在0℃下向化合物1(10.00g，56.82mmol)于DCM(150mL)中的溶液中添加Et3N(11.48g，113.64mmol)、随后乙酰氯(5.35g，68.18mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌2小时。所述混合物用饱和2NHCl水溶液(100mL)和水(50mL)洗涤，经无水MgSO4干燥，并且浓缩以提供化合物2(12g，97％产率)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤中；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ9.96(s,1H),7.63(d,J＝1.6Hz,1H),7.54(dd,J1＝1.6Hz,J2＝8.0Hz,
1H),7.25(d,J＝8.0Hz,1H),4.79(d,J＝2.4Hz,2H),2.57(t,J＝2.4Hz,1H),2.35(s,3H)
1H),7.25(d,J＝8.0Hz,1H),4.79(d,J＝2.4Hz,2H),2.57(t,J＝2.4Hz,1H),2.35(s,3H)
[0304] 乙酸4-(羟基甲基)-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(3)
[0305] 在0℃下分成小份向化合物2(12.00g，55.05mmol)于DCM/MeOH(150mL/15mL)中的溶液中添加NaBH4(3.06g，82.57mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌30min。所述混合物通过丙酮(5mL)淬灭，并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1)纯化以提供化合物3(10.32g，85％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ7.16(d,J＝1.6Hz,1H),7.04(d,J＝
8.0Hz,1H),6.98(dd,J1＝1.6Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.72(d,J＝2.4Hz,2H),4.69(s,2H),2.53(t,J＝2.4Hz,1H),2.32(s,3H)。
8.0Hz,1H),6.98(dd,J1＝1.6Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.72(d,J＝2.4Hz,2H),4.69(s,2H),2.53(t,J＝2.4Hz,1H),2.32(s,3H)。
[0306] 乙酸4-(溴甲基)-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(4)
[0307] 在0℃下向化合物3(11.50g，52.27mmol)于DCM(150mL)中的溶液中添加PPh3(20.50g，78.41mmol)和NBS(11.04g，62.73mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌0.5小时。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1)纯化以提供化合物4
(7.82g，53％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ7.14(m,1H),7.02(m,2H),4.73(d,J＝2.4Hz,
2H),4.48(s,2H),2.55(t,J＝2.4Hz,1H),2.32(s,3H)。
(7.82g，53％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ7.14(m,1H),7.02(m,2H),4.73(d,J＝2.4Hz,
2H),4.48(s,2H),2.55(t,J＝2.4Hz,1H),2.32(s,3H)。
[0308] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-
苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(6)
苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(6)
[0309] 向化合物4(5.85g，20.67mmol)于MeCN(50mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(4.96g,
6.89mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌2天。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:6)纯化以提供所需化合物5，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(3.2g，50％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ9.66(m,1H),7.83(m,
1H),7.36(m,1H),7.26-7.14(m,13H),6.72(m,1H),5.18(m,1H),4.90(m,2H),4.77(m,2H),
4.53-4.36(m,4H),4.26(m,3H),4.08(m,1H),3.92(m,2H),3.74(m,1H),3.46(m,1H),3.35
(m,1H),3.13(m,1H),3.04(m,2H),2.81(s,3H),2.75(m,2H),2.62(m,1H),2.33(m,3H),2.20(m,1H),2.12(m,1H),1.70-1.53(m,3H),1.50-1.33(m,5H),1.25(m,2H),0.90-0.81(m,
12H)。
6.89mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌2天。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:6)纯化以提供所需化合物5，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(3.2g，50％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ9.66(m,1H),7.83(m,
1H),7.36(m,1H),7.26-7.14(m,13H),6.72(m,1H),5.18(m,1H),4.90(m,2H),4.77(m,2H),
4.53-4.36(m,4H),4.26(m,3H),4.08(m,1H),3.92(m,2H),3.74(m,1H),3.46(m,1H),3.35
(m,1H),3.13(m,1H),3.04(m,2H),2.81(s,3H),2.75(m,2H),2.62(m,1H),2.33(m,3H),2.20(m,1H),2.12(m,1H),1.70-1.53(m,3H),1.50-1.33(m,5H),1.25(m,2H),0.90-0.81(m,
12H)。
[0310] 实施例1由化合物6和PEG20K(N3)4根据一般聚乙二醇化程序A制备；1H NMR(500MHz,弛豫时间＝10s)DMSO-d6NMR:δ9.50(s,4H),8.50(s,4H),8.39(d,J＝8Hz,4H),8.27(d,J＝8Hz,4H),8.11(s,4H),8.05(d,J＝8Hz,4H),7.58(s,4H),7.26-7.29(m,12H),7.12-7.23(m,
32H),7.03-7.06(m,4H),5.26(m,8H),4.89-5.00(m,8H),4.52-4.56(m,12H),4.28-4.38(m,
16H),4.17-4.20(m,4H),4.05(m,16H),3.81(t,J＝5.5Hz,8H),3.63-3.66(m,8H),3.50(s,
2098H),3.10(d,J＝5Hz,4H),2.94-2.98(m,12H),2.72-2.78(m,4H),2.50-2.65(m,8H),
2.24(s,12H),1.90-1.98(m,4H),1.78-1.88(m,4H),1.58-1.66(m,8H),1.39(s,12H),1.25-
1.38(m,12H),0.836-0.882(m,24H),0.786-0.817(m,24H)；负载：87％。
32H),7.03-7.06(m,4H),5.26(m,8H),4.89-5.00(m,8H),4.52-4.56(m,12H),4.28-4.38(m,
16H),4.17-4.20(m,4H),4.05(m,16H),3.81(t,J＝5.5Hz,8H),3.63-3.66(m,8H),3.50(s,
2098H),3.10(d,J＝5Hz,4H),2.94-2.98(m,12H),2.72-2.78(m,4H),2.50-2.65(m,8H),
2.24(s,12H),1.90-1.98(m,4H),1.78-1.88(m,4H),1.58-1.66(m,8H),1.39(s,12H),1.25-
1.38(m,12H),0.836-0.882(m,24H),0.786-0.817(m,24H)；负载：87％。
[0311] 实施例2：甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-2-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(9)。
[0312]
[0313] 2-羟基-4-(甲氧基甲氧基)苯甲醛(1)
[0314] 向化合物2,4-二羟基苯甲醛(5.04g，36.24mmol)于THF(100mL)中的溶液中添加DIPEA(6.52g，54.35mmol)和氯(甲氧基)甲烷(3.21g，39.86mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝15:1)纯化以提
1
供化合物1(3.96g，60％产率)；H NMR(300MHz,CDCl3):δ11.41(s,1H),9.76(s,1H),7.48(dd,J1＝2.7Hz,J2＝8.4Hz,1H),6.67(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.7Hz,1H),6.62(d,J＝2.1Hz,
1H),5.25(d,J＝2.7Hz,2H),3.51(d,J＝3.0Hz,3H)。
1
供化合物1(3.96g，60％产率)；H NMR(300MHz,CDCl3):δ11.41(s,1H),9.76(s,1H),7.48(dd,J1＝2.7Hz,J2＝8.4Hz,1H),6.67(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.7Hz,1H),6.62(d,J＝2.1Hz,
1H),5.25(d,J＝2.7Hz,2H),3.51(d,J＝3.0Hz,3H)。
[0315] 4-(甲氧基甲氧基)-2-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(2)
[0316] 在20℃下向NaH(900mg，21.252mmol)于DMSO(100mL)中的混合物中添加含化合物1(2.0g，10.63mmol)的DMSO(50mL)。所述混合物在相同温度下搅拌30min并且接着逐滴添加3-溴丙-1-炔(1.90g，15.94mmol)。所述反应混合物在相同温度下搅拌4小时并且接着倾入冰水(100mL)中。所得溶液经调节至pH＝2-3并且添加EtOAc(100mL)。分离两相并且水相用EtOAc(100mL×3)萃取。有机组合的有机相经干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱
(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物2(1.89g，80％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ
10.34(s,1H),7.85(d,J＝9.3Hz,1H),6.76(m,2H),5.26(s,2H),4.83(d,J＝2.4Hz,2H),
3.52(s,3H),2.60(q,J＝2.4Hz,1H)。
(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物2(1.89g，80％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ
10.34(s,1H),7.85(d,J＝9.3Hz,1H),6.76(m,2H),5.26(s,2H),4.83(d,J＝2.4Hz,2H),
3.52(s,3H),2.60(q,J＝2.4Hz,1H)。
[0317] 4-羟基-2-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(3)
[0318] 向化合物2(5.1g，23.18mmol)于丙-2-醇(100mL)中的溶液中添加CBr4(760mg，2.32mmol)。所述反应混合物回流过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物3(2.44g，60％产率)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ
10.76(s,1H),10.11(s,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,1H),6.59(d,J＝2.0Hz,1H),6.52(dd,J1＝
2.0Hz,J2＝8.8Hz,1H),4.92(d,J＝2.4Hz,2H),3.70(q,J＝2.4Hz,1H)。
10.76(s,1H),10.11(s,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,1H),6.59(d,J＝2.0Hz,1H),6.52(dd,J1＝
2.0Hz,J2＝8.8Hz,1H),4.92(d,J＝2.4Hz,2H),3.70(q,J＝2.4Hz,1H)。
[0319] 4-(羟基甲基)-3-(丙-2-炔基氧基)苯酚(4)
[0320] 在0℃下分成小份向化合物3(2.45g，13.92mmol)于MeOH(40mL)中的溶液中添加NaBH4(618mg，16.698mmol)。所述反应混合物在相同温度下搅拌1小时并且接着用水
(1.5mL)淬灭。浓缩过量溶剂并且残留物再溶解于EtOAc(100mL)中。所得溶液经干燥并且浓缩以提供化合物4(1.80g，74％产率)，其无需进一步纯化即用于下一步骤中；1H NMR
(400MHz,DMSO-d6):δ6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.32(s,1H),6.26(d,J＝8.0Hz,1H),4.65(d,J＝2.0Hz,2H),4.32(s,2H),3.54(m,1H)。
(1.5mL)淬灭。浓缩过量溶剂并且残留物再溶解于EtOAc(100mL)中。所得溶液经干燥并且浓缩以提供化合物4(1.80g，74％产率)，其无需进一步纯化即用于下一步骤中；1H NMR
(400MHz,DMSO-d6):δ6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.32(s,1H),6.26(d,J＝8.0Hz,1H),4.65(d,J＝2.0Hz,2H),4.32(s,2H),3.54(m,1H)。
[0321] 乙酸4-(羟基甲基)-3-(丙-2-炔基氧基)苯酯(5)
[0322] 在0℃下向化合物4(1.20g，6.74mmol)于DCM(30mL)中的溶液中逐滴添加TEA(1.70g，16.85mmol)、随后乙酰氯(634mg，8mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌30min。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1)纯化以提供化合物5
(360mg，30％产率)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.38(d,J＝8.0Hz,1H),6.79(d,J＝2.0Hz,
1H),6.75(dd,J1＝2.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),5.09(m,J＝5.6Hz,1H),4.82(d,J＝2.4Hz,1H),
4.46(d,J＝5.6HZ,2H),3.60(q,J＝2.4Hz,1H),2.26(s,3H)。
(360mg，30％产率)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.38(d,J＝8.0Hz,1H),6.79(d,J＝2.0Hz,
1H),6.75(dd,J1＝2.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),5.09(m,J＝5.6Hz,1H),4.82(d,J＝2.4Hz,1H),
4.46(d,J＝5.6HZ,2H),3.60(q,J＝2.4Hz,1H),2.26(s,3H)。
[0323] 乙酸4-(溴甲基)-3-(丙-2-炔基氧基)苯酯(6)
[0324] 在0℃下分成小份向化合物5(360mg，1.64mmol)于DCM(15mL)中的溶液中添加PPh3(515mg，1.96mmol)、随后NBS(318mg，1.80mmol)。所述反应混合物在相同温度下搅拌30min。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝50:1)纯化以提供化合物6(190mg，41％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.36(d,J＝8.4Hz,1H),6.78(d,J＝2.0Hz,
1H),6.73(dd,J1＝2.0Hz,J2＝8.4Hz,1H),4.77(d,J＝2.4Hz,2H),4.54(s,2H),2.56(q,J＝
2.4Hz,1H),2.31(s,3H)。
1H),6.73(dd,J1＝2.0Hz,J2＝8.4Hz,1H),4.77(d,J＝2.4Hz,2H),4.54(s,2H),2.56(q,J＝
2.4Hz,1H),2.31(s,3H)。
[0325] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-2-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-
苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(8)
苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(8)
[0326] 向化合物6(190mg，0.67mmol)于MeCN(10mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(480mg,
0.67mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(MeOH/EtOAc＝1:50)纯化以提供所需化合物7，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(340mg，74％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.68(m,1H),7.88(m,
1H),7.63(m,1H),7.33～7.16(m,10H),6.89(m,3H),6.50(m,1H),5.16(m,1H),5.05(m,1H),
4.87(m,1H),4.75(m,2H),4.47(m,2H),4.45～4.12(m,8H),4.02(m,3H),3.72(m,1H),3.54
(m,1H),3.38(m,1H),3.20(m,1H),3.06(m,2H),2.80(s,3H),2.74(m,2H),2.63(m,2H),2.40～2.08(m,5H),1.64(m,2H),1.47(s,3H),0.85(m,12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(480mg,
0.67mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(MeOH/EtOAc＝1:50)纯化以提供所需化合物7，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(340mg，74％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.68(m,1H),7.88(m,
1H),7.63(m,1H),7.33～7.16(m,10H),6.89(m,3H),6.50(m,1H),5.16(m,1H),5.05(m,1H),
4.87(m,1H),4.75(m,2H),4.47(m,2H),4.45～4.12(m,8H),4.02(m,3H),3.72(m,1H),3.54
(m,1H),3.38(m,1H),3.20(m,1H),3.06(m,2H),2.80(s,3H),2.74(m,2H),2.63(m,2H),2.40～2.08(m,5H),1.64(m,2H),1.47(s,3H),0.85(m,12H)。
[0327] 实施例2的化合物由化合物8和PEG5KN3根据一般聚乙二醇化程序A制备
[0328] 实施例3：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(2-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-4-(丙酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
(9)
基)-4-(2-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-4-(丙酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
(9)
[0329]
[0330] 2-羟基-4-(甲氧基甲氧基)苯甲醛(1)
[0331] 向2,4-二羟基苯甲醛(5.0g，36.23mmol)于THF中的溶液中添加DIPEA(6.52g，54.35mmol)和氯(甲氧基)甲烷(3.21g，39.86mmol)。所述反应混合物搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝15:1)纯化以提供化合物1(3.96g，
60％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ11.41(s,1H),9.76(s,1H),7.48(dd,J1＝2.7Hz,J2＝
8.4Hz,1H),6.67(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.7Hz,1H),6.62(d,J＝2.1Hz,1H),5.25(d,J＝
2.7Hz,2H),3.51(d,J＝3.0Hz,3H)。
60％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ11.41(s,1H),9.76(s,1H),7.48(dd,J1＝2.7Hz,J2＝
8.4Hz,1H),6.67(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.7Hz,1H),6.62(d,J＝2.1Hz,1H),5.25(d,J＝
2.7Hz,2H),3.51(d,J＝3.0Hz,3H)。
[0332] 4-(甲氧基甲氧基)-2-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(2)
[0333] 在20℃下向NaH(900mg，21.252mmol)于DMSO(100mL)中的混合物中添加含化合物1(2.0g，10.626mmol)的DMSO(50mL)。所述混合物在相同温度下搅拌30min并且接着逐滴添加3-溴丙-1-炔(1.90g，15.94mmol)。所述反应混合物在相同温度下搅拌4小时并且接着倾入冰水(100mL)中。所得溶液经调节至pH＝2-3并且添加EtOAc(100mL)。分离两相并且水相用EtOAc(100mL×3)萃取。组合的有机相经干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物2(1.89g，80％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ10.34(s,
1H),7.85(d,J＝9.3Hz,1H),6.76(m,2H),5.26(s,2H),4.83(d,J＝2.4Hz,2H),3.52(s,3H),
2.60(q,J＝2.4Hz,1H)。
1H),7.85(d,J＝9.3Hz,1H),6.76(m,2H),5.26(s,2H),4.83(d,J＝2.4Hz,2H),3.52(s,3H),
2.60(q,J＝2.4Hz,1H)。
[0334] 4-羟基-2-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(3)
[0335] 向化合物2(5.1g，23.18mmol)于丙-2-醇(100mL)中的溶液中添加CBr4(760mg，2.318mmol)。所述反应混合物回流过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物3(2.44g，60％产率)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ
10.76(s,1H),10.11(s,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,1H),6.59(d,J＝2.0Hz,1H),6.52(dd,J1＝
2.0Hz,J2＝8.8Hz,1H),4.92(d,J＝2.4Hz,2H),3.70(q,J＝2.4Hz,1H)。
10.76(s,1H),10.11(s,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,1H),6.59(d,J＝2.0Hz,1H),6.52(dd,J1＝
2.0Hz,J2＝8.8Hz,1H),4.92(d,J＝2.4Hz,2H),3.70(q,J＝2.4Hz,1H)。
[0336] 4-(羟基甲基)-3-(丙-2-炔基氧基)苯酚(4)
[0337] 在0℃下分成小份向化合物3(2.45g，13.92mmol)于MeOH(40mL)中的溶液中添加NaBH4(618mg，16.698mmol)。所述反应混合物在相同温度下搅拌1小时并且接着通过水
(1.5mL)淬灭。浓缩过量溶剂并且残留物再溶解于EtOAc(100mL)中。所得溶液经干燥并且浓缩以提供化合物4(1.80g，74％产率)，其无需进一步纯化即用于下一步骤中；1H NMR
(400MHz,DMSO-d6):δ6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.32(s,1H),6.26(d,J＝8.0Hz,1H),4.65(d,J＝2.0Hz,2H),4.32(s,2H),3.54(m,1H)。
(1.5mL)淬灭。浓缩过量溶剂并且残留物再溶解于EtOAc(100mL)中。所得溶液经干燥并且浓缩以提供化合物4(1.80g，74％产率)，其无需进一步纯化即用于下一步骤中；1H NMR
(400MHz,DMSO-d6):δ6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.32(s,1H),6.26(d,J＝8.0Hz,1H),4.65(d,J＝2.0Hz,2H),4.32(s,2H),3.54(m,1H)。
[0338] 丙酸4-(羟基甲基)-3-(丙-2-炔基氧基)苯酯(5)
[0339] 在0℃下向化合物4(2.4g，13.5mmol)于DCM/THF(30mL/5mL)中的溶液中添加Et3N(3.41g，33.75mmol)和丙酸酐(1.93g，14.8mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物5(850mg，
30％产率)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.38(d,J＝8.0Hz,1H),6.81(d,J＝2.4Hz,1H),
6.74(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),5.08(br,s,1H),4.80(d,J＝2.4Hz,1H),4.46(s,2H),
3.60(m,1H),2.20(m,2H),1.16(m,3H)。
30％产率)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.38(d,J＝8.0Hz,1H),6.81(d,J＝2.4Hz,1H),
6.74(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),5.08(br,s,1H),4.80(d,J＝2.4Hz,1H),4.46(s,2H),
3.60(m,1H),2.20(m,2H),1.16(m,3H)。
[0340] 丙酸4-(溴甲基)-3-(丙-2-炔基氧基)苯酯(6)
[0341] 在RT下向化合物5(850mg，3.63mmol)于DCM(40mL)中的溶液中添加PPh3(1.24g，4.72mmol)和NBS(767.4mg，4.36mmol)。所述反应混合物搅拌30min。浓缩过量溶剂并且残留
1
物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物6(780mg，73％产率)；H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.34(d,J＝8.0Hz,1H),6.78(d,J＝2.0Hz,1H),6.73(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),4.77(d,J＝2.4Hz,1H),4.54(m,1H),2.60(m,2H),2.56(m,1H),1.27(q,J＝
7.6Hz,3H)。
1
物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物6(780mg，73％产率)；H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.34(d,J＝8.0Hz,1H),6.78(d,J＝2.0Hz,1H),6.73(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),4.77(d,J＝2.4Hz,1H),4.54(m,1H),2.60(m,2H),2.56(m,1H),1.27(q,J＝
7.6Hz,3H)。
[0342] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(2-(丙-
2-炔-1-基氧基)-4-(丙酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(8)
2-炔-1-基氧基)-4-(丙酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(8)
[0343] 向化合物6(780mg，2.626mmol)于MeCN(10mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(945mg,
1.313mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:3)纯化以提供所需化合物7(760mg，57％产率)，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(740mg，97％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ
9.64(m,1H),7.88(m,1H),7.63(m,1H),7.26(m,10H),6.92(m,1H),6.89(m,2H),6.50(m,
1H),5.16(m,1H),5.05(m,1H),4.87(m,1H),4.78(m,2H),4.47(m,2H),4.45～4.12(m,8H),
3.72(m,1H),3.54(m,1H),3.38(m,1H),3.20(m,1H),3.06(m,2H),2.84(m,1H),2.80(s,3H),
2.74(m,2H),2.63(m,3H),2.40～2.08(m,5H),1.64(m,2H),1.47(s,3H),1.24(m,3H),0.85
(m,12H)。
1.313mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:3)纯化以提供所需化合物7(760mg，57％产率)，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(740mg，97％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ
9.64(m,1H),7.88(m,1H),7.63(m,1H),7.26(m,10H),6.92(m,1H),6.89(m,2H),6.50(m,
1H),5.16(m,1H),5.05(m,1H),4.87(m,1H),4.78(m,2H),4.47(m,2H),4.45～4.12(m,8H),
3.72(m,1H),3.54(m,1H),3.38(m,1H),3.20(m,1H),3.06(m,2H),2.84(m,1H),2.80(s,3H),
2.74(m,2H),2.63(m,3H),2.40～2.08(m,5H),1.64(m,2H),1.47(s,3H),1.24(m,3H),0.85
(m,12H)。
[0344] 实施例3的聚乙二醇化卡非佐米化合物由化合物8和PEG5KN3根据一般聚乙二醇化程序A制备。
[0345] 实施例4：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(4-(异丁酰基氧基)-3-(((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨甲酰基)苯甲基)吗啉-4-鎓(9)
基)-4-(4-(异丁酰基氧基)-3-(((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨甲酰基)苯甲基)吗啉-4-鎓(9)
[0346]
[0347] 5-甲酰基-2-羟基苯甲酸叔丁酯(1)
[0348] 在RT下向化合物5-甲酰基-2-羟基苯甲酸(2.01g，12mmol)于2-甲基丙-2-醇(70mL)中的溶液中添加DCC(2.3g，12mmol)。所述反应混合物在回流下搅拌3小时。浓缩溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1)纯化以提供化合物1(1.8g，75％产
1
率)。H NMR(300MHz,CDCl3):δ11.76(s,1H),9.91(s,1H),8.33(d,J＝2.1Hz,1H),8.00(dd,J1＝1.8Hz,J2＝8.7Hz,1H),7.11(d,J＝8.4Hz,1H),1.68(s,9H)。
1
率)。H NMR(300MHz,CDCl3):δ11.76(s,1H),9.91(s,1H),8.33(d,J＝2.1Hz,1H),8.00(dd,J1＝1.8Hz,J2＝8.7Hz,1H),7.11(d,J＝8.4Hz,1H),1.68(s,9H)。
[0349] 5-甲酰基-2-(异丁酰基氧基)苯甲酸叔丁酯(2)
[0350] 在RT下向化合物1(1.01g，4.5mmol)于THF(20mL)中的溶液中添加吡啶(1.07g，13.5mmol)和异丁酸酐(1.423g，9mmol)。所述反应混合物搅拌3小时。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1)纯化以提供化合物2(420mg，36％产率)。
1HNMR(300MHz,CDCl3):δ10.04(s,1H),8.36(d,J＝1.8Hz,1H),8.04(dd,J1＝2.1Hz,J2＝
8.4Hz,1H),7.25(m,1H),2.91(m,1H),1.59(s,9H),1.36(d,J＝6.9Hz,6H)
1HNMR(300MHz,CDCl3):δ10.04(s,1H),8.36(d,J＝1.8Hz,1H),8.04(dd,J1＝2.1Hz,J2＝
8.4Hz,1H),7.25(m,1H),2.91(m,1H),1.59(s,9H),1.36(d,J＝6.9Hz,6H)
[0351] 5-(羟基甲基)-2-(异丁酰基氧基)苯甲酸叔丁酯(3)
[0352] 在RT下向化合物2(400mg，1.37mmol)于THF(20mL)中的溶液中添加NaBH4(57.3mg，1.5mol)。所述反应混合物搅拌1小时并且接着通过丙酮(1mL)淬灭。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝8:1)纯化以提供化合物3(300mg，75％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.85(m,1H),7.52(d,J＝8.1Hz,1H),7.06(d,J＝8.1Hz,1H),4.73(s,
2H),2.88(m,1H),1.57(s,9H),1.30(m,6H)。
2H),2.88(m,1H),1.57(s,9H),1.30(m,6H)。
[0353] 5-(羟基甲基)-2-(异丁酰基氧基)苯甲酸(4)
[0354] 化合物3(400mg，1.38mmol)于TFA/DCM(v/v,3mL/12mL)中的溶液在RT下搅拌过夜。所述混合物倾入水中并且水相经调节至pH＝3-4。分离两相并且有机相经无水MgSO4干燥并且浓缩以提供化合物4(202mg，62％产率)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。
[0355] 异丁酸4-(羟基甲基)-2-(丙-2-炔基氨甲酰基)苯酯(5)
[0356] 在0℃下向化合物4(202mg，0.85mmol)于DCM(20mL)中的溶液中添加DIPEA(219.3mg，1.7mmol)、HATU(969mg，2.55mmol)和丙-2-炔-1-胺(93.5mg，1.7mmol)。所述反应混合物搅拌30min。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1)纯化以提供化合物5(130mg，60％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.83(m,1H),7.52(m,1H),
7.10(m,1H),4.65(s,2H),4.24(m,2H),2.87(m,1H),2.30(m,1H),1.26(m,6H)。
7.10(m,1H),4.65(s,2H),4.24(m,2H),2.87(m,1H),2.30(m,1H),1.26(m,6H)。
[0357] 异丁酸4-(溴甲基)-2-(丙-2-炔基氨甲酰基)苯酯(6)
[0358] 在0℃下向化合物5(130mg，0.5mmol)于DCM(15mL)中的溶液中添加PPh3(170.3mg，0.65mmol)和NBS(105.6mg，0.6mmol)。所述反应混合物搅拌30min并且浓缩溶剂。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1)纯化以提供化合物6(50mg，32％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.88(m,1H),7.37(m,1H),7.11(m,1H),4.51(s,2H),4.23(m,2H),2.87
(m,1H),2.31(m,1H),1.37(m,6H)。
(m,1H),2.31(m,1H),1.37(m,6H)。
[0359] 溴化4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(4-(异丁酰基氧基)-3-(丙-2-炔-1-基氨甲酰基)苯甲基)吗啉-4-鎓(8)
[0360] 向化合物6(360mg，1.1mmol)于MeCN(4mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(720mg,1.0mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。浓缩溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝50:1)纯化以提供所需产物7，所述产物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(150mg，15％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.61(m,1H),7.90(m,1H),7.64(m,2H),
7.34-7.10(m,12H),6.92(m,1H),6.68(m,1H),5.03(m,2H),4.86(m,1H),4.58-4.32(m,4H),
4.28-4.10(m,5H),3.96(m,4H),3.47-3.31(m,2H),3.18(m,1H),3.06-2.87(m,2H),2.83(s,
3H),2.76(m,2H),2.26(m,1H),2.23-2.04(m,3H),1.66-1.58(m,2H),1.42(m,4H),1.38-
1.30(m,6H),1.27(m,4H),0.90-0.84(m,12H)。
7.34-7.10(m,12H),6.92(m,1H),6.68(m,1H),5.03(m,2H),4.86(m,1H),4.58-4.32(m,4H),
4.28-4.10(m,5H),3.96(m,4H),3.47-3.31(m,2H),3.18(m,1H),3.06-2.87(m,2H),2.83(s,
3H),2.76(m,2H),2.26(m,1H),2.23-2.04(m,3H),1.66-1.58(m,2H),1.42(m,4H),1.38-
1.30(m,6H),1.27(m,4H),0.90-0.84(m,12H)。
[0361] 实施例4的聚乙二醇化卡非佐米化合物由化合物8和PEG5KN3根据一般聚乙二醇化程序A制备。
[0362] 实施例5：甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
[0363]
[0364] 4-羟基-3-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(1)
[0365] 在20℃下向NaH于DMSO(300mL)中的混合物中添加含3,4-二羟基苯甲醛(30g，217.39mmol)的DMSO(50mL)。所述混合物搅拌30min并且添加3-溴丙-1-炔(25.87g，
217.39mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌一小时。所述混合物倾入冰水(800mL)中并且所得溶液经调节至pH＝2。所述混合物用EtOAc(500mL×3)萃取，经无水MgSO4干燥，并且浓缩。
残留物重复地从DCM/石油醚(30mL/500mL)结晶以提供化合物1(30g，78％产率)；1H NMR
(CDCl3,300MHz,):δ9.87(s,1H),7.54(d,J＝1.2Hz,1H),7.49(dd,J1＝1.5Hz,J2＝8.1Hz,
1H),7.09(d,J＝8.1Hz,1H),4.82(m,2H),2.62(m,1H)。
217.39mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌一小时。所述混合物倾入冰水(800mL)中并且所得溶液经调节至pH＝2。所述混合物用EtOAc(500mL×3)萃取，经无水MgSO4干燥，并且浓缩。
残留物重复地从DCM/石油醚(30mL/500mL)结晶以提供化合物1(30g，78％产率)；1H NMR
(CDCl3,300MHz,):δ9.87(s,1H),7.54(d,J＝1.2Hz,1H),7.49(dd,J1＝1.5Hz,J2＝8.1Hz,
1H),7.09(d,J＝8.1Hz,1H),4.82(m,2H),2.62(m,1H)。
[0366] 乙酸4-甲酰基-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(2)
[0367] 在0℃下向化合物1(10.00g，56.82mmol)于DCM(150mL)中的溶液中添加Et3N(11.48g，113.64mmol)、随后乙酰氯(5.35g，68.18mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌2小时。所述混合物用饱和2NHCl水溶液(100mL)和水(50mL)洗涤，经无水MgSO4干燥，并且浓缩以提供化合物2(12g，97％产率)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤中；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ9.96(s,1H),7.63(d,J＝1.6Hz,1H),7.54(dd,J1＝1.6Hz,J2＝8.0Hz,
1H),7.25(d,J＝8.0Hz,1H),4.79(d,J＝2.4Hz,2H),2.57(t,J＝2.4Hz,1H),2.35(s,3H)。
1H),7.25(d,J＝8.0Hz,1H),4.79(d,J＝2.4Hz,2H),2.57(t,J＝2.4Hz,1H),2.35(s,3H)。
[0368] 乙酸4-(羟基甲基)-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(3)
[0369] 在0℃下分成小份向化合物2(12.00g，55.05mmol)于DCM/MeOH(150mL/15mL)中的溶液中添加NaBH4(3.06g，82.57mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌30min。所述混合物通过丙酮(5mL)淬灭，并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1)纯化以提供化合物3(10.32g，85％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ7.16(d,J＝1.6Hz,1H),7.04(d,J＝
8.0Hz,1H),6.98(dd,J1＝1.6Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.72(d,J＝2.4Hz,2H),4.69(s,2H),2.53(t,J＝2.4Hz,1H),2.32(s,3H)。
8.0Hz,1H),6.98(dd,J1＝1.6Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.72(d,J＝2.4Hz,2H),4.69(s,2H),2.53(t,J＝2.4Hz,1H),2.32(s,3H)。
[0370] 乙酸4-(溴甲基)-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(4)
[0371] 在0℃下向化合物3(11.50g，52.27mmol)于DCM(150mL)中的溶液中添加PPh3(20.50g，78.41mmol)和NBS(11.04g，62.73mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌0.5小时。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1)纯化以提供化合物4
(7.82g，53％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ7.14(m,1H),7.02(m,2H),4.73(d,J＝2.4Hz,
2H),4.48(s,2H),2.55(t,J＝2.4Hz,1H),2.32(s,3H)。
(7.82g，53％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ7.14(m,1H),7.02(m,2H),4.73(d,J＝2.4Hz,
2H),4.48(s,2H),2.55(t,J＝2.4Hz,1H),2.32(s,3H)。
[0372] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-
苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(6)
苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(6)
[0373] 向化合物4(5.85g，20.67mmol)于MeCN(50mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(4.96g,
6.89mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌2天。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:6)纯化以提供所需化合物5，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(3.2g，50％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ9.66(m,1H),7.83(m,
1H),7.36(m,1H),7.26-7.14(m,13H),6.72(m,1H),5.18(m,1H),4.90(m,2H),4.77(m,2H),
4.53-4.36(m,4H),4.26(m,3H),4.08(m,1H),3.92(m,2H),3.74(m,1H),3.46(m,1H),3.35
(m,1H),3.13(m,1H),3.04(m,2H),2.81(s,3H),2.75(m,2H),2.62(m,1H),2.33(m,3H),2.20(m,1H),2.12(m,1H),1.70-1.53(m,3H),1.50-1.33(m,5H),1.25(m,2H),0.90-0.81(m,
12H)。
6.89mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌2天。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:6)纯化以提供所需化合物5，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(3.2g，50％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ9.66(m,1H),7.83(m,
1H),7.36(m,1H),7.26-7.14(m,13H),6.72(m,1H),5.18(m,1H),4.90(m,2H),4.77(m,2H),
4.53-4.36(m,4H),4.26(m,3H),4.08(m,1H),3.92(m,2H),3.74(m,1H),3.46(m,1H),3.35
(m,1H),3.13(m,1H),3.04(m,2H),2.81(s,3H),2.75(m,2H),2.62(m,1H),2.33(m,3H),2.20(m,1H),2.12(m,1H),1.70-1.53(m,3H),1.50-1.33(m,5H),1.25(m,2H),0.90-0.81(m,
12H)。
[0374] 实施例5的聚乙二醇化卡非佐米化合物由化合物6和PEG5KN3根据一般聚乙二醇化程序A制备。
[0375] 实施例6：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(3-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-4-(丙酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
(6)
基)-4-(3-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-4-(丙酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
(6)
[0376]
[0377] 丙酸4-甲酰基-2-(丙-2-炔-1-基氧基)苯酯(1)
[0378] 在0℃下向4-羟基-3-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(2.64g，15mmol)于DCM(30mL)中的溶液中添加TEA(3g，30mmol)和丙酰氯(1.67g，18mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌一小时。这一混合物用水(50mL)淬灭并且收集DCM相，经无水MgSO4干燥，并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1)纯化以提供化合物1(2.4g，85％产率)；1H NMR
(300MHz,CDCl3):δ9.97(s,1H),7.64(d,J＝1.5Hz,1H),7.55(d,J1＝1.5Hz,J2＝7.8Hz,
1H),7.26(d,J＝8.1Hz,1H),4.79(d,J＝2.1Hz,1H),2.68(q,J＝7.5Hz,2H),2.58(t,J＝
2.4Hz,1H),1.31(t,J＝7.5Hz,1H)。
(300MHz,CDCl3):δ9.97(s,1H),7.64(d,J＝1.5Hz,1H),7.55(d,J1＝1.5Hz,J2＝7.8Hz,
1H),7.26(d,J＝8.1Hz,1H),4.79(d,J＝2.1Hz,1H),2.68(q,J＝7.5Hz,2H),2.58(t,J＝
2.4Hz,1H),1.31(t,J＝7.5Hz,1H)。
[0379] 丙酸4-(羟基甲基)-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(2)
[0380] 在0℃下分成小份向化合物1(2.32g，0.01mol)于THF(30mL)中的溶液中添加NaBH4(570mg，0.015mol)。所述反应混合物在室温下搅拌2小时并且接着通过饱和NH4Cl(15mL)淬灭。收集有机相并且水相通过DCM(20mL×3)萃取。组合有机相，经无水MgSO4干燥，并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1)纯化以提供化合物2(1.7g，73％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.12～6.95(m,3H),4.68(m,2H),4.62(m,2H),2.63(m,2H),2.53(m,1H),1.27(m,3H)。
[0381] 丙酸4-(溴甲基)-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(3)
[0382] 依序向化合物2(1.7g，7.26mmol)于DCM(30mL)中的溶液中添加PPh3(2.28g，8.7mmol)和DIPEA(1.12g，8.7mmol)。所述混合物冷却至0℃并且分成小份添加NBS(1.4g，
7.78mmol)。所述反应混合物在相同温度下搅拌20min。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1)纯化以提供化合物3(400mg，19％产率)。
7.78mmol)。所述反应混合物在相同温度下搅拌20min。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1)纯化以提供化合物3(400mg，19％产率)。
[0383] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(3-(丙-
2-炔-1-基氧基)-4-(丙酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
2-炔-1-基氧基)-4-(丙酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
[0384] 向化合物3(400mg，1.34mmol)于MeCN(5mL)中的溶液中添加化合物(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(484.8mg,0.67mmol)。所述反应混合物在45℃下加热过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱纯化以提供所需化合物4(380mg，48％产率)，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(370mg，定量)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.63(m,1H),7.82(m,1H),
7.35～7.09(m,13H),6.91(m,1H),6.52(m,1H),5.13(m,1H),5.02～4.82(m,5H),4.72(m,
2H),4.50～3.83(m,11H),3.52～3.31(m,2H),3.18～2.58(m,11H),1.68～1.18(m,9H),
0.88(m,12H)。
7.35～7.09(m,13H),6.91(m,1H),6.52(m,1H),5.13(m,1H),5.02～4.82(m,5H),4.72(m,
2H),4.50～3.83(m,11H),3.52～3.31(m,2H),3.18～2.58(m,11H),1.68～1.18(m,9H),
0.88(m,12H)。
[0385] 实施例6的聚乙二醇化卡非佐米化合物由化合物5和PEG5KN3根据一般聚乙二醇化程序A制备。
[0386] 实施例7：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(4-(异丁酰基氧基)-3-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(6)
基)-4-(4-(异丁酰基氧基)-3-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(6)
[0387]
[0388] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(4-(异丁酰基氧基)-3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
[0389] 向化合物3(0.5g，1.6mmol)于MeCN(9mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-
2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(864mg,1.2mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌20小时。浓缩溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/
MeOH＝100:6)纯化以提供所需化合物4，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化
1
为相应甲磺酸盐(500mg，44％产率)；H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.67(m,1H),7.82(m,1H),
7.27(m,16H),6.85(m,1H),6.47(m,1H),5.13(m,1H),5.02(m,1H),4.85(m,1H),4.70(m,
2H),4.45(m,2H),4.37(m,2H),4.23(m,4H),3.92(m,2H),3.84(m,1H),3.46(m,1H),3.35(m,
1H),3.15(m,1H),3.03(m,1H),2.92(m,1H),2.80(s,3H),2.73(m,2H),2.58(m,1H),2.20(m,
1H),2.12(m,1H),1.70(m,1H),1.62(m,3H),1.43(m,4H),1.28(m,6H),1.21(m,3H),0.85(m,
12H)。
2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(864mg,1.2mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌20小时。浓缩溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/
MeOH＝100:6)纯化以提供所需化合物4，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化
1
为相应甲磺酸盐(500mg，44％产率)；H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.67(m,1H),7.82(m,1H),
7.27(m,16H),6.85(m,1H),6.47(m,1H),5.13(m,1H),5.02(m,1H),4.85(m,1H),4.70(m,
2H),4.45(m,2H),4.37(m,2H),4.23(m,4H),3.92(m,2H),3.84(m,1H),3.46(m,1H),3.35(m,
1H),3.15(m,1H),3.03(m,1H),2.92(m,1H),2.80(s,3H),2.73(m,2H),2.58(m,1H),2.20(m,
1H),2.12(m,1H),1.70(m,1H),1.62(m,3H),1.43(m,4H),1.28(m,6H),1.21(m,3H),0.85(m,
12H)。
[0390] 实施例7通过类似于实施例3和5中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得，并且化合物5和PEG5KN3根据一般聚乙二醇化程序A反应。
[0391] 实施例8：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(4-(丁酰基氧基)-3-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
(6)
基)-4-(4-(丁酰基氧基)-3-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
(6)
[0392]
[0393] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(4-(丁酰基氧基)-3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
[0394] 向化合物3(0.7g，2.25mmol)于MeCN(8mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(0.8g,1.125mmol)。
所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱
(EtOAc/MeOH＝100/3)纯化以提供所需化合物4(500mg，23.3％产率)，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(460mg，92％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.73(m,1H),7.76(m,1H),7.33～7.10(m,13H),6.91(m,1H),6.52(m,1H),5.18(m,1H),5.08～
4.85(m,2H),4.72(m,2H),4.50～3.78(m,11H),3.52～3.31(m,2H),3.18～2.58(m,11H),
2.18(m,2H),1.68～1.24(m,12H),0.84(m,12H)。
所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱
(EtOAc/MeOH＝100/3)纯化以提供所需化合物4(500mg，23.3％产率)，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(460mg，92％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.73(m,1H),7.76(m,1H),7.33～7.10(m,13H),6.91(m,1H),6.52(m,1H),5.18(m,1H),5.08～
4.85(m,2H),4.72(m,2H),4.50～3.78(m,11H),3.52～3.31(m,2H),3.18～2.58(m,11H),
2.18(m,2H),1.68～1.24(m,12H),0.84(m,12H)。
[0395] 实施例8通过类似于实施例3中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得(使用丙酰氯来产生与实施例3中所示的中间物1的相关性)，并且化合物5和PEG5KN3根据一般聚乙二醇化程序A反应。
[0396] 实施例9：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(4-(己酰基氧基)-3-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
(6)
基)-4-(4-(己酰基氧基)-3-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
(6)
[0397]
[0398] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(4-(己酰基氧基)-3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
[0399] 向化合物3(1.41g，4.16mmol)于MeCN(25mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(1.0g,
1.39mmol)。所述反应混合物在40～45℃下加热过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝20:1)纯化以提供所需化合物4，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为甲磺酸盐(570mg，41％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.72(m,1H),7.82(m,
1H),7.34～7.15(m,12H),7.10(m,1H),6.82(m,1H),6.43(m,1H),5.15(m,1H),4.98(m,1H),
4.76(m,2H),4.46(m,2H),4.38(m,2H),4.25(m,3H),4.12(m,1H),4.01(m,2H),3.85(m,2H),
3.47(m,1H),3.36(m,1H),3.15(m,1H),3.01(m,2H),2.80(s,3H),2.72(m,2H),2.60(m,2H),
2.51(m,1H),2.35～2.14(m,4H),1.76(m,2H),1.55(m,2H),1.48(m,4H),1.37(m,6H),1.23
(m,3H),0.86(m,12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(1.0g,
1.39mmol)。所述反应混合物在40～45℃下加热过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝20:1)纯化以提供所需化合物4，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为甲磺酸盐(570mg，41％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.72(m,1H),7.82(m,
1H),7.34～7.15(m,12H),7.10(m,1H),6.82(m,1H),6.43(m,1H),5.15(m,1H),4.98(m,1H),
4.76(m,2H),4.46(m,2H),4.38(m,2H),4.25(m,3H),4.12(m,1H),4.01(m,2H),3.85(m,2H),
3.47(m,1H),3.36(m,1H),3.15(m,1H),3.01(m,2H),2.80(s,3H),2.72(m,2H),2.60(m,2H),
2.51(m,1H),2.35～2.14(m,4H),1.76(m,2H),1.55(m,2H),1.48(m,4H),1.37(m,6H),1.23
(m,3H),0.86(m,12H)。
[0400] 实施例9通过类似于实施例3中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得(使用戊酰氯来产生与实施例3中所示的中间物1的相关性)，并且化合物5和PEG5KN3根据一般聚乙二醇化程序A反应。
[0401] 实施例10：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(3-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-4-(辛酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
(6)
基)-4-(3-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-4-(辛酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
(6)
[0402]
[0403] 实施例10通过类似于实施例3中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得(使用庚酰氯和三甲胺来产生与实施例3中所示的中间物1醛的相关性)，并且化合物5和PEG5KN3根据一般聚乙二醇化程序A反应。
[0404] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(4-(辛酰基氧基)-3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
[0405] 向化合物3(1.53g，4.17mmol)于MeCN(25mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(1.00g,
1.39mmol)。所述反应混合物在40～45℃下搅拌过夜。浓缩溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:5)纯化以提供所需化合物4，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(620mg，44％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.69(m,1H),7.82(m,1H),7.34～7.15(m,12H),7.10(m,1H),6.88(m,1H),6.51(m,1H),5.15(m,1H),4.98(m,
1H),4.88(m,1H),4.74(m,2H),4.46(m,2H),4.38(m,2H),4.25(m,4H),4.02(m,2H),3.85(m,
1H),3.47(m,1H),3.36(m,1H),3.15(m,1H),3.01(m,2H),2.83(s,3H),2.72(m,2H),2.60(m,
3H),2.35-2.14(m,3H),1.76(m,2H),1.55(m,2H),1.48-1.23(15H),0.92～0.78(12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(1.00g,
1.39mmol)。所述反应混合物在40～45℃下搅拌过夜。浓缩溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:5)纯化以提供所需化合物4，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(620mg，44％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.69(m,1H),7.82(m,1H),7.34～7.15(m,12H),7.10(m,1H),6.88(m,1H),6.51(m,1H),5.15(m,1H),4.98(m,
1H),4.88(m,1H),4.74(m,2H),4.46(m,2H),4.38(m,2H),4.25(m,4H),4.02(m,2H),3.85(m,
1H),3.47(m,1H),3.36(m,1H),3.15(m,1H),3.01(m,2H),2.83(s,3H),2.72(m,2H),2.60(m,
3H),2.35-2.14(m,3H),1.76(m,2H),1.55(m,2H),1.48-1.23(15H),0.92～0.78(12H)。
[0406] 实施例11：甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-甲基-5-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(8)
[0407]
[0408]
[0409] 3,4-二羟基-5-甲基苯甲醛(1)
[0410] 在-78℃下向化合物4-羟基-3-甲氧基-5-甲基-苯甲醛(2.00g，12.04mmol)于DCM(100mL)中的溶液中添加BBr3(3.02g，12.04mmol)。所述反应混合物在室温下搅拌过夜。所述混合物在-20℃下用饱和NH4Cl(100mL)淬灭。分离两相并且水溶液用EtOAc(50mL)萃取。
组合的有机相经无水MgSO4干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝
1
10:1)纯化以提供化合物1(1.56g，85％产率)；H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.94(s,1H),
9.69(s,1H),9.47(s,1H),7.21(s,1H),7.15(s,1H),2.02(s,3H)。
组合的有机相经无水MgSO4干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝
1
10:1)纯化以提供化合物1(1.56g，85％产率)；H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.94(s,1H),
9.69(s,1H),9.47(s,1H),7.21(s,1H),7.15(s,1H),2.02(s,3H)。
[0411] 4-羟基-3-甲基-5-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(2)
[0412] 在0℃下向NaH(489.12mg，20.38mmol)于DMSO(30mL)中的混合物中添加含化合物1(1.55g，10.19mmol)的DMSO(10mL)。所述混合物搅拌30min并且接着在相同温度下添加3-溴丙-1-炔(1.21g，10.19mmol)。所述反应混合物搅拌30min并且用水(100mL)淬灭。所得溶液经调节至pH＝4-5并且用EtOAc(400mL×3)萃取。组合的EtOAc相用盐水(50mL)洗涤，经无水MgSO4干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1)纯化以提供化合物2(1.7g，88％产率)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.84(s,1H),9.77(s,1H),7.42(m,2H),4.94(d,J＝2.1Hz,2H),3.65(m,1H),2.22(s,3H)。
[0413] 乙酸4-甲酰基-2-甲基-6-(丙-2-炔基氧基)苯酯(3)
[0414] 在0℃下以液滴形式向化合物2(1.60g，8.41mmol)于DCM中的溶液中添加吡啶(2.00g，25.23mmol)、随后乙酰氯(1.32g，16.82mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌1小时并且接着添加水(100mL)。分离两相并且有机相用稀HCl(1N，50mL)洗涤，经无水MgSO4干燥并且浓缩以提供化合物3(2.0g，定量)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.95(s,1H),7.56(m,2H),4.96(m,2H),3.67(m,1H),2.36(m,3H),2.23(s,3H)。
[0415] 乙酸4-(羟基甲基)-2-甲基-6-(丙-2-炔基氧基)苯酯(4)
[0416] 在0℃下分成小份向化合物3(2.00g，8.61mmol)于THF(50mL)中的溶液中添加NaBH4(325.80mg，8.61mmol)。所述反应混合物在相同温度下搅拌1小时并且接着用水(1mL)淬灭。所述混合物用DCM(100mL)稀释，直接经无水MgSO4干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快
1
速柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1)纯化以提供化合物4(1.5g，74％产率)；H NMR(300MHz,
DMSO-d6):δ7.00(s,1H),6.86(s,1H),5.26(m,1H),4.78(d,J＝2.4Hz,2H),4.47(m,2H),
3.61(m,1H),2.31(s,3H),2.11(s,3H)。
1
速柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1)纯化以提供化合物4(1.5g，74％产率)；H NMR(300MHz,
DMSO-d6):δ7.00(s,1H),6.86(s,1H),5.26(m,1H),4.78(d,J＝2.4Hz,2H),4.47(m,2H),
3.61(m,1H),2.31(s,3H),2.11(s,3H)。
[0417] 乙酸4-(溴甲基)-2-甲基-6-(丙-2-炔基氧基)苯酯(5)
[0418] 在0℃下向化合物4(1.50g，6.46mmol)于DCM(50mL)中的溶液中添加PBr3(1.75g，6.46mmol)。所述反应混合物搅拌30min并且接着用水(50mL)淬灭。分离两相并且有机相经无水MgSO4干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝30:1)纯化以提供化合物5(750mg，39％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.00(s,1H),6.94(s,1H),4.73(d,J＝2.4Hz,2H),4.47(s,2H),2.57(m,1H),2.37(s,3H),2.19(s,3H)。
[0419] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-甲基-5-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-
四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
[0420] 向化合物5(351.25mg，1.19mmol)于MeCN(5mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(428.35mg，
595.00umol)。所述反应混合物在40-45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:1)纯化以提供所需化合物6，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(280mg，50％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.68(m,1H),
7.82(m,1H),7.26(m,11H),7.00(m,2H),6.60(m,1H),5.17(m,1H),5.08(m,1H),4.78(m,
3H),4.46(m,4H),4.22(m,4H),4.01(m,2H),3.80(m,2H),3.45(m,2H),3.18(m,1H),3.05(m,
2H),2.80(s,3H),2.73(m,2H),2.60(m,1H),2.43(m,3H),2.20(m,3H),1.58(m,2H),1.46(m,
6H),1.32(m,3H),0.88(m,12H)。
595.00umol)。所述反应混合物在40-45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:1)纯化以提供所需化合物6，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(280mg，50％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.68(m,1H),
7.82(m,1H),7.26(m,11H),7.00(m,2H),6.60(m,1H),5.17(m,1H),5.08(m,1H),4.78(m,
3H),4.46(m,4H),4.22(m,4H),4.01(m,2H),3.80(m,2H),3.45(m,2H),3.18(m,1H),3.05(m,
2H),2.80(s,3H),2.73(m,2H),2.60(m,1H),2.43(m,3H),2.20(m,3H),1.58(m,2H),1.46(m,
6H),1.32(m,3H),0.88(m,12H)。
[0421] 实施例11由化合物7和PEG5KN3根据一般聚乙二醇化程序A反应而制备。
[0422] 实施例12：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(3-(((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨甲酰基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(9)
基)-4-(3-(((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨甲酰基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(9)
[0423]
[0424] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(4-(新戊酰基氧基)-3-(丙-2-炔-1-基氨甲酰基)苯甲基)吗啉-4-鎓(8)
[0425] 向化合物6(400mg，1.1mmol)于MeCN(10mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(720mg，
0.1mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从MeCN/Et2O(v/v,1/5)结晶以提供所需化合物7，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(120mg，11.2％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.63(m,1H),7.82～7.55(m,
4H),7.33～7.08(m,11H),6.85(m,1H),6.62(m,1H),5.13～4.82(m,2H),4.50～3.93(m,
14H),3.42～2.68(m,11H),2.5～1.9(m,6H),1.68～1.18(m,19H),0.88(m,12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(720mg，
0.1mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从MeCN/Et2O(v/v,1/5)结晶以提供所需化合物7，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(120mg，11.2％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.63(m,1H),7.82～7.55(m,
4H),7.33～7.08(m,11H),6.85(m,1H),6.62(m,1H),5.13～4.82(m,2H),4.50～3.93(m,
14H),3.42～2.68(m,11H),2.5～1.9(m,6H),1.68～1.18(m,19H),0.88(m,12H)。
[0426] 实施例12通过类似于实施例4中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得(使用叔丁酰氯来产生与实施例4中所示的中间物1的相关性)，并且化合物8和
PEG5KN3根据一般聚乙二醇化程序A反应。
PEG5KN3根据一般聚乙二醇化程序A反应。
[0427] 实施例13：甲酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(3-((1-(PEG20K-4臂)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
(7)
(7)
[0428]
[0429] 4-羟基-3-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(1)
[0430] 在20℃下向NaH于DMSO(300mL)中的混合物中添加含3,4-二羟基苯甲醛(30g，217.39mmol)的DMSO(50mL)。所述混合物搅拌30min并且添加3-溴丙-1-炔(25.87g，
217.39mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌一小时并且接着倾入冰水中。所得溶液经调节至pH＝2并且接着用EtOAc(500mL×3)萃取。组合的有机相经无水MgSO4干燥并且浓缩。残留物重复地从DCM/石油醚(30mL/500mL)结晶以提供化合物1(30g，78％产率)；1H NMR(CDCl3,
300MHz,):δ9.89(s,1H),7.54(d,J＝1.2Hz,1H),7.49(dd,J1＝1.5Hz,J2＝8.1Hz,1H),7.09(d,J＝8.1Hz,1H),4.82(m,2H),2.62(m,1H)。
217.39mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌一小时并且接着倾入冰水中。所得溶液经调节至pH＝2并且接着用EtOAc(500mL×3)萃取。组合的有机相经无水MgSO4干燥并且浓缩。残留物重复地从DCM/石油醚(30mL/500mL)结晶以提供化合物1(30g，78％产率)；1H NMR(CDCl3,
300MHz,):δ9.89(s,1H),7.54(d,J＝1.2Hz,1H),7.49(dd,J1＝1.5Hz,J2＝8.1Hz,1H),7.09(d,J＝8.1Hz,1H),4.82(m,2H),2.62(m,1H)。
[0431] 新戊酸4-甲酰基-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(2)
[0432] 在0℃下向化合物1(3.0g，17mmol)于DCM(120mL)中的溶液中添加Et3N(3.45g，34mmol)、随后新戊酰氯(2.34g，20.4mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌2小时。所述混合物用饱和NaHCO3(20mL)和水(20mL)洗涤，经无水MgSO4干燥，并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱
1
色谱(石油醚/EtOAc＝50:1)纯化以提供呈白色固体状的化合物2(2.10g，47％产率)；H
NMR(CDCl3,300MHz):δ9.99(s,1H),7.61(d,J＝1.8Hz,1H),7.55(dd,J1＝1.8Hz,J2＝8.1Hz,
1H),7.26(d,J＝8.1Hz,1H),4.77(d,J＝2.4Hz,2H),2.58(t,J＝2.4Hz,1H),1.42(s,9H)。
1
色谱(石油醚/EtOAc＝50:1)纯化以提供呈白色固体状的化合物2(2.10g，47％产率)；H
NMR(CDCl3,300MHz):δ9.99(s,1H),7.61(d,J＝1.8Hz,1H),7.55(dd,J1＝1.8Hz,J2＝8.1Hz,
1H),7.26(d,J＝8.1Hz,1H),4.77(d,J＝2.4Hz,2H),2.58(t,J＝2.4Hz,1H),1.42(s,9H)。
[0433] 新戊酸4-(羟基甲基)-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(3)
[0434] 在0℃下向化合物2(1.8g，6.9mmol)于DCM/MeOH(100mL/10mL)中的溶液中添加NaBH4(0.37g，10.4mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌30min。所述混合物通过丙酮(3mL)淬灭并且浓缩溶剂。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物3
(1.50g，83％产率)；1H NMR(CDCl3,300MHz):δ7.11(m,1H),7.00(m,2H),4.68(m,4H),2.53(m,1H),1.41(s,9H)。
(1.50g，83％产率)；1H NMR(CDCl3,300MHz):δ7.11(m,1H),7.00(m,2H),4.68(m,4H),2.53(m,1H),1.41(s,9H)。
[0435] 新戊酸4-(溴甲基)-2-(丙-2-炔基氧基)苯酯(4)
[0436] 在0℃下向化合物3(1.50g，5.7mmol)于DCM(60mL)中的溶液中添加PPh3(1.80g，6.8mmo)和NBS(1.11g，6.3mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌0.5小时。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝50:1)纯化以提供化合物4(1.34g，81％产
率)；1H NMR(CDCl3,300MHz):δ7.12(d,J＝1.5Hz,1H),7.03(m,2H),4.70(d,J＝2.4Hz,2H),
4.51(d,J＝3.9Hz,2H),2.56(t,J＝2.4Hz,1H),1.40(s,9H)。
率)；1H NMR(CDCl3,300MHz):δ7.12(d,J＝1.5Hz,1H),7.03(m,2H),4.70(d,J＝2.4Hz,2H),
4.51(d,J＝3.9Hz,2H),2.56(t,J＝2.4Hz,1H),1.40(s,9H)。
[0437] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(4-(新戊酰基氧基)-3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(6)
[0438] 向化合物4(2.38g，7.3mmol)于MeCN(30mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(2.64g，
3.7mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:6)纯化以提供所需化合物5，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(1.23g，25％产率)；1H NMR(CDCl3,300MHz):δ9.83(m,1H),7.92(m,
1H),7.50-7.11(m,13H),7.03(m,1H),6.62(m,1H),5.25(m,1H),5.15-4.90(m,2H),4.88-
4.75(m,2H),4.70-4.20(m,7H),4.20-3.90(m,3H),3.70-3.40(m,4H),3.26(m,1H),3.15(m,
2H),2.90(s,3H),2.85(m,2H),2.40-2.10(m,2H),1.87-1.63(m,5H),1.55(m,3H),1.41(s,
9H),1.38(m,2H),0.89-1.05(m,12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(2.64g，
3.7mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:6)纯化以提供所需化合物5，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(1.23g，25％产率)；1H NMR(CDCl3,300MHz):δ9.83(m,1H),7.92(m,
1H),7.50-7.11(m,13H),7.03(m,1H),6.62(m,1H),5.25(m,1H),5.15-4.90(m,2H),4.88-
4.75(m,2H),4.70-4.20(m,7H),4.20-3.90(m,3H),3.70-3.40(m,4H),3.26(m,1H),3.15(m,
2H),2.90(s,3H),2.85(m,2H),2.40-2.10(m,2H),1.87-1.63(m,5H),1.55(m,3H),1.41(s,
9H),1.38(m,2H),0.89-1.05(m,12H)。
[0439] 化合物实施例13由化合物6和PEG20K(N3)4根据一般聚乙二醇化程序A制备。化合物实施例13还在本文中所说明的多个图中经指定为OP-59381。1H NMR(500MHz,弛豫时间＝10s,DMSO-d6)δ8.47(s,4H),8.42(d,J＝8.5Hz,4H),8.29(d,J＝7.5Hz,4H),8.11(s,4H),
8.07(d,J＝8Hz,4H),7.53(s,4H),7.26-7.29(m,4H),7.11-7.19(m,32H),7.05-7.06(m,
4H),5.21(s,8H),4.95(dd,J＝12.5Hz和39.0Hz,8H),4.52-4.54(m,12H),4.28-4.38(m,
16H),4.17-4.20(m,4H),4.06(m,20H),3.78(t,J＝5.5Hz,8H),3.61-3.65(m,8H),3.50(s,
2133H),3.35-3.37(m,8H),3.10(d,J＝5Hz,4H),2.94-2.98(m,12H),2.73-2.78(m,4H),
2.50-2.65(m,8H),1.90-1.98(m,4H),1.78-1.88(m,4H),1.51-1.68(m,8H),1.39(s,12H),
1.25-1.38(m,16H),1.18(s,36H),0.833-0.881(m,24H),0.782-0.815(m,24H)；负载：86％。
8.07(d,J＝8Hz,4H),7.53(s,4H),7.26-7.29(m,4H),7.11-7.19(m,32H),7.05-7.06(m,
4H),5.21(s,8H),4.95(dd,J＝12.5Hz和39.0Hz,8H),4.52-4.54(m,12H),4.28-4.38(m,
16H),4.17-4.20(m,4H),4.06(m,20H),3.78(t,J＝5.5Hz,8H),3.61-3.65(m,8H),3.50(s,
2133H),3.35-3.37(m,8H),3.10(d,J＝5Hz,4H),2.94-2.98(m,12H),2.73-2.78(m,4H),
2.50-2.65(m,8H),1.90-1.98(m,4H),1.78-1.88(m,4H),1.51-1.68(m,8H),1.39(s,12H),
1.25-1.38(m,16H),1.18(s,36H),0.833-0.881(m,24H),0.782-0.815(m,24H)；负载：86％。
[0440] 实施例14：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(4-(异丁酰基氧基)-3-((1-PEG20K-4臂-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)吗
啉-4-鎓(14)
基)-4-(4-(异丁酰基氧基)-3-((1-PEG20K-4臂-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)吗
啉-4-鎓(14)
[0441]
[0442] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(4-(异丁酰基氧基)-3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
[0443] 向化合物3(0.5g，1.6mmol)于MeCN(9mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-
2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(864mg，1.2mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌20小时。浓缩溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/
MeOH＝100:6)纯化以提供所需化合物4，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(500mg，44％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.67(m,1H),7.82(m,1H),
7.27(m,16H),6.85(m,1H),6.47(m,1H),5.13(m,1H),5.02(m,1H),4.85(m,1H),4.70(m,
2H),4.45(m,2H),4.37(m,2H),4.23(m,4H),3.92(m,2H),3.84(m,1H),3.46(m,1H),3.35(m,
1H),3.15(m,1H),3.03(m,1H),2.92(m,1H),2.80(s,3H),2.73(m,2H),2.58(m,1H),2.20(m,
1H),2.12(m,1H),1.70(m,1H),1.62(m,3H),1.43(m,4H),1.28(m,6H),1.21(m,3H),0.85(m,
12H)。
2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(864mg，1.2mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌20小时。浓缩溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/
MeOH＝100:6)纯化以提供所需化合物4，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(500mg，44％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.67(m,1H),7.82(m,1H),
7.27(m,16H),6.85(m,1H),6.47(m,1H),5.13(m,1H),5.02(m,1H),4.85(m,1H),4.70(m,
2H),4.45(m,2H),4.37(m,2H),4.23(m,4H),3.92(m,2H),3.84(m,1H),3.46(m,1H),3.35(m,
1H),3.15(m,1H),3.03(m,1H),2.92(m,1H),2.80(s,3H),2.73(m,2H),2.58(m,1H),2.20(m,
1H),2.12(m,1H),1.70(m,1H),1.62(m,3H),1.43(m,4H),1.28(m,6H),1.21(m,3H),0.85(m,
12H)。
[0444] 实施例14通过类似于实施例3、5和7中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得(使用异丙酰氯来产生与实施例3中所示的中间物1的相关性)，并且化合物5和PEG20KN3根据一般聚乙二醇化程序A反应。
[0445] 实施例15：甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-(2-(2-(2-((1-PEG5K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-
15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(9)
15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(9)
[0446]
[0447] 2-(2-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇(1)
[0448] 在0℃下向NaH(3.47g，0.086mol)于THF(320mL)中的混合物中添加2,2'-(乙烷-1,2–二基双(氧基))二乙醇(20g，0.133mol)。所述混合物在相同温度下搅拌30min并且接着添加3-溴丙-1-炔(7.93g，0.066mol)。所述反应混合物在0℃下保持2小时并且接着留在RT下过夜。所述混合物用水(4mL)淬灭并且所得溶液直接经无水MgSO4干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1)纯化以提供化合物1(10.12g，80％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.21(d,J＝2.0Hz,2H),3.75-3.68(m,10H),3.62(m,2H),2.44(m,1H),
2.23(s,1H)。
2.23(s,1H)。
[0449] 4-甲基苯磺酸2-(2-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯(2)
[0450] 在0℃下向化合物1(5g，26.6mmol)于DCM(80mL)中的溶液中添加TsCl(7.6g，39.89mmol)、随后吡啶(25mL)。所述反应混合物在RT下搅拌过夜。所述DCM溶液用HCl(3N，
50mL×4)洗涤，经干燥并且浓缩以提供化合物2(7.89g，87％产率)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤中；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.80(d,J＝8.4Hz,2H),7.34(d,J＝
8.0Hz,2H),4.20(m,4H),3.68(m,6H),3.61(m,4H),2.45(m,1H),2.40(m,3H)。
50mL×4)洗涤，经干燥并且浓缩以提供化合物2(7.89g，87％产率)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤中；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.80(d,J＝8.4Hz,2H),7.34(d,J＝
8.0Hz,2H),4.20(m,4H),3.68(m,6H),3.61(m,4H),2.45(m,1H),2.40(m,3H)。
[0451] 4-羟基-3-(2-(2-(2-(丙-2-炔基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯甲醛(3)
[0452] 在20℃下依序向NaH(0.82g，20.47mmol)于DMSO(50mL)中的混合物中添加3,4-二羟基苯甲醛(1.41g，10.23mmol)于DMSO(5mL)中的溶液和化合物2(3.5g，10.23mmol)于DMSO(5mL)中的溶液。所述反应混合物在RT下搅拌过夜。所述混合物倾入冰水(500mL)中并且这一水溶液由2N HCl调节至pH＝2。所得混合物用EtOAc(50mL×3)萃取并且组合的EtOAc相经无水MgSO4干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1)纯化以提供化合物3(579mg，18％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.80(s,1H),7.46(m,2H),7.03(d,J＝
7.6Hz,1H),4.25(m,4H),3.88(m,2H),3.70(m,8H),2.45(m,1H)。
7.6Hz,1H),4.25(m,4H),3.88(m,2H),3.70(m,8H),2.45(m,1H)。
[0453] 乙酸4-甲酰基-2-(2-(2-(2-(丙-2-炔基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯酯(4)
[0454] 在0℃下向化合物3(479mg，1.56mmol)于THF(20mL)中的溶液中添加TEA(471mg，4.67mmol)和Ac2O(238mg，2.33mmol)。所述反应混合物在室温下搅拌3小时。浓缩过量溶剂并且残留物溶解于EtOAc(40mL)中。所得溶液用水(50mL)洗涤，经无水MgSO4干燥并且浓缩。
残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1)纯化以提供化合物4(400mg，74％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.94(s,1H),7.52(d,J＝1.6Hz,1H),7.49(dd,J1＝1.6Hz,J2＝
8.0Hz,1H),7.22(d,J＝8.0Hz,1H),4.23(m,2H),4.20(m,2H),3.86(m,2H),3.72(m,8H),
2.43(m,1H),2.34(s,3H)。
残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1)纯化以提供化合物4(400mg，74％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.94(s,1H),7.52(d,J＝1.6Hz,1H),7.49(dd,J1＝1.6Hz,J2＝
8.0Hz,1H),7.22(d,J＝8.0Hz,1H),4.23(m,2H),4.20(m,2H),3.86(m,2H),3.72(m,8H),
2.43(m,1H),2.34(s,3H)。
[0455] 乙酸4-(羟基甲基)-2-(2-(2-(2-(丙-2-炔基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯酯(5)
[0456] 在0℃下逐滴向化合物4(1.18g，3.38mmol)于THF(50mL)中的溶液中添加BH3/THF溶液(3.4mL，3.38mmol)。所述反应混合物搅拌30min并且接着用MeOH(5mL)淬灭。浓缩反应溶液并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1)纯化以提供化合物5(700mg，
59％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.09(d,J＝1.8Hz,1H),7.03(d,J＝8.1Hz,1H),6.94(dd,J1＝1.8Hz,J2＝8.1Hz,1H),4.68(s,2H),4.22(m,4H),3.85(m,2H),3.74(m,8H),2.46
(m,1H),2.33(s,3H)。
59％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.09(d,J＝1.8Hz,1H),7.03(d,J＝8.1Hz,1H),6.94(dd,J1＝1.8Hz,J2＝8.1Hz,1H),4.68(s,2H),4.22(m,4H),3.85(m,2H),3.74(m,8H),2.46
(m,1H),2.33(s,3H)。
[0457] 乙酸4-(溴甲基)-2-(2-(2-(2-(丙-2-炔基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯酯(6)
[0458] 在0℃下分成小份向化合物5(680mg，1.93mmol)于DCM(40mL)中的溶液中添加PPh3(607mg，2.32mmol)、随后NBS(374mg，2.13mmol)。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物6(430mg，54％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.03(s,1H),6.99(m,2H),4.46(s,2H),4.20-4.16(m,4H),3.83(m,2H),3.68(m,8H),2.43(m,1H),2.29(s,3H)。化合物6使用如本文所述的类似方法转化为化合物8。
[0459] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-(2-(2-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(8)
[0460] 向化合物6(430mg，1.04mmol)于MeCN(5mL)中的溶液中添加化合物(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(743mg，1.04mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝10:1)纯化以提供所需产物7(160mg，14％产率)，所述产物接着通过用离
1
子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(135mg，85％产率)；H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.68(m,1H),7.73(m,1H),7.29-7.05(m,13H),6.82(m,1H),6.40(m,1H),5.15(m,1H),5.08(m,
1H),5.02(m,1H),4.82(m,2H),4.51(m,2H),4.38(m,3H),4.20(m,4H),4.15(m,2H),4.03(m,
2H),3.84(m,1H),3.76(m,2H),3.65(m,9H),3.50(m,1H),3.38(m,1H),3.18(m,1H),3.02(m,
2H),2.86(m,1H),2.80(s,3H),2.64(m,2H),2.46(m,1H),2.32(m,3H),2.30-2.05(m,3H),
1.60(m,2H),1.52(m,6H),1.24(m,2H),0.84(12H)。
1
子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(135mg，85％产率)；H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.68(m,1H),7.73(m,1H),7.29-7.05(m,13H),6.82(m,1H),6.40(m,1H),5.15(m,1H),5.08(m,
1H),5.02(m,1H),4.82(m,2H),4.51(m,2H),4.38(m,3H),4.20(m,4H),4.15(m,2H),4.03(m,
2H),3.84(m,1H),3.76(m,2H),3.65(m,9H),3.50(m,1H),3.38(m,1H),3.18(m,1H),3.02(m,
2H),2.86(m,1H),2.80(s,3H),2.64(m,2H),2.46(m,1H),2.32(m,3H),2.30-2.05(m,3H),
1.60(m,2H),1.52(m,6H),1.24(m,2H),0.84(12H)。
[0461] 实施例15由化合物8和PEG5KN3根据一般聚乙二醇化程序A制备。
[0462] 实施例16：甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-(1-(PEG5K-亚氨基)乙基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,
11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(5)
11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(5)
[0463]
[0464] 乙酸2-乙酰基-4-甲基苯酯(1)
[0465] 在0℃下向1-(2-羟基-5-甲基苯基)乙酮(1.5g，0.01mol)于DCM(15mL)中的溶液中添加TEA(1.5g，0.015mol)和乙酰氯(0.94g，0.012mol)。所述反应混合物在室温下搅拌过夜。这一混合物用水(20mL)淬灭。收集DCM相，用盐水(20mL)洗涤，经无水MgSO4干燥，并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物1(0.9g，47％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.64(m,1H),7.37(m,1H),7.02(d,J＝8.1Hz,1H),2.57(s,3H),2.42(s,3H),2.37(s,3H)。
[0466] 乙酸2-乙酰基-4-(溴甲基)苯酯(2)
[0467] 向化合物1(0.5g，2.6mmol)于CCl4(20mL)中的溶液中添加NBS(573mg，3.25mmol)和AIBN(42.6mg，0.26mmol)。所述反应混合物在回流下加热过夜。所述混合物冷却至RT并且过滤。浓缩滤液并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1)纯化以提供化合物2(160mg，23％产率)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.02(m,1H),7.73(d,J＝8.1Hz,1H),7.25(d,J＝8.4Hz,1H),4.81(s,2H),2.53(s,3H),2.32(s,3H)。
[0468] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-乙酰基苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(4)
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(4)
[0469] 向化合物2(1.03g，3.7mmol)于MeCN(10mL)中的溶液中添加化合物(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(884.7mg，1.23mmol)。所述反应混合物在45℃下加热过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:3)纯化以提供所需化合物3，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(260mg，21％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.62(m,1H),8.06(m,
1H),7.88～7.71(m,2H),7.33～7.11(m,11H),6.95(m,1H),6.66(m,1H),5.33～4.91(m,
2H),4.55～3.90(m,11H),3.58～2.91(m,4H),2.85(s,3H),2.74(m,2H),2.61(s,3H),2.40
(s,3H),2.31～1.94(m,7H),1.72～1.18(m,8H),0.88(m,12H)。
1H),7.88～7.71(m,2H),7.33～7.11(m,11H),6.95(m,1H),6.66(m,1H),5.33～4.91(m,
2H),4.55～3.90(m,11H),3.58～2.91(m,4H),2.85(s,3H),2.74(m,2H),2.61(s,3H),2.40
(s,3H),2.31～1.94(m,7H),1.72～1.18(m,8H),0.88(m,12H)。
[0470] 实施例16由化合物4和PEG5KONH3+.MsO-根据一般聚乙二醇化程序B制备。
[0471] 实施例17：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(3-(1-(PEG5K-亚氨基)乙基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
基)-4-(3-(1-(PEG5K-亚氨基)乙基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
[0472]
[0473] 甲烷磺酸4-(3-乙酰基-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙
基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(4)
基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(4)
[0474] 向化合物2(1.03g，3.2mmol)于MeCN(10mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(766mg，
1.06mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从EtOAc/Et2O(5/1,v/v)结晶以提供所需化合物3，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(300mg，32％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.68(m,1H),8.06(m,1H),7.75(m,
1H),7.40-7.15(m,12H),6.92(m,1H),6.65(m,1H),5.28-4.96(m,2H),4.55-4.42(m,4H),
4.38-4.18(m,4H),4.07-3.90(m,3H),3.60-3.30(m,2H),3.17(m,2H),3.04(m,2H),2.85(s,
3H),2.80(m,2H),2.63(s,3H),2.44(s,3H),2.28-2.12(m,2H),2.04(m,3H),1.76(m,3H),
1.50-1.40(m,6H),1.30-1.18(m,4H),0.92-0.84(m,12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(766mg，
1.06mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从EtOAc/Et2O(5/1,v/v)结晶以提供所需化合物3，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(300mg，32％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.68(m,1H),8.06(m,1H),7.75(m,
1H),7.40-7.15(m,12H),6.92(m,1H),6.65(m,1H),5.28-4.96(m,2H),4.55-4.42(m,4H),
4.38-4.18(m,4H),4.07-3.90(m,3H),3.60-3.30(m,2H),3.17(m,2H),3.04(m,2H),2.85(s,
3H),2.80(m,2H),2.63(s,3H),2.44(s,3H),2.28-2.12(m,2H),2.04(m,3H),1.76(m,3H),
1.50-1.40(m,6H),1.30-1.18(m,4H),0.92-0.84(m,12H)。
[0475] 实施例17通过类似于实施例16中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得(使用叔丁酰氯来产生与实施例16中所示的中间物1的相关性)，并且化合物4和PEG5KONH3+.MsO-根据一般聚乙二醇化程序B。
[0476] 实施例18：甲烷磺酸4-(3-乙酰氧基-4-((PEG5K-亚氨基)甲基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,
11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(8)
11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(8)
[0477]
[0478] 2-羟基-5-(羟基甲基)苯甲醛(1)
[0479] 向甲醛水溶液(37％，17mL)中添加2-羟基苯甲醛(10.3g，84.4mmol)和浓HCl(42mL)。所述反应混合物在回流下加热过夜。所述混合物冷却至RT并且接着用EtOAc
(200mL)萃取。有机相经无水硫酸钠干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物1(1.97g，15％产率)；1H NMR(DMSO-d6,300MHz):δ10.61(s,
1H),10.26(s,1H),7.60(d,J＝2.1Hz,1H),7.46(dd,J＝2.4,8.7Hz,1H),6.96(d,J＝8.4Hz,
1H),5.18(m,1H),4.42(d,J＝3.3Hz,2H)。
(200mL)萃取。有机相经无水硫酸钠干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物1(1.97g，15％产率)；1H NMR(DMSO-d6,300MHz):δ10.61(s,
1H),10.26(s,1H),7.60(d,J＝2.1Hz,1H),7.46(dd,J＝2.4,8.7Hz,1H),6.96(d,J＝8.4Hz,
1H),5.18(m,1H),4.42(d,J＝3.3Hz,2H)。
[0480] 5-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-羟基苯甲醛(2)
[0481] 向化合物1(2.01g，13.2mmol)于DCM(60mL)中的溶液中添加咪唑(1.43g，21mmol)。所述溶液冷却至0℃并且添加叔丁基氯二甲基硅烷(2.57g，17.1mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌3h并且接着倾入水(50mL)中。分离两相并且有机相经无水硫酸钠干燥并且浓缩。
残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝50:1)纯化以提供化合物2(3.2g，91％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ10.85(br,s,1H),9.78(s,1H),7.41(d,J＝2.0Hz,1H),7.35(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),4.59(s,2H),0.82(s,9H),0.00(s,6H)。
残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝50:1)纯化以提供化合物2(3.2g，91％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ10.85(br,s,1H),9.78(s,1H),7.41(d,J＝2.0Hz,1H),7.35(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),4.59(s,2H),0.82(s,9H),0.00(s,6H)。
[0482] 乙酸4-((叔丁基二甲基硅烷基氧基)甲基)-2-甲酰基苯酯(3)
[0483] 向化合物2(25g，94mmol)于DCM(500mL)中的溶液中添加TEA(19.0g，188mmol)。所述混合物冷却至0℃并且添加乙酰氯(11.1g，141mmol)。所述反应混合物在室温下搅拌2h。所述混合物用水(500mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝100:1)纯化以提供化合物3(19.7g，68％产率)；1H NMR(CDCl3,
400MHz):δ9.98(s,1H),7.70(d,J＝2.0Hz,1H),7.49(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),7.03(d,J＝
2.4Hz,1H),4.66(s,2H),2.28(s,3H),0.83(s,9H),0.00(s,6H)。
400MHz):δ9.98(s,1H),7.70(d,J＝2.0Hz,1H),7.49(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),7.03(d,J＝
2.4Hz,1H),4.66(s,2H),2.28(s,3H),0.83(s,9H),0.00(s,6H)。
[0484] 乙酸2-甲酰基-4-(羟基甲基)苯酯(4)
[0485] 化合物3(3.6g，11.7mmol)溶解于AcOH/THF/H2O(50mL/25mL/25mL)中。所述反应混合物在30℃下搅拌3h。去除过量THF并且所得溶液经调节至pH＝7-8并且接着用EtOAc(50mL×3)萃取。组合的有机相经无水硫酸钠干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物4(2.04g，90％产率)；1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ10.08(s,1H),7.85(d,J＝2.0Hz,1H),7.67(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),7.26(d,J＝8.4Hz,1H),4.57
(s,2H),2.35(s,3H)。
(s,2H),2.35(s,3H)。
[0486] 乙酸4-(溴甲基)-2-甲酰基苯酯(5a)
[0487] 在0℃下向化合物4(2.03g，10.3mmol)于DCM(80mL)中的溶液中添加PBr3(2.79g，10.3mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌4h。所述反应通过添加水(20mL)淬灭并且所得混合物用饱和NaHCO3水溶液调节至pH＝7。分离有机相，经无水硫酸钠干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物5a(300mg，11％产率)；1H NMR(CDCl3,300MHz):δ10.12(s,1H),7.92(d,J＝2.1Hz,1H),7.68(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),7.22(d,J＝8.1Hz,1H),4.54(s,2H),2.42(s,3H)。
[0488] 乙酸4-(碘甲基)-2-甲酰基苯酯(5b)
[0489] 在0℃下向化合物4(5.0g，27.55mmol)于DCM(300mL)中的溶液中添加SOCl2(6.13g，51.55mmol)。所述反应混合物在回流下加热过夜。浓缩所述混合物并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1)纯化以提供相应苯甲基氯(2.4g，44％产率)；1H NMR(CDCl3,300MHz):δ10.12(s,1H),7.92(d,J＝2.4Hz,1H),7.68(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),
7.22(d,J＝2.4Hz,1H),4.64(s,2H),2.42(s,3H)。
7.22(d,J＝2.4Hz,1H),4.64(s,2H),2.42(s,3H)。
[0490] 向苯甲基氯(2.4g，11.29mmol)于丙酮(160mL)中的溶液中添加NaI(16.94g，112.94mmol)。所述反应混合物在30℃下搅拌过夜。浓缩所述混合物并且残留物溶解于DCM(100mL)中。所得溶液用饱和Na2S2O3水溶液(50mL×3)和水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并且浓缩以提供化合物5b(2.1g，61％产率)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤中。1H NMR(CDCl3,300MHz):δ10.10(s,1H),7.90(d,J＝2.4Hz,1H),7.66(dd,J＝2.1,8.4Hz,
1H),7.16(d,J＝2.4Hz,1H),4.49(s,2H),2.41(s,3H)。
1H),7.16(d,J＝2.4Hz,1H),4.49(s,2H),2.41(s,3H)。
[0491] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-甲酰基苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
[0492] 向化合物5b(380mg，1.48mmol)于MeCN(5mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(532mg，
0.74mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。在减压下去除溶剂。残留物通过硅胶快速柱色谱(DCM/MeOH＝10:1)纯化以提供所需化合物(6)，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(280mg，39％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ10.15(s,1H),
9.53(br s,1H),8.03(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(m,1H),7.68(br s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,
1H),7.26-7.13(m,10H),6.84(br s,1H),6.52(br s,1H),5.20(m,2H),4.97(m,1H),4.50-
3.96(m,7H),3.46-3.28(m,2H),3.16(m,1H),3.06-2.92(m,3H),2.85-2.61(m,7H),2.44(s,
3H),2.14(m,2H),1.69-1.17(m,11H),0.89-0.83(m,12H)。化合物5a还可能用于这一反应。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(532mg，
0.74mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。在减压下去除溶剂。残留物通过硅胶快速柱色谱(DCM/MeOH＝10:1)纯化以提供所需化合物(6)，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(280mg，39％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ10.15(s,1H),
9.53(br s,1H),8.03(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(m,1H),7.68(br s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,
1H),7.26-7.13(m,10H),6.84(br s,1H),6.52(br s,1H),5.20(m,2H),4.97(m,1H),4.50-
3.96(m,7H),3.46-3.28(m,2H),3.16(m,1H),3.06-2.92(m,3H),2.85-2.61(m,7H),2.44(s,
3H),2.14(m,2H),1.69-1.17(m,11H),0.89-0.83(m,12H)。化合物5a还可能用于这一反应。
[0493] 实施例18由化合物7和PEG5KONH3+.MsO-根据一般聚乙二醇化程序A制备。
[0494] 实施例19：甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-((E)-((2-(PEG5K-氨基)-2-氧代乙氧基)亚氨基)甲基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(8)
[0495]
[0496]
[0497] 2-羟基-5-(羟基甲基)苯甲醛(1)
[0498] 向甲醛水溶液(37％，17mL)中添加2-羟基苯甲醛(10.3g，84.4mmol)和浓HCl(42mL)。所述反应混合物在回流下加热过夜。所述混合物冷却至RT并且接着用EtOAc
(200mL)萃取。有机相经无水硫酸钠干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物1(1.97g，15％产率)；1H NMR(DMSO-d6,300MHz):δ10.61(s,
1H),10.26(s,1H),7.60(d,J＝2.1Hz,1H),7.46(dd,J＝2.4,8.7Hz,1H),6.96(d,J＝8.4Hz,
1H),5.18(m,1H),4.42(d,J＝3.3Hz,2H)。
(200mL)萃取。有机相经无水硫酸钠干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物1(1.97g，15％产率)；1H NMR(DMSO-d6,300MHz):δ10.61(s,
1H),10.26(s,1H),7.60(d,J＝2.1Hz,1H),7.46(dd,J＝2.4,8.7Hz,1H),6.96(d,J＝8.4Hz,
1H),5.18(m,1H),4.42(d,J＝3.3Hz,2H)。
[0499] 5-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-羟基苯甲醛(2)
[0500] 向化合物1(2.01g，13.2mmol)于DCM(60mL)中的溶液中添加咪唑(1.43g，21mmol)。所述溶液冷却至0℃并且添加叔丁基氯二甲基硅烷(2.57g，17.1mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌3h并且接着倾入水(50mL)中。分离两相并且有机相经无水硫酸钠干燥并且浓缩。
残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝50:1)纯化以提供化合物2(3.2g，91％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ10.85(br,s,1H),9.78(s,1H),7.41(d,J＝2.0Hz,1H),7.35(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),4.59(s,2H),0.82(s,9H),0.00(s,6H)。
残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝50:1)纯化以提供化合物2(3.2g，91％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ10.85(br,s,1H),9.78(s,1H),7.41(d,J＝2.0Hz,1H),7.35(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),4.59(s,2H),0.82(s,9H),0.00(s,6H)。
[0501] 乙酸4-((叔丁基二甲基硅烷基氧基)甲基)-2-甲酰基苯酯(3)
[0502] 向化合物2(25g，94mmol)于DCM(500mL)中的溶液中添加TEA(19.0g，188mmol)。所述混合物冷却至0℃并且添加乙酰氯(11.1g，141mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌2h。所述混合物用水(500mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝100:1)纯化以提供化合物3(19.7g，68％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ9.98(s,1H),7.70(d,J＝2.0Hz,1H),7.49(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),7.03(d,J＝2.4Hz,1H),
4.66(s,2H),2.28(s,3H),0.83(s,9H),0.00(s,6H)。
4.66(s,2H),2.28(s,3H),0.83(s,9H),0.00(s,6H)。
[0503] 乙酸2-甲酰基-4-(羟基甲基)苯酯(4)
[0504] 化合物3(3.6g，11.7mmol)溶解于AcOH/THF/H2O(50mL/25mL/25mL)中。所述反应混合物在30℃下搅拌3h。去除过量THF并且所得溶液经调节至pH＝7-8并且接着用EtOAc(50mL×3)萃取。组合的有机相经无水硫酸钠干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物4(2.04g，90％产率)；1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ10.08(s,1H),7.85(d,J＝2.0Hz,1H),7.67(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),7.26(d,J＝8.4Hz,1H),4.57
(s,2H),2.35(s,3H)。
(s,2H),2.35(s,3H)。
[0505] 乙酸4-(溴甲基)-2-甲酰基苯酯(5a)
[0506] 在0℃下向化合物4(2.03g，10.3mmol)于DCM(80mL)中的溶液中添加PBr3(2.79g，10.3mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌4h。所述反应通过添加水(20mL)淬灭并且所得混合物用饱和NaHCO3水溶液调节至pH＝7。分离有机相，经无水硫酸钠干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物5a(300mg，11％产率)；1H NMR(CDCl3,300MHz):δ10.12(s,1H),7.92(d,J＝2.1Hz,1H),7.68(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),7.22(d,J＝8.1Hz,1H),4.54(s,2H),2.42(s,3H)。
[0507] 乙酸4-(碘甲基)-2-甲酰基苯酯(5b)
[0508] 在0℃下向化合物4(5.0g，27.55mmol)于DCM(300mL)中的溶液中添加SOCl2(6.13g，51.55mmol)。所述反应混合物在回流下加热过夜。浓缩所述混合物并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1)纯化以提供相应苯甲基氯(2.4g，44％产率)；1H NMR(CDCl3,300MHz):δ10.12(s,1H),7.92(d,J＝2.4Hz,1H),7.68(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),
7.22(d,J＝2.4Hz,1H),4.64(s,2H),2.42(s,3H)。
7.22(d,J＝2.4Hz,1H),4.64(s,2H),2.42(s,3H)。
[0509] 向苯甲基氯(2.4g，11.29mmol)于丙酮(160mL)中的溶液中添加NaI(16.94g，112.94mmol)。所述反应混合物在30℃下搅拌过夜。浓缩所述混合物并且残留物溶解于DCM(100mL)中。所得溶液用饱和Na2S2O3水溶液(50mL×3)和水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并且浓缩以提供化合物5b(2.1g，61％产率)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤中。1H NMR(CDCl3,300MHz):δ10.10(s,1H),7.90(d,J＝2.4Hz,1H),7.66(dd,J＝2.1,8.4Hz,
1H),7.16(d,J＝2.4Hz,1H),4.49(s,2H),2.41(s,3H)。
1H),7.16(d,J＝2.4Hz,1H),4.49(s,2H),2.41(s,3H)。
[0510] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-甲酰基苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
[0511] 向化合物5b(380mg，1.48mmol)于MeCN(5mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(532mg，
0.74mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。在减压下去除溶剂。残留物通过硅胶快速柱色谱(DCM/MeOH＝10:1)纯化以提供所需化合物(6)，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(280mg，39％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ10.15(s,1H),
9.53(br s,1H),8.03(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(m,1H),7.68(br s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,
1H),7.26-7.13(m,10H),6.84(br s,1H),6.52(br s,1H),5.20(m,2H),4.97(m,1H),4.50-
3.96(m,7H),3.46-3.28(m,2H),3.16(m,1H),3.06-2.92(m,3H),2.85-2.61(m,7H),2.44(s,
3H),2.14(m,2H),1.69-1.17(m,11H),0.89-0.83(m,12H)。化合物5a还可能用于这一反应。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(532mg，
0.74mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。在减压下去除溶剂。残留物通过硅胶快速柱色谱(DCM/MeOH＝10:1)纯化以提供所需化合物(6)，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(280mg，39％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ10.15(s,1H),
9.53(br s,1H),8.03(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(m,1H),7.68(br s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,
1H),7.26-7.13(m,10H),6.84(br s,1H),6.52(br s,1H),5.20(m,2H),4.97(m,1H),4.50-
3.96(m,7H),3.46-3.28(m,2H),3.16(m,1H),3.06-2.92(m,3H),2.85-2.61(m,7H),2.44(s,
3H),2.14(m,2H),1.69-1.17(m,11H),0.89-0.83(m,12H)。化合物5a还可能用于这一反应。
[0512] 实施例19由化合物7和PEG5KNHC(O)CH2ONH2(Creative PEGWorks,Chapel Hill,NC,US)根据一般聚乙二醇化程序A制备。
[0513] 实施例20：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(3-((PEG5K-亚氨基)甲基)-4-(丙酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(7)。
基)-4-(3-((PEG5K-亚氨基)甲基)-4-(丙酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(7)。
[0514]
[0515] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(3-甲酰
基-4-(丙酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(6)
基-4-(丙酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(6)
[0516] 向化合物4(400mg，1.476mmol)于MeCN(5mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(318.8mg，
0.442mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从MeCN/Et2O(1/5,v/v)结晶以提供所需化合物5，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(200mg，15％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ10.18(s,1H),7.68(br,s,1H),
8.03(s,1H),7.88(m,1H),7.72(br,1H),7.38(m,1H),7.30～7.15(m,10H),6.74(m,1H),
6.37(br,1H),5.25～5.01(m,3H),4.50～3.90(m,12H),3.47～3.12(m,3H),2.97(m,2H),
2.97～2.71(m,7H),2.15(m,2H),2.71～1.10(m,9H),0.87(m,12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(318.8mg，
0.442mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从MeCN/Et2O(1/5,v/v)结晶以提供所需化合物5，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(200mg，15％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ10.18(s,1H),7.68(br,s,1H),
8.03(s,1H),7.88(m,1H),7.72(br,1H),7.38(m,1H),7.30～7.15(m,10H),6.74(m,1H),
6.37(br,1H),5.25～5.01(m,3H),4.50～3.90(m,12H),3.47～3.12(m,3H),2.97(m,2H),
2.97～2.71(m,7H),2.15(m,2H),2.71～1.10(m,9H),0.87(m,12H)。
[0517] 实施例20通过类似于实施例16中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得(使用乙酰氯来产生与实施例16中所示的中间物1的相关性)，并且化合物6和+ -
PEG5KONH3 .MsO根据一般聚乙二醇化程序B。
PEG5KONH3 .MsO根据一般聚乙二醇化程序B。
[0518] 实施例21：甲烷磺酸4-(3-乙酰氧基-4-((PEG2K-亚氨基)甲基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,
11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(8)
11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(8)
[0519]
[0520] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-甲酰基苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
[0521] 向化合物5b(380mg，1.48mmol)于MeCN(5mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(532mg，
0.74mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。在减压下去除溶剂。残留物通过硅胶快速柱色谱(DCM/MeOH＝10:1)纯化以提供所需化合物(6)，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(280mg，39％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ10.15(s,1H),
9.53(br s,1H),8.03(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(m,1H),7.68(br s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,
1H),7.26-7.13(m,10H),6.84(br s,1H),6.52(br s,1H),5.20(m,2H),4.97(m,1H),4.50-
3.96(m,7H),3.46-3.28(m,2H),3.16(m,1H),3.06-2.92(m,3H),2.85-2.61(m,7H),2.44(s,
3H),2.14(m,2H),1.69-1.17(m,11H),0.89-0.83(m,12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(532mg，
0.74mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。在减压下去除溶剂。残留物通过硅胶快速柱色谱(DCM/MeOH＝10:1)纯化以提供所需化合物(6)，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(280mg，39％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ10.15(s,1H),
9.53(br s,1H),8.03(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(m,1H),7.68(br s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,
1H),7.26-7.13(m,10H),6.84(br s,1H),6.52(br s,1H),5.20(m,2H),4.97(m,1H),4.50-
3.96(m,7H),3.46-3.28(m,2H),3.16(m,1H),3.06-2.92(m,3H),2.85-2.61(m,7H),2.44(s,
3H),2.14(m,2H),1.69-1.17(m,11H),0.89-0.83(m,12H)。
[0522] 实施例21由化合物7和PEG2KONH3+.MsO-根据一般聚乙二醇化程序A制备。
[0523] 实施例22：甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-(1-(PEG2K-亚氨基)乙基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,
11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(5)
11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(5)
[0524]
[0525] 乙酸2-乙酰基-4-甲基苯酯(1)
[0526] 在0℃下向1-(2-羟基-5-甲基苯基)乙酮(1.5g，0.01mol)于DCM(15mL)中的溶液中添加TEA(1.5g，0.015mol)和乙酰氯(0.94g，0.012mol)。所述反应混合物在RT下搅拌过夜。这一混合物用水(20mL)淬灭。收集DCM相，用盐水(20mL)洗涤，经无水MgSO4干燥，并且浓缩。
残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物1(0.9g，47％产率)；
1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.64(m,1H),7.37(m,1H),7.02(d,J＝8.1Hz,1H),2.57(s,3H),
2.42(s,3H),2.37(s,3H)。
残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化以提供化合物1(0.9g，47％产率)；
1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.64(m,1H),7.37(m,1H),7.02(d,J＝8.1Hz,1H),2.57(s,3H),
2.42(s,3H),2.37(s,3H)。
[0527] 乙酸2-乙酰基-4-(溴甲基)苯酯(2)
[0528] 向化合物1(0.5g，2.6mmol)于CCl4(20mL)中的溶液中添加NBS(573mg，3.25mmol)和AIBN(42.6mg，0.26mmol)。所述反应混合物在回流下加热过夜。所述混合物冷却至RT并且过滤。浓缩滤液并且残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1)纯化以提供化合物2(160mg，23％产率)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.02(m,1H),7.73(d,J＝8.1Hz,1H),7.25(d,J＝8.4Hz,1H),4.81(s,2H),2.53(s,3H),2.32(s,3H)。
[0529] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-乙酰基苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(4)
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(4)
[0530] 向化合物2(1.03g，3.7mmol)于MeCN(10mL)中的溶液中添加化合物(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(884.7mg，1.23mmol)。所述反应混合物在45℃下加热过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:3)纯化以提供所需化合物3，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(260mg，21％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.62(m,1H),8.06(m,
1H),7.88～7.71(m,2H),7.33～7.11(m,11H),6.95(m,1H),6.66(m,1H),5.33～4.91(m,
2H),4.55～3.90(m,11H),3.58～2.91(m,4H),2.85(s,3H),2.74(m,2H),2.61(s,3H),2.40
(s,3H),2.31～1.94(m,7H),1.72～1.18(m,8H),0.88(m,12H)。
1H),7.88～7.71(m,2H),7.33～7.11(m,11H),6.95(m,1H),6.66(m,1H),5.33～4.91(m,
2H),4.55～3.90(m,11H),3.58～2.91(m,4H),2.85(s,3H),2.74(m,2H),2.61(s,3H),2.40
(s,3H),2.31～1.94(m,7H),1.72～1.18(m,8H),0.88(m,12H)。
[0531] 实施例22由化合物4和PEG2KONH3+.MsO-根据一般聚乙二醇化程序B制备。
[0532] 实施例23：甲烷磺酸4-(3-乙酰氧基-4-((PEG3K-亚氨基)甲基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,
11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(8)
11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(8)
[0533]
[0534] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-甲酰基苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
[0535] 向化合物5b(380mg，1.48mmol)于MeCN(5mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(532mg，
0.74mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。在减压下去除溶剂。残留物通过硅胶快速柱色谱(DCM/MeOH＝10:1)纯化以提供所需化合物(6)，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(280mg，39％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ10.15(s,1H),
9.53(br s,1H),8.03(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(m,1H),7.68(br s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,
1H),7.26-7.13(m,10H),6.84(br s,1H),6.52(br s,1H),5.20(m,2H),4.97(m,1H),4.50-
3.96(m,7H),3.46-3.28(m,2H),3.16(m,1H),3.06-2.92(m,3H),2.85-2.61(m,7H),2.44(s,
3H),2.14(m,2H),1.69-1.17(m,11H),0.89-0.83(m,12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(532mg，
0.74mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌过夜。在减压下去除溶剂。残留物通过硅胶快速柱色谱(DCM/MeOH＝10:1)纯化以提供所需化合物(6)，所述化合物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(280mg，39％产率)；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ10.15(s,1H),
9.53(br s,1H),8.03(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(m,1H),7.68(br s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,
1H),7.26-7.13(m,10H),6.84(br s,1H),6.52(br s,1H),5.20(m,2H),4.97(m,1H),4.50-
3.96(m,7H),3.46-3.28(m,2H),3.16(m,1H),3.06-2.92(m,3H),2.85-2.61(m,7H),2.44(s,
3H),2.14(m,2H),1.69-1.17(m,11H),0.89-0.83(m,12H)。
[0536] 实施例23通过类似于实施例16中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得(使用乙酰氯来产生与实施例16中所示的中间物1的相关性)，并且化合物7和PEG3KONH3+.MsO-根据一般聚乙二醇化程序A。
[0537] 实施例24：甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-(1-(PEG3K-亚氨基)乙基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,
11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(5)
11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(5)
[0538]
[0539] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-乙酰基苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(4)
12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(4)
[0540] 向化合物2(1.03g，3.7mmol)于MeCN(10mL)中的溶液中添加化合物(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(884.7mg，1.23mmol)。所述反应混合物在45℃下加热过夜。浓缩过量溶剂并且残留物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc/MeOH＝100:3)纯化以提供所需化合物3，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐(260mg，21％产率)；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.62(m,1H),8.06(m,
1H),7.88～7.71(m,2H),7.33～7.11(m,11H),6.95(m,1H),6.66(m,1H),5.33～4.91(m,
2H),4.55～3.90(m,11H),3.58～2.91(m,4H),2.85(s,3H),2.74(m,2H),2.61(s,3H),2.40
(s,3H),2.31～1.94(m,7H),1.72～1.18(m,8H),0.88(m,12H)。
1H),7.88～7.71(m,2H),7.33～7.11(m,11H),6.95(m,1H),6.66(m,1H),5.33～4.91(m,
2H),4.55～3.90(m,11H),3.58～2.91(m,4H),2.85(s,3H),2.74(m,2H),2.61(s,3H),2.40
(s,3H),2.31～1.94(m,7H),1.72～1.18(m,8H),0.88(m,12H)。
[0541] 实施例24通过类似于实施例22中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似+ -方式制得并且化合物4和PEG3KONH3 .MsO根据一般聚乙二醇化程序B。
[0542] 实施例25.甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(3-(2-(PEG20K-4臂-亚氨基)乙氧基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
基)-4-(3-(2-(PEG20K-4臂-亚氨基)乙氧基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
[0543] 实施例25通过类似于实施例17中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得，同时使用PEG20KONH3+.MsO-并且根据一般聚乙二醇化程序B。
[0544] 实施例26：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(4-(异丁酰基氧基)-3-((PEG5K-亚氨基)甲基)苯甲基)吗啉-4-鎓(6)
基)-4-(4-(异丁酰基氧基)-3-((PEG5K-亚氨基)甲基)苯甲基)吗啉-4-鎓(6)
[0545]
[0546] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(3-甲酰
基-4-(异丁酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
基-4-(异丁酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
[0547] 向化合物3(550mg，1.657mmol)于MeCN(8mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(393mg，
0.547mmol)。所述反应混合物在40℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从
(EtOAc/Et2O＝1:5)结晶以提供所需化合物4，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐5(115mg，7.5％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.18(s,1H),9.68(m,1H),
8.04(m,1H),7.89(m,1H),7.81(s,1H),7.35(m,1H),7.30(m,1H),7.11-7.29(m,9H),6.79
(s,1H),6.44(m,1H),5.18(m,2H),4.99(m,1H),4.41(m,3H),4.20(m,3H),3.99(m,3H),3.40(m,1H),3.30(m,1H),3.20(m,1H),2.95(m,2H),2.92(m,1H),2.79(m,3H),2.75(m,2H),2.21(m,1H),2.09(m,1H),1.83(m,4H),1.62(m,2H),1.49(m,4H),1.38(m,6H),1.24(m,2H),0.88(m,12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(393mg，
0.547mmol)。所述反应混合物在40℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从
(EtOAc/Et2O＝1:5)结晶以提供所需化合物4，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐5(115mg，7.5％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.18(s,1H),9.68(m,1H),
8.04(m,1H),7.89(m,1H),7.81(s,1H),7.35(m,1H),7.30(m,1H),7.11-7.29(m,9H),6.79
(s,1H),6.44(m,1H),5.18(m,2H),4.99(m,1H),4.41(m,3H),4.20(m,3H),3.99(m,3H),3.40(m,1H),3.30(m,1H),3.20(m,1H),2.95(m,2H),2.92(m,1H),2.79(m,3H),2.75(m,2H),2.21(m,1H),2.09(m,1H),1.83(m,4H),1.62(m,2H),1.49(m,4H),1.38(m,6H),1.24(m,2H),0.88(m,12H)。
[0548] 实施例26通过类似于实施例16中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得(使用异丙酰氯来产生与实施例16中所示的中间物1的相关性)，并且化合物5和PEG5KONH3+.MsO-根据一般聚乙二醇化程序B。
[0549] 实施例27：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(3-((PEG5K-亚氨基)甲基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(6)
基)-4-(3-((PEG5K-亚氨基)甲基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(6)
[0550]
[0551] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(3-甲酰
基-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
基-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
[0552] 向化合物3(500mg，1.44mmol)于MeCN(8mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(360mg，
0.5mmol)。所述反应混合物在40℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从(EtOAc/Et2O＝1:5)结晶以提供所需化合物4，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐5(130mg，12％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.17(s,1H),9.74(m,1H),8.01(m,
1H),7.90(m,1H),7.74(m,1H),7.36-7.12(m,11H),6.78(m,1H),6.41(m,1H),5.22(m,1H),
5.14(m,2H),4.58-4.35(m,3H),4.28-4.10(m,3H),4.08-3.83(m,3H),3.38(m,1H),3.29(m,
1H),3.17(m,1H),2.97(m,2H),2.83(s,3H),2.76(m,2H),2.30-2.20(m,2H),1.70-1.58(m,
2H),1.47(m,6H),1.42(s,10H),1.30-1.16(m,3H),0.90-0.84(m,12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(360mg，
0.5mmol)。所述反应混合物在40℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从(EtOAc/Et2O＝1:5)结晶以提供所需化合物4，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐5(130mg，12％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.17(s,1H),9.74(m,1H),8.01(m,
1H),7.90(m,1H),7.74(m,1H),7.36-7.12(m,11H),6.78(m,1H),6.41(m,1H),5.22(m,1H),
5.14(m,2H),4.58-4.35(m,3H),4.28-4.10(m,3H),4.08-3.83(m,3H),3.38(m,1H),3.29(m,
1H),3.17(m,1H),2.97(m,2H),2.83(s,3H),2.76(m,2H),2.30-2.20(m,2H),1.70-1.58(m,
2H),1.47(m,6H),1.42(s,10H),1.30-1.16(m,3H),0.90-0.84(m,12H)。
[0553] 实施例27通过类似于实施例16中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得(使用叔丁酰氯来产生与实施例16中所示的中间物1的相关性)，并且化合物5和PEG5KONH3+.MsO-根据一般聚乙二醇化程序B。
[0554] 实施例28：甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-(1-(PEG5K-亚氨基)乙基)-5-甲基苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-
2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
[0555]
[0556] 2-羟基-5-(羟基甲基)-3-甲基苯甲醛(1)
[0557] 在RT下向2-羟基-3-甲基苯甲醛(5.01g，36.84mmol)和甲醛(37％，7.01g，86.45mmol)的混合物中添加浓HCl(30mL)。所述反应混合物在80℃下加热1h。添加水(90mL)并且所得混合物用EtOAc(100mL×3)萃取。浓缩组合的有机相并且残留物用水(150mL，40
℃)处理。滤出固体并且滤液用EtOAc(100mL×3)萃取。组合的有机相经无水MgSO4干燥并且浓缩以提供化合物1(2.60g，43％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ11.26(s,1H),9.88(s,
1H),7.41(s,2H),4.66(s,2H),2.28(s,3H)。
℃)处理。滤出固体并且滤液用EtOAc(100mL×3)萃取。组合的有机相经无水MgSO4干燥并且浓缩以提供化合物1(2.60g，43％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ11.26(s,1H),9.88(s,
1H),7.41(s,2H),4.66(s,2H),2.28(s,3H)。
[0558] 5-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-羟基-3-甲基苯甲醛(2)
[0559] 在0℃下向化合物1(2.60g，15.66mmol)于DCM(50mL)中的溶液中添加咪唑(2.13g，31.33mmol)。添加TBSCl(3.54g，23.50mmol)于DCM(5mL)中的溶液并且所述反应混合物在室温下搅拌1h。浓缩所述混合物并且残留物通过硅胶快速柱色谱(己烷/EtOAc＝200:1)纯化以生成化合物2(3.90g，88.9％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.85(br,s,1H),9.96(s,
1H),7.44(d,J＝1.6Hz,1H),7.33(d,J＝1.2Hz,1H),4.56(s,2H),2.12(s,3H),0.82(s,9H),
0.00(s,6H)。
1H),7.44(d,J＝1.6Hz,1H),7.33(d,J＝1.2Hz,1H),4.56(s,2H),2.12(s,3H),0.82(s,9H),
0.00(s,6H)。
[0560] 乙酸4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-甲酰基-6-甲基苯酯(3)
[0561] 在0℃下向化合物2(1.70g，6.08mmol)于DCM(50mL)中的溶液中添加TEA(1.23g，12.14mmol)和乙酰氯(715mg，9.11mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌20min。所述混合物用DCM(50mL)稀释并且接着倾入水(100mL)中。分离两相并且有机相用盐水(100mL)洗涤，经无水MgSO4干燥并且浓缩以提供粗化合物3(1.94g，定量)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤；1H NMR_(400MHz,CDCl3):δ9.90(s,1H),7.52(d,J＝1.6Hz,1H),7.35(d,J＝
1.2Hz,1H),4.63(s,2H),2.30(s,3H),2.11(s,3H),0.83(s,9H),0.00(s,6H)。
1.2Hz,1H),4.63(s,2H),2.30(s,3H),2.11(s,3H),0.83(s,9H),0.00(s,6H)。
[0562] 乙酸2-甲酰基-4-(碘甲基)-6-甲基苯酯(4)
[0563] 在0℃下向NaI(4.66g，31.06mmol)于MeCN(50mL)中的溶液中添加化合物3(2.01g，6.21mmol)和SiCl4(1.06g，6.21mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌15min。浓缩所述混合物并且残留物用DCM(100mL)处理。过滤所得混合物并且滤液用饱和Na2S2O3(50mL×2)洗涤，经无水MgSO4干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(己烷/EtOAc＝15:1)纯化以生成化合物4(803mg，41％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.00(s,1H),7.70(d,J＝2.4Hz,1H),
7.52(d,J＝2.0Hz,1H),4.44(s,2H),2.42(s,3H),2.22(s,3H)。
7.52(d,J＝2.0Hz,1H),4.44(s,2H),2.42(s,3H),2.22(s,3H)。
[0564] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-乙酰基-5-甲基苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙
基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(6)
基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(6)
[0565] 向化合物4(803mg，1.57mmol)于MeCN(5mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(340mg,
0.47mmol)。所述反应混合物在40℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物从(EtOAc/Et2O＝1:5)再结晶三次以提供所需碘化物盐5，所述盐通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐6(202mg，47％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.05(s,1H),9.55(m,1H),7.86(m,
1H),7.74(m,2H),7.13-7.29(m,10H),6.85(m,1H),6.51(m,1H),5.23(m,1H),5.05(m,2H),
4.45(m,5H),4.22(m,5H),4.00(m,4H),3.30-3.52(m,2H),3.17(m,1H),2.98(m,2H),2.83
(s,4H),2.76(m,2H),2.46(s,3H),2.29(s,3H),2.08-2.25(m,2H),1.48-1.69(m,4H),1.45
(m,2H),1.38(m,2H),1.25(m,2H),0.88(m,12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(340mg,
0.47mmol)。所述反应混合物在40℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物从(EtOAc/Et2O＝1:5)再结晶三次以提供所需碘化物盐5，所述盐通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐6(202mg，47％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.05(s,1H),9.55(m,1H),7.86(m,
1H),7.74(m,2H),7.13-7.29(m,10H),6.85(m,1H),6.51(m,1H),5.23(m,1H),5.05(m,2H),
4.45(m,5H),4.22(m,5H),4.00(m,4H),3.30-3.52(m,2H),3.17(m,1H),2.98(m,2H),2.83
(s,4H),2.76(m,2H),2.46(s,3H),2.29(s,3H),2.08-2.25(m,2H),1.48-1.69(m,4H),1.45
(m,2H),1.38(m,2H),1.25(m,2H),0.88(m,12H)。
[0566] 实施例28由化合物6和PEG5KONH3+.MsO-根据一般聚乙二醇化程序B制备。
[0567] 实施例29：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(3-((PEG20K-4臂-亚氨基)甲基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
基)-4-(3-((PEG20K-4臂-亚氨基)甲基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓
[0568]
[0569] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(3-甲酰
基-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
基-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
[0570] 向化合物3(500mg，1.44mmol)于MeCN(8mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(360mg，
0.5mmol)。所述反应混合物在40℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从(EtOAc/Et2O＝1:5)结晶以提供所需化合物4，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐5(130mg，12％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.17(s,1H),9.74(m,1H),8.01(m,
1H),7.90(m,1H),7.74(m,1H),7.36-7.12(m,11H),6.78(m,1H),6.41(m,1H),5.22(m,1H),
5.14(m,2H),4.58-4.35(m,3H),4.28-4.10(m,3H),4.08-3.83(m,3H),3.38(m,1H),3.29(m,
1H),3.17(m,1H),2.97(m,2H),2.83(s,3H),2.76(m,2H),2.30-2.20(m,2H),1.70-1.58(m,
2H),1.47(m,6H),1.42(s,10H),1.30-1.16(m,3H),0.90-0.84(m,12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(360mg，
0.5mmol)。所述反应混合物在40℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从(EtOAc/Et2O＝1:5)结晶以提供所需化合物4，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐5(130mg，12％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.17(s,1H),9.74(m,1H),8.01(m,
1H),7.90(m,1H),7.74(m,1H),7.36-7.12(m,11H),6.78(m,1H),6.41(m,1H),5.22(m,1H),
5.14(m,2H),4.58-4.35(m,3H),4.28-4.10(m,3H),4.08-3.83(m,3H),3.38(m,1H),3.29(m,
1H),3.17(m,1H),2.97(m,2H),2.83(s,3H),2.76(m,2H),2.30-2.20(m,2H),1.70-1.58(m,
2H),1.47(m,6H),1.42(s,10H),1.30-1.16(m,3H),0.90-0.84(m,12H)。
[0571] 实施例29通过类似于实施例18中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得(使用叔丁酰氯来产生与实施例18中所示的中间物1的相关性)，并且化合物5和PEG20K-(ONH3+.MsO-)4根据一般聚乙二醇化程序B。
[0572] 实施例30：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(3-(PEG20K-4臂-亚氨基)甲基)-5-甲基-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(6)
基)-4-(3-(PEG20K-4臂-亚氨基)甲基)-5-甲基-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(6)
[0573]
[0574] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(3-甲酰
基-5-甲基-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
基-5-甲基-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(5)
[0575] 向化合物3(900mg，2.60mmol)于MeCN(8mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(624mg，
0.87mmol)。所述反应混合物在40℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从
(EtOAc/Et2O＝1:5)结晶以提供所需化合物4，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐5(222mg，9.0％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.05(s,1H),9.66(m,1H),
7.82(m,3H),7.12-7.30(m,10H),6.84(m,1H),6.47(m,1H),5.19(m,1H),5.01(m,2H),4.47
(m,5H),4.20(m,4H),3.98(m,4H),3.40(m,1H),3.28(m,1H),3.17(m,1H),2.98(m,2H),2.83(m,4H),2.73(m,2H),2.25(m,3H),2.10(m,2H),1.61(m,2H),1.47(m,12H),1.26(m,2H),
0.87(m,12H)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(624mg，
0.87mmol)。所述反应混合物在40℃下搅拌过夜。浓缩过量溶剂并且残留物重复地从
(EtOAc/Et2O＝1:5)结晶以提供所需化合物4，所述化合物通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐5(222mg，9.0％产率)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.05(s,1H),9.66(m,1H),
7.82(m,3H),7.12-7.30(m,10H),6.84(m,1H),6.47(m,1H),5.19(m,1H),5.01(m,2H),4.47
(m,5H),4.20(m,4H),3.98(m,4H),3.40(m,1H),3.28(m,1H),3.17(m,1H),2.98(m,2H),2.83(m,4H),2.73(m,2H),2.25(m,3H),2.10(m,2H),1.61(m,2H),1.47(m,12H),1.26(m,2H),
0.87(m,12H)。
[0576] 实施例30通过类似于实施例28中所述的那些方法的方法制备，其中中间物以类似方式制得(使用叔丁酰氯来产生与实施例28中所示的中间物1的相关性)，并且化合物5和PEG20K(ONH3+.MsO-)4根据一般聚乙二醇化程序B。
[0577] 实施例31：甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-((4-(PEG5K-亚氨基)甲基)苯甲基)氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(8)
[0578]
[0579] 1-(氯甲基)-4-(二甲氧基甲基)苯(1)
[0580] 在0℃下向(4-(二甲氧基甲基)苯基)甲醇(200mg，1.1mmol)于DCM(10ml)中的溶液中添加TEA(365.6mg，3.62mmol)和MsCl(207.6mg，1.813mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌2h，并且接着倾入饱和NaHCO3(10mL)中。分离两相，并且有机相经无水Na2SO4干燥并且浓缩以提供化合物1(200mg，91％产率)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。
[0581] 4-(4-(二甲氧基甲基)苯甲基氧基)-3-羟基苯甲醛(2)
[0582] 在室温下向化合物1(200mg，0.998mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加NaH(37.4mg，1.1mmol)。在30min反应之后，添加3,4-二羟基苯甲醛(137.7mg，0.998mmol)于DMSO(5mL)中的溶液并且所述反应混合物在RT下搅拌过夜。所述混合物倾入饱和NaHCO3
(10mL)中并且所得混合物用DCM(10mL×2)萃取。组合的有机层经无水Na2SO4干燥并且浓缩以提供化合物2(300mg，粗物质)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。
(10mL)中并且所得混合物用DCM(10mL×2)萃取。组合的有机层经无水Na2SO4干燥并且浓缩以提供化合物2(300mg，粗物质)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。
[0583] 乙酸2-(4-(二甲氧基甲基)苯甲基氧基)-4-甲酰基苯酯(3)
[0584] 在0℃下向化合物2(300mg，1mmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加TEA(202mg，2mmol)和AcCl(102mg，1.3mmol)。所述反应混合物在r.t.下搅拌2h，并且接着倾入饱和
NaHCO3(10mL)中。分离两相，并且有机层经无水Na2SO4干燥并且浓缩以提供化合物3(200mg，粗物质)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。
NaHCO3(10mL)中。分离两相，并且有机层经无水Na2SO4干燥并且浓缩以提供化合物3(200mg，粗物质)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。
[0585] 乙酸2-(4-(二甲氧基甲基)苯甲基氧基)-4-(羟基甲基)苯酯(4)
[0586] 向化合物3(200mg，0.58mmol)于DCM/MeOH(10mL/1mL)中的溶液中添加NaBH4(19.8mg，0.58mmol)。所述反应混合物在0℃下搅拌1小时并且接着用丙酮(5mL)淬灭。所述混合物倾入饱和NaHCO3水溶液(10mL)中并且用DCM(10mL×2)萃取。组合的有机层经无水
Na2SO4干燥并且浓缩以提供化合物4(300mg，粗物质)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。
Na2SO4干燥并且浓缩以提供化合物4(300mg，粗物质)，所述化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。
[0587] 乙酸4-(溴甲基)-2-(4-甲酰基苯甲基氧基)苯酯(5)
[0588] 向化合物4(1.8g，5.2mmol)于DCM(50mL)中的溶液中添加PBr3(1.41g，5.2mmol)。所述反应混合物在RT下搅拌5小时并且接着用饱和NaHCO3水溶液(60mL)淬灭。分离两层并且水相用DCM(50mL×2)萃取。组合的有机层经无水Na2SO4干燥并且浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱(石油醚/EtOAc＝4:1)纯化以提供化合物5(327mg，15％产率)；1H NMR(400MHz,DMSO):δ10.01(s,1H),7.96～7.94(m,2H),7.62～7.60(m,2H),7.31(m,1H),7.13～7.07(m,
2H),5.26(s,2H),4.68(s,2H),2.27(s,3H)。
2H),5.26(s,2H),4.68(s,2H),2.27(s,3H)。
[0589] 甲烷磺酸4-(4-乙酰氧基-3-((4-甲酰基苯甲基)氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧
代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓(7)
[0590] 向化合物5(320mg，0.884mmol)于MeCN(6mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(254mg，
0.354mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌48小时。蒸发过量溶剂并且残留物重复地从
MeCN/Et2O(1/5,v/v)结晶以提供所需产物6，所述产物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐化合物7(180mg，47％产率)。
丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(254mg，
0.354mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌48小时。蒸发过量溶剂并且残留物重复地从
MeCN/Et2O(1/5,v/v)结晶以提供所需产物6，所述产物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐化合物7(180mg，47％产率)。
[0591] 化合物7(500mg，0.46mmol)、2-氨基-5-甲氧基苯甲酸(25.5mg，0.14mmol)和PEG-O-NH2(甲磺酸盐，2.12g，0.41mmol)于DCM中的溶液在r.t.下搅拌2h。接着浓缩所述反应混合物并且残留物在40℃下溶解于iPrOH中。所述溶液冷却至RT并且添加Et2O以诱导结晶。所述混合物在冰浴中保持10min并且接着过滤。滤饼从iPrOH/Et2O(5/2)结晶以提供8(2.10g，82％产率)。
[0592] 实施例32：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(4-(异丁酰基氧基)-3-((4-(PEG5K-亚氨基)甲基)苯甲基)氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(8)
基)-4-(4-(异丁酰基氧基)-3-((4-(PEG5K-亚氨基)甲基)苯甲基)氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(8)
[0593]
[0594] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(3-(4-甲酰基苯甲基氧基)-4-(异丁酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(7)
[0595] 向化合物5(310.4mg，0.80mmol)于MeCN(2mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(286mg，
0.30mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌48小时。蒸发过量溶剂并且残留物重复地从
MeCN/Et2O(1/5,v/v)结晶以提供所需产物6，所述产物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐化合物7(280mg，83％产率)。
0.30mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌48小时。蒸发过量溶剂并且残留物重复地从
MeCN/Et2O(1/5,v/v)结晶以提供所需产物6，所述产物接着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐化合物7(280mg，83％产率)。
[0596] 化合物6(280mg，0.25mmol)、2-氨基-5-甲氧基苯甲酸(14.0mg，0.026mmol)和PEG-O-NH2(甲磺酸盐，1.16g，0.227mmol)于DCM(3mL)中的溶液在r.t.下搅拌2h。接着浓缩所述反应混合物并且残留物在40℃下溶解于i-PrOH中。所述溶液冷却至室温并且添加Et2O以诱导结晶。所述混合物在冰浴中保持10min并且通过过滤收集所形成的固体。重复两次从i-PrOH/Et2O(5:2)结晶直至所有7均去除以提供8(1.0g，72％产率)。
[0597] 实施例33：甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷
基)-4-(3-((4-(PEG5K-亚氨基)甲基)苯甲基)氧基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(8)
基)-4-(3-((4-(PEG5K-亚氨基)甲基)苯甲基)氧基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(8)
[0598]
[0599] 甲烷磺酸4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)-4-(3-(4-甲酰基苯甲基氧基)-4-(新戊酰基氧基)苯甲基)吗啉-4-鎓(7)
[0600] 向化合物5(实施例31中化合物5的叔丁基酯类似物，230mg，0.51mmol)于MeCN(3mL)中的溶液中添加(S)-4-甲基-N-((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-
基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺
基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(184mg，0.25mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌48小时。蒸发过量溶剂并且残留物重复地从MeCN/Et2O(1/5,v/v)结晶以提供所需产物6，所述产物接
1
着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐化合物7(170mg，71％产率)；H NMR
(400MHz,CDCl3):δ9.99(s,1H),9.59(m,1H),7.87～7.85(m,2H),7.57～7.55(m,2H),7.32(m,1H),7.26～7.13(m,11H),7.03(m,1H),6.89(m,1H),6.44(m,1H),5.18(m,2H),5.05～
5.03(m,1H),4.92～4.88(m,2H),4.46～4.42(m,4H),4.18～4.03(m,4H),3.94～3.90(m,
3H),3.40～3.32(m,1H),3.27～3.20(m,1H),3.13(m,1H),3.00～2.98(m,2H),3.82～2.80
(m,3H),2.79(m,1H),2.74～2.72(m,2H),2.19(m,1H),2.10～1.97(m,4H),1.64～1.55(m,
2H),1.48～1.44(m,5H),1.29(m,6H),0.88～0.81(m,12H)。
基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-(N-吗啉基)乙酰胺
基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺(184mg，0.25mmol)。所述反应混合物在45℃下搅拌48小时。蒸发过量溶剂并且残留物重复地从MeCN/Et2O(1/5,v/v)结晶以提供所需产物6，所述产物接
1
着通过用离子交换树脂处理而转化为相应甲磺酸盐化合物7(170mg，71％产率)；H NMR
(400MHz,CDCl3):δ9.99(s,1H),9.59(m,1H),7.87～7.85(m,2H),7.57～7.55(m,2H),7.32(m,1H),7.26～7.13(m,11H),7.03(m,1H),6.89(m,1H),6.44(m,1H),5.18(m,2H),5.05～
5.03(m,1H),4.92～4.88(m,2H),4.46～4.42(m,4H),4.18～4.03(m,4H),3.94～3.90(m,
3H),3.40～3.32(m,1H),3.27～3.20(m,1H),3.13(m,1H),3.00～2.98(m,2H),3.82～2.80
(m,3H),2.79(m,1H),2.74～2.72(m,2H),2.19(m,1H),2.10～1.97(m,4H),1.64～1.55(m,
2H),1.48～1.44(m,5H),1.29(m,6H),0.88～0.81(m,12H)。
[0601] 化合物7(170mg，0.15mmol)、2-氨基-5-甲氧基苯甲酸(28.2mg，0.016mmol)和PEG-O-NH2(甲磺酸盐，614mg，0.12mmol)于DCM中的溶液在RT下搅拌30min。接着浓缩所述反应混合物并且残留物在40℃下溶解于iPrOH中。所述溶液冷却至RT并且添加Et2O以诱导结晶。所述混合物在冰浴中保持10min并且接着过滤。滤饼从iPrOH/Et2O(5/2)结晶以提供8(580mg，77％)。
[0602] 本发明的代表性卡非佐米前药实施例31-33提供具有潜在增强的化学稳定性的肟连接的结合物。在这些实施例中，肟连接用供电子苯甲基氧基间隔开以增加PEG构筑体的总体稳定性。
[0603] 实施例34：氯化4-(4-乙酰氧基-3-((1-PEG3K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓
[0604]
[0605] 实施例34使用类似于实施例5-11中教导的方法和方法A的方法，但使用具有氯化物阴离子作为抗衡离子的氯化物盐中间物来制备。
[0606] 实施例35：甲磺酸4-(4-乙酰氧基-3-((1-PEG3K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓
[0607]
[0608] 实施例35使用类似于实施例5-11中教导的方法和方法A的方法，使用PEG3KN3来制备。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ9.19(M,1H),8.24(m,2H),8.12(m,1H),7.90(m,1H),7.62(m,1H),7.22(m,13H),7.0(m,1H),5.26(m,2H),4.88(m,2H),4.53(m,3H),4.37(br s,4H),4.05(m,5H),3.81(m,2H),3.68(m,4H),3.52(br s,339H),3.30(m,4H),3.24(s,4H),2.94
(m,2H),2.75(m,1H),2.63(m,2H),2.24(s,3H),1.87(m,2H),1.59(m,2H),1.40(m,7H),0.84(m,12H)
(m,2H),2.75(m,1H),2.63(m,2H),2.24(s,3H),1.87(m,2H),1.59(m,2H),1.40(m,7H),0.84(m,12H)
[0609] 实施例36：甲磺酸4-(4-乙酰氧基-3-((1-PEG2K-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓
[0610]
[0611] 实施例36使用类似于实施例5-11中教导的方法和方法A的方法，使用PEG2KN3来制1
备。H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ9.44(M,1H),8.26(m,2H),8.16(m,1H),8.00(m,1H),7.62
(m,1H),7.22(m,13H),5.26(m,2H),5.00(m,2H),4.54(m,3H),4.37(m,5H),4.09(m,4H),
3.81(m,2H),3.68(m,2H),3.50(br s,218H),3.32(m,2H),3.27(s,1H),3.26(s,4H),2.94
(m,2H),2.76(m,1H),2.61(m,2H),2.24(s,3H),1.90(m,2H),1.62(m,2H),1.40(m,7H),0.82(m,12H)
备。H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ9.44(M,1H),8.26(m,2H),8.16(m,1H),8.00(m,1H),7.62
(m,1H),7.22(m,13H),5.26(m,2H),5.00(m,2H),4.54(m,3H),4.37(m,5H),4.09(m,4H),
3.81(m,2H),3.68(m,2H),3.50(br s,218H),3.32(m,2H),3.27(s,1H),3.26(s,4H),2.94
(m,2H),2.76(m,1H),2.61(m,2H),2.24(s,3H),1.90(m,2H),1.62(m,2H),1.40(m,7H),0.82(m,12H)
[0612] 实施例37：甲磺酸4-(4-乙酰氧基-3-((1-(5-((2-PEG3K-乙基)氨基)-5-氧代戊基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-
15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓
15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓
[0613]
[0614] 实施例37使用类似于实施例5-11中教导的方法和方法A的方法，使用具有源于5-叠氮基戊酸的连接体的PEG3K来制备。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ9.26(M,1H),8.25(m,2H),
8.17(m,1H),7.98(d,1H),7.87(m,1H),7.62(m,1H),7.22(m,11H),7.02(m,1H),4.99(m,
2H),4.56(m,1H),4.37(br s,6H),4.11(m,3H),3.71(m,3H),3.52(br s,304H),3.25(br s,
7H),2.75(m,1H),2.61(m,2H),2.24(s,3H),2.11(m,1H),1.87(m,2H),1.40(m,5H),0.82(m,
12H)
8.17(m,1H),7.98(d,1H),7.87(m,1H),7.62(m,1H),7.22(m,11H),7.02(m,1H),4.99(m,
2H),4.56(m,1H),4.37(br s,6H),4.11(m,3H),3.71(m,3H),3.52(br s,304H),3.25(br s,
7H),2.75(m,1H),2.61(m,2H),2.24(s,3H),2.11(m,1H),1.87(m,2H),1.40(m,5H),0.82(m,
12H)
[0615] 实施例38：甲磺酸4-(4-乙酰氧基-3-((1-(5-((2-PEG2K-乙基)氨基)-5-氧代戊基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲基)-4-((4S,7S,10S,13S)-10-苯甲基-7-异丁基-
15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓
15-甲基-13-((R)-2-甲基环氧乙烷-2-羰基)-2,5,8,11-四氧代-4-苯乙基-3,6,9,12-四氮杂十六烷基)吗啉-4-鎓
[0616]
[0617] 实施例38使用类似于实施例5-11中教导的方法和方法A的方法，使用具有源于5-1
叠氮基戊酸的连接体的PEG2K来制备。H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ9.56(M,1H),8.29(m,2H),
8.18(m,1H),8.04(m,1H),7.92(m,1H),7.62(m,1H),7.22(m,11H),7.0(m,1H),5.38(m,2H),
4.99(m,2H),4.56(m,1H),4.37(br s,7H),4.19(m,3H),4.02(m,3H),3.52(br s,179H),
3.25(br s,5H),2.94(m,2H),2.80(m,1H),2.63(m,2H),2.24(s,3H),2.10(m,2H),1.87(m,
2H),1.40(m,9H),0.82(m,12H)
叠氮基戊酸的连接体的PEG2K来制备。H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ9.56(M,1H),8.29(m,2H),
8.18(m,1H),8.04(m,1H),7.92(m,1H),7.62(m,1H),7.22(m,11H),7.0(m,1H),5.38(m,2H),
4.99(m,2H),4.56(m,1H),4.37(br s,7H),4.19(m,3H),4.02(m,3H),3.52(br s,179H),
3.25(br s,5H),2.94(m,2H),2.80(m,1H),2.63(m,2H),2.24(s,3H),2.10(m,2H),1.87(m,
2H),1.40(m,9H),0.82(m,12H)
[0618] 本发明的示例性化合物可显示出由于具有适合并且足以提供所述癌症治疗的药物动力学和药效学概况而有效治疗多种癌症(包括而不限于多发性骨髓瘤)。以下示例性描述和附图显示本发明的所选代表性化合物的这些药物动力学和药效学概况中的一些。
[0619] 实施例39：人类血浆中的PEG-卡非佐米化合物转化。
[0620] 人类血浆转化方案：
[0621] 在DMSO中制备所需测试化合物的1毫摩尔浓度(mM)储备液。通过从1mM储备液稀释在乙腈:水中制备所述测试化合物的25μM储备液(即，2.5μL的1mM储备溶液添加至97.5μL的乙腈:水(50:50)中)。冷冻人类血浆(从5名男性汇集，2KEDTA抗凝血剂)在室温下解冻并且在1400x RCF 4℃下离心持续15分钟。大约90％的澄清上清液部分转移至分离管中并且用于所述分析。关于时间0min样品，血浆在80℃下热不活化。向72μL热不活化血浆中添加3μL 25μM工作储备液并且用200μL含内部标准的乙腈碰撞50μL样品。关于分析，通过将20μL 25μM工作储备液掺加至480μL血浆中来制备1μM孵育样品。样品在37℃下在振荡器水浴中在轻微振荡下孵育0.5、1、2、4和6h。在各时间点，50μL样品用200μL含有内部标准的乙腈沉淀并且在4000x RCF、4℃下离心持续20分钟。150μL上清液用150μL水稀释并且通过LC-MS/MS进行分析。使用具有5μM最高卡非佐米浓度、随后2.5倍稀释的血浆产生8点校准曲线。所释放的卡非佐米的量针对所述校准曲线进行定量并且以μM报道。
[0622] 图1显示PEG-卡非佐米化合物的代表性实施例转化为卡非佐米的游离、非PEG结合、活性形式的速率。如所示，本发明的示例化合物提供卡非佐米的血浆浓度，其在时间0开始并且逐渐地增加(关于大多数所描绘实施例)至有意义浓度持续长达2小时并且在一些情况下持续长于2小时。此图显示本发明的示例性化合物的半衰期预计在人类血浆中为至少2小时，并且潜在地更长。因此，图1说明本发明的PEG-卡非佐米化合物提供卡非佐米的活性形式至血浆中的缓慢释放，由此允许卡非佐米潜在更长持续时间作用于细胞蛋白酶体酶，导致预期的对蛋白酶体活性的延长抑制效应。
[0623] PEG-卡非佐米结合物静脉内施用于雌性Balb/c小鼠(n＝3)之后的平均血浆浓度(μM)。所指示的剂量为mg/kg的PEG-卡非佐米结合物。
[0624] 实施例40：PEG-卡非佐米小鼠pK
[0625] PEG卡非佐米化合物呈静脉内(i.v.)推注形式在含有10％(w/v)乙醇的水溶液中以规定剂量(剂量体积5mL/kg)施用于小鼠(Balb/c，雌性，n＝3每个剂量组)。在所指示的时间点收集血液样品并且通过LC/MS-MS一式两份测量血浆卡非佐米浓度。对照组比较物概况为卡非佐米标准制剂，即用于施用的10％(w/v)磺丁基醚-β-环糊精和10mmol/L的柠檬酸钠(pH 3.5)的水溶液制剂(5mg/kg)。这一标准卡非佐米表示目前获批用于治疗多发性骨髓瘤的卡非佐米制剂。关于实施例13、16和18，施用于小鼠的不同剂量反映卡非佐米的含量和给药量，和经计算与所述标准卡非佐米制剂中提供的卡非佐米的那一量大致相同的量。
[0626] 如图2中所描绘，虽然实施例18展现类似于对照组卡非佐米的那一概况的概况，但实施例13和16展现其概况的延伸。特别地，实施例16在与对照组的时期相同的时期内具有游离、活性卡非佐米的改进可用性。然而，实施例13展现在比对照组卡非佐米长得多的时期内的卡非佐米释放，其导致在彼较长时期内显著较高的卡非佐米血浆浓度。实施例13的血浆浓度为对照组的血浆浓度的多个对数倍数。
[0627] 实施例41：PEG-卡非佐米化合物对卡非佐米的蛋白酶体抑制
[0628] PEG卡非佐米化合物实施例1呈静脉内(i.v.)推注形式在含有10％(w/v)乙醇的水溶液中以规定剂量(剂量体积5mL/kg)施用于小鼠(Balb/c，雌性，n＝3每个剂量组)。卡非佐米标准在用于施用的10％(w/v)磺丁基醚-β-环糊精和10mmol/L的柠檬酸钠(pH 3.5)的水溶液中配制(5mg/kg)。在i.v.药物施用之后的所选时间点，收集组织样品(肾上腺、心脏、肝和骨髓)。通过心脏穿刺收集全血至含有肝素钠的管中。
[0629] 血液：使用EDTA微离心管收集大约0.4mL全血。样品立即放置于冰上并且在室温(RT)下在微离心机中以最大速度短暂离心2分钟。。细胞集结粒存储于湿冰上。全血细胞集结粒再悬浮于1ml磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)中并且在4℃下以最大速度离心。去除上清液并且所述集结粒用PBS洗涤第二次。样品再悬浮于2体积的溶解缓冲液(20mM Tris，pH 8.0，
5mM EDTA)中，接着冷冻并且存储于-80℃下直至分析。
5mM EDTA)中，接着冷冻并且存储于-80℃下直至分析。
[0630] 肾上腺、心脏和肝组织：
[0631] 在给药后规定的图解时间点收集组织(肾上腺、心脏和肝)。切去组织并且在4℃下放置于含有PBS的15ml管中。关于均质化组织，样品用剪刀切碎并且约0.1-0.2mg部分放置于2mL微离心管中。组织部分冷冻并且存储于-80℃下。
[0632] 样品加工：
[0633] 所有样品均在冰上解冻。溶解缓冲液中的所有单细胞集结粒(全血)均短暂地涡旋，接着在4℃下在微离心机中以14,000rpm短暂离心持续15分钟。上清液在样品板中以100μL:25μL 50％甘油的比率经转移，其中甘油最终浓度为10％。这些样品接着准备用于分析，或其可在-80℃下冷冻。大约2体积的溶解缓冲液和不锈钢珠粒添加至解冻的组织部分(肾上腺、心脏和肝)中。样品每一侧在20mHz下均质化持续60秒，接着在4℃下在微离心机中以
14,000rpm短暂离心持续15分钟。上清液在样品板中以100μL:25μL 50％甘油的比率经转移，其中甘油最终浓度为10％。小心避免具有高脂肪含量的组织(即，肾上腺)的顶部脂质层。这些样品接着准备用于分析，或其可在-80℃下冷冻。在这一溶解产物/10％甘油平台处冷冻的样品应在分析之前在冰上解冻。各样品的蛋白浓度通过Bradford分析来测量。通过监测游离AMC从荧光肽Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(BostonBiochem)的释放来定量蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样(CT-L)活性。
14,000rpm短暂离心持续15分钟。上清液在样品板中以100μL:25μL 50％甘油的比率经转移，其中甘油最终浓度为10％。小心避免具有高脂肪含量的组织(即，肾上腺)的顶部脂质层。这些样品接着准备用于分析，或其可在-80℃下冷冻。在这一溶解产物/10％甘油平台处冷冻的样品应在分析之前在冰上解冻。各样品的蛋白浓度通过Bradford分析来测量。通过监测游离AMC从荧光肽Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(BostonBiochem)的释放来定量蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样(CT-L)活性。
[0634] 如图3所示，在小鼠中的血液中以及肾上腺、心脏和肝组织中，CT-L活性在标准卡非佐米与实施例结合物1之间可相当。
[0635] 实施例42：关于实施例13、26和34(各从IV施用)的平均卡非佐米血浆浓度-时间概况。
[0636] 所述PEG卡非佐米化合物以静脉内(i.v.)推注形式以5mg/kg(等于卡非佐米，剂量体积1mL/kg)施用于小鼠(Balb/c，雄性，n＝9每个剂量组)。在所指示的时间点(给药后0.5、1、2、4、6、12、16和24小时)收集来自各小鼠的血液样品并且通过用125μL含有作为内部标准的D10-CFZ的乙腈进行蛋白沉淀来提取25μL血浆样品并且接着离心。通过LC-MS/MS使用多反应监测以阳性电喷雾电离模式测量上清液中的卡非佐米浓度。所述分析的定量下限为
0.500ng/mL。
0.500ng/mL。
[0637] 如图4所示，这一研究中的对照组标准卡非佐米(CFZ)环糊精制剂(5mg/mL)在极短时期内导致血浆浓度下降。3K-PEG CFZ(实施例34)存在于血浆中持续在所述PEG结合物的初始施用后长达20与约25小时之间。同样，5K-PEG CFZ(实施例26)存在于血浆中，如图5中所测量，在约25小时的实际上所有时间内均处于较高浓度下。最终，20K-PEG(实施例13)为在3K和5K-PEG曲线上方的曲线(虽然在其间开始)，并且披露出这一PEG结合物在所测量的25小时过程中释放卡非佐米至血浆中，同时在彼极长持续时间内提供在显著较高血浆浓度下的卡非佐米。最终，如图4所示，在开始时间点处的最高曲线(包含3K-PEG和20K-PEG卡非佐米化合物的组合的制剂)展现个别地高于并且长于3K-PEG并且可与单独较高分子量20K-PEG卡非佐米化合物相当的血浆浓度。
[0638] 表4描述当代表性卡非佐米化合物实施例与标准卡非佐米进行比较并且所有样品均IV给药时获得的结果。
[0639] 表4：pK测量
[0640]
[0641] 在实施例39-41中给药的PEG卡非佐米制剂一般如下制备：所需量的PEG-CFZ化合物使用分析天平称出至无菌玻璃容器中。基于所述材料的重量计算稀释剂体积。10mM乙酸盐(pH 5.0)、9％蔗糖的稀释剂添加至所述玻璃容器中，其最终体积导致PEG-CFZ化合物的浓度为1mg/ml、5mg/mL、10mg/mL或20mg/mL。各PEG-CFZ样品在室温下搅拌1小时以允许所述材料完全溶解。一旦所述材料完全溶解于溶液中，取出样品以测量pH，发现所述pH始终在
4.9-5.1的所需范围内。因此，未进行进一步pH调节。对所有样品执行样品重量渗透浓度测量和内毒素测试并且发现其始终在295-312mOsm(对于重量渗透浓度)和<1.0EU/mL(对于内毒素计数)的可接受范围内。样品在溶解之后即刻经无菌填充至5cc无菌玻璃小瓶中，塞住并且盖帽。在实施例39-41中的运输和给药之前1天至2.5周时期内，样品在-70℃下冷冻，如下文所述。
4.9-5.1的所需范围内。因此，未进行进一步pH调节。对所有样品执行样品重量渗透浓度测量和内毒素测试并且发现其始终在295-312mOsm(对于重量渗透浓度)和<1.0EU/mL(对于内毒素计数)的可接受范围内。样品在溶解之后即刻经无菌填充至5cc无菌玻璃小瓶中，塞住并且盖帽。在实施例39-41中的运输和给药之前1天至2.5周时期内，样品在-70℃下冷冻，如下文所述。
[0642] 实施例43：实施例13和CFZ-磺丁基醚β环糊精在SCID灰棕色小鼠中的HT-29人类结肠直肠腺癌异种移植物模型中的功效研究(图5)
[0643] 程序：从Harlan Laboratories(Livermore,CA)购得6至7周龄的雌性灰棕色严重复合型免疫缺乏(SCID)小鼠(60只加上备用)。在抵达之后，使用电子天平(Ohaus
PRO,Parsippany,NJ)对动物称重，给予临床检查以确保所述动物在良好状态
下，并且每个笼子圈养5只(在给药的前)。所述动物维持于Micro-VENT全通风啮齿动物圈养系统(Allentown Caging Equipment Co.,Allentown,NJ)中的HEPA过滤环境中，每小时提供至少10次室内换气。设定动物室控制以维持温度和相对湿度分别在20℃±1℃和50％±
20％下。圈养室在12:12光暗循环下。笼子经高压灭菌，并且动物在SaniChip照射垫料
7990.BG(Harlan Teklad；Hayward,CA)上分层。水经高压灭菌并且经由水瓶随意供应至各笼子。照射2018Teklad Global 16％蛋白啮齿动物饲料((Harlan Teklad)随意供应至各笼子。
PRO,Parsippany,NJ)对动物称重，给予临床检查以确保所述动物在良好状态
下，并且每个笼子圈养5只(在给药的前)。所述动物维持于Micro-VENT全通风啮齿动物圈养系统(Allentown Caging Equipment Co.,Allentown,NJ)中的HEPA过滤环境中，每小时提供至少10次室内换气。设定动物室控制以维持温度和相对湿度分别在20℃±1℃和50％±
20％下。圈养室在12:12光暗循环下。笼子经高压灭菌，并且动物在SaniChip照射垫料
7990.BG(Harlan Teklad；Hayward,CA)上分层。水经高压灭菌并且经由水瓶随意供应至各笼子。照射2018Teklad Global 16％蛋白啮齿动物饲料((Harlan Teklad)随意供应至各笼子。
[0644] 化合物配制：如上文一般所述制备实施例13。卡非佐米比较物化合物制备为CFZ-磺丁基醚β环糊精(1mg/mL)。实施例13的粉末样品在10％ETOH/生理盐水中稀释至30mg/ml(第3组)或50mg/ml(第3组开始第四剂量)或40mg/ml(第4组)。媒剂和CFZ-磺丁基醚β环糊精在所述研究中存储于4℃下。在所述研究期间，定期检查实施例13在所述悬浮液的质量方面的潜在改变；未观察到改变
[0645] 细胞系：人类结肠直肠腺癌癌细胞(CA)系NCI-HT29(HT-29； HTB-38TM)购自ATCC(Manassas,VA)。在MGI签收之后，细胞在RPMI 1640和10％胎牛血清中内部生长持续
7个继代，接着用于产生冷冻储备液。所述细胞从冷冻储备液回收并且如上文加以培养。在生长之后，所述细胞短暂离心并且以5E07个细胞/mL的浓度再悬浮于无添加剂的无血清培养基中，接着与MatrigelTM(Trevigen,Gaithersburg,MD)1:1组合。在植入时，细胞对应于MGI第7继代(MGP7)。
7个继代，接着用于产生冷冻储备液。所述细胞从冷冻储备液回收并且如上文加以培养。在生长之后，所述细胞短暂离心并且以5E07个细胞/mL的浓度再悬浮于无添加剂的无血清培养基中，接着与MatrigelTM(Trevigen,Gaithersburg,MD)1:1组合。在植入时，细胞对应于MGI第7继代(MGP7)。
[0646] 细胞植入：在预计分级日之前大约3周，小鼠通过皮下(SC)注射植入至左下侧腹中，其中每只小鼠200μL(5.0E06个细胞)新鲜制备的HT29:Matrigel混合物。所有程序均在HEPA过滤层流通风橱中进行。
[0647] 研究设计：所有组的研究设计和处理均显示于表I中(功效)。当肿瘤达到每只小鼠大约200mm3的平均体积时，具有确定肿瘤和中等体重的四十只动物随机化为4个处理组(每组n＝10只小鼠)。在第0天开始，动物通过每周一次(qw)注射媒剂(第1组)或以5mpk每周两次D1D2注射(即，每周两个相邻日)CFZ-磺丁基醚β环糊精(第2组)或以150mg/kg每周两次D1D2注射OP-59381(第3组)来进行施用。以第四剂量开始(即，在三周之后)，第3组动物的给药增加至250mg/kg。第4组以200mg/kg每周一次(qw)注射OP-59381(实施例13)来给药。所有这些剂量均以5mL/kg的剂量体积呈静脉内(IV)注射形式施用。在IV给药持续第七周之后(即，关于第1-4组在第42天之后)，肿瘤处理功效看来减慢或完全停止。
[0648] 表5
[0649]
[0650] 如图5可见，媒剂组(第1组)中的肿瘤经IV给药时间间隔线性生长，其中截至第49天肿瘤增加至初始大小的约2,755％。虽然在所有三个组中第0天至第15天肿瘤大小相对媒剂对照组未改变，但截至第19天肿瘤生长在200mpk实施例13和5mpk CFZ-磺丁基醚β环糊精处理动物中显著减弱。这一显著减弱持续至第29天，此时所有三个实验组均实现显著性，所述显著性持续至第40天，证明3种剂量足以提供抗肿瘤活性。
[0651] 实施例44：实施例44反映了由实施例41的研究产生的小鼠存活数据，所述数据在表6中制表并且图解说明于图6中。
[0652] 表6
[0653]
[0654] 实施例41和42披露了人类结肠直肠腺癌癌细胞的小鼠异种移植物模型中卡非佐米代表性化合物实施例13的功效。媒剂组中的肿瘤在研究期间线性生长。用化合物实施例
13(200mpk，或第3周之后150上升至250mpk)或用CFZ-磺丁基醚β环糊精(5mpk)每周一次静脉内给药会在第一剂量施用的19天内提供肿瘤生长的显著减弱(与媒剂对照组相比)。另
外，用所述两种制剂静脉内给药与重量增加的显著减弱有关。
13(200mpk，或第3周之后150上升至250mpk)或用CFZ-磺丁基醚β环糊精(5mpk)每周一次静脉内给药会在第一剂量施用的19天内提供肿瘤生长的显著减弱(与媒剂对照组相比)。另
外，用所述两种制剂静脉内给药与重量增加的显著减弱有关。
[0655] 实施例45：实施例13和CFZ-磺丁基醚β环糊精在SCID灰棕色小鼠中的HT-29结肠直肠腺癌异种移植物模型中的功效研究(图7)
[0656] 程序：从Harlan Laboratories(Livermore,CA)购得6至7周龄的雌性灰棕色严重复合型免疫缺乏(SCID)小鼠(60只加上备用)。在抵达之后，使用电子天平(Ohaus
PRO,Parsippany,NJ)对动物称重，给予临床检查以确保所述动物在良好状态
下，并且每个笼子圈养5只(在给药之前)。所述动物维持于Micro-VENT全通风啮齿动物圈养系统(Allentown Caging Equipment Co.,Allentown,NJ)中的HEPA过滤环境中，每小时提供至少10次室内换气。设定动物室控制以维持温度和相对湿度分别在20℃±1℃和50％±
20％下。圈养室在12:12光暗循环下。笼子经高压灭菌，并且动物在SaniChip照射垫料
7990.BG(Harlan Teklad；Hayward,CA)上分层。水经高压灭菌并且经由水瓶随意供应至各笼子。照射2018Teklad Global 16％蛋白啮齿动物饲料((Harlan Teklad)随意供应至各笼子。
PRO,Parsippany,NJ)对动物称重，给予临床检查以确保所述动物在良好状态
下，并且每个笼子圈养5只(在给药之前)。所述动物维持于Micro-VENT全通风啮齿动物圈养系统(Allentown Caging Equipment Co.,Allentown,NJ)中的HEPA过滤环境中，每小时提供至少10次室内换气。设定动物室控制以维持温度和相对湿度分别在20℃±1℃和50％±
20％下。圈养室在12:12光暗循环下。笼子经高压灭菌，并且动物在SaniChip照射垫料
7990.BG(Harlan Teklad；Hayward,CA)上分层。水经高压灭菌并且经由水瓶随意供应至各笼子。照射2018Teklad Global 16％蛋白啮齿动物饲料((Harlan Teklad)随意供应至各笼子。
[0657] 化合物配制：实施例13如本文所述配制至所需浓度。卡非佐米呈CFZ-磺丁基醚β环糊精(1mg/mL)形式提供。实施例13的粉末样品在10％ETOH/生理盐水中稀释至30mg/ml(第3组)或50mg/ml(第4组)。媒剂和CFZ-磺丁基醚β环糊精在所述研究中存储于4℃下。在所述研究期间，定期检查实施例13制剂在所述悬浮液的质量方面的潜在改变；未观察到改变。
[0658] 细胞系：人类结肠直肠腺癌癌细胞(CA)系NCI-HT29(HT-29； HTB-38TM)购自ATCC(Manassas,VA)。在MGI签收之后，细胞在RPMI 1640和10％胎牛血清中内部生长持续
7个继代，接着用于产生冷冻储备液。所述细胞从冷冻储备液回收并且如上文加以培养。在生长之后，所述细胞短暂离心并且以5E07个细胞/mL的浓度再悬浮于无添加剂的无血清培养基中，接着与MatrigelTM(Trevigen,Gaithersburg,MD)1:1组合。在植入时，细胞对应于MGI第7继代(MGP7)。
7个继代，接着用于产生冷冻储备液。所述细胞从冷冻储备液回收并且如上文加以培养。在生长之后，所述细胞短暂离心并且以5E07个细胞/mL的浓度再悬浮于无添加剂的无血清培养基中，接着与MatrigelTM(Trevigen,Gaithersburg,MD)1:1组合。在植入时，细胞对应于MGI第7继代(MGP7)。
[0659] 细胞植入：在预计分级日之前大约3周，小鼠通过皮下(SC)注射植入至左下侧腹中，其中每只小鼠200μL(5.0E06个细胞)新鲜制备的HT29:Matrigel混合物。所有程序均在HEPA过滤层流通风橱中进行。
[0660] 研究设计：所有组的研究设计和处理均显示于表I中(功效)。当肿瘤达到每只小鼠大约200mm3的平均体积时，具有确定肿瘤和中等体重的四十只动物随机化为4个处理组(每组n＝10只小鼠)。在第0天开始，动物通过每周一次(qw)注射媒剂(第1组)或以5mpk每周两次D1D2注射(即，每周两个相邻日)CFZ-磺丁基醚β环糊精(第2组)或以150mg/kg或250mg/kg每周两次D1D2注射实施例13(分别为第3组和第4组)来进行施用。所有这些剂量均以5mL/kg的剂量体积呈静脉内(IV)注射形式施用。在第六周的剂量施用之后(即，在第35天之后)，就功效而言IV给药停止。
[0661] 如图7可见，媒剂组(第1组)中的肿瘤经IV给药时间间隔线性生长，其中截至第41天肿瘤增加至初始大小的约2100％。相比之下，所有实验组中的肿瘤生长均显著减弱：第41天，第2、3和4组的肿瘤大小分别为83.6％、79.6％和61.8％。这一减弱实现了在最早时间点(9或12天)开始的显著性，证明两种剂量足以提供抗肿瘤活性。肿瘤生长在IV给药结束之后(第35天之后)重新开始。
[0662] 表7
[0663]
[0664] 实施例46：细胞中示例性化合物的蛋白酶体抑制(图9-14)
[0665] 细胞系：MOLT-4人类急性淋巴母细胞白血病T淋巴母细胞在生长培养基(补充有10％FBS和1x L-谷酰胺的RPMI-1640基础培养基)中生长持续至少6个继代。悬浮细胞以1-
2e6个细胞/mL(50uL，约60,000个细胞/孔)的速率一式两份接种至96孔板中。
2e6个细胞/mL(50uL，约60,000个细胞/孔)的速率一式两份接种至96孔板中。
[0666] 处理：卡非佐米和聚乙二醇化卡非佐米化合物实施例5、35、36、37和38的制剂以10mM浓度溶解于DMSO中。在DMSO中执行连续稀释以产生覆盖7个对数的浓度，并且接着各连续稀释液进一步在生长培养基中稀释40倍。稀释液接着以相等体积添加至含有细胞的孔
中，进一步稀释化合物浓度两倍。细胞在37℃(5％CO2)下孵育1小时，接着在RT下以1500rpm短暂离心持续5min。去除培养基并且细胞用PBS洗涤3次。在最后一次洗涤之后，去除上清液并且细胞集结粒在干冰上冷冻。
中，进一步稀释化合物浓度两倍。细胞在37℃(5％CO2)下孵育1小时，接着在RT下以1500rpm短暂离心持续5min。去除培养基并且细胞用PBS洗涤3次。在最后一次洗涤之后，去除上清液并且细胞集结粒在干冰上冷冻。
[0667] 分析：细胞集结粒解冻并且接着通过再悬浮于50uL溶解缓冲液中的冰上(20mM Tris-HCl，5mM EDTA，pH 8)中而溶解。所述制剂以1500rpm离心持续5min并且接着直接用于AMC-LLVY荧光分析。每2分钟进行测量持续70分钟以产生动力学曲线，并且使用5-15分钟斜率(RFU/min，初始速度)计算IC50值。
[0668] 如图10所示，代表性示例性化合物5展现约16.25nM的细胞蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样(CT-L)IC50抑制效力。相比之下，卡非佐米的对照样品展现约9.2nM的IC50活性(类似于实施例5的效力的效力)。同样，化合物实施例号35(图11)展现约9.0nM的细胞蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样(CT-L)IC50抑制效力，化合物实施例号36(图12)展现约21.8nM的细胞蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样(CT-L)IC50抑制效力，化合物实施例号37(图13)展现约22.8nM的细胞蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样(CT-L)IC50抑制效力并且化合物实施例号38(图14)展现约21.8nM的细胞蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样(CT-L)IC50抑制效力。本发明的一些代表性化合物展现作为聚乙二醇化卡非佐米化合物的CT-L抑制活性。
[0669] 实施例47：PEG-卡非佐米结合物对卡非佐米的蛋白酶体抑制
[0670] PEG卡非佐米化合物实施例35和36呈皮下推注形式在用于施用的含有10mmol/L乙酸钠(pH 5.0)和9％蔗糖的水溶液中(20mg/kg)以规定剂量(剂量体积5mL/kg)施用于小鼠
(Balb/c，雌性，n＝3每个剂量组)。在药物施用之后的所选时间点，使用含有肝素的管收集血液样品。样品立即放置于冰上并且在室温(RT)下在微离心机中以最大速度短暂离心2分钟。细胞集结粒存储于湿冰上。全血细胞集结粒再悬浮于1ml磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)中并且在4℃下以最大速度离心。去除上清液并且所述集结粒用PBS洗涤第二次。样品再悬浮于2体积的溶解缓冲液(20mM Tris，pH 8.0，5mM EDTA)中，接着冷冻并且存储于-80℃下直至分析。
(Balb/c，雌性，n＝3每个剂量组)。在药物施用之后的所选时间点，使用含有肝素的管收集血液样品。样品立即放置于冰上并且在室温(RT)下在微离心机中以最大速度短暂离心2分钟。细胞集结粒存储于湿冰上。全血细胞集结粒再悬浮于1ml磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)中并且在4℃下以最大速度离心。去除上清液并且所述集结粒用PBS洗涤第二次。样品再悬浮于2体积的溶解缓冲液(20mM Tris，pH 8.0，5mM EDTA)中，接着冷冻并且存储于-80℃下直至分析。
[0671] 样品加工：所有样品均在冰上解冻。溶解缓冲液中的所有单细胞集结粒(全血)均短暂地涡旋，接着在4℃下在微离心机中以14,000rpm短暂离心持续15分钟。上清液在样品板中以100μL:25μL 50％甘油的比率经转移，其中甘油最终浓度为10％。这些样品接着准备用于分析，或其可在-80℃下冷冻。在这一溶解产物/10％甘油平台处冷冻的样品应在分析之前在冰上解冻。各样品的蛋白浓度通过Bradford分析来测量。通过监测游离AMC从荧光肽Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(BostonBiochem)的释放来定量蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样(CT-L)活性。
[0672] 图15描绘本发明的代表性化合物实施例35和36的体内药效学(PD)活性。如图15所示，实施例35和36在小鼠中施用之后经48h各自展现体内几乎完全CT-L抑制。即使经96h的持续时间，所述化合物继续在小鼠中展现约50％或更高的CT-L抑制活性。
[0673] 使用方法
[0674] 蛋白酶体抑制的生物效应为适用并且所需的。蛋白酶体抑制已经建议为预防和/或治疗多种疾病，包括但不限于增生性疾病、神经毒性/退行性疾病、阿尔兹海默氏、缺血病况、发炎、自身免疫疾病、HIV、癌症、器官移植排斥、败血性休克、抗原呈递的抑制、减少的病毒性基因表达、寄生虫感染、与酸中毒有关的病况、黄斑变性、肺病况、肌肉消耗性疾病、纤维变性疾病、骨和毛发生长疾病。因此，包含治疗有效剂量的本发明PEG卡非佐米化合物的药物制剂提供一种向患者施用药物和治疗这些病况的方式。
[0675] 在细胞层面上，在用多种蛋白酶体抑制剂处理细胞时已报道聚泛素化蛋白的积聚、细胞形态改变和细胞凋亡。还已公开蛋白酶体抑制，并且其已在临床上和商业上经证明为适用抗肿瘤治疗策略。为此，所述化合物和包括本发明化合物的组合物适用于治疗癌症，包括而不限于新近经诊断和/或复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0676] 体外和体内模型已显示恶性细胞一般易经受蛋白酶体抑制。实际上，蛋白酶体抑制已经验证为用于治疗多发性骨髓瘤的治疗性策略。这可能部分地归因于高度增殖性恶性细胞依赖于蛋白酶体系统来快速地去除蛋白(Rolfe等人,J.Mol.Med.(1997)75:5-17；Adams,Nature(2004)4:349-360)。本文提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括向需要所述治疗的患者施用治疗有效量的式I和II的聚乙二醇化卡非佐米化合物，或如本文所提供或所述的任何特定示例的PEG卡非佐米化合物。
[0677] 如本文所用，术语“癌症”包括但不限于血源性癌症和实体肿瘤。癌症可折磨血液、骨、器官、皮肤组织和血管系统的组分，包括但不限于膀胱、血液、骨、脑、乳房、子宫颈、胸部、结肠、子宫内膜、食道、眼、头、肾、肝、肺、淋巴结、口腔、颈、卵巢、胰脏、前列腺、直肠、肾、皮肤、胃、睾丸、喉和子宫的癌症。特定癌症包括但不限于白血病(急性淋巴球性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、毛细胞白血病)、成熟B细胞赘瘤(小淋巴球性淋巴瘤)、B细胞幼淋巴球性白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤(如华氏巨球蛋白血症)、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、单克隆免疫球蛋白沉积病、重链病、结外边缘区B细胞淋巴瘤(MALT淋巴瘤)、结节性边缘区B细胞淋巴瘤(NMZL)、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤和伯基特淋巴瘤/白血病)、成熟T细胞和天然杀手(NK)细胞赘瘤(T细胞幼淋巴球性白血病、T细胞大颗粒淋巴球性白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈状肉芽肿(塞扎莱综合征)、原发性皮肤未分化大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、非特指型外周T细胞淋巴瘤和未分化大细胞淋巴瘤)、霍奇金淋巴瘤(结节性硬化、混合细胞型、富含淋巴细胞、淋巴细胞耗乏或未耗乏、结节性淋巴细胞为主型)、非霍奇金氏淋巴瘤、骨髓瘤(多发性骨髓瘤、无痛性骨髓瘤、冒烟性骨髓瘤)、慢性骨髓增生性疾病、骨髓增生异常/骨髓增生性疾病、骨髓增生异常综合征、免疫缺乏相关淋巴增生性病症、组织细胞和树突状细胞赘瘤、肥大细胞增生症、软骨肉瘤、尤文肉瘤、纤维肉瘤、恶性巨细胞肿瘤、骨髓瘤骨病、骨肉瘤、乳癌(激素依赖性、激素非依赖性)、妇科癌症(子宫颈、子宫内膜、输卵管、妊娠滋养细胞疾病、卵巢、腹膜、子宫、阴道和阴门)、基底细胞癌(BCC)、鳞状细胞癌(SCC)、恶性黑色素瘤、隆突性皮肤纤维肉瘤、梅克尔细胞癌、卡波西氏肉瘤、星细胞瘤、毛状星细胞瘤、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤、寡树突神经胶细胞瘤、室鼓膜瘤、多形性神经胶质母细胞瘤、混合型神经胶质瘤、寡星细胞瘤、神经管胚细胞瘤、视网膜胚细胞瘤、神经胚细胞瘤、胚细胞瘤、畸胎瘤、恶性间皮瘤(腹膜间皮瘤、心包间皮瘤、胸膜间皮瘤)、胃-肠-胰脏或胃肠胰脏神经内分泌肿瘤(GEP-NET)、类癌瘤、胰脏内分泌肿瘤(PET)、结肠直肠腺癌、结肠直肠癌、侵袭性神经内分泌肿瘤、平滑肌肉瘤粘液性腺癌、印戒细胞腺癌、肝细胞癌、胆管癌、肝胚细胞瘤、血管瘤、肝腺瘤、局限性结节状增生(结节状再生性增生、错构瘤)、非小细胞肺癌(NSCLC)(鳞状细胞肺癌、腺癌、大细胞肺癌)、小细胞肺癌、甲状腺癌、前列腺癌(激素抗拒性、雄激素非依赖性、雄激素依赖性、激素不敏感性)和软组织肉瘤(纤维肉瘤、恶性纤维性组织细胞瘤、皮肤纤维肉瘤、脂肪肉瘤、横纹肌肉瘤平滑肌肉瘤、血管肉瘤、滑膜肉瘤、恶性外周神经鞘瘤/神经纤维肉瘤、骨外骨肉瘤)。
[0678] 一方面，本发明提供如本文所提供的聚乙二醇化卡非佐米化合物或包含所述化合物的药物组合物，其可经施用以治疗患者中的多发性骨髓瘤。例如，多发性骨髓瘤可包括新近经诊断或复发性和/或难治性多发性骨髓瘤中任一者或两者。
[0679] 造血和淋巴样组织的多种肿瘤的特征在于细胞增殖的增加，或特定类型的细胞。慢性骨髓增生性疾病(CMPD)为纯系造血干细胞病症，其特征在于一个或多个骨髓谱系的骨髓的增生，导致外周血中粒细胞、红血球和/或血小板的数目增加。因而，蛋白酶体抑制剂用于治疗所述疾病的用途引人注目并且经检查(Cilloni等人,Haematologica(2007)92:
1124-1229)。CMPD可包括慢性骨髓性白血病、慢性中性粒细胞白血病、慢性嗜酸粒细胞白血病、真性红血球增多症、慢性特发性骨髓纤维化、原发性血小板增多症和不可分类慢性骨髓增生性疾病。本文提供一种治疗CMPD的方法，所述方法包括向需要所述治疗的患者施用有效量的本文所公开的蛋白酶体抑制剂化合物。
1124-1229)。CMPD可包括慢性骨髓性白血病、慢性中性粒细胞白血病、慢性嗜酸粒细胞白血病、真性红血球增多症、慢性特发性骨髓纤维化、原发性血小板增多症和不可分类慢性骨髓增生性疾病。本文提供一种治疗CMPD的方法，所述方法包括向需要所述治疗的患者施用有效量的本文所公开的蛋白酶体抑制剂化合物。
[0680] 骨髓增生异常/骨髓增生性疾病(如慢性骨髓单核细胞性白血病、非典型慢性骨髓白血病、青少年骨髓单核细胞性白血病和不可分类骨髓增生异常/骨髓增生性疾病)的特征在于归因于一个或多个骨髓谱系的增生的骨髓细胞过多。用本文所述的组合物抑制所述蛋白酶体可用于通过向需要所述治疗的患者提供有效量的所述组合物来治疗这些骨髓增生异常/骨髓增生性疾病。
[0681] 骨髓增生异常综合征(MDS)是指一组造血干细胞病症，其特征在于一种或多种主要骨髓细胞系中的增生异常和无效造血。在这些血液学恶性肿瘤中用蛋白酶体抑制剂靶向NF-kB会诱导细胞凋亡，由此杀灭恶性细胞(Braun等人Cell Death and Differentiation(2006)13:748-758)。本文进一步提供一种治疗MDS的方法，所述方法包括向需要所述治疗的患者施用有效量的本文所提供的化合物。MDS包括难治性贫血、难治性贫血伴环形含铁胚血球、难治性血球减少伴多谱系增生异常、难治性贫血伴过多胚细胞、不可分类骨髓增生异常综合征和与分离的del(5q)染色体异常有关的骨髓增生异常综合征。
[0682] 肥大细胞增生症为肥大细胞的增生和其随后积聚于一个或多个器官系统中。肥大细胞增生症包括但不限于皮肤肥大细胞增生症、无痛性全身性肥大细胞增生症(ISM)、全身性肥大细胞增生症合并纯系血液学非肥大细胞谱系疾病(SM-AHNMD)、侵袭性全身性肥大细胞增生症(ASM)、肥大细胞白血病(MCL)、肥大细胞肉瘤(MCS)和皮外肥大细胞瘤。本文进一步提供一种治疗肥大细胞增生症的方法，所述方法包括向经诊断患有肥大细胞增生症的患者施用有效量的本文所公开的化合物。
[0683] 额外实施方案包括用于影响致癌蛋白的蛋白酶体依赖性调节的方法和治疗或抑制癌症生长的方法，各方法包括使细胞暴露(体内，例如患者中，或体外)于本文所公开的组合物。HPV-16和HPV-18源性E6蛋白刺激粗网状细胞溶解产物中p53的ATP和泛素依赖性结合和降解。隐性致癌基因p53已显示在非许可温度下积聚于具有突变型不耐热E1的细胞系中。
升高水平的p53可导致细胞凋亡。由泛素系统降解的原致癌蛋白的实例包括c-Mos、c-Fos和c-Jun。一个实施方案为一种用于治疗p53相关细胞凋亡的方法，所述方法包括向患者施用有效量的本文所公开的组合物。
升高水平的p53可导致细胞凋亡。由泛素系统降解的原致癌蛋白的实例包括c-Mos、c-Fos和c-Jun。一个实施方案为一种用于治疗p53相关细胞凋亡的方法，所述方法包括向患者施用有效量的本文所公开的组合物。
[0684] 还已证明，结合于20S蛋白酶体的抑制剂在骨器官培养物中刺激骨形成。此外，当所述抑制剂已全身性施用于小鼠时，某些蛋白酶体抑制剂增加骨体积和骨形成速率超过70％(Garrett,I.R.等人,J.Clin.Invest.(2003)111:1771-1782)，由此表明所述泛素-蛋白酶体机构调节成骨细胞分化和骨形成。因此，所公开的组合物可适用于治疗和/或预防与骨损失有关的疾病，如骨质疏松症。
[0685] 骨组织为用于具有刺激骨细胞的能力的因子的优秀来源。因此，牛骨组织的提取物不仅含有负责维持骨结构完整性的结构蛋白，而且含有可刺激骨细胞增生的生物活性骨生长因子。在这些后者因子中有新近描述的蛋白家族，其称作骨成形性蛋白(BMP)。所有这些生长因子均对其他类型的细胞以及对骨细胞具有影响，包括Hardy,M.H.等人,Trans Genet(1992)8:55-61描述骨成形性蛋白(BMP)在发育期间在毛囊中差异表达的迹象。
Harris,S.E.等人,J Bone Miner Res(1994)9:855-863描述TGF-β对骨细胞中的BMP-2和其他物质的表达的影响。在成熟期间和在细胞增生时期的后还发生成熟毛囊中的BMP-2表达(Hardy等人(1992,上述)。因此，本文所提供的化合物还可适用于毛囊生长刺激。
Harris,S.E.等人,J Bone Miner Res(1994)9:855-863描述TGF-β对骨细胞中的BMP-2和其他物质的表达的影响。在成熟期间和在细胞增生时期的后还发生成熟毛囊中的BMP-2表达(Hardy等人(1992,上述)。因此，本文所提供的化合物还可适用于毛囊生长刺激。
[0686] 最后，所公开的组合物还适用作用于筛选由Ntn水解酶(包括所述蛋白酶体)加工的蛋白(例如，酶、转录因子)的诊断剂(例如，在诊断套组中或用于临床实验室)。所公开的组合物还适用作用于特异性结合X/MB1次单元或α链并且抑制与其相关的蛋白水解活性的研究试剂。例如，可确定所述蛋白酶体的其他次单元的活性(和特异性抑制剂)。
[0687] 大多数细胞蛋白在成熟或活化期间经受蛋白水解加工。本文所公开的酶抑制剂可用于确定细胞、发育或生理学过程或输出是否由特定Ntn水解酶的蛋白水解活性调节。一种所述方法包括获得生物体、完整细胞制剂或细胞提取物；使所述生物体、细胞制剂或细胞提取物暴露于本文所公开的组合物；使化合物暴露的生物体、细胞制剂或细胞提取物暴露于信号，和监测所述过程或输出。本文所公开的化合物的高选择性允许给定细胞、发育或生理学过程中Ntn(例如，20S蛋白酶体)的快速并且精确消除或牵连。
[0688] 药物组合物
[0689] 本发明进一步提供药物组合物以对癌症患者施用所述治疗。所述组合物包含一种和在一些实施方案中超过一种如本文所述的式I或II和其子式的PEG卡非佐米化合物。本发明所提供的一种类型的药物组合物为肠胃外施用的药物组合物。适用于输注、注射或皮下施用的可肠胃外施用组合物可包括无菌水溶液(其中水可溶)或分散液和/或用于供输注或注射用的无菌溶液或分散液的临时制备的无菌粉末。关于静脉内施用(如通过输注)，合适载体包括无菌注射用水、无菌缓冲液(如柠檬酸盐缓冲液)、抑菌水和Cremophor ELTM(BASF,Parsippany,NJ)。在所有情况下，尤其就人类用途、治疗和消耗而言，所述组合物必须无菌并且应流动至使其容易添加至或拉升至注射器或输注袋中的程度。所述组合物应在制造和存储条件下稳定并且必须针对如细菌和真菌的微生物的污染作用进行防腐处理。载体可为含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)和其合适混合物的溶剂或分散介质。适当流动性可例如通过使用涂层(如卵磷脂)，在分散液的情况下通过维持所需粒径和通过使用表面活性剂来维持。微生物作用的预防可通过多种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等实现。在多种情况下，在所述组合物中包括例如糖、多元醇(如甘露醇、山梨醇)和氯化钠的等张剂将为优选的。可通过在所述组合物中包括延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来引起可注射组合物的延长吸收。
[0690] 无菌可注射溶液可通过在需要时具有一种上文所列举的成分或所述成分的组合的适当溶剂中并入所需量的本发明活性化合物PEG卡非佐米化合物、随后过滤灭菌来制备。
一般地，分散液通过将所述卡非佐米并入无菌媒剂中来制备，所述无菌媒剂含有基础分散介质和来自上文所列举的那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，合适制备方法为冷冻干燥(冻干)，其提供所述卡非佐米的粉末形式加上来自其先前经无菌过滤溶液的任何额外所需成分。
一般地，分散液通过将所述卡非佐米并入无菌媒剂中来制备，所述无菌媒剂含有基础分散介质和来自上文所列举的那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，合适制备方法为冷冻干燥(冻干)，其提供所述卡非佐米的粉末形式加上来自其先前经无菌过滤溶液的任何额外所需成分。
[0691] 如本文所述的本发明治疗性化合物的全身性施用还可通过经粘膜或经皮方式。关于经粘膜或经皮施用，适于欲渗透的屏障的渗透剂用于所述制剂中。所述渗透剂一般为所属领域中已知的，并且就经粘膜施用来说包括例如清洁剂、胆盐和梭链孢酸衍生物。经粘膜施用可经由使用鼻喷雾剂或栓剂来实现。关于经皮施用，本发明活性化合物经配制成如所属领域中一般已知的软膏、油膏、凝胶或乳膏。
[0692] 在一个实施方案中，本发明的治疗性PEG卡非佐米化合物用将保护所述治疗性化合物免于从身体快速消除的载体制备，如控制释放制剂。其他实例包括而不限于植入物和微封装递送系统。可使用生物可降解、生物相容性聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。所述制剂可使用标准技术制备，或在商业上获自例如Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals,Inc。脂质体悬浮液(包括用细胞抗原的单克隆抗体靶向所选细胞的脂质体)还可用作药学上可接受的载体。这些可根据所属领域的技术人员已知的方法(例如，如美国专利号4,522,811所述)制备。
[0693] 由本发明提供的药物组合物可立即施用，或可分成多个欲以时间间隔施用的较小剂量。应理解治疗的精确剂量和持续时间随所治疗的疾病而变并且可凭经验使用已知测试方案或通过从体内或体外测试资料外推而确定。应注意浓度和剂量值还可随欲缓解的病况的严重程度而变化。应进一步理解关于任何特定患者，特定给药方案应根据个体需求和施用或监督施用所述组合物的人的专业判断随时间加以调节，并且本文所陈述的浓度范围仅为示例性的并且不意图限制所主张的组合物的范围或实践。
[0694] 可制备含有在0.005％至100％范围内的如本文所述的本发明PEG-卡非佐米化合物的剂型或组合物(余下由无毒载体构成)。所属领域的技术人员已知用于制备这些组合物的方法。本发明的预期药物组合物可含有0.001％-100％、在一个实施方案中0.1-95％并且在另一实施方案中75-85％的由此提供的PEG卡非佐米化合物。所述药物组合物可连同施用说明书一起纳入容器、包装或分配器中。在一些实施方案中，本文所提供的PEG卡非佐米化合物可如美国专利号9309283所述经配制。
[0695] 施用
[0696] 如本文所述制备的组合物可以多种形式施用，视欲治疗的病症和患者的年龄、健康状态和体重而定，如所属领域中众所周知。例如，在所述组合物欲口服施用的情况下，其可经配制为片剂、胶囊、颗粒、散剂或糖浆；或就肠胃外施用来说，其可经配制为注射液(静脉内、肌肉内或皮下)、滴注制剂或栓剂。关于通过眼科粘膜途径应用，其可经配制为滴眼剂或眼用软膏。这些制剂可通过常规方式以及本文所述的方法制备并且必要时，活性成分可与如粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、增溶剂、悬浮助剂、乳化剂或涂布剂的任何常规添加剂或赋形剂混合。尽管剂量将视患者的症状、年龄和体重、欲治疗或预防的病症的性质和严重程度、施用途径和药物形式而变化，一般来说，0.01至2000mg所述化合物的每天剂量经推荐用于成年人类患者，并且这一剂量可以单一剂量或以分次给药施用。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量一般将为所述化合物产生治疗效应的那个量。下文提供关于本发明化合物的剂量的更多信息。一般来说，意图用于肠胃外用途(例如，静脉内、皮下注射)的组合物包括增溶剂。所述增溶剂可为经取代环糊精。
[0697] 就给定患者的治疗功效来说将产生最有效结果的所述组合物的精确施用时间和/或量将取决于所述特定PEG卡非佐米化合物的活性、药物动力学和生物可用性、所述患者的生理状况(包括年龄、性别、疾病类型和阶段、一般身体状况、对给定剂量的反应性和药物类型)、施用途径等。然而，以上指导方针可用作用于微调所述治疗的基础，例如确定最佳施用时间和/或量，其将仅仅需要由监测所述患者和调节剂量和/或时间安排组成的常规实验。
[0698] 短语“药学上可接受”在本文中用于指在合理医学判断的范围内适合与人类和动物组织接触使用而无过量毒性、刺激、过敏性反应或其他问题或并发症，与合理效益/风险比率相称的那些配体、材料、组合物和/或剂型。
[0699] 如本文所用，短语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或媒剂，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料。各载体必须在可与所述制剂的其他成分相容并且对患者无害的意义上为“可接受的”。可充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉、马铃薯淀粉和经取代或未取代β-环糊精；(3)纤维素和其衍生物，如羧基甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉末状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；(9)油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)褐藻酸；(16)无热原质水；(17)等张生理盐水；
(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；和(21)用于药物制剂中的其他无毒可相容物质。在某些实施方案中，本文所提供的药物组合物为非热原质的，即当施用于患者时不诱导显著温度升高。
(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；和(21)用于药物制剂中的其他无毒可相容物质。在某些实施方案中，本文所提供的药物组合物为非热原质的，即当施用于患者时不诱导显著温度升高。
[0700] 术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的相对无毒、无机和有机酸加成盐或碱性盐。这些盐可在所述化合物的最终分离和纯化期间当场制备，或通过独立地使呈其游离碱形式的经纯化PEG-卡非佐米化合物与合适的有机或无机酸反应并且分离因此形成的盐来制备。代表性酸加成盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、顺丁烯二酸盐、反丁烯二酸盐、丁二酸盐、酒石酸盐、萘酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐、月桂基磺酸盐和氨基酸盐等。(参见例如Berge等人(1977)
“Pharmaceutical Salts”,J.Pharm.Sci.66:1-19。)
“Pharmaceutical Salts”,J.Pharm.Sci.66:1-19。)
[0701] 在一些实施方案中，本文所提供的PEG卡非佐米化合物可含有一种或多种酸性官能团并且因此能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。在这些情况中的术语“药学上可接受的盐”是指所述化合物的相对无毒无机和有机碱加成盐。这些盐可同样在所述抑制剂的最终分离和纯化期间当场制备，或通过独立地使呈其游离酸形式的所述化合物与合适的碱(如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)，与氨，或与药学上可接受的有机伯、仲或叔胺反应来制备。代表性碱性盐包括而不限于碱金属或碱土金属盐，如锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等。适用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等(参见例如Berge等人,上述)。
[0703] 药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，如棕榈酸抗坏血脂、丁基化羟基茴香醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
[0704] 适用于口服施用的制剂可呈胶囊、药囊、丸剂、片剂、口含锭(使用调味基料，通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)、散剂、颗粒形式，或呈水性或非水性液体中的溶液或悬浮液形式，或呈水包油或油包水液体乳液形式，或呈酏剂或糖浆形式，或呈丸粒(使用惰性基质，如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)形式和/或呈漱口水形式等，各含有预定量的本发明化合物作为活性成分。组合物还可呈推注、舐剂或糊剂形式施用。
[0705] 在用于口服施用的固体剂型(胶囊、片剂、丸剂、糖衣药丸、散剂、颗粒等)中，所述活性成分(本发明化合物)与一种或多种药学上可接受的载体混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或以下任一者：(1)填充剂或增量剂，如淀粉、环糊精、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，如羧基甲基纤维素、褐藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，如甘油；(4)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶解阻滞剂，如石蜡；(6)吸收促进剂，如季铵化合物；(7)湿润剂，如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸附剂，如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和其混合物；和(10)着色剂。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，所述药物组合物还可包含缓冲剂。类似类型的固体组合物还可在使用如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中用作填充剂。
[0706] 片剂可通过任选地与一种或多种附属成分一起压缩或模制而制得。压缩片剂可使用粘合剂(例如明胶或羟基丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如乙醇酸淀粉钠或交联羧基甲基纤维素钠)、表面活性或分散剂制备。模制片剂可通过在合适机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的粉末状抑制剂的混合物而制得。
[0707] 片剂和如糖衣药丸、胶囊、丸剂和颗粒的其他固体剂型可任选地刻痕或用包衣和壳制备，如肠溶包衣和药物配制技术中众所周知的其他包衣。其还可使用例如呈变化比例以提供所需释放概况的羟基丙基甲基纤维素、其他聚合物基质、脂质体和/或微球配制以便提供其中活性成分的缓慢或控制释放。其可通过例如经由细菌截留过滤器过滤，或通过并入呈可在使用之前即刻溶解于无菌水或一些其他无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌。这些组合物还可任选地含有乳浊剂并且可具有如下组成，所述组成使其任选地以延迟方式在胃肠道的特定部分中仅或优先地释放活性成分。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。所述活性成分还可呈微封装形式，适当时具有一种或多种上文所述的赋形剂。
[0708] 用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了所述活性成分以外，所述液体剂型还可含有所属领域中通常使用的惰性稀释剂，如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(尤其棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、和山梨聚糖的脂肪酸酯和其混合物。除惰性稀释剂以外，所述口服组合物还可包括佐剂，如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。
[0709] 除了活性抑制剂以外，悬浮液还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨聚糖酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶和其混合物。
[0710] 用于直肠或阴道施用的制剂可呈栓剂形式提供，所述栓剂可通过混合一种或多种抑制剂与包含例如可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸盐的一种或多种合适非刺激性赋形剂或载体来制备，其在室温下为固体，但在体温下为液体并且因此将在直肠或阴道腔中融化并且释放活性剂。
[0711] 适用于阴道施用的制剂还包括子宫托、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、发泡剂或含有如所属领域中已知适当的载体的喷雾制剂。
[0712] 用于表面或经皮施用本发明的所选化合物的剂型包括散剂、喷雾剂、软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、溶液、贴片和吸入剂。所述化合物可在无菌条件下与药学上可接受的载体和与可需要的任何防腐剂、缓冲液或推进剂混合。
[0713] 除本发明化合物以外，所述软膏、糊剂、乳膏和凝胶还可含有赋形剂，如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌或其混合物。除本发明化合物以外，散剂和喷雾剂还可含有赋形剂，如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂可另外含有惯用推进剂，如氯氟烃和挥发性未取代烃，如丁烷和丙烷。
[0714] 本发明的PEG卡非佐米化合物可通过气雾剂施用。此举通过制备含有所述组合物的水性气雾剂、脂质体制剂或固体粒子来实现。可能使用非水性(例如，氟碳推进剂)悬浮液。在一些实施方案中，声波喷雾器为优选的，因为其使所述试剂与剪切力的接触减至最低，所述剪切力可导致所述化合物的降解。通常地，水性气雾剂通过与常规药学上可接受的载体和稳定剂一起配制所述试剂的水溶液或悬浮液而制得。所述载体和稳定剂随特定组合物的需求而变化，但典型地包括非离子性表面活性剂(Tween、Pluronic、山梨聚糖酯、卵磷脂、Cremophor)、药学上可接受的共溶剂(如聚乙二醇)、无害蛋白(如血清白蛋白)、山梨聚糖酯、油酸、卵磷脂、氨基酸(如甘氨酸)、缓冲液、盐、糖或糖醇。气雾剂一般地由等张溶液制备。
[0715] 经皮贴片具有向身体提供本发明化合物的控制递送的附加优势。所述剂型可通过使所述化合物溶解或分散于适当介质中而制得。吸收增强剂还可用于增加所述化合物跨皮肤的通量。所述通量的速率可通过提供速率控制膜或在聚合物基质或凝胶中分散所述化合物来控制。
[0716] 适用于肠胃外施用的药物组合物包含与一种或多种药学上可接受的无菌水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液组合的一种或多种本发明化合物，或可仅在使用之前复原成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末，其可含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂、使得所述制剂与预期接受者的血液等张的溶质或悬浮或增稠剂。可用于本文所提供的药物组合物的合适水性和非水性载体的实例包括注射用水(如通过皮下施用(例如，无菌注射用水))、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、缓冲液(如柠檬酸盐缓冲液)和其合适混合物、植物油(如橄榄油)和可注射有机酯(如油酸乙酯)。适当流动性可例如通过使用涂布材料(如卵磷脂)，在分散液的情况下通过维持所需粒径和通过使用表面活性剂来维持。
[0717] 药物组合物典型地包括药学上可接受的载体。如本文所用，术语“药学上可接受的载体”包括可与药物施用相容的缓冲液、无菌注射用水、溶剂、分散介质、涂料、抗细菌剂和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂等。在一些实施方案中，药学上可接受的载体为酸-碱缓冲液系统，如柠檬酸盐缓冲液，以维持用于所得溶液的稳定pH。在一些实施方案中，药学上可接受的载体为无菌注射用水。在一些实施方案中，药学上可接受的载体包含柠檬酸。
[0718] 这些组合物还可含有佐剂，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。微生物作用的预防可通过包括多种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等来确保。还可需要在所述组合物中包括张力调节剂，如糖等。另外，可通过包括延迟吸收的试剂(如单硬脂酸铝和明胶)来引起可注射药物形式的延长吸收。在一些情况下，为了延长药物的效应，可需要减慢从皮下或肌肉内注射吸收所述药物。例如，肠胃外施用的药物形式的延迟吸收通过使所述药物溶解或悬浮于油媒剂中来实现。
[0719] 可注射储槽形式通过在如聚丙交酯-聚乙交酯的生物可降解聚合物中形成本发明化合物的微封装基质而制得。视卡非佐米与聚合物的比率(典型地重量比率)和所用特定聚合物的性质而定，可控制卡非佐米释放的速率。其他生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。储槽可注射制剂还通过将所述药物截留于可与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。
[0720] 试剂的制剂可口服、肠胃外、经表面或经直肠给予。其当然通过适用于各施用途径的形式给予。例如，其呈片剂或胶囊形式、通过注射、吸入、眼用洗剂、软膏、栓剂、输注；通过洗剂或软膏经表面；和通过栓剂经直肠施用。在一些实施方案中，施用为口服。
[0721] 如本文所用，短语“肠胃外施用(parenteral administration)”和“肠胃外施用(administered parenterally)”意指除肠和表面施用以外的施用模式，通常通过注射，并且包括而不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊椎内和胸骨内注射和输注。
[0722] 如本文所用，短语“全身性施用(systemic administration)”、“全身性施用(administered systemically)”、“外周施用(peripheral administration)”和“外周施用(administered peripherally)”意指配体、药物或其他材料除直接施用于中枢神经系统中以外的施用，以致其进入患者的系统并且因此经受代谢和其他类似过程，例如皮下施用。
[0723] 本文所述的本发明的PEG-卡非佐米化合物可通过任何合适施用途径，包括口服、经鼻(如通过例如喷雾剂)、经直肠、阴道内、肠胃外、脑池内和经表面(如通过散剂、软膏或滴剂，包括经颊和舌下)施用于人类和其他动物以用于疗法。
[0724] 与所选施用途径无关，可以合适水合形式使用的本发明化合物和/或本文所提供的药物组合物通过所属领域的技术人员已知的常规方法配制成药学上可接受的剂型。
[0725] 如上文所提及，由本发明提供的药物组合物中所述PEG卡非佐米化合物的实际剂量可变化以便包括在临床上证明有效和/或在商业上获批有效的活性无PEG卡非佐米剂的
量，以实现对癌症患者(包括而不限于对多发性骨髓瘤患者)的所需治疗反应。为此，在药学上可接受的组合物中本发明的聚乙二醇化卡非佐米化合物的特定量和/或浓度将视数种因素而变化，包括欲施用的化合物的量、所用化合物的药物动力学特征和施用途径。一般来说，由本发明提供的药物组合物可为用于肠胃外施用的水溶液，其含有约0.1-20％w/v的本文所公开的化合物以及其他物质。假定每天1-4次分次给药，PEG卡非佐米化合物活性成分的典型剂量范围为每天约0.01至约50mg/kg体重。各分次给药将含有一种或多种由本发明提供的化合物。所需、特定化合物剂量应为足以在患者血浆中提供治疗有效剂量的自由作用卡非佐米的量，所述有效剂量基于用于监管获批适应症的监管获批用途。这一有效量可在患者之间变化，并且一般取决于数种因素，包括患者的总体健康状况和所选化合物的特定配制组合物和施用途径。
量，以实现对癌症患者(包括而不限于对多发性骨髓瘤患者)的所需治疗反应。为此，在药学上可接受的组合物中本发明的聚乙二醇化卡非佐米化合物的特定量和/或浓度将视数种因素而变化，包括欲施用的化合物的量、所用化合物的药物动力学特征和施用途径。一般来说，由本发明提供的药物组合物可为用于肠胃外施用的水溶液，其含有约0.1-20％w/v的本文所公开的化合物以及其他物质。假定每天1-4次分次给药，PEG卡非佐米化合物活性成分的典型剂量范围为每天约0.01至约50mg/kg体重。各分次给药将含有一种或多种由本发明提供的化合物。所需、特定化合物剂量应为足以在患者血浆中提供治疗有效剂量的自由作用卡非佐米的量，所述有效剂量基于用于监管获批适应症的监管获批用途。这一有效量可在患者之间变化，并且一般取决于数种因素，包括患者的总体健康状况和所选化合物的特定配制组合物和施用途径。
[0726] 卡非佐米目前以每天一次提供，持续每周最初连续2天，在28天周期中持续连续3周的剂量获批，其量足以提供介于20mg/m2至56mg/m2范围内的患者血浆浓度。因此，本发明的较高分子量PEG卡非佐米化合物应以足以在药物动力学上提供大约等于获批剂量范围的量的量施用。例如，本发明的2K PEG化合物为大约24重量％游离卡非佐米。因此，使用具有1.9m2平均体表的平均男性时，为了实现约27mg/m2的相等剂量，将必须以约215mg的所述2k PEGCFZ化合物给药。同样，可以约1100mg的20K PEG CFZ化合物给药以递送与目前获批卡非佐米制剂的70mg/m2剂量将相同的量的卡非佐米。
[0727] 在本发明的实施方案71中，提供一种治疗需要治疗的个体中的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用有效剂量的式I的PEG卡非佐米化合物以治疗所述癌症。在实施方案72中，本发明提供实施方案71的方法，其中所述癌症为多发性骨髓瘤。在实施方案73中，本发明提供实施方案71-72中任一者的方法，其中PEG卡非佐米的有效剂量在约100mg至约2000mg范围内。在实施方案74中，本发明提供实施方案71-73中任一者的方法，其中所述有效剂量在每天约150mg至约1000mg范围内。在实施方案75中，本发明提供实施方案71-74中任一者的方法，其中所施用的PEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约200mg至约500mg范围内。在实施方案76中，本发明提供实施方案71-73中任一者的方法，其中所施用的2KPEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约150mg至约600mg范围内。在实施方案77中，本发明提供实施方案71-73中任一者的方法，其中所施用的3K PEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约300mg至约2000mg范围内。在实施方案78中，本发明提供实施方案71-73中任一者的方法，其中所施用的5KPEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约800mg至约3000mg范围内。在实施方案79中，本发明提供实施方案71-73中任一者的方法，其中所施用的20K PEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约800mg至约3000mg范围内。在实施方案80中，本发明提供实施方案
71-73中任一者的方法，其中所施用的PEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约200mg至约
1500mg范围内。在实施方案81中，本发明提供实施方案71-73中任一者的方法，其中所施用的PEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约5mg/kg至约50mg/kg(以所述个体的重量计)范
围内。在实施方案82中，本发明提供实施方案71-73中任一者的方法，其中所施用的2K、3K或
5KPEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约200mg至约800mg范围内。在实施方案83中，本发明提供实施方案71-73中任一者的方法，其中所施用的2K或3K PEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约200mg至约500mg范围内。在实施方案84中，本发明提供实施方案71-73中任一者的方法，其中所施用的5K或20KPEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约400mg至约
1000mg范围内。在实施方案85中，本发明提供实施方案71-84中任一者的方法，其中所述方法进一步包括施用类固醇。在实施方案86中，本发明提供实施方案85的方法，其中所述类固醇选自由地塞米松和泼尼松组成的组。在实施方案87中，本发明提供实施方案85-86中任一者的方法，其中所述类固醇为地塞米松。在实施方案88中，本发明提供实施方案85-86中任一者的方法，其中所述类固醇为泼尼松。在实施方案89中，本发明提供实施方案71-88中任一者的方法，其中所述方法进一步包含施用选自由沙利度胺、来那度胺和泊马度胺组成的组的免疫调节剂。在实施方案90中，本发明提供实施方案89的方法，其中所述免疫调节剂为来那度胺或泊马度胺。在实施方案91中，本发明提供实施方案89-90中任一者的方法，其中所述免疫调节剂为来那度胺。在实施方案92中，本发明提供实施方案89-90中任一者的方法，其中所述免疫调节剂为泊马度胺。在实施方案93中，本发明提供实施方案71-88中任一者的方法，其中所述方法进一步包括施用CD-38抑制剂。在实施方案94中，本发明提供实施方案93的方法，其中所述CD-38抑制剂为达雷木单抗。在实施方案95中，本发明提供实施方案71-94中任一者的方法，其中所述癌症为复发性或难治性多发性骨髓瘤。在实施方案96中，本发明提供实施方案71-94中任一者的方法，其中所述癌症为新近经诊断的多发性骨髓瘤。在实施方案97中，本发明提供实施方案96的方法，其中所述癌症为新近经诊断的多发性骨髓瘤并且其中所述患者有资格接受干细胞移植，如由注册、授权医学从业者所确定。在实施方案98中，本发明提供实施方案96的方法，其中所述癌症为新近经诊断的多发性骨髓瘤并且其中所述患者无资格接受干细胞移植，如由注册、授权医学从业者所确定。在实施方案
99中，本发明提供实施方案71-98中任一者的方法，其中所述方法包括向所述个体施用包含式I的PEG卡非佐米化合物的药物组合物。在实施方案100中，本发明提供实施方案99的方法，其中所述药物组合物为口服溶液或肠胃外溶液。在实施方案101中，本发明提供实施方案99-100中任一者的方法，其中所述药物组合物为可在施用之前复原的冷冻干燥制剂。在实施方案102中，本发明提供实施方案71-98中每一者的方法，其中所述PEG卡非佐米化合物为
71-73中任一者的方法，其中所施用的PEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约200mg至约
1500mg范围内。在实施方案81中，本发明提供实施方案71-73中任一者的方法，其中所施用的PEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约5mg/kg至约50mg/kg(以所述个体的重量计)范
围内。在实施方案82中，本发明提供实施方案71-73中任一者的方法，其中所施用的2K、3K或
5KPEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约200mg至约800mg范围内。在实施方案83中，本发明提供实施方案71-73中任一者的方法，其中所施用的2K或3K PEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约200mg至约500mg范围内。在实施方案84中，本发明提供实施方案71-73中任一者的方法，其中所施用的5K或20KPEG卡非佐米化合物的有效剂量在每天约400mg至约
1000mg范围内。在实施方案85中，本发明提供实施方案71-84中任一者的方法，其中所述方法进一步包括施用类固醇。在实施方案86中，本发明提供实施方案85的方法，其中所述类固醇选自由地塞米松和泼尼松组成的组。在实施方案87中，本发明提供实施方案85-86中任一者的方法，其中所述类固醇为地塞米松。在实施方案88中，本发明提供实施方案85-86中任一者的方法，其中所述类固醇为泼尼松。在实施方案89中，本发明提供实施方案71-88中任一者的方法，其中所述方法进一步包含施用选自由沙利度胺、来那度胺和泊马度胺组成的组的免疫调节剂。在实施方案90中，本发明提供实施方案89的方法，其中所述免疫调节剂为来那度胺或泊马度胺。在实施方案91中，本发明提供实施方案89-90中任一者的方法，其中所述免疫调节剂为来那度胺。在实施方案92中，本发明提供实施方案89-90中任一者的方法，其中所述免疫调节剂为泊马度胺。在实施方案93中，本发明提供实施方案71-88中任一者的方法，其中所述方法进一步包括施用CD-38抑制剂。在实施方案94中，本发明提供实施方案93的方法，其中所述CD-38抑制剂为达雷木单抗。在实施方案95中，本发明提供实施方案71-94中任一者的方法，其中所述癌症为复发性或难治性多发性骨髓瘤。在实施方案96中，本发明提供实施方案71-94中任一者的方法，其中所述癌症为新近经诊断的多发性骨髓瘤。在实施方案97中，本发明提供实施方案96的方法，其中所述癌症为新近经诊断的多发性骨髓瘤并且其中所述患者有资格接受干细胞移植，如由注册、授权医学从业者所确定。在实施方案98中，本发明提供实施方案96的方法，其中所述癌症为新近经诊断的多发性骨髓瘤并且其中所述患者无资格接受干细胞移植，如由注册、授权医学从业者所确定。在实施方案
99中，本发明提供实施方案71-98中任一者的方法，其中所述方法包括向所述个体施用包含式I的PEG卡非佐米化合物的药物组合物。在实施方案100中，本发明提供实施方案99的方法，其中所述药物组合物为口服溶液或肠胃外溶液。在实施方案101中，本发明提供实施方案99-100中任一者的方法，其中所述药物组合物为可在施用之前复原的冷冻干燥制剂。在实施方案102中，本发明提供实施方案71-98中每一者的方法，其中所述PEG卡非佐米化合物为
[0728]
[0729] 其中R1为C1-10烷基；
[0730] R2为C1-6烷基、-OCH3或卤素；
[0731] R3为H或CH3；
[0732] X-为选自氯化物阴离子和烷基-磺酸盐阴离子的抗衡阴离子；
[0733] n为4；和
[0734] PEG为具有3000、5000或20000道尔顿分子量的聚乙二醇聚合物部分。
[0735] 在实施方案103中，本发明提供实施方案71-98的方法，其中所述PEG卡非佐米化合物为
[0736]
[0737] 在实施方案104中，本发明提供实施方案71-98的方法，其中所述PEG卡非佐米化合物为
[0738]
[0739]
[0740] 组合
[0741] 虽然本发明的PEG-卡非佐米化合物可呈单独活性医药剂形式给药或施用，但其还可与一种或多种试剂(如第二抗癌剂)组合使用。当呈组合形式施用时，所述PEG卡非佐米活性成分和所述另一试剂可经配制为同时或在不同时间依序施用的独立组合物，或两种活性剂可呈单一组合物形式给予。
[0742] 在定义本发明的PEG卡非佐米化合物和另一抗癌剂的用途时，短语“协同疗法”(或“组合疗法”)意图涵盖在将提供所述药物组合物的有益效应的方案中以依序方式施用各试剂，并且还意图涵盖以实质上同时方式共施用这些试剂，如在具有固定比率的这些活性剂的单一剂量制剂中，或在用于各活性剂的多个、独立剂量制剂中。因此，本发明在施用顺序方面不受限制，即所述PEG卡非佐米化合物可在另一试剂的施用之前、同时或之后施用。
[0743] 在某些实施方案中，本文所述的PEG-卡非佐米化合物与一种或多种其他蛋白酶体抑制剂共同施用。另一蛋白酶体抑制剂可包括例如硼替佐米、奥普佐米或依沙佐米。在另一实施方案中，本文所述的PEG卡非佐米化合物与包括沙利度胺、来那度胺和泊马度胺的免疫调节化合物组合施用。在来自前一实施方案的一个实施方案中，所述PEG卡非佐米与选自来那度胺和泊马度胺的免疫调节剂组合施用。在另一实施方案中，本发明提供一种通过向个体施用包含式I或II的PEG卡非佐米化合物和免疫调节剂的组合疗法来治疗所述个体中的癌症的方法。在另一实施方案中，所述癌症为多发性骨髓瘤。
[0744] 在某些实施方案中，本文所述的PEG-卡非佐米化合物与一种或多种化学治疗剂共同施用。合适化学治疗剂可包括天然产品，如长春花属生物碱(即，长春花碱、长春新碱和长春瑞滨)、紫杉烷(例如多西他赛、紫杉醇，例如多西他赛)、表鬼臼毒素(即，依托泊苷、替尼泊苷)、抗生素(放线菌素(放线菌素D)道诺霉素、阿霉素和埃达霉素；例如阿霉素)、蒽环类、米托蒽醌、博来霉素、普卡霉素(光神霉素)和丝裂霉素、酶(L-天冬酰胺酶，其全身性代谢L-天冬酰胺并且剥夺不具有合成其本身天冬酰胺的能力的细胞)；抗血小板剂；抗增生/抗有丝分裂烷基化剂，如氮芥(二氯甲基二乙胺、异环磷酰胺、环磷酰胺和类似物、美法仑、苯丁酸氮芥，例如美法仑)、乙烯亚胺和甲基三聚氰胺(六甲基三聚氰胺和噻替哌)、烷基磺酸酯(白消安)、亚硝基脲(卡莫司汀(BCNU)和类似物、链脲霉素)、四氮烯(trazene)-达卡巴嗪(DTIC)；抗增生/抗有丝分裂抗代谢物，如叶酸类似物(甲氨蝶呤)、嘧啶类似物(氟脲嘧啶、氟尿苷和阿糖胞苷)、嘌呤类似物和相关抑制剂(巯嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁和2-氯脱氧腺苷)；芳香酶抑制剂(阿那曲唑、依西美坦和来曲唑)；铂配位错合物(顺铂、卡铂)、甲基苄肼、羟基脲、米托坦、氨鲁米特；DNA结合/细胞毒性剂(例如Zalypsis)；组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂(例如曲古抑菌素、丁酸钠、阿皮西单(apicidan)、辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA(Vorinostat))、曲古抑菌素A、酯肽、制蚜菌素、A-161906、斯瑞泰德、PXD-101、CHAP、丁酸、德布地欣(depudecin)、奥沙福拉定(oxamflatin)、苯基丁酸盐、丙戊酸、MS275(N-(2-氨基苯基)-4-[N-(吡啶-3-基甲氧基-羰基)氨基甲基]苯甲酰胺)、LAQ824/LBH589、CI994、
MGCD0103、ACY-1215、Panobinostat)；激素(即，雌激素)和激素激动剂，如促黄体激素释放激素(LHRH)激动剂(戈舍瑞林、亮丙瑞林和曲普瑞林)。其他化学治疗剂可包括二氯甲基二乙胺、喜树碱、异环磷酰胺、他莫昔芬、雷洛昔芬、吉西他滨、温诺平或前述的任何类似物或衍生物变异体。
MGCD0103、ACY-1215、Panobinostat)；激素(即，雌激素)和激素激动剂，如促黄体激素释放激素(LHRH)激动剂(戈舍瑞林、亮丙瑞林和曲普瑞林)。其他化学治疗剂可包括二氯甲基二乙胺、喜树碱、异环磷酰胺、他莫昔芬、雷洛昔芬、吉西他滨、温诺平或前述的任何类似物或衍生物变异体。
[0745] 在某些实施方案中，本文所述的PEG-卡非佐米化合物与细胞因子共同施用。细胞因子包括但不限于干扰素-γ、-α和-β、白细胞介素1-8、10和12、粒细胞单核细胞群落刺激因子(GM-CSF)、TNF-α和-β和TGF-β。
[0746] 在某些实施方案中，本文所述的PEG-卡非佐米化合物与类固醇共同施用。合适类固醇可包括但不限于21-乙酰氧基孕烯醇酮、阿氯米松、阿尔孕酮、安西奈德、倍氯米松、倍他米松、布地奈德、氯泼尼松、氯倍他索、氯可托龙、氯泼尼醇、皮质固酮、皮质酮、可的伐唑、地夫可特、地奈德、去羟米松、地塞米松、二氟拉松、二氟可龙、二氟泼尼酯、甘草次酸、氟扎可特、氟氯奈德、氟米松、氟尼缩松、丙酮化氟新龙、乙酸氟轻松、氟可丁丁酯、氟可龙、氟米龙、乙酸氟培龙、乙酸氟泼尼定、氟泼尼松龙、氟氢缩松、丙酸氟替卡松、福莫可他、哈西奈德、卤倍他索丙酸酯、卤米松、氢化可的松、氯替泼诺、马泼尼酮、甲羟松、甲泼尼松、甲泼尼龙、糠酸莫米松、对氟米松、强碳松、泼尼松龙、25-二乙基氨基乙酸泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠、泼尼松、泼尼松龙戊酸酯、泼尼立定、利美索龙、替可的松、氟羟泼尼松龙、曲安奈德、苯曲安奈德、己曲安奈德和其盐和/或衍生物(例如氢化可的松、地塞米松、甲泼尼龙和泼尼松龙；例如地塞米松)。在某些实施方案中，本文所述的PEG-卡非佐米化合物与地塞米松共同施用。在某些实施方案中，共同疗法包括在KYPROLIS(卡非佐米)标签上提供的给药方案，如由US FDA和由EMA批准。
[0747] 在一些实施方案中，本文所述的PEG-卡非佐米化合物与免疫治疗剂共同施用。合适免疫治疗剂可包括但不限于MDR调节剂(维拉帕米、戊司泊达、比立考达、塔利圭达、拉尼圭达)、环孢霉素、沙利度胺和单克隆抗体。所述单克隆抗体可为裸的或结合的，如利妥昔单抗、托西莫单抗、阿仑珠单抗、依帕珠单抗、替伊莫单抗、吉妥珠单抗-奥佐米星、贝伐单抗、西妥昔单抗、厄洛替尼和曲妥珠单抗。
[0748] 在某些实施方案中，本文所述的PEG-卡非佐米化合物与一种或多种组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂(例如曲古抑菌素、丁酸钠、阿皮西单、辛二酰苯胺异羟肟酸(“SAHA”(Vorinostat))、曲古抑菌素A、酯肽、制蚜菌素、A-161906、斯瑞泰德、PXD-101、CHAP、丁酸、德布地欣、奥沙福拉定、苯基丁酸盐、丙戊酸、MS275(N-(2-氨基苯基)-4-[N-(吡啶-3-基甲氧基-羰基)氨基甲基]苯甲酰胺)、LAQ824/LBH589、CI994、MGCD0103、ACY-1215、
Panobinostat；例如SAHA、ACY-1215、Panobinostat)共同施用。
Panobinostat；例如SAHA、ACY-1215、Panobinostat)共同施用。
[0749] 在某些实施方案中，本文所述的PEG-卡非佐米化合物与一种或多种氮芥(二氯甲基二乙胺、异环磷酰胺、环磷酰胺和类似物、美法仑、苯丁酸氮芥，例如美法仑)共同施用。在某些实施方案中，本文所述的PEG-卡非佐米化合物与一种或多种DNA结合/细胞毒性剂(例如Zalypsis)共同施用。在某些实施方案中，本文所述的PEG-卡非佐米化合物与一种或多种紫杉烷(例如多西他赛、紫杉醇，例如多西他赛)共同施用。
[0750] 在某些实施方案中，本文所述的PEG-卡非佐米化合物与一种或多种抗生素(放线菌素(放线菌素D)道诺霉素、阿霉素和埃达霉素；例如阿霉素)共同施用。
[0751] 前述仅说明本发明并且不意图将本发明限制于所公开的用途。对所属领域的技术人员来说常规的变化和改变意图在随附权利要求书中界定的本发明的范围和性质内。
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