一种三联袋以及应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法
专利汇可以提供一种三联袋以及应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 建立一种三联袋以及应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法，本方法采用三联袋的方式从脐带血中分离出造血干细胞，三联袋分离的整个操作过程在封闭无菌的环境内完成，既可以减少操作过程的污染，同时对操作环境和人员的无菌要求低，便于操作；分离过程采用自动分浆夹去除 血浆 ，速度快，操作简单，提高了操作效率。，下面是一种三联袋以及应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法专利的具体信息内容。
1.一种三联袋，其特征为，包括制备袋、血浆袋和冻存袋，其中，制备袋上分别设有第一连接管、第四连接管和第五连接管；
第一连接管分别与第二管道和第三管道相连接，第一连接管上设有第一取样口，第二连接管与输血穿刺器相连接，第三连接管与血浆袋相连接，第三连接管上设有第二取样口；
第四连接管与冻存袋相连接；
第五连接管与加冻存液口相连接；
第二连接管上设有第一夹子、第四连接管上设有第二夹子、第五连接管上设有第三夹子、第三连接管上设有第四夹子。
2.应用如权利要求1所述的三联袋分离脐带血造血干细胞的方法，其特征为，包括以下步骤：
1)将三联袋消毒后放入生物安全柜中，排净血浆袋和冻存袋中的空气，关闭所有夹子；
2)将三联袋的输血穿刺器扎入采血袋的旋帽开口端并拧紧；
3)举起采血袋，松开第一夹子，使采血袋内血液流入制备袋内，转移完成后关闭第一夹子，将制备袋放置在摇床上摇匀5min；
4)将准备好的羟乙基淀粉通过第一取样口注入制备袋后混匀；
5)用两个充气后的转移袋将装有脐带血的制备袋夹住固定于离心杯中，配平后放置于离心机内离心50g，7min，10℃；
6)离心结束后，取出离心杯，再从离心杯中取出制备袋，用止血钳夹住第一夹子附近管道，倒挂静置5min；
7)待分层清晰后，打开第一夹子，用止血钳控制红细胞流速，使红细胞以3-10ml/min的速度流入采血袋中，直至分层界面距离制备袋管口1cm处，夹住止血钳，关闭第一夹子，取下制备袋，热合掉连接采血袋的管道；
8)把制备袋中的血液混匀，用两个充气后的转移袋夹住制备袋固定到离心杯中，配平后放置于离心机内离心747g，15min，10℃；
9)离心结束后，取出离心杯，再从离心杯中取出制备袋，挂入21±1ml的自动分浆夹中，打开第四夹子，按下自动分浆夹的开关，多余血浆会被匀速挤入血浆袋中，到了自动分浆夹设定体积21±1ml后自动停止；
10)关闭第四夹子，从自动分浆夹上取下制备袋，把管道中的血浆通过第四夹子手动挤入血浆袋中，热合血浆袋与制备袋之间管道，剪下血浆袋待用；
11)用无尘布擦拭制备袋表面，确保贴在制备袋内壁上的有核细胞全部进入血液，混匀浓缩血后从第一取样口取1ml血样进行细胞数、活率、表面标志和集落CFU检测；
12)用生物冰袋夹住制备袋，放入4-10℃药品保存箱内预冷至少20min；
13)打开第三夹子，用微量注射泵将预冷的冻存液从加冻存液口加入制备袋中，加完后关闭第三夹子；
14)冻存液加完后，打开第二夹子，将制备袋中的混合液转入冻存袋中，排尽冻存袋中的空气，使浓缩血混合液充盈冻存袋管道，热合掉冻存袋的管道，将冻存袋放入程序降温仪中进行程序降温冷冻；
15)从血浆袋的第二取样口取16ml血浆进行需氧菌和厌氧菌检测。
3.如权利要求2所述的应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法，其特征为步骤1)中的羟乙基淀粉的加入量为：脐带血净重＝脐带血毛重-空采血袋重量，脐带血净体积＝脐带血净重/1.03，羟乙基淀粉体积＝脐带血净体积×0.2。
4.如权利要求3所述的应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法，步骤5)中的装有脐带血的制备袋倒置放置于离心杯中。
5.如权利要求4所述的应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法，步骤8)的制备袋正置放置于离心杯中。
6.如权利要求5所述的应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法，步骤13)中，在制备袋中加冻存液的整个过程中，制备袋都由生物冰袋夹住，并放置在微电脑采液控制器上进行摇匀。
7.如权利要求6所述的应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法，冻存液添加比例为浓缩血：冻存液＝4:1，冻存液由右旋糖酐和DMSO两种试剂按照1：1的比例混合配制而成。
一种三联袋以及应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法
技术领域
背景技术
发明内容
具体实施方式
取1ml血样进行细胞数、活率、表面标志和集落CFU检测；细胞 数的检测结果为11.8×10(分离前细胞数为13.0×108)，根据回收率计算方式： 回收率＝(分离后有核细胞细胞总数÷分离前有核细胞总数)×100％，回收率为 90.8％；用流式细胞仪检测CD34+细胞，检测结果为CD34+细胞占有核细胞的百 分比为0.12％；造血干细胞经过14的培养，在显微镜下观察到有红系、粒系等 不同的造血干细胞集落形成。
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