减少β淀粉样蛋白负载的组合物和方法
阅读：25发布：2020-06-02
专利汇可以提供减少β淀粉样蛋白负载的组合物和方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及用于调节非神经元(即，外周)细胞、 流体 或组织展示的β 淀粉 样肽(Aβ) 水 平的方法和组合物。本发明还涉及经由选择性调节(例如，抑制)γ-分泌酶活性来调节Aβ水平。本发明还涉及 预防 、 治疗 或改善病症包括但不限于Aβ相关病症的症状的方法，所述方法是通过直接或间接地施用导致调节非神经元组织中的γ-分泌酶的化合物来预防、治疗或改善大脑Aβ病症如阿兹海默病的症状而实现的。，下面是减少β淀粉样蛋白负载的组合物和方法专利的具体信息内容。
1.一种治疗患有大脑Aβ病症或易患大脑Aβ病症的受试者的方法，其包括外周地施用调节外周组织中的Aβ的产生的化合物，其中所述化合物是伊马替尼衍生物，与伊马替尼相比，所述伊马替尼衍生物展示减少的蛋白激酶抑制。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述大脑Aβ病症是阿兹海默病。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述调节包括减少所述外周组织中的Aβ的产生。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述外周组织是肝。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物包括伊马替尼对-二氨基甲基苯或其药学上可接受的盐。
6.如权利要求5所述的方法，其中所述伊马替尼对-二氨基甲基苯呈甲磺酸盐形式。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物包括N-去甲基伊马替尼或其药学上可接受的盐。
8.如权利要求5所述的方法，其中所述N-去甲基伊马替尼呈甲磺酸盐形式。
9.一种方法，其包括：
a)针对存在大脑Aβ病症或易患大脑Aβ病症对受试者进行评估；
b)外周地施用调节Aβ的产生的化合物，其中所述化合物基本上不渗透血脑屏障，其中所述化合物包括伊马替尼对-二氨基甲基苯和/或N-去甲基伊马替尼；并且
c)在步骤b)的所述施用之后，针对大脑Aβ病症或大脑Aβ病症的进展来对所述受试者进行评估。
10.如权利要求9所述的方法，其中Aβ的产生的所述调节包括调节所述受试者的肝中的Aβ的产生。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述调节包括抑制。
12.如权利要求9所述的方法，其中所述大脑Aβ病症是阿兹海默病。
13.如权利要求9所述的方法，其中所述化合物包括γ-分泌酶活性的抑制剂。
14.如权利要求9所述的方法，其中所述评估包括以下各项中的一个或多个：精神状态评估、神经心理学测试或大脑成像。
15.如权利要求9所述的方法，其中所述化合物包括伊马替尼对-二氨基甲基苯或其药学上可接受的盐。
16.如权利要求9所述的方法，其中所述化合物包括N-去甲基伊马替尼或其药学上可接受的盐。
17.如权利要求9所述的方法，其中所述化合物进一步包括用于治疗、改善或减少大脑Aβ相关病症的危险或严重性的已知治疗剂。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述已知治疗剂选自由以下组成的组：伊马替尼、大麻素、dimebom、泼尼松、布洛芬、萘普生、吲哚美辛；他汀类药物、选择性雌激素受体分子、抗高血压药物、α-阻滞剂、β-阻滞剂、α-β阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、钙通道阻滞剂、利尿剂、NSAIDS和抗氧化剂。
19.如权利要求9所述的方法，其中所述外周施用包括口服施用。
20.一种组合物，其包含伊马替尼对-二氨基甲基苯或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的赋形剂。
21.一种组合物，其包含N-去甲基伊马替尼或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的赋形剂。
22.如权利要求20或权利要求21所述的组合物，其中所述化合物进一步包括用于治疗、改善或减少大脑Aβ相关病症的危险或严重性的已知治疗剂。
23.如权利要求22所述的组合物，其中所述已知治疗剂选自由以下组成的组：伊马替尼、大麻素、dimebom、泼尼松、布洛芬、萘普生、吲哚美辛；他汀类药物、选择雌激素受体分子、抗高血压药物、α-阻滞剂、β-阻滞剂、α-β阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、钙通道阻滞剂、利尿剂、NSAIDS和抗氧化剂。
24.如权利要求20-23中任一项所述的组合物，其中所述组合物被配置来口服施用。
减少β淀粉样蛋白负载的组合物和方法
[0001] 本申请主张2011年11月1日提交的美国临时申请序列号61/554,375和2012年8月10日提交的美国临时申请序列号61/682,031的优先权，这些申请各自全部以引用方式并入本文。
发明领域
发明领域
[0002] 本发明涉及调节非神经(即，外周)细胞、流体或组织展示的β淀粉样肽(Aβ)水平的方法和组合物。本发明还涉及经由选择性调节(例如，抑制)外周组织中的γ-分泌酶活性来调节大脑Aβ水平。本发明进一步涉及通过外周地施用导致直接或间接地调节γ-分泌酶的化合物来预防、治疗或改善病症，包括但不限于神经Aβ相关病症的症状的方法。本发明还涉及经由外周施用来使用γ-分泌酶活性的调节剂以预防、治疗或改善阿兹海默病的症状。本发明更进一步涉及使用具有减少的激酶抑制活性的Aβ产生抑制剂。
[0003] 背景
[0004] β淀粉样(Aβ)肽是阿兹海默病相关前体蛋白，即β淀粉样前体蛋白(APP)的代谢物，并且据信是阿兹海默病(AD)的主要病理决定因素。AD是神经变性病症，特征在于Aβ在大脑的易损区域，尤其额叶皮质和海马内的年龄依赖性沉积(Terry RD.J Geriatr Psychiatry Neurol19:125-128,2006)。Aβ具有致病作用，导致逐渐神经元损失，从而引起那些大脑区域控制较高阶和基本神经过程的能力退化。当退化恶化时，患病个体面临痴呆和恶化的生活质量，并且最终病状是致死的(Brookmeyer R,Johnson E,Ziegler-Graham K,Arrighi HM.Alzheimer's Dement3:186-191,2007；Powers JM.Neurobiol Aging18:S53-S54,1997)。
[0005] 据信AD的发展是由与老化相关的自然生物化学过程引起的，并且不论每个个体是否活足够长的时间，他或她几乎最终表现疾病的症状。年龄是AD的最大的已知危险因素，并且在85岁或更年长的人中，发病率为25-50％(Giacobini E.Ann NY Acad Sci920:321-327,2000)。对于给定个体，病症表现的时间是一系列额外危险因素的结果，一些因素可归因于环境原因，但是许多因素归因于个体的遗传禀赋：个体基因的结构和活性的天然变异产生蛋白质集合，这些蛋白质集合的复杂相互作用网络使得个体或多或少易于患上AD。已经识别其蛋白质产物影响AD危险的一些基因。举例来说，存在编码血清蛋白载脂蛋白E的基因的三个常见变体，称为e2、e3和e4。与平均水平相比，继承e4-编码等位基因的个体处于AD的较高危险，并且与没有e4等位基因的个体相比，倾向于在更早时间患上疾病。从父母双方继承e4等位基因的那些人处于早发AD的更高危险，而具有e2等位基因的个体处于非常低的危险，与平均水平相比，如果患上疾病有的话也只在一生中较晚时间患上疾病(Cedazo-Minguez A.J Cell Mol Med.11:1227-38,2007)。还发现创伤性脑损伤和重复脑创伤加速大脑Aβ沉积和认知障碍。Uryu等人J.Neurosci.22(2):446(2002)。
[0006] 大多数(即使不是全部)AD被认为具有与每个个体的危险阈值相关的一些遗传组分。然而，一些形式的人AD是特别高度可遗传的。这些可遗传形式由编码蛋白质的单一基因的罕见突变产生，这些蛋白质与此神经变性病症相关并且在疾病过程的启始中起核心作用。这些基因的突变可遗传或可偶尔出现。
[0007] 这些基因之一编码淀粉样前体蛋白(APP)(Tanzi RE.Ann Med.21:91-94,1989)。APP是膜蛋白质，其生物化学功能现在未知。已知APP是多种内源性蛋白酶的蛋白水解的底物，并且蛋白水解释放具有不同结构的片段。这些蛋白酶活性中的两种被称为β-分泌酶和γ-分泌酶。APP通过β-分泌酶的蛋白水解产生片段，此片段可随后由γ-分泌酶在多个部位裂解来产生Aβ肽。γ-分泌酶是多个蛋白质(包括早老素1和早老素2)的复合物，并且APP通过γ-分泌酶的裂解产生Aβ的多个同种型，这些同种型在37至43个氨基酸残基范围内(参见例如Steiner H,Fluhrer R,Haass C.,J Biol Chem.2008Jul23)。42-残基形式的Aβ被认为是最致病的(Wolfe MS.Biochemistry45:7931-7939,2006)。42-残基Aβ片段形成低聚结构，除了形成沉积于AD患病大脑中的斑块以外，这些结构被认为导致认知缺陷(Barten DM,Albright CF.Mol Neurobiol37:171-186,2008)。
[0008] 诱发AD的APP变异聚集于蛋白裂解部位附近，影响产生致病性Aβ片段的速率、其稳定性和其形成低聚物的能力(Selkoe DJ.Physiol Rev81:741-766,2001)。继承这类APP变异的个体通常在其五十几岁时显示AD迹象，而偶发AD直到个体达到其七十几岁为止才变得常见(Waring SC,Rosenberg RN.Arch Neurol.65:329-34,2008)。
[0009] γ-分泌酶的完整分子身份仍然未知。早老素1或紧密相关的早老素2为γ-分泌酶活性所必需。在从遗传缺失早老素1的胚胎获得的培养细胞中，γ-分泌酶活性降低80％。在没有早老素1和早老素2的细胞中，γ-分泌酶活性全部丧失。γ-分泌酶活性的拟肽类抑制剂可与早老素1和2交联，暗示这些蛋白质是裂解的催化亚单位。然而，从细胞中分离的γ-分泌酶活性通过色谱法分析为>1M道尔顿的较大复合物。最近遗传研究识别出为γ-分泌酶活性所需要的另外三种蛋白质；呆蛋白、aph-1和pen-1。(Francis 等 人 2002,Developmental Cell3(1):85-97；Steiner 等 人 2002,J.Biol.Chemistry:277(42):3906239065；和Li等人2002,J.Neurochem.82(6):1540-1548)。在没有这些蛋白质的细胞中，早老素积聚成高分子量复合物发生改变。编码γ-分泌酶的早老素1和早老素2组分的基因中的罕见变异也赋予早发AD的高危险(Waring SC,Rosenberg RN.Arch Neurol.65:329-34,2008)。
[0010] 第三种酶，α-分泌酶，将前体蛋白在β-与γ-裂解部位之间裂解，从而排除Aβ产生并且释放近似3kDa的被称为P3的肽，这种肽是非病理性的。β-和α-分泌酶裂解也产生APP的可溶性、分泌末端片段，这些片段分别被称为sAPPβ和sAPPα。已经提出sAPPα片段具有神经保护作用。
[0011] 由于这些遗传观察和大量生物化学和神经解剖学实验，已经出现如下模型：增加Aβ，尤其Aβ-42的产生和积聚的生物化学事件加速AD的发病和进展。因此，治疗和预防程序的目标在于减少Aβ的产生或降低其积聚。
[0012] AD治疗的当前焦点是降低Aβ产生和/或在大脑中的积聚。几个方法目前在研究中(Rojas-Fernandez CH,Chen M,Fernandez HL.Pharmacotherapy22:1547-1563,2002；Hardy J,Selkoe DJ.Science.297:353-356,2002)。关于AD诱发性APP为转基因并且另外携带β-分泌酶基因的失活敲除突变的小鼠展现大脑中的Aβ的几乎完全减少(Luo Y,Bolon B,Kahn S,Bennett BD,Babu-Khan S,Denis P,Fan W,Kha H,Zhang J,Gong Y,Martin L,Louis JC,Yan Q,Richards WG,Citron M,Vassar R.Nat Neurosci4:231-232,2001)。然而，已经证明这类小鼠仍然展现认知缺陷、过早死亡和髓鞘化低下(Ohno M,Chang L,Tseng W,Oakley H,Citron M,Klein WL,Vassar R,Disterhoft JF.Eur J Neurosci23:251-260,2006；
Ohno M,Sametsky EA,Younkin LH,Oakley H,Younkin SG,Citron M,Vassar R,Disterhoft JF.Neuron41:27-33,2004；Laird FM,Cai H,Savonenko AV,Farah MH,He K,Melnikova T,Wen H,Chiang H-C,Xu G,Koliatsos VE,Borchelt DR,Price DL,Lee H-K,Wong PC.J Neurosci25:11693-11709,2005；Dominguez D,Tournoy J,Hartmann D,Huth T,Cryns K,Deforce S,Serneels L,Camacho IE,Marjaux E,Craessaerts K,Roebroek AJ,Schwake M,D’Hooge R,Bach P,Kalinke U,Moechars D,Alzheimer C,Reiss K,Saftig P,De Strooper B.J Biol Chem280:30797-30806,2005；Hu X,Hicks CW,He W,Wong P,Macklin WB,Trapp BD,Yan R.Nat Neurosci9:1520-1525,2006)。这导致以下结论：大脑中的β-分泌酶活性为健康神经功能所需要，并且降低β-分泌酶的大脑活性的治疗剂可能具有不利副作用。另外，难以设计有效、大脑渗透β-分泌酶抑制剂(Barten DM,Albright CF.Mol Neurobiol37:171-186,2008)，它一直是研究AD的药物疗法的那些人员的目标。
Ohno M,Sametsky EA,Younkin LH,Oakley H,Younkin SG,Citron M,Vassar R,Disterhoft JF.Neuron41:27-33,2004；Laird FM,Cai H,Savonenko AV,Farah MH,He K,Melnikova T,Wen H,Chiang H-C,Xu G,Koliatsos VE,Borchelt DR,Price DL,Lee H-K,Wong PC.J Neurosci25:11693-11709,2005；Dominguez D,Tournoy J,Hartmann D,Huth T,Cryns K,Deforce S,Serneels L,Camacho IE,Marjaux E,Craessaerts K,Roebroek AJ,Schwake M,D’Hooge R,Bach P,Kalinke U,Moechars D,Alzheimer C,Reiss K,Saftig P,De Strooper B.J Biol Chem280:30797-30806,2005；Hu X,Hicks CW,He W,Wong P,Macklin WB,Trapp BD,Yan R.Nat Neurosci9:1520-1525,2006)。这导致以下结论：大脑中的β-分泌酶活性为健康神经功能所需要，并且降低β-分泌酶的大脑活性的治疗剂可能具有不利副作用。另外，难以设计有效、大脑渗透β-分泌酶抑制剂(Barten DM,Albright CF.Mol Neurobiol37:171-186,2008)，它一直是研究AD的药物疗法的那些人员的目标。
[0013] γ-分泌酶抑制剂在减少大脑Aβ中的效果也已经得到研究。大脑渗透γ-分泌酶抑制剂已被证明在AD的小鼠模型中减少Aβ合成并且减少认知缺陷(Barten DM,Meredith JE Jr,Zaczek R,Houston JG,Albright CF.Drugs R D7:87-97,2006)。然而，γ-分泌酶具有除了APP以外的目标(Pollack SJ,Lewis H.Curr Opin Investig Drugs6:35-47,2005)，其中一个目标是Notch家族的跨膜受体。通过γ-分泌酶抑制剂的慢性给药来抑制Notch信号转导导致胃肠道、脾和胸腺的变化，从而限制使用所研究的化合物在体内可实现的Aβ抑 制的 程 度(Searfoss GH,Jordan WH,Calligaro DO,Galbreath EJ,Schirtzinger LM,Berridge BR,Gao H,Higgins MA,May PC,Ryan TP.J Biol Chem278:46107-46116,2003；Wong GT,Manfra D,Poulet FM,Zhang Q,Josien H,Bara T,Engstrom L,Pinzon-Ortiz M,Fine JS,Lee HJ,Zhang L,Higgins GA,Parker EM.J Biol Chem279:12876-12882,2004；
Milano J,McKay J,Dagenais C,Foster-Brown L,Pognan F,Gadient R,Jacobs RT,Zacco A,Greenberg B,Ciaccio PJ.Toxicol Sci82:341-358,2004)。
Milano J,McKay J,Dagenais C,Foster-Brown L,Pognan F,Gadient R,Jacobs RT,Zacco A,Greenberg B,Ciaccio PJ.Toxicol Sci82:341-358,2004)。
[0014] 美国专利申请20020128319A1陈述在表达通过裂解APP而获得的Aβ40和Aβ42的细胞培养物中，某些非类固醇抗炎症药物(NSAIDS)降低Aβ42的产生和/或水平。因为有充分的证据表明高Aβ42水平是AD的主要危险因素，所以这类药物可适用于预防、延缓或逆转AD的进展。然而，使用这类药物的缺点是需要大剂量NSAIDS来显著降低Aβ42，并且显著胃肠副作用，包括出血性溃疡，与长时间使用高剂量的NSAIDS相关(Langman等人1994,Lancet343:1075-1078)。另外，由于通过Aβ40和不受Aβ42降低剂影响的其它形式来形成淀粉样蛋白，仍然存在阿兹海默病的未知危险。因此，在本领域中需要开发与调控Aβ产生相关的疾病或病症的疗法。
[0015] 已经发现一类化合物减少Aβ产生而不影响Notch信号转导。这类化合物包括酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼(STI-571，商品名称GLEEVEC)和相关化合物，6-(2,6-二氯苯基)-8-甲基-2-(甲基硫基苯基-氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮，其被称为抑制剂2(Netzer WJ等人Proc Natl Acad Sci U S A.100:12444-12449,2003)。还参见美国专利公布2004/0028673和PCT专利公布WO2004/032925，这些公布各自以引用方式并入本文。目前批准STI-571用于治疗髓性白血病和胃肠间质肿瘤。在APP转染成神经细胞瘤细胞和转染细胞的无细胞提取物中，STI-571经由不需要Abl酪氨酸激酶的机制来有效地减少Aβ的产生，这种激酶是此药物在白血病细胞中的一个重要目标(Netzer，同上文)。在从胚胎18天大鼠的大脑皮质制备的初级神经元的培养物中，发现STI-571和称为“抑制剂2”的相关化合物减少Aβ的产生(Netzer，同上文)，指示这些药物影响来自内源性和转染APP基因的蛋白质的蛋白水解处理。
[0016] 根据GLEEVEC的产品资料，STI-571口服施用。这种药物已经关于其对于大脑中的Aβ积聚的效果加以研究并且这种药物已被证明具有不佳的血脑屏障渗透性。在STI-571治疗的接受这种药物的白血病患者中，药物的脑脊髓液(CSF)水平比血液中的水平低92倍(Takayama N,Sato N,O'Brien SG,Ikeda Y,Okamoto S.Br J Haematol.119:106-108,2002)。因此，其以未修饰形式用作AD的潜在治疗剂已经不再被考虑(Netzer，同上文)。
[0017] 鉴于不佳的血脑屏障渗透性，研究STI-571对于大脑Aβ的效果的研究人员使用植入渗透微泵来将STI-571或抑制剂2鞘内传输至豚鼠大脑(Netzer，同上文)。虽然Netzer等人观察到大脑中的Aβ积聚减少，但是他们仍然断定“在Gleevec和相关药物的情况下，获得高度血脑屏障渗透性的能力是改善治疗益处的可能性所必需的”(Netzer，同上文)。
[0018] 在大多数疾病的小分子治疗剂的开发中，与经由替代机制来发挥相同治疗作用的化合物相比，抑制蛋白质激酶或阻断任何酶的ATP结合域的化合物总体上是不太可取的。蛋白质激酶调控许多必需细胞过程，包括细胞周期进展、DNA损伤反应、细胞增殖、代谢和细胞死亡、分化和存活。事实上，人基因组含有至少500个编码蛋白质激酶的不同基因。激酶抑制剂药物，如伊马替尼具有改变其毒性和副作用概况的已知脱靶相互作 用(参 见 例 如Force,T.& Kolaja,K.L.Cardiotoxicity of kinase inhibitors:the prediction and translation of preclinical models to clinical outcomes.Nat.Rev.Drug Discov.10,111-126(2011))。伊马替尼抑制激酶Abl、ARG(Abl相关基因蛋白质)、PDGF-Ra/B和KIT。酪氨酸激酶抑制剂舒尼替尼(参见例如Chu,T.F.等人Cardiotoxicity associated with tyrosine kinase inhibitor sunitinib. Lancet 370,2011-2019(2007))和其它 激酶抑 制剂 表现出 心脏中 毒(还参 见Cheng,H.& Force,T.Molecular mechanisms of cardiovascular toxicity of targeted cancer therapeutics,Circ.Res.106,21-34(2010))。因此，有人担心，在长期治疗方案中使用激酶抑制药物如伊马替尼来预防阿兹海默病可能具有消极后果，这些消极后果在相对短暂化疗方案中是观察不到的。虽然对于用于癌症治疗的化学治疗剂来说，伊马替尼的所报告副作用被认为是有限的，但是如果数以千万计的人为了维持而服用这种药物，那么可预计将观察到与蛋白激酶抑制活性相关的新的副作用。
[0019] 仍然需要有效地减少大脑中的Aβ水平的疗法，并且另外仍然需要有效地减少Aβ水平，并且导致Abl激酶活性的较小抑制的疗法。
[0020] 发明概述
[0021] 本发明涉及通过测试和/或治疗外周(非大脑、非CNS)组织来治疗、预防或监测大脑Aβ病症的方法。在一些优选实施方案中，外周组织包括肝，而在其它实施方案中，外周组织包括血液/和或血清。在一些实施方案中，本发明包括针对存在AD或易患AD来对受试者进行评估，方法是外周地施用调节Aβ的积聚或产生的化合物，并且针对AD或AD的进展来对所述受试者进行评估。
[0022] 本发明提供涉及通过治疗受试者的肝来治疗或预防AD的方法、组合物和过程。具体地说，本发明涉及改变受试者的肝中的Aβ产生、处理、积聚或运输，方法是直接抑制产生(例如，通过抑制APP的表达)，或通过调节一种因子，进而调节肝中的Aβ的产生、处理、积聚或运输。这类因子包括但不限于γ-分泌酶、早老素1、早老素2、ApoE、钙整合素结合蛋白、突触生长相关蛋白、肌醇1,4,5-三磷酸受体(InsP3R)或Smad相互作用蛋白质-1(SIP1，由Zfhx1b编码)、丛生蛋白(由CLU编码，也称为ApoJ)、磷酸肌醇结合网格蛋白组装蛋白质(由PICALM编码)、补体组分受体1(由CR1编码)、胰岛素降解酶(IDE)、γ分泌酶-活化蛋白质(GSAP)和其调节剂。本发明涵盖通过调节任何因子来治疗或预防AD，这种因子在调节时直接地(例如，通过作用于APP产生或处理)或间接地(例如，通过作用于一种因子，这种因子进而作用于对于APP起作用的因子)来影响受试者的肝中的Aβ的产生。本发明不受调节的性质，或进行操作以调节受试者的肝中的Aβ的因子的身份或数目限制。
[0023] 在一些实施方案中，本发明提供治疗诊断为患有大脑Aβ病症或易患大脑Aβ病症的受试者的方法，包括外周地施用调节外周组织中的Aβ的产生的化合物。在一些优选实施方案中，化合物抑制Aβ的产生。在尤其优选实施方案中，外周地施用的化合物具有小于2.0的分配系数，更优选地小于1.5并且仍然更优选地小于约1.0。在尤其优选实施方案中，化合物基本上不横越血脑屏障。
[0024] 在一些实施方案中，本发明提供针对受试者的大脑Aβ病症或易患大脑Aβ病症来对受试者进行治疗的方法，包括外周地施用调节所述受试者的外周组织中的基因的表达的化合物。在优选实施方案中，调节所述基因的所述表达导致所述外周组织中的Aβ产生或积聚的调节。在某些优选实施方案中，外周组织是受试者的肝。
[0025] 本发明涵盖影响肝中的Aβ的产生的任何方法，包括但不限于改变APP的表达和/或处理。在一些实施方案中，本发明提供包括外周地施用化合物的方法，所述化合物调节Psen1、Apo E、InsP3R、Psen2、APP、Cib1、Ngrn、Zfhx1b、CLU(也称为ApoJ)、PICALM、IDE、GSAP和CR1基因中的一个或多个的表达。在一些实施方案中，本发明的方法包括外周地施用化合物，所述化合物调节以下各项中的一个或多个的活性：早老素2、钙整合素结合蛋白、突触生长相关蛋白、Zfhx1b、丛生蛋白、磷酸肌醇-结合网格蛋白组装蛋白质、补体组分受体1、胰岛素降解酶、GSAP或APP表达或活性。在一些实施方案中，调节受试者的肝中的这些基因或活性中的一个或多个。在一些实施方案中，调节包括抑制表达或活性，而在一些实施方案中，调节包括刺激表达或活性。
[0026] 在一些实施方案中，本发明包括例如治疗大脑Aβ病症的方法，所述方法包括以下步骤：针对存在大脑Aβ病症或易患大脑Aβ病症对受试者进行评估，外周地施用调节Aβ的产生的化合物，其中化合物基本上不渗透血脑屏障，并且针对大脑Aβ病症或大脑Aβ病症的进展对受试者进行评估。进一步预期，在一些实施方案中，将治疗前后的评估结果以便比较，以确定例如治疗对于大脑Aβ病症状态的效果(例如，确定对于疾病发展或减轻的开始或速率的效果)。Aβ的产生的调节不限于任何具体调节手段或途径。产生的调节可包括，例如，改变(例如，降低)APP的表达，或改变将APP处理成Aβ。
[0027] 在一些实施方案中，本发明包括以下步骤：针对存在大脑Aβ病症或易患大脑Aβ病症对受试者进行评估，外周地施用调节Aβ的积聚的化合物，其中化合物基本上不渗透血脑屏障，并且针对大脑Aβ病症或大脑Aβ病症的进展对受试者进行评估。Aβ的积聚的调节不限于任何具体手段。积聚的调节可包括，例如，降低Aβ的产生和/或增加Aβ的降解或清除，或改变Aβ以产生具有不同性质的改良型(例如，非致病形式)。
[0028] 预期在本发明的一些实施方案中，Aβ的产生和/或积聚的调节，所施用的化合物包括γ-分泌酶活性的调节剂，而在一些优选实施方案中，化合物包括γ-分泌酶活性的抑制剂。
[0029] 进一步预期在本发明的一些实施方案中，Aβ的产生和/或积聚的调节，所施用的化合物包括早老素2的调节剂。在一些优选实施方案中，化合物包括早老素2的抑制剂。在一些实施方案中，化合物包括裂解淀粉样前体蛋白的调节剂，而在一些实施方案中，化合物包括裂解淀粉样前体蛋白的抑制剂。
[0030] 在一些实施方案中，化合物包括选自由以下组成的组的组合物：STI-571、伊马替尼对-二氨基甲基苯(例如，三盐酸盐)、N-去甲基伊马替尼、化合物1、化合物2、LY450139、GSI-953、左旋氟比洛芬和E2012(Eisei)化合物，或其血脑屏障不可渗透性变体。在尤其优选实施方案中，组合物具有小于2.0的分配系数(例如，在辛醇/水系统中)、更优选地小于1.5，并且仍然更优选地小于约1.0。在尤其优选实施方案中，化合物基本上不横越血脑屏障。
[0031] 在一些实施方案中，化合物包括干扰寡核苷酸，而在优选实施方案中，化合物包括干扰RNA。在仍然更优选实施方案中，干扰RNA选自由以下组成的组：siRNA、shRNA和miRNA。在一些实施方案中，干扰RNA包括针对淀粉样前体蛋白RNA的干扰RNA，而在其它实施方案中，干扰RNA包括针对早老素2RNA的干扰RNA。在其它实施方案中，干扰RNA针对Psen1、Apo E、InsP3R、Cib1、Ngrn、Zfhx1b、CLU(也称为ApoJ)、PICALM、IDE、GSAP或CR1RNA。
[0032] 预期在一些实施方案中，化合物进一步包括治疗、改善或降低大脑Aβ相关病症的危险或严重性的已知治疗剂。在某些优选实施方案中，已知治疗剂选自由以下组成的组：大麻素、dimebom、泼尼松、布洛芬、萘普生、吲哚美辛；他汀类药物、选择性雌激素受体分子、抗高血压药物、α-阻滞剂、β-阻滞剂、α-β阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、钙通道阻滞剂、利尿剂和抗氧化剂。
[0033] 本发明方法中的所述化合物的外周施用不限于任何具体途径。施用途径包括但不限于经由眼睛(眼用)、口腔(口服)、皮肤(经皮)、鼻子(鼻腔)、肺(吸入剂)、口腔粘膜(颊腔)、耳、注射(例如静脉内、皮下、腹膜内等)和类似途径。在某些优选实施方案中，外周施用包括口服施用。
[0034] 在本发明的方法的一些实施方案中，评估包括精神状态评估。在一些优选实施方案中，评估包括神经心理学测试和大脑成像中的一个或多个。
[0035] 预期在一些实施方案中，本发明提供评估受试者的大脑Aβ病症的危险或存在的方法，包括确定所述受试者的外周组织中的Aβ水平。在一些其它实施方案中，本发明提供监测受试者的大脑Aβ病症的方法，包括确定所述受试者的外周组织中的Aβ水平。在一些实施方案中，外周组织是血液，而在一些实施方案中，外周组织是血清。在一些尤其优选实施方案中，监测包括在多个时间点测量所述外周组织的Aβ。
[0036] 在在上文中公开的方法的优选实施方案中，大脑Aβ病症是阿兹海默病。
[0037] 在一些实施方案中，本发明提供监测受试者的大脑Aβ病症的方法，包括分析所述受试者的外周组织中的基因产物的表达或活性。在某些优选实施方案中，基因产物来自选自由以下组成的组的基因：Psen2、APP、Cib1、Ngrn和Zfhx1b。
[0038] 在一些实施方案中，本发明提供方法，包括以下步骤：针对存在大脑Aβ病症或易患大脑Aβ病症对受试者进行评估，并且外周地施用抑制外周Aβ运输横跨血脑屏障的化合物，其中所述化合物并非抗Aβ抗体。在优选实施方案中，进一步包括针对大脑Aβ病症或大脑Aβ病症的进展来对所述受试者进行评估。在尤其优选实施方案中，大脑Aβ病症是阿兹海默病。
[0039] 在一些实施方案中，本发明提供识别治疗大脑Aβ病症的遗传目标的方法，包括将来自患有或易患所述Aβ病症的第一亲代和具有所述Aβ病症的减少的易感性的第二亲代的后代的肝基因表达概况进行比较，识别在肝中具有一定表达水平的可遗传基因标记，其中相对于所述第一亲代的肝中的表达水平，所述后代的肝中的所述可遗传基因标记的表达增加或减少与来自所述第二亲代的所述基因标记的遗传性相关。
[0040] 在一些实施方案中，本发明包括选自由以下组成的组的化合物：STI-571、伊马替尼对-二氨基甲基苯、N-去甲基伊马替尼、化合物1、化合物2、LY450139、GSI-953、左旋氟比洛芬和E2012化合物或其血脑屏障不可渗透性变体，用于调节具有或易患Aβ病症的受试者的外周组织中的Aβ的产生。在一些实施方案中，Aβ病症是大脑Aβ病症。在尤其优选实施方案中，化合物具有小于2.0的分配系数，更优选地小于1.5并且仍然更优选地小于约1.0。在尤其优选实施方案中，化合物基本上不横越血脑屏障。
[0041] 在一些实施方案中，本发明提供选自由以下组成的组的化合物：STI-571、伊马替尼对-二氨基甲基苯、N-去甲基伊马替尼、化合物1、化合物2、LY450139、GSI-953、左旋氟比洛芬和E2012化合物或其血脑屏障不可渗透性变体，用于调节(例如，抑制)具有或易患Aβ病症的受试者的肝中的Aβ的产生。在一些实施方案中，Aβ病症是大脑Aβ病症。在尤其优选实施方案中，化合物具有小于2.0的分配系数，更优选地小于1.5并且仍然更优选地小于约1.0。在尤其优选实施方案中，化合物基本上不横越血脑屏障。
[0042] 在一些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物的用途：伊马替尼(STI-571)、伊马替尼对-二氨基甲基苯、N-去甲基伊马替尼、WGB-BC-15、化合物1、化合物2、LY450139、GSI-953、左旋氟比洛芬和E2012化合物、其血脑屏障不可渗透性变体和/或其药学上可接受的盐，用于制造药物供调节患有或易患大脑Aβ病症的受试者的外周组织中的Aβ的产生。在优选实施方案中，药物配制用于口服施用。在尤其优选实施方案中，外周组织包括肝。在尤其优选实施方案中，化合物具有小于2.0的分配系数，优选地小于1.5并且仍然更优选地小于约1.0。在尤其优选实施方案中，化合物基本上不横越血脑屏障。在一些优选实施方案中，本发明涉及伊马替尼或其药学上可接受的盐在制造药物中的用途，所述药物用于抑制患有或易患大脑Aβ病症的受试者的肝中的Aβ的产生。
[0043] 本发明还提供如上所述的化合物用于制造药物的用途，所述药物包括治疗大脑Aβ病症的第二治疗剂。在一些实施方案中，第二治疗剂选自伊马替尼(STI-571)、伊马替尼对-二氨基甲基苯、N-去甲基伊马替尼,WGB-BC-15、化合物1、化合物2、LY450139、GSI-953、左旋氟比洛芬和E2012化合物、其血脑屏障不可渗透性变体和/或其药学上可接受的盐。在某些优选实施方案中，第二治疗剂包括选自由以下组成的组的一个或多个药剂：大麻素、dimebom、泼尼松、布洛芬、萘普生、吲哚美辛；他汀类药物、选择性雌激素受体分子、抗高血压药物、α-阻滞剂、β-阻滞剂、α-β阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、钙通道阻滞剂、利尿剂和抗氧化剂。在如上所述的方法和组合物的某些尤其优选实施方案中，化合物包括伊马替尼对-二氨基甲基苯和/或N-去甲基伊马替尼或其药学上可接受的盐。
[0045] 图1A展示将来自受试者小鼠的肝样品中的Psen2 mRNA的量进行比较的图，其与Psen2基因座的小鼠的基因型相比较。
[0046] 图1B展示在来自多达89个重组自交系(RI)谱系的6个组织(任意单位)中，将Psen2基因座基因型(B6/B6或D2/D2)相比于Psen2mRNA浓度进行作图的图。将亲本C57和DBA值在来自RI谱系的那些值附近作图。一些组织具有来自单一RI谱系的数据，这些谱系在Psen2基因座处是杂合的：这些在图中以B6/D2来表示。数据从GeneNetwork.org获得(J.Wang,R.W.Williams,K.F.Manly KF,Neuroinformatics 1,299(2003))。对于肝，表达数据最初以肝荧光信号与每个探针的参考mRNA样品产生的信号的比率来表示。数据使用稳健LOWESS平滑方法来标准化，所述方法在两个通道中调整信号的非线性。然后计算这些比率的对数底2(中值)。-1的值指示肝中的表达是对照中的表达的大约1/2；-2的值指示肝中的表达是对照中的表达的大约1/4等。相反地，+2的值指示肝中的表达比在肝中大4倍。来自40个重组近交系的肝数据集由D.Gatti等人Hepatology 46,548(2007)描述。
对于其它组织，表达值和替代标准化方法如指示(Wang，同上文)。
对于其它组织，表达值和替代标准化方法如指示(Wang，同上文)。
[0047] 图2是STI-571，甲磺酸盐GLEEVECTM)、STI-571变体(“WGB-BC-15”)、化合物 1(PD173955,Moasser等 人 1999,Cancer Research 59:6145-6152；Wisniewski 等 人Cancer Research 2002,62(15):4244-55)和化合物2(PD166326；Wisniewski等人Cancer Research2002,62(15):4244-55)的化学结构图。
[0048] 图3A-3F展示外周施用STI-571对于血浆和全脑中的Aβ水平的效果。野生型B6和D2小鼠(8-12周龄[A-F]或15-18月龄[G,H])通过腹膜内注射每天两次施用药物或媒介物历时7天。图3A展示蛋白质印迹，其展示用盐水媒介物(泳道1、2、9和10)或三个剂量的STI-571处理的年轻D2小鼠的血浆中的Aβ六聚体水平：泳道3、4、11和12展示使用1mg/kg的结果；泳道5、6、13和14展示使用10mg/kg的结果；并且泳道7、8、15和16展示使用100mg/kg的结果；n＝4/组。图3B展示图3A中的蛋白质印迹图像的条形图量化。图3C展示蛋白质印迹，其展示用盐水媒介物或20mg/kg的STI-571处理的年轻B6小鼠的大脑提取物中的Aβ六聚体水平(总共n＝10/组；在蛋白质印迹中只展示n＝5)。图3D展示图3C中的蛋白质印迹图像的条形图量化。图3E和3F展示条形图，其指示用盐水媒介物或20mg/kg的STI-571处理的年老B6小鼠(n＝4/组)的大脑提取物(E)或血浆(F)中的Aβ六聚体水平。
[0049] 图4展示将来自受试者小鼠的肝样品中的Ngrn mRNA的量进行比较的图，其与Ngrn基因座的小鼠的基因型相比较。
[0050] 图5展示在40个重组近交系的肝(任意单位)中，将Cib1(图5A)或Zfhx1b(图5B)基因型(B6/B6、B6/D2或D2/D2)相比于钙整合素结合蛋白(图5A)或Zfhx1b(图5B)mRNA浓度来进行作图的图，如在图1B中。数据从GeneNetwork.org获得(Wang,同上文)；
肝数据集由Gatti同上文描述。
肝数据集由Gatti同上文描述。
[0051] 图6展示将伊马替尼和去甲基伊马替尼对于所治疗细胞中的Aβ浓度的效果进行比较的图。
[0052] 图7展示将伊马替尼、伊马替尼对-二氨基甲基苯3HCl、伊马替尼(吡啶)-N-氧化物和伊马替尼(哌啶)-N-氧化物对于所治疗细胞中的Aβ浓度的效果进行比较的图。
[0053] 图8展示在无细胞测定系统中，将伊马替尼、去甲基伊马替尼和伊马替尼对-二氨基甲基苯对于Abl激酶活性的效果进行比较的图。
[0054] 图9展示选择性图，此图展示在所展示的三个浓度中的每个浓度下，每个化合物的降低Aβ活性的倍数差(与伊马替尼相比)与此化合物的激酶抑制剂活性的倍数差的比率。
[0055] 图10A-D分别展示N-去甲基伊马替尼、伊马替尼对-二氨基甲基苯3HCl、伊马替尼(吡啶)-N-氧化物和伊马替尼(哌啶)-N-氧化物的结构。
[0056] 定义
[0057] 如本文使用，术语“受试者”和“患者”可互换使用。如本文使用，术语“受试者”和“受试者”涉及动物，优选地哺乳动物包括非灵长类动物(例如牛、猪、马、驴、山羊、骆驼、猫、犬、豚鼠、大鼠、小鼠、绵羊)和灵长类动物(例如，猴，如食蟹猴、大猩猩、黑猩猩、和人)，优选地人。在一个实施方案中，受试者是患有阿兹海默病(AD)的受试者。
[0058] 如本文使用，术语“Aβ相关病症”或“Aβ病症”是涉及Aβ水平异常或失调的疾病(例如，阿兹海默病)或病状(例如，老年痴呆)。Aβ相关病症包括但不限于AD、脑创伤相关淀粉样蛋白病症、唐氏综合征和包涵体肌炎。
[0059] 如本文使用，术语“处于疾病危险中”是指易患特定疾病的受试者(例如，人)。此易患病体质可为遗传性的(例如，经历疾病如可遗传病症的特定遗传倾向)，或归因于其它因素(例如，年龄、体重、环境条件、暴露于环境中存在的有害化合物等)。因此，不希望本发明限于任何特定危险，也不希望本发明限于任何特定疾病。
[0060] 如本文使用，术语“遭受疾病”是指经历特定疾病或诊断患有特定疾病的受试者(例如，人)。不希望本发明限于任何特定体征或症状，也不限于疾病。因此，预期本发明涵盖经历任何范围疾病(例如，从亚临床表现到全面疾病)的受试者，其中受试者表现与特定疾病相关的至少一些征象(例如，体征和症状)。
[0061] 如本文使用，术语“疾病”和“病理状况”可互换使用以描述与活动物或任何其器官或组织的正常状态的任何障碍相关的状态、体征和/或症状，这种障碍中断或限定正常功能的执行，并且可以是对于环境因素(如情绪创伤、物理创伤、营养失调、工业危险或气候)、特定传染物(如蠕虫、细菌或病毒)、有机体的固有缺陷(如各种遗传异常，或这些因素和其它因素的组合所发生的反应。
[0062] 如本文使用，术语“患有AD的受试者”或“显示指示AD的体征或症状或病状的受试者”或“怀疑显示指示AD的体征或症状或病状的受试者”是指基于已知AD体征、症状和病状被识别或被诊断为患有或可能患有AD的受试者。
[0063] 如本文使用，术语“处于显示指示AD的病状的危险的受试者”和“处于AD危险的”受试者是指受试者被识别为处于患上AD的危险。
[0064] 如本文使用，术语“AD治疗剂”是指用于治疗或预防AD的药剂。这类药剂包括但不限于小分子、药物、抗体、药品等。
[0065] 如本文使用，术语“认知功能”总体上是指思维、推理、专注或记忆的能力。因此，术语“认知功能下降”是指思维、推理、专注或记忆的能力退化缺乏。
[0066] 如本文使用，术语“调节(modulate)”“调节(modulates)”“调节(modulated)”或“调节(modulation)”应具有其通常的含义，并且涵盖措词“增强”、“促进”、“增加”、“促效”、“抑制”、“降低”或“拮抗”的含义。例如酶活性，如γ-分泌酶活性的调节剂可直接起作用，即，通过与具有将要被调节的活性的酶直接相互作用，或它可间接地起作用，即.，没有与酶直接相互作用，但是经由可导致活性得以调节的途径。
[0067] 如本文使用，术语“针对AD来对受试者进行评估”是指执行一个或多个试验以确定，例如，受试者的AD的存在或进展，或受试者的患上AD的危险。针对AD来对受试者进行评估和/或区分阿兹海默病与记忆丧失的其它原因，可包括评估以下各项中的一个或多个：
[0068] 1.病史，包括评估受试者的一般健康状况和过去医疗问题、受试者可在执行每日活动时发生的问题
[0069] 2.基本医学试验，包括例如排除痴呆的其它潜在原因，如甲状腺病症或维生素缺乏的血液试验。
[0070] 3.精神状态评估，例如屏幕记忆、问题解决能力、注意跨度、计算技能和语言。
[0071] 4.神经心理学测试，包括记忆的更广泛评估、问题解决能力、注意跨度、计算技能和语言。
[0073] 如本文使用，“激动剂”是直接或间接地作用于分子以产生药理学效果的任何化合物，而“拮抗剂”是直接或间接地作用于分子以减少药理学效果的任何化合物。
[0074] 术语“样品”和“样本”以其最广泛含义来使用并且涵盖从任何来源获得的样品或样本。如本文使用，术语“样品”用于指从动物(包括人)获得的生物样品，并且涵盖流体、固体、组织和气体。在本发明的一些实施方案中，生物样品包括神经组织(例如，大脑组织)脑脊液(CSF)、浆液、尿液、唾液、血液和血液产物如血浆、血清等。然而，这些实例不应理解为限制适用于本发明的样品的类型。
[0075] 如本文使用，术语“血脑屏障”指中枢神经系统(CNS)中的结构，这种结构限制各种化学物质和微观对象(例如细菌)在血液与神经组织之间的传送。血脑屏障“内部”和“外部”的方向指示是指物体分别处于血脑屏障的大脑/神经组织侧，或血脑屏障的非大脑/神经侧。
[0076] 如本文使用，如关于材料或化合物(例如，药物)所使用的术语“血脑屏障不可渗透性变体”是指化合物变体，与亲本或参考化合物的渗透性比较，这种化合物变体在外周地施用至受试者时渗透血脑屏障的能力得以降低，以使得例如变体基本上不渗透所施用的受试者的血脑屏障。如下讨论，化合物横越血脑屏障的能力可通过在本领域中已知的许多方法中的任何一种来表征，例如通过体内或体外测试、通过计算模型或通过相对于与血脑屏障可透性相关的特征例如尺寸、电荷等来对化合物进行表征(例如，通过物理测试或计算模型)。
[0077] 确定或评估药物的大脑/CNS吸收的方法包括体内方法(例如，静脉内或颈动脉注射，随后进行大脑采样或成像)、使用例如分离大脑微血管或细胞培养物模型的体外方法，以及通常基于像分子量和亲油性这样的因素的计算(硅片上)预测方法。参见例如以引用方式并入本文的U.Bickel,NeuroRx.2005年1月；2(1):15-26，以获得测量跨越血脑屏障的药物转运的方法的综述和比较。
[0078] 化合物的亲油性/亲水性总体上与化合物进入大脑的速率和程度相关。药物的亲油性/亲水性经常以分配系数来表示，其代表在不可混合的有机/水性溶剂系统中分溶时药物的特性。1-辛醇/水分配系统已经广泛用于评估化合物横越血脑屏障的能力。1-辛醇/水分配系数“log P”长期用作亲油性的描述信息，并且提供经过计算的log P值，如Clog P和Mlog P的计算机算法经常密切匹配实验测量值(在约0.3对数单位内；Bickel，同上文)。对于可电离分子来说，使用分配系数，即经过限定的pH(通常7.4的生理血浆pH值)下的log P值。如果logP和pKa是已知的，那么log D(对数分配系数)可使用Henderson-Hasselbalch方程来获得。经常引用pH7.4下的Log D来给出在血浆pH下的药物的亲油性的指示。
[0079] Hansch和同事已经确定具有约2的log P的药物总体上易于进入中枢神经系统(Hansch等人1987,J.Pharm.Sci.76(9):663-687，其以引用方式并入本文)，并且更具有亲水性，以使得其具有低log P值(例如，约1)的药物总体上具有降低的进入CNS的能力。这一观察结果已经应用于改进药物以减少CNS渗透性作为控制例如CNS中毒或副作用的手段。例如心脏药物ARL-57的CNS渗透性。此药物被认为是极好的强心药，但是不可用于患者，因为它导致人“亮丽的色彩视觉”。ARL-57在pH8下具有log P＝2.59。产生此物质的更具有亲水性的变体，ARL115，(硫马唑(sulmazole)；在pH8下，log P＝1.17；计算值1.82)并且发现所述变体没有CNS副作用，证明改变亲油性/亲水性可用作改变例如减少)血脑屏障的药物渗透性的手段(Hansch，等人，同上文)。
[0080] 甲磺酸伊马替尼的分配系数(log P)在25℃和37℃下分别计算为1.198和1.267(Velpandian等人,Journal of Chromatography B,804(2):431-434(2004))。此log P值与数据一致，显示伊马替尼基本上不渗透血脑屏障。
[0081] 如关于受试者组织中或其上的位置所使用的术语“外周(peripheral)”和“外周(periphera)”涉及血脑屏障以外的受试者的所有位置和组织。
[0082] 如本文使用，短语“基本上不横越血脑屏障”或“基本上不渗透血脑屏障”是指如下材料或化合物，例如GLEEVEC甲磺酸伊马替尼(STI-571)，如果施用于外周组织或口服，这些材料或化合物完全地不存在于CNS采样(例如，大脑组织、脑脊液)中，或以发现于外周组织中的浓度的较小百分比存在于CNS采样中，例如，发现于外周组织中的浓度的小于约10％、优选地小于约5％，并且更优选地小于约2％。举例来说，GLEEVEC/STI-571具有血脑屏障的不佳渗透性，如药物的脑脊髓液(CSF)水平比在血液中的水平低92倍的STI-571处理白血病患者中所展示(Takayama N,Sato N,O'Brien SG,Ikeda Y,Okamoto S.Br J Haematol.119:106-108,2002)。因此，GLEEVEC/STI-571甲磺酸伊马替尼基本上不渗透血脑屏障。
[0084] 如本文使用，化合物的“足够量”，或“足以...的化合物的量”是指至少含有为了获得预定结果所需要的最小量的量。这些量可常规由本领域技术人员基于来自研究的数据、使用分析方法如本文公开的那些方法来确定。
[0085] 如本文使用，术语“约”是指在10至15％内，优选地在5至10％内。
[0086] 如本文使用，术语“控制(manage)”、“控制(managing)”和“控制(management)”是指受试者从不引起疾病治愈的化合物中获得的有利效果，所述化合物如降低细胞或组织展示的Aβ水平的化合物。在某些实施方案中，向受试者施用一个或多个这类药剂以“控制”病症以便预防或减慢病症的进展或恶化。
[0087] 如 本 文 使 用，术 语“预 防(prevent)”、“预 防(preventing)”和“预 防(prevention)”是指阻碍受试者的Aβ相关病症或Aβ相关病症的一个或多个症状的复发或发作。
[0088] 如本文使用，“协议”包括给药日程和给药方案。本文中的协议是使用方法并且包括预防和治疗协议。
[0089] 如本文使用，术语“施用(administration)”和“施用(administering)”是指将药物、前药或其它药剂，或治疗性疗法(例如，本发明的组合物)给予受试者(例如，受试者或体内、体外或离体细胞、组织和器官)的行为。施用至人体的示例性途径可经由眼睛(眼用)、嘴(口腔)、皮肤(表面或经皮)、鼻(鼻腔)、肺(吸入剂)、口腔粘膜(口腔)、耳、直肠、阴道、注射(例如静脉内、皮下、瘤内、腹膜内等)和类似途径。“外周施用”是指在血脑屏障外部给予的任何施用途径。
[0090] 如 本 文 使 用，术 语“共 同 施 用(co-administration)”和“共 同 施 用(co-administering)”是指将至少两种药剂(例如，包含STI-571、N-去甲基伊马替尼、伊马替尼对-二氨基甲基苯和一个或多个其它药剂例如Aβ相关疾病治疗剂的组合物)或疗法施用至受试者。在一些实施方案中，两个或更多个药剂或疗法的共同施用是同时发生的。在其它实施方案中，第一个药剂/疗法在第二个药剂/疗法之前施用。本领域技术人员了解所使用的各种药剂或疗法的制剂和/或施用途径可变化。共同施用的适当剂量可容易由本领域技术人员确定。在一些实施方案中，当药剂或疗法共同施用时，相应药剂或疗法以比用于其单独施用的适当剂量低的剂量来施用。因此，共同施用在以下实施方案中是尤其合乎需要的，其中药剂或疗法的共同施用降低潜在有害(例如，毒性)药剂的必需剂量，和/或两种或更多种药剂的共同施用经由另一种药剂的共同施用而导致受试者对于一种药剂的有利效果的敏感化。
[0091] 如本文使用，术语“治疗(treat)”和“治疗(treating)”包括施用疗法以预防、治愈或减轻/预防与特定病症、疾病、损伤或病状相关的症状。
[0092] 如本文使用，术语“治疗”或语法等效物涵盖改善和/或逆转疾病(例如，Aβ相关疾病，如阿兹海默病)的症状。因此，在用于本发明的筛查方法中时，导致与疾病相关的任何参数的改善的化合物可识别为治疗性化合物。术语“治疗”是指治疗性治疗和预防或防范措施。举例来说，可受益于用本发明的组合物和方法来治疗的那些人包括已经患有疾病和/或病症(例如，Aβ相关疾病，或与Aβ相关疾病一致的症状或病状)的那些人以及疾病和/或病症将要(例如，使用本发明的预防性疗法)预防的那些人。
[0093] 术语“化合物”是指可用于治疗或预防疾病、病情、患病或身体功能病症的任何化学实体、药物、药品等。如本文使用，化合物可为单一组合物(例如，化学品的纯制剂)或它可为包含多种化学品(例如，一种或多种有效药剂和一种或多种惰性剂)的组合物。化合物可包括已知和潜在治疗组合物。化合物可使用本发明的筛查方法来筛查以确定为治疗剂。
[0094] “已知治疗”化合物或药剂包括已经证明(例如，经由动物试验或施用至人的以前经验)在治疗中具有治疗效果的治疗化合物。然而，已知治疗化合物不限于在治疗或预防疾病(例如，Aβ相关疾病)中具有特定有效性水平的化合物，并且包括例如数据暗示存在一些有利效果并且几乎没有负效应的化合物(例如，总体上公认为安全的化合物，如食品提取物和保健食品化合物)。在单独或与其它化合物或疗法组合使用时，用于治疗、改善或减少危险或严重性Aβ相关疾病(例如阿兹海默病)的已知治疗剂的实例包括但不限于大麻素(参见例如Ramirez等人The Journal of Neuroscience,February23,2005,25(8):1904-1913)；dimebom(参见例如RS Doody等人The Lancet372:207-215(2008)；抗炎症剂如泼尼松(类固醇)和非类固醇消炎药(NSAID)，包括但不限于布洛芬、萘普生、吲哚美辛；胆固醇降低和/或心脏保护药物如他汀类药物，例如，阿托伐他汀
、西伐他汀 、氟伐他汀(例如， )、美伐他汀、匹伐他汀(例如
)、普伐他汀(例如， )、罗苏伐他汀(例如，
)和辛伐他汀(例如， )；选择性雌激素受体分子(SERM)，例如，雷洛昔芬
；抗高血压药物，包括α-阻滞剂、β-阻滞剂、α-β阻滞剂、血管紧张素转
化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂(ARB，如缬沙坦(例如， ))、钙通道阻滞
剂和利尿剂(参见例如I Hajjar等人The Journals of Gerontology Series A:Biological Sciences and Medical Sciences60:67-73(2005))；和抗氧化剂如大蒜提取物、姜黄素、褪黑素、白藜芦醇、银杏提取物、绿茶、维生素C和维生素E(参见例如B Frank等人Ann Clin Psychiatry17(4):269-86(2005)。
、西伐他汀 、氟伐他汀(例如， )、美伐他汀、匹伐他汀(例如
)、普伐他汀(例如， )、罗苏伐他汀(例如，
)和辛伐他汀(例如， )；选择性雌激素受体分子(SERM)，例如，雷洛昔芬
；抗高血压药物，包括α-阻滞剂、β-阻滞剂、α-β阻滞剂、血管紧张素转
化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂(ARB，如缬沙坦(例如， ))、钙通道阻滞
剂和利尿剂(参见例如I Hajjar等人The Journals of Gerontology Series A:Biological Sciences and Medical Sciences60:67-73(2005))；和抗氧化剂如大蒜提取物、姜黄素、褪黑素、白藜芦醇、银杏提取物、绿茶、维生素C和维生素E(参见例如B Frank等人Ann Clin Psychiatry17(4):269-86(2005)。
[0095] 如本文使用，术语“小分子”总体上是指小于约10kDa分子量的分子，包括但是不限于天然或合成有机或无机化合物、肽、(聚)核苷酸、(寡)糖等。小分子尤其包括较小非聚合物(即并非肽或多肽)有机和无机分子。
[0096] 如本文使用，术语“提取物”和类似术语是指将一种或多种组分从其天然来源分离且/或纯化的过程，或在用作名词时，是指通过这类过程产生的组合物。
[0097] 如本文使用，术语“试剂盒”是指用于输送材料的任何输送系统。在激酶活性或抑制测定的情况下，这类输送系统包括允许存储、运输或将反应试剂和/或支持材料(例如，缓冲剂、执行测定的书面指令等)从一个位置输送至另一个位置的系统。举例来说，试剂盒包括一个或多个套罩(例如，盒)，其含有相关反应试剂和/或支持材料。如本文使用，术语“零散试剂盒”是指包括两个或更多个单独容器的输送系统，每个容器含有全部试剂盒组分的子部分。这些容器可共同或单独输送至预定接受者。举例来说，第一容器可含有用于测定的酶，而第二容器含有用于与试验化合物比较的标准。术语“零散试剂盒”欲涵盖含有根据联邦食品、药物和化妆品法(Federal Food,Drug,and Cosmetic Act)的部分520(e)来管理的分析物特效试剂(ASR)的试剂盒，但是不限于此。事实上，包含各自含有全部试剂盒组分的子部分的两个或更多个单独容器的任何输送系统包括于术语“零散试剂盒”中。相比之下，“组合试剂盒”是指将反应测定的所有组分包含于单一容器(例如，容纳每个所需组分的单一盒)的输送系统。术语“试剂盒”包括零散和组合试剂盒。
[0098] 如本文使用，术语“毒性”是指与施用毒物之前的相同细胞或组织相比，对于受试者、细胞或组织的任何不利或有害效果。
[0099] 如本文使用，术语“药学纯化”是指用于药物用途的足够制备纯度或质量的组合物。
[0100] 如本文使用，术语“纯化”是指处理起始组合物以移除至少一种其它组分(例如，来自起始组合物(例如，植物或动物组织、环境样品等)的另一种组分、污染物、合成前体或副产物等)，以使得纯化组分与移除组分的比率大于起始组合物中的比率。
[0101] 如本文使用，术语“药物组合物”是指活性剂(例如，包含γ-分泌酶活性调节剂的组合物)与惰性或活性载体的组合，使得组合物尤其适合于体外、体内或离体诊断或治疗用途。
[0102] 如本文使用，术语“药学上可接受”或“药理上可接受”是指在施用至受试者时基本上不产生不利反应，例如毒性、过敏或免疫反应的组合物。
[0103] 如本文使用，术语“药学上可接受的载体”是指任何标准药物载体，包括但不限于磷酸缓冲盐水溶液、水、乳液(例如、如油/水或水/油乳液)和各种类型的润湿剂、任何和所有溶剂、分散介质、涂料、月桂基硫酸钠、等渗和吸收延缓剂、崩解剂(例如、马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)等。组合物还可包括稳定剂和防腐剂。例如载体、稳定剂和佐剂。(参见 例如Martin,Remington's Pharmaceutical Sciences,15th Ed.,Mack Publ.Co.,Easton,Pa.(1975)，以引用方式并入本文)。
[0104] 如本文使用，术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的任何盐(例如，通过与酸或碱反应来获得)，其在目标受试者(例如，哺乳动物受试者，和/或体内或离体、细胞、组织或器官)中生理耐受。本发明化合物的“盐”可从无机或有机酸和碱来获得。实例酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、反丁烯二酸、马来酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、酒石酸、醋酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸等。其它酸，如草酸，虽然本身是药学上不可接受的，但是可用于制备盐，这些盐可在获得本发明的化合物和其药学上可接受的酸加成盐中用作中间物。
[0105] 碱的实例包括但不限于碱金属(例如，钠)氢氧化物、碱土金属(例如，镁)氢氧+化物、氨和式NW4 化合物，其中W是C1-4烷基等。
[0106] 盐的实例包括但不限于：醋酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡萄糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一酸盐等。盐的其它实例包括与合适阳+ + +离子如Na、NH4 和NW4(其中W是C1-4烷基)等复合的本发明化合物的阴离子。对于治疗用途，本发明化合物的盐预期为药学上可接受的。然而，非药学上可接受的酸和碱的盐也可适用于例如制备或纯化药学上可接受的化合物。
[0107] 对于治疗用途，本发明化合物的盐预期为药学上可接受的。然而，非药学上可接受的酸和碱的盐也可适用于例如制备或纯化药学上可接受的化合物。在本发明的一些实施例中，药物组合物包括选自由以下组成的组的形式：粉末、溶液、乳液、胶粒、脂质体、凝胶和膏剂形式。在一些实施方案中，药物组合物包括片剂或填充胶囊，其中所述片剂或填充胶囊任选地包括肠溶包衣材料。
[0108] 如本文使用，术语“赋形剂”是指添加至活性成分制剂的无活性成分(即，并非药学活性)。
[0109] 术语“基因”是指核酸(例如，DNA)序列，其包含产生多肽、前体或RNA(例如，rRNA、tRNA)所需要的编码序列。多肽可由全长编码序列或编码序列的任何部分来编码，只要全长或片段的所需活性或功能性质(例如，酶活性、配体结合、信号转导、免疫原性等)得以保留。此术语也涵盖结构基因的编码区域以及与编码区域相邻位于5'和3'末端上、在任一个末端上达约1kb或更长的距离的序列，以使得基因对应于全长mRNA的长度。位于编码区域的5'并且存在于mRNA上的序列被称为5'非翻译序列。位于编码区域的3'或下游并且存在于mRNA上的序列被称为3'非翻译序列。术语“基因”涵盖基因的cDNA和基因组形式。基因的基因组形式或克隆含有以被称为“内含子”或“插入区域”或“插入序列”的非编码序列来间断的编码区域。内含子是转录至核RNA(hnRNA)中的基因节段；内含子可含有调控元件如增强子。内含子从核或原始转录物中移除或“剪除”；因此，内含子不存在于信使RNA(mRNA)转录物中。mRNA在翻译期间起作用以指定新生多肽中的氨基酸的序列或顺序。
[0110] 如本文使用，术语“基因表达”和“表达”是指经由基因“转录”(即，经由RNA聚合酶的酶促作用)将在基因中编码的遗传信息转化成RNA(例如，mRNA、rRNA、tRNA或snRNA)的过程，并且对于蛋白质编码基因来说，经由mRNA“翻译”来转化成蛋白质的过程。基因表达可在此过程中的许多阶段加以调控。“上调”或“活化”是指增加和/或增强基因表达产物(例如，RNA或蛋白质)的产生的调控，而“下调”或“抑制”是指减少产生的调控。涉及上调或下调的分子(例如，转录因子)通常分别称为“活化剂”和“抑制剂”。
[0111] 除了含有内含子以外，基因的基因组形式还可包括位于RNA转录物上存在的5'和3'末端序列上的序列。这些序列被称为“侧接”序列或区域(这些侧接序列位于存在于mRNA转录物上的非翻译序列5'或3')。5'侧接区域可含有控制或影响基因转录的调控序列如启动子和增强子。3'侧接区域可含有引导转录终止、转录后裂解和多聚腺苷酸化的序列。
[0112] 术语“野生型”是指从天然发生的来源分离的基因或基因产物。野生型基因是在群体中最经常观察到的基因，因此任意设计成基因的“正常”或“野生型”形式。相反，术语“修饰”或“突变体”是指与野生型基因或基因产物相比，展示序列和或功能性质变化(即，改变特性)的基因或基因产物。应注意天然发生的突变体可予以分离；这些突变体通过以下事实来识别：与野生型基因或基因产物相比，其具有改变的特性(包括改变的核酸序列)。
[0113] 如本文使用，术语“核酸分子编码”、“DNA序列编码”和“DNA编码”是指沿着脱氧核糖核酸链的脱氧核糖核苷酸的顺序或序列。这些脱氧核糖核苷酸的顺序确定沿着多肽(蛋白质)链的氨基酸顺序。因此，DNA序列编码氨基酸序列。
[0114] 如使用，术语“真核生物”是指可与“原核生物”区分的生物体。预期此术语涵盖细胞展现真核生物的通常特性的所有生物体，这些特性诸如存在由核膜界定的真实细胞核(在所述核膜内安置有染色体)、存在膜结合细胞器，和在真核生物体中通常观察到的其它特性。因此，此术语包括但不限于诸如真菌、原生动物和动物(例如，人)的生物体。
[0115] 如本文使用，术语“体外”是指人为环境和在人为环境内发生的过程或反应。体外环境可由但是不限于试管和细胞培养物组成。术语“体内”是指自然环境(例如，动物或细胞)和在自然环境内发生的过程或反应。
[0116] 术语“试验化合物”和“候选化合物”是指候选用于治疗或预防疾病、病情、患病或身体功能病症(例如，认知功能、淀粉样蛋白相关病症、循环、高血压、心脏病等)的任何化学实体、药物、药品等。试验化合物包括已知和潜在治疗化合物。试验化合物可使用本发明的筛查方法来筛查以确定为治疗剂。
[0117] 如本文使用，“功能”分子是呈一定形式的分子，在这种形式下它表现出它藉以表征的特性。举例来说，功能酶是表现出此酶藉以表征的特性催化活性的酶。
[0118] 如本文使用，术语“反义寡核苷酸”是指与目标RNA(或其片段)的序列互补的核酸，例如，RNA或DNA节段。典型地，目标RNA是由细胞表达的mRNA。
[0119] 如本文使用，术语“干扰寡核苷酸”是指能够抑制目标基因产物的功能的寡核苷酸，不论抑制机制为何。如本文使用，干扰寡核苷酸包括但不限于反义寡核苷酸、适体、小分子RNA(miRNA)、短干扰RNA(siRNA)和短发夹RNA(shRNA)短干扰RNA通常由总体上19-22nt的双链RNA分子组成，而短发夹RNA由回文序列组成，这些回文序列通过总体上19-29nt的循环序列连接。产生干扰寡核苷酸的方法为本领域技术人员熟知，并且包括但不限于化学合成、重组DNA技术或使用酶裂解，例如通过Dicer酶而由较大前体分子产生。
[0120] 如本文使用，术语“抗体”是指包括抗原识别部位的免疫球蛋白或免疫球蛋白衍生蛋白。抗体包括但不限于包含两个重链和两个轻链的天然或重组免疫球蛋白，以及包括一部分重链和轻链的不同组合的修饰形式，包括例如片段抗体和单链抗体。此术语包括多克隆和单克隆抗体。
[0121] 如本文使用，术语“减少激酶抑制伊马替尼衍生物”是指与伊马替尼例如伊马替尼对-二氨基甲基苯和N-去甲基伊马替尼相比，具有降低蛋白激酶活性的伊马替尼相关化合物。这些伊马替尼衍生物不一定从作为起始材料的伊马替尼获得，并且此术语涵盖例如通过化学合成产生的伊马替尼的变体。
[0122] 发明详述
[0123] 本发明的具体实施方案描述于此发明详述和发明概述中，其通过引用并入本文。虽然已结合特定实施方案描述了本发明，但应理解的是，要求保护的本发明不应不适当地局限于所述特定实施方案。举例来说，本发明的方法和组合物结合γ-分泌酶活性的具体调节剂例如GLEEVEC(STI-571)甲磺酸伊马替尼和具体大脑淀粉样病症(例如阿兹海默病)来描述。应了解本发明不限于使用或包括甲磺酸伊马替尼的方法或组合物，或AD。本发明涉及减少激酶抑制伊马替尼衍生物在治疗Aβ相关病症中的用途。
[0124] 本发明部分地基于申请人的意外发现：调节外周组织例如肝中的Aβ表达或积聚在大脑的Aβ相关疾病例如阿兹海默病中提供治疗效果。因此，本发明总体上涉及经由施用调节非神经(即外周)细胞、流体和/或组织中的Aβ产生和/或积聚的化合物来预防或治疗大脑Aβ相关病症如AD的方法和组合物。
[0125] 如以上讨论，β淀粉样(Aβ)肽是淀粉样前体蛋白(APP)的代谢物，并且被认为是阿兹海默病(AD)的主要病理决定因素。APP通过β和γ-分泌酶来蛋白水解以产生Aβ肽，其中42残基形式的Aβ被认为是最具有致病性的。β-分泌酶为健康大脑功能所需要，因此它是为了减少Aβ而加以抑制的不佳候选物。许多大脑渗透性γ-分泌酶抑制剂由于干扰对于其它目标，尤其Notch家族跨膜受体的γ-分泌酶作用而导致展示不合需要的副作用。已经发现一类化合物减少Aβ产生而不影响Notch信号转导。这类化合物包括酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼(STI-571，商品名称GLEEVEC)和相关化合物，6-(2,6-二氯苯基)-8-甲基-2-(甲基硫基苯基-氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮，其被称为抑制剂2(Netzer WJ等人Proc Natl Acad Sci U S A.100:12444-12449,2003)。然而，此类化合物不再作为大脑Aβ病症的疗法而予以考虑，因为它不横越血脑屏障，因此非常难以输送至大脑组织。
[0126] 如以上提及，我们已经发现调节外周组织例如肝中的Aβ产生或积聚在大脑的Aβ相关疾病例如阿兹海默病中提供治疗效果。本发明提供涉及通过治疗受试者的肝来治疗或预防AD的方法、组合物和过程。具体地说，本发明涉及改变受试者的肝中的Aβ产生、处理、积聚或运输，方法是直接抑制产生(例如，通过抑制APP的表达)，或通过调节一种因子，进而调节肝中的Aβ的产生、处理、积聚或运输。在优选实施方案中，抑制是经由使用基本上不横越血脑屏障的化合物来实现的。在尤其优选实施方案中，用于治疗的组合物和方法包括使用外周地例如口服施用的STI-571或其药学上可接受的盐。在进一步尤其优选实施方案中，用于治疗的组合物和方法包括使用外周地例如口服施用的减少激酶抑制伊马替尼衍生物或其药学上可接受的盐。在仍进一步优选实施方案中，伊马替尼衍生物选自由以下组成的组：N-去甲基伊马替尼和伊马替尼对-二氨基苯组合物如三盐酸盐。
[0127] 组合物在制造药物中的用途
[0128] 伊马替尼是下式I的化合物4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)苯基]-苯甲酰胺的通用名称[国际非专有名称]：
[0129]
[0130] STI-571总体上是指伊马替尼甲磺酸盐，并且已经批准用于治疗慢性骨髓性白血病和胃肠间质肿瘤。伊马替尼在治疗乳腺癌中的用途描述于WO 2004/032925。伊马替尼、其制造、其药学上可接受的盐例如酸加成盐，和其蛋白激酶抑制性质描述于美国专利号5,521,184中，所述专利通过引用并入本文。“伊马替尼”对应于呈游离碱或甲磺酸盐形式的
4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)苯基]-苯甲酰胺。伊马替尼的制备和其用途描述于欧洲专利申请EP-A-O 564 409的实例21中，所述专利通过引用并入本文。
4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)苯基]-苯甲酰胺。伊马替尼的制备和其用途描述于欧洲专利申请EP-A-O 564 409的实例21中，所述专利通过引用并入本文。
[0131] N-去甲基伊马替尼，也称为伊马替尼的N-去甲基化哌嗪衍生物，是具有图10A所示结构的伊马替尼的活性代谢物。
[0132] 伊马替尼对-二氨基甲基苯是具有图10B所示结构的变体。
[0133] 虽然外周施用不限于任何具体施用途径，但是在一些优选实施方案中，施用是口服。因此，在一些优选实施方案中，本发明包括STI-571和/或减少激酶抑制伊马替尼衍生物在制备用于治疗或预防大脑Aβ病症的口服施用药物中的用途。在一些实施方案中，口服施用形式包括片剂，而在一些实施方案中，口服施用形式包括胶囊。
[0134] 在优选实施方案中，本发明包括制备包含有效量的伊马替尼和/或减少激酶抑制伊马替尼衍生物的片剂或胶囊来减少大脑中的Aβ水平。举例来说，胶囊或片剂可包括100至1000mg活性剂(例如，伊马替尼或其衍生物)。.举例来说，片剂或胶囊可包括100、
200、300、400、500、600、700、800、900或1000mg，或其之间的任何便利的剂量(例如，125mg、
150mg、175mg、225mg、250mg...975mg等)。在一些实施方案中，片剂或胶囊被配置来含有较小有效剂量的伊马替尼或减少激酶抑制伊马替尼衍生物，例如，1至5mg(例如，1、2、3、4或
5mg，或其便利的分数量)、6至10mg、11至15mg等。
200、300、400、500、600、700、800、900或1000mg，或其之间的任何便利的剂量(例如，125mg、
150mg、175mg、225mg、250mg...975mg等)。在一些实施方案中，片剂或胶囊被配置来含有较小有效剂量的伊马替尼或减少激酶抑制伊马替尼衍生物，例如，1至5mg(例如，1、2、3、4或
5mg，或其便利的分数量)、6至10mg、11至15mg等。
[0135] 用于口腔施用的组合物和制剂包括，例如，粉末或颗粒、水或非水介质中的悬浮液或溶液、胶囊、囊剂糯米纸囊剂、可溶性条带和片剂。增稠剂、调味剂、稀释剂、乳化剂、分散助剂或结合剂可为需要的。在优选实施方案中，片剂或胶囊(或其它形式的外周施用)被配置来输送1与1000mg之间的任何完整整数mg量(例如，1、2、3、4、5等)，或1与1000mg之间的任何分数mg量的剂量或等效量。在某些实施方案中，制剂可包括例如用组合物的混合物填充的胶囊。
[0136]
[0137] 在一些实施方案中，胶囊或片剂包括肠溶包衣。“肠溶”是指小肠，因此“肠溶包衣”总体上是指基本上防止在它到达小肠之前释放药物的涂层。虽然不将本发明限于任何具体作用机制，但是应了解大多数肠溶包衣通过呈现表面来起作用，这种表面在酸性pH下稳定但是在较高pH下快速分解。
[0138] 肠胃外施用的组合物和制剂可包括无菌水溶液，这些溶液还可含有缓冲剂、稀释剂和其它合适添加剂诸如但不限于载体化合物和其它药学上可接受的载体或赋形剂。
[0139] 可方便地以单位剂型呈现的本发明的药物制剂可根据制药工业熟知的常规技术来制备。这类技术包括使活性成分与药物载体或赋形剂缔合的步骤。总体上，制备制剂的方法是通过均匀并且紧密地使活性成分与液体载体或细碎固体载体或两者缔合，然后，如果有必要，使产物成形。
[0140] 甲磺酸伊马替尼(GLEEVEC)的药代动力学已经在健康受试者的研究以及群体药代动力学研究中评估。伊马替尼在口服施用之后完全吸收，C最大在给药后2-4小时获得。平均绝对生物利用率是98％。在健康志愿者中口服施用之后，伊马替尼和其主要活性代谢物N-去甲基衍生物的消除半衰期分别为近似18和40小时。平均伊马替尼AUC(血浆药物浓度相比于时间曲线下方面积)随着25mg-1000mg范围内的剂量递增而按比例增加。在重复给药后，伊马替尼的药代动力学没有显著变化，并且在每日一次给药时，积聚在稳态下为1.5-2.5倍。在伊马替尼的临床相关浓度下，体外实验中的结合至血浆蛋白质约为95％，主要地结合至白蛋白和α1-酸糖蛋白。参见例如"Gleevec Prescribing Information"2003revision T2003-09；Printed in U.S.A.89019001(Novartis)。
[0141] CYP3A4是负责代谢伊马替尼的主要酶。其它细胞色素P450酶，如CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9和CYP2C19，在其代谢中发挥次要作用。人体内的主要循环活性代谢物是主要由CYP3A4形成的N-去甲基化哌嗪衍生物，N-去甲基伊马替尼。它展示类似于亲本伊马替尼的体外效力。此代谢物的血浆AUC是伊马替尼的AUC的约15％。
[0142] 消除主要在粪便中，大多呈代谢物形式。基于口服14C-标记剂量的伊马替尼之后化合物的回收，剂量的近似81％在7天内，在粪便(68％剂量)和尿液(13％剂量)中消除。未变化的伊马替尼占剂量的25％(5％尿液，20％粪便)，其余部分是代谢物.
[0143] 典型地，重50kg的50岁患者中的伊马替尼的清除率预期是8L/h，而对于重100kg的50岁患者，清除率增加至14L/h。然而，清除率的40％的患者间变化性并不证明需要基于体重和/或年龄来调整初始剂量，但是指示需要严密监测治疗相关毒性。
[0144] 如在成人患者中，据报告伊马替尼在小儿患者中口腔施用之后快速吸收，并且C最大为2-4小时。表观口服清除率类似于成人值(儿童中的11.0L/hr/m2相对于成人中的10.0L/hr/m2)，如同半衰期一样(儿童中的14.8小时相对于成人中的17.1小时)。260mg/m2和340mg/m2的儿童给药实现类似于成人中的400-mg剂量的AUC。在重复每日一次给药之后，在260mg/m2和340mg/m2剂量水平下，第8天相比于第1天的AUC(0-24)的比较分别显示1.5和2.2倍药物积聚。平均伊马替尼AUC未随着剂量递增而按比例增加。"Gleevec Prescribing Information"2003revision T2003-09；Printed in U.S.A.89019001(Novartis).
[0145] 虽然通过用伊马替尼治疗来调节肝中的Aβ产生用作以上实施例，但是本发明不限于用此化合物来治疗肝，并且提供针对受试者的大脑Aβ病症或易患大脑Aβ病症来对受试者进行治疗的一般方法，包括外周地施用调节所述受试者的外周组织中的基因的表达的化合物。在优选实施方案中，调节所述基因的所述表达导致所述外周组织中的Aβ产生或积聚的调节。在某些优选实施方案中，外周组织是受试者的肝。
[0146] 在尤其优选实施方案中，Aβ产生的调节包括使用与例如伊马替尼相比具有减少蛋白激酶抑制活性的组合物。
[0147] 如以下实施例3所描述，本发明提供的组合物抑制Aβ的形成，同时与伊马替尼相比展现基本上减少蛋白激酶抑制。具体地说，本发明提供伊马替尼对-二氨基甲基苯和/或N-去甲基伊马替尼制剂，其用于减少所治疗细胞和受试者的Aβ负载。
[0148] 本发明涵盖影响肝中的Aβ的产生的任何方法，包括但不限于改变APP的表达和/或处理。在一些实施方案中，本发明提供包括外周地施用化合物的方法，所述化合物调节Psen1、Apo E、InsP3R、Psen2、APP、Cib1、Ngrn、Zfhx1b、CLU(也称为ApoJ)、PICALM、IDE、GSAP和CR1基因中的一个或多个的表达。在一些实施方案中，本发明的方法包括外周地施用化合物，所述化合物调节以下各项中的一个或多个的活性：早老素2、钙整合素结合蛋白、突触生长相关蛋白、Zfhx1b、丛生蛋白、磷酸肌醇-结合网格蛋白组装蛋白质、补体组分受体1、胰岛素降解酶、GSAP或APP表达或活性。在一些实施方案中，调节受试者的肝中的这些基因或活性中的一个或多个。在一些实施方案中，调节包括抑制表达或活性，而在一些实施方案中，调节包括刺激表达或活性。
[0149] 在外周治疗期间，评估和监测大脑Aβ病症
[0150] 本发明涉及通过测试并且施用至受试者的外周(即，非大脑)组织来测试并且治疗AD和AD危险。如下讨论，本研究展示肝和/或一个或多个外周组织中的早老素2表达可改变Aβ积聚，并且外周的Aβ减少足以改变其在大脑中的沉积。因此，尽管文献中广泛的相反教导，但是减少Aβ积聚的用于AD的有效治疗性或预防性治疗不需要横越血脑屏障和进入大脑。在中枢神经系统外部(即，在血脑屏障外部)抑制Psen2或γ-分泌酶活性，或通过其它手段来减少Aβ产生或积聚适用于防止大脑患上Aβ相关病状。治疗外周组织具有防止大脑受任何不利副作用影响的额外益处，如果治疗剂进入大脑，就可能出现这些副作用。
[0151] 在一些实施方案中，本发明提供将疗法相对于受试者或患者的生物化学状态来进行调适的方法。预期针对外周组织中的Aβ的调节来选择的一种或多种化合物的有效剂量的特征可被受试者或患者的具体生物化学情况影响，包括但不限于存在其它药物或药剂(例如.用于治疗Aβ病症或不相关的病状)，或由其它情况导致的生物化学变化。本发明提供的方法包括在施用调节例如肝中的Aβ产生的化合物前后针对大脑Aβ病症或大脑Aβ病症的进展对受试者进行评估来监测受试者。在一些实施方案中，选择、调整或相应地改变大脑Aβ病症的疗法。
[0152] 实验性实施例
[0153] 提供以下实施例以展现并且进一步阐明本发明的某些优选实施方案和方面，并且不应理解为限制其范围。
[0154] 实施例1
[0155] 识别患上AD样病状的修饰基因
[0156] 已开发重演人阿兹海默病的关键特征的转基因小鼠模型。将携带在人体内诱发AD的一些变异的APP基因连接至各种转录启动子并且引入小鼠种系中(Games D,Adams D,Alessandrini R,Barbour R,Berthelette P,Blackwell C,Carr T,Clemens J,Donaldson T,Gillespie F, 等 人Nature373:523-527；Hsia AY,Masliah E,McConlogue L,Yu GQ,Tatsuno G,Hu K,Kholodenko D,Malenka RC,Nicoll RA,Mucke L.Proc Natl Acad Sci U S A.96:3228-3233,1999；Hsiao K,Chapman P,Nilsen S,Eckman C,Harigaya Y,Younkin S,Yang F,Cole G.Science274:99-102,1996；Sturchler-Pierrat C,Abramowski D,Duke M,Wiederhold KH,Mistl C,Rothacher S,Ledermann B,Bürki K,Frey P,Paganetti PA,Waridel C,Calhoun ME,Jucker M,Probst A,Staufenbiel M,Sommer B.Proc Natl Acad Sci U S A94:13287-13292,1997；Moechars D,Dewachter I,Lorent K,Reversé D,Baekelandt V,Naidu A,Tesseur I,Spittaels K,Haute CV,Checler F,Godaux E,Cordell B,Van Leuven F.J Biol Chem.274:6483-6492,1999；Richardson JC,Kendal CE,Anderson R,Priest F,Gower E,Soden P,Gray R,Topps S,Howlett DR,Lavender D,Clarke NJ,Barnes JC,Haworth R,Stewart MG,Rupniak HT.Neuroscience122:213-228,2003；Buttini M,Yu GQ,Shockley K,Huang Y,Jones B,Masliah E,Mallory M,Yeo T,Longo FM,Mucke L.J Neurosci.22:10539-10548,2002)。所得转基因小鼠出现Aβ沉积物，但是时间在3月至15月龄之间不等。造成这些年龄差异的变量包括所选择的具体转录启动子，APP基因中的具体AD诱发突变、转基因整合的染色体部位以及转基因得以维持于其中的小鼠 背景 品系(在Bloom FE,Reilly JF,Redwine JM,Wu CC,Young WG,Morrison JH.Arch Neurol.62:185-187,2005中综述)。
[0157] 一份报告(Kulnane LS,Lamb BT.Neurobiol Dis.8:982-992,2001)将R1.40引入混合C57Bl/6x129/Sv小鼠遗传背景中，所述R1.40是携带所谓瑞典突变(K670N、M671L，使继承此突变基因的那些人易于患上早发AD的变异)的人APP转基因。R1.40转基因的表达由天然人APP启动子来驱动。Aβ沉积物首先可在14-16月的这些小鼠的大脑中检测到。随后，将R1.40转基因从其初始背景个别地杂交至C57Bl/6(B6)、DBA/2(D2)和129/Sv背景中。然后，将这些3个菌株中的每一个菌株繁殖至同性质：10个或更多个菌株回交至相同背景中以使得产生具有统一但是不同背景的3个转基因品系(Lehman EJ,Kulnane LS,Gao Y,Petriello MC,Pimpis KM,Younkin L,Dolios G,Wang R,Younkin SG,Lamb BT.Hum Mol Genet.12:2949-2956,2003)。虽然所有三个转基因品系产生相同量的APP前体(指示转基因在3个品系背景中同等地表达)，但是如通过对于大脑匀浆和血浆的ELISA所测量，在第21天和第60天与其它2个品系相比，B6积聚更多Aβ(APP的致病片段)，并且在13.5个月，出现人AD特有的淀粉样沉积物，而D2得到保护(在2年内没有沉积)。因此，这指示存在将B6与D2小鼠加以区分的基因，并且这些基因改变患AD样病状，并且很可能这些基因涉及致病物质Aβ的积聚(Lehman EJ,Kulnane LS,Gao Y,Petriello MC,Pimpis KM,Younkin L,Dolios G,Wang R,Younkin SG,Lamb BT.Hum Mol Genet.12:2949-2956,2003)。修饰基因的特性可暗示治疗或预防模式，这些模式模拟修饰基因效果并且延迟或预防出现AD病状。
[0158] 为了将修饰基因分配至染色体区间，Ryman和同事(Ryman D,Gao Y,Lamb BT.Neurobiol Aging29:1190-1198,2008)将雌性B6R1.40小鼠(对于转基因为纯合)与雄性D2R1.40小鼠(也对于转基因为纯合)杂交，然后将其F1后代(全部具有R1.40转基因的2个拷贝)与非转基因B6x D2F1后代杂交，产生516F2小鼠，每个小鼠携带单一转基因。这些转基因用909SNP来基因分型。在来自516小鼠的大脑匀浆中，Aβ通过ELISA测量。
将Aβ积聚量与516小鼠的基因型关联的回归分析允许将3个修饰基因座分配至集中以下位置的广泛区域：染色体1，182.049374兆碱基(Mb)；染色体2，41.216315Mb；染色体7，
63.680922 Mb。
将Aβ积聚量与516小鼠的基因型关联的回归分析允许将3个修饰基因座分配至集中以下位置的广泛区域：染色体1，182.049374兆碱基(Mb)；染色体2，41.216315Mb；染色体7，
63.680922 Mb。
[0159] 确定修饰基因
[0160] 编码早老素2，Psen2的小鼠基因位于染色体1的182.06371兆碱基处，性状基因座区间的中心，暗示它是改变Aβ积聚和沉积的候选基因。这与其作为γ-分泌酶的组分的功能一致。为了使Psen2代表由Ryman和同事定位于染色体1的实际修饰基因，其活性必须在B6与D2小鼠品系之间可遗传地变化(以孟德尔方式)，并且与D2小鼠相比，B6小鼠中的Psen2活性必须更大，因为预期较低γ-分泌酶活性在AD中具有保护性。我们通过确定B6和D2小鼠品系和重组自交系小鼠的多达89个品系的各种组织中的Psen2基因积聚的mRNA量来研究此问题，这些自交系小鼠通过使B6和D2小鼠杂交来产生并且将后代饲养至同性质。B6和D2小鼠品系和89个重组自交系小鼠品系的10个组织(大脑、小脑、肝、纹状体、肾、海马、眼睛、前额皮质、伏核和新皮质)中的超过20,000个mRNA中的每一个mRNA的浓度可在http://www.GeneNetwork.org编制的公开数据库中获得。对于89个重组自交系小鼠品系中的每一个品系，已经通过基因分型来确定是否此品系遗传其来自B6或D2亲代的基因组的每个区间。
[0161] 探针rs13476267位于染色体1的182.120454Mb处。使用genenetwork.org/webqtl/WebQTL.py的万维网公共站点上的软件，通过计算皮尔森积矩(Pearson’s product-moment)，我们执行rs13476267区间的基因型与多达89个重组自交系小鼠中的10个组织中的每个组织中积聚的Psen2mRNA量之间的性状关联。这些值为：
[0162]
[0163] 从大脑获得的组织样品中没有一个展示Psen2表达的高遗传性(│r│>0.9)，并且对于展现Psen2 mRNA表达的有限遗传性的两个大脑区域，小脑和伏核，与B6基因型相比，更多Psen2 mRNA与D2基因型相关联。因此，大脑中的Psen2表达并非Aβ积聚的改变因素。然而，在肝中，Psen2 mRNA的量与Psen2基因座的基因型高度相关(图1A)。此外，与D2小鼠相比，B6小鼠表达更多Psen2 mRNA。
[0164] 数据证明肝和/或一个或多个外周组织中的Psen2表达可改变Aβ积聚，并且外周的Aβ减少足以改变其在大脑中的沉积。因此，尽管文献中广泛的相反教导，但是至少部分地基于大脑疾病由大脑中发生的事件引起的天然假设，减少Aβ积聚的用于AD的有效治疗性或预防性治疗不需要横越血脑屏障和进入大脑。在中枢神经系统外部抑制Psen2或γ-分泌酶活性，或通过其它手段来减少Aβ产生或积聚足以防止大脑患上Aβ沉积，同时防止大脑受任何不利副作用影响，如果治疗剂进入大脑，就可能出现这些副作用。外周的Aβ积聚的治疗可使用不包括直接应用于CNS(例如，通过CSF输送)的药物输送途径，如经由口服施用来完成。
[0165] 实施例2
[0166] 外周施用STI-571甲磺酸伊马替尼以减少脑中的Aβ
[0167] 来自作图研究和我们的进一步想法的数据提出基于调节肝中的Aβ产生来治疗AD(其起始、进展或严重性)的新颖治疗途径。新治疗策略的基础是降低血液中的Aβ稳态水平(通过抑制肝中的Aβ的产生)的药物将降低大脑中的Aβ浓度。
[0168] 设计实验以测试STI-571甲磺酸伊马替尼施用对于2个小鼠品系的大脑和血液组织的Aβ蛋白质水平的效果。通过IP注射在一周过程中向小鼠施用STI-571甲磺酸伊马替尼，并且将大脑和组织样品移除，并且Aβ蛋白质水平通过ELISA或蛋白质印迹来测量。
[0169] 通过腹膜内注射、每日两次向野生型C57Bl/6和DBA/2J雄性小鼠(8-12周龄)施用药物或媒介物历时7天。向媒介物组(每个品系，n＝4只动物)注射100ul盐水并且药物疗法组(n＝4)接受1、10或100mg/kgSTI-571(GLEEVEC伊马替尼甲磺酸盐，目录号I-5508，LC laboratories,Woburn,MA)。对于人癌症患者规定的STI-571剂量是100mg至1000mg。参见例如Gleevec Prescribing Information2003revision T2003-09；Printed in U.S.A.89019001(Novartis)，其以引用方式并入本文。
[0170] 最后一次注射之后12小时，将动物处死。个别小鼠用异氟烷麻醉并且血液样品(100-300ul)通过心脏穿刺用肝素注射器来获得。在EDTA存在下，将样品安置于冰上30分钟，然后在16,000xg下在4℃下离心20分钟。将血浆部分移除并且存储于-80℃下。将大脑移除，并且在干冰上快速冷冻并且在-80℃下存储。
[0171] 血液和大脑样品中的小鼠Aβ1-40的检测使用可购得免疫测定试剂盒(Biosource小鼠Aβ1-40，目录号KMB3481，Invitrogen,Carlsbad,CA)或蛋白质印迹来执行。小鼠大脑样品通过在波吕特龙(polytron)中、在5M胍HCl和50mM Tris HCl，pH8.0存在下均化大脑组织来制备，如测定协议中所描述。(参见例如Masliah,E.等人，(2001)β amyloid peptides enhanceα-synuclein accumulation and neuronal deficits in a transgenic mouse model linking Alzheimer’s disease and Parkinson’s disease.PNAS 98:12245-12250；Johnson-Wood,K, 等 人 (1997)Amyloid precursor protein processing and A beta42deposition in a transgenic mouse model of Alzheimer disease PNAS94:1550-1555；和Chishti,M.A.等人(2001)；Early-onset amyloid deposition and cognitive defects in transgenic mice expressing a double mutant form of amyloid precursor protein695.J.Biol.Chem.276:21562-21570.)
[0172] 对于测定，将大脑匀浆在含有杜尔贝科氏磷酸盐缓冲盐水与5％BSA和0.03％吐温-20，补充以蛋白酶抑制剂混合物(目录号539131，EMD Biosciences,La Jolla,CA)的反应缓冲液中1:10稀释。将血液样品在标准稀释剂缓冲液中1:5稀释。样品重复两次测定并且OD450在Tecan infinite2000酶标仪上测量。
[0173] 低聚Aβ在SDS部分中提取，基本上如所描述(T.Kawarabayashi等人，Neurosci21,372(2001))。对于蛋白质印迹，样品经受PAGE分析，转移至PVDF膜并且Aβ六聚体使用针对小鼠Aβ的单克隆抗体4G8(1:1,000；Covance)、使用制造商建议协议来观测。印迹通过测光密度术来扫描，然后以组蛋白H3的抗体(1:50,000；Abcam)作为负载和转移对照来再次探测。数据以标准化光密度来描绘。
[0174] 大脑和血液中的Aβ水平在所测试的两个小鼠品系(C57Bl/6和DBA/2J)之间是不同的。在媒介物处理对照组中，与DBA/2J相比，Aβ水平在来自C57Bl/6小鼠的大脑和血液样品中较高，如以前所示。
[0175] 图3展示外周施用的STI-571对于血浆和大脑中的Aβ水平的效果。图3A展示蛋白质印迹，其展示用盐水媒介物(泳道1、2、9和10)或三个剂量的STI-571处理的年轻D2小鼠的血浆中的Aβ六聚体水平：泳道3、4、11和12展示使用1mg/kg的结果；泳道5、6、13和14展示使用10mg/kg的结果；并且泳道7、8、15和16展示使用100mg/kg的结果；n＝4/组。图3B展示图3A中的蛋白质印迹图像的条形图量化。图3C展示蛋白质印迹，其展示用盐水媒介物或20mg/kg的STI-571处理的年轻B6小鼠的大脑提取物中的Aβ六聚体水平(总共n＝10/组；在蛋白质印迹中只展示n＝5)。图3D展示图3C中的蛋白质印迹图像的条形图量化。图3E和3F展示条形图，其指示用盐水媒介物或20mg/kg的STI-571处理的年老B6小鼠(n＝4/组)的大脑提取物(E)或血浆(F)中的Aβ六聚体水平。
[0176] 观察到血浆Aβ的剂量依赖性减少(图3A-B)，并且最高剂量减少循环Aβ近似75％。选择中间剂量，20mg/kg，来研究大脑效果。在年轻和年老的B小鼠中，此剂量减少Aβ的大脑和血浆水平近似50％(图3B和3C)。观察到Aβ的这些水平在R1.40小鼠模型中具有保护性(E.J.Lehman等人，Hum Mol Genet12,2949(2003))。
[0177] 这些结果证明短期(一周)STI-571甲磺酸伊马替尼治疗显著降低血液和大脑中的Aβ水平。此外，因为在用于在此项研究中的浓度下，药物未明显横越血脑屏障，所以结果指示STI-571甲磺酸伊马替尼可通过外周地调节Aβ产生来间接地改变大脑Aβ水平。
[0178] 实施例3
[0179] 识别候选染色体2和7修饰基因
[0180] 如上所述的研究证明致病性Aβ可能来自肝。使用如上所述的相同数据库和方法，我们也搜索对映于染色体2和7区间的基因，并且其在肝中的活性在B6与D2小鼠品系之间可遗传地变化。
[0181] 标记rs4226715位于染色体7的80.138616Mb处，在所述染色体的修饰基因座内。来自此区间的两个基因显示肝内表达的非常高的遗传性：Ngrn基因，和Cib1基因。Ngrn基因编码突触生长相关蛋白，它是一种具有未知功能的广泛表达蛋白质，其表达在一些癌中增加并且与成神经细胞瘤分化相关(S.Ishigaki等人，Biochem Biophys Res Commun279,526(2002),S.R.Hustinx等 人，Cancer Biol Ther 3,1254(2004))，并 且Cib1基因编码钙整合素结合蛋白，它是肉豆蔻酰化钙和整合素结合膜相关蛋白质，它的最初发现是由于其与HeLa细胞中的早老素2优先相互作用(S.M.Stabler等人，J Cell Biol14,145,1277(1999))。这些基因展示最高相关：相应皮尔森值r＝0.945，并且r＝-0.913，p<4.99e-39，(分别图5和4)。Ngrn位于染色体7的80.138736Mb处并且Cib1位于80.101507，其与对映修饰基因座一致。
[0182] 如以上提及，钙整合素结合蛋白具有被证明的与早老素2的相互作用。然而，因为在大脑中的钙整合素结合蛋白分布不与大脑早老素分布或最易患AD病状的区域完全相关，所以以前研究认为其在促成前脑中的Aβ产生方面具有潜在作用，但是判断这类作用是不可能的(M.Blazejczyk等人，Biochim Biophys Acta1762,66(2006))。然而，钙整合素结合蛋白由肝高度表达(S.M.Stabler，同上文)。一种暗示钙整合素结合蛋白活性是作为肌醇1,4,5-三磷酸受体Ca(2+)释放通道的蛋白质配体(C.White等人，J Biol Chem281,20825(2006).)，其门控活性以突变型早老素基因转染的小鸡细胞中是异常的(K.H.Cheung等人，Neuron58,871(2008))。
[0183] 肝钙整合素结合蛋白mRNA表达的遗传性是非常高的。在从B6亲代继承其Cib1基因的每个品系中，与从D2亲代继承其Cib1基因的品系中观察到的量相比，钙整合素结合蛋白mRNA的量较高(图5A)。一种品系(谱系73)似乎在探针处是杂合的，但是表达如同D2一样的钙整合素结合蛋白mRNA量。这暗示肝中的低钙整合素结合蛋白表达减少大脑中的Aβ积聚，并且防止小鼠受其不利效果的影响。
[0184] 用减少钙整合素结合蛋白的Aβ增效活性的化合物来治疗可模拟D2基因型的低表达，因此具有保护性。
[0185] 突触生长相关蛋白具有逆相关(图4)。肝中的丰富的突触生长相关蛋白与较低Aβ积聚相关联，暗示用增加突触生长相关蛋白的化合物来治疗应具有保护性。
[0186] 标记rs3669981位于染色体2的44.943029Mb处，在所述染色体的相当广泛修饰基因座内。编码锌指同源框1b蛋白质的Zfhx1b基因(44.810557Mb)展示最高相关：r＝-0.919，p＝4.99e-39(图5B)。Zfhxb1蛋白质是涉及Wnt和刺猬信号转导的Smad相互作用转录协阻抑因子(G.Bassez等人，Neurobiol Dis15,240(2004)；G.Verstappen等人，Hum Mol Genet17,1175(2008)；N.Isohata等人,Int J Cancer125,1212(2009).)。所述基因的有害变体导致发育障碍Mowat-Wilson综合征，造成多种先天性缺陷，包括智力低下(C.Zweier等人，Am J Med Genet 108,177(2002))。虽然Zfhx1b mRNA在成年小鼠的发育期间，尤其在神经系统内广泛地表达，但是它最高度表达于肝中(G.Bassez，同上文)。Zfhx1b基因位于染色体2的44.810557Mb处，与对映修饰基因座一致。对于此基因，肝mRNA表达的遗传性是非常高的。在从B6亲代继承其Zfhx1b基因的几乎每个品系中，与从D2亲代继承其Zfhx1b基因的品系相比，Zfhx1b mRNA的量更大(图5B)。在探测下，品系12和36在基因型方面不同但是具有类似mRNA水平。这些数据暗示肝中的低Zfhx1b表达减少大脑中的Aβ积聚，并且防止小鼠受其不利效果的影响。用抑制Zfhx1b活性的化合物治疗可模拟D2基因型的低表达，因此具有保护性。
[0187] 实施例3
[0188] 测量伊马替尼衍生物组合物的Aβ抑制
[0189] 协议
[0190] 1.解冻SY5Y-APP细胞，加至t-75烧瓶中的具有10％血清、pen-strep的温热高葡萄糖DMEM。在第2天，将培养物划分至4个烧瓶。收集来自3个烧瓶的细胞并且在液体N2中冷冻。使用其余培养物来进行实验。
[0191] 2.用相同培养基中的细胞来接种24孔板。生长至融合。
[0192] 3.制备伊马替尼和去甲基伊马替尼的储备溶液：
[0193] 100ul中的500ug是10mM储备物
[0194] 还制得1mM储备物
[0195] 4.更换培养基(1ml)并且添加抑制剂(在DMSO媒介物中)或仅媒介物，如下：
[0196] 1.仅媒介物
[0197] 2.来自1mM储备物的3ul伊马替尼＝3uM最终浓度
[0198] 3.来自1mM储备物的3ul去甲基伊马替尼(Santa Cruz Biotechnology目录号SC-208027；Toronto Research Chemicals，目录号D292045)＝3uM最终浓度
[0199] 4.来自1mM储备物的10ul伊马替尼＝10uM最终浓度
[0200] 5.来自1mM储备物的10ul去甲基伊马替尼＝10uM最终浓度
[0201] 6.来自10mM储备物的3ul伊马替尼＝30uM最终浓度
[0202] 7.来自10mM储备物的3ul去甲基伊马替尼＝30uM最终浓度
[0203] 8.来自10mM储备物的10ul去甲基伊马替尼＝100uM最终浓度
[0204] 5.16小时孵育之后，分离培养基、添加10ul蛋白酶抑制剂并且旋出细胞和碎片(3000xg)；
[0205] 4.用Covance ELISA试剂盒SIG-38952照度计来测量100μL等分部分中的Aβ[0206] 结果展示于图6。这些数据表明在相同范围的浓度下施用时，与伊马替尼(Gleevec)相比，代谢物去甲基伊马替尼(展示于图10A)产生更有效的Aβ减少。
[0207] 除了上述，伊马替尼的三个变体对于Aβ浓度的效果如上所述来测试，只是在150μL而非100uL的培养基上清液中测量Aβ。
[0208] A.伊马替尼(Gleevec)3、10和30μM；
[0209] B.伊马替尼对-二氨基甲基苯3HCl(展示于图10B，Toronto Research Chemicals，目录号I267995)3、10、30和100μM；
[0210] C.伊马替尼(吡啶)-N-氧化物(展示于图10C，Toronto Research Chemicals，目录号I268010)；和
[0211] D.伊马替尼(哌啶)-N-氧化物(展示于图10D，Toronto Research Chemicals，目录号I268000)。
[0212] 结果展示于图7。这些数据表明在相同范围的浓度下施用时，与伊马替尼(Gleevec)相比，活性代谢物伊马替尼对-二氨基甲基苯3HCl(展示于图10B)产生更强的Aβ抑制。这些数据也表明伊马替尼(吡啶)-N-氧化物和伊马替尼(哌啶)-N-氧化物对于Aβ浓度几乎没有效果。
[0213] 实施例4
[0214] 测量伊马替尼相关组合物对于Abl激酶的抑制
[0215] 将以下依序合并：
[0216] 10μL2.5x激酶测定缓冲液
[0217] 2.5μL Abl激酶(Millipore,Temecula,CA)
[0218] 在冰上的DMSO中的1μL DMSO媒介物或抑制剂
[0219] 10μLγ32P-ATP
[0220] 2.5μL Abltide合成肽底物，生物素标记(Millipore,Temecula,CA)
[0221] 在30℃下孵育10分钟；
[0222] 通过添加12.5μL7.5M胍HCL至每个反应中，涡动来终止。
[0223] 涂布12.5μL于SAM2生物素捕获膜(Promega Corp.,Madison,WI)上
[0224] 冲洗所述膜(4x2M NaCl；4x2M NaCl，1％H3PO4，2x H2O，于室温下)
[0225] 激酶活性通过闪烁计数来确定。
[0226] 闪烁计数：展示最终药物浓度
[0227] 每个测定重复执行两次。所测量的每分钟计数如下，并且两个测定的平均值展示于右手列中：
[0228]
[0229] 数据展示于图8和9。图8展示在0至100μM浓度的每个药物存在下所测量的Abl激酶活性的半对数曲线图。甚至在所测试的最低浓度10μM下，伊马替尼基本上抑制Abl激酶。与伊马替尼相比，N-去甲基伊马替尼抑制Abl激酶较小，并且用伊马替尼对-二氨基甲基苯三盐酸盐来治疗甚至在所测试的最高浓度100μM下展示显著地较低水平的Abl激酶抑制。
[0230] 图9展示选择性图，此图展示在所展示的三个浓度中的每个浓度下，每个化合物的降低Aβ活性的倍数差(与伊马替尼相比)与此化合物的激酶抑制剂活性的倍数差的比率。伊马替尼是参考化合物，因此此药物的比率值设定为1。
[0231] 在选择性方面，N-去甲基伊马替尼展示优于伊马替尼的3.8至4.8倍改进。伊马替尼对-二氨基甲基苯三盐酸盐展示最大的选择性。在30μM浓度下，对二氨基苯组合物在降低Aβ方面展示约3.7倍更大活性，并且在Abl激酶测定中只有伊马替尼活性的1/16，产生几乎60的选择性比率。
[0232] 以上说明书中提到的所有公布和专利以引用的方式并入本文。本发明的所描述组合物和方法的各种改进和变化对于本领域技术人员是显而易知的，而不背离本发明的范围和精神。虽然已结合特定实施方案描述了本发明，但应理解的是，要求保护的本发明不应不适当地局限于所述特定实施方案。事实上，相关领域技术人员显而易知的执行本发明的所描述模式的各种改进预期在本发明的范围内。
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