发明背景

本发明涉及给予感染1型免疫缺陷病毒(“HIV-1”)患者有效量 的干扰素-α从而增强其对HIV-1免疫反应的方法。

A-M.Vandamme等， Antiviral Chemistry&Chemotherapy，9： 187-203(1998)公开当前对人HIV-1感染的临床治疗，它包括至少三 种药物的联合使用或所谓高度有效的抗逆转录病毒疗法 (“HAART”)；HAART涉及核苷逆转录酶抑制剂(“NRTI”)、非核 苷逆转录酶抑制剂(“NNRTI”)以及HIV蛋白酶抑制剂(“PI”)的各 种组合。对于顺从性患者，HAART有效降低HIV-1的AIDS患者死 亡率和延缓病程。然而，这些多药疗法不能消除HIV-1，而且长期治 疗常常导致多药抗性。对HIV-1感染患者中断诸如HAART的抗-逆 转录病毒疗法导致大多数患者血浆HIV-RNA水平迅速升高。经常观 察到伴随HIV-1特异性细胞毒性T-淋巴细胞增加。然而鉴于观察到 抗逆转录病毒疗法间断出现高病毒血症，这种T-细胞增加对于限制 HIV-1复制的有效性仍在讨论之中。据报道有些患者中断HAART后 每天给予IL-2增强对HIV-1的免疫性，但是一旦中断包括羟基脲或 没有羟基脲的HAART，HIV-1病毒负荷量就反弹。

最近公开了HIV-1感染患者使用HAART以诱导对HIV-1的免 疫反应的结构性治疗间断(structured treatmetn interruption，“STI”)的 初步结果(Structured Treatment Interruption Workshop Summary，2000 年1月31日出版，第1-21页)。在STI期间只在少数中断HAART 的HIV-1患者中观察到保持HIV-1病毒抑制。其他反复中断HAART 的各个患者在中断HAART期间，在HAART的STI阶段恢复HIV-1 免疫特异性细胞，但它们迅速被HIV-1的复制所破坏。据报道中断 HAART后每日给予IL-2，在有些患者增强对HIV-1的免疫性，但是 一旦中断包括羟基脲或没有羟基脲的HAART，HIV-1病毒负荷量就 反弹。

开发新的药物疗法，增强对HIV-1感染、特别是在HAART治 疗间断期间对HIV-1感染的免疫反应仍然是首选的。

                    发明概述

本发明提供增强HIV-1感染患者的HIV-1特异性免疫应答的方 法，所述患者需要增强HIV-1特异性免疫应答，所述方法包括给予 所述患者有效量的干扰素-α。

本发明提供增强HIV-1感染患者的HIV-1特异性免疫应答的方 法，所述患者需要增强HIV-1特异性免疫应答，所述方法包括给予 所述患者有效量的聚乙二醇化干扰素-α。

本发明还提供增强已中断抗-HIV疗法的HIV-1感染患者HIV-1 特异性T-细胞活性的方法，它包括给予所述患者一定量的干扰素-α， 其给药时间足以将患者血浆HIV-RNA水平降低到开始抗-HIV疗法 之前的患者血浆HIV-RNA水平以下。

本发明还提供增强已中断抗-HIV疗法的HIV-1感染患者HIV-1 特异性T-细胞活性的方法，它包括给予所述患者一定量的聚乙二醇 化干扰素-α，其给药时间足以将患者血浆HIV-RNA水平降低到开始 抗-HIV疗法之前的患者血浆HIV-RNA水平以下。

本发明还提供增强HIV-1感染患者HIV-1特异性T-细胞活性的 方法，它包括给予所述患者有效量的干扰素-α与有效量的抗-HIV药 物，其给药时间足以产生所述增强作用。

本发明还提供增强HIV-1感染患者HIV-1特异性T-细胞活性的 方法，该方法包括给予所述患者有效量的聚乙二醇化干扰素-α与一种 有效量的抗-HIV药物，其给药时间足以产生所述增强作用。

                    发明详述

中断HIV-1感染患者抗逆转录病毒疗法例如HAART通常导致 血浆HIV-RNA水平迅速增加。本发明的一个优选实施方案提供给予 聚乙二醇化干扰素-α增强HIV感染患者HIV特异性免疫应答的方 法，所述患者已中断抗-逆转录病毒疗法，特别是HAART。所述聚 乙二醇化干扰素-α可每周给予一次，以增强HIV特异性免疫应答， 中断HAART后，如果血浆HIV-RNA水平继续迅速上升，则可每周 给予两次聚乙二醇化干扰素-α。中断HAART后继续给予聚乙二醇 化干扰素-α，其给药时间足以将血浆HIV-RNA水平降低至开始 HAART前的初始血浆HIV-RNA水平以下。通常给予干扰素-α、优 选聚乙二醇化干扰素-α的时间持续4-8周，足以使血浆HIV-RNA水 平降低至所述水平，但是其准确剂量及给药方案由治疗医生决定， 治疗医生需要考虑初始HIV-RNA病毒负荷量、CD4细胞的绝对或 相对百分率、所述患者的年龄及健康状况。重新开始的HAART持续 足够长时间以将血浆HIV-RNA水平降低至可检测限以下，即每毫升 血浆低于50个HIV-RNA拷贝。其持续时间通常约为一年，但准确 的持续时间按照良好的临床实践决定以使血浆HIV-1-RNA水平达到 最低。参见例如A-M.Vandamme等， Antiviral Chemistry& Chemotherapy，9：187-203(1998)及“用于HIV感染的药物”载于 The Medical Letter，第39卷(第1015期)，1997年12月5日，第111-116 页。本发明的另一个实施方案提供在给予HAART的同时给予聚乙 二醇化干扰素-α以增强HIV特异性免疫应答。给予聚乙二醇化干扰 素-α及HAART足够长的时间以产生免疫反应，使得STI产生持续的 病毒抑制低于开始抗-逆转录病毒疗法之前的病毒水平。在本发明一 个更优选实施方案中，至少存在3个STI，其中给予聚乙二醇化干扰 素-α以提高HIV特异性免疫应答。此后如果患者每毫升血浆低于约 10,000个HIV-RNA拷贝、优选每毫升血浆低于约5,000个HIV-RNA 拷贝，则不必重新启动HAART。

本文所用术语“HIV-1特异性免疫应答”是指引起血浆HIV-RNA 水平下降的任何免疫反应，包括但不限于增强HIV-1特异性T细胞 活性、促进T-细胞如细胞毒性T淋巴细胞的增殖和提高细胞因子以 及趋化因子例如白介素(如IL-2)和干扰素(如干扰素-γ)的水平。

本文所用术语“HIV-1特异性细胞”包括但不限于T-淋巴细胞 如CD4+-T-细胞、CD8+-T-细胞。

本文所用术语“抗逆转录病毒疗法”和“抗HIV-1疗法”是指 目前用于HIV-1感染临床治疗的多药疗法，包括但不限于多药抗 HIV-1疗法，例如三种药物和四种药物抗HIV-1药物疗法(HAART)， 见A-M.Vandamme等， Antiviral Chemistry&Chemotherapy，9：187-203 (1998)公开内容，它描述了当前HIV-1感染的临床治疗，包括何时开 始多药疗法及组合哪些药物。三种药物疗法可包括两种核苷及核苷 酸逆转录酶抑制剂(“NRTI”)和一种蛋白酶抑制剂(“PI“)，但是为 任何一个患者选择准确的HAART还有许多问题要考虑。参见例如 A-M.Vandamme等论文中的表1&2和图2以及上文所列举的“用于 HIV感染的药物”。

本文所用术语“HIV-1感染患者”是指HIV-1感染的任何患者(包 括儿科患者)，包括HIV-1感染的未治疗患者和接受了治疗的患者以 及同时感染HIV-1和丙型肝炎病毒(“HCV”)的未治疗患者和接受了 治疗的患者。

本文所用术语“儿科患者”是指年龄在17岁以下的患者，通常 包括出生到16岁的患者。

本文所用术语“未治疗患者”是指未曾用任何抗逆转录病毒药 物治疗的HIV-1感染或同时感染HIV-1和HCV的任何患者，所述抗 逆转录病毒药物例如NRTI、NNRTI、PI或任何干扰素，包括但不限 于干扰素-α或聚乙二醇化干扰素-α。

本文所用术语“接受了治疗的患者”是指已开始某种形式抗HIV 治疗(包括但不限于HAART)或某种形式的抗HCV治疗(包括但不限 于干扰素-α、聚乙二醇化干扰素-α或病毒唑)的感染HIV-1或同时感 染HIV-1和HCV的任何患者以及检测不到血浆HIV-RNA的正在进 行HAART的患者。

本文所用术语“丙型肝炎感染患者”是指患有丙型肝炎的任何 患者(包括儿科患者)，包括丙型肝炎的未治疗患者和丙型肝炎的接受 了治疗的患者以及慢性丙型肝炎的未治疗及接受了治疗的儿科患 者。

这些丙型肝炎患者包括感染包括1型丙型肝炎在内的多种丙型 肝炎病毒基因型的患者和感染如丙型肝炎病毒基因型2型、3型、4 型、5型和/或6型以及其它可能的丙型肝炎病毒基因型的患者。

本文所用术语“丙型肝炎感染的未治疗患者”是指从未曾用病 毒唑或任何干扰素治疗的丙型肝炎患者，所述干扰素包括但不限于 干扰素-α或聚乙二醇化干扰素-α。

本文所用术语“丙型肝炎感染的接受了治疗的患者”是指包括 复发患者和无反应患者在内的已用病毒唑或任何干扰素治疗的丙型 肝炎患者，所述干扰素包括但不限于干扰素-α或聚乙二醇化干扰素- α。

本文所用术语“复发患者”是指接受了治疗的丙型肝炎患者， 所述患者是对先前单独的干扰素治疗或干扰素与病毒唑的联合治疗 获得初期疗效后复发的患者。

本文所用术语“无反应患者”是指对先前任何单独的干扰素治 疗或干扰素与病毒唑的联合治疗无反应的接受了治疗的丙型肝炎患 者。

当给予的聚乙二醇化干扰素-α为聚乙二醇化干扰素α-2b时，按 照本发明治疗期间(包括第一和第二治疗阶段)给予的治疗有效量聚乙 二醇化干扰素α-2b为以单剂量或分剂量每周给予约0.1-9.0μg/kg聚 乙二醇化干扰素α-2b，优选每周一次(QW)或每周两次(BIW)，优选每 周一次(QW)给予约0.1-9.0μg/kg聚乙二醇化干扰素α-2b或每周二次 (BIW)给予约0.05-4.5μg/kg聚乙二醇化干扰素α-2b，或者每周给予 约0.5-3.0μg/kg聚乙二醇化干扰素α-2b，优选每周一次(QW)给予约 0.5-3.0μg/kg聚乙二醇化干扰素α-2b或每周二次(BIW)给予约0.25- 1.5μg/kg聚乙二醇化干扰素α-2b，或者每周给予约0.75-1.5μg/kg聚 乙二醇化干扰素α-2b，最优选每周一次给予约0.75-1.5μg/kg聚乙二 醇化干扰素α-2b或每周二次给予约0.375-0.75μg/kg聚乙二醇化干扰 素α-2b。

当给予儿科患者的聚乙二醇化干扰素-α为聚乙二醇化干扰素α-2b 时，按照本发明治疗期间(包括第一和第二治疗阶段)给予的治疗有效 量聚乙二醇化干扰素α-2b为以单剂量或分剂量每周给予约0.1-9.0 μg/kg聚乙二醇化干扰素α-2b，优选每周一次(QW)或每周两次 (BIW)，更优选每周一次(QW)给予约0.1-9.0μg/kg聚乙二醇化干扰 素α-2b或以单剂量或分剂量每周给予约0.05-4.5μg/kg聚乙二醇化干 扰素α-2b，优选每周一次(QW)或每周两次(BIW)，更优选每周一次给 予约0.05-4.5μg/kg聚乙二醇化干扰素α-2b，或者优选以单剂量或分 剂量给予约0.75-3.0μg/kg聚乙二醇化干扰素α-2b，优选每周一次 (QW)或每周两次(BIW)，更优选每周一次给予约0.75-3.0μg/kg聚乙 二醇化干扰素α-2b或每周二次给予约0.375-1.5μg/kg聚乙二醇化干 扰素α-2b，最优选每周一次给予约2.25-2.6μg/kg聚乙二醇化干扰素 α-2b或每周二次(BIW)给予约1.125-1.3μg/kg聚乙二醇化干扰素α- 2b。在本发明的一个优选实施方案中，儿科剂量为每周给予一次约0.75 μg/kg、约1.5μg/kg以及约3.0μg/kg聚乙二醇化干扰素α-2b。

当给予的聚乙二醇化干扰素-α为聚乙二醇化干扰素α-2a时，按 照本发明治疗期间(包括第一和第二治疗阶段)给予的治疗有效量聚乙 二醇化干扰素α-2a为约50-500μg，每周一次(“QW”)，优选约200-250 μg，QW，或有效剂量为约50-250μg，每周二次，优选约100-125μg， 每周二次。

当给予儿科患者的聚乙二醇化干扰素-α为聚乙二醇化干扰素α-2a 时，按照本发明在包括第一治疗阶段的治疗期间给予的治疗有效量 聚乙二醇化干扰素α-2a为约50-500μg，每周一次(“QW”)，优选约 300-375μg，QW，或给予儿科患者的治疗有效量聚乙二醇化干扰素 α-2a为约50-250μg，每周二次，优选约150-190μg，每周一次。

联合给予所述患者聚乙二醇化干扰素-α和病毒唑，即给予聚乙二 醇化干扰素-α之前、之后或同时给予病毒唑。聚乙二醇化干扰素-α剂 量优选在患者接受病毒唑剂量的同一时段给予。与聚乙二醇化干扰 素-α同时给予的病毒唑剂量为约400-1600mg/天，优选约600-1200 mg/天或约800-1200mg/天，最优选约1000-1200mg/kg/天。聚乙二 醇化干扰素-α剂量还优选在儿科患者接受病毒唑剂量的同一时段给予 儿科患者。与聚乙二醇化干扰素-α同时给予儿科患者的病毒唑剂量约 8-15mg/kg/天，优选约8、12、15mg/kg/天，以分剂量给予。

口服给药时聚乙二醇化干扰素-α制剂无效，因此给予聚乙二醇化 干扰素-α的优选方法是胃肠外注射给药，优选皮下、IV或IM注射 给药。在胃肠外给予聚乙二醇化干扰素-α时，病毒唑可以胶囊、片剂 或液体形式口服给予。当然也设想了这两种药物其他可利用的给药 方式，例如鼻腔喷雾给药、经皮给药、栓剂给药或缓释剂型给药以 及经肺吸入给药。只要可传递适当剂量而不破坏所述活性成分，任 何给药方式都可使用。

本文所用术语“核苷和核苷酸逆转录酶抑制剂”(“NTRI”)是 指抑制HIV-1逆转录酶活性的核苷和核苷酸及其类似物，HIV-1逆 转录酶催化病毒基因组HIV-1RNA转化为前病毒HIV-1DNA。

典型的合适NRTI包括齐多夫定(AZT)，可以商品名RETROVIR 从Glaxo-Wellcome公司，Research Triangle，NC27709获得；去羟肌 苷(ddl)，可以商品名VIDEX从Bristol-Myers Squibb公司，Princeton，NJ 08543获得；扎西他滨(ddC)，可以商品名HIVID从Roche Pharmaceuticals，Nutley，NJ07110获得；stavudine(d4T)，可以商品 名ZERIT从Bristol-Myers Squibb公司，Princeton，NJ08543获得； 拉米夫定(3TC)，可以商品名EPIVIR从Glaxo-Wellcome Research Triangle，NC27709获得；WO96/30025公开的abacavir(1592U89)， 可以商品名ZIAGEN从Glaxo-Wellcome Research Triangle，NC27709获得；adefovir dipivoxil[bis(POM)- PMEA]，可以商品名PREVON从Gilead Sciences，Foster City，CA 94404获得；核苷逆转录酶抑制剂lobucavir(BMS-180194)，公开于 EP-0358154及EP-0736533，由Bristol-Myers Squibb公司，Princeton，NJ 08543开发；逆转录酶抑制剂BCH-10652(BCH-10618和BCH-10619 的外消旋混合物)，开发者为Biochem Pharma，Laval，Quebec H7V，4A7， Canada；emitricitabine[(-)-FTC]，从Emory大学允可获得的Emory Univ.美国专利第5,814,639号，开发者为Triangle Pharmaceuticals， Durham，NC27707；β-L-FD4(也称为β-L-D4C，名称为β-L-2′，3′- dicleoxy-5-fluorocytidene)，由Yale大学许可给Vion Pharmaceuticals， New Haven CT06511；DAPD嘌呤核苷((-)-β-D-2，6，-二氨基嘌呤二氧 戊烷)，公开于EP0656778，由Emory大学和Georgia大学许可给 Triangle Pharmaceuticals，Durham，NC27707；lodenosine(FddA)，即 9-(2，3-双脱氧-2-氟-b-D-苏型-呋喃戊糖)腺嘌呤，它为一种酸稳定型嘌 呤型逆转录酶抑制剂，由NIH发现，由U.S.Bioscience Inc.West Conshohoken，PA.19428开发。

本文所用术语“非核苷逆转录酶抑制剂”(“NNRTI”)是指抑制 HIV-1逆转录酶活性的非核苷抑制剂。

典型的合适非核苷逆转录酶抑制剂包括奈韦拉平(BI-RG-587)， 可以商品名VIRAMUNE从Roxane实验室的制造商Boehringer Ingelheim，Columbus，OH43216获得；delaviradine(BHAP，U-90152)， 可以商品名RESCRIPTPOR从Pharmacia&Upjohn公司，Bridgewater NJ08807获得；efavirenz(DMP-266)，它为WO94/03440公开的一种 苯并噁嗪-2-酮，可以商品名SUSTIVA从DuPont Pharmaceutical公 司，Wilmington，DE19880-0723获得；PNU-142721，即呋喃吡啶-硫 代嘧啶，由Pharmacia和Upjohn，Bridgewater NJ08807开发；AG- 1549(以前称为Shionogi#S-1153)；5-(3，5-二氯苯基)-硫代-4-异丙基-1- (4-吡啶基)甲基-IH-咪唑-2-基甲基碳酸酯，公开于WO96/10019，由 Agouron Pharmaceuticals公司，LaJolla CA92037-1020进行临床开发； MKC-442，即1-(乙氧基甲基)-5-(1-甲基乙基)-6-(苯基甲基)-2，4(1H， 3H)-嘧啶二酮，由Mitsubishi Chemical公司发现，由Triangle Pharmaceutials，Durham，NC27707开发；以及NIH美国专利第 5,489,697号公开的(+)-calanolide A(NSC-675451)和B香豆素衍生物， 由Med Chem Research获得许可，该公司与Vita-Invest共同开发口 服产品(+)calanolide A。

本文所用术语“蛋白酶抑制剂”(“PI”)是指HIV-1蛋白酶的抑 制剂，HIV-1蛋白酶是病毒多蛋白前体(如病毒GAG和GAG Pol多 蛋白)解裂成为存在于传染性HIV-1内的各种功能蛋白所需的酶。HIV 蛋白酶抑制剂包括具有肽类似结构、分子量高(7600道尔顿)及基本肽 特征的各种化合物，如CRIXIVAN(可从Merck获得)，以及包括非肽 蛋白酶抑制剂如VIRACEPT(可从Agouron获得)。

典型的合适蛋白酶抑制剂包括沙奎那韦(Ro31-8959)，可以商品 名为INVIRASE的硬凝胶胶囊和商品名为FORTOUASE的软凝胶胶 囊从Roche Pharmaceuticals，Nutley，NJ07110-1199获得；ritonavir (ABT-538)，可以商品名NORVIR从Abbott实验室，Abbott Park，IL 60064获得；indinavir(MK-639)，可以商品名CRIXIVAN从Merck& Co.，公司，West Point，PA19486-0004获得；nelfnavir(AG-1343)，可 以商品名VIRACEPT从Agouron Pharmaceuticals公司，LaJolla，CA 92037-1020获得；amprenavir(141W94)，它为一种非肽蛋白酶抑制 剂，由Vertex Pharmaceuticals公司，Cambridge，MA02139-4211开发， 可在扩展进入程序(expanded access pro，am)下从Glaxo-Wellcome， Research Triangle，NC获得；lasinavir(BMS-234475)(最初由Novarits， Basel，瑞士(CGP-61755)发现)，可从Bristol-Myers Squibb，Princeton， NJ08543获得；DMP-450，一种环形脲，由Dupont发现，由Triangle Pharmaceuticals开发；BMS-2322623，为一种氮杂肽，由Bristol-Myers Squibb，Princeton，NJ08543开发的第二代HIV-1PI；ABT-378，由 Abbott，Abbott Park，IL60064开发；以及AG-1549，由Shionogi发现 的一种口服有效的咪唑氨基甲酸酯(Shionogi#S-1153)，由Agouron Pharmaceuticals公司，LaJolla CA92037-1020开发。

本文所用术语“抗HIV-1疗法”是指单独或作为多药联合用药(特 别是称为HAART的三种药物或四种药物联合用药)的一部分用于治 疗人体HIV-1感染的任何抗HIV-1药物。

典型的合适抗HIV-1疗法包括但不限于多药联合用药，例如(i)选 自两种NRTI、一种PI、第二种PI以及一种NNRTI的至少三种抗HIV-1 药物；及(ii)选自NNRTI和PI的至少两种抗HIV-1药物；参见下文 表I、表II和表III。

典型的合适HAART多药联合用药包括(a)三种药物联合用药， 例如两种NRTI和一种PI；或(b)两种NRTI和一种NNRTI；以及(c)四 种药物联合用药，例如两种NRTI、一种PI以及第二种PI或一种 NNRTI。对未治疗患者，优选以三种药物联合用药开始抗HIV-1治 疗；优选使用两种NRTI和一种PI，除非患者对PI不能耐受。药物 顺从性是非常重要的。应每3-6个月监测一次血浆CD4+和HIV-1-RNA 水平。若病毒负荷量处于平台期，可添加第四种药物例如一种PI或 一种NNRTI。参见下文表A。

                        表A

                抗HIV-1多药联合用药 A.三种药物联合用药 1.两种NRTI1+一种PI2 2.两种NRTI1+一种NNRTI13 B.四种药物联合疗法4

两种NRTI+一种PI+第二种PI或一种NNRTI C.替代疗法：5

两种NTRI1

一种NRTI5+一种PI2

两种PI6±一种NTRI7或NNRTI3

一种PI2+一种NTRI7+一种NNRTI3 表A脚注

1.一种下列组合：齐多夫定+拉米夫定；齐多夫定+去羟肌苷；stavudine+ 拉米夫定；stavudine+去羟肌苷；齐多夫定+扎西他滨；另见表1。

2.Indinavir、nelfimavir、ritonavir或沙奎那韦软凝胶胶囊。

因为ritonavir有麻烦的副作用，所以较少使用。沙奎那韦的老制剂因其 生物利用度低且疗效差，因此使用最少，但是新型沙奎那韦制剂应更有效。另 见表III。

3.奈韦拉平或delavirdine。另见表II。

4.参见A-M.Vandamne等，Antiviral Chemistry+Chemotherapy，9：187， 第193-197页及图1+2。

5.替代治疗方案是用于因药物顺从性问题或毒性而不能采用推荐治疗方案 的患者，以及用于对推荐治疗方案无效或复发的患者。两种核苷组合使用可引 起许多患者产生HIV抗性及临床治疗失败。

6.大多数数据用沙奎那韦和ritonavir获得(各400mg bid)。另见表III。

7.齐多夫定、stavudine或去羟肌苷。另见表I。

其它用于与聚乙二醇化干扰素-α联合给予的抗HIV-1药物包括 羟基脲、病毒唑、IL-2和IL-12以及Yissum Project第11607号。以 上所列这些抗HIV-1药物联合应用聚乙二醇化干扰素-α的同时也可 联合给予任何抗HIV-1药物疗法，尤其是称为HAART的三种药物 联合用药及四种药物联合用药。

羟基脲(Droxia)为三磷酸核糖核苷还原酶抑制剂，三磷酸核糖核 苷还原酶参与T细胞的激活。NCI发现羟基脲，由Bristol-Myers Squibb 开发。临床前研究表明，它与去羟肌苷活性具有协同作用，而且与 Stavudine一起进行了研究。

Yissum Project第11607号，基于HIV-1 Vif蛋白的一种合成蛋 白，开发者为Yissum Research Development公司，Jerusalem91042，以 色列。

聚乙二醇化干扰素-α即PEG12000-IFN-α2b(可从Schering Plough Research Institute，Kenilworth，NJ获得)增加病毒唑的体外抗HIV-1活 性。用植物凝集素(“PHA”-P)激活的外周血单核细胞(“PBMC”)， PEG12000-IFN-α2b和病毒唑组合在相当于在动物和人体内观察到的血 浆浓度量抑制体外HIV复制。通过Ficoll-Hypaque密度梯度离心从 一位HIV血清反应阴性献血者的血沉棕黄层中分离健康PBMC。用 1μg/ml植物凝集素(PHA-P)在细胞培养基A中激活PBMC2天，所 述细胞培养基A为：补充10％热灭活(+56℃，45分钟)的胎牛血清 (FCS)、2mM L-谷氨酰胺及三种抗生素混合物(青霉素、链霉素、新 霉素；PSN)的RPMI1640。两天以后，洗涤细胞并在细胞培养基B 中以每毫升100万个细胞的浓度培养，所述培养基B为：补充20IU/ml 重组人白介素-2的细胞培养基A。将细胞保持在37℃的5％CO2湿 化空气中。用其他献血者的细胞重复两次实验。总计进行三次独立 实验。

用HIV-1-LAI参照株[F.Barre′-Sinoussi，Science，1983，220，868- 871]以1,00050％组织培养物感染剂量(TCID50)感染PBMC。采用 PHA-P激活的脐血单核细胞(UBMC)扩增所述病毒株。然后通过终点 稀释度对PHA-P激活的PBMC滴定病毒株贮藏液。再用Karber′s公 式计算TCID50[Arch.Exp.Path.Pharmak.，1931，162，126-133]。

单独或联合使用PEG12000-IFN-α2b和病毒唑，AZT作为对照， 在HIV-1感染前24小时给予，并在整个培养过程中保持用药。使用 三种剂量的PEG12000-IFN-α2b和病毒唑。

将200,000个PHA-P激活的PBMC加入96孔微量板的各孔中。 感染前用HIV-1-LAI参照株对细胞预处理24小时。每周两次收集细 胞上清液，并更新药物和培养基。第7天测定细胞上清液RT活性， 通过显微镜观察评价各药物和药用组合物的潜在细胞毒性作用。

使用Retro-Sys试剂盒，按照生产商(Innovagen，Lund，Sweden)的 建议通过测定细胞上清液中逆转录酶(“RT”)活性，检测病毒复制。

应用Chou J.和TC.微型电脑软件，使用累积RT活性计算有效 剂量。

应用采用J和TC Chou微电脑软件的任何组合指数(CI)[Chou& Talalay，1984]或者分抑制浓度(FIC)指数[Antimicrob.Agents. Chemother.，1987，31，1631-1617]分析所述组合效果。当CI指数或FIC 指数等于1时，所述组合为累加作用组合。当CI指数或FIC指数小 于1.0时，所述组合为协同性组合，而当CI指数或FIC指数大于1 时，所述组合可判定为拮抗性组合。

PEG12000-IFN-α2b以及PEG12000-IFN-α2b和病毒唑组合在相当于 小鼠及HIV-1感染患者中检测到的血浆浓度剂量抑制HIV复制[BE. Gilbert等，Antimicrob.Agents Chemother.， 1988， 32.117-121；E.Connor 等，Antimicrob.Agents Chemother.，1993，37，537-539]。

IL-2公开于Ajinomoto EP-0142268，Takeda EP-0176299和Chiron 的美国专利号RE33653、4530787、4569790、4604377、4748234、 4752585以及4949314，可以商品名PROLEUKIN(aldesleukin)从Chiron 公司，Emeryville，CA94608-2997获得，它为冻干粉，用水复制及稀 释后IV输注或sc给药；优选sc给药剂量约1-2000万IU/天；更优 选sc给药剂量为约1500万IU/天。

IL-12公开于WO96/25171，可从Roche Pharmaceuticals，Nutley，NJ 07110-1199及American Home Products，Madison，NJ07940获得；sc 给药剂量为约0.5μg/kg/天-10μg/kg/天

Pentafuside(DP-178，T-20)为一种36个氨基酸的合成肽，公开于 美国专利第5,464,933号，Trimeris得到Duke大学的许可，Trimeris 与Duke大学合作开发Pentafuside；Pentafuside的作用是抑制HIV-1 与靶细胞膜融合。Pentafuside(3-100mg/天)与efavirenz和2种PI 一起以连续sc输注或注射给予对三种药物的联合用药无效的HIV-1 阳性患者；优选100mg/天。

本文所用术语“干扰素-α”是指抑制病毒复制和细胞增殖以及 调节免疫反应的高度同源的种属特异性蛋白质家族。典型的合适干 扰素-α包括但不限于重组干扰素α-2b(例如可从Schering公司， Kenilworth，N.J.获得的Intron-A干扰素)、重组干扰素α-2a(例如可从 Hoffmann-La Roche，Nutley，N.J.获得的Roferon干扰素)、重组干扰 素α-2C(例如可从Boehringer Ingelheim Pharmaceutical，Inc.，Ridgefield， CT.获得的Beroforα2干扰素)、干扰素α-n1(天然干扰素-α的纯化混 合物)(例如可从日本Sumitomo获得的Sumiferon或可从Glaxo- Wellcome Ltd.，London，Great Britain获得的Wellferon干扰素α-n1 (INS))、或者共有干扰素-α(例如美国专利第4,897,471号及第4,695,623 号(特别是其实施例7、8或9)公开的共有干扰素-α以及可从Amgen， Inc.，Newbury Park，CA获得的具体产品)、或者干扰素α-n3，它为 由Interferon Sciences制备的天然干扰素-α混合物，可以商品名 Alferon得自Purdue Frederick Co.，Norwalk，CT.、以及下文定义的聚 乙二醇化干扰素-α。优选使用干扰素α-2a或干扰素α-2b。因为在所 有干扰素中，干扰素α-2b在世界范围内最广泛批准用于治疗慢性丙 型肝炎感染，所以最优选干扰素α-2b。干扰素α-2b的制备介绍于美 国专利第4,530,901号。更优选聚乙二醇化干扰素α-2a或聚乙二醇化 干扰素α-2b。

本文所用术语“聚乙二醇化干扰素-α”是指聚乙二醇修饰的干扰 素-α、优选干扰素α-2a和干扰素α-2b的缀合物。优选的聚乙二醇-干 扰素α-2b缀合物为PEG12000-IFNα-2b。本文所用术语“分子量为12,000 的聚乙二醇缀合的干扰素-α”及“PEG12000-IFN-α”是指诸如按照国 际专利申请号WO95/13090的方法制备并在干扰素α-2a氨基或干扰 素α-2b氨基和平均分子量为12000的聚乙二醇之间含氨基甲酸乙酯 键的缀合物。

优选的PEG12000-IFNα-2b通过使PEG聚合物连接在IFNα-2b分 子赖氨酸残基的ε氨基上制得。一个PEG12000分子通过氨基甲酸乙酯 键与IFNα-2b分子的游离氨基连接。所述缀合物的特征在于所连接 的PEG12000的分子量。PEG12000-IFNα-2b缀合物配制成注射用冻干粉。 IFN-α与PEG缀合的目的是通过显著延长该蛋白质血浆半衰期提高其 传送量，从而延长IFN-α的作用。

其它干扰素-α缀合物可通过将干扰素-α与水溶性聚合物偶合来制 备。对所述聚合物非限制性举例包括其它聚醚均聚物，例如聚丙二 醇、聚氧乙烯化多元醇及其共聚物和嵌段共聚物。作为聚醚型聚合 物的替代物，可使用有效的非抗原性物质如葡聚糖、聚乙烯吡咯烷 酮、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、碳水化合物型聚合物等。所述干扰素-α 聚合物缀合物介绍于美国专利第4,766,106号、美国专利第4,917,888 号、欧洲专利申请第0236987号、欧洲专利申请第0510356号、0593 868及0809996号(聚乙二醇化干扰素α-2a)以及国际专利公布号WO 95/13090。

适于胃肠外给予的聚乙二醇化干扰素-α的药用组合物可用适当 缓冲剂(例如Tris-HCl、醋酸盐或磷酸盐如磷酸氢二钠/磷酸二氢钠缓 冲剂)和药学上可接受的赋形剂(如蔗糖)、载体(如人血浆白蛋白)、渗 透剂(如NaCl)、防腐剂(如硫柳汞、甲酚或苄醇)以及表面活性剂(如 吐温或聚山梨醇酯)溶于无菌注射用水配制。聚乙二醇化干扰素-α可 以冻干粉在2℃-8℃下冷藏。当贮存于2℃和8℃时，其复制水溶液 是稳定的，可在复制后24小时内使用。参见例如美国专利第4,492, 537号、5,762,923号以及5,766,582号。复制水溶液也可贮存于预装 填的、多剂量注射器，例如用来给予诸如胰岛素的药物的注射器。 典型合适注射器包括包含与笔型注射器(如可得自Novo Nordisk的 NOVOLET Novo Pen)的预装填小瓶以及患者容易自己注射的预装填 笔型注射器的系统。其它注射器系统包括含有玻璃筒的笔型注射器， 所述玻璃筒在不同独立隔室中含有稀释剂和聚乙二醇化干扰素-α冻干 粉。

慢性丙型肝炎感染患者可表现出一种或多种以下体征或症状：

a)ALT升高，

b)抗HCV抗体检测阳性，

c)存在HCV，其证据是血清HCV-RNA检测阳性，

d)慢性肝病的临床特征，

e)肝细胞损伤。

为了实施本发明，在第一和第二治疗阶段对感染HIV-1并表现 出一种或多种上述体征或症状的患者给予聚乙二醇化干扰素-α和病毒 唑联合用药以及诸如HAART的抗逆转录病毒药物治疗，用药量足以 去除或至少缓解一种或多种所述体征或症状，而且使HCV-RNA血 清水平至少降低到十分之一，优选至少在第二治疗阶段结束时检测 不到HCV-RNA并且在第二治疗阶段结束后至少24周检测不到 HCV-RNA。第一和第二治疗阶段总计约为40-50周，优选48周。可 在第二治疗阶段结束后中断给予病毒唑，这取决于主治临床医师的 判断。

本发明中的术语“没有可检测的HCV-RNA”是指根据定量多循 环逆转录酶PCR方法检测，所述患者血清中HCV-RNA拷贝低于100 拷贝/ml。本发明中优选通过熟练临床医师熟知的研究型RT-PCR方 法检测HCV-RNA。该方法在本文中称为HCV-RNA/qPCR。HCV-RNA 的检测下限为100拷贝/mL。由中心实验室进行血清HCV-RNA/qPCR 检测和HCV基因型检测。另见J.G.McHutchinson等(N.Engl.J.Med.， 1998，339：1485-1492)及G.L.Davis等(N.Engl.J.Med.339：1493- 1499)。

在本发明的一个优选实施方案中，用聚乙二醇化干扰素-α及病 毒唑与HAART组合治疗同时感染HIV-1和HCV的患者，主治临床 医师和所述患者认为这是合适的。优选使用Schering公司出售的商 品名为REBETRON的干扰素α-2b-病毒唑组合药物。另见J.G. McHutchinson等(N.Engl.J.Med.，1998，339：1485-1492)及G.L.Davis 等(N.Engl.J.Med.339：1493-1499)。可得自ICN Pharmaceuticals公 司，Costa Mesa，Califomia的病毒唑(1-β-D-呋喃核糖-1H-1，2，4-三唑-3- 甲酰胺)介绍于默克索引，第8199号化合物，第11版。它的制备和 配制介绍于美国专利第4,211,771号。

对于同时感染HIV-1和HCV的儿科患者，合适的HAART包括 一种NRTI+一种PI，例如Nelfinavir+一种NNRTI，如Efavirenz 联合上文所列的聚乙二醇化干扰素-α和病毒唑的剂量和用药方案。另 见下文的表I-IV。为了减轻与聚乙二醇化干扰素-α治疗相关的生长 迟缓，可给予所述儿科患者人生长激素，例如重组rDNA来源的多 肽激素即人生长激素，可以商品名HUMATROPE从Eli Lilly&Co.， Indianapolis，IN46285获得，生长激素的给药剂量和给药方案见产品 说明并咨询主治临床医师。

HAART与聚乙二醇化干扰素-α联合给予，即可在所述患者接受 HAART剂量之前、之后或同时给予聚乙二醇化干扰素-α剂量。人生 长激素例如可以商品名HUMATROPE从Eli Lilly&Co，Indianapolis， IN 46285获得的重组rDNA来源多肽激素即生长激素也可与HAART 和聚乙二醇化干扰素-α联合给予感染HIV-1的儿科患者，其给药剂 量和给药方案可见产品说明并咨询主治主治临床医师。

在本发明的一个优选实施方案中，在开始HAART之前、优选 开始HAART之前约2-4周给予HIV-1感染患者聚乙二醇化干扰素- α。在本发明的另一个优选实施方案中，同时开始给予聚乙二醇化干 扰素-α，即在给予HAART的同一天给予聚乙二醇化干扰素-α。在本 发明的另一个实施方案中，在HIV-1感染患者开始HAART之后给 予聚乙二醇化干扰素-α。

本发明中抗HIV-1药物治疗的目的是将HIV-1-RNA病毒负荷量 降至可检测限以下。本发明中“HIV-1-RNA的可检测限”是指根据 定量多循环逆转录酶PCR方法检测，患者血浆中HIV-1-RNA拷贝低 于约200个拷贝/ml至低于约50个拷贝/ml。本发明优选通过 Amplicor-1 Monitor1.5(可从Roche Diagnsotics获得)的方法或 Nuclisens HIV-1QT-1的方法检测HIV-1-RNA。所述方法介绍于 Schooley，RT，Antiviral Therapy(1997)，2(增刊4)：59-70。

NRTI、NNRTI和PI；IL-2、IL-12和pentafuside的剂量和给药 方案由主治临床医师根据包装说明书中批准的剂量和给药方案决定 或按照考虑患者的年龄、性别、健康状况以及HIV-1感染的严重程 度所提出的治疗方案决定。对于感染HIV-1或同时感染HIV-1和HCV 的儿科患者，合适的HAART包括一种NRTI+一种PI，例如Nelfinavir +一种NNRTI，如Efavirenz结合上文所列聚乙二醇化干扰素-α和病 毒唑的剂量和给药方案。关于剂量和给药方案另见下文的表I-IV。

以下临床治疗方案可用来药物给予本发明的抗HIV-1治疗药物。 对所述临床治疗方案的许多调整对熟练临床医师是显而易见的，并 且以下研究设计不应解释为限制本发明方法的范围，本发明的方法 只受下文权利要求书限制。参见例如J.G.McHutchinson等(N.Engl.J. Med.，1998，339：1485-1492)及G.L.Davis等(N.Engl.J.Med. 339：1493-1499)。

                     第1号研究

研究人群包括诊断为HIV-1感染的未治疗或接受了治疗的男性 和女性患者，如果符合以下入选标准和排除标准则被选入本研究。 受试者入选标准：

●诊断为HIV-1感染的未治疗或接受了治疗的患者。

● 1.5型Amplicor测试HIV-RNA大于500个拷贝/mL。

●CD4+计数高于100个拷贝/mL，优选高于200个细胞/mL。

●临床上可接受的安全实验室检测结果及ECG表明受试者身 体健康。

●必须符合以下实验室参数：

  ◆血小板计数≥75,00/mL

  ◆血红蛋白为9gm/dL(90gm/L)

  ◆嗜中性细胞绝对计数1500/μL

  ◆肌酐＜正常值上限的1.5倍

  ◆SGOT/SGPT≤正常值上限的5倍

  ◆胆红素≤正常值上限的2.5倍

●尿液妊娠试验(限女性)阴性

受试者必须愿意并且能够签署书面知情同意书，能够遵守研究

方案中提出的治疗计划。 受试者排除标准

●哺乳或怀孕妇女或不能采取充分的生育控制措施的女性。

●对大肠杆菌蛋白过敏的患者。

●有明显的既往病史/精神病史、尤其是抑郁症或痴呆病史的患 者。

受试者随机接受聚乙二醇化干扰素α-2b，即PEG12000-IFN-α2b， 剂量为0.5-4.5μg/kg，例如每周一次皮下注射剂量为0.5、1.0、1.5、 3.0或4.5μg/kg。也可在给予聚乙二醇化干扰素α-2b即PEG12000-IFN- α-2b即可得自Schering公司，Kenilworth，NJ.的PEG-Intron之前或同 时开始HAART。 研究总设计和计划：

主要疗效目标是将血浆HIV-1-RNA水平降至定量限(LOQ)以 下，即血浆HIV-RNA低于50个拷贝/mL。

中心实验室检测血浆HIV-1-RNA/qPCR。在达到定量限以下足 够时间(优选一年以上)后中断所有抗逆转录病毒疗法，直到病毒回升 至血浆HIV-RNA水平≥10,000个拷贝/mL，此时再开始一个抗逆转录 病毒疗法疗程。达到LOQ以下足够时间后，再开始一个STI，其中 干扰素-α、优选聚乙二醇化干扰素-α按照本发明给予。重复治疗、然 后停止治疗的治疗循环，直到STI期间在缺少任何抗逆转录病毒治 疗或干扰素-α的情况下，病毒回升保持血浆HIV-RNA水平为10,000 个拷贝/mL以下，优选血浆HIV-RNA水平为5,000个拷贝/mL以下。

                     第2号研究 研究目的

研究人群包括诊断为HIV-1感染并且病毒抑制水平在定量限以 下保持足够长时间(优选一年以上)的男性和女性患者。 受拭者入选标准：

●诊断为HIV-1感染的未治疗或接受了治疗的患者。

●1.5型Amplicor测试HIV-RNA小于50个拷贝/mL。

●CD4+计数大于100个拷贝/mL，优选大于200个细胞/mL。

●临床上可接受的安全实验室检测结果及ECG表明受试者身体健 康。

●必须符合以下实验室参数：

  ◆血小板计数≥75,00/mL

  ◆血红蛋白为9gm/dL(90gm/L)

  ◆嗜中性细胞绝对计数为1500/μL

  ◆肌酐＜正常值上限的1.5倍

  ◆SGOT/SGPT≤正常值上限的5倍

  ◆胆红素≤正常值上限的2.5倍

●尿液妊娠试验(限女性)阴性

受试者必须愿意并且能够签署书面知情同意书，能够遵守研究方 案中提出的治疗计划。

●HIV-RNA低于5个拷贝/mL 受试者排除标准

●哺乳或怀孕或不能采取充分的生育控制措施的女性。

●对大肠杆菌蛋白过敏的患者。

●有明显的既往病史/精神病史、尤其是抑郁症或痴呆病史的 患者。 总设计和研究流程

受试者在STI期间随机接受聚乙二醇化干扰素-α或不接受任何 药物。病毒反弹时间及病毒RNA水平≥10,000拷贝/mL需重新启动 HAART患者百分率是主要指标。需要重新启动HAART的患者在随 后的治疗循环(优选6个月，最长至一年时间)保持接受聚乙二醇化干 扰素-α或不接受任何药物。每个STI循环期间主要的指标是病毒反弹 的时间及反弹程度大小。

                           表1

        核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)剂量及给药方案 NRTI(商品名，Marketer)                              常规成人剂量 齐多夫定，AZT(Retrovir-Glaxo Wellcome)*            200mg PO tid或300mg PO bid Stavudine(Zerit-Bristol-Myers Squibb)*             40mg PO bid1 去羟肌苷(Videx-Bristol-Myers Squibb)*              200mg PO bid2 拉米夫定(Epivir-Glaxo Wellcome)*                   150mg PO bid3 扎西他滨(Hivid-Roche)                               0.75mg PO tid 齐多夫定+拉米夫定(Combivir-Glaxo Wellcome)          1片PO bid4 Abacavir(Ziagen-Glaxo-Wellcome)                     200或400mg PO tid Adefovir dipivoxil(Prevon-Gilead Sciences)          125或200mg PO qd5 Lobucavir(BMS-180194-BMS)                           200mg PO bid6 BCH-10652(Biochem Pharma)                           400mg PO qid7 Emitricitabine((-)-FTC-Triangle Pharmaceuticals)    200mg PO qd8 β-L-FD4(B-L-D4C-Vion Pharmaceutical)               0.2-25mg/kg/天9 DAPD(Triangle Pharmaceuticals)                      ____________10 Lodenosine(FddA-U.S.Bioscience)                     1.6-3.2mg/kg PO bid11

                          表1脚注

*可以液体制剂获得。

1低于60kg的患者，30mg PO bid。

2片剂；低于60kg的患者，125mg PO bid；大于60kg的患者，200mg bid； 粉剂，剂量范围为167mg(＜60kg)-250mg PO(＜60kg)bid。应在饭前至少30 分钟或饭后至少2小时服药。

3低于50kg的患者，2mg/kg PO bid。

4每片含300mg齐多夫定及150mg拉米夫定。

5可以扩展进入程序获得-NIH-资助的III期试验。

6II期

7I/II期；参见PharmaProjects，J5A&J5Z章节。

8II/III期；参见PharmaProjects，J5A&J5Z章节。

9临床前；在鸭HBV模型中有活性；参见PharmaProjects，J5A&J5Z章节

10临床前；PO及IV均有效，DAPD是另一种dioxolene嘌呤DXG的药物前 体，参见PharmaProjects，J5A&J5Z章节

11II期，FddA可每日给药一次。

                           表II

        非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)剂量及给药方案 NRTI(商品名，Marketer)                            常规成人剂量和给药方案 奈韦拉平(Viramune-Roxane)                         200mg PO bid1 Delavirdine(Rescriptor-Pharmacia&Upj ohn)         400mg PO tid Efavirenz(Sustiva，Dupont)                        200mg PO qid2 PNU-142721(Pharmacia+Upjohn)                      ____________3 AG-1549(Agouvon Pharmaceuticals)                  ____________4 MKC-442(Triangle Pharmaceuticals)                 750mg PO bid5 (+)-Calanolide A(Med Chem Research)               800mg PO6

1为了降低出现皮疹的危险，用奈韦拉平治疗的前两周，患者应每日只服用一 片200mg片剂。

2Efavirenz与indinavir+2种NRTI的四种药物疗法或efavirenz+AZT+拉米 夫定的三种药物疗法。

3临床前阶段；参见PharmaProjects，J5A&J5Z章节。

4I/II期评价剂量及与其它抗HIV-1治疗药物的同时使用；参见PharmaProjects， J5A&J5Z章节。

5三种药物疗法：(a)MKC-442与stavudine以及拉米夫定或去羟肌苷；或(b)MKC -442与nelfmavir(qv)以及NRTI。

6I期；参见PharmaProjects，J5A&J5Z章节。

                              表III

                 蛋白酶抑制剂(PI)剂量及给药方案 PI(商品名，Marketer)                                  剂量+给药方案 沙奎那韦(Invirase-硬凝胶胶囊-Roche)                   600mg PO tid1

    (Fortovase-软凝胶胶囊-Roche)                  1100mg PO tid1 Ritonavir(Norvir-Abbott)                              600mg PO bid2 Indinavir(Crixivan-Merck)                             800mg PO qid3 Nelfinavir(Viracept-Agouron)                          750mg PO tid4 Amprenavir(141W94，Glaxo)                             900mg-1200mg PO bid5 Lasinavir(BMS-234475，BMS)                            _______________6 DMP-450(Triangle Pharmaceuticals)                     _______________7 BMS-2322623(BMS)                                      _______________8 ABT-378(Abbott)                                       60mg PO bid9

1饱餐的同时或饱餐后2小时以内。

2与食物一起。液体制剂口感不佳；生产商建议与巧克力奶或液体营养补充剂一 起服用。

3餐前1小时或餐后2小时用水送服。服用indinavir的患者应每天至少饮用48 盎司(1.5升)水。

4与食物一起。

5四种药物联合用药：amprenavir与AZT+拉米夫定+abacavir。

6I/II期；参见PharmaProjects，J5A&J5Z章节。

7II期；参见PharmaProjects，J5A&J5Z章节。

8临床前研究；BMS2322623的药物前体酯促进口服吸收；参见PharmaProjects， J5A&J5Z章节。

9I期研究表明ABT-378药效为ritonavir的10倍；参见PharmaProjects J5A&J5Z 章节。

                         表IV

                    其它抗HIV-1药物 药物(商品名，Marketer)                           常规成人剂量及给药方案 羟基脲(Droxia，BMS)                              1000mg PO qid1 Ribavirin(Rebetol，Schering-Plough)              600mg-1200mg/天，PO IL-2(Proleukin，Chiron公司)                      1-20百万IU/天，sc IL-12(Roche)                                     0.5-10μg/kg/天，sc Yissum Project第11607号                          __________________2

1羟基脲与400mg ddl+500mg AZT的三种药物疗法；参见PharmaProjects B3C1章节。

2临床前；参见PharmaProjects，J5A&J5Z章节。