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18F标记的喹唑啉类EGFR正 电子示踪剂及其制备方法和应用

阅读：1010发布：2021-01-03

专利汇可以提供18F标记的喹唑啉类EGFR正电子示踪剂及其制备方法和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种18F标记的喹唑啉类EGFR 正电子示踪剂及其制备方法和应用，属化学合成领域。本发明的一种18F标记的喹唑啉类EGFR正电子示踪剂具有式II所示的化学结构。合成的18F标记的小分子EGFR类正电子示踪剂具有诊断和监测治疗疗效的临床价值，特别是对于推动个性化治疗将发挥重要的作用。此外，本发明还提出了一种一步法，全自动合成18F标记喹唑啉类EGFR正电子示踪剂的方法，该方法具有多用途、产量大、效率高、合成时间短和成本低等特点，能够满足大规模生产的需要。式II。，下面是18F标记的喹唑啉类EGFR正电子示踪剂及其制备方法和应用专利的具体信息内容。

权利要求

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1.一种一步法合成 F标记喹唑啉类EGFR正电子示踪剂的方法，其特征在于包括以下步骤：
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1)将来自于加速器的 F离子和水传到接收瓶并导入到阴离子交换柱中；
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2)利用强碱弱酸盐以及乙腈将所述阴离子交换柱中的 F离子进行洗脱并传送到反应瓶；
3)将前体溶于乙腈、DMSO或DMF并加入到所述反应瓶中在惰性气体的保护下进行加热，其中，所述前体的化学结构式如式I所示：
4)降低温度，对所述反应瓶中粗产物进行水解；
5)对步骤4)所得溶液的目标产物进行分离、收集，所述目标产物具有式II所示的化学结构：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2)在强碱弱酸盐以及乙腈的混合液中+ -
加入离子液体[BMIm][OTf]。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述强碱弱酸盐为K2CO3、KHCO3、Cs2CO3或TBAC中的一种。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤5)中利用高效液相色谱或纯化柱或分离柱对目标产物进行分离、收集。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述加热的方式为微波加热或电热炉加热。

说明书全文

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F标记的喹唑啉类EGFR正电子示踪剂及其制备方法和应

用

[0001] 相关申请案的交叉参考

[0002] 本申请案要求2013年1月5日申请的，申请号为201310002892.4，发明名称为“18F标记的喹唑啉类EGFR正电子示踪剂及其制备方法和应用”的中国专利申请案的优先权，其说明书是以引用的方式全部并入本文中。

技术领域

[0003] 本发明涉及一种氟化取代反应合成的18F标记小分子苯胺喹唑啉类EGFR类正电子示踪剂及其制备方法和应用。本发明属化学合成领域。

背景技术

[0004] 目前临床使用医用回旋加速器生产的正电子核素15O、13N、11C、18F中18F具有110分11 11
钟的半衰期而成为临床最为重视的正电子核素。 C由于半衰期仅仅20分钟。所以 C标
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记的示踪剂在临床试用性小，多数示踪剂标记的示踪剂仅仅用于临床前期和临床研究。 F标记的正电子示踪剂是临床PET/CT、PET和符合线路系统最常用的正电子放射性示踪剂，
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[ F]FDG、[ F]FLT、[ F]乙酸盐、[ F]胆碱等作为正电放射型示踪剂目前已经被广泛用于肿瘤、心血管和神经系统疾病的早期诊断、治疗方案制定和疗效评估。

[0005] 表皮生长因子受体(EGFR)是原癌基因c-erbB的表达产物，属受体型酪氨酸激酶(tyrosine kinase，TK)。EGFR与配体结合后活化胞内区TK，激活多条信号通路，参与肿瘤细胞增殖、凋亡抑制、侵袭、转移及治疗抗拒等过程。EGFR在放射线抵抗及照射后细胞加速再增殖中具有重要意义，可作为预测放疗疗效的重要依据和放疗增敏的有效靶点。EGFR靶向治疗与传统化疗相比，因具有更好的安全性和耐受性，在非小细胞肺癌（NSCLC）等恶性肿瘤的治疗中占有越来越重要的地位，但是治疗费用相当高昂，因此治疗前明确EGFR的表达水平，对肿瘤的治疗及预后判断及药物卫生经济学具有一定的价值。随着EGFR 分子靶向治疗广泛的临床应用，EGFR分子显像也逐渐引起了关注并得到了初步的研究。

[0006] 以EGFR为治疗靶点是肿瘤分子靶向治疗的重要部分，主要有单克隆抗体及小分子酪氨酸激酶拮抗剂两种方式，如西妥昔单抗(Cetuximab,Erbitux，爱必妥)、尼妥珠单抗（Nimotuzumab，泰欣生）和吉非替尼(Gefitinib，Iressa，易瑞沙)、厄洛替尼（Erlotinib,Tarceva，特罗凯）等在临床实验及临床应用中表现出较好的治疗效果。与抗体相比较，小分子酪氨酸激酶拮抗剂由于合成简单、患者副作用小而受到临床关注。

[0007] （一）小分子EGFR受体抑制剂及其应用

[0008] 1、小分子EGFR受体及其分类

[0009] 表皮生长因子(Epidermal Growth Factor，EGF)是常见生长因子的一种，促进表皮细胞、上皮细胞及间质的生长。表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR)家族包括EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4等4个成员，其家族受体酪氨酸激酶（Receptor Tyrosine Kinase,RTK）以单体形式存在，在结构上由胞外区、跨膜区、胞内区3个部分组成，胞外区具有2个半胱氨酸丰富区，胞内区具有典型的腺苷三磷酸(Adenosine Triphosphate,ATP)结合位点和酪氨酸激酶区，其酪氨酸激酶活性在调节细胞增殖及分化中具有至关重要的作用。EGFR在许多肿瘤中的过表达和/或突变，借助信号转导导致细胞生长失控和恶性化。另外EGFR的异常表达还与新生血管的生成，肿瘤的侵袭和转移，肿瘤的化疗抗性及预后密切相关。EGFR高表达的肿瘤患者，肿瘤恶性程度高，容易发生转移，复发率高，预后差。

[0010] 2、小分子EGFR抑制剂在临床应用

[0011] 目前临床最长使用的小分子EGFR抑制剂有吉非替尼和、厄罗替尼。

[0012] 吉非替尼(Gefitinib,ZD1839,Iressa):吉非替尼是一种能够通过阻断EGFR信号传导通路而抑制肿瘤细胞的生长与增殖的EGFR-TKIs。2003年美国食品与药品管理局（FDA）批准吉非替尼用于既往化疗失败的晚期NSCLC患者的治疗。相关研究发现，即使患者曾接受过多次化疗药物治疗，吉非替尼仍可发挥作用，特别是对亚裔女性、不吸烟的肺腺癌患者。Kim等做的类似研究结果也显示，在晚期NSCLC的二线治疗中，吉非替尼与多烯紫杉醇化疗方案相比，两者疗效相当，但前者具有更好的安全性与耐受性，这些研究确定了吉非替尼可作为晚期NSCLC二线治疗的标准方案。近几年研究发现吉非替尼的疗效与患者的种族有很大关系，其中最早是发现亚洲一些无吸烟史的女性肺腺癌患者对其特别敏感。2004年Giaccone G等研究证实这一人群普遍存在EGFR基因的突变。有研究表明具有EGFR基因突变的患者对EGFR-TKIs治疗的敏感率可达70%～80%，并且接受EGFR-TKIs治疗后EGFR基因突变的患者与EGFR基因正常的患者相比总生存期（overall survival,OS）明显延长。

[0013] 厄罗替尼(Erlotinib,OSI-774,Tarceva)：厄罗替尼属喹唑啉类化合物，是一种兼具选择性以及可逆性的EGFR-TK活性抑制剂,具有水溶性特点，能穿过细胞膜与细胞质内位于EGFR分子的酪氨酸激酶结构域的嘌呤核苷三磷酸（adenosine-triphosphate，ATP）特异性结合，阻止ATP与细胞内酪氨酸激酶结合，抑制其磷酸化，阻断信号传导，从而可逆地抑制EGFR酪氨酸激酶活性，抑制肺癌细胞的游走、粘附、侵袭和血管新生，促使肺癌细胞凋亡。2009年Rosell等的一项多中心临床研究通过检测2005年4月—2007年12月2312例Ⅳ期NSCLC患者肿瘤标本的EGFR外显子19D746-750缺失及外显子21L858R突变，发现其中有307例患者EGFR突变，并对这部分患者采用厄罗替尼治疗。结果发现在165例资料完整并且可评价疗效的患者中，48例(29.1%)为男性，112例(67.9%)为不吸烟者，124例(75.2%)为腺癌。103例(62.8%)EGFR基因19外显子缺失，62例(37.6%)EGFR基因21外显子突变，89例(53.9%)为厄洛替尼一线治疗者，76例(46.1%)为二线治疗者。而纳入分析的193例患者资料则显示，总有效率为70.8%（128例），缓解率13.3%（24例），其中位OS为22个月，其中男性为17个月，女性为28个月。中位疾病进展时间（TTP）为12个月，女性也存在优势。61～71岁年龄组患者的有效率是其他年龄组患者的2倍，存在外显子19缺失患者的有效率是非缺失者的2倍。外显子19缺失及L858R突变患者的平均OS分别为27个月及16个月，两者之间存在差异（P=0.03）。该研究中观察到2312例中的307例患者EGFR基因19或21外显子突变，突变率为13.3%，其中62.8%的患者存在19外显子缺失，而
37.6％的患者存在21外显子突变，与已知的白种人EGFR突变率低于亚洲人种相一致。这一研究结果提示了EGFR突变患者可从厄洛替尼治疗中显著获益，它也强调了检测EGFR基因突变对于实现个体化治疗的重要性。

[0014] （二）目前检测EGFR是否突变、筛选小分子EGFR抑制剂受益人群及监测治疗疗效的方法及其局限

[0015] 目前，可能预测EGFR靶向治疗疗效的生物学标志物包括EGFR蛋白或mRNA高表达、EGFR基因拷贝数、EGFR基因突变、K-RAS基因突变、EGFR下游信号系统的相关标志物等。但尚无足够循证医学证据推荐应用生物学标志物来决定是否应用TKIs治疗。

[0016] 常规DNA测序，PCR技术扩增EGFR基因后，DNA分析、荧光RT-PCR、高效液相色谱法虽可判断EGFR基因突变，但从技术层面上分析，都存在着局限性。①活体取材：属于离体的、有创性检查，增加操作后病变转移的风险；②组织取材要求高，受成分和实验条件影响较大；③目前研究的取材很多来自确诊时的手术病理标本，能否代表患者接受TKI治疗前复发的肿瘤状况需进一步研究；④操作复杂，耗时多、随机性较大；⑤检测中所需的仪器昂贵、效率较低，目前国内仅有少数几家单位可以提供该项基因检测方法，故难以大面积推广应用，目前只有约五分之一的患者能找到合适的组织标本进行检测；⑥最新的研究有人尝试从胸腔积液和血清中检测EGFR突变，但是由于这种方式获得的EGFR样本量及其微小，检出率、一致性及准确率较低；⑦传统影像学技术在监测EGFR靶向治疗疗效中也存在诸多不确定因素，尚无明确的影像学手段能判断EGFR靶向治疗的疗效。在NSCLC患者中识别出最[22]有可能从EGFR靶向治疗中受益的患者，仍是决定EGFR靶向治疗的难题。因此，探寻一种更简单、更直观，且同样敏感、准确，并能够在活体实时预测小分子EGFR抑制剂治疗敏感患者，指导此类药物用药，监测治疗疗效的检测方法成为了目前国内外研究的另一研究热点问题。

[0017] （三）分子影像是检测EGFR状态的理想方式——18F标记小分子苯胺喹唑啉类EGFR类正电子示踪剂的应用

[0018] 分子影像是在活体上从分子水平研究细胞功能、代谢以达到疾病诊断、疗效判定和新药研制的全新领域。分子影像利用分子探针结合胞内特定靶分子，活体采用PET、PET/CT、MRI、SPECT及光学成像设备等探测成像，具有高特异性、高灵敏度和高分辨率，能无创性提供定位、定性和定量资料。

[0019] 11C-PD153035是最早用于EGFR抑制剂成像的PET示踪剂。但是，由于11C半衰期11
仅仅20分钟，而且 C-PD153035在正常肝脏具有大量摄取因而并不适合于作为EGFR的PET
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示踪剂。为此，探索采用 F标记小分子喹唑啉类EGFR类PET示踪剂的合成方法就成为基础和临床研究的热点和重点。从前体的选择来看，大家公认的是采用4-苯胺基喹唑啉作
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为标记前体的骨架化合物。采用 F对于骨架化合物和其衍生物的标记均采用多步方法来
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完成。按照 F标记4-苯胺基喹唑啉衍生物位置的不同，将标记方法基本分成两类。即标记在4-苯胺基和喹唑啉衍生物。

[0020] 先用18F标记苯胺基，然后将18F标记化合物与喹唑啉或衍生物进行连接。最典型18 18
的是BonaseraThomas A和AbourbehGalith报道的[ F]-ML01和[ F]-ML04就是采用这种
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方法合成的。但是[ F]-ML01和[ F]-ML04在肝脏仍然有很高的摄取，而且在肿瘤中的摄取并没有达到满意的效果。特别是采用该类标记方法合成时间一般需要120分钟，标记率均小于15%。所以，这种方法缺乏临床实用性。

[0021] 标记喹唑啉或其衍生物，然后于苯胺或其衍生物进行连接。Chen Yurong等人最近18 18
报道采用该方法。首先用[ F]标记乙基，然后将[ F]-乙基与喹唑啉6位基团连接。然后再与苯胺连接最后合成的最终产物的标记率20%左右（校正后），合成总时间接近120分钟。
这与Kobus K等作者报道的结果基本一致。

[0022] 目前18F标记小分子类正电子示踪剂在临床应用很少，特别是临床18F标记的正+18 -电子示踪剂主要利用氟化聚铵（kryptofix/K F）作为相转移催化剂（phase transfer catalysis,PTC）,标记过程相对复杂，即使利用最先进的全自动化的正电子放射性示踪剂
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合成系统，也要多步反应才能完成 F标记小分子喹唑啉类EGFR类正电子示踪剂。这样不但延长标记时间（一般需要90-120分钟），而且会降低标记率，导致与这些方法缺乏临床实用性。研究肿瘤具有高摄取（高亲和力）的全自动化、一步法合成的EGFR类正电子示踪剂的方法成为分子影像研究急需解决的问题。

发明内容

[0023] 针对目前存在的问题，本发明所要解决的技术问题之一是提供一种[18F]标记EGFR正电子示踪剂；

[0024] 本发明所要解决的技术问题之二是提供一种一步法合成[18F]标记EGFR正电子示踪剂方法，该方法具有多用途、产量大、效率高、方法稳定、合成时间短以及成本低等特点。

[0025] 为了达到设计出能够满足多用途、高产率、稳定、高效和快速和低成本的合成 18F标记EGFR正电子示踪剂的方法，本发明在设计中利用以下几个关键核心技术达到本发明要求的技术解决方案。这些核心技术包括：设计独特的前体；前体采用三氟甲磺酸脂作为离去基团；在前体的7位增加4个PEG，以提高示踪剂的水溶性；利用加热达到大剂量合成和快速合成的目的；使用HPLC或分离柱对示踪剂进行分离以进一步缩短产物分离时间；利18
用微波加热技术提高合成效率；最终达到一步法合成 F标记小分子EGFR类正电子示踪剂的目的。

[0026] （一）在前体（式I所示）中采用三氟甲磺酸脂作为离去基团一步法合成18F标记EGFR正电子示踪剂

[0027] 三氟甲磺酸是理想的离去基团。本发明中在前体上的7位采用三氟甲磺酸作为离去基团，这样可以提高标记率。另外，在前体的7位引入4个PEG基团（提高亲水性），并在PEG基团的末端接上三氟甲磺酸脂；。

[0028] （二）在前体的7位连接4个PEG，以提高示踪剂亲水性，降低肝脏的摄取率，提高11
肿瘤摄取率。传统的 C标记的EGFR正电子示踪剂在肝脏具有大量的浓聚，明显影响了其临床应用。本发明在7位进入4个PEG基团明显降低了其酯溶性。

[0029] （三）利用加热缩短合成过程，以满足临床大剂量合成正电子放射性示踪剂的目的。

[0030] （四）利用HPLC对产物进行分离以便获得高比活度示踪剂，或采用分离柱对产物进行分离以降低合成成本。

[0031] 对于小分子EGFR类正电子示踪剂一步合成后需要对产物分离，本发明提供了采用HPLC和柱状分离技术两种方法。采用HPLC明显提高产物的比活度，采用柱状分离技术明显降低合成的成本。

[0032] （五）利用微波加热技术提高合成效率

[0033] 微波不仅仅具有加热均匀、快速升温和降低温度的特点，而且微波加热明显提高了合成效率。

[0034] （六）利用一站式合成模式达到全自动化、一步法合成18F正电子示踪剂[0035] 为了达到该技术具有实用性的目的本发明在设计中特别重视达到全自动化一步法合成的目的。只有全自化一步法合成利用使操作人员降低射线辐射、快速完成合成过程、具有高度重复性和稳定性等优点。对于正电子放射性示踪剂由于核素的半衰期非常短，不能完成全自动化一步合成过程，就无从谈起实用性的问题。为此，我们在GE公司的18
TracerLab FX fn化学合成器上在全球首次完成全自化一步法合成出上述 F标记的正电子放射性示踪剂。

[0036] 本发明的一种18F标记的喹唑啉类EGFR正电子示踪剂，其特征在于所述的正电子示踪剂具有式II所示的化学结构：

[0037]

[0038] 式II。

[0039] 进一步的，本发明还提出了一种一步法合成18F标记喹唑啉类EGFR正电子示踪剂的方法，其特征在于包括以下步骤：

[0040] 1）将来自于加速器的18F离子和水传到接收瓶并导入到阴离子交换柱中；

[0041] 2）利用强碱弱酸盐以及乙腈将所述阴离子交换柱中的18F离子进行洗脱并传送到反应瓶；

[0042] 3）将前体溶于乙腈、DMSO或DMF并加入到所述反应瓶中在惰性气体的保护下进行加热，其中，所述前体的化学结构式如式I所示：

[0043]

[0044] 式I

[0045] 4）降低温度，对所述反应瓶中粗产物进行水解；

[0046] 5）对步骤4）所得溶液的目标产物进行分离、收集。

[0047] 在本发明所述的方法中，优选的，步骤2）在强碱弱酸盐以及乙腈的混合液中加入+ -离子液体[BMIm][OTf]。

[0048] 在本发明所述的方法中，优选的，所述强碱弱酸盐为K2CO3、KHCO3、Cs2CO3或TBAC中的一种。

[0049] 在本发明所述的方法中，优选的，步骤5）中利用高效液相色谱或纯化柱或分离柱对目标产物进行分离、收集。

[0050] 在本发明所述的方法中，优选的，所述加热的方式为微波加热或电热炉加热。

[0051] 更进一步的，本发明还提出了所述的18F标记的喹唑啉类EGFR正电子示踪剂在制备检测表皮生长因子受体（EGFR）表达水平试剂中的应用。及

[0052] 所述的18F标记的喹唑啉类EGFR正电子示踪剂在制备筛选小分子表皮生长因子受体抑制剂试剂中的应用。

[0053] 本发明创建的利用18F标记的小分子EGFR类正电子示踪剂方法对于肺癌早期诊断、肺癌治疗方案制定、疗效的评价均具有重要的价值。

[0054] 归纳起来，本发明与现有技术相比具有如下特点：

[0055] 1、稳定：利用18F标记的小分子EGFR类正电子示踪剂全自动化、一步法合成方法，合成效率高，而且稳定。该方法明显克服了多步合成方法存在的合成时间长、效率低、不容易掌握等固有缺陷性。

[0056] 2、满足临床常规工作：临床常规生产的18F量在1－4Ci之间，为此就需要提高从18 18
F柱洗脱 F的能力，即加大强碱弱酸盐K2CO3、Cs2CO3、KHCO3、或TBAC洗脱的浓度和体积以
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提高 F产量。这是迄今最高的合成产量。

[0057] 3、简单、方便合成过程：明显简化了合成流程，并建立了一个全新的利用18F标记的小分子EGFR类正电子示踪剂类新流程。

[0058] 4、作为优化方案，实验证明采用离子液体[BMIm]+[OTf]-作为辅助相转移催化剂后明显提高了产率。

[0059] 5、多用途：合成的18F标记的小分子EGFR类正电子示踪剂具有诊断和指导治疗的临床价值，特别是对于推动个性化治疗将发挥重要的作用。附图说明

[0060] 图1为本发明的方法流程图。

[0061] 缩写注释：

[0062] Boc Di-tert-butyldicarbonate

[0063] Dde 1-(4,4-dimethyl-2,6-dioxocyclohex-1-ylidene)ethyl

[0064] DMF N,N-dimethyl formamide

[0065] DMSO Dimethylsulfoxide

[0066] DMTEAN1-{6-[(2-(p-toluolslfonyloxy)ethyl)(methyl)amino]-2naphthyl}ethylidene)malononitrile或2-(1-{6-[(2-hydroxy)ethyl)(methyl)amino]-2naphthyl}ethylidene)malononitrile)

[0067] EGFR Epidermal Growth Factor Receptor

[0068] [18F]ML04 [18F]-N-{4-[(4,5-Dichloro-2-fluorophenyl)amino]quinazoline-6-yl}-dimethylamine-butylamide

[0069] PEG Polyethyleneglycol

[0070] TBAC Tetrabutylammonium bicarbonate

[0071] Tso- 4-methylbenzenesulfonate

[0072] TrtTrityl

[0073] 图2为各细胞系在与[18F]FH41孵育不同的时间后测定的放射性摄入数量。

具体实施方式

[0074] 下面通过实验并结合实施例对本发明做进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

[0075] 实施例1：[18F]FH41（式II所示）的合成

[0076]

[0077] 式I

[0078]

[0079] 式II

[0080] 合成步骤：

[0081] 1、前体（N-(3-chloro-4-fluorophenyl)-6-methoxy-7-(Tso-polyethyleneglycol(4))quinazolin-4-amine，N-(3-氯-4-氟苯基)-6-甲氧基-7-（对甲基苯磺酰基-聚乙二醇4）-喹唑啉-4-胺，式I所示），该化合物送交江苏华益有限公司合成；

[0082] 2、将从医用回旋加速器传送的18F离子和水传到接收瓶（1-4Ci）；

[0083] 3、将18F离子和水传到阴离子交换柱QMA；

[0084] 4、利用0.15mL K2CO3（0.9mg）＋0.5mL乙腈从QMA柱洗脱18F离子并传送到反应瓶，将3mg前体（式I所示）溶于0.5mL DMSO溶液中然后加入到反应瓶；在氮气或氦气的保护下65℃加热3.5分钟，90℃温度下微波加热10分钟；

[0085] 5、温度冷却至35℃，然后加入淋洗液进入反应瓶。淋洗液为CH3OH以及1%Et3N水溶液（用H3PO4调节pH至7.4）按照体积比65:35(v/v)配制而成；

[0086] 6、将溶液通过HPLC（C18柱）进行分离、纯化产物。得到可供注射的[18F]FH41溶18
液；也可以利用WATERS公司或其它公司提供的分离柱分离[ F]FH41；合成效率25％以上，放射化学纯度大于98％。

[0087] 以上步骤在GE公司的TracerLab FX fn化学合成器上能够全自化一步法合成[18F]FH41（N-(3-chloro-4-fluorophenyl)-6-methoxy-7-(18F-fluoro-polyethyleneglycol(4))quinazolin-4-amine，N-(3-氯-4-氟苯基)-6-甲氧基-7-（18F-氟-聚乙二醇4）-喹唑啉-4-胺），其化学结构式如式II所示。

[0088] 可选方案：

[0089] 1、利用70W微波加热时，加热时间均可以缩短1－2分钟，合成效率可以达到30％，放射性化学纯度大于98％。

[0090] 实施例2[18F]FH41（式II所示）在检测表皮生长因子受体表达水平中的应用[0091] 实验方法：

[0092] 1.不同EGFR表达水平的四种细胞系分别以5x105个铺于12孔板内，贴壁[0093] 24小时备用，所述的四种细胞系分别为；

[0094] EGFR19外显子缺失突变的细胞系PC9（分子靶向治疗敏感细胞系）；

[0095] EGFRL858R及T790M突变细胞系H1975（分子靶向治疗耐药细胞系）；

[0096] 野生型EGFR细胞系H358；

[0097] EGFR低表达细胞系H520。

[0098] 以上细胞系均购买自美国模式菌种收集中心（ATCC）。

[0099] 2.含有18.5kBq[18F]FH41的1ml无血清培养液加于各孔之中；

[0100] 3.在[18F]FH41加入共孵育15min,30min,60min和120min后,移除培养液；

[0101] 4.各孔贴壁的细胞用1ml冷的PBS冲洗一次；

[0102] 5.各孔加入200ul胰酶后，在37o C下孵育5min；

[0103] 6.各孔消化下来的细胞移到计数瓶中，在gamma计数仪中计数。

[0104] 实验结果：

[0105] 根据结果来判断不同EGFR表达水平细胞系对[18F]FH41的摄取数量，结果如表118
及图2所示。结果表明本发明的[ F]FH41可以与不同EGFR表达水平及状态的细胞系中的
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EGFR有不同程度的结合，而且研究结果表明过表达突变EGFR的PC9细胞系对[ F]FH41摄
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取率最高，从而证明[ F]FH41是靶向突变EGFR的，并能够通过活体成像设备检测到，从而
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说明了[ F]FH41可以用于临床EGFR靶向成像及治疗疗效监测。

[0106] 表1各细胞系在与[18F]FH41孵育不同的时间后测定的放射性摄入数量（以占总放射性摄入量的百分数（%）表示）

[0107]

[0108] 以上所述仅为本发明的优选实施例，对本发明而言仅是说明性的，而非限制性的；本领域普通技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效变更，但都将落入本发明的保护范围内。

标题	发布/更新时间	阅读量
放射化学治疗用的化学组成物	2020-05-12	693
化学治疗应答者的确定	2020-05-12	786
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18F标记的喹唑啉类EGFR正电子示踪剂及其制备方法和应用

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