技术领域
[0001] 本
发明涉及
植物生物技术领域，具体地指一种红掌组培快繁接种方法。技术背景
[0002] 红掌(Anthurium andraeaum)，又名花烛、安祖花或火鹤花，为天南星科花烛属多年生常绿草本植物，原产于南美热带雨林，现在欧洲、亚洲、非洲皆有广泛栽培。其花叶优美典雅，花型独特，为叶形苞片，有佛焰花序，色泽鲜艳华丽，具有极大的观赏价值，且花期长，可全年开花，花语是“新婚、祝福、幸运、快乐、大展宏图、热情、热血”，成为现代居室及各种大型活动场所不可多得的装饰珍品。
[0003] 2012年我国红掌上市量为1522万盆，2013年上市量为1900多万盆，上升幅度达27.5％，经济效益高，市场规模巨大。红掌常规的繁殖方法是
播种繁殖和分株繁殖，但繁殖系数低、周期长，难以满足目前市场的巨大需求，加之存在诸如：优良品种的匮乏；遗传育种方面的研究较少，且理论研究与生产实践结合不紧密；种植规模不大，单位面积产量、产值比较低；销售环节薄弱等问题，致使我国每年大量优质红掌种苗依赖进口。
[0004] 植物组织培养技术可在保证母本的优良品种特性的同时，在短时间内提供大量种苗，成为国内红掌产业摆脱依赖进口的主要途径之一。
[0005] 国内外众多研究者对红掌组织培养技术进行了研究，并取得一定的进展，但由于红掌组培再生体系的建立相对缓慢，植株生长参差不齐，继代次数过多造成种苗退化或变异等原因，国内生产的组培苗与进口种苗还存在较大差距。因此，有必要摸索和掌握高效的优质红掌组培苗快繁技术，控制组培苗整齐度、保证成苗量的同时尽量减少继代增殖次数。
[0006] 目前，关于红掌的组培快繁培养基配方及栽培技术已有较多研究报道(夏时
云,等.提高红掌
叶片愈伤组织诱导和植株分化及壮苗率的技术研究.中国农学通报，2005，21(2):45-48；郑学平，等.不同因素对红掌增殖系数的影响.北方
园艺，2009，(7):65-68；郭云贵，等红掌愈伤组织增殖分化条件的优化.中国园艺文摘，2012，5:10-12；
牛瑞鹤，等.红掌愈伤组织培养及不定芽分化影响因素的研究.安徽农业科学,2013,41(24):9914-9916；崔瑞峰，等.红掌叶片愈伤组织的研究.江苏农业科学，2013，41(9):24-26……)，但尚未检索到关于改进快繁过程中接种方法的报道。
发明内容
[0007] 本发明的目的就是要提供一种红掌组培快繁接种方法，该方法可较好改善红掌组培快繁过程中植株生长参差不齐的问题，还可弥补因接种继代时间推迟形成的过高组培苗造成的损失，同时，可减少愈伤组织分化不定芽次数，降低因继代次数过多造成种苗退化或变异的
风险。
[0008] 为实现此目的，本发明所设计的红掌组培快繁接种方法，它包括如下步骤：
[0009] 步骤1：红掌组培苗的培养；
[0010] 将红掌愈伤组织分化得到的不定芽从愈伤组织上剥离，对于长度小于0.5cm的健康不定芽每2～3个一组，带愈伤组织切取后，接种到增殖培养基上培养，对于长度大于等于0.5cm、但不足2cm的健康不定芽接种到伸长培养基上培养，对于长度大于等于2cm的健康不定芽接种到生根培养基上培养，增殖培养、伸长培养和生根培养的培养条件均为：
温度24～
26℃，光照强度1500～2500Lux，每天光照15～17h，经过40～60d培养，获得健康红掌组培苗；
[0011] 步骤2：红掌组培苗快繁接种；
[0012] 从步骤1得到的健康红掌组培苗中，选取株高2cm及以上，且具备2节及以上茎节的健康红掌组培苗，在接种盘内，在选取的健康红掌组培苗的苗茎
自下而上的茎节第1节上部1.8～2.2mm处横切，形成上、下两部分，上部分接种于生根培养基，下部分接种于伸长培养基中继续培养，培养条件与步骤1相同，即可获得生长整齐的红掌组培苗。
[0013] 本发明的有益效果：
[0014] (1)本发明简便易行，操作方便，可在更长的时间范围内人为控制红掌组培苗接种时间，有利于根据人员、订单等更有效地安排生产。
[0015] (2)本发明还可应用于因接种继代时间推迟形成的过高组培苗，可增加繁殖量、弥补损失。
[0016] (3)本发明节约时间、节省成本，同时减少愈伤组织增殖继代次数，从而降低因种苗退化或变异造成的风险。
附图说明
[0017] 图1a为红掌愈伤组织不定芽接种操作前的示意图；
[0018] 图1b为红掌愈伤组织不定芽接种操作后的示意图；
[0019] 图2a为红掌组培苗接种操作前的示意图；
[0020] 图2b为红掌组培苗接种操作后的示意图；
[0021] 图3a为依据现有方法进行红掌接种后培养整齐度示意图；
[0022] 图3b为依据本发明进行红掌接种后培养整齐度示意图；
具体实施方式
[0023] 以下结合附图和具体
实施例对本发明作进一步的详细说明：
[0024] 本发明所设计的红掌组培快繁接种方法，它包括如下步骤：
[0025] 步骤1：红掌组培苗的培养；
[0026] 将红掌愈伤组织分化得到的不定芽从愈伤组织上剥离，对于长度小于0.5cm的健康不定芽每2～3个一组，带愈伤组织切取后，接种到增殖培养基上培养，对于长度大于等于0.5cm、但不足2cm的健康不定芽接种到伸长培养基上培养，对于长度大于等于2cm的健康不定芽接种到生根培养基上培养，增殖培养、伸长培养和生根培养的培养条件均为：温度24～
26℃(优选25℃)，光照强度1500～2500Lux，每天光照15～17h(优选16h)，经过40～60d培养，获得健康红掌组培苗；
[0027] 步骤2：红掌组培苗快繁接种；
[0028] 从步骤1得到的健康红掌组培苗中，选取株高2cm及以上，且具备2节及以上茎节的健康红掌组培苗，在接种盘内，在选取的健康红掌组培苗的苗茎自下而上的茎节第1节上部1.8～2.2mm(优选2mm)处横切，形成上、下两部分，上部分接种于生根培养基，下部分接种于伸长培养基中继续培养，培养条件与步骤1相同，即可获得生长整齐的红掌组培苗。
[0029] 上述技术方案中，所述伸长培养基为MS(Murashige and Skoog，下同)基本培养基和附加不同成份的物质，其中附加成份包括1.0～1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA)、0.05～0.2mg/L的2,4-二氯苯
氧乙酸(2,4-D)、28～32g/L的
蔗糖(优选30g/L)、6～8g/L(优选7g/L)的琼脂粉，所述伸长培养基的PH值为5.8。
[0030] 上述技术方案中，所述生根培养基为MS基本培养基和附加不同成份的物质，其中附加成份包括0.5～1.0mg/L的吲哚丁酸(IBA)、2～3g/L(优选2.5g/L)的
活性炭、28～32g/L(优选30g/L)的蔗糖、6～8g/L的琼脂粉(优选7g/L)，所述生根培养基的PH值为5.8。
[0031] 上述技术方案中，所述增殖培养基为MS基本培养基和附加不同成份的物质，其中附加成份包括1.0～3.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.1～0.5mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、28～32g/L的蔗糖(优选30g/L)、6～8g/L的琼脂粉(优选7g/L)，所述增殖培养基的PH值为5.8。
[0032] 上述技术方案中，伸长培养基、生根培养基和增殖培养基的PH值均通过NaOH和HCl调节。
[0033] 上述技术方案中，所述6-苄基腺嘌呤、2,4-二氯苯氧乙酸和吲哚丁酸均用0.1mol/L的NaOH或95％
乙醇溶解，再用蒸溜
水稀释后分别配制成0.5mg/ml的母液，装入容量瓶中，置于3～5℃(优选4℃)
冰箱保存。
[0034] 上述技术方案中，伸长培养基、生根培养基和增殖培养基均经121℃、1.1kg/cm2的高温高压灭菌20min。
[0035] 实施例1：
[0036] 1、试验材料
[0037] 供试红掌材料为武汉谷易丰科技服务有限公司提供的盆栽品种No.05。试验所用化学
试剂均购自武汉欣友援生物科技有限公司。
[0038] 2、培养基配制
[0039] 基本培养基MS的配制见<<植物组织培养>>(李明浚编译.北京：中国农业出版社，1992)。
[0040] 所有培养基均添加琼脂粉7g/L、蔗糖30g/L及不同浓度的
植物生长调节剂，用0.1mol/L的NaOH和HCl将配制好的培养基的pH值调至5.8，培养基经121℃、1.1kg/cm2高温高压灭菌20min。
[0041] 3、方法
[0042] (1)在超净
工作台上，用经高温消毒的
镊子将分化出不定芽的愈伤组织从培养基上取出，置于事先经灭菌处理的接种盘中，并用无菌手术刀将残留培养基轻轻去除。再将长度大于等于0.5cm但小于2cm的不定芽从愈伤组织上轻轻剥离(图1a和图1b)，并接种到伸长培养基上培养，其它健康的不定芽每2-3个一组，带愈伤组织切取后，继续进行增殖培养。伸长培养基为MS基本培养基及附加的1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.2mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖；增殖培养基为MS基本培养基及附加的2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.2mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖。培养条件为：温度25℃，光照强度1500Lux，每天光照16h，经过40～60d培养，获得健康红掌组培苗。
[0043] (2)在超净工作台上，用经高温消毒的镊子将经过40～60d培养得到的红掌组培苗从培养基上取出，置于事先经灭菌处理的接种盘中，并用无菌手术刀将残留培养基轻轻去除。选取株高2cm及以上、且具备2节及以上茎节的健康红掌组培苗，用手术刀在其自下而上的第1节上部2mm处横切，形成上、下两部分(图2a和图2b)，上部分接种于生根培养基，下部分接种于伸长培养基，继续培养。若有长度不足0.5cm的不定芽或长度大于等于0.5cm但小于2cm的不定芽，其接种方法同实施例1(1)的相关操作方法。生根培养基为MS基本培养基及附加的0.8mg/L的吲哚丁酸、2.5g/L的活性炭、7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖。培养条件同实施例1(1)的相关内容，可获得生长整齐一致的红掌组培苗(图3b)。
[0044] 实施例2：
[0045] 1、试验材料
[0046] 供试红掌材料为武汉谷易丰科技服务有限公司提供的盆栽品种No.47。试验所用化学试剂均购自武汉欣友援生物科技有限公司。
[0047] 2、培养基配制
[0048] 同实施例1中2、培养基配制。
[0049] 3、方法
[0050] 本方法适用于红掌组培苗生长参差不齐的情况。
[0051] 在超净工作台上，用经高温消毒的镊子将带不定芽的愈伤组织从培养基上取出，置于事先经灭菌处理的接种盘中，并用无菌手术刀将残留培养基轻轻去除。再将长度小于0.5cm的不定芽每2-3个一组，带愈伤组织切取后，继续进行增殖培养；长度大于等于0.5cm但小于2cm的不定芽从愈伤组织上轻轻剥离(图1)，接种到伸长培养基上培养；株高2cm及以上、具备2节及以上茎节的健康红掌组培苗，用手术刀在其自下而上的第1节上部约2mm处横切，形成上、下两部分(图2a和图2b)，上部分接种于生根培养基，下部分接种于伸长培养基，继续培养40d左右。
[0052] 增殖培养基为MS基本培养基及附加的1.8mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.15mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖；伸长培养基为MS基本培养基及附加的1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.1mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖；生根培养基为MS基本培养基及附加的0.5mg/L的吲哚丁酸、2.5g/L的活性炭、7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖。培养条件为温度25℃，光照强度2000Lux，每天光照16h，可获得较为整齐的健康红掌组培苗。
[0053] 本
说明书未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的
现有技术。
