用于预防和治疗神经病的方法和组合物
阅读：967发布：2023-03-05
专利汇可以提供用于预防和治疗神经病的方法和组合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本公开内容涉及通过给受试者施用有效量的芳香族阳离子肽，用于 治疗 患有通过药物诱导的神经病引起的痛觉过敏的受试者的方法。本公开内容还涉及通过给处于发展该病症的危险中的受试者施用有效量的芳香族阳离子肽，用于使受试者免于通过药物诱导的神经病引起的痛觉过敏的方法。，下面是用于预防和治疗神经病的方法和组合物专利的具体信息内容。
1.一种用于治疗有此需要的受试者中的周围神经病或痛觉过敏的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的具有式D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2的肽。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述周围神经病或痛觉过敏是药物诱导的。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述药物是化学治疗剂。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述化学治疗剂是丙卡巴肼、呋喃西林、鬼臼、氮芥、依托格鲁、顺铂、舒拉明、紫杉醇、苯丁酸氮芥、六甲蜜胺、卡铂、阿糖胞苷、多西紫杉醇、达卡巴嗪、依托泊苷、异环磷酰胺与美司钠、氟达拉滨、他莫昔芬、替尼泊苷、硫鸟嘌呤或长春新碱。
5.根据权利要求3所述的方法，其中所述化学治疗剂是长春新碱。
6.根据权利要求2所述的方法，其中所述肽与所述药物同时施用。
7.根据权利要求2所述的方法，其中所述肽在所述药物后施用。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述周围神经病引起痛觉过敏。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者是人。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述肽静脉内、经口、皮下、经皮、腹膜内、鞘内、肌内、鼻内、经颊、舌下、经舌或局部施用。
11.一种用于预防有此需要的受试者中的痛觉过敏的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的具有式D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2的肽。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述痛觉过敏是药物诱导的。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述药物是化学治疗剂。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述化学治疗剂是丙卡巴肼、呋喃西林、鬼臼、氮芥、依托格鲁、顺铂、舒拉明、紫杉醇、苯丁酸氮芥、六甲蜜胺、卡铂、阿糖胞苷、多西紫杉醇、达卡巴嗪、依托泊苷、异环磷酰胺与美司钠、氟达拉滨、他莫昔芬、替尼泊苷、硫鸟嘌呤或长春新碱。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述化学治疗剂是长春新碱。
16.根据权利要求12所述的方法，其中所述肽与所述药物同时施用。
17.根据权利要求12所述的方法，其中所述肽在所述药物后施用。
18.根据权利要求11所述的方法，其中所述肽在痛觉过敏发作前施用。
19.根据权利要求11所述的方法，其中所述受试者是人。
20.根据权利要求11所述的方法，其中所述肽静脉内、经口、皮下、经皮、腹膜内、鞘内、肌内、鼻内、经颊、舌下、经舌或局部施用。
21.一种用于治疗或预防有此需要的受试者中的痛觉过敏的组合物，所述组合物包含有效量的具有式D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2的肽。
22.根据权利要求21所述的组合物，其中所述痛觉过敏是药物诱导的。
23.根据权利要求22所述的组合物，其中所述药物是化学治疗剂。
24.根据权利要求23所述的组合物，其中所述化学治疗剂是丙卡巴肼、呋喃西林、鬼臼、氮芥、依托格鲁、顺铂、舒拉明、紫杉醇、苯丁酸氮芥、六甲蜜胺、卡铂、阿糖胞苷、多西紫杉醇、达卡巴嗪、依托泊苷、异环磷酰胺与美司钠、氟达拉滨、他莫昔芬、替尼泊苷、硫鸟嘌呤或长春新碱。
25.根据权利要求22所述的组合物，其中所述化学治疗剂是长春新碱。
26.根据权利要求22所述的组合物，其中所述肽与所述药物同时施用。
27.根据权利要求22所述的组合物，其中所述肽在所述药物后施用。
28.根据权利要求21所述的组合物，其中所述肽在痛觉过敏发作前施用。
29.根据权利要求21所述的组合物，其中所述受试者是人。
30.根据权利要求21所述的组合物，其中所述肽静脉内、经口、皮下、经皮、腹膜内、鞘内、肌内、鼻内、经颊、舌下、经舌或局部施用。
用于预防和治疗神经病的方法和组合物
[0001] 与相关申请的交叉参考
[0002] 本申请要求于2012年3月30日提交的美国临时申请号61/618,428的优先权，所述美国临时申请在此全文以引用方式并入。
技术领域
[0003] 本技术总体涉及包含芳香族阳离子肽用于预防或治疗神经病的组合物及其使用方法。
背景技术
[0005] 化学治疗诱导性周围神经病导致患者受累并使治疗范围限制于潜在有用的抗癌药。长春花生物碱例如长春新碱和长春碱具有在恶性肿瘤治疗中的显著功效。然而，这些试剂是高度神经毒的，经常引起疼痛的周围神经病，所述周围神经病限制在癌症治疗中的使用剂量和持续时间。这些副作用是剂量和时间依赖性的，经常具有数天至数周的潜伏期，并且可与其他药物相关的毒性累积，所述其他药物与化学治疗剂组合使用。发明内容
[0006] 本公开内容提供了用于治疗或预防神经病或痛觉过敏的组合物和方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用芳香族阳离子肽。
[0007] 在一个方面，本公开内容提供了用于治疗有此需要的受试者中的周围神经病或痛觉过敏的方法，所述方法包括给受试者施用有效量的具有式D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2的肽。在一些实施例中，周围神经病或痛觉过敏是药物诱导的。
[0008] 在一些实施例中，药物是化学治疗剂。在一些实施例中，化学治疗剂是丙卡巴肼、呋喃西林、鬼臼、氮芥、依托格鲁、顺铂、舒拉明、紫杉醇、苯丁酸氮芥、六甲蜜胺、卡铂、阿糖胞苷、多西紫杉醇、达卡巴嗪、依托泊苷、异环磷酰胺与美司钠、氟达拉滨、他莫昔芬、替尼泊苷、硫鸟嘌呤或长春新碱。在一些实施例中，化学治疗剂是长春新碱。
[0009] 在一些实施例中，该肽与药物同时施用。在一些实施例中，该肽在药物后施用。在一些实施例中，周围神经病引起痛觉过敏。在一些实施例中，受试者是人。在一些实施例中，该肽静脉内、经口、皮下、经皮、腹膜内或局部施用。
[0010] 在一个方面，本公开内容提供了用于预防有此需要的受试者中的痛觉过敏的方法，所述方法包括给受试者施用有效量的具有式D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2的肽。在一些实施例中，痛觉过敏是药物诱导的。在一些实施例中，药物是化学治疗剂。
[0011] 在一些实施例中，化学治疗剂是丙卡巴肼、呋喃西林、鬼臼、氮芥、依托格鲁、顺铂、舒拉明、紫杉醇、苯丁酸氮芥、六甲蜜胺、卡铂、阿糖胞苷、多西紫杉醇、达卡巴嗪、依托泊苷、异环磷酰胺与美司钠、氟达拉滨、他莫昔芬、替尼泊苷、硫鸟嘌呤或长春新碱。在一些实施例中，化学治疗剂是长春新碱。
[0012] 在一些实施例中，该肽与药物同时施用。在一些实施例中，该肽在药物后施用。在一些实施例中，该肽在痛觉过敏发作前施用。在一些实施例中，受试者是人。在一些实施例中，该肽静脉内、经口、皮下、经皮、腹膜内、鞘内、肌内、鼻内、经颊、舌下、经舌或局部施用。
[0013] 在一个方面，本公开内容提供了用于治疗或预防有此需要的受试者中的痛觉过敏的组合物，所述组合物包含有效量的具有式D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2的肽。在一些实施例中，痛觉过敏是药物诱导的。
[0014] 在一些实施例中，药物是化学治疗剂。在一些实施例中，化学治疗剂是丙卡巴肼、呋喃西林、鬼臼、氮芥、依托格鲁、顺铂、舒拉明、紫杉醇、苯丁酸氮芥、六甲蜜胺、卡铂、阿糖胞苷、多西紫杉醇、达卡巴嗪、依托泊苷、异环磷酰胺与美司钠、氟达拉滨、他莫昔芬、替尼泊苷、硫鸟嘌呤或长春新碱。在一些实施例中，化学治疗剂是长春新碱。
[0015] 在一些实施例中，该肽与药物同时施用。在一些实施例中，该肽在药物后施用。在一些实施例中，该肽在痛觉过敏发作前施用。在一些实施例中，受试者是人。在一些实施例中，该肽静脉内、经口、皮下、经皮、腹膜内、鞘内、肌内、鼻内、经颊、舌下、经舌或局部施用。
[0016] 在一个实施例中，该肽由式I限定：
[0017]1 2
[0018] 其中R 和R 独立地选自
[0019] (i)氢；
[0020] (ii)线性或分支C1-C6烷基；
[0021] (iii) 其中m＝1-3；
[0022] (iv)
[0023] (v)
[0024] R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12各自独立地选自
[0025] (i)氢；
[0026] (ii)线性或分支C1-C6烷基；
[0028] (iv)氨基；
[0029] (v)C1-C4烷基氨基；
[0030] (vi)C1-C4二烷基氨基；
[0031] (vii)硝基；
[0032] (viii)羟基；
[0033] (ix)卤素，其中“卤素”包含氯、氟、溴和碘；和
[0034] n为1-5的整数。
[0035] 在特定实施例中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12均为氢；并且n为4。1 2 3 4 5 6 7 8 9 11 8 12 10
在另一个实施例中，R、R、R、R、R、R、R、R、R 和R 均为氢；R 和R 为甲基；R 为羟基；
并且n为4。
在另一个实施例中，R、R、R、R、R、R、R、R、R 和R 均为氢；R 和R 为甲基；R 为羟基；
并且n为4。
[0036] 在一个实施例中，该肽由式II限定：
[0037]
[0038] 其中R1和R2各自独立地选自
[0039] (i)氢；
[0040] (ii)线性或分支C1-C6烷基；
[0041] (iii) 其中m＝1-3；
[0042] (iv)
[0043] (v)
[0044] R3和R4各自独立地选自
[0045] (i)氢；
[0046] (ii)线性或分支C1-C6烷基；
[0047] (iii)C1-C6烷氧基；
[0048] (iv)氨基；
[0049] (v)C1-C4烷基氨基；
[0050] (vi)C1-C4二烷基氨基；
[0051] (vii)硝基；
[0052] (viii)羟基；
[0053] (ix)卤素，其中“卤素”包含氯、氟、溴和碘；和
[0054] R5、R6、R7、R8和R9各自独立地选自
[0055] (i)氢；
[0056] (ii)线性或分支C1-C6烷基；
[0057] (iii)C1-C6烷氧基；
[0058] (iv)氨基；
[0059] (v)C1-C4烷基氨基；
[0060] (vi)C1-C4二烷基氨基；
[0061] (vii)硝基；
[0062] (viii)羟基；
[0063] (ix)卤素，其中“卤素”包含氯、氟、溴和碘；和
[0064] n为1-5的整数。
[0066] 图1是显示D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2有效预防大鼠中长春新碱诱导的痛觉过敏的图表。关于组1和3的比较，#p>0.05；关于组1和A的比较，**p<0.01。
[0067] 图2是显示D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2有效治疗大鼠中长春新碱诱导的痛觉过敏的图表。
具体实施方式
[0068] 本公开内容基于下述令人惊讶的发现：某些芳香族阳离子肽可治疗或改善神经病和痛觉过敏，包括药物诱导的神经病和痛觉过敏。应当理解本技术的某些方面、模式、实施例、变化和特点在下文以不同的详细水平描述，以便提供本技术的基本理解。
[0069] 在实践本技术中，使用分子生物学、蛋白质生物化学、细胞生物学、免疫学、微生物学和重组DNA的许多常规技术。这些技术是众所周知的，并且分别在例如下述中阐明：Current Protocols in Molecular Biology,第I-III 卷，Ausubel，编 辑(1997)；Sambrook 等 人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual, 第 二 版 (Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,1989)；DNA Cloning:A Practical Approach,第I和 II卷，Glover,编 辑(1985)；Oligonucleotide Synthesis,Gait, 编辑(1984)；Nucleic Acid Hybridization,Hames&Higgins,编辑(1985)；Transcription and Translation,Hames&Higgins, 编 辑 (1984)；Animal Cell Culture,Freshney, 编辑 (1986)；Immobilized Cells and Enzymes(IRL Press,1986)；Perbal,A Practical Guide to Molecular Cloning；系列，Meth.Enzymol.,(Academic Press,Inc.,1984)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells,Miller&Calos,编 辑 (Cold Spring Harbor Laboratory,NY,1987)；以及Meth.Enzymol.,第154和155卷，Wu&Grossman和Wu,编辑。
[0070] 如本说明书中使用的某些术语的定义在下文提供。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语一般具有与本技术所属领域普通技术人员通常理解相同的含义。
[0072] 如本文使用的，“约”应由本领域普通技术人员理解，并且取决于它在其中使用的上下文而改变至一些程度。如果存在对于本领域普通技术人员不明确的该术语的使用，则考虑到它在其中使用的上下文，“约”意指最多至加上或减去列举值的10％。
[0073] 如本文使用的，试剂、药物或肽对受试者的“施用”包括将化合物引入或递送至受试者以执行其预期功能的任何途径。施用可通过任何合适途径执行，包括经口、鼻内、肠胃外(静脉内、肌内、腹膜内或皮下)、经直肠或局部。施用包括自施用和通过另一者的施用。
[0074] 如本文使用的，术语“氨基酸”包括天然存在的氨基酸和合成氨基酸，以及氨基酸类似物和氨基酸模拟物，其以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸，以及以后修饰的氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸盐和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物指这样的化合物，其具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构，即与氢、羧基、氨基和R基结合的α-碳，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。此类类似物具有经修饰的R基(例如正亮氨酸)或经修饰的肽主链，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物指这样的化学化合物，其具有不同于氨基酸的一般化学结构的结构，但以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用。氨基酸在本文中可由其通常已知的三字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号提及。
[0075] 如本文使用的，术语“有效量”指足以实现所需治疗和/或预防效应的数量，例如导致神经病或者与神经病相关的一种或多种病症包括但不限于痛觉过敏的预防或降低的量。在治疗或预防应用的背景下，施用于受试者的组合物量将取决于神经病或痛觉过敏的类型和严重性，以及个体的特征，例如一般健康、年龄、性别、体重和对药物的耐受。它还将取决于神经病或痛觉过敏的程度、严重性和类型。取决于这些及其他因素，技术人员将能够测定适当剂量。组合物还可与一种或多种另外的治疗性化合物组合施用。
[0076] “分离的”或“纯化的”多肽或肽基本上不含来自试剂源自其的细胞或组织来源的细胞材料或其他污染多肽，或当化学合成时，基本上不含化学前体或其他化学品。例如，分离的芳香族阳离子肽将不含干扰试剂的治疗用途的材料。此类干扰材料可包括酶、激素及其他蛋白质性和非蛋白质性溶质。
[0077] 如本文使用的，术语“医学病症”包括但不限于表现为对于其期望治疗和/或预防的一种或多种身体和/或心理症状的任何病症或疾病，并且包括先前和新近鉴定的疾病及其他障碍。例如，医学病症可以是神经病，或任何相关病症或并发症，包括但不限于痛觉过敏。
[0078] 如本文使用的，“神经病”或“周围神经病”一般指对周围神经系统系统的神经的损害。该术语包含各种病因学的神经病，包括但不限于通过下述引起、起因于下述或与下述相关的神经病：遗传障碍、代谢/内分泌并发症、糖尿病、炎性疾病、维生素缺乏症、恶性病和毒性，例如酒精毒性、有机金属毒性、重金属毒性、放射毒性和药物毒性。如本文使用的，该术语包含运动神经病、感觉神经病、混合性感觉运动神经病、慢性神经病和急性神经病。如本文使用的，该术语包含单神经病、多重单神经病和多神经病。
[0079] 举例说明性神经病原因包括但不限于通过下述引起、起因于下述或与下述相关的神经病：糖尿病、化学疗法、创伤、营养不良、酒精中毒、自身免疫疾病、癌症、传染病、肾疾病、肝疾病、HIV、AIDS、甲状腺功能减退、遗传性障碍和对毒素的暴露。
[0080] 在一些实施例中，本公开内容提供了用于治疗或预防周围神经病或周围神经病症状的组合物。在一些实施例中，周围神经病是药物诱导的周围神经病。在一些实施例中，周围神经病通过化学治疗剂诱导。在一些实施例中，化学治疗剂是长春花生物碱。在一些实施例中，长春花生物碱是长春新碱。在一些实施例中，周围神经病的症状包括痛觉过敏。
[0081] 如本文使用的，“痛觉过敏”指增加的对疼痛的敏感性，其可通过对伤害性感受器或周围神经(即神经病)的损害引起。该术语指瞬时性痛觉过敏和永久性痛觉过敏，并且包含原发性痛觉过敏(即在受损组织中直接发生的疼痛敏感性)和继发性痛觉过敏(即在受损组织周围的未受损组织中发生的疼痛敏感性)两者。该术语包含通过(但不限于)神经病引起的痛觉过敏，所述神经病通过下述引起、起因于下述或在其他方面与下述相关：遗传障碍、代谢/内分泌并发症、炎性疾病、维生素缺乏症、恶性病和毒性，例如酒精毒性、有机金属毒性、重金属毒性、放射毒性和药物毒性。在一些实施例中，痛觉过敏通过药物诱导的周围神经病引起。
[0082] 在一些实施例中，本公开内容提供了用于治疗或预防痛觉过敏的组合物。在一些实施例中，痛觉过敏是药物诱导的。在一些实施例中，痛觉过敏通过化学治疗剂诱导。在一些实施例中，化学治疗剂是长春花生物碱。在一些实施例中，长春花生物碱是长春新碱。
[0083] 如本文使用的，术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，以意指包含通过肽键或经修饰的肽键彼此连接的两个或更多个氨基酸的聚合物，即肽等排物。多肽指通常被称为肽、糖肽或寡聚物的短链，和一般被称为蛋白质的更长链两者。多肽可含有20种基因编码的氨基酸以外的氨基酸。多肽包括通过天然过程例如翻译后加工、或通过本领域众所周知的化学修饰技术进行修饰的氨基酸序列。此类修饰在基础课本以及大量研究文献中充分描述。
[0084] 如本文使用的，就治疗方法(例如化合物例如本公开内容的芳香族阳离子肽的施用)而言的障碍或病症的“预防”或“防止”意指相对于未经治疗的对照受试者，该方法降低经治疗的受试者中的障碍或病症的出现。
[0085] 如本文使用的，单词“保护”指减少下述可能性和/或危险：用本技术的肽治疗的受试者将发展给定疾病或障碍，或者延迟疾病、障碍或病症的一种或多种症状的发作，或者降低疾病、障碍或病症的一种或多种症状的严重性，所述疾病、障碍或病症例如神经病或者相关病症或并发症例如痛觉过敏。通常，如果与未用本技术的肽治疗的相同受试者将发展神经病或痛觉过敏的可能性和/或危险相比较，可能性减少至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％，则发展疾病或障碍的可能性视为降低的。在一些实施例中，当该肽在受试者接受神经病诱导药物后，但在神经病或痛觉过敏发作前施用时，该肽使受试者免于发展神经病或痛觉过敏。
[0086] 如本文使用的术语“受试者”指任何脊椎动物物种的成员。本文公开的主题的方法可特别用于温血脊椎动物。本文提供的是治疗哺乳动物例如人，以及由于将要绝种具有重要性、具有对人的经济重要性(用于由人消费的在农场饲养的动物)和/或社会重要性(作为宠物或在动物园中保持的动物)的那些哺乳动物。在一些实施例中，受试者是人。
[0087] 如本文使用的，术语“处理”、“治疗”或“减轻”指治疗性处理和预防或防止措施两者，其中目的是预防或减慢(减轻)靶向病理学病症或障碍。如果在接受治疗量的根据本文所述方法的芳香族阳离子肽后，受试者显示可观察和/或可测量的特定疾病或病症的一种或多种体征和症状中的减少或不存在，则受试者就疾病或病症被成功“治疗”。例如，对于神经病或痛觉过敏，治疗或预防可包括症状例如四肢中的疼痛的频率、严重性或持续时间降低。还应当理解如所述的医学病症的多种治疗或预防模式意指“基本的”，其包括完全治疗或预防以及少于完全治疗或预防，并且其中达到一些生物学或医学相关结果。
[0088] 肽
[0089] 在本方法中有用的芳香族阳离子肽是水溶性和高度极性的。尽管有这些特性，该肽仍可容易地穿透细胞膜。在本方法中有用的芳香族阳离子肽包括由肽键共价连接的最少三个氨基酸且优选包括最少四个氨基酸。本方法的芳香族阳离子肽中存在的氨基酸的最大数目是由肽键共价连接的约二十个氨基酸。在一些实施例中，氨基酸的最大数目是约十二、约九或约六。在一些实施例中，该肽中存在的氨基酸数目为四。
[0090] 芳香族阳离子肽的氨基酸可以是任意氨基酸。氨基酸可以是天然存在的。天然存在的氨基酸包括例如在哺乳动物蛋白质中通常发现的二十种最常见的左旋(L)氨基酸，即丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、天冬酰胺(Asn)、天冬氨酸(Asp)、半胱氨酸(Cys)、谷氨酰胺(Glu)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Ileu)、亮氨酸(Leu)、赖氨酸(Lys)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和缬氨酸(Val)。其他天然存在的氨基酸包括例如在与蛋白质合成不相关的代谢过程中合成的氨基酸。例如，氨基酸鸟氨酸和瓜氨酸在尿素生产过程中的哺乳动物代谢中合成。
[0091] 该肽可任选含有一种或多种非天然存在的氨基酸。非天然存在的氨基酸可以是L-、右旋的(D)或其混合物。该肽可不具有天然存在的氨基酸。非天然存在的氨基酸是这样的氨基酸，其通常在活生物体中的正常代谢过程中未合成，并且在蛋白质中未天然存在。另外，非天然存在的氨基酸不由常见蛋白酶识别。
[0092] 非天然存在的氨基酸可存在于肽中的任何位置处。例如，非天然存在的氨基酸可在N末端、C末端或N末端和C末端之间的任何位置处。非天然氨基酸可例如包含烷基、芳基或烷基芳基。烷基氨基酸的一些例子包括α-氨基丁酸、β-氨基丁酸、γ-氨基丁酸、δ-氨基戊酸和ε-氨基己酸。芳基氨基酸的一些例子包括邻、间和对氨基苯甲酸。烷基芳基氨基酸的一些例子包括邻、间和对氨基苯乙酸和γ-苯基-β-氨基丁酸。非天然存在的氨基酸还包括天然存在的氨基酸的衍生物。天然存在的氨基酸的衍生物可例如包括一个或多个化学基团对天然存在的氨基酸的添加。
[0093] 例如，一个或多个化学基团可加入苯丙氨酸或酪氨酸残基的芳环的2′、3′、4′、5′或6′位置或者色氨酸残基的苯并环的4′、5′、6′或7′位置中的一个或多个。基团可以是可加入芳环的任何化学基团。此类基团的一些例子包括分支或未分支的C1-C4烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基、C1-C4烷基氧基(即烷氧基)、氨基、C1-C4烷基氨基和C1-C4二烷基氨基(例如甲基氨基、二甲氨基)、硝基、羟基、卤素(即氟、氯、溴或碘)。天然存在的氨基酸的非天然存在的衍生物的一些具体例子包括正缬氨酸(Nva)、正亮氨酸(Nle)和羟脯氨酸(Hyp)。
[0094] 氨基酸修饰的另一个例子是肽的天冬氨酸或谷氨酸残基的羧基的衍生化。一个衍生化例子是由氨或者由伯胺或仲胺酰胺化，所述伯胺或仲胺例如甲胺、乙胺、二甲胺或二乙胺。另一个衍生化例子包括由例如甲醇或乙醇酯化。另一种此类修饰包括赖氨酸、精氨酸或组氨酸残基的氨基的衍生化。例如，此类氨基可以是酰化的。一些合适的酰基包括例如苯甲酰基或包含上文提及的C1-C4烷基中的任一个的烷酰基例如乙酰基或丙酰基。
[0095] 非天然存在的氨基酸适当地对常见蛋白酶是抗性的，并且在一些实施例中，对常见蛋白酶是不敏感的。对蛋白酶是抗性或不敏感的非天然存在的氨基酸的例子包括右旋(D-)形式的上述天然存在的L-氨基酸中的任一个，以及L-和/或D-非天然存在的氨基酸。D-氨基酸通常不存在于蛋白质中，尽管它们在某些肽抗生素中发现，所述肽抗生素由细胞的正常核糖体蛋白合成机制以外的方法合成。如本文使用的，D-氨基酸视为非天然存在的氨基酸。
[0096] 为了使蛋白酶敏感性降到最低，该肽可具有由常见蛋白酶识别的小于五个、小于四个、小于三个、小于两个连接L-氨基酸，与氨基酸是天然存在的还是非天然存在的无关。如果该肽含有蛋白酶敏感的氨基酸序列，则氨基酸中的至少一个可以是非天然存在的D-氨基酸，由此赋予蛋白酶抗性。蛋白酶敏感序列的例子包括由常见蛋白酶例如内肽酶和胰蛋白酶容易切割的两个或更多个连接的碱性氨基酸。碱性氨基酸的例子包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸。
[0097] 在合适的实施例中，与肽中的氨基酸残基总数目相比较，芳香族阳离子肽在生理pH下具有最小数目的净正电荷。在生理pH下的净正电荷的最小数目在下文将被称为(pm)。肽中的氨基酸残基总数目在下文将被称为(r)。下文讨论的净正电荷的最小数目均在生理pH下。如本文使用的术语“生理pH”指在哺乳动物机体的组织和器官的细胞中的正常pH。
例如，人的生理pH通常为大约7.4，但哺乳动物中的正常生理pH可以是约7.0-约7.8的任何pH。
例如，人的生理pH通常为大约7.4，但哺乳动物中的正常生理pH可以是约7.0-约7.8的任何pH。
[0098] 如本文使用的“净电荷”指由肽中存在的氨基酸携带的正电荷数目和负电荷数目的平衡。在本说明书中，应当理解净电荷在生理pH下测量。在生理pH下带正电的天然存在的氨基酸包括L-赖氨酸、L-精氨酸和L-组氨酸。在生理pH下带负电的天然存在的氨基酸包括L-天冬氨酸和L-谷氨酸。通常，肽具有带正电的N末端氨基和带负电的C末端羧基。电荷在生理pH下彼此抵消。
[0099] 在一个实施例中，芳香族阳离子肽具有的在生理pH下的净正电荷的最小数目(pm)和氨基酸残基的总数目(r)之间的关系为：其中3pm是小于或等于r+1的最大数。在该实施例中，净正电荷的最小数目(pm)和氨基酸残基总数目(r)之间的关系如下：
[0100] 表1.氨基酸数目和净正电荷(3pm≤p+1)
[0101](r) 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
(pm) 1 1 2 2 2 3 3 3 4 4 4 5 5 5 6 6 6 7
(pm) 1 1 2 2 2 3 3 3 4 4 4 5 5 5 6 6 6 7
[0102] 在另一个实施例中，芳香族阳离子肽具有的在净正电荷的最小数目(pm)和氨基酸残基的总数目(r)之间的关系为：其中2pm是小于或等于r+1的最大数。在该实施例中，净正电荷的最小数目(pm)和氨基酸残基总数目(r)之间的关系如下：
[0103] 表2.氨基酸数目和净正电荷(2pm≤p+1)
[0104](r) 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
(pm) 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 7 7 8 8 9 9 10 10
(pm) 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 7 7 8 8 9 9 10 10
[0105] 在一个实施例中，净正电荷的最小数目(pm)和氨基酸残基的总数目(r)相等。在另一个实施例中，该肽具有三个或四个氨基酸残基和最少一个净正电荷、优选地最少二个净正电荷和更优选地最少三个净正电荷。在合适的实施例中，芳香族阳离子肽具有与净正电荷的总数目(pt)相比较最小数目的芳香族基团。芳香族基团的最小数目在下文将被称为(a)。
[0106] 具有芳香族基团的天然存在的氨基酸包括氨基酸组氨酸、色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。例如，六肽Lys-Gln-Tyr-D-Arg-Phe-Trp具有净正电荷二(由赖氨酸残基和精氨酸残基贡献)以及三个芳香族基团(由酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基贡献)。
[0107] 在一个实施例中，芳香族阳离子肽具有的在芳香族基团的最小数目(a)和在生理pH下的净正电荷的总数目(pt)之间的关系为：其中3a是小于或等于pt+1的最大数，除了当pt是1时，a也可以是1之外。在该实施例中，芳香族基团的最小数目(a)和净正电荷的总数目(pt)之间的关系如下：
[0108] 表3.芳香族基团和净正电荷(3a≤pt+1或a＝pt＝1)
[0109](pt) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
(a) 1 1 1 1 2 2 2 3 3 3 4 4 4 5 5 5 6 6 6 7
(a) 1 1 1 1 2 2 2 3 3 3 4 4 4 5 5 5 6 6 6 7
[0110] 在另一个实施例中，芳香族阳离子肽具有的在芳香族基团的最小数目(a)和净正电荷的总数目(pt)之间的关系为：其中2a是小于或等于pt+1的最大数。在该实施例中，芳香族氨基酸残基的最小数目(a)和净正电荷的总数目(pt)之间的关系如下：
[0111] 表4.芳香族基团和净正电荷(2a≤pt+1或a＝pt＝1)
[0112](pt) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
(a) 1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 7 7 8 8 9 9 10 10
(a) 1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 7 7 8 8 9 9 10 10
[0113] 在另一个实施例中，芳香族基团的数目(a)和净正电荷的总数目(pt)相等。
[0114] 羧基且尤其是C末端氨基酸的末端羧基可由例如氨酰胺化，以形成C末端酰胺。作为另外一种选择，C末端氨基酸的末端羧基可由任一伯胺或仲胺酰胺化。所述伯胺或仲胺可以例如是烷基，尤其是分支的或无分支的C1-C4烷基或者芳基胺。相应地，在肽的C末端处的氨基酸可转化为酰胺基、N-甲基酰胺基、N-乙基酰胺基、N,N-二甲基酰胺基、N,N-二乙基酰胺基、N-甲基-N-乙基酰胺基、N-苯基酰胺基或N-苯基-N-乙基酰胺基。
[0115] 未存在于本技术的芳香族阳离子肽的C末端处的天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸和谷氨酸残基的游离羧酸酯基团也可被酰胺化，不论它们是否存在于肽内。在这些内部位置处的酰胺化可以是由氨或者上述伯胺或仲胺中的任一个。
[0116] 在一个实施例中，芳香族阳离子肽是具有两个净正电荷和至少一个芳香族氨基酸的三肽。在特定实施例中，芳香族阳离子肽是具有两个净正电荷和两个芳香族氨基酸的三肽。
[0117] 芳香族阳离子肽包括但不限于下述示出肽：
[0118] Lys-D-Arg-Tyr-NH2
[0119] Phe-D-Arg-His
[0120] D-Tyr-Trp-Lys-NH2
[0121] Trp-D-Lys-Tyr-Arg-NH2
[0122] Tyr-His-D-Gly-Met
[0123] Phe-Arg-D-His-Asp
[0124] Tyr-D-Arg-Phe-Lys-Glu-NH2
[0125] Met-Tyr-D-Lys-Phe-Arg
[0126] D-His-Glu-Lys-Tyr-D-Phe-Arg
[0127] Lys-D-Gln-Tyr-Arg-D-Phe-Trp-NH2
[0128] Phe-D-Arg-Lys-Trp-Tyr-D-Arg-His
[0129] Gly-D-Phe-Lys-Tyr-His-D-Arg-Tyr-NH2
[0130] Val-D-Lys-His-Tyr-D-Phe-Ser-Tyr-Arg-NH2
[0131] Trp-Lys-Phe-D-Asp-Arg-Tyr-D-His-Lys
[0132] Lys-Trp-D-Tyr-Arg-Asn-Phe-Tyr-D-His-NH2
[0133] Thr-Gly-Tyr-Arg-D-His-Phe-Trp-D-His-Lys
[0134] Asp-D-Trp-Lys-Tyr-D-His-Phe-Arg-D-Gly-Lys-NH2
[0135] D-His-Lys-Tyr-D-Phe-Glu-D-Asp-D-His-D-Lys-Arg-Trp-NH2
[0136] Ala-D-Phe-D-Arg-Tyr-Lys-D-Trp-His-D-Tyr-Gly-Phe
[0137] Tyr-D-His-Phe-D-Arg-Asp-Lys-D-Arg-His-Trp-D-His-Phe
[0138] Phe-Phe-D-Tyr-Arg-Glu-Asp-D-Lys-Arg-D-Arg-His-Phe-NH2
[0139] Phe-Try-Lys-D-Arg-Trp-His-D-Lys-D-Lys-Glu-Arg-D-Tyr-Thr
[0140] Tyr-Asp-D-Lys-Tyr-Phe-D-Lys-D-Arg-Phe-Pro-D-Tyr-His-Lys
[0141] Glu-Arg-D-Lys-Tyr-D-Val-Phe-D-His-Trp-Arg-D-Gly-Tyr-Arg-D-Met-NH2[0142] Arg-D-Leu-D-Tyr-Phe-Lys-Glu-D-Lys-Arg-D-Trp-Lys-D-Phe-Tyr-D-Arg-Gly[0143] D-Glu-Asp-Lys-D-Arg-D-His-Phe-Phe-D-Val-Tyr-Arg-Tyr-D-Tyr-Arg-His-Phe-NH2
[0144] Asp-Arg-D-Phe-Cys-Phe-D-Arg-D-Lys-Tyr-Arg-D-Tyr-Trp-D-His-Tyr-D-Phe-Lys-Phe
[0145] His-Tyr-D-Arg-Trp-Lys-Phe-D-Asp-Ala-Arg-Cys-D-Tyr-His-Phe-D-Lys-Tyr-His-Ser-NH2
[0146] Gly-Ala-Lys-Phe-D-Lys-Glu-Arg-Tyr-His-D-Arg-D-Arg-Asp-Tyr-Trp-D-His-Trp-His-D-Lys-Asp
[0147] Thr-Tyr-Arg-D-Lys-Trp-Tyr-Glu-Asp-D-Lys-D-Arg-His-Phe-D-Tyr-Gly-Val-Ile-D-His-Arg-Tyr-Lys-NH2
[0148] 在一些实施例中，肽是具有酪氨酸残基或酪氨酸衍生物的肽。酪氨酸的适当衍生物包括2′-甲基酪氨酸(Mmt)；2′,6′-二甲基酪氨酸(2′6′Dmt)；3′,5′-二甲基酪氨酸(3′5′Dmt)；N,2′,6′-三甲基酪氨酸(Tmt)；和2′-羟基-6′-甲基酪氨酸(Hmt)。
[0149] 在一个实施例中，该肽具有式Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2。Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2具有由氨基酸酪氨酸、精氨酸和赖氨酸贡献的净正电荷三，并且具有由氨基酸苯丙氨酸和酪氨酸贡献的两个芳香族基团。Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2的酪氨酸可以是经修饰的酪氨酸衍生物例如2′,6′-二甲基酪氨酸，以产生具有式2′,6′-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2的化合物。
[0150] 在合适的实施例中，在N末端处的氨基酸残基是精氨酸。此类肽的例子是D-Arg-2′6′Dmt-Lys-Phe-NH2。在另一个实施例中，在N末端处的氨基酸是苯丙氨酸或其衍生物。苯丙氨酸的衍生物包括2′-甲基苯丙氨酸(Mmp)、2′,6′-二甲基苯丙氨酸(Dmp)、N,2′,6′-三甲基苯丙氨酸(Tmp)和2′-羟基-6′-甲基苯丙氨酸(Hmp)。此类肽的例子是Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2。在一个实施例中，2′,6′-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2的氨基酸序列重排，使得Dmt不在N末端处。此类芳香族阳离子肽的例子具有式D-Arg-2′6′Dmt-Lys-Phe-NH2。
[0151] 在另外一个实施例中，芳香族阳离子肽具有式Phe-D-Arg-Dmt-Lys-NH2。作为另外一种选择，N末端苯丙氨酸可以是苯丙氨酸的衍生物，例如2′,6′-二甲基苯丙氨酸(2′6′Dmp)。含有在氨基酸位置一处的2′,6′-二甲基苯丙氨酸的Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2具有式2′,6′-Dmp-D-Arg-Dmt-Lys-NH2。
[0152] 适当的肽置换变体包括保守氨基酸置换。氨基酸可根据其物理化学特征如下分组：
[0153] (a)非极性氨基酸：Ala(A)Ser(S)Thr(T)Pro(P)Gly(G)Cys(C)；
[0154] (b)酸性氨基酸：Asn(N)Asp(D)Glu(E)Gln(Q)；
[0155] (c)碱性氨基酸：His(H)Arg(R)Lys(K)；
[0156] (d)疏水氨基酸：Met(M)Leu(L)Ile(I)Val(V)；和
[0157] (e)芳香族氨基酸：Phe(F)Tyr(Y)Trp(W)His(H)。
[0158] 肽中的氨基酸由相同组的另一种氨基酸的置换被称为保守置换，并且可保存原始肽的物理化学特征。相比之下，肽中的氨基酸由不同组的另一种氨基酸的置换一般更可能改变原始肽的特征。肽的例子包括但不限于表5中所示的芳香族阳离子肽。
[0159] 表5.芳香族阳离子肽的例子
[0160]
[0161]
[0162] Cha＝环己基丙氨酸
[0163] 在某些情况下，使用还具有阿片样物质受体激动剂活性的肽可以是有利的。μ阿片样物质类似物的例子包括但不限于表6中所示的芳香族阳离子肽。
[0164] 表6.具有阿片样物质受体激动剂活性的芳香族阳离子肽
[0165]
[0166]
[0167]
[0168]
[0169]
[0170] Dab＝二氨基丁酸
[0171] Dap＝二氨基丙酸
[0172] Dmt＝二甲基酪氨酸
[0173] Mmt＝2'-甲基酪氨酸
[0174] Tmt＝N,2',6'-三甲基酪氨酸
[0175] Hmt＝2'-羟基,6'-甲基酪氨酸
[0176] dnsDap＝β-丹磺酰-L-α,β-二氨基丙酸
[0177] atnDap＝β-氨茴酰-L-α,β-二氨基丙酸
[0178] Bio＝生物素
[0179] 表5和6中所示的肽的氨基酸可以为L-或D-构型。
[0180] 肽的合成
[0181] 可通过本领域众所周知的方法的任一种化学合成在本技术的方法中有用的肽。用于合成蛋白质的合适方法包括例如由Stuart和Young在“Solid Phase Peptide Synthesis,”第二版，Pierce Chemical Company(1984)中和在“Solid Phase Peptide Synthesis,”Methods Enzymol.,289,Academic Press,Inc,New York(1997)中描述的方法。
[0182] 神经病和痛觉过敏
[0183] 本文描述的芳香族阳离子肽可用于治疗或预防神经病或痛觉过敏。在一些实施例中，芳香族阳离子肽可在神经病或痛觉过敏发作后施用于受试者。因此，术语“治疗”在本文中以其最广泛含义使用，并且指芳香族阳离子肽用于部分或完全治愈神经病或痛觉过敏、降低或改善体征或症状和/或降低体征或症状的严重性的用途。
[0184] 在其他实施例中，本技术的芳香族阳离子肽可在神经病或痛觉过敏发作前施用于受试者，以便预防神经病或痛觉过敏，使免于神经病或痛觉过敏和/或提供神经病或痛觉过敏的预防。还考虑化合物可施用于处于发展神经病或痛觉过敏的危险中的受试者。
[0185] 术语“周围神经病”一般指对周围神经系统系统的神经的损害。该术语包含各种病因学的神经病，包括但不限于获得性神经病、遗传性神经病和特发性神经病。举例说明性获得性神经病包括但不限于例如通过下述引起、起因于下述或在其他方面与下述相关的神经病：创伤、代谢/内分泌障碍(例如糖尿病)、炎性疾病、传染病、维生素缺乏症、恶性病和毒性，例如酒精毒性、有机金属毒性、重金属毒性、放射毒性和药物毒性。如本文使用的，“周围神经病”包含运动神经病、感觉神经病、混合性感觉运动神经病、慢性神经病和急性神经病。如本文使用的，该术语包含单神经病、多重单神经病和多神经病。
[0186] 举例说明性神经病原因包括但不限于通过下述引起、起因于下述或与下述相关的神经病：糖尿病、化学疗法、创伤、营养不良、酒精中毒、自身免疫疾病、癌症、传染病、肾疾病、肝疾病、HIV、AIDS、甲状腺功能减退、遗传性障碍和对毒素的暴露。
[0187] 药物毒性引起多重形式的周围神经病，其中最常见的是轴突变性。值得注意的例外是哌克昔林的药物毒性，所述哌克昔林是可引起节段性脱髓鞘的预防性抗心绞痛药，所述节段性脱髓鞘是在一些神经周围的绝缘层的局限性变性。
[0189] 药物诱导的周围神经病包括例如化学疗法诱导的周围神经病可引起各种剂量限制性神经病病症，包括1)肌痛，2)疼痛的燃烧的感觉异常，3)手套和袜套式感觉神经病，以及4)痛觉过敏和异常性疼痛。痛觉过敏指通过通常仅是轻度疼痛或刺激性的刺激引起的超敏反应和疼痛。异常性疼痛指通过通常不是疼痛或刺激性的刺激引起的超敏反应和疼痛。
[0190] 术语“痛觉过敏”指增加的对疼痛的敏感性，其可通过对伤害性感受器或周围神经(即神经病)的损害引起。该术语指瞬时性痛觉过敏和永久性痛觉过敏，并且包含原发性痛觉过敏(即在受损组织中直接发生的疼痛敏感性)和继发性痛觉过敏(即在受损组织周围的未受损组织中发生的疼痛敏感性)两者。该术语包含通过周围神经病引起的痛觉过敏，所述周围神经病包括但不限于通过下述引起、起因于下述或与下述相关的神经病：遗传障碍、代谢/内分泌并发症、炎性疾病、维生素缺乏症、恶性病和毒性，例如酒精毒性、有机金属毒性、重金属毒性、放射毒性和药物毒性。在一些实施例中，痛觉过敏通过药物诱导的周围神经病引起。
[0191] 在一些实施例中，本公开内容提供了用于治疗或预防痛觉过敏的组合物。在一些实施例中，痛觉过敏是药物诱导的。在一些实施例中，痛觉过敏通过化学治疗剂诱导。在一些实施例中，化学治疗剂是长春花生物碱。在一些实施例中，长春花生物碱是长春新碱。
[0193] 已知引起神经病的举例说明性抗微生物剂包括但不限于例如异烟肼、乙胺丁醇、乙硫异烟胺、呋喃妥因、甲硝唑、环丙沙星、氯霉素、甲砜霉素、二胺、粘杆菌素、链霉素、萘啶酸、氯碘羟喹、磺胺类药物、两性霉素、青霉素。
[0194] 已知引起神经病的举例说明性抗肿瘤药包括但不限于例如丙卡巴肼、呋喃西林、鬼臼、氮芥、依托格鲁、顺铂、舒拉明、紫杉醇、苯丁酸氮芥、六甲蜜胺、卡铂、阿糖胞苷、多西紫杉醇、达卡巴嗪、依托泊苷、异环磷酰胺与美司钠、氟达拉滨、他莫昔芬、替尼泊苷和硫鸟嘌呤。长春花生物碱例如长春新碱已知是特别神经毒的。
[0195] 已知引起神经病的举例说明性心血管药物包括但不限于例如普萘洛尔、哌克昔林、肼屈嗪、胺碘酮、丙吡胺和氯贝丁酯。
[0196] 已知引起神经病的举例说明性安眠药和精神药物包括但不限于例如苯乙肼、沙利度胺、安眠酮、格鲁米特、阿米替林和丙咪嗪。
[0197] 已知引起神经病的举例说明性抗风湿药包括但不限于例如金、吲哚美辛、秋水仙碱、氯喹和保泰松。
[0198] 已知引起神经病的举例说明性抗惊厥药包括但不限于例如苯妥英。
[0199] 已知引起神经病的其他药物包括但不限于例如氰胺钙、阿地砜、麦角胺、丙硫氧嘧啶、舒噻嗪(sulthaime)、氯磺丙脲、美西麦角、苯妥英、双硫仑、磺胺丁脲、甲苯磺丁脲、甲巯咪唑、氨苯砜和抗凝血药。
[0200] 预防和治疗方法
[0201] 一般的。本文描述的芳香族阳离子肽可用于预防、改善或治疗疾病。具体地，本公开内容提供了用于治疗或预防神经病或痛觉过敏的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用有效量的芳香族阳离子肽。在一些实施例中，该肽是D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2。在一些实施例中，神经病或痛觉过敏是药物诱导的。在一些实施例中，药物诱导的神经病或痛觉过敏通过施用化学治疗剂引起。在一些实施例中，化学治疗剂是长春花生物碱。在一些实施例中，长春花生物碱是长春新碱。
[0202] 测定基于芳香族阳离子肽的治疗剂的生物效应。在多个实施例中，进行合适的体外测定或体内测定，来测定特定的基于芳香族阳离子肽的治疗剂的效应以及其施用是否适应于治疗神经病或痛觉过敏。在多个实施例中，可对涉及受试者障碍的代表性细胞类型进行体外测定，以测定给定的基于芳香族阳离子肽的治疗剂是否对细胞类型发挥所需效应。在人受试者中的测试之前，可在合适的动物模型系统中测试用于治疗的化合物，所述动物模型系统包括但不限于大鼠、小鼠、鸡、牛、猴、兔等等。类似地，对于体内测试，在施用于人受试者之前，可使用本领域已知的动物模型系统中的任一种。例如通过测量动物受试者对疼痛刺激的敏感性，例如通过下文实例1和2中概述的方法，可容易地检测与神经病或痛觉过敏相关的病症，以及芳香族阳离子肽在预防或治疗此类病症中的功效。
[0203] 预防方法。在一个方面，本技术提供了用于预防受试者中的神经病或痛觉过敏，或者与神经病或痛觉过敏相关的症状的方法，所述方法包括给受试者施用有效量的芳香族阳离子肽，例如D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2。在一些实施例中，该肽与一种或多种治疗药物同时施用，以便治疗或预防药物诱导的神经病或痛觉过敏。在一些实施例中，该肽在一种或多种治疗药物前施用，以便治疗或预防药物诱导的神经病或痛觉过敏。在一些实施例中，该肽在一种或多种治疗药物前和/或与一种或多种治疗药物同时施用，以便治疗或预防药物诱导的神经病或痛觉过敏。在一些实施例中，该肽与药物同时和/或在药物后施用，以便治疗或预防神经病或痛觉过敏。在一些实施例中，该肽在一种或多种治疗剂施用后，但在神经病或痛觉过敏或者神经病或痛觉过敏症状发作前施用。
[0204] 处于药物诱导的神经病或痛觉过敏的危险中的受试者可通过本领域已知的各种诊断或预防方法进行鉴定。例如，具有药物诱导的神经病或痛觉过敏病史，或者神经病或痛觉过敏家族史的受试者可评价为处于发展神经病或痛觉过敏的危险中。另外或可替代地，施用多重治疗剂或者施用一种或多种治疗剂延长时间段的受试者可评价为处于发展神经病或痛觉过敏的危险中。
[0205] 治疗方法。该技术的另一个方面包括为了治疗目的降低受试者中与神经病或痛觉过敏相关的症状的方法。在治疗应用中，将组合物或药剂施用于疑似患有此类疾病或已患有此类疾病的受试者，其量足以治愈或至少部分地阻止该疾病的症状，包括其并发症和在该疾病发展过程中的中间病理表型。像这样，本技术提供了治疗患有神经病或痛觉过敏或者与神经病或痛觉过敏相关的症状的个体的方法。
[0206] 在一个实施例中，芳香族阳离子肽例如D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2对显示出一种或多种神经病或痛觉过敏症状的受试者的施用将引起这些医学病症中的一种或多种中的改善。例如，与如在芳香族阳离子肽施用前评价的症状相比较，受试者可显示出神经病或痛觉过敏的临床症状中的至少约5％、至少约10％、至少约
20％、或至少约50％改善。在一些实施例中，受试者可显示出神经病或痛觉过敏症状的持续时间中的至少约5％、至少约10％、至少约20％、或至少约50％降低。在一些实施例中，受试者可显示出神经病或痛觉过敏症状的频率中的至少约5％、至少约10％、至少约20％、或至少约50％降低。在一些实施例中，受试者可显示出神经病或痛觉过敏症状的严重性中的至少约5％、至少约10％、至少约20％、或至少约50％降低。在一些实施例中，受试者可显示在神经病或痛觉过敏症状的持续时间、频率或严重性中的一种或多种中的改善。
20％、或至少约50％改善。在一些实施例中，受试者可显示出神经病或痛觉过敏症状的持续时间中的至少约5％、至少约10％、至少约20％、或至少约50％降低。在一些实施例中，受试者可显示出神经病或痛觉过敏症状的频率中的至少约5％、至少约10％、至少约20％、或至少约50％降低。在一些实施例中，受试者可显示出神经病或痛觉过敏症状的严重性中的至少约5％、至少约10％、至少约20％、或至少约50％降低。在一些实施例中，受试者可显示在神经病或痛觉过敏症状的持续时间、频率或严重性中的一种或多种中的改善。
[0207] 组合疗法
[0208] 本公开内容考虑了包含芳香族阳离子肽例如D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2与一种或多种另外的治疗方案的施用的组合疗法。在一些实施例中，另外的治疗方案涉及神经病或痛觉过敏或者与神经病或痛觉过敏相关的症状的治疗或预防。在一些实施例中，另外的治疗方案涉及与神经病或痛觉过敏无关的疾病或医学病症的治疗或预防。在一些实施例中，另外的治疗方案包括涉及神经病或痛觉过敏或者与神经病或痛觉过敏相关的症状，加上与神经病或痛觉过敏或者与神经病或痛觉过敏相关的症状无关的疾病、医学病症或症状的治疗或预防的方案。在一些实施例中，另外的治疗方案包括一种或多种药物的施用，所述药物包括但不限于抗微生物剂、抗肿瘤药、心血管药物、安眠药和精神药物、抗风湿药和抗惊厥药。在实施例中，另外的治疗方案包括非药剂疗法，包括但不限于饮食和生活方式管理。
[0209] 施用模式和有效剂量
[0210] 可采用本领域的技术人员已知的用于使细胞、器官或组织与肽接触的任何方法。合适方法包括体外、离体或体内方法。体内方法通常包括将芳香族阳离子肽(例如上文描述的芳香族阳离子肽)施用于哺乳动物例如人。当在体内用于治疗时，本技术的芳香族阳离子肽可以有效量(即具有所需疗效的量)施用于受试者。它们通常静脉内、经口、皮下、经皮、腹膜内、鞘内、肌内、鼻内、经颊、舌下、经舌或局部施用。剂量和给药方案将取决于神经病的严重性、所使用的特定的芳香族阳离子肽的特征(例如其治疗指数)、受试者以及受试者的病史。
[0211] 可在临床前试验和临床试验过程中通过医生和临床医生熟悉的方法来测定有效量。例如在药物组合物中的肽的有效量可通过用于施用药物化合物的多种众所周知方法中的任一种施用于有此需要的哺乳动物。肽可全身或局部施用。
[0212] 该肽可配制成药学可接受的盐。术语“药学可接受的盐”意指由对于施用于患者例如哺乳动物可接受的碱或酸制备成的盐(例如对于给定的给药方案，具有可接受的哺乳动物安全性的盐)。然而，应当理解，所述盐无需是药学可接受的盐，例如不预期施用于患者的中间化合物的盐。药学可接受的盐可源自药学可接受的无机碱或有机碱以及药学可接受的无机酸或有机酸。另外，当肽包含碱性部分(例如胺、吡啶或咪唑)和酸性部分(例如羧酸或四唑)两者时，可形成两性离子，且包括在如本文使用的术语“盐”中。源自药学可接受的无机碱的盐包括铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐和锌盐等等。源自药学可接受的有机碱的盐包括伯胺盐、仲胺盐和叔胺盐，包括取代胺盐、环胺盐、天然存在的胺盐等等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N’-二苄乙烯二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、葡萄糖胺、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、葡甲胺、吗啉、哌嗪、哌啶(piperadine)、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等等。源自药学可接受的无机酸的盐包括硼酸盐、碳酸盐、氢卤酸(氢溴酸、盐酸、氢氟酸或氢碘酸)盐、硝酸盐、磷酸盐、氨基磺酸盐和硫酸盐。源自药学可接受的有机酸的盐包括脂肪族羟基酸(例如柠檬酸、葡糖酸、乙醇酸、乳酸、乳糖酸、苹果酸和酒石酸)盐、脂肪族单羧酸(例如乙酸、丁酸、甲酸、丙酸和三氟乙酸)盐、氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)盐、芳香族羧酸(例如苯甲酸、对氯苯甲酸、二苯乙酸、龙胆酸、马尿酸和三苯基乙酸)盐、芳香族羟基酸(例如邻羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、1-羟基萘-2-羧酸和3-羟基萘-2-羧酸)盐、抗坏血酸盐、二羧酸(例如富马酸、马来酸、草酸和琥珀酸)盐、葡糖醛酸盐、扁桃酸盐、粘酸盐、烟酸盐、乳清酸盐、扑酸盐、泛酸盐、磺酸(例如苯磺酸、樟脑磺酸、乙二磺酸(edisylic)、乙磺酸、羟乙磺酸、甲磺酸、萘磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2,6-二磺酸和对甲苯磺酸)盐、辛那酸盐(xinafoic acid)、乙酸盐或三氟乙酸盐等等。
[0213] 本文描述的芳香族阳离子肽可掺入药物组合物内用于单独或组合施用于受试者，以治疗或预防本文描述的障碍或医学病症。此类组合物通常包括活性剂和药学可接受的载体。如本文使用的，术语“药学可接受的载体”包括与药物施用相容的盐水、溶剂、分散介质、涂层、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。补充性活性化合物也可掺入组合物内。
[0214] 通常将药物组合物配制成与其预期施用途径相容。施用途径的例子包括肠胃外(例如，静脉内、皮内、腹膜内或皮下)、经口、吸入、经皮(局部)、经粘膜和经直肠施用。用于肠胃外、皮内或皮下应用的溶液或悬浮液可包括下述组分：无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、不挥发油、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张度的试剂，例如氯化钠或右旋糖。可用酸或碱例如盐酸或氢氧化钠来调节pH。肠胃外制剂可封装在玻璃或塑料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多剂量小瓶中。
[0215] 适合于注射用途的药物组合物可包括无菌水溶液(在水溶性的情况下)或者用于临时制备无菌注射液或分散体的分散体和无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括TM生理盐水、抑菌水、Cremophor EL (BASF,Parsippany,N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，用于肠胃外施用的组合物必须是无菌的，且应流动至存在容易注射性的程度。
它在制造和储存条件下应是稳定的，且必须针对微生物例如细菌和真菌的污染作用进行防腐。
它在制造和储存条件下应是稳定的，且必须针对微生物例如细菌和真菌的污染作用进行防腐。
[0216] 芳香族阳离子肽组合物可包括载体，该载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如，丙三醇、丙二醇和液态聚乙二醇等等)及其合适混合物的溶剂或分散介质。可通过例如下述来保持适当的流动性：使用涂层例如卵磷脂，在分散体的情况下维持所需粒子大小，和使用表面活性剂。可通过多种抗菌剂和抗真菌剂来实现微生物作用的预防，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等等。在许多情况下，将期望在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇例如甘露醇、山梨糖醇或氯化钠。可通过在组合物中包括延迟吸收的试剂来造成可注射组合物的延长吸收，所述延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝或明胶。
[0217] 可通过将所需量的活性化合物掺入具有上文列举的成分之一或组合的适当溶剂中，根据需要随后过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。一般地，通过将活性化合物掺入无菌媒介物中来制备分散体，所述无菌媒介物含有基本分散介质和来自上文列举的那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，典型的制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，其可获得活性成分加上来自其先前灭菌过滤的溶液的任何另外所需成分的粉末。
[0218] 口服组合物一般包括惰性稀释剂或可食用载体。为了经口治疗施用的目的，活性化合物可与赋形剂一起掺入，并以片剂、锭剂或胶囊例如明胶胶囊的形式使用。还可使用流体载体制备口服组合物，以用作漱口剂。药学相容的粘合剂和/或辅助材料可被包括作为该组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等等可含有下述成分或具有相似性质的化合物中的任一种：粘合剂，例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解剂，例如海藻酸、羧甲淀粉钠(Primogel)或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，例如胶态二氧化硅；甜味剂，例如蔗糖或糖精；或调味剂，例如薄荷、水杨酸甲酯或橙调味料。
[0219] 如本文描述的治疗性化合物的全身施用还可通过经粘膜或经皮方法来进行。对于经粘膜或经皮施用，适合于待渗透的屏障的渗透剂用于配制中。此类渗透剂一般是本技术领域已知的，并且对于经粘膜施用，包括例如去污剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。可通过使用鼻腔喷雾或栓剂来完成经粘膜施用。对于经皮施用，将活性化合物配制成本领域一般已知的软膏、药膏、凝胶或乳膏。在一个实施例中，经皮施用可通过电离子透入来进行。
[0220] 可通过细胞培养或实验动物中的标准药学程序来测定治疗剂的剂量、毒性和治疗效果，例如，用于测定LD50(对50％群体致命的剂量)和ED50(在50％群体中治疗有效的剂量)。毒性和疗效之间的剂量比是治疗指数，并且它可表示为比率LD50/ED50。显示出高治疗指数的化合物是优选的。尽管可使用显示出毒性副作用的化合物，但应当小心设计递送系统，该递送系统将此类化合物靶向受累组织部位，以便使对其他细胞的潜在损伤降到最低，且由此降低副作用。
[0221] 得自细胞培养测定和动物研究的数据可用于配制在人中使用的剂量范围中。此类化合物的剂量优选位于包括具有很少毒性或无毒性的ED50的循环浓度的范围中。取决于采用的剂型和利用的施用途径，剂量可在该范围内变化。对于本技术的方法中使用的任何化合物，可最初由细胞培养测定来估计治疗有效剂量。可在动物模型中配制剂量来实现循环血浆浓度范围，其包括如在细胞培养中测定的IC50(即，实现症状的半数最大抑制的测试化合物浓度)。此类制剂可用于更准确地测定人中的有用剂量。可例如通过高效液相色谱法测量血浆水平。
[0222] 通常，足以实现治疗或预防效应的芳香族阳离子肽的有效量范围为约0.000001mg/千克体重/天至约10,000mg/千克体重/天。在一些实施例中，剂量范围为约
0.0001mg/千克体重/天至约100mg/千克体重/天。例如，剂量可以是每天、每两天或每三天1mg/kg体重或10mg/kg体重，或者在每周、每两周或每三周1-10mg/kg的范围内。在一个实施例中，肽的单次剂量范围为0.1-10,000毫克/kg体重。在一个实施例中，在载体中的芳香族阳离子肽浓度范围为0.2-2000毫克/每递送的毫升。示例性治疗方案需要每天一次或每周一次的施用。其后，可对患者施用预防方案。
0.0001mg/千克体重/天至约100mg/千克体重/天。例如，剂量可以是每天、每两天或每三天1mg/kg体重或10mg/kg体重，或者在每周、每两周或每三周1-10mg/kg的范围内。在一个实施例中，肽的单次剂量范围为0.1-10,000毫克/kg体重。在一个实施例中，在载体中的芳香族阳离子肽浓度范围为0.2-2000毫克/每递送的毫升。示例性治疗方案需要每天一次或每周一次的施用。其后，可对患者施用预防方案。
[0223] 在一些实施例中，芳香族阳离子肽的治疗有效量可限定为在靶标组织处10-11-10-6-7摩尔、例如大约10 摩尔的肽浓度。该浓度可通过0.01-100mg/kg的全身剂量或体表面积的等效剂量来递送。最佳化剂量的时间表，以维持在靶标组织处的治疗浓度，例如通过每天或每周单次施用，但也包括连续施用(例如，肠胃外输注或经皮应用)。
[0224] 在一些实施例中，芳香族阳离子肽的剂量以“低”、“中”或“高”剂量水平提供。在一个实施例中，低剂量提供约0.001-约0.5mg/kg/h、适当地0.01-约0.1mg/kg/h。在一个实施例中，中剂量提供约0.1-约1.0mg/kg/h、适当地约0.1-约0.5mg/kg/h。在一个实施例中，高剂量提供约0.5-约10mg/kg/h、适当地约0.5-约2mg/kg/h。
[0225] 本领域技术人员应当理解，某些因素可影响有效治疗受试者的剂量和时机，包括但不限于疾病或障碍的严重性、先前治疗、一般健康和/或受试者的年龄以及存在的其他疾病。此外，使用本文描述的治疗有效量的治疗组合物治疗受试者可包括单次治疗或一系列治疗。
[0226] 依照本技术治疗的哺乳动物可以是任何哺乳动物，包括例如农场动物，如绵羊、猪、牛和马；宠物动物，例如犬和猫；实验室动物，例如小鼠、大鼠和兔。在一些实施例中，哺乳动物是人。
[0227] 实例
[0228] 通过下述实例进一步举例说明本技术，所述实例不应解释为以任何方式限制本发明。
[0229] 实例1：D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2在预防和治疗大鼠中药物诱导的痛觉过敏中的用途
[0230] 该实例示出在预防和治疗痛觉过敏中的本技术的方法和组合物。该实例证实D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2在预防和治疗大鼠中长春新碱诱导的痛觉过敏中的用途。
[0231] 雌性Sprague Dawley大鼠根据表7随机分成5组(n＝10)。组2-4经由尾静脉施用静脉内(i.v.)注射的长春新碱0.10mg/kg，随后为0.1ml PBS媒介物的弹丸注射，每天一次，共14天。组1根据相同时间表施用单独的1ml/kgPBS媒介物。对于整个14天时期(组3)，或对于在第15天时开始的两周时期(组4)，在长春新碱施用前15分钟皮下(s.c.)施用D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH210mg/kg。组5经由尾静脉施用i.v.注射的长春新碱0.10mg/kg，随后为0.1ml PBS媒介物的弹丸注射，每天一次，共28天，以及s.c.施用的D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH210mg/kg，在第15天时开始的14天时期。
[0232]
[0233]
[0234] 使用电子Von Frey测试每两天测量缩爪反应的机械性伤害感受阈值。结果在图1和图2中显示为平均值±SEM。单向ANOVA伴随事后检验或t检验用于评价统计显著性，其中p<0.05视为统计上显著的。在图1中，在不存在同时的D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2的情况下接受长春新碱的受试者(组2、4、5)的数据共同显示为“组A”。
[0235] 结果-如图1中所示，与仅媒介物对照(组1)相比较，施用长春新碱14天时期的受试者(组A)显示在疼痛阈值中的减少。相比之下，施用D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2连同长春新碱的受试者(组3)的疼痛阈值与仅媒介物对照并无显著不同。这显示D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2连同长春新碱的共施用预防哺乳动物受试者中长春新碱诱导的痛觉过敏。
[0236] 如图2中所示，与仅媒介物对照(组1)相比较，施用长春新碱14天时期的受试者(组2、4)显示在疼痛阈值应答中的减少。在长春新碱撤药后，未施用D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2的受试者继续显示疼痛阈值中的下降，在第21天时达到最低点，并且显示在第22天时开始的中等改善(组2)。相比之下，在长春新碱撤药后施用D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2的受试者显示早在第15天时改善的疼痛阈值，其中改善继续通过第25天(组4)。这显示在长春新碱疗法后施用D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2改善哺乳动物受试者从长春新碱诱导的痛觉过敏的恢复速率。
[0237] 如图2中进一步显示的，在不存在D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2的情况下施用长春新碱共14天时期，并且随后施用长春新碱连同D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2共14天时期的受试者，显示在最初14天时期中明显的疼痛阈值中的向下趋势的停止，随后为在第16天时开始的疼痛阈值中的改善(组5)。这显示即使当受试者继续接受长春新碱时，在长春新碱诱导的痛觉过敏发展后施用D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2也有效停止该病症的进一步进展并促进该病症的改善。
[0238] 该实例显示本技术的芳香族阳离子肽例如D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2可用于预防和治疗长春新碱诱导的痛觉过敏。该结果还显示本技术的芳香族阳离子肽例如D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2可用于预防和治疗一般性药物诱导的痛觉过敏。
[0239] 实例2–D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2在治疗人中药物诱导的痛觉过敏中的用途
[0240] 该实例证实本技术的方法和组合物在治疗人受试者中的痛觉过敏中的用途。该实例证实D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2在治疗人中长春新碱诱导的痛觉过敏中的用途。
[0241] 当患者在临床上呈现慢性(>6个月的持续时间)、自发性、进行性、长春新碱相关疼痛时，将他们召募至该研究。加入的患者在视觉类比量表(VAS)上将其日最大量的疼痛水平评定为4或更大。患者就其加入研究的意愿进行筛选，并且获得知情同意书。还召募健康受试者用于收集比较数据。在患者或比较组中的受试者不具有关于周围神经病的任何其他原因的已知危险因素，包括糖尿病、AIDS、慢性酒精中毒或先前辐射暴露。
[0242] 在关于患者癌症和治疗史的集中面谈后，要求患者通过从理想类型单词叙述词列表中选择来描述感觉症状。进行性和日最大量疼痛强度在VAS上评定，其中在底部提示“无疼痛”和在顶部提示“最可想象的”。疼痛和感觉障碍的区域通过每个患者在标准化人体地图上进行描绘。类似于在用紫杉醇治疗的患者中的先前观察，具有长春新碱诱导的周围神经病的受试者预测为鉴定下述三个感觉区：
[0243] a)疼痛区域：进行中的疼痛区位于手指和/或脚趾尖端上。食指尖端预期在所有患者中牵涉并用作该区中的测试部位。
[0244] b)边缘区域：与疼痛区域相邻并接近，但不同于疼痛区域，由非疼痛的感觉障碍代表并位于手掌和/或足底中。鱼际隆起预期在所有患者中牵涉并用作该区中的测试部位。
[0245] c)非疼痛区域：与边缘区域相邻并接近，但不同于边缘区域，由患者报告为感觉“正常”。该部位预期始终与腕和/或踝接近。感觉测试在臂的掌侧表面上进行。
[0246] 食指尖端、鱼际隆起和掌侧前臂在正常受试者中进行测试用于比较。患者特别询问关于在这些区域中引发疼痛或引起进行性疼痛加剧的刺激，包括衣服、床上用品、沐浴和日常生活原因的正常活动的效应。每个区就任何身体变化进行检查，所述身体变化例如被记录的脱皮、杵状指和红斑。感觉障碍区域通过用驼毛刷轻触和通过徒手按摩进行身体探测，以筛选异常性疼痛或痛觉过敏的存在。
[0247] 触觉和锋利度检测阈值-触觉检测阈值用von Frey单丝使用如先前报告的上/下方法进行测定。以0.02g的弯曲力开始，每根单丝被施加于皮肤上直径小于2mm的点大约一秒。连续检测四次的细丝的力被指定为触觉检测阈值。锋利度检测使用加重的30号金属圆筒进行测定。简言之，锉削30号针(直径200mm)的尖端，以产生扁平的圆柱形端部，并且鲁尔接头(luer)被配合至对于每种刺激用所需力(100、200和400mN)水平校正的黄铜砝码。每根装载的针置于它在其中能够自由移动的分开的10cc注射器内。每种刺激对皮肤垂直施加一秒，在每个目的区域内以假随机次序10次。受试者指示刺激是察觉为触摸、压力、锋利还是其他。将计算每个回复的百分比并随后组合成组总平均值用于比较。50％锋利度检测阈值计算为在连续10次刺激后引起五次或更多次锋利应答的加重的针。
[0248] 凹槽拼板测试-手灵巧度用凹槽拼板测试进行评价。受试者得到指示以有序方式填充五×五狭槽拼板，并且记录惯用手和非惯用手两者的时间。
[0249] 热检测阈值-关于热疼痛的阈值使用Marstock技术进行测定。在测试开始时使用辐射计，以确定在所有测试部位处的基线皮肤温度。所有测试和测量均在室温22℃下进行。使用3.6x 3.6cm Peltier热电极从32℃的基线温度施加热升温。皮肤加热为0.30℃/秒的幅度(ramp)，并且皮肤冷却为-0.5℃/秒的幅度。受试者得到指示在刺激察觉为第一次变得更温暖并且随后热得发疼时发信号，或第一次变得更冷且随后冷得发疼时发信号。如果对于上升幅度在51.5℃的截断温度前或在冷却测试中保持10秒的3℃，受试者未能达到给定阈值，则对于未达到的任何值指定截断值。关于每个患者中的每种皮肤感觉的最终阈值通过三次加热和冷却试验的结果求平均值进行测定。
[0250] 统计分析-关于触觉检测的阈值使用非参数法(Wilcoxon检验)进行比较。锋利度检测、热阈值和凹槽拼板测试中的时间使用平均值的方差分析和事后比较伴随邓肯多重范围检验进行比较。对于测试皮肤的不同区域在健康受试者和患者之间进行机械阈值和热阈值的比较。在患者组内的光滑皮肤和掌侧皮肤之间进行进一步分析。对于在本研究中进行的每一次比较，p<0.05视为显著的。
[0251] 在上述标准的最初评价后，将受试者分成四组：
[0252] a)健康对照
[0253] b)无治疗
[0254] c)仅媒介物的安慰剂，s.c.施用，每天一次，共14天
[0255] d)以 1-100mg/kg(例 如 1mg/kg、5mg、kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg或100mg/kg)的D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2，s.c.施用，每天一次，共14天
[0256] 在14天治疗期后，使用如上所述的统计分析，受试者根据上述标准进行再评价。
[0257] 结果-与未施用治疗或施用仅媒介物的安慰剂的受试者相比较，预期施用D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2共14天时期的神经病受试者将报告痛觉过敏症状中的降低。痛觉过敏中的降低表现为与对照受试者相比较，关于触觉和锋利度检测阈值、凹槽拼板测试和热检测测试的改善评分。
[0258] 这些结果显示本技术的芳香族阳离子肽例如D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2可用于治疗长春新碱诱导的痛觉过敏和一般性药物诱导的痛觉过敏。结果显示本文描述的方法和组合物可用于治疗药物诱导的周围神经病或痛觉过敏。
[0259] 实例3–D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2在治疗人中的痛觉过敏中的用途
[0260] 该实例证实本技术的方法和组合物在治疗痛觉过敏中的用途。该实例证实D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2在治疗人中与各种病因学的周围神经病相关的痛觉过敏中的用途。
[0261] 当患者在临床上呈现慢性(>6个月的持续时间)、自发性、进行性、神经病相关疼痛时，将他们召募至该研究。独立研究将解决起因于下述、通过下述引起或在其他方面与下述相关的神经病：遗传障碍、代谢/内分泌并发症、炎性疾病、维生素缺乏症、恶性病和毒性，例如酒精毒性、有机金属毒性、重金属毒性、放射毒性和药物毒性。这样选择受试者，使得他们具有单一类型的神经病并且不具有在受试者加入其中的研究范围外的神经病类型的已知危险因素。加入的患者在视觉类比量表(VAS)上将其日最大量的疼痛水平评定为4或更大。受试者就其加入研究的意愿进行筛选，并且获得知情同意书。还召募健康受试者用于收集比较数据。
[0262] 在关于医疗史的集中面谈后，要求患者通过从理想类型单词叙述词列表中选择来描述感觉症状。进行性和日最大量疼痛强度在VAS上评定，其中在底部提示“无疼痛”和在顶部提示“最可想象的”。疼痛和感觉障碍的区域通过每个患者在标准化人体地图上进行描绘。神经病受试者预测为鉴定下述三个感觉区：
[0263] a)疼痛区域：进行中的疼痛区位于手指和/或脚趾尖端上。食指尖端预期在所有患者中牵涉并用作该区中的测试部位。
[0264] b)边缘区域：与疼痛区域相邻并接近，但不同于疼痛区域，由非疼痛的感觉障碍代表并位于手掌和/或足底中。鱼际隆起预期在所有患者中牵涉并用作该区中的测试部位。
[0265] c)非疼痛区域：与边缘区域相邻并接近，但不同于边缘区域，由患者报告为感觉“正常”。该部位预期始终与腕和/或踝接近。感觉测试在臂的掌侧表面上进行。
[0266] 食指尖端、鱼际隆起和掌侧前臂在正常受试者中进行测试用于比较。患者特别询问关于在这些区域中引发疼痛或引起进行性疼痛加剧的刺激，包括衣服、床上用品、沐浴和日常生活原因的正常活动的效应。每个区就任何身体变化进行检查，所述身体变化例如被记录的脱皮、杵状指和红斑。感觉障碍区域通过用驼毛刷轻触和通过徒手按摩进行身体探测，以筛选异常性疼痛或痛觉过敏的存在。
[0267] 触觉和锋利度检测阈值-触觉检测阈值用von Frey单丝使用如先前报告的上/下方法进行测定。以0.02g的弯曲力开始，每根单丝被施加于皮肤上直径小于2mm的点大约一秒。连续检测四次的细丝的力被指定为触觉检测阈值。锋利度检测使用加重的30号金属圆筒进行测定。简言之，锉削30号针(直径200mm)的尖端，以产生扁平的圆柱形端部，并且鲁尔接头被配合至对于每种刺激用所需力(100、200和400mN)水平校正的黄铜砝码。每根装载的针置于它在其中能够自由移动的分开的10cc注射器内。每种刺激对皮肤垂直施加一秒，在每个目的区域内以假随机次序10次。受试者指示刺激是察觉为触摸、压力、锋利还是其他。将计算每个回复的百分比并随后组合成组总平均值用于比较。50％锋利度检测阈值计算为在连续10次刺激后引起五次或更多次锋利应答的加重的针。
[0268] 凹槽拼板测试-手灵巧度用凹槽拼板测试进行评价。受试者得到指示以有序方式填充五×五狭槽拼板，并且记录惯用手和非惯用手两者的时间。
[0269] 热检测阈值-关于热疼痛的阈值使用Marstock技术进行测定。在测试开始时使用辐射计，以确定在所有测试部位处的基线皮肤温度。所有测试和测量均在室温22℃下进行。使用3.6x 3.6cm Peltier热电极从32℃的基线温度施加热升温。皮肤加热为0.30℃/秒的幅度，并且皮肤冷却为-0.5℃/秒的幅度。受试者得到指示在刺激察觉为第一次变得更温暖并且随后热得发疼时发信号，或第一次变得更冷且随后冷得发疼时发信号。如果对于上升幅度在51.5℃的截断温度前或在冷却测试中保持10秒的3℃，受试者未能达到给定阈值，则对于未达到的任何值指定截断值。关于每个患者中的每种皮肤感觉的最终阈值通过三次加热和冷却试验的结果求平均值进行测定。
[0270] 统计分析-关于触觉检测的阈值使用非参数法(Wilcoxon检验)进行比较。锋利度检测、热阈值和凹槽拼板测试中的时间使用平均值的方差分析和事后比较伴随邓肯多重范围检验进行比较。对于测试皮肤的不同区域在健康受试者和患者之间进行机械阈值和热阈值的比较。在患者组内的光滑皮肤和掌侧皮肤之间进行进一步分析。对于在本研究中进行的每一次比较，p<0.05视为显著的。
[0271] 在上述标准的最初评价后，将受试者分成四组：
[0272] a)健康对照
[0273] b)无治疗
[0274] c)仅媒介物的安慰剂，s.c.施用，每天一次，共14天
[0275] d)以 1-100mg/kg(例 如 1mg/kg、5mg、kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg或100mg/kg)的D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2，s.c.施用，每天一次，共14天
[0276] 在14天治疗期后，使用如上所述的统计分析，受试者根据上述标准进行再评价。
[0277] 结果-与施用仅媒介物的安慰剂的受试者相比较，预期施用D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2共14天时期的神经病受试者将报告痛觉过敏中的降低。痛觉过敏中的降低表现为与对照受试者相比较，关于触觉和锋利度检测阈值、凹槽拼板测试和热检测测试的改善评分。
[0278] 这些结果显示本技术的芳香族阳离子肽例如D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2可用于治疗一般的神经病相关的痛觉过敏。
[0279] 实例4–D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2在预防人中的痛觉过敏中的用途
[0280] 该实例证实本技术的方法和组合物在预防痛觉过敏中的用途。该实例证实D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2在预防人中与各种病因学的周围神经病相关的痛觉过敏中的用途。
[0281] 当受试者在临床上呈现用于治疗与周围神经病或痛觉过敏发展相关的病症时，召募处于发展痛觉过敏的危险中的受试者。独立研究将解决起因于下述、通过下述引起或在其他方面与下述相关的神经病和痛觉过敏：遗传障碍、代谢/内分泌并发症、炎性疾病、维生素缺乏症、恶性病和毒性，例如酒精毒性、有机金属毒性、重金属毒性、放射毒性和药物毒性。这样选择受试者，使得他们处于发展单一类型的神经病或痛觉过敏的危险中，不具有在受试者加入其中的研究范围外的危险因素，并且尚未具有与神经病或痛觉过敏相关的症状。受试者就其加入研究的意愿进行筛选，并且获得知情同意书。还召募健康受试者用于收集比较数据。
[0282] 在关于医疗史的集中面谈后，使用如上所述的统计分析，根据上文描述的方法，测定触觉和锋利度检测阈值、凹槽拼板测试和热检测阈值的基线测量。
[0283] 在上述标准的最初评价后，将受试者分成四组：
[0284] a)健康对照
[0285] b)无治疗
[0286] c)仅媒介物的安慰剂，s.c.施用，每天一次
[0287] d)以 1-100mg/kg(例 如 1mg/kg、5mg、kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg或100mg/kg)的D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2，s.c.施用，每天一次
[0288] 受试者在关于锋利度检测阈值、凹槽拼板测试和热检测阈值的试验期间每周评估一次。试验继续28天的时期，或直至无治疗和安慰剂对照组展示根据上述标准的痛觉过敏，在所述点时受试者经历最终评价。
[0289] 结果-与未经治疗的对照和安慰剂对照相比较，预期施用D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2的处于发展神经病或痛觉过敏的危险中的受试者显示减弱的神经病或痛觉过敏发展。
[0290] 这些结果显示本技术的芳香族阳离子肽例如D-Arg-2′6′-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2可用于预防一般的神经病和痛觉过敏。结果显示本文描述的方法和组合物可用于预防一般的神经病或痛觉过敏。
[0291] * * * *
[0292] 本技术并不限于在本申请中描述的特定实施例，所述特定实施例预期作为本技术的单个方面的单独举例说明。如对于本领域技术人员显而易见的，可作出本技术的多种修改和变化而不背离其精神和范围。根据上述说明书，除本文中列举的之外，在本技术范围内的功能上等价的方法和组合物对于本领域的技术人员将是显而易见的。此类修改和变化预期落入所附权利要求的范围内。本技术仅受所附权利要求书连同此类权利要求书赋予权力的等价物的全部范围限制。应当理解，本技术并不限于特定的方法、试剂、化合物、组合物和生物系统，当然，所述方法、试剂、组合物和生物系统可变化。还应理解，本文中使用的术语仅用于描述特定实例，并不预期是限制性的。
[0293] 另外，当本公开内容的特征或方面按照Markush组进行描述时，本领域技术人员将认识到本公开内容由此也按照Markush组的任何个别成员或成员亚组进行描述。
[0294] 如本领域的技术人员应当理解的，为了任何和所有目的，特别是在提供书面说明书方面，本文公开的所有范围还可涵盖任何和所有可能的子范围及其子范围的组合。任何列出的范围可容易地视为充分描述并使相同范围能够分解成至少相等的二分之一、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作为非限制性例子，本文讨论的每个范围可容易地分解成下三分之一、中三分之一和上三分之一等。如本领域技术人员还应理解的，所有的语言例如“上至”、“至少”、“大于“、”小于“等等包括所述数目，并且指随后可分解成如上文讨论的子范围的范围。最后，如本领域的技术人员应当理解的，范围包括每一个别成员。因此，例如，具有1-3个单元的组指具有1、2或3个单元的组。类似地，具有1-5个单元的组指具有1、2、3、4或5个单元的组等等。
[0296] 在下述权利要求中阐述了其他实施例。
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈