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β-酪蛋白和认知功能

阅读：706发布：2020-05-26

专利汇可以提供β-酪蛋白和认知功能专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且通过提供包含β- 酪蛋白的组合物改善认知功能，其中至少75％重量的β-酪蛋白为在动物的肠道中消化时不产生BCM-7的β-酪蛋白变体。，下面是β-酪蛋白和认知功能专利的具体信息内容。

权利要求

1.改善动物认知功能的方法，通过摄取包含β-酪蛋白的组合物或通过向动物提供包含β-酪蛋白的组合物来进行，其中至少75％重量的β-酪蛋白是在动物肠道中消化时不产生BCM-7的β-酪蛋白变体。
2.如权利要求1中所要求保护的方法，其中β-酪蛋白变体为A2β-酪蛋白、A3β-酪蛋白、Dβ-酪蛋白、Eβ-酪蛋白、H2β-酪蛋白或Iβ-酪蛋白。
3.如权利要求1或权利要求2中所要求保护的方法，其中β-酪蛋白变体为A2β-酪蛋白。
4.如权利要求1-3任一项中所要求保护的方法，其中β-酪蛋白包含至少90％重量的A2β-酪蛋白。
5.如权利要求1-4任一项中所要求保护的方法，其中β-酪蛋白包含100％A2β-酪蛋白。
6.如权利要求1-5任一项中所要求保护的方法，其中使用任意以下一种或多种来评估认知功能：微妙认知障碍测试(SCIT)、自动认知测试(ACT)、自动神经心理学评估指标(ANAM)、痴呆的认知药物研究计算机评估系统(COGDRAS-D)、社区痴呆筛查仪器(CSI-D)、轻度认知损害计算机管理神经心理学筛查(CANS-MCI)、轻度认知损害计算机评估(CAMCI)、计算机化自我测试(CST)、佛罗里达州简要记忆量表(FBMS)、轻度认知损害(MCI)、神经心理学测试组(NTB)、精神分裂症中认知的简要评估(BACS)、剑桥老年人精神障碍检查-修订(CAMDEX-R)、剑桥神经心理测试自动化组(CANTAB)、计算机化多相交互神经认知双显示系统(CMINDS)、计算机化神经心理学测试组(CNTB)、记忆能力测试(MCT)、神经心理学评估组(NAB)、阿尔茨海默病合作研究(ADCS)、执行、语言、空间和记忆能力组(ELSMEM)、简短精神状态检查(MMSE)和Hamilton D认知测试(HAM-D)。
7.如权利要求1-6任一项中所要求保护的方法，其中所述组合物是乳或乳制品。
8.如权利要求7中所要求保护的方法，其中所述乳是新鲜乳、乳粉、由粉末重构的液态乳、脱脂乳、均质乳、炼乳、淡炼乳、巴氏消毒乳或非巴氏消毒乳。
9.如权利要求7中所要求保护的方法，其中所述乳制品是奶油、酸乳酪、夸克、干酪、黄油或冰淇淋。
10.如权利要求1-9任一项中所要求保护的方法，其中所述动物是人。
11.用于改善动物认知功能的组合物，该组合物包含β-酪蛋白，其中至少75％重量的β-酪蛋白是在动物肠道中消化时不产生BCM-7的β-酪蛋白变体。
12.乳在制备用于改善动物认知功能的组合物中的用途，其中所述乳包含β-酪蛋白，且其中至少75％重量的β-酪蛋白是在动物肠道中消化时不产生BCM-7的β-酪蛋白变体。
13.预防或治疗动物认知损害的方法，包括由动物摄取包含β-酪蛋白的组合物或向动物提供包含β-酪蛋白的组合物，其中至少75％重量的β-酪蛋白是在动物肠道中消化时不产生BCM-7的β-酪蛋白变体。

说明书全文

β-酪蛋白和认知功能

技术领域

[0001] 本发明涉及乳蛋白β-酪蛋白和改善动物的认知功能。特别地，本发明涉及具有β-酪蛋白组分的乳和乳衍生的食品，其中β-酪蛋白组分主要是A2β-酪蛋白或相关的β-酪蛋白变体。申请人已经发现，消耗含有β-酪蛋白的A1变体的乳与认知处理速度和准确度的降低相关，而消耗仅含有β-酪蛋白的A2变体的乳与提高的处理速度和准确度相关。

[0002] 发明背景

[0003] 在世界各地的人群中消耗的乳、主要是牛乳是人类膳食中蛋白质的主要来源。牛乳典型地包含约30克/升蛋白质。酪蛋白占该蛋白质的最大成分(80％)，且β-酪蛋白占酪蛋白的约37％。在过去的二十年中，酪蛋白蛋白质、特别是β-酪蛋白牵连于许多不利的生理或生物作用和健康障碍中的证据一直在增长。

[0004] Β-酪蛋白可分为A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白。这两种蛋白质是大多数人群中消耗的牛乳中的主要β-酪蛋白。A1β-酪蛋白与A2β-酪蛋白的区别在于单个氨基酸。组氨酸氨基酸位于A1β-酪蛋白的209氨基酸序列的67位，而脯氨酸位于A2β-酪蛋白的相同位置。然而，这种单一氨基酸差异对肠道中β-酪蛋白的酶促消化至关重要。67位的组氨酸的存在允许在酶消化时产生包含7个氨基酸的蛋白质片段，称为β-酪啡肽(casomorphin)-7(BCM-7)。因此，BCM-7是A1β-酪蛋白的消化产物。在A2β-酪蛋白的情况下，67位被脯氨酸占据，这阻碍了该位置的氨基酸键的裂解。因此，BCM-7不是A2β-酪蛋白的消化产物。

[0005] 其它β-酪蛋白变体，例如B、C、F、G和H1变体，在67位也具有组氨酸，而除A2变体之外的变体，例如A3、D、E、H2和I变体，在67位上具有脯氨酸。但在来自欧洲来源的奶牛的乳中，这些变体仅以非常低水平被发现或完全未被发现。因此，在本发明的上下文中，术语A1β-酪蛋白可以指在67位具有组氨酸的任何β-酪蛋白，并且术语A2β-酪蛋白可以指在67位具有脯氨酸的任何β-酪蛋白。

[0006] BCM-7是一种阿片样肽，并且可以结合并激活全身的阿片受体。BCM-7具有穿过胃肠壁并进入循环的能力，使其能够通过阿片受体影响全身和细胞活动。申请人等在先已确定了在乳或乳制品中发现的A1β-酪蛋白的消耗与I型糖尿病1、冠心病2、神经性障碍3、肠炎症4、乳糖不耐症的症状5和血糖水平调节6之间的不良相关性。β-酪蛋白变体与这些疾病和障碍有关的越来越多的科学证据使得申请人研究了β-酪蛋白消耗的一系列生理和行为影响。

[0007] 据报道，消耗包含在67位具有组氨酸而不是脯氨酸的β-酪蛋白变体的乳会引起阿片样肽或外啡肽(exorphin)的释放，这可能会诱发或加重神经性障碍，如孤独症或阿斯佩7
格综合症(Asperger's Syndrome) 。这种阿片样物质已被鉴定为BCM-7。一些研究报道了酪蛋白与孤独癖谱群疾病之间的联系，包括尿肽和外啡肽分泌增加，以及孤独症个体中针对酪蛋白和BCM-7抗体的存在8-13。还报道了酪蛋白、特别是针对酪蛋白的抗体与精神分裂症之间的联系14-18。因为BCM-7与参与突触发生和中枢信号传导过程的阿片样物质和5-羟色胺受体相互作用，所以长期暴露于BCM-7可能对大脑发育和功能产生不良影响，从而导致神经系统疾病或病症的表现12。

[0008] 据报道，BCM-7显著减少了大鼠的正常行为，如站立(rearing)、行走和梳理，以及增强的异常活动，如爆发性运动行为、转圈和社交互动减少19。已经确定BCM-7的这些行为影响是由其与阿片样受体的相互作用引起的，因为特异性阿片样受体拮抗剂纳洛酮可以消除这种作用。BCM-7还在与精神分裂症相关的脑区诱导fos-样免疫反应性，尤其是前额叶皮层、伏核、终纹床核和尾壳核20。

[0009] BCM-7也可能影响其它神经活动，包括精神运动发育21。分别在母乳喂养和配方乳喂养的婴儿中，在出生后的前三个月内检测到人和牛BCM-7的免疫反应22。值得注意的是，升高的牛BCM-7免疫反应性与精神运动发育迟缓和异常高肌张力有关。

[0010] 这些报道的发现均与BCM-7或消化时产生BCM-7的β-酪蛋白变体对患有临床诊断的疾病或病症的个体的行为特征的影响有关。该发现与健康个体无关。此外，众所周知，基于细胞培养实验的研究结果不能可靠地推断为体内或临床作用，因为有许多与BCM-7产生、转运和代谢相关的变量影响组织暴露，并且因此影响生物反应。例如，已知阿片样物质的浓度及其对阿片样受体的亲和力对细胞应答是重要的。

[0011] 在正在进行的关于β-酪蛋白变体与人类生物反应之间联系的调查研究中，申请人现已发现A1β-酪蛋白(和产生BCM-7的其它β-酪蛋白变体)对健康人认知功能的两个特定方面或措施之间存在负面关联。心理学和相关学科领域的技术人员众所周知，行为不同于认知。行为被认为是环境刺激的结果，而认知则涉及影响人类如何感知、记忆和理解周围世界的信息处理。影响行为的因素通常不影响认知功能，他们预期也不会影响认知功能。申请人的研究代表了β-酪蛋白变体消耗与认知功能之间直接相关性的第一个确凿的科学证据。

[0012] 因此，本发明的一个目的是提供一种改善人和其它动物的认知功能的方法，或至少提供现有方法的有用替代方法。

[0013] 发明概述

[0014] 在本发明的第一方面，提供了通过摄取含有β-酪蛋白的组合物或通过向动物提供含有β-酪蛋白的组合物来改善动物认知功能的方法，其中至少75％重量的β-酪蛋白是一种β-酪蛋白变体，该变体在动物肠道中消化时不产生BCM-7。

[0015] 在本发明的某些实施方案中，β-酪蛋白变体是A2β-酪蛋白、A3β-酪蛋白、Dβ-酪蛋白、Eβ-酪蛋白、H2β-酪蛋白或Iβ-酪蛋白。在优选的实施方案中，β-酪蛋白变体是A2β-酪蛋白。A2β-酪蛋白的量可以为β-酪蛋白的75％-100％重量范围中的任意量，例如至少90％或甚至100％。

[0016] 在本发明的某些实施方案中，使用任意以下一种或多种评估改善的认知功能：微妙认知障碍测试(SCIT)、自动认知测试(ACT)、自动神经心理学评估指标(ANAM)、痴呆的认知药物研究计算机评估系统(COGDRAS-D)、社区痴呆筛查仪器(CSI-D)、轻度认知损害计算机管理神经心理学筛查(CANS-MCI)、轻度认知损害计算机评估(CAMCI)、计算机化自我测试(CST)、佛罗里达州简要记忆量表(FBMS)、轻度认知损害(MCI)、神经心理学测试组(NTB)、精神分裂症中认知的简要评估(BACS)、剑桥老年人精神障碍检查-修订(CAMDEX-R)、剑桥神经心理测试自动化组(CANTAB)、计算机化多相交互神经认知双显示系统(CMINDS)、计算机化神经心理学测试组(CNTB)、记忆能力测试(MCT)、神经心理学评估组(NAB)、阿尔茨海默病合作研究(ADCS)、执行、语言、空间和记忆能力组(ELSMEM)、简短精神状态检查(MMSE)和Hamilton D认知测试(HAM-D)。

[0017] 在本发明的某些实施方案中，组合物是乳或乳制品。乳可以是新鲜乳、乳粉、由粉末重构的液态乳、脱脂乳、均质乳、炼乳、淡炼乳、巴氏消毒乳或非巴氏消毒乳。乳制品可以是婴儿配方(infant formula)、奶油、酸乳酪(yoghurt)、夸克(quark/粗制脱脂酸奶酪)、干酪、黄油、冰淇淋或任何其它乳制品。

[0018] 在本发明的第二方面，提供了一种用于改善动物认知功能的组合物，该组合物含有β-酪蛋白，其中至少75％重量的β-酪蛋白是在动物肠道中消化时不产生BCM-7的β-酪蛋白变体。

[0019] 在本发明的另一个方面，提供了乳在制备用于改善动物认知功能的组合物中的用途，其中所述乳含有β-酪蛋白，且其中至少75％重量的β-酪蛋白是在动物肠道中消化时不产生BCM-7的β-酪蛋白变体。

[0020] 在本发明的另一方面，提供了预防或治疗动物认知损害的方法，包括由动物摄取含有β-酪蛋白的组合物或通过向动物提供含有β-酪蛋白的组合物，其中至少75％重量的β-酪蛋白是在动物肠道中消化时不产生BCM-7的β-酪蛋白变体。

[0021] 附图简述

[0022] 图1显示成人试验的阶段1喂养干预的SCIT响应时间。

[0023] 图2显示成人试验的阶段2喂养干预的SCIT响应时间。

[0024] 图3显示学龄前试验中阶段1喂养干预的SCIT错误率。

[0025] 图4显示学龄前试验中阶段2喂养干预的SCIT错误率。

[0026] 图5显示头部和尾部暴露持续时间的SCIT错误率。

[0027] 详细描述

[0028] 本发明涉及含有蛋白质β-酪蛋白的组合物及其用于改善动物、尤其是人类的认知功能的用途。重要的是，β-酪蛋白是β-酪蛋白的A2变体，或构成组合物中存在的总β-酪蛋白变体的至少75％重量。A2变体在组合物中占主导地位的重要性是由于申请人已经证明的事实：A1变体的消耗与人类认知功能降低之间存在直接联系，特别是微妙认知损害测试中的响应时间和错误率。另外，申请人已经表明，A2变体的消耗与改善的认知功能之间存在直接联系，而与避免消耗A1变体的效果无关。

[0029] 术语“认知功能”或“认知”旨在表示一组心理过程，包括注意力、记忆力、语言的产生和理解、学习、推理、解决问题和决策。

[0030] 术语“β-酪啡肽-7”或“BCM-7”是指蛋白质片段Tyr-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-Ile，即在酶消化在氨基酸序列的第67位上具有组氨酸而不是脯氨酸的牛β-酪蛋白变体时产生的七肽。

[0031] 由于大多数人群膳食中的β-酪蛋白的主要(如果不仅是)来源是乳或来源于乳的产品，并且由于消耗的大多数乳仅包含β-酪蛋白的A1和A2变体的混合物，因此消耗具有高含量A2变体的乳(或由这种乳制成的产品)必然意味着A1变体的消耗量低。因此，如果β-酪蛋白的唯一膳食来源包含A2变体而没有其它变体，则A1变体的膳食摄入被消除，因此也可以预期BCM-7对认知功能的不良影响被消除。

[0032] 因此，本申请的发明基于减少或消除膳食中的A1β-酪蛋白，以及促进A2β-酪蛋白。这是通过确保含β-酪蛋白的食品组合物、尤其是乳和乳制品中的β-酪蛋白主要是或甚至完全是A2β-酪蛋白来实现的。

[0033] 理想地，组合物中的β-酪蛋白是100％A2β-酪蛋白。因此，完全消除A1β-酪蛋白可降低认知损害的可能性。然而，任何其中β-酪蛋白主要是A2β-酪蛋白的组合物可以增强认知损害，例如75％重量与100％之间的任意量，包括但不限于80％、90％、95％、98％和99％重量。

[0034] 本发明的组合物通常是乳，但也可以是任何乳衍生的产品，例如奶油、酸乳酪、夸克、干酪、黄油或冰淇淋。该组合物也可以是含有从乳中获得的β-酪蛋白的非乳制品。该组合物本身可以是β-酪蛋白，或者可以由β-酪蛋白制备，该β-酪蛋白可以是固体形式，例如粉末或颗粒或固体饼状物的形式。

[0035] 虽然乳可以从任何哺乳动物获得，包括人、山羊、猪和水牛(buffalo)，但在本发明的优选实施方案中，所述乳是牛乳。

[0036] 乳可以是新鲜乳、乳粉、由粉末重构的液态乳、脱脂乳、均质乳、炼乳、淡炼乳、巴氏消毒乳或非巴氏消毒乳，或任何其它形式的乳。

[0037] 本发明的组合物主要适用于人类消耗，但应当理解，健康有益性也与一些其它动物如猫、狗和其它家养动物有关。

[0038] 在实施例1中发现了对本发明的支持，其描述了成人受试者被指定服用含有A1和A2β-酪蛋白(称为常规乳)的乳和含有A2β-酪蛋白但不含其它β-酪蛋白变体的乳(称为仅含A2β-酪蛋白的乳)的试验。使用微妙认知损害测试(SCIT)评估认知功能，这是一种基于计算机的测试，其测定信息处理的速度和有效性。SCIT分析显示，常规乳的消耗与反应时间和错误的高度显著增加有关。响应时间的增加主要可见于较长的刺激持续时间(尾)，而错误率的增加主要限于较短的刺激持续时间(头)。这启示常规乳的消耗与前意识自动处理的效率降低相关，但是长期刺激持续时间控制的过程有助于以处理速度为代价来降低处理效率的不足。在需要快速刺激检测和/或快速决策的情况下，认知功能的这种轻微损害可能具有相当大的影响。这一发现表明，含有A1β-酪蛋白的乳的消耗会影响认知功能。

[0039] 尽管使用SCIT进行实验，但是本领域技术人员应当理解，可以使用用于认知功能的任意其它适合的测试。实例包括自动认知测试(ACT)、自动神经心理学评估指标(ANAM)，痴呆的认知药物研究计算机评估系统(COGDRAS-D)、社区痴呆筛查仪器(CSI-D)、轻度认知损害计算机管理神经心理学筛查(CANS-MCI)、轻度认知损害计算机评估(CAMCI)、计算机化自我测试(CST)、佛罗里达州简要记忆量表(FBMS)、轻度认知损害(MCI)、神经心理学测试组(NTB)、精神分裂症中认知的简要评估(BACS)、剑桥老年人精神障碍检查-修订(CAMDEX-R)、剑桥神经心理测试自动化组(CANTAB)、计算机化多相交互神经认知双显示系统(CMINDS)、计算机化神经心理测试组(CNTB)、记忆能力测试(MCT)、神经心理学评估组(NAB)、阿尔茨海默病合作研究(ADCS)、执行、语言、空间和记忆能力组(ELSMEM)、简短精神状态检查(MMSE)和Hamilton D认知测试(HAM-D)。

[0040] 如上所述，一些研究已经揭示了A1β-酪蛋白/BCM-7与临床诊断的神经系统疾病如自闭症和精神分裂症之间的关联。还报道了BCM-7免疫反应性升高与婴儿精神运动发育迟缓有关。实施例1的数据暗示A1β-酪蛋白及其肽衍生物也影响健康受试者脑中的信息处理。健康受试者大脑中的信息处理与诊断的神经病症的影响无关。因此，不认为蛋白质(或任何其它物质)与健康受试者大脑中的信息处理之间的关联可由相同蛋白质(或其它物质)与神经病症之间的关联预测。

[0041] 表2通过研究阶段和产品显示了每个暴露持续时间的SCIT响应时间的汇总统计。图1和图2分别显示了干预阶段1和阶段2中产品在每个暴露持续时间(16、32、48、64、80、96、
112和128ms)的响应时间。

[0042] 混合效应ANOVA的结果(表3)显示，在每个暴露持续时间时，产品效应对响应时间(p＝0.0013)和错误率(p＝0.0004)都是显著的。在响应时间的尾平均值(p＝0.027)和错误率的头平均值(p＝0.020)中也发现了显著的产品效应。所有SCIT变量的基线水平是产品干预后水平的显著协变量。

[0043] 表4显示两种研究产品之间的对比测试结果。与用仅含A2β-酪蛋白的乳干预的受试者相比，在常规乳干预下的受试者具有8.6ms更长的平均响应时间(p＝0.0013)和1.76％更高的错误率(p＝0.0004)。消耗常规乳与仅含A2β-酪蛋白的乳相比，响应时间的尾平均值(暴露持续时间为80-128ms)长14.7ms(p＝0.020)，且错误率的头平均值(暴露持续时间为16-64ms)高2.76％(p＝0.027)，而在比较两种产品的响应时间头平均值和错误率的尾平均值方面没有观察到显著性差异。

[0044] 实施例2是涉及学龄前儿童的研究。结果显示在图3-5中。对于头和尾错误率，观察到所有三个关键结果的显著结果：

[0045] 1.条件的主要影响-表明乳消耗是否对SCIT行为表现有任何影响，但不区分乳品类型。

[0046] 2.乳类型与条件之间的相互作用-表示乳类型在乳消耗前和消耗后的SCIT行为表现方面是否存在差异。

[0047] 3.阶段、乳类型和条件之间的相互作用-表明参与者接受乳类型的顺序是否对乳消耗前后的SCIT行为表现随着乳类型有任何影响。

[0048] 基线和乳消耗后量度之间在行为表现方面存在总体上显著改善。然而，这主要是由于，在存在消耗常规乳后错误率明显增加的情况下，消耗仅含A2β-酪蛋白的乳后错误率大幅提高。乳类型和条件之间的显著相互作用支持了这一观察结果。阶段、乳类型和条件之间也存在显著的相互作用。图3最佳地示例了，相对于在阶段1消耗仅含A2β-酪蛋白的乳和在阶段2消耗常规乳的一组参与者(第2组)，在阶段1消耗常规乳且在阶段2期消耗仅含A2β-酪蛋白的乳的一组参与者(第1组)的头和尾错误率数据。对于第1组，消耗常规乳对错误率没有影响，但消耗仅含A2β-酪蛋白的乳导致错误率大幅度和显著降低。对于第2组，在阶段1中消耗仅含A2β-酪蛋白的乳导致在消耗仅含A2β-酪蛋白的乳后错误率大幅度和显著降低。然而，对于该组，随后在阶段2中消耗常规乳后，误差也大幅度和显著增加。这是导致阶段x乳类型x条件相互作用的结果，但不代表常规乳的真实效果。相反，对于第2组的参与者，观察到在第一阶段消耗仅含A2β-酪蛋白的乳的遗留效应(carryover effect)。消耗仅含A2β-酪蛋白的乳后错误率的改善继续贯穿了不存在仅含A2β-酪蛋白乳的清除期。当引入常规乳时，参与者的行为表现恢复到与无乳消耗基线相当的水平。因此，头和尾错误率的第1组示意图中显示的性能模式更好地描述了消耗常规乳与仅含A2β-酪蛋白乳相比的效果，其中消耗常规乳对行为没有影响，而消耗仅含A2β-酪蛋白的乳改善了SCIT行为表现相对于基线行为的准确性。此外，在消耗仅含A2β-酪蛋白的乳后改善的行为表现准确性，在仅含A2β-酪蛋白的乳不存在下持续了至少10天的清除期，并且可能更长时间。

[0049] 这些研究代表了A1β-酪蛋白消耗与认知功能降低之间联系的首个明确的科学证据。通过申请人的发现，很显然应当避免消化时产生BCM-7的β-酪蛋白。此外，这些研究代表了A2β-酪蛋白消耗与改善的认知功能之间的联系、而与避免A1β-酪蛋白消耗和随后的BCM-7产生的作用无关的首个明确的科学证据。此外，在消耗仅含A2β-酪蛋白乳后改善的行为准确性的持续，是消耗A2β-酪蛋白的进行性有益效果在消耗后持续至少2周的明确证据。因此，消耗在消化时不产生BCM-7的β-酪蛋白的益处很好地延伸超过消耗和消化所花费的时间。

[0050] 实际上，通过寻找含有主要是A2β-酪蛋白的β-酪蛋白的乳并生产来源于该乳的产品，并使得该乳和那些产品可用于改善、增强或维持认知功能的目的，可以在较大的人群中实现本发明的益处。

[0051] 可以测试奶牛乳中A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白的相对比例。或者，可以对奶牛进行基因测试，以确定其产生含有A1β-酪蛋白(或其它能够产生BCM-7的变体)的乳的能力，或测试其产生含有A2β-酪蛋白(或其它不能产生BCM-7的变体)的乳的能力，或同时产生两者的能力。这些技术是众所周知的。

[0052] 本发明提供了一种相对容易控制的解决方案，即避免含有A1β-酪蛋白的乳或乳制品，并确保膳食中的乳和乳制品含有主要为A2β-酪蛋白的β-酪蛋白，优选100％A2β-酪蛋白。

[0053] 在本说明书中对现有技术文献的任何引用不应被认为是承认这种现有技术是众所周知的或构成本领域公知常识的一部分。

[0054] 如在本说明书中所使用的，词语“包括”、“包含”和类似词语不应以排他性或穷举性的意义来解释。换句话说，它们旨在表示“包括但不限于”。

[0055] 参考以下实施例进一步描述本发明。应当理解，要求保护的本发明并不旨在以任何方式受到该实施例的限制。实施例

[0056] 实施例1：成年人中的乳试验和SCIT分析

[0057] 研究设计

[0058] 本研究根据2008年首尔修订的赫尔辛基宣言进行，并获得了上海营养学会伦理委员会批准(批准号：SNSIRB#2014[002])。本研究在ClinicalTrials.gov注册(标识符号：NCT02406469)。所有受试者在纳入本研究之前都提供了书面知情同意书。这是一项单点、双盲、随机化、对照、2×2交叉研究，设计旨在评估仅含A2β-酪蛋白类型的乳与含A1和A2β-酪蛋白类型的乳对免疫应答标志物的血清水平的效果与不耐受症状的相关性。在对受试者进行全面临床评估和尿半乳糖定性测试的筛查访问后，符合条件的受试者进入2周的清除期。
然后，受试者进入干预期1，其中根据随机化方案，他们接受仅含A2β-酪蛋白变体的乳(仅含A2β-酪蛋白的乳)或含有A1和A2β-酪蛋白变体的乳(常规乳)，持续2周。在第二个2-周的清除期后，受试者进入干预期2，其中他们接受了相反的乳制品。访问安排在每个干预期开始时以及每个干预期的第7天和第14天。在每个清除期间通过电话接触受试者。本研究在上海交通大学医学院附属新华医院消化内科(上海，中国)进行。

[0059] 干预

[0060] 由A2婴儿营养有限公司(新西兰奥克兰)提供的仅含A2β-酪蛋白的乳和常规乳，并且由SPRIM中国分发到研究地点。SPRIM中国的工作人员重新包装并标记了所有产品，以确保研究人员和受试者对每个干预期间收到的产品不知情。在每个干预期间，受试者被指示每天2餐后消耗250ml乳，持续14天。受试者使用日志记录乳摄入量并遵守每次干预。在每次访问时收集使用过的和未使用过的纸箱，以评估对干预措施的依从性，并确认盲法是完整的。根据密封信封中的分配编号，对受试者进行随机分组(按性别分层)至顺序1(常规乳→仅含A2β-酪蛋白乳)或顺序2(仅含A2β-酪蛋白乳→常规乳)。该分配基于SPRIM中国编制的计算机生成列表。

[0061] 仅含A2β-酪蛋白的乳(每100ml)含有271kJ 能量、3.1g蛋白质、3.6g脂肪、5.0g 碳水化合物、48mg钠、150mg 钾和117mg钙。正如通过超高效液相色谱和质谱分析所证实的，A1/A2产品中A1β-酪蛋白与A2β-酪蛋白之比约为40:60。两种产品相同并含有相同量的蛋白质。

[0062] 在本研究过程中禁止食用除所提供乳制品以外的乳制品。允许受试者在每个清除期间食用非乳制品，但不允许食用牛乳。

[0063] 受试者

[0064] 纳入标准如下：男性或女性；年龄25-68岁；不规则的乳消耗(使用食物频率问卷记录)；自我报告对商品乳不耐受；自我报告的乳消耗后轻度至中度消化不适；和在安静呼吸期间正常心电图(ECG)和血压。如果他们同意以下情况，则纳入：在研究期间不服用任何药物、营养补充剂或其它乳制品、包括嗜酸菌乳；愿意遵守所有要求和程序；提供签署的知情同意书；同意在本研究期间不参加另一项介入性临床研究；没有达到任何排除标准；并充分理解本研究的性质、目标、利益、潜在风险和副作用。通过社区医院布告板上的广告招募受试者。概括统计表如表1所示。

[0065] 表1-基线特征平均值(SD)或频率(％)的评价

[0066]

[0067] 精确认知损害试验(SCIT)

[0068] SCIT是一种基于计算机的测试，其用于测量信息处理的速度和有效性。通过按下鼠标左键或右键，受试者指示目标刺激中的两条平行垂直线中的哪一条较短。在16、32、48、64、80、96、112和128ms的暴露持续时间随机呈现视觉掩蔽的目标刺激；每项试验共12项，共
96项试验。记录刺激暴露持续时间的受试者响应时间和错误率。汇总四个最短曝光持续时间(16-64ms)的数据，以便从各自的响应曲线(前意识-自动处理)的头部提供两个评分：响应时间(SCIT-RTH)和错误率(SCIT-EH)。汇总四个较长呈现持续时间(83-133ms)的数据，以便为其各自的响应曲线(有意识的处理)的尾部提供两个评分：响应时间(SCIT-RTT)和错误率(SCIT-ET)。SCIT具有高测试-重测试和内部一致性可靠性以及中-高度内容效度20。

[0069] 统计分析

[0070] Kolmogorov–Smirnov检验用于评估连续变量的正态性。对非正态分布的变量进行平方根或对数转换以近似正态分布。将基线特征描述为受试者的平均值±标准偏差(SD)或数量(百分比)。使用方差的混合效应分析来分析SCIT变量，其中分配的干预和干预期被包括作为固定效应，并且受试者被包括作为嵌套在研究顺序中的随机效应(即，顺序1，常规乳→仅含A2β-酪蛋白乳；顺序2，仅含A2β-酪蛋白乳→常规乳)。为了研究两个干预措施在每个终点的平均值之间是否存在差异，以及在研究期间平均值是否发生变化，使用固定效应的III型测试来测试干预和研究期间的影响。另外，进行对比试验以比较每种产品的平均值。使用相互作用“干预×时间期限”评估遗留效应的存在。如果这种相互作用不显著，则会对来自这两个时期的数据进行评估。如果相互作用显著，则仅使用来自干预期1的数据。

[0071]

[0072] 表3–固定效应SCIT III类测试的混合效应ANOVA的结果

[0073]

[0074] *：p<0.05；**：p<0.01；***：p<0.001；无符号：p≥0.05

[0075] 表4–最小二乘法SCIT差异的混合效应ANOVA的结果

[0076]

[0077] *：p<0.05；**：p<0.01；***：p<0.001；无符号：p≥0.05

[0078] 实施例2：学龄前儿童的乳试验和SCIT分析

[0079] 本试验按照与上述实施例1相同的方法进行，除外受试者是学龄前儿童。试验开始于80名受试者，但在本试验期间因退出5名儿童而减少至75名。

[0080] 所有分析均使用交叉设计线性混合模型分析进行。在主要分析中存在三个因素：

[0081] 1.阶段(交叉设计的阶段1和阶段2)

[0082] 2.乳类型(混合型和仅A2β-酪蛋白)

[0083] 3.条件(基线和处理)，即如消耗前后的行为表现。

[0084] 四个SCIT测量值用作头和尾响应时间以及头和尾错误率。头和尾分别指的是对在暴露持续时间16-64ms之间(头)和80-128ms之间(尾)呈现的刺激的响应。该划分对应于仅有自动过程可用于刺激处理(头)的暴露持续时间和受控(注意驱动)过程也可用的暴露持续时间(尾)。对四个SCIT测量值中的每一个分别进行分析。结果显示在图3-5中。

[0085] 尽管已经通过实施例描述了本发明，但是应当理解，在不脱离如权利要求中所限定的本发明范围的情况下，可以进行变化和变型。此外，在特定特征存在已知等效方案的情况下，这类等效方案被并入，如同在本说明书中具体提及的那样。

[0086] 参考文献

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