用具有低岩藻糖基化的抗-EGFR抗体的抗-癌治疗
阅读：72发布：2020-11-27
专利汇可以提供用具有低岩藻糖基化的抗-EGFR抗体的抗-癌治疗专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于使用抗-癌 抗体 治疗 癌的领域。提供具有改善的糖基化特征，尤其是减少的岩藻糖基化的抗-EGFR抗体的医疗使用，其显示抗-癌功效和改善的不利的 副作用 特征。，下面是用具有低岩藻糖基化的抗-EGFR抗体的抗-癌治疗专利的具体信息内容。
1.在CH2结构域具有糖基化位点的抗-EGFR抗体，
其中附接于所述糖基化位点的聚糖的50％或更少携带岩藻糖(减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)，且
其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性反应，用于治疗人患者中的EGFR阳性肿瘤形成疾病。
2.权利要求1的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于80％的治疗的患者中导致任何级的不利的皮肤反应。
3.权利要求1的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于75％的治疗的患者中导致任何级的不利的皮肤反应。
4.权利要求1的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于70％的治疗的患者中导致任何级的不利的皮肤反应。
5.权利要求1的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于65％的治疗的患者中导致痤疮样皮疹。
6.权利要求1～5之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于20％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。
7.权利要求1～5之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于15％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。
8.权利要求1～5之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于10％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。
9.权利要求1～5之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于5％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。
10.权利要求1～9之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于70％的治疗的患者中导致痤疮样皮疹。
11.权利要求1～9之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于50％的治疗的患者中导致痤疮样皮疹。
12.权利要求1～9之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于40％的治疗的患者中导致痤疮样皮疹。
13.权利要求1～9之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于30％的治疗的患者中导致痤疮样皮疹。
14.权利要求1～13之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于20％的治疗的患者中导致3级或更高的痤疮样皮疹。
15.权利要求1～13之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于15％的治疗的患者中导致3级或更高的痤疮样皮疹。
16.权利要求1～13之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于10％的治疗的患者中导致3级或更高的痤疮样皮疹。
17.权利要求1～13之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于5％的治疗的患者中导致3级或更高的痤疮样皮疹。
18.权利要求1～17之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于20％，优选不多于15％的治疗的患者，在不多于10％或在不多于5％的治疗的患者中导致低镁血症。
19.权利要求1～18之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于30％，优选不多于25％的治疗的患者，在不多于20％或在不多于15％的治疗的患者中导致低钾血症。
20.权利要求1～19之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于40％，优选不多于35％的治疗的患者，在不多于30％或在不多于25％的治疗的患者中导致腹泻。
21.权利要求2～20之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体当以至少10mg/剂量的量施用时，在不多于指示的百分率的治疗的患者中导致任何级的不利的皮肤反应，痤疮样皮疹，3级或更高的不利的皮肤反应，3级或更高的痤疮样皮疹，低镁血症和/或腹泻。
22.权利要求2～21之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体当以至少50mg/剂量的量施用时，在不多于指示的百分率的治疗的患者中导致任何级的不利的皮肤反应，痤疮样皮疹，3级或更高的不利的皮肤反应，3级或更高的痤疮样皮疹，低镁血症和/或腹泻。
23.权利要求2～22之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体当以至少240mg/剂量的量施用时，在不多于指示的百分率的治疗的患者中导致任何级的不利的皮肤反应，痤疮样皮疹，3级或更高的不利的皮肤反应，3级或更高的痤疮样皮疹，低镁血症和/或腹泻。
24.权利要求2～23之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体当以至少500mg/剂量的量施用时，在不多于指示的百分率的治疗的患者中导致任何级的不利的皮肤反应，痤疮样皮疹，3级或更高的不利的皮肤反应，3级或更高的痤疮样皮疹，低镁血症和/或腹泻。
25.权利要求21～24之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体当施用至少4个剂量时，在不多于指示的百分率的治疗的患者中导致任何级的不利的皮肤反应，痤疮样皮疹，3级或更高的不利的皮肤反应，3级或更高的痤疮样皮疹，低镁血症和/或腹泻。
26.权利要求21～25之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体当施用至少8个剂量时，在不多于指示的百分率的治疗的患者中导致任何级的不利的皮肤反应，痤疮样皮疹，3级或更高的不利的皮肤反应，3级或更高的痤疮样皮疹，低镁血症和/或腹泻。
27.权利要求25或26的抗-EGFR抗体，其中当剂量至少每隔一周施用时，所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于指示的百分率的治疗的患者中导致任何级的不利的皮肤反应，痤疮样皮疹，3级或更高的不利的皮肤反应，3级或更高的痤疮样皮疹，低镁血症和/或腹泻。
28.权利要求1～27之任一项的抗-EGFR抗体，用于治疗患EGFR阳性肿瘤形成疾病的人患者，所述疾病已显示，至少一种其他抗-EGFR抗体在多于50％的治疗的患者中显示不利的皮肤反应。
29.权利要求28的抗-EGFR抗体，其中所述本发明的减少岩藻糖的抗体用于以其他抗-EGFR抗体在多于50％的患者中显示不利的皮肤反应，和/或在多于12％的患者中显示
3级或更高的不利的皮肤反应的剂量施用。
30.权利要求1～29之任一项的抗-EGFR抗体，用于治疗人患者中的EGFR阳性肿瘤形成疾病，其中使用这样的治疗条件，该条件对于至少一种其他抗-EGFR抗体而言，当使用所述其他抗-EGFR抗体时，在至少50％的患者中导致不利的皮肤反应，或当使用所述其他抗-EGFR抗体时，在至少12％的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。
31.权利要求28～30之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述至少一种其他抗-EGFR抗体选自：高岩藻糖西妥昔单抗 帕尼单抗，扎芦木单抗和GA201。
32.权利要求28～31之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以每周至少200mg的剂量施用。
33.权利要求1～32之任一项的抗-EGFR抗体，其用于治疗已之前用至少一种EGFR抑制物治疗的人患者，所述EGFR抑制物在患者中导致3级或更高的不利的反应。
34.权利要求1～33之任一项的抗-EGFR抗体，其用于治疗针对导致该严重的不利的反应的EGFR抑制物具有知道的3级或更高的严重的不利的反应的人患者。
35.权利要求1～34之任一项的抗-EGFR抗体，其用于在用尤其是在多于10％的患者中导致3级或更高的严重的不利的反应的EGFR抑制物治疗期间，治疗具有增加的发展3级或更高的严重的不利的反应的风险的人患者。
36.权利要求1～35之任一项的抗-EGFR抗体，其用于治疗已之前用EGFR抑制物治疗的人患者，且其中所述之前治疗被间断，终止，或其中所述EGFR抑制物的剂量需减少，因为在所述治疗期间针对所述EGFR抑制物发生的不利的反应。
37.权利要求1～36之任一项的抗-EGFR抗体，其用于治疗已之前用EGFR抑制物治疗的人患者，且其中所述之前用EGFR抑制物治疗不是或不可持续，因为针对所述EGFR抑制物发生的不利的反应。
38.权利要求33～37之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR抑制物是抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗 帕尼单抗 和GA201。
39.权利要求33～37之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR抑制物是酪氨酸激酶抑制物诸如吉非替尼，厄洛替尼和拉帕替尼。
40.权利要求38或39的抗-EGFR抗体，其中所述由EGFR抑制物导致的不利的反应是
3级或更高的不利的反应。
41.权利要求33～40之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述由EGFR抑制物导致的不利的反应是不利的皮肤反应。
42.权利要求41的抗-EGFR抗体，其中所述由EGFR抑制物导致的不利的皮肤反应包括皮疹和/或痤疮样皮疹。
43.权利要求41的抗-EGFR抗体，其中所述由EGFR抑制物导致的不利的皮肤反应包括
3级或更高的皮疹和/或3级或更高的痤疮样皮疹。
44.权利要求41～43之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述由EGFR抑制物导致的不利的皮肤反应包括严重的、泛发性红皮病，斑疹，丘疹或小泡疹；脱屑覆盖至少50％的身体皮肤区；泛发性剥脱性、溃疡性和/或大疱性皮炎；和/或与疼痛、毁容、溃疡形成和/或脱屑关联的痤疮样皮疹；丘疹和/或脓疱覆盖至少30％的身体皮肤区，任选地与瘙痒症或压痛的症状关联；与用指示的口腔或静脉内抗生素的局部或扩展的重叠感染关联的丘疹和/或脓疱。
45.权利要求1～44之一项或更多项的抗-EGFR抗体，其用于治疗在之前治疗中发展了针对抗-EGFR抗体的过敏性反应的人患者和/或用于治疗具有既有Gal-Gal IgE抗体的人患者。
46.权利要求1～45之一项或更多项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病是EGFR阳性癌。
47.权利要求46的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR-阳性癌选自：头颈癌，结肠癌，肾癌，胃癌，食管癌，胆囊癌，子宫癌，乳腺癌，直肠癌，肺癌，卵巢癌和阴茎癌。
48.权利要求46或47的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR-阳性癌选自：结肠癌，直肠癌，非-小细胞肺癌，鳞状细胞肺癌，肾细胞癌，三重阴性乳腺癌，头和颈鳞状细胞癌，食管腺癌，胃腺癌，胃食管连接处腺癌，子宫内膜癌或肉瘤，子宫颈癌。
49.权利要求46～48之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR-阳性癌是选自下列的肾细胞癌：透明细胞肾细胞癌，乳头肾细胞癌包括嗜碱性和嗜酸性粒细胞乳头肾细胞癌，嫌色细胞肾细胞癌，Bellini管癌，收集管癌和肾的多形性和/或肉瘤样癌。
50.权利要求46～48之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR-阳性癌是选自下列的非小细胞肺癌：鳞状非小细胞肺癌(sNSCLC)，及非鳞状非小细胞肺癌(nsNSCLC)包括腺癌和大细胞癌。
51.权利要求46～48之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR-阳性癌是头和颈鳞状细胞癌(SCCHN)包括非-分化的，分化的，腺样-鳞状和疣状SCCHN。
52.权利要求46～48之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR-阳性癌是选自下列的胃癌：腺癌包括管状腺癌，乳头腺癌和粘液腺癌，印戒细胞癌，腺样-鳞状癌，鳞状癌，髓质胃癌，小细胞胃癌，及非-分化的胃癌。
53.权利要求46～48之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR-阳性癌是位于幽门窦，胃体，胃底，或扩散地整个胃中的胃癌。
54.权利要求46～53之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR-阳性癌是转移性癌。
55.权利要求46～54之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述癌是肾细胞癌。
56.权利要求55的抗-EGFR抗体，其中所述肾细胞癌是透明细胞肾细胞癌或非-透明细胞肾细胞癌。
57.权利要求1～56之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR-阳性肿瘤形成疾病包括恶性泻流。
58.权利要求57的抗-EGFR抗体，其中所述恶性泻流是恶性胸腔积液或恶性腹膜泻流。
59.权利要求57或58的抗-EGFR抗体，其中所述恶性泻流是恶性腹水。
60.权利要求57～59之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR-阳性肿瘤形成疾病是胃和/或食管癌包括恶性泻流。
61.在CH2结构域具有糖基化位点的抗-EGFR抗体，其中附接于所述糖基化位点的聚糖的50％或更少携带岩藻糖(减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)，且其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性反应，用于治疗人患者中的肾癌。
62.权利要求61的抗-EGFR抗体，其中所述肾癌是肾细胞癌。
63.权利要求61或62的抗-EGFR抗体，其中所述肾癌是透明细胞肾细胞癌或非-透明细胞肾细胞癌。
64.权利要求61～63之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述肾癌选自：透明细胞肾细胞癌，乳头肾细胞癌，嫌色细胞肾细胞癌，收集管癌，及透明细胞乳头肾细胞癌。
65.权利要求64的抗-EGFR抗体，其中所述肾癌选自透明细胞肾细胞癌和乳头肾细胞癌。
66.权利要求61～65之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述肾癌是转移肾癌。
67.在CH2结构域具有糖基化位点的抗-EGFR抗体，其中附接于所述糖基化位点的聚糖的50％或更少携带岩藻糖(减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)，且其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性反应，用于治疗具有EGFR阳性肿瘤形成疾病的人患者中的恶性泻流。
68.权利要求67的抗-EGFR抗体，其中EGFR阳性肿瘤形成疾病选自：胃癌，食管癌，肺癌，乳腺癌，淋巴瘤，卵巢癌，胰腺癌，肝脏癌和结肠癌。
69.权利要求67或68的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病是转移癌。
70.权利要求69的抗-EGFR抗体，其中EGFR阳性肿瘤形成疾病包括在腹膜，胸膜和/或肺上或中的转移瘤。
71.权利要求67～70之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述泻流是胸腔积液。
72.权利要求71的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病选自：乳腺癌，肺癌，胃癌和食管癌。
73.权利要求71或72的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病包括向胸膜肿瘤侵入和/或在胸膜上或中的转移瘤。
74.权利要求67～70之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述泻流是腹膜泻流。
75.权利要求74的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病选自：胰腺癌，卵巢癌，胃癌，食管癌和结肠癌。
76.权利要求74或75的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病包括向腹膜肿瘤侵入和/或在腹膜上或中的转移瘤。
77.权利要求67～76之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病是胃癌和/或食管癌。
78.权利要求77的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病是胃癌或食管/胃连接处的腺癌。
79.权利要求1～78之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在附接于CH2结构域的碳水化合物链中具有20％或更少的量的岩藻糖。
80.权利要求79的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在附接于CH2结构域的碳水化合物链中具有15％或更少的量的岩藻糖。
81.权利要求79的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在附接于CH2结构域的碳水化合物链中具有3％～20％范围的量的岩藻糖。
82.权利要求1～81之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在CH2结构域的糖基化位点内包含以下糖基化特征中的一个或更多：
(i)至少5％、优选至少10％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
(ii)至少50％、优选至少60％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；
(iii)至少10％、优选至少15％的携带2个半乳糖的聚糖的相对量；
(iv)至少1％、优选至少2％的携带至少1个唾液酸、尤其是NeuAc的聚糖的相对量；
(v)至少0.5％、优选至少1％的携带2个唾液酸、尤其是NeuAc的聚糖的相对量。
83.权利要求82的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在CH2结构域的糖基化位点中包含全部糖基化特征(i)～(v)。
84.权利要求1～83之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在重链可变区VH内包含另外的糖基化位点。
85.权利要求84的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在VH结构域的糖基化位点包含以下糖基化特征中的一个或更多：
(i)40％或更少、优选35％或更少的携带岩藻糖残基的聚糖的相对量；
(ii)至少35％、优选至少40％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
(iii)至少85％、优选至少90％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；
(iv)至少70％、优选至少80％的携带至少2个半乳糖的聚糖的相对量；
(v)至少50％、优选至少60％的携带至少1个唾液酸的聚糖的相对量；
(vi)至少35％、优选至少45％的携带至少2个唾液酸的聚糖的相对量。
86.权利要求85的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在VH结构域的糖基化位点包含全部糖基化特征(i)～(vi)。
87.权利要求84～86之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体对于整个抗体包含具有以下糖基化特征中的一个或更多：
(i)30％或更少、优选25％或更少的携带岩藻糖残基的聚糖的相对量；
(ii)至少20％、优选至少25％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
(iii)至少60％、优选至少70％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；
(iv)至少30％、优选至少35％的携带至少2个半乳糖的聚糖的相对量；
(v)至少10％、优选至少15％的携带至少1个唾液酸的聚糖的相对量；
(vi)至少4％、优选至少6％的携带至少2个唾液酸的聚糖的相对量。
88.权利要求87的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体对于整个抗体包含全部糖基化特征(i)～(vi)。
89.权利要求1～88之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体包含以下糖基化特征中的一个或更多：
(i)无可检测的NeuGc；
(ii)无可检测的Galα1,3-Gal；
(iii)可检测的α2,6-偶联的NeuAc。
90.权利要求1～89之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体具有人糖基化特征谱。
91.权利要求1～90之任一项的抗-EGFR抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含：
CDR1，其具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列，
CDR2，其具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列，及
CDR3，其具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列。
92.权利要求1～91之任一项的抗-EGFR抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:7或9的氨基酸序列，或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列。
93.权利要求1～92之任一项的抗-EGFR抗体，其包含轻链可变区，所述轻链可变区包含：
CDR1，其具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列，
CDR2，其具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列，及
CDR3，其具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
94.权利要求1～93之任一项的抗-EGFR抗体，其包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8或10的氨基酸序列，或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列。
95.权利要求1～94之任一项的抗-EGFR抗体，其包含与抗体西妥昔单抗的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链和轻链氨基酸序列。
96.权利要求1～95之任一项的抗-EGFR抗体，与抗体西妥昔单抗显示交叉-特异性。
97.权利要求1～96之任一项的抗-EGFR抗体，其为IgG类型抗体，优选IgG1类型抗体。
98.权利要求1～97之任一项的抗-EGFR抗体，能特异性结合EGFR的细胞外部分，尤其是EGFR的结构域III。
99.权利要求1～98之任一项的抗-EGFR抗体，其能阻断配体结合EGFR。
100.权利要求1～99之任一项的抗-EGFR抗体，其能阻断EGFR的二聚化。
101.权利要求1～100之任一项的抗-EGFR抗体，其能阻断EGFR，尤其是EGFR的激酶活性的活化。
102.权利要求1～101之任一项的抗-EGFR抗体，其能减少细胞表面上EGFR的量，尤其是通过诱导EGFR向细胞内化。
103.权利要求1～102之任一项的抗-EGFR抗体，其以在CH2结构域具有糖基化位点的高岩藻糖抗-EGFR抗体的至少10-倍的力度诱导ADCC，其中至少60％附接于所述糖基化位点的聚糖携带岩藻糖。
104.权利要求1～103之任一项的抗-EGFR抗体，其能通过在所述细胞的表面与EGFR结合来减少或防止细胞增殖和/或诱导细胞凋亡。
105.权利要求1～104之任一项的抗-EGFR抗体，其能诱导针对表达EGFR的细胞的抗体-依赖性细胞毒性。
106.权利要求1～105之任一项的抗-EGFR抗体，其能通过与所述EGFR结合及通过活化攻击表达EGFR的细胞的粒细胞，尤其是嗜中性粒细胞和/或嗜酸性粒细胞来诱导所述表达EGFR的细胞的裂解。
107.权利要求1～106之任一项的抗-EGFR抗体，其能通过与所述EGFR结合及通过活化攻击表达EGFR的细胞的巨噬细胞来诱导所述表达EGFR的细胞的裂解。
108.权利要求1～107之任一项的抗-EGFR抗体，具有以下特征：
(i)其包含重链可变区，所述重链可变区
包含SEQ ID NO:7或9的氨基酸序列或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列，及包含
CDR1，其具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列，
CDR2，其具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列，及
CDR3，其具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列；
(ii)其包含轻链可变区，所述轻链可变区
包含SEQ ID NO:8或10的氨基酸序列或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列，及包含
CDR1，其具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列，
CDR2，其具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列，及
CDR3，其具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列；
(iii)其在CH2结构域中具有以下糖基化特征：
(a)20％或更少、优选15％或更少的携带岩藻糖残基的聚糖的相对量；
(b)至少10％、优选至少15％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
(c)至少70％、优选至少80％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；以及
(d)至少30％、优选至少35％的携带2个半乳糖的聚糖的相对量；
(e)至少5％、优选至少8％的携带至少1个唾液酸的聚糖的相对量；以及
(f)至少1％、优选至少2％的携带2个唾液酸的聚糖的相对量；
(iv)任选地，其在VH结构域内包含糖基化位点，其中如果所述糖基化位点存在，其具有以下糖基化特征：
(a)20％或更少、优选15％或更少的携带岩藻糖残基的聚糖的相对量；
(b)至少25％、优选至少30％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
(c)至少70％、优选至少80％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；
(d)至少40％、优选至少50％的携带至少2个半乳糖的聚糖的相对量；
(e)至少22％、优选至少28％的携带至少1个唾液酸的聚糖的相对量；
(f)至少8％、优选至少12％的携带至少2个唾液酸的聚糖的相对量，
(v)其是IgG1类型抗体。
109.权利要求1～108之任一项的抗-EGFR抗体，其被缀合于其他剂。
110.权利要求109的抗-EGFR抗体，其中所述其他剂是治疗活性物质。
111.权利要求109或110的抗-EGFR抗体，其中所述其他剂选自：放射性核素，化学治疗剂，抗体，酶，相互作用结构域，可检测的标记物，毒素，细胞裂解组分，免疫调节物，免疫效应子，MHC I类或II类抗原，放射性同位素和脂质体。
112.权利要求1～111之任一项的抗-EGFR抗体，其中
所述患者在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是苯丙氨酸纯合(FcγRIIIa-158F/F)，或
所述患者在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是缬氨酸和苯丙氨酸杂合
(FcγRIIIa-158V/F)。
113.权利要求1～111之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述患者在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是缬氨酸纯合(FcγRIIIa-158V/V)。
114.权利要求1～113之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于与所述抗体的FcγRIIIa同种异型无关地治疗患者。
115.权利要求1～114之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病包含K-RAS突变。
116.权利要求1～115之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于与EGFR阳性肿瘤形成疾病的K-RAS突变状态无关地治疗患者。
117.权利要求1～116之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病抵抗用至少1种化学治疗剂治疗，或
在用至少1种化学治疗剂治疗之后进展。
118.权利要求1～117之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病抵抗用EGFR抑制物治疗，或
在用EGFR抑制物治疗之后进展。
119.权利要求118的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR抑制物是抗-EGFR抗体，诸如西妥昔单抗 帕尼单抗 扎芦木单抗和GA201。
120.权利要求119的抗-EGFR抗体，其中所述抗-EGFR抗体是西妥昔单抗
121.权利要求118的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR抑制物是酪氨酸激酶抑制物，诸如吉非替尼，厄洛替尼和拉帕替尼。
122.权利要求1～121之任一项的抗-EGFR抗体，其用于治疗原发性肿瘤。
123.权利要求1～121之任一项的抗-EGFR抗体，其用于治疗复发的肿瘤。
124.权利要求1～123之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗是用于辅助治疗，用于新辅助治疗，用于新辅助-辅助治疗或用于减轻性治疗。
125.权利要求1～124之任一项的抗-EGFR抗体，其用作单一治疗。
126.权利要求1～125之任一项的抗-EGFR抗体，其用于联合治疗。
127.权利要求126的抗-EGFR抗体，其用于与下列组合使用：
(i)至少1种化学治疗剂；和/或
(ii)至少1种不同于减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的其他治疗性抗体；和/或
(iv)癌手术和/或放射治疗。
128.权利要求127的抗-EGFR抗体，其中所述至少1种化学治疗剂选自：紫杉烷诸如紫杉醇(泰素)，多西他赛(泰素帝)和SB-T-1214；环磷酰胺；拉帕替尼；卡培他滨；
阿糖胞苷；长春瑞滨；贝伐珠单抗；吉西他滨；蒽环类抗生素诸如柔红霉素，多柔比星，表柔比星，伊达比星，戊柔比星和米托蒽醌；芳香酶抑制物诸如氨鲁米特，睾内酯(Teslac)，阿那曲唑(Arimidex)，来曲唑(Femara)，依西美坦(Aromasin)，伏氯唑(Rivizor)，福美坦(Lentaron)，法倔唑(Afema)，4-羟雄烯二酮，1,4,6-雄烷三烯-3,17-二酮(ATD)和
4-雄烯-3,6,17-三酮(6-OXO)；拓扑异构酶抑制物诸如伊立替康，托泊替康，喜树碱，片螺素D，依托泊苷(VP-16)，替尼泊苷，多柔比星，柔红霉素，米托蒽醌，安吖啶，艾力替新，金精三羧酸和HU-331；基于铂的化学治疗剂诸如顺式-二氨二氯铂(II)(顺铂)，顺式-二氨(1,1-环丁烷二羧酸根合)铂(II)(卡铂)和[(1R,2R)-环己烷-1,2-二胺](乙二酸根合-O,O')铂(II)(奥沙利铂)，及抗代谢剂，尤其是抗叶酸剂诸如甲氨喋呤，培美曲塞，雷替曲塞和普拉曲沙，嘧啶类似物诸如氟尿嘧啶，吉西他滨，氟尿苷，5-氟尿嘧啶和替加氟-尿嘧啶，及嘌呤类似物，选择性雌激素受体调节物和雌激素受体下调物。
129.权利要求127或128的抗-EGFR抗体，其中所述至少1种化学治疗剂是基于铂的化学治疗剂或拓扑异构酶抑制物。
130.权利要求127～129之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述至少1种化学治疗剂是伊立替康。
131.权利要求127～129之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述抗-EGFR抗体与下列组合：
(i)亚叶酸，氟尿嘧啶和奥沙利铂(FOLFOX)；或者
(ii)亚叶酸，氟尿嘧啶和伊立替康(FOLFIRI)。
132.权利要求127～131之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述至少1种其他治疗性抗体选自：抗-EGFR抗体诸如帕木单抗(Vectibix)和尼妥珠单抗(Theraloc)；抗-HER2抗体诸如曲妥珠单抗(赫赛汀)和培妥珠单抗；抗-VEGF抗体诸如贝伐珠单抗(阿瓦斯丁)；
抗-CD52抗体诸如阿仑珠单抗(Campath)；抗-CD30抗体诸如brentuximab(Adcetris)；
抗-CD33抗体诸如吉妥珠单抗(Mylotarg)；及抗-CD20抗体诸如利妥昔单抗(利妥昔单抗,Mabthera)，托西莫单抗(Bexxar)和替伊莫单抗(Zevalin)。
133.权利要求1～132之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体不与另一EGFR抑制物组合使用。
134.权利要求1～133之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述治疗包括以12～2000mg/剂量的量施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
135.权利要求134的抗-EGFR抗体，其中所述治疗包括以240～1200mg/剂量的量施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
136.权利要求134的抗-EGFR抗体，其中所述治疗包括以700～1500mg/剂量的量施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
137.权利要求1～136之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述治疗包括以每剂量0.5～
50mg/kg患者体重的量施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
138.权利要求137的抗-EGFR抗体，其中所述治疗包括以每剂量2～20mg/kg患者体重的量施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
139.权利要求137的抗-EGFR抗体，其中所述治疗包括以每剂量10～25mg/kg患者体重的量施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
140.权利要求1～139之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述治疗包括以每剂量5～
2
1000mg/m患者身体表面积的量施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
2
141.权利要求140的抗-EGFR抗体，其中所述治疗包括以每剂量100～600mg/m 患者身体表面积的量施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
2
142.权利要求140的抗-EGFR抗体，其中所述治疗包括以每剂量300～750mg/m 患者身体表面积的量施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
143.权利要求1～142之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述治疗包括每5天或更低频率施用一个剂量的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
144.权利要求143的抗-EGFR抗体，其中所述治疗包括每周或更低频率施用一个剂量的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
145.权利要求143的抗-EGFR抗体，其中所述治疗包括每隔一周或更低频率施用一个剂量的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
146.权利要求1～145之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述治疗中减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的初始剂量包含存在于随后剂量中的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的1.1～3倍量。
147.权利要求146的抗-EGFR抗体，其中所述治疗中减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的初始剂量包含存在于随后剂量中的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的1.2～1.6倍量。
148.权利要求1～147之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗患者包括施用至少6个剂量的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
149.权利要求1～148之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述患者用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗至少6周。
150.权利要求1～149之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗包括在施用第1剂量的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体之后细胞因子释放的诱导。
151.权利要求150的抗-EGFR抗体，其中所述细胞因子选自：IFN-γ，IL-6，IL-8，TNF-α，IP-10和IL-1ra。
152.权利要求1～151之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述第1剂量的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在4天之内作为2个分离的部分剂量施用给患者。
153.权利要求152的抗-EGFR抗体，其中所述第1剂量的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在2个连日作为2个分离的部分剂量施用给患者。
154.权利要求152或153的抗-EGFR抗体，其中所述第1部分剂量包含150mg或更少的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体，及经至少1小时时期施用于患者。
155.权利要求154的抗-EGFR抗体，其中所述第1部分剂量包含100mg或更少的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体，及经至少2小时时期经输注施用于患者。
156.权利要求1～155之任一项的抗-EGFR抗体，其中在施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体之前或之后，作为麻醉前用药给予无组胺拮抗剂和/或甾和/或无四环素。
157.权利要求1～156之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗与用具有解热性质的剂的患者的麻醉前用药组合。
158.权利要求157的抗-EGFR抗体，其中所述具有解热性质的剂是N-(4-羟苯基)乙酰胺。
159.权利要求157或158的抗-EGFR抗体，其中所述麻醉前用药包含至少2个分离的剂量的具有解热性质的剂，然而
第1剂量在施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体之前8h～48给予，和
第2剂量在施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体之前5min～6小时给予。
160.权利要求159的抗-EGFR抗体，其中所述各剂量含有250mg和1500mg之间，尤其是约1000mg的具有解热性质的剂。
161.权利要求157～160之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述麻醉前用药包括以下步骤，或由以下步骤组成：
(a)在施用抗体之前一晚约1000mg的N-(4-羟苯基)乙酰胺的第1剂量，以及
(b)在施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体之前1小时约1000mg的N-(4-羟苯基)乙酰胺的第2剂量。
162.权利要求1～161之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病涉及下列一个或更多，优选全部：
(i)在EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞上抑制EGFR活化，尤其是经所述EGFR被减少岩藻糖的抗-EGFR抗体结合；
(ii)由与所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体诱导针对EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞的抗体-依赖性细胞毒性，尤其是经活化免疫细胞，优选自然杀伤细胞；
(iii)诱导粒细胞，尤其是嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，以攻击和优选毁坏EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞，尤其是经粒细胞被与所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体结合及活化；
(iv)诱导巨噬细胞以攻击和优选毁坏EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞，尤其是经巨噬细胞被与所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体活化。
163.权利要求1～162之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病涉及粒细胞，尤其是嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，被与EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体结合及活化；及诱导所述活化的粒细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。
164.权利要求1～163之任一项的抗-EGFR抗体，其中所述用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病涉及巨噬细胞被与EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体活化；及诱导所述活化的巨噬细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。
165.在CH2结构域具有糖基化位点的抗-EGFR抗体，其中附接于所述糖基化位点的聚糖的50％或更少携带岩藻糖(减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)，且其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性反应，用于在人患者中诱导针对EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞的粒细胞-驱动的免疫反应。
166.权利要求165的抗-EGFR抗体，其中所述粒细胞-驱动的免疫反应涉及粒细胞被与所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体结合及活化；及诱导所述活化的粒细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。
167.权利要求165或166的抗-EGFR抗体，其中所述粒细胞是嗜中性粒细胞和/或嗜酸性粒细胞。
168.在CH2结构域具有糖基化位点的抗-EGFR抗体，
其中附接于所述糖基化位点的聚糖的50％或更少携带岩藻糖(减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)，且
其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性反应，用于在人患者中诱导针对EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞的巨噬细胞-驱动的免疫反应。
169.权利要求168的抗-EGFR抗体，其中所述巨噬细胞-驱动的免疫反应涉及巨噬细胞被与所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体活化；及诱导所述活化的巨噬细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。
170.权利要求165～169之任一项的抗-EGFR抗体，其中
所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体是权利要求1～164之任一项中定义的抗体，所述EGFR阳性肿瘤形成疾病是权利要求1～164之任一项中定义的疾病，和/或所述患者是权利要求1～164之任一项中定义的患者。
171.权利要求1～170之任一项的抗-EGFR抗体，其包含在药物组合物中。
172.权利要求171的抗-EGFR抗体，其中
(i)所述药物组合物中附接于所述抗-EGFR抗体的全部的CH2结构域的糖基化位点的全部聚糖的20％或更少、优选15％或更少携带岩藻糖；
(ii)所述药物组合物中附接于所述抗-EGFR抗体的全部的CH2结构域的糖基化位点的全部聚糖的至少10％、优选至少15％携带截开型GlcNAc；
(iii)所述药物组合物中附接于所述抗-EGFR抗体的全部的CH2结构域的糖基化位点的全部聚糖的至少70％、优选至少80％携带至少1个半乳糖；
(iv)所述药物组合物中附接于所述抗-EGFR抗体的全部的CH2结构域的糖基化位点的全部聚糖的至少30％、优选至少35％携带2个半乳糖；
(v)所述药物组合物中附接于所述抗-EGFR抗体的全部的CH2结构域的糖基化位点的全部聚糖的至少5％、优选至少8％携带至少1个唾液酸；
(vi)所述药物组合物中附接于所述抗-EGFR抗体的全部的CH2结构域的糖基化位点的全部聚糖的至少1％、优选至少2％携带2个唾液酸；
(vii)所述药物组合物中附接于所述抗-EGFR抗体的全部的CH2结构域的糖基化位点的聚糖不携带可检测的量的NeuGc；
(viii)所述药物组合物中附接于所述抗-EGFR抗体的全部的CH2结构域的糖基化位点的聚糖不携带可检测的量的Galα1,3-Gal；以及
(ix)所述药物组合物中附接于所述抗-EGFR抗体的全部的CH2结构域的糖基化位点的聚糖携带可检测的量的α2,6-偶联的NeuAc。
173.用于减少用EGFR抑制物治疗患EGFR阳性肿瘤形成疾病的患者中的不利的反应的方法，其包括用在CH2结构域具有糖基化位点的抗-EGFR抗体治疗患者的步骤，其中附接于所述糖基化位点的聚糖的50％或更少携带岩藻糖(减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)，且
其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性反应。
174.权利要求173的方法，其中用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗患者包括以至少
200mg/剂量的量给患者施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
175.权利要求173的方法，其中用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗患者包括以至少
500mg/剂量的量给患者施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
176.权利要求173的方法，其中用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗患者包括以至少
700mg/剂量的量给患者施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
177.权利要求173的方法，其中用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗患者包括以至少
900mg/剂量的量给患者施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
178.权利要求173～177之任一项的方法，其中用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗患者包括以每5天1个剂量至每3周1个剂量之间的间隔给患者施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
179.权利要求178的方法，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体每周施用。
180.权利要求178的方法，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体每隔一周施用。
181.权利要求173～180之任一项的方法，其中所述患者遭受由EGFR抑制物导致的痤疮样皮疹。
182.权利要求181的方法，其中所述痤疮样皮疹是3级或更高。
183.权利要求182的方法，其中所述痤疮样皮疹的严重性被降低至少1级。
184.权利要求181～183之任一项的方法，其中具有不利的皮肤反应的所述患者身体表面积降低至少10％。
185.权利要求184的方法，其中具有不利的皮肤反应的所述患者身体表面积降低至少
20％。
186.权利要求185的方法，其中具有不利的皮肤反应的所述患者身体表面积降低至少
50％。
187.权利要求181～186之任一项的方法，其中所述不利的皮肤反应减少，从而其不再发生。
188.权利要求173～187之任一项的方法，其中所述不利的反应的减少在用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗8周或更少之后发生。
189.权利要求188的方法，其中所述不利的反应的减少在用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗6周或更少之后发生。
190.权利要求189的方法，其中所述不利的反应的减少在用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗4周或更少之后发生。
191.权利要求173～190之任一项的方法，其中所述EGFR抑制物在治疗的患者的70％或更多中导致不利的皮肤反应。
192.权利要求191的方法，其中所述EGFR抑制物在治疗的患者的80％或更多中导致不利的皮肤反应。
193.权利要求191的方法，其中所述EGFR抑制物在治疗的患者的90％或更多中导致不利的皮肤反应。
194.权利要求173～193之任一项的方法，其中所述EGFR抑制物在治疗的患者的25％或更多中导致3级或更高的不利的皮肤反应。
195.权利要求194的方法，其中所述EGFR抑制物在治疗的患者的30％或更多中导致
3级或更高的不利的皮肤反应。
196.权利要求195的方法，其中所述EGFR抑制物在治疗的患者的35％或更多中导致
3级或更高的不利的皮肤反应。
197.权利要求173～196之任一项的方法，其中所述EGFR抑制物在治疗的患者的60％或更多中导致痤疮样皮疹。
198.权利要求197的方法，其中所述EGFR抑制物在治疗的患者的70％或更多中导致痤疮样皮疹。
199.权利要求198的方法，其中所述EGFR抑制物在治疗的患者的80％或更多中导致痤疮样皮疹。
200.权利要求173～199之任一项的方法，其中所述EGFR抑制物在治疗的患者的25％或更多中导致3级或更高的痤疮样皮疹。
201.权利要求200的方法，其中所述EGFR抑制物在治疗的患者的30％或更多中导致
3级或更高的痤疮样皮疹。
202.权利要求201的方法，其中所述EGFR抑制物在治疗的患者的35％或更多中导致
3级或更高的痤疮样皮疹。
203.权利要求173～202之任一项的方法，其中所述EGFR抑制物是抗-EGFR抗体，诸如西妥昔单抗 帕尼单抗 和GA201。
204.权利要求173～203之任一项的方法，其中所述用EGFR抑制物治疗是高剂量治疗。
205.权利要求173～204之任一项的方法，其中所述用EGFR抑制物治疗涉及每周施用
2
至少200mg西妥昔单抗 /m患者身体表面积。
206.权利要求205的方法，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体被以与西妥昔单抗相同量或更高量施用于患者。
207.权利要求173～206之任一项的方法，其中所述用EGFR抑制物治疗被中止。
208.权利要求173～207之任一项的方法，其中
所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体是权利要求1～172之任一项中定义的抗体，所述EGFR阳性肿瘤形成疾病是权利要求1～172之任一项中定义的疾病，
所述患者是权利要求1～172之任一项中定义的患者，和/或
所述用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗患者是权利要求1～172之任一项中定义的治疗。
用具有低岩藻糖基化的抗-EGFR抗体的抗-癌治疗
【技术领域】
[0001] 本发明属于具有改善的特征的抗-EGFR抗体在抗-癌治疗中的新医疗应用。所述抗-EGFR抗体显示更优治疗性功效，有不利的副作用诸如皮肤反应的大大减少的发生。因此，用这些抗体治疗癌患者良好耐受，及治疗另外由于由常规抗-EGFR抗体导致的严重的不利的反应而不可治疗的患者是可能的。【背景技术】
[0002] 抗体是在医学和研究领域广泛使用的剂。在医学中，它们被发现应用于许多不同领域，尤其是在治疗和预防各种疾病，尤其是肿瘤形成疾病诸如癌中作为治疗剂。但是，由癌患者的抗体治疗获得的治疗结果是高度可变的。使用抗-癌抗体的治疗的显著百分率显示疾病的无或仅小缓解和和有时限于特定患者组。
[0003] 例示建立的抗-癌抗体是针对表皮生长因子受体(EGFR)的抗体。EGF受体是质膜中锚定的受体酪氨酸激酶。配体表皮生长因子(EGF)或转化生长因子α(TGFα)与EGFR的细胞外结构域的结合导致受体的二聚化和其细胞内蛋白-酪氨酸激酶活性的刺激。由有活性的受体二聚体起始的信号转导级联控制细胞迁移，粘接和增殖。人表皮生长因子受体(EGFR)蛋白被认为是针对包含高EGFR活性(由EGFR过表达或通过EGFR蛋白的突变)的癌的抗体治疗的独特和有用的靶。EGFR在几种癌，包括但不限于结直肠癌，肺癌，胰腺癌和头颈癌中过表达。EGFR或家族成员的突变，扩增或误调牵涉约30％的全部上皮癌及相关于差的预后。
[0004] 几种针对EGFR的抗体为本领域所知。它们中的一些已被批准用于医疗应用。例如，重组嵌合小鼠/人IgG1抗-EGFR单克隆抗体西妥昔单抗( Merck)在欧洲和美国被批准用于临床应用，用于治疗转移性结直肠癌和头和颈鳞状细胞癌。西妥昔单抗被用作单-及联合治疗。将西妥昔单抗在SP2/0细胞(鼠细胞系)中表达，由此被高度岩藻糖基化及具有总体鼠糖基化模式。被批准用于医疗应用的另一抗-EGFR抗体是人单克隆IgG2抗体帕尼单抗( Amgen)。
[0005] 这些抗-EGFR抗体是在癌治疗中有效，因为它们能抑制EGFR信号传导。它们结合EGFR的细胞外结构域，及预防天然的活化配体诸如EGF和TGFα的结合，由此抑制EGFR的二聚化和活化和其下游信号传导级联。需注意，此作用机理是仅对于依赖于EGFR的活化的肿瘤增殖关联。尤其在结直肠癌中，大部分肿瘤，但是，在KirstenRas基因(KRAS)中包含突变，致使K-Ras蛋白恒定有活性。K-Ras是EGFR的下游信号传导级联的重要成员，和EGFR信号传导的抑制通常会对K-Ras是恒定有活性的肿瘤无效应。因为此，西妥昔单抗和帕尼单抗仅被批准用于治疗KRAS野生型转移性结直肠癌。
[0006] 作为进一步作用模式，IgG1抗体西妥昔单抗也诱导抗体-依赖性细胞-介导的细胞毒性(ADCC)。与靶癌细胞表面上的其抗原结合的抗体募集免疫细胞，其然后毁坏癌细胞。此通过抗体的恒定区与免疫细胞上的Fcγ受体的结合介导。尤其是，IgG1抗体的Fc区结合自然杀伤细胞上的FcγRIIIa。
[0007] 减少的岩藻糖，包括无岩藻糖基化的IgG1抗体已显示具有增强的抗体-依赖性细胞-介导的细胞毒性(ADCC)，由此提供开发生物学更好的抗体的机会。证据提示，自伯N-乙酰葡萄糖胺的岩藻糖缺失导致增加的IgG1抗体与FcγRIIIa受体的结合的亲和性，因而增加的由自然杀伤(NK)细胞介导的ADCC功效。此在采用除岩藻糖残基缺陷外，尤其是α(1-6)岩藻糖基转移酶已被敲除的突变CHO细胞中产生的非-岩藻糖基化的糖型的研究中确认。非-岩藻糖基化的IgG1糖型对补体的FcγRI或C1组分的亲和性被报道未受影响；报道了对FcγRIIa和FcγRIIb的亲和性的小增加，但由于活化/抑制性比被维持，得出其不会是功能性地显著的。对无岩藻糖基化的IgG-Fc观察到的增强的ADCC部分来自增加的对FcγRIIIa的亲和性，克服正常血清IgG的竞争。对无岩藻糖基化的西妥昔单抗也呈现改善的ADCC。FcγRIIIa受体是多态的，和已显示，相比FcγRIIIa-158F(苯丙氨酸)形式，FcγRIIIa-158V(缬氨酸)形式对于岩藻糖基化的IgG1具有更高亲和性。体外展示，相比通过纯合FcγRIIIa-158F或杂合FcγRIIIa-158V/FcγRIIIa-158F细胞介导ADCC，在通过具有纯合FcγRIIIa-158V的细胞介导ADCC中岩藻糖基化的IgG1抗体更有效。因此，预期，依赖于表达的FcγRIIIa的多态形式，ADCC功效中的类似差异可体内关联。例如，Zhang等人(2007)J Clin Oncol 25，3712-3718描述，FcγRIIIa的等位基因状态影响接收西妥昔单抗单一治疗的结直肠癌患者的无进展的存活的平均时间。无岩藻糖基化的抗体的使用用于治疗现有技术(例如US 2006/0182741)中推荐的F/F纯合或V/F杂合的弱-应答者患者的相应亚群。无岩藻糖基化的抗体和具有减少的岩藻糖含量的抗体也描述于EP 1500 400和WO 2008/028686。
[0008] 但是，尽管对于几种类型的癌，用抗-EGFR抗体获得良好治疗结果，肾癌，尤其是肾细胞癌，至今常常逃避抗体治疗以及许多其他抗-癌治疗。一般观察到，肾癌常常不应答抗体治疗，化学治疗或放射治疗。此尤其是应用于EGFR靶向癌治疗，尽管70％～90％的肾细胞癌表达EGFR。例如，用西妥昔单抗( )的II期临床研究未显示任何部分或完全应答和仅观察到非常短的中位进展用时间(见Motzer,R.J.等人(2003)Investigational New Drugs 21,99～101)。同样，EGFR抑制物ZD1839，有力的酪氨酸激酶抑制物，也未在II期临床试验中显示治疗性功效(见Drucker,B.J.等人(2002)Proceedings of the American Society of Clinical Oncology 21,摘要720)。因此，患肾癌的患者具有非常差的预后。由于此应答缺乏，肾癌，尤其是肾细胞癌，已知是在全部生殖泌尿肿瘤中最致死的。当今的标准治疗是肿瘤块的充分手术移出。但是，转移性肾细胞癌给肿瘤科医生呈现特定挑战，由于约70％的患者在他们的疾病过程期间发展转移瘤。患转移性肾细胞癌的患者5年存活率低至5～15％。此主要基于目前在原发性肿瘤和可见转移的手术切除之后无用于肾细胞癌的建立的辅助的治疗。非特异性细胞因子的使用至今已显示无效。不像多数其他癌，肾细胞癌抵抗多数细胞毒性和细胞生长抑制剂，这严重限制可能的有效辅助的治疗。癌疫苗，放射治疗，化学治疗，免疫治疗或生物学治疗的试验罕有成功，即便它们基于有前景的体外数据。因此，用于完全切除的高-风险肾细胞癌护理的目前标准是紧密观察而无其他治疗。
[0009] 但是，在一临床研究中，通过使用抗-EGFR抗体帕尼单抗(Amgen Inc.的ABX-EGF)获得一些结果(见Rowinsky,E.K.等人(2004)Journal of Clinical Oncology22,3003-3015)。观察到一些应答，及约50％的患者具有稳定的疾病至少8周。无中位进展的存活是100天。但是，治疗相关于不利的皮肤反应的非常高发生率。依赖于剂量水平，达
100％的患者遭受在痤疮样疹。此外，帕尼单抗是不能在患者中诱导ADCC的IgG2抗体。因此，独立于EGFR信号传导的肿瘤诸如具有KRAS突变的那些对于用帕尼单抗治疗不敏感。
100％的患者遭受在痤疮样疹。此外，帕尼单抗是不能在患者中诱导ADCC的IgG2抗体。因此，独立于EGFR信号传导的肿瘤诸如具有KRAS突变的那些对于用帕尼单抗治疗不敏感。
[0010] 因此，对于用于治疗肾癌诸如透明细胞肾癌和也非-透明细胞肾癌的新治疗法有大需求。
[0011] 用全部抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗和也其他EGFR抑制物一般观察到，它们常导致不利的皮肤反应。这些皮肤反应跨自弱皮肤刺激至覆盖大多数患者的身体表面的严重的皮疹。这些皮疹伴随脓疱，瘙痒，肿胀及常常疼痛，及在严重的情况中可相关于溃疡形成，感染和甚至皮肤区的坏死。皮疹，尤其是痤疮样疹，在用EGFR抑制物，尤其是抗-EGFR抗体治疗的患者中高度常见。例如，约76％～88％的用抗-EGFR抗体西妥昔单抗( )治疗的患者受痤疮样疹影响，包括达17％具有严重的形式的此不利的反应(见,例如,Eli Lilly&Co.的爱必妥的处方信息)。这些不利的皮肤反应也由其他抗-EGFR抗体诸如帕尼单抗发生。因此，文献中广泛描述，不利的皮肤反应，也被称为皮肤毒性，是全部EGFR抑制物的独特类-比毒性，和尤其是随抗-EGFR抗体发生(见例如.li,T.和Perez-Soler,R。
(2009)Targeted Oncology 4,107-119和Perez-Soler,R.等人。(2005)The Oncologist
10,345～356)。因为不利的皮肤反应是如此常见的，和考虑到自用不同EGFR抑制物包括不同抗-EGFR抗体的几种临床研究获得的实验数据，至今相信，不利的皮肤反应的发生甚至EGFR抑制物的功效，和因此，与癌治疗的成功直接关联。因此，皮肤反应的发生被认为是治疗性功效的标志物。例如，Fracasso，P.M.等人(2007)Clinical Cancer Research
13，986～993在它们的临床研究以及在其他研究中陈述，由于用抗-EGFR抗体西妥昔单抗( )治疗而具有部分应答或稳定的疾病的患者相比具有疾病进展的那些具有统
计学地显著更高总体疹级。也根据Li，T.和Perez-Soler，R(2009)Targeted Oncology 4，
107～119，皮疹的存在和严重性相关于接收EGFR抑制物的患者的改善的临床功效。在使用单克隆IgG2抗-EGFR抗体ABX-EGF(帕尼单抗)的进一步I期临床研究中，约80％的患者也遭受痤疮样皮疹，包括显著数的严重的情况(见Rowinsky,E.K.等人(2004)Journal of Clinical Oncology 22,3003-3015)。在两种研究中，不利的皮肤反应再次被认为是药物作用的潜在标志物，及临床益处的潜在替代品标志物(见也Perez-Soler等人,2005)。
(2009)Targeted Oncology 4,107-119和Perez-Soler,R.等人。(2005)The Oncologist
10,345～356)。因为不利的皮肤反应是如此常见的，和考虑到自用不同EGFR抑制物包括不同抗-EGFR抗体的几种临床研究获得的实验数据，至今相信，不利的皮肤反应的发生甚至EGFR抑制物的功效，和因此，与癌治疗的成功直接关联。因此，皮肤反应的发生被认为是治疗性功效的标志物。例如，Fracasso，P.M.等人(2007)Clinical Cancer Research
13，986～993在它们的临床研究以及在其他研究中陈述，由于用抗-EGFR抗体西妥昔单抗( )治疗而具有部分应答或稳定的疾病的患者相比具有疾病进展的那些具有统
计学地显著更高总体疹级。也根据Li，T.和Perez-Soler，R(2009)Targeted Oncology 4，
107～119，皮疹的存在和严重性相关于接收EGFR抑制物的患者的改善的临床功效。在使用单克隆IgG2抗-EGFR抗体ABX-EGF(帕尼单抗)的进一步I期临床研究中，约80％的患者也遭受痤疮样皮疹，包括显著数的严重的情况(见Rowinsky,E.K.等人(2004)Journal of Clinical Oncology 22,3003-3015)。在两种研究中，不利的皮肤反应再次被认为是药物作用的潜在标志物，及临床益处的潜在替代品标志物(见也Perez-Soler等人,2005)。
[0012] 在用糖加工的单克隆抗-EGFR抗体RG7160(GA201)的新近I期临床研究中，80％的患者也发展皮疹，25％的患者具有3级或甚至4级的严重的疹(见Paz～Ares,L.G.等人。(2011)Journal of Clinical Oncology 29,3783-3790)。此研究用50和1,400mg抗体之间的剂量显示约50％的临床益处率(具有稳定的疾病,部分应答或完全应答的患者比)。约5％的患者具有部分或完全应答，及在用少于400mg抗体治疗的患者中，仅18％显示稳定的疾病。此外，26％的患者观察到肿瘤尺寸的收缩，各用40mg抗体或更多治疗。无进展的存活的平均持续时间是121天。但是，该临床益处率常常仅由接收的他们的第1常规化学治疗剂治疗的患者达到。为了治疗群体，临床益处率更低。此外，由于高数的不利的皮肤反应，15％的患者需要剂量延迟和8％需要剂量减小。患者也因为不利的皮肤反应而自研究撤离。32％的患者由于持续的疹而需在研究结束时另外地治疗。当抗体以低剂量给出时，皮疹也以高发生率观察到。因此，用这些新，优化的抗-EGFR抗体，也发生不利的皮肤反应，包括严重的形式。再次报道，疹的发生率与之前为西妥昔单抗和帕尼单抗报道的一致，其中其被认为与活性关联。也随GA201发生的抗-EGFR抗体的常见的其他不利的事件是低镁血症和输注相关的反应(77％)。
[0013] 也为人单克隆抗-EGFR抗体扎芦木单抗获得类似结果。患转移性头和颈鳞状细胞癌的癌患者的治疗显示总体存活和无进展的存活的小至中等增加。但是，92％的患者报道皮疹，21％的患者具有3或4级疹(见Machiels,J.-P.等人(2011)Lancet Oncology12,333～343)。
[0014] 但是，这些通常发生的皮肤反应对于EGFR抑制物治疗在几个不同方面高度有问题。其一，用EGFR抑制物治疗的癌患者是通常已处于差的一般健康状况，和不利的皮肤反应还劣化患者的状态，由此变得甚至更关键。因此，这些患者可难以耐受由常规EGFR抑制物治疗导致的不利的皮肤反应的进一步负担或为治疗皮肤反应的另外的药物治疗的负担。此外，如果皮肤反应发展为严重的形式，它们可伴随可容易给癌患者造成麻烦或甚至威胁生命的皮肤坏死或继发感染。严重的皮肤毒性发展后，报道了并发症，包括金黄色葡萄球菌(S.aureus)脓毒症和需要切开和排出的脓肿。此外，在2012年7月，Amgen发出了红头文件，其中所述医疗医师被通知及警告，在用抗-EGFR抗体帕尼单抗治疗期间，在相关于由治疗导致的严重的不利的皮肤反应，尤其是坏死筋膜炎和脓毒症的治疗期间发生具有死亡发生率的危胁生命的和感染性并发症。在不同化学治疗性治疗之后尤其晚期阶段癌患者常常仅具有减少的免疫应答，和应避免任何进一步并发症。而且，对于具有更佳一般健康状态的患者，不利的皮肤反应也可由于它们对心理学水平的巨大的负面效应而成为严重的并发症。EGFR抑制物诱导的皮疹常常影响上身体区，包括面和因此，无法隐藏。因此，它们是被其他人可见的。对于许多患者，甚至欠严重的不利的皮肤反应可发展为不堪忍受的心理学负担，和可导致治疗中止。
[0015] 而且，至今无用于治疗或预防这些不利的皮肤反应的通用的手段(见Li,T.和Perez-Soler,R(2009)Targeted Oncology 4,107-119和Perez-Soler,R.等人。(2005)The Oncologist 10,345～356)。反之，除了用EGFR抑制物的癌治疗之外，各患者还需对皮肤反应个别治疗。在 的处方信息中，建议用口服四环素的预防性共治疗和其他治疗。但是，文献描述，迫切地需要管理在EGFR抑制物治疗期间发生的不利的皮肤反应的新治疗法，尤其是抗-EGFR抗体治疗法。
[0016] 如果严重的不利的皮肤反应发生，不利的皮肤反应，尤其是严重的形式诸如3级或更高的具体性及对治疗的冲击也自用需适应的抗-EGFR抗体治疗变得明晰。例如，如果在用西妥昔单抗治疗期间发生3级或更高的严重的不利的皮肤反应，治疗必需间断及仅可在不利的皮肤反应减少至2级时持续。如果3级或更高的不利的皮肤反应第2或第3次复发，治疗必需间断及当持续治疗时剂量必需减少。如果不利的皮肤反应再次复发或不利的皮肤反应不退至2级，用西妥昔单抗的治疗必需甚至终止(见 处方信息)。也为抗-EGFR抑制物帕尼单抗(见处方信息)提供类似治疗方案。因此，操作严重的不利的皮肤反应的唯一方式是剂量减小或中断或终止EGFR抑制物治疗(也见Fracasso,P.M.等人(2007)Clinical Cancer Reserch 13,986-993和Li,T.和Perez-Soler,R(2009))。但是，在治疗中断或终止的情况，癌不再被治疗，及在尤其是无其他治疗选项的患者中，肿瘤进一步进展和转移性传播可由此是不利的皮肤反应的直接结果。在具有进展的癌的患者中，此可具有显著结果。类似问题可发生在剂量减小期间，随功效可减少。
[0017] 因此，显然这些皮肤反应对于用抗-EGFR抗体和其他EGFR抑制物治疗是具体和关联的，和对治疗进程和患者管理也具有严重的冲击。因此，对于用避免或减少不利的皮肤反应，尤其是3级和更高的严重的皮肤反应的发生的抗-EGFR抗体的新治疗法有需求。
[0018] 癌患者的另一主要并发症是恶性泻流(也被称为恶性肿瘤-相关的泻流,即由恶性癌疾病导致的流体例如自血或淋巴管逃逸至体腔)(见,例如,Covey,A.M(2005)The Journal of Supportive Oncology 3,169-176和 Olopade,O.I. 和 Ultmann,J.E(1991)Cancer Journal for Clinicians 41,166～179)。这些泻流通常需通过穿剌排出，以给患者至少一些减轻。但是，此过程是非常疼痛的，及造成并发症诸如继发感染或低血压的风险。此外，泻流排出仅靶向症状，和需常重复，这增加疼痛和并发症风险，及对于患者非常麻烦。泻流由通过衬体腔的膜的流体运输的去调节导致。影响衬体腔的膜(间皮)的原发性肿瘤或转移可，例如，导致不受控的流体输入和/或扰乱的流体输出。尤其是，胸腔积液和腹膜泻流(即腹水)影响许多患晚期或末期癌的患者。胸腔积液是胸膜腔中过量的流体收集，及常常与呼吸困难，咳嗽和胸疼痛关联。成为恶性胸腔积液的基础的最常见的类型的癌是肺和乳腺癌以及淋巴瘤。但是，原理上任何癌可导致恶性泻流，由于也可影响相应间皮的转移性传播。恶性腹水主要与卵巢，乳腺，胃，胰腺，肝脏和结肠癌和淋巴瘤关联。除了通过泻流直接导致的疼痛和负担之外，由于得到的不动性，努力排出泻流和由其得到的疼痛，也大大不利地影响患者的生命质量。但是，由于恶性泻流常常在患晚期或甚至末期癌的患者中发展，标准癌治疗在许多情况中对泻流不具有效应。癌治疗的情景中泻流的重要性也由为治疗恶性泻流特别批准药物所凸显。因此，恶性泻流被视为需治疗的分离的，另外的适应证。例如，卡妥索单抗( 由Trion Pharma)是为治疗恶性腹水使用的双特异性抗体。但是，除了癌治疗之外，此导致进一步治疗，与通常与进一步不利的副作用关联和显著地给癌患者添加负担。例如，卡妥索单抗在约90％的治疗的患者中导致不利的反应(见Fresenius Biotech GmbH的Removab的开处方信息)。
[0019] 因此，也有用于恶性泻流的新治疗的需求。尤其是，对于也允许治疗恶性泻流的抗癌治疗有需求。
[0020] 考虑到以上，明白对于EGFR阳性肿瘤形成疾病，尤其是EGFR阳性恶性上皮肿瘤的新及改善的治疗有大需求。尤其是，对于提供用抗-EGFR抗体有效治疗EGFR阳性癌，但是，解决与由常规抗-EGFR抗体治疗导致的高度常见的严重的不利的皮肤反应关联的问题有高需求。此外，也对于有效针对肾癌，尤其是透明细胞和非-透明细胞肾癌有新治疗需要。此外，对于有效预防或减少恶性泻流的癌治疗也有大需求。
[0021] 【发明概述】
[0022] 本发明的在它们的Fc区具有减少的(包括缺乏)岩藻糖基化的抗-EGFR抗体在临床试验中展示显著的治疗特征和高治疗性功效。例如所述抗-EGFR抗体有效抵抗广范围的不同EGFR-阳性肿瘤形成疾病，诸如结肠癌，肺癌，胃癌和肾癌包括不同类型的肾细胞癌。所述抗-EGFR抗体也被发现有效抵抗不同形式的转移瘤。此外，用本发明的抗-EGFR抗体治疗针对与EGFR阳性恶性疾病关联的泻流也高度有效，及尤其在治疗胸膜和/或腹膜泻流中有效。因此，本发明为患所述疾病的患者提供新治疗，甚至在单一治疗设置中。
[0023] 同时，本发明人意外地发现，本发明的抗-EGFR抗体导致相比常规EGFR抑制物，尤其是相比目前使用的抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗( Merck)，帕尼单抗( Amgen)或新开发的抗-EGFR抗体诸如GA201显著地少和更弱不利的皮肤反
应。如上所述，常规抗-EGFR抗体总是与严重的不利的反应，尤其不利的皮肤反应诸如痤疮样疹关联。因为这些不利的皮肤反应對于抗-EGFR抗体如此常见，它们在现有技术甚至被认为是用于EGFR抑制物的治疗性功效的指标(见以上)。但是，本发明，反证推定，有效用EGFR抑制物治疗不可避免地与不利的皮肤反应关联，包括在大量的治疗的患者中严重的皮肤反应。如由本文呈现的临床数据显示，本发明的抗-EGFR抗体显示仅弱至中等不利的皮肤反应和甚至这些弱皮肤反应仅在少于50％的治疗的患者中发生。至今在临床研究中观察到无3级或更高的严重的不利的皮肤反应。此是区别本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体与现有技术抗-EGFR抗体诸如 帕尼单抗，扎芦木单抗和GA201(在80％或更
多的患者中导致不利的皮肤反应及在许多情况中导致3级和更高的不利的皮肤反应)的高度显著的性质。然而，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在体外测试，包括完全人测定，及临床研究中展示高治疗性功效。此外，如由本文提供的临床数据显示，在本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体中一般的副作用特征也改善，这对长期治疗是重要的。例如，本发明的抗-EGFR抗体具有减少的低镁血症，健康-关键低血镁水平风险，而用常规抗-EGFR抗体治疗在几乎全部治疗的患者中导致进行性镁损失，在达55％的患者中导致低镁血症。此外，无过敏性反应报道及其他不利的反应诸如低钾血症或腹泻的发生率相比标准治疗显著地减少。因此，用本发明的抗-EGFR抗体治疗被患者更佳耐受。考虑到癌患者，尤其是重度预治疗的患者的健康条件，此是重要的。
应。如上所述，常规抗-EGFR抗体总是与严重的不利的反应，尤其不利的皮肤反应诸如痤疮样疹关联。因为这些不利的皮肤反应對于抗-EGFR抗体如此常见，它们在现有技术甚至被认为是用于EGFR抑制物的治疗性功效的指标(见以上)。但是，本发明，反证推定，有效用EGFR抑制物治疗不可避免地与不利的皮肤反应关联，包括在大量的治疗的患者中严重的皮肤反应。如由本文呈现的临床数据显示，本发明的抗-EGFR抗体显示仅弱至中等不利的皮肤反应和甚至这些弱皮肤反应仅在少于50％的治疗的患者中发生。至今在临床研究中观察到无3级或更高的严重的不利的皮肤反应。此是区别本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体与现有技术抗-EGFR抗体诸如 帕尼单抗，扎芦木单抗和GA201(在80％或更
多的患者中导致不利的皮肤反应及在许多情况中导致3级和更高的不利的皮肤反应)的高度显著的性质。然而，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在体外测试，包括完全人测定，及临床研究中展示高治疗性功效。此外，如由本文提供的临床数据显示，在本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体中一般的副作用特征也改善，这对长期治疗是重要的。例如，本发明的抗-EGFR抗体具有减少的低镁血症，健康-关键低血镁水平风险，而用常规抗-EGFR抗体治疗在几乎全部治疗的患者中导致进行性镁损失，在达55％的患者中导致低镁血症。此外，无过敏性反应报道及其他不利的反应诸如低钾血症或腹泻的发生率相比标准治疗显著地减少。因此，用本发明的抗-EGFR抗体治疗被患者更佳耐受。考虑到癌患者，尤其是重度预治疗的患者的健康条件，此是重要的。
[0024] 如以下会详细描述，用本发明的抗-EGFR抗体达到的高治疗性功效以及显著更低程度的皮肤毒性和总体改善的副作用特征提供重要新治疗选项和尤其是允许有效治疗用已知导致3级或更高的严重的不利的皮肤反应的常见的抗-EGFR抗体不可治疗的新患者组。尤其是，用常规抗-EGFR抗体不可或不可进一步治疗的患者，例如因为由于这些不利的反应重于由治疗接收的潜在健康益处的健康风险，及发生患者的用常规抗-EGFR抗体的治疗因为不利的反应，尤其是严重的不利的皮肤反应需间断或终止，现在可用本发明的减少的岩藻糖EGFR抗体治疗。由此，提供新和重要新治疗选项，这是对现有技术的重要贡献。
[0025] 基于以上发现，本发明提供在CH2结构域具有糖基化位点的抗-EGFR抗体，其中50％或更少，40％或更少，30％或更少、优选25％或更少，更优选20％或更少，更优选15％～0％的附接于所述糖基化位点的聚糖携带岩藻糖(减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)，且其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性反应，用于治疗患EGFR阳性肿瘤形成疾病，尤其是癌的人患者。如上所述，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体相比现有技术抗-EGFR抗体导致欠不利的皮肤反应。在特定实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于10％、优选不多于3％，更优选的不多于1％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。
[0026] 本发明的抗-EGFR抗体提供多种新治疗选项。尤其，它们可用作EGFR阳性肿瘤形成疾病的第1线治疗和/或如下治疗之前接收一次或更多抗-癌治疗的患者。EGFR阳性肿瘤形成疾病的不同治疗详细描述于本发明的详述。以下凸显用于治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病的一些方面。
[0027] 根据一方面，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体是用于治疗已之前用至少一种EGFR抑制物，尤其是抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗或帕尼单抗治疗的人患者。根据特定实施方式，此之前治疗在所述患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。
[0028] 根据再一方面，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗具有知道的针对导致该严重的不利的皮肤反应的抗-EGFR抗体，尤其是西妥昔单抗( )或帕尼单抗的3或4级的严重的不利的皮肤反应的人患者。
[0029] 根据再一方面，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗在用在多于12％的治疗的患者中导致3级或更高的严重的不利的皮肤反应的抗-EGFR抗体治疗期间处于发展3或4级的严重的不利的皮肤反应的风险的人患者。
[0030] 根据再一方面，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗已之前用EGFR抑制物，尤其是抗-EGFR抗体治疗的人患者，且其中所述之前治疗间断，终止或其中所述EGFR抑制物的剂量需减少，因为在所述之前治疗期间发生的不利的皮肤反应。
[0031] 根据再一方面，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗已之前用EGFR抑制物，尤其是抗-EGFR抗体治疗的人患者，且其中所述之前用EGFR抑制物治疗不是或不可持续，因为针对所述EGFR抑制物发生的不利的皮肤反应。
[0032] 根据再一方面，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于在这样的条件下治疗人患者中的EGFR阳性肿瘤形成疾病，其中对于至少一种其他抗-EGFR抗体而言，当在所述条件下用所述其他抗-EGFR抗体治疗患者时，该条件在至少50％的患者中导致不利的皮肤反应；或用于在这样的条件下治疗人患者中的EGFR阳性肿瘤形成疾病，其中对于至少一种其他抗-EGFR抗体而言，当在所述条件下用所述其他抗-EGFR抗体治疗患者时，该条件在至少12％的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。至少一种其他抗-EGFR抗体尤其是选自：
高岩藻糖西妥昔单抗( )，帕尼单抗，扎芦木单抗和GA201。关于此，“在条件下”尤其是指抗-EGFR抗体的剂量。
高岩藻糖西妥昔单抗( )，帕尼单抗，扎芦木单抗和GA201。关于此，“在条件下”尤其是指抗-EGFR抗体的剂量。
[0033] 根据一方面，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗患EGFR阳性肿瘤形成疾病的人患者，所述疾病已显示，至少一种其他抗-EGFR抗体在多于50％，多于60％或多于70％的治疗的患者中显示不利的皮肤反应。在本文描述了该EGFR阳性肿瘤形成疾病的例和优选的实施方式，及其在相应公开中提及。在特定实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗体以所述其他抗-EGFR抗体在多于50％，多于55％，多于60％，多于65％，多于70％或多于
75％的患者中显示不利的皮肤反应的剂量施用。在特定实施方式中，其他抗-EGFR抗体选自高岩藻糖西妥昔单抗( )，帕尼单抗，扎芦木单抗和GA201。在一实施方式中，其他抗-EGFR抗体是西妥昔单抗( )。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗体以
每周至少200mg，优选每周240mg，每周300mg，每周400mg或每周500mg的平均剂量，优选以每周(以每剂量指示的量)或每隔一周(以每剂量两倍量)一剂量施用。在特定实施方式中，由其他抗-EGFR抗体导致的不利的皮肤反应包括3级或更高的不利的皮肤反应。在特定实施方式中，由其他抗-EGFR抗体(根据一实施方式是西妥昔单抗( ))导致的
不利的皮肤反应是或包括痤疮样皮疹。本发明的减少岩藻糖的抗体可以所述其他抗-EGFR抗体在多于12％，多于15％，或更多相比17％的患者中显示3级或更高的不利的皮肤反应的剂量施用。如本文所述，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体具有不利的皮肤反应，尤其是3或4级的不利的皮肤反应的发生率显著地减少或可甚至预防的优势。因此，本发明在通过施用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体来用抗-EGFR抗体治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病期间允许减少或预防副作用，尤其是不利的皮肤反应。尤其是，3或4级的不利的皮肤反应可由本发明显著地减少或预防。即便至少每周200mg，优选每周240mg，每周300mg，每周400mg或每周500mg的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的平均剂量被施用于患者和甚至当治疗当用另一抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗( )治疗时，具有不利的皮肤反应诸
如皮疹的特定高发生率的EGFR阳性肿瘤形成疾病诸如结直肠癌时，也达到此有利效果。现有技术抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗( )当以该剂量使用时，在多于75％的患
者中导致不利的皮肤反应和也导致3或4级的不利的皮肤反应。因此，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体提供新治疗选项。本发明的减少岩藻糖的抗体可用作第1线，第2线或随后治疗。在特定实施方式中，用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗的患者已之前用在多于50％，多于60％或多于70％的治疗的患者中导致不利的皮肤反应的抗-EGFR抗体治疗。在特定实施方式中，用抗-EGFR抗体的之前治疗需终止，间断或剂量需减少，因为发生不利的皮肤反应，尤其是3或4级的不利的皮肤反应，和/或因为用之前使用的抗-EGFR抗体治疗失效。该预治疗以及适合的和优选的实施方式的细节也描述于本发明的详述及在所述公开中提及。此外，这里也描述EGFR阳性肿瘤形成疾病，适合的及优选的剂量和患者组的特定实施方式。相应公开可与描述于此段落的本发明的方面组合。在特定实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于至少3个月，至少6个月，至少9个月或至少
12个月的长期治疗。
75％的患者中显示不利的皮肤反应的剂量施用。在特定实施方式中，其他抗-EGFR抗体选自高岩藻糖西妥昔单抗( )，帕尼单抗，扎芦木单抗和GA201。在一实施方式中，其他抗-EGFR抗体是西妥昔单抗( )。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗体以
每周至少200mg，优选每周240mg，每周300mg，每周400mg或每周500mg的平均剂量，优选以每周(以每剂量指示的量)或每隔一周(以每剂量两倍量)一剂量施用。在特定实施方式中，由其他抗-EGFR抗体导致的不利的皮肤反应包括3级或更高的不利的皮肤反应。在特定实施方式中，由其他抗-EGFR抗体(根据一实施方式是西妥昔单抗( ))导致的
不利的皮肤反应是或包括痤疮样皮疹。本发明的减少岩藻糖的抗体可以所述其他抗-EGFR抗体在多于12％，多于15％，或更多相比17％的患者中显示3级或更高的不利的皮肤反应的剂量施用。如本文所述，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体具有不利的皮肤反应，尤其是3或4级的不利的皮肤反应的发生率显著地减少或可甚至预防的优势。因此，本发明在通过施用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体来用抗-EGFR抗体治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病期间允许减少或预防副作用，尤其是不利的皮肤反应。尤其是，3或4级的不利的皮肤反应可由本发明显著地减少或预防。即便至少每周200mg，优选每周240mg，每周300mg，每周400mg或每周500mg的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的平均剂量被施用于患者和甚至当治疗当用另一抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗( )治疗时，具有不利的皮肤反应诸
如皮疹的特定高发生率的EGFR阳性肿瘤形成疾病诸如结直肠癌时，也达到此有利效果。现有技术抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗( )当以该剂量使用时，在多于75％的患
者中导致不利的皮肤反应和也导致3或4级的不利的皮肤反应。因此，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体提供新治疗选项。本发明的减少岩藻糖的抗体可用作第1线，第2线或随后治疗。在特定实施方式中，用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗的患者已之前用在多于50％，多于60％或多于70％的治疗的患者中导致不利的皮肤反应的抗-EGFR抗体治疗。在特定实施方式中，用抗-EGFR抗体的之前治疗需终止，间断或剂量需减少，因为发生不利的皮肤反应，尤其是3或4级的不利的皮肤反应，和/或因为用之前使用的抗-EGFR抗体治疗失效。该预治疗以及适合的和优选的实施方式的细节也描述于本发明的详述及在所述公开中提及。此外，这里也描述EGFR阳性肿瘤形成疾病，适合的及优选的剂量和患者组的特定实施方式。相应公开可与描述于此段落的本发明的方面组合。在特定实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于至少3个月，至少6个月，至少9个月或至少
12个月的长期治疗。
[0034] 根据再一方面，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗在之前治疗中发展了针对治疗性抗体的过敏性反应的人患者。尤其是，患者可发展了针对在啮齿动物细胞中产生的治疗性抗体的过敏性反应。在特定实施方式中，患者在之前治疗中发展了针对抗-EGFR抗体的过敏性反应。
[0035] 根据再一方面，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗具有既有Gal-Gal IgE抗体的人患者。
[0036] 根据再一方面，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于在具有EGFR阳性肿瘤形成疾病，尤其是癌的人患者中治疗恶性泻流，尤其是恶性胸膜或腹膜泻流，尤其是恶性腹水。
[0037] 根据再一方面，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗EGFR阳性肾细胞癌，尤其用于治疗透明细胞肾细胞癌或用于治疗非-透明细胞肾细胞癌。
[0038] 此外，在本发明的再一方面提供治疗人患者中的EGFR阳性肿瘤形成疾病的方法，包含给患者施用治疗有效量的本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性反应。
[0039] 在另一方面，本发明提供减少用EGFR抑制物治疗患EGFR阳性肿瘤形成疾病的患者中的不利的反应的方法，包含用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗患者的步骤。尤其是，方法包括终止用EGFR抑制物治疗及起始用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗。
[0040] 本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的本文所述的全部实施方式和特征也同样应用于本发明的治疗方法和其他方法。尤其是，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗患者也指治疗所述患者的相应方法。
[0041] 以上方面可组合。本领域技术人员自以下说明和随附的权利要求明晰本发明的其他目的，特征，优势和方面。但是，应明白，以下说明，随附的权利要求和特定实施例指示申请的优选的实施方式，仅由例证方式给出。本领域技术人员自以下内容明晰各种变化和修饰在公开的发明的精神和范围之内。
[0042] 【定义】
[0043] 如本文所用，以下表达通常旨在优选具有以下所述的含义，除非使用它们的情景有另外指示。
[0044] 表达"包含"，如本文所用，除其字面含义，也包括及特别指称表达"基本上由…组成"和"由…组成"。由此，表达"包含"指称实施方式，其中所述主题"包含"特别列的要素可和/或的确不包括其他要素，以及实施方式，其中所述主题"包含"特别列的要素不包含其他要素。同样，表达"具有"应理解为表达"包含"，也包括及特别指表达"基本上由…组成"和"由…组成"。
[0045] 术语"抗体"尤其是指称蛋白包含由二硫键连接的至少2个重链和2个轻链。各重链包含重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)。各轻链包含轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)。重链-恒定区包含3或在IgM-或IgE-型抗体的情况中4个重链-恒定区(CH1,CH2,CH3和CH4)，其中所述第1恒定区CH1与可变区相邻，和可由铰链区连接于第2恒定区CH2。轻链-恒定区仅由一个恒定区组成。可变区可还亚分为高可变性区，称为互补决定区(CDR)，散在于更保守的区，称为框架区(FR)，其中各可变区包含3个CDR和4个FR。重和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。重链恒定区可具有任何类型诸如γ-，δ-，α-，μ-或ε-型重链。优选地，抗体重链是γ-链。此外，轻链恒定区也可具有任何类型诸如κ-或λ-型轻链。优选地，抗体轻链是κ-链。抗体恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因素，包括免疫系统的各种细胞(例如,效应细胞)和典型互补系统的第1组分(C1q)结合。抗体可为例如人源化的，人或嵌合抗体。本发明的抗体能诱导ADCC。
[0046] 抗体的抗原-结合部分通常指称保留特异性结合抗原的能力的抗体全长或一个或更多片段。已显示，抗体的抗原-结合功能可由全长抗体的片段实施。抗体的结合片段的例包括Fab片段，由VL，VH，CL和CH1结构域组成的单价片段；F(ab)2片段，包含2个Fab片段的二价片段，各结合相同的抗原，在铰链区由二硫桥连接；由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；dAb片段(Ward等人,1989性质341:544-546)，其由VH结构域组成；及分离的互补决定区(CDR)。抗体的"Fab部分"尤其是指包含重和轻链可变区(VH和VL)和第1重和轻链恒定区(CH1和CL)的一部分抗体。在抗体不包含全部这些区的情况中，则术语"Fab部分"仅指称存在于抗体的VH，VL，CH1和CL区的那些。优选地，"Fab部分"指称含有抗体的抗原结合活性的对应于通过用木瓜蛋白酶消化天然的抗体获得的片段的抗体部分。尤其是，抗体的Fab部分包括抗原结合位点或其抗原结合能力。优选地，Fab部分包含至少抗体的VH区。
[0047] 抗体的"Fc部分"尤其是指称包含重链恒定区2，3及(当可应用时)4(CH2,CH3和CH4)的一部分抗体。在抗体不包含全部这些区的情况中，则术语"Fc部分"仅指称存在于抗体的区CH2，CH3和CH4的那些。优选地，Fc部分包含至少抗体的CH2区。优选地，"Fc部分"指称抗体的对应于通过用木瓜蛋白酶消化天然的抗体获得的不含有抗体的抗原结合活性的片段的部分。尤其是，抗体的Fc部分能由此结合Fc受体，例如包含Fc受体结合位点或Fc受体结合能力。
[0048] 为指示重链和轻链的氨基酸位置，尤其是其可变区，在本文所用Kabat编号系统(Kabat,E.A.et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th edition,NIH Publication No.91-3242)。根据所述系统，重链可变区包含第0位～第113位的氨基酸位置，包括位置35A，35B，52A～52C，82A～82C和100A～100K。根据Kabat编号，重链可变区的CDR位于第31位～35B(CDR1)，50～65(CDR2)和95～102(CDR3)。余下氨基酸位置形成框架区FR1～FR4。轻链可变区包含第0～109位，包括位置27A～27F，95A～95F和106A。CDR位于第24～34位(CDR1)，第50～56位(CDR2)和第89～97位(CDR3)。依赖于抗体的特定基因的初始形成，并非所有这些位置需存在于给定重链可变区或轻链可变区。当在本文提及重链或轻链可变区中的氨基酸位置时，除非另外指示，其指根据Kabat编号的位置。
[0049] 根据本发明，术语"嵌合抗体"尤其是指这样的抗体，其中所述恒定区源于人抗体或人抗体共有序列，且其中至少一个及优选二个可变区源于非-人抗体，例如源于啮齿动物抗体诸如小鼠抗体。
[0050] 根据本发明，术语"人源化的抗体"尤其是指非-人抗体，其包含人恒定区和可变区，其氨基酸序列被修饰为当施用于人身体时减少对抗体的免疫原性。构建人源化的抗体的例示方法是CDR移植，其中将非-人抗体的所述CDR或特异性决定残基(SDR)与源于人的框架区组合。任选地，人框架区的一些残基可向亲本非-人抗体的残基回复突变，例如用于增加或恢复抗原结合亲和力。其他人源化方法包括，例如，表面再建，超人源化和人残基串内容优化。在表面再建方法中，仅定位在抗体表面的非-人框架区的那些残基被存在于在所述位置的对应人抗体序列的残基取代。超人源化基本上对应于CDR移植。但是，尽管在CDR移植期间，人框架区基于它们与非-人框架区的同源性正常选择，但在超人源化中，是基于CDR的相似性选择人框架区。在人残基串内容优化中，对非-人抗体序列与人种系序列的差异进行评分，然后对抗体突变而最小化所述分值。此外，人源化的抗体也可由经验方法获得，其中大人框架区或人抗体库用于产生多抗体人源化的候选体，然后通过筛选方法测定最有前景的候选体。也用上述合理的方法，可产生几种人源化的抗体候选体，然后，例如就它们的抗原结合进行筛选。人源化过程的概观可见于，例如，Almagro,J.C.and Fransson,J.(2008)Frontiers in Bioscience 13,1619-1633及Journal Methods的整卷36(2005)。
[0051] 术语"人抗体"，如本文所用，旨在包括抗体，其具有框架和CDR区源于人来源的序列的可变区。
[0052] 此外，本发明的抗体可已经历框架或Fc加工。该加工的抗体包括已对VH和/或VL之内的框架残基制造修饰，例如改善抗体性质的那些。一般制造该框架修饰以降低抗体的免疫原性。例如，在人源化期间，一种方法是将一个或更多框架残基"回复突变"为对应种系序列。更特别是，经历了体细胞突变的抗体可含有不同于抗体所来源的种系序列的框架残基。该残基可通过比较抗体框架序列与抗体所来源的种系序列来鉴定。为了使框架区序列返回到它们的种系构型，体细胞突变可由，例如，定点诱变或PCR-介导的诱变被"回复突变"至种系序列。该"回复突变的"抗体也可根据本发明使用。框架或CDR区之内制造的修饰之外或替代性地，本发明的抗体可被加工为在Fc区之内包括修饰，一般以改变抗体的一个或更多官能性质，诸如血清半衰期，补体结合，Fc受体结合，和/或抗原-依赖性细胞毒性。例如，Fc区可通过用不同氨基酸残基取代至少一个氨基酸残基来改变而改变抗体的效应子功能。例如，一个或更多氨基酸可用不同氨基酸残基取代，使得抗体对效应子配体具有改变的亲和性，但保留亲本抗体的抗原-结合能力。亲和性改变的效应子配体可为，例如，Fc受体或补体的C1组分。在一实施方式中，描述的抗体的Fc区通过修饰一个或更多氨基酸来被修饰为增加抗体介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或增加抗体对Fcγ受体的亲和性。此方法还描述于例如WO00/42072。而且，人IgG1上的FcγRl，FcγRII，FcγRIII和FcRn的结合位点已标位及已描述具有改善的结合的变体(见Shields,R.L.et al.,2001J.Biol.Chen.276:6591-6604)。
[0053] 靶氨基酸序列"源于"或"对应于"参照氨基酸序列，如果靶氨基酸序列在其全长与参照氨基酸序列的对应部分共享至少75％，更优选至少80％，至少85％，至少90％，至少93％，至少95％或至少97％的同源性或同一性。例如，如果人源化的抗体的框架区源于或对应于特定人抗体的可变区，则人源化的抗体的框架区的氨基酸在其全长与人抗体的对应框架区共享至少75％，更优选至少80％，至少85％，至少90％，至少93％，至少95％或至少97％的同源性或同一性。"对应部分"是指，例如，靶抗体的重链可变区(FRH1)的框架区1对应于参照抗体的重链可变区的框架区1。在特定实施方式中，"源于"或"对应于"参照氨基酸序列的靶氨基酸序列在其全长与参照氨基酸序列的对应部分具有100％同源性，或尤其是100％同一性。根据本发明优选在参照序列的全长上或在对应于定义同源性或同一性的序列的参照序列的对应部分的全长上确定氨基酸序列或核苷酸序列的"同源性"或"同一性"。
[0054] "特异性结合"优选是指剂(诸如抗体)相比结合另一靶，更强结合特异性的靶(诸如表位)。剂相比第2靶更强结合第1靶，如果其以小于与第2靶的解离常数的解离常数(Kd)结合第1靶。优选地，剂与靶特异性结合的解离常数小于剂与靶不特异性结合解离常数的100分之一，200分之一，500分之一或1000分之一。此外，术语"特异性结合"6 -1 7 -1 8 -1
尤其是指示结合偶体之间的以至少10M ，优选至少10M ，更优选至少10M 的Ka的结合
6 -1 7 -1
亲和力。特异于特定抗原的抗体尤其是指能以具有至少10M ，优选至少10M ，更优选至
8 -1
少10M 的Ka的亲和性结合所述抗原的抗体。例如，术语"抗-EGFR抗体"指称特异性结
6 -1 7 -1 8 -1
合EGFR和优选能以具有至少10M ，优选至少10M ，更优选至少10M 的Ka的亲和性结合EGFR的抗体。
尤其是指示结合偶体之间的以至少10M ，优选至少10M ，更优选至少10M 的Ka的结合
6 -1 7 -1
亲和力。特异于特定抗原的抗体尤其是指能以具有至少10M ，优选至少10M ，更优选至
8 -1
少10M 的Ka的亲和性结合所述抗原的抗体。例如，术语"抗-EGFR抗体"指称特异性结
6 -1 7 -1 8 -1
合EGFR和优选能以具有至少10M ，优选至少10M ，更优选至少10M 的Ka的亲和性结合EGFR的抗体。
[0055] 本文所用的术语"西妥昔单抗"尤其是指具有如药物 (Merck)中使用的西妥昔单抗抗体的氨基酸序列的抗体西妥昔单抗。只要情景不另外指示，抗体西妥昔单抗也在其Fc部分具有与药物 (Merck)中使用的西妥昔单抗抗体相同的或类
似的高岩藻糖糖基化模式，其中所述岩藻糖基化是至少60％，尤其是至少70％。指示不同糖基化模式的环境，例如，参照"Fuc-西妥昔单抗"。术语"Fuc-西妥昔单抗"尤其是指与西妥昔单抗结合相同的表位，且具有与药物 (Merck)中使用的西妥昔单抗抗体
的那些具有至少85％、优选至少90％，更优选至少95％同一性的氨基酸序列的抗体，其中，但是，Fuc-西妥昔单抗相比药物 中使用的西妥昔单抗抗体在其Fc部分具有更
低量的岩藻糖，和尤其是在Fc部分具有50％或更少，30％或更少、优选25％或更少，更优选的20％或更少和最优选15％～0％的岩藻糖基化。
似的高岩藻糖糖基化模式，其中所述岩藻糖基化是至少60％，尤其是至少70％。指示不同糖基化模式的环境，例如，参照"Fuc-西妥昔单抗"。术语"Fuc-西妥昔单抗"尤其是指与西妥昔单抗结合相同的表位，且具有与药物 (Merck)中使用的西妥昔单抗抗体
的那些具有至少85％、优选至少90％，更优选至少95％同一性的氨基酸序列的抗体，其中，但是，Fuc-西妥昔单抗相比药物 中使用的西妥昔单抗抗体在其Fc部分具有更
低量的岩藻糖，和尤其是在Fc部分具有50％或更少，30％或更少、优选25％或更少，更优选的20％或更少和最优选15％～0％的岩藻糖基化。
[0056] 术语"EGFR"根据本发明尤其是指人表皮生长因子受体1，也被称为ErbB-1或HER1。EGFR是包含细胞外配体结合结构域，膜-跨结构域和细胞内激酶结构域的受体酪氨酸激酶。结合其配体(例如表皮生长因子(EGF)及转化生长因子α(TGFα))之后，EGFR形成同源二聚体或与其他ErbB受体形成异源二聚体，和其激酶功能活化，导致细胞内结构域的几个酪氨酸的自磷酸化。抗-EGFR抗体是能特异性结合EGFR的抗体。在特定实施方式中，抗-EGFR抗体能干扰或抑制EGFR的活化，例如通过预防配体结合和/或受体二聚化。在特定实施方式中，抗-EGFR抗体能抑制EGFR阳性人癌细胞的增殖。在特定实施方式中，抗-EGFR抗体能特异性结合EGFR，但不预防或减少EGFR信号传导。在此情况中，抗-EGFR抗体优选经ADCC机理有治疗活性。
[0057] 术语"抗体"，如本文所用，在特定实施方式中指称相同的种类的一群抗体。尤其是，抗体群的全部抗体呈现用于定义抗体的特征。在特定实施方式中，抗体群中的全部抗体具有相同的氨基酸序列。参照特定种抗体，诸如抗-EGFR抗体或减少岩藻糖的抗-EGFR抗体，尤其是指一群此种抗体。
[0058] 优选地，一群减少岩藻糖的抗-EGFR抗体中的全部抗体具有相同的氨基酸序列。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体群可存在于也包含其他抗体的组合物中。这些其他抗体未包括进术语"减少岩藻糖的抗-EGFR抗体"中，及不认为用于确定减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的糖基化特征。根据本发明，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的Fc部分由此CH2结构域中岩藻糖的(百分率)量尤其是指附接于包含岩藻糖残基的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体群中减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的CH2结构域中的对应糖基化位点的全部碳水化合物链的百分率。所述碳水化合物链包括附接于结构上或由氨基酸序列同源性对应于根据Kabat编号的IgG-型抗体的重链的氨基酸第297位的糖基化位点的碳水化合物链。在Asn297的N-联糖基化在哺乳动物IgG中以及在其他抗体同种型的同源区中保守。抗体通常包含2个重链和
2个轻链，因此，在它们的Fc部分具有2个糖基化位点，在各CH2结构域一个。为回避怀疑，不强制抗体CH2结构域的2个糖基化位点必需携带碳水化合物链。2个CH2结构域中的2个糖基化位点之间不区别，及说到CH2结构域中的糖基化结构域也指2个CH2结构域中的2个糖基化位点。优选地，仅考虑在碳水化合物链的还原端与GlcNAc残基经α1,6-连接结合的岩藻糖残基。如果提及特异性抗体种(例如减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)的CH2结构域中岩藻糖的量，则为测定岩藻糖的百分率量，即链携带岩藻糖的碳水化合物量而仅考虑组合物中附接于所述特异性抗体种的群(例如减少岩藻糖的抗-EGFR抗体群)的抗体分子的CH2结构域的糖基化位点的碳水化合物链。附接于抗体Fab部分中的糖基化位点的碳水化合物链，如果存在，以及附接于其他抗体的碳水化合物链，如果与减少岩藻糖的抗-EGFR抗体一起存在于组合物中，不被认为用测定减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的CH2结构域中岩藻糖的量。附接于抗体的Fab部分和Fc部分的碳水化合物可由首先在Fab部分和Fc部分消化抗体，彼此分离部分，和个别测定各部分的糖基化特征来独立地测定。同样，附接于减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的CH2结构域的截开型N-乙酰葡萄糖胺(bisGlcNAc)的(百分率)量尤其是指链附接于包含bisGlcNAc残基的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体群中全部抗体的CH2结构域中的糖基化位点的全部碳水化合物的百分率。BisGlcNAc指称附接于复合N型-聚糖中的中心甘露糖残基的GlcNAc残基。同样，附接于减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的CH2结构域的半乳糖(百分率)量尤其是指附接于包含至少1个半乳糖残基的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体群中全部抗体的CH2结构域中的糖基化位点的全部碳水化合物链的百分率。为减少岩藻糖的抗-EGFR抗体描述的以上考虑同样应用于其他特异性抗体诸如高岩藻糖抗-EGFR抗体等。
2个轻链，因此，在它们的Fc部分具有2个糖基化位点，在各CH2结构域一个。为回避怀疑，不强制抗体CH2结构域的2个糖基化位点必需携带碳水化合物链。2个CH2结构域中的2个糖基化位点之间不区别，及说到CH2结构域中的糖基化结构域也指2个CH2结构域中的2个糖基化位点。优选地，仅考虑在碳水化合物链的还原端与GlcNAc残基经α1,6-连接结合的岩藻糖残基。如果提及特异性抗体种(例如减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)的CH2结构域中岩藻糖的量，则为测定岩藻糖的百分率量，即链携带岩藻糖的碳水化合物量而仅考虑组合物中附接于所述特异性抗体种的群(例如减少岩藻糖的抗-EGFR抗体群)的抗体分子的CH2结构域的糖基化位点的碳水化合物链。附接于抗体Fab部分中的糖基化位点的碳水化合物链，如果存在，以及附接于其他抗体的碳水化合物链，如果与减少岩藻糖的抗-EGFR抗体一起存在于组合物中，不被认为用测定减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的CH2结构域中岩藻糖的量。附接于抗体的Fab部分和Fc部分的碳水化合物可由首先在Fab部分和Fc部分消化抗体，彼此分离部分，和个别测定各部分的糖基化特征来独立地测定。同样，附接于减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的CH2结构域的截开型N-乙酰葡萄糖胺(bisGlcNAc)的(百分率)量尤其是指链附接于包含bisGlcNAc残基的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体群中全部抗体的CH2结构域中的糖基化位点的全部碳水化合物的百分率。BisGlcNAc指称附接于复合N型-聚糖中的中心甘露糖残基的GlcNAc残基。同样，附接于减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的CH2结构域的半乳糖(百分率)量尤其是指附接于包含至少1个半乳糖残基的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体群中全部抗体的CH2结构域中的糖基化位点的全部碳水化合物链的百分率。为减少岩藻糖的抗-EGFR抗体描述的以上考虑同样应用于其他特异性抗体诸如高岩藻糖抗-EGFR抗体等。
[0059] 抗-EGFR抗体在特异性结构域中具有，诸如CH2结构域或VH结构域，携带特定糖单元或特征，诸如岩藻糖，半乳糖，2个半乳糖，特定百分率值或范围的截开型GlcNAc，唾液酸或2个唾液酸的聚糖的相对量尤其是指全部具有相同的氨基酸序列的一群抗-EGFR抗体，其中附接于所述群的全部抗-EGFR抗体的所述特异性结构域的全部聚糖的所述百分率或百分率范围包含所述特定糖单元或满足所述特征。同样，具有特定百分率值或范围的量的附接于特异性结构域的聚糖中特定糖单元或特征的抗-EGFR抗体也尤其是指全部具有相同的氨基酸序列的一群抗-EGFR抗体，其中附接于所述群的全部抗-EGFR抗体的所述特异性结构域的全部聚糖的所述百分率或百分率范围包含所述特定糖单元或满足所述特征。本文所用的术语"碳水化合物链"，"碳水化合物结构"，"聚糖"和"聚糖结构"具有相同的含义及互换使用。
[0060] 根据本发明，术语"糖基化位点"尤其是指可特异性识别及由天然的糖基化酶，尤其是糖基转移酶，优选天然存在的哺乳动物或人糖基转移酶糖基化的氨基酸序列。尤其是，术语"糖基化位点"指称N-糖基化位点，包含碳水化合物结合或可结合的天冬酰胺残基。尤其是，糖基化位点是具有氨基酸序列Asn-Xaa-Ser/Thr/Cys的N-糖基化位点，其中Xaa是任何氨基酸残基。优选地，Xaa不是Pro。
[0061] 在"缀合物"中，2个或更多化合物连接在一起。在特定实施方式中，来自各化合物的至少一些性质保留在缀合物中。连接可由共价或非-共价键达到。优选地，缀合物的化合物经共价键连接。缀合物的不同化合物可经化合物的原子之间的一个或更多共价键彼此直接结合。或者，化合物可经化学部分诸如接头分子彼此结合，其中所述接头共价附接于化合物的原子。如果缀合物由多于2个化合物组成，则这些化合物可，例如，以链构象连接，一个化合物附接于下一化合物，或几个化合物各可附接于一个中心化合物。
[0062] 术语"患者"尤其是指人。
[0063] 可用本文所述的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗的术语"EGFR阳性肿瘤形成疾病"和"EGFR阳性癌"根据本发明，尤其是指肿瘤形成疾病，癌，肿瘤和/或转移，其中细胞表达EGFR。EGFR阳性癌包括但不限于恶性上皮肿瘤，乳腺癌，胃癌，消化道癌，癌，结肠癌，膀胱癌，泌尿道上皮肿瘤，子宫癌，食管癌，胃食管连接处的癌，卵巢癌，肺癌，子宫内膜癌，肾癌，胰腺癌，甲状腺癌，结直肠癌，前列腺癌，脑癌，子宫颈癌，肠癌和肝癌。在特定实施方式中，癌是转移癌。优选地，待用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗的EGFR阳性癌选自结肠癌(包括盲囊和直肠癌)，肾癌，胃癌，头颈癌和肺癌，食管癌，子宫内膜和子宫颈癌，尤其是转移性结肠癌，转移性结直肠癌，转移性胃癌，(晚期)胃腺癌，(晚期)食管腺癌，(晚期)胃食管连接处腺癌，(转移性)肾细胞癌，(转移性)非-小细胞肺癌(NSCLC)，肺腺癌，鳞状或非-鳞状非-小细胞肺癌，三重阴性乳腺癌(雌激素受体(ER)，黄体酮受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER2)表达阴性的乳腺癌)，头和颈鳞状细胞癌，子宫内膜癌或肉瘤，阴茎癌，子宫颈癌，恶性棒状肿瘤和移行细胞癌,。其他EGFR阳性癌包括肾细胞癌诸如透明细胞肾细胞癌，乳头肾细胞癌(嗜碱性和嗜酸性粒细胞)，嫌色细胞肾细胞癌，Bellini管癌/收集管癌，及肾多形性(肉瘤样)癌；非小细胞肺癌诸如鳞状非小细胞肺癌(sNSCLC)，及非鳞状非小细胞肺癌(nsNSCLC)，尤其是腺癌和大细胞癌；小细胞肺癌(SCLC)；头和颈上皮肿瘤诸如头和颈鳞状细胞癌(SCCHN)，尤其是非-分化的，分化的，腺样-鳞状和疣状SCCHN；及胃癌诸如腺癌，尤其是管状腺癌，乳头腺癌和粘液腺癌，印戒细胞癌，腺样-鳞状癌，鳞状癌，髓质胃癌，小细胞胃癌，及非-分化的胃癌。胃癌可位于幽门窦，胃体或胃底或可为在整个胃的扩散胃癌。
[0064] 在特定实施方式中，用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗的EGFR阳性肿瘤形成疾病或癌包含表达EGFR的癌细胞。在特定实施方式中，肿瘤，转移等被分类为EGFR阳性，如果特定％的包含的细胞表达EGFR。例如在现有技术中，肿瘤通常被分类为是EGFR阳性，如果至少1％的肿瘤细胞表达EGFR。本发明的抗-EGFR抗体可用于治疗人患者，其中在治疗之前，在所述患者中EGFR状态被测定为是阳性。实施方式随后描述。但是，在起始用本发明的抗-EGFR抗体治疗之前，患者的EGFR状态的确定或确认不是必需的。例如有通常知道为EGFR阳性的疾病诸如例如SCCHN。在SCCHN的情况中，多于90％的影响的患者是EGFR阳性。对于通常是EGFR阳性的疾病诸如SCCHN或结直肠癌，在现有技术方法中，在用抗-EGFR抗体治疗之前，常常不测定患者的EGFR状态。同样，在疾病待治疗该情况中，例如多于75％，多于80％，多于85％或多于90％的患者是EGFR阳性，用本发明的抗-EGFR抗体治疗可无需之前待治疗的个体患者的EGFR状态的确定或确认地起始。
[0065] EGFR表达是可在检测癌样品细胞中EGFR基因的表达的基因或蛋白表达测定中，例如通过检测EGFR mRNA或EGFR蛋白的存在和/或量来检测。适合的检测测定是，例如，免疫组织化学(IHC)，蛋白印迹，酶联免疫吸附测定(ELISA)，电-化学发光免疫测定(ECLIA)，荧光-活化的细胞分选(FACS)，配体-结合测定，聚合酶链反应(PCR)，DNA印迹和原位杂交诸如荧光原位杂交(FISH)，银原位杂交(SISH)或染色体基因原位杂交(CISH)，及由本领域技术人员知道的可直接或间接测定细胞表面EGFR受体的表达的其他技术。相应测定可用于测定待治疗的患者的EGFR状态，如果期望该之前确定。
[0066] 根据特定实施方式，所述EGFR阳性肿瘤形成疾病或癌过表达EGFR和/或显示EGFR基因扩增。因此，在特定实施方式中，患者患包含表达或甚至过表达EGFR的肿瘤细胞和/或转移性细胞的EGFR阳性癌。EGFR表达可例如由免疫组织化学测定。关于此，免疫组织化学指称固定的肿瘤样品的免疫组织化学染色和染色的分析。EGFR表达可通过使用包含癌细胞的组织样品，尤其是固定的癌组织样品诸如福尔马林-固定的，石蜡-嵌入的样品测定。用于测定EGFR过表达的免疫组织化学测定优选包括(i)使包含癌细胞的样品与针对EGFR的第一抗体接触，之后是(ii)使样品与针对第一抗体及偶联于可视化剂诸如催化具有可见终产物的反应的酶，例如辣根过氧化物酶的第二抗体接触。适合的EGFR免疫组织化学试剂盒是EGFR pharmDx试剂盒(DakoCytomation A/S)。EGFR阳性肿瘤形成疾病也包括就EGFR基因扩增是阳性的癌，如由荧光原位杂交(FISH)，银原位杂交(SISH)或染色体基因原位杂交(CISH)测定。根据FISH测定，如果肿瘤细胞中EGFR基因的拷贝数是第17染色体的拷贝数的至少2-倍，或如果肿瘤细胞包含至少4拷贝的EGFR基因，癌就EGFR基因倍增是阳性。在特定实施方式中，根据CISH测定，如果每细胞核至少5拷贝的EGFR基因存在于至少50％的肿瘤细胞中，癌就EGFR基因倍增是阳性。
[0067] 由"转移(metastasis)"或"转移(metastases)"是指癌细胞自其原位点(例如原发性肿瘤位点)传播到身体的另一部分。在单数和复数“转移”之间不区别，除非情景另外指示。如上所述，在本发明的背景中，转移的形成是非常复杂的过程，和正常涉及癌细胞自原发性肿瘤脱离，进入身体循环及在身体别处的正常组织内沉着生长。对于细节，参照也在本文申请的相应公开。如本文所述，岩藻糖减少的本发明的抗-EGFR抗体可用于治疗转移瘤。作为EGFR阳性肿瘤形成疾病的一实施方式可见转移瘤。转移的EGFR状态可不同于转移所来源的原发性癌的EGFR状态(见例如.Scartozzi等人,J Clin Oncol,200422(23):4772-8)。根据优选的实施方式，待治疗的转移是EGFR阳性的。优选地，原发性癌和转移是EGFR-阳性的。EGFR阳性和测定EGFR状态的方法的例如上述；参照也在本文申请的以上公开。根据优选的实施方式，待治疗的EGFR阳性癌是转移性癌。EGFR阳性癌的例如上述。转移可为远处的转移瘤。可用本发明的抗-EGFR抗体治疗的特定类型的转移是淋巴结转移和内脏转移瘤。“内脏转移(Visceral metastasis)”或“内脏转移(visceral metastases)”尤其是指在内脏，身体内部器官，特别胸内的器官诸如心脏或肺，或腹内的器官，诸如肝，胰腺或肠中的转移瘤。尤其是，术语“内脏转移”指称肺和/或肝中的转移瘤。
可用本文所述的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体成功地治疗的特定类型的转移是间皮转移包括胸膜和腹膜转移，及肺转移瘤。“间皮转移”指称癌细胞在间皮诸如胸膜和腹膜中或上生长。尤其是，间皮转移可导致由间皮围绕的腔中流体蓄积，尤其是胸膜和/或腹部泻流，例如由于由转移导致的受影响的间皮的炎性反应和/或增加的通透性。随EGFR阳性疾病发生的其他类型的转移包括皮肤转移，脑转移和骨转移瘤。
可用本文所述的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体成功地治疗的特定类型的转移是间皮转移包括胸膜和腹膜转移，及肺转移瘤。“间皮转移”指称癌细胞在间皮诸如胸膜和腹膜中或上生长。尤其是，间皮转移可导致由间皮围绕的腔中流体蓄积，尤其是胸膜和/或腹部泻流，例如由于由转移导致的受影响的间皮的炎性反应和/或增加的通透性。随EGFR阳性疾病发生的其他类型的转移包括皮肤转移，脑转移和骨转移瘤。
[0068] 本发明的术语"失效的治疗"或"治疗失败"或相关的术语特别指称导致疾病进展的癌的治疗。在特定实施方式中，疾病进展指称以下一个或更多：(i)存在的肿瘤的进一步生长，尤其是生长至少20％；(ii)一个或更多新损伤的生长或形成或存在的类型的转移；(iii)一个或更多不同类型的进一步转移的形成；(iv)进一步损伤的形成和/或(v)一个或更多损伤的尺寸增加。肿瘤的进一步生长尤其是指肿瘤体积增加至少20％。损伤尺寸的增加尤其是指损伤尺寸增加至少20％。但是，指示治疗失败的上述的标准是非限制性的。
依赖于待治疗的疾病和/或临床情况，其他劣化也可被认为是治疗失败。例如导致之前治疗需中止的症状性劣化可被认为是治疗失败。如由实施例显示，本发明的抗-EGFR抗体可成功地在其他抗-癌治疗，尤其是用其他抗-EGFR抗体治疗失效之后使用。在特定实施方式中，治疗失败根据RECIST的标准(实体瘤中的应答评估标准)测定。
依赖于待治疗的疾病和/或临床情况，其他劣化也可被认为是治疗失败。例如导致之前治疗需中止的症状性劣化可被认为是治疗失败。如由实施例显示，本发明的抗-EGFR抗体可成功地在其他抗-癌治疗，尤其是用其他抗-EGFR抗体治疗失效之后使用。在特定实施方式中，治疗失败根据RECIST的标准(实体瘤中的应答评估标准)测定。
[0069] 本发明的术语"成功的治疗"或"治疗成功"或相关的术语特别指称导致疾病稳定，疾病部分缓解和/或全缓解的EGFR阳性癌或转移的治疗。成功的治疗可包括以下一个或更多：(i)抑制肿瘤生长或防止肿瘤生长多于20％；(ii)减小肿瘤尺寸；(iii)防止相同的类型和/或不同类型的进一步转移；(iv)减少转移数；(v)防止进一步损伤；(vi)减少损伤数；(vii)减小一个或更多损伤的尺寸；(viii)减小患者的循环中一种或更多肿瘤标志物，尤其是CEA和/或Ca19-9的浓度；(ix)减小泻流，尤其是胸膜和/或腹部泻流，和/或(x)减少疼痛。如果一个或更多这些标准实现，则可达到成功的治疗。在特定实施方式中，成功的治疗也包括治疗，其中观察到肿瘤尺寸的小增加(达约20％)，转移或损伤数或它们的尺寸的小增加(达20％)，一种或更多肿瘤标志物浓度的小增加(达20％)，或泻流流体量的小增加(达20％)。肿瘤尺寸的减小在特定实施方式中指称肿瘤体积减小至少30％，包括缓解其中所述肿瘤体积降低30～50％，缓解，其中所述肿瘤体积降低多于50％，及完全缓解，其中所述肿瘤体积降低100％或降至不可测量或不可检测的尺寸。损伤尺寸减小尤其是指损伤尺寸减小至少30％，包括减小，其中所述损伤尺寸降低30～50％，减小，其中所述损伤尺寸降低多于50％，及完全减小，其中所述损伤尺寸降低100％或降至不可测量的或不可检测的尺寸。损伤尤其是指由原发性肿瘤和/或由一次或更多转移导致的损伤。患者的循环中一种或更多肿瘤标志物，尤其是CEA和/或Ca19-9浓度的减小优选指称减小至少10％，更优选至少25％或至少50％，最优选至少75％。尤其是，肿瘤标志物的完全减少指称减少至健康个体的正常水平。泻流减少尤其是指称泻流流体量减少至少25％，包括减少，其中所述泻流流体量降低25～50％，减小，其中所述泻流流体量降低多于50％，及完全减小，其中受影响的体腔诸如腹膜腔或胸膜腔中无异常流体量可检测。成功的治疗尤其是也包括相比无治疗或使用高岩藻糖抗-EGFR抗体的标准治疗，导致无进展的存活增加和/或寿命增加，尤其是无进展的存活或余下寿命至少2个月，优选至少3个月，至少4个月，至少6个月，至少9个月或至少1年，甚至更优选至少1.5年，至少2年，至少3年，至少4年或至少5年，或无进展的存活的增加或余下寿命至少2个月，优选至少3个月，至少4个月，至少6个月，至少9个月或至少1年，甚至更优选至少1.5年，至少2年，至少3年，至少
4年或至少5年的治疗。"稳定的疾病"和因此疾病稳定在特定实施方式中包括(i)肿瘤和/或转移体积变化少于30％和/或(ii)靶损伤尺寸变化少于30％。成功的治疗优选测定至少1个月，更优选至少2个月，至少3个月，至少4个月，至少6个月，至少9个月或至少1年，甚至更优选至少1.5年，至少2年，至少3年，至少4年或至少5年的观察时期。在特定实施方式中，治疗成功根据RECIST的标准(实体瘤中的应答评估标准)确定。
4年或至少5年的治疗。"稳定的疾病"和因此疾病稳定在特定实施方式中包括(i)肿瘤和/或转移体积变化少于30％和/或(ii)靶损伤尺寸变化少于30％。成功的治疗优选测定至少1个月，更优选至少2个月，至少3个月，至少4个月，至少6个月，至少9个月或至少1年，甚至更优选至少1.5年，至少2年，至少3年，至少4年或至少5年的观察时期。在特定实施方式中，治疗成功根据RECIST的标准(实体瘤中的应答评估标准)确定。
[0070] 肿瘤标志物CEA(癌胚抗原)是细胞粘接中涉及的糖蛋白。健康个体的血清中此肿瘤标志物的正常值在不吸烟者中是2.5ng/mL以下及在吸烟者中是5ng/mL以下。在患转移性癌的患者中，肿瘤制造者可上升至100ng/mL以上的水平。随10ng/mL或更高的CEA水平，良性疾病是不可能的和需预期恶性疾病。CA19-9(碳水化合物抗原19-9,也被称为癌抗原19-9或唾液酸化的Lewis(a)抗原)是细胞间粘接分子。在健康个体中，CA19-9的正常值是37U/mL血清以下。在1,000U/mL以上的水平，良性疾病是不可能的和需预期恶性疾病。可使用可商购的诊断试剂盒和/或在临床实验室中测定患者的血样品中的肿瘤标志物CEA和CA19-9以及其他标准肿瘤标志物。在描述于实施例的临床研究中包括的几个患者中，观察到肿瘤标志物，尤其CEA和CA19-9显著减少，由此展示本发明的抗-EGFR抗体的治疗效果。
[0071] 基于由来自临床和实验室数据的结果查明的医师的医疗判断建立治疗失败以及成功的治疗，这本领域评定患者治疗中通常知道。该数据可由实施例的方式，自临床检查，细胞学和组织技术，内窥镜检查术和腹腔镜检，超声波，CT，PET和MRI扫描，胸x-射线，乳房X线摄影术和其组合获得。此外，RECIST标准可用于测定肿瘤应答。
[0072] 术语"手术"根据本发明尤其是指包含全部或一部分肿瘤，尤其是原发性肿瘤诸如乳腺肿瘤，和/或一个或更多转移的组织的手术移除(切除或切除)。
[0073] "辅助治疗"尤其是指称在手术之后癌的治疗。
[0074] "新辅助治疗"尤其是指称在手术之前癌的治疗。
[0075] “减轻性治疗”尤其是指不预期显著地减少癌而特别给予致症状管理的癌治疗。减轻性护理针对与不可治愈癌关联的改善症状。减轻性护理的主要目的是改善余下患者的生命的质量。疼痛是与癌关联的常见的症状之一。大致75％的末期癌患者具有疼痛。疼痛是主观症状，由此其不可通过使用科技方法测量。大多数癌患者作为压缩相邻神经，骨或软组织的肿瘤块，或自直接神经损伤(神经性疼痛)的结果经历疼痛。疼痛可自肋骨，肌肉和内部结构诸如腹(与梗阻关联的痉挛类型疼痛)中受影响的神经发生。许多患者也作为追踪测试，治疗(手术,辐射和化学-治疗)和诊断过程(即,活组织检查)的直接结果经历各种类型的疼痛。治疗有用的减轻性治疗能减少疼痛。
[0076] 术语"放射治疗"，也被称为放射治疗，特别是指医疗使用电离辐射来控制或杀灭恶性细胞。放射治疗可组合手术，作为辅助和/或新辅助治疗，或无手术使用，例如以在手术之后预防肿瘤复发或移除原发性肿瘤或转移瘤。
[0077] 术语"药物组合物"和类似术语特别指称适合于给人施用的组合物，即，含有是药学可接受的组分的组合物。优选地，药物组合物随载体，稀释剂或药学赋形剂诸如缓冲剂，或张度修饰物一起包含活性化合物或其盐。根据一实施方式，药物组合物不包含防腐剂。
[0078] 术语"抗体组合物"和"包含抗体的组合物"在本文情景互换使用，如果不另外指示。本文所用的也术语"抗体"可在特定实施方式中指称抗体组合物。抗体组合物可为流体或固体组合物，及也包括冷冻干燥的或重建的抗体组合物。优选使用流体组合物，更优选水性组合物。在特定实施方式中，其还包含溶剂诸如水，用于调整及维持pH值的缓冲剂，及任选地稳定化抗体或防止抗体降解的其他剂。抗体组合物优选包含合理的量的抗体，尤其是至少1fmol，优选至少1pmol，至少1nmol或至少1μmol的抗体。包含特异性抗体的组合物可另外地包含一种或更多不同氨基酸序列的其他抗体。在特定实施方式中，一种或更多不同抗体与不同表位或不同靶结合。在一实施方式中，包含本发明的特异性抗体诸如减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的组合物不包含除特异性抗体之外的其他抗体。在特定实施方式中，在抗体组合物中的至少75％、优选至少80％，至少85％，至少90％，至少95％，至少97％，至少98％或至少99％，最优选约100％的抗体针对或结合相同的抗原或表位或具有相同的氨基酸序列。因此，在特定实施方式中，术语"减少岩藻糖的抗-EGFR抗体"指称基本上无具有不同抗原性特异性和/或不同氨基酸序列的其他抗体的抗体组合物。在特定实施方式中，抗体组合物是药物组合物。
[0079] 【发明详述】
[0080] 在本发明的概述中简短描述了用本发明的抗-EGFR抗体达到的显著的治疗效果和由本发明提供的新治疗机会。本发明提供在CH2结构域具有糖基化位点的抗-EGFR抗体，其中仅50％或更少，40％或更少，30％或更少、优选25％或更少，更优选20％～0％的附接于所述糖基化位点的聚糖携带岩藻糖(减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)，其用于治疗患EGFR阳性肿瘤形成疾病，尤其是进展的或转移癌的患者。由此，本发明提供用于治疗患EGFR阳性癌的人患者的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。在本文中，本发明尤其是提供新治疗法。
[0081] 如由实验数据展示，与现有技术抗-EGFR抗体相比，本发明的抗-EGFR抗体在治疗的患者中诱导显著地少和仅弱不利的皮肤反应。尤其是，仅约40％的用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗的患者发展不利的皮肤反应。此是相比在80％或更多的患者中导致皮肤反应的常规抗-EGFR抗体减小一半。此外，用本发明的减少岩藻糖的抗体观察的皮肤反应非常弱，和在用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体持续临床研究期间至今未观察到3级或更高的严重的不利的皮肤反应。此是本发明的抗体区别于常诱导该严重的皮肤反应的现有技术抗-EGFR抗体的关键的特征。如在本发明的背景中详细描述，严重的皮肤反应是对于患者是大负担。在许多情况中，不利的皮肤反应变得如此严重至临床指示抗体施用需延迟，剂量需减少或甚至终止治疗。这些问题用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体得以克服。因此，用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病被患者显著更佳耐受，和因为本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的独特性质而提供新治疗机会。尤其是，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在由于由所述常规抗-EGFR抗体导致的不利的皮肤反应而无法或无法再用常规抗-EGFR抗体治疗的患者中致使EGFR-阳性肿瘤形成疾病的治疗。此尤其应用于经历用常规抗-EGFR抗体治疗的患者，其中所述治疗因为不利的皮肤反应，尤其是3级或更高的严重的不利的皮肤反应而需间断或中止，或其中所述常规抗-EGFR抗体的剂量因为不利的皮肤反应而需减少，由此危害治疗性功效。此外，由于用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体观察到仅弱的不利的皮肤反应，如果需要，可使用更高剂量。因此，本发明提供用于患EGFR阳性肿瘤形成疾病，尤其是恶性上皮肿瘤的人患者的新及改善的治疗，其中所述患者患，之前遭受针对EGFR抑制物，尤其是抗-EGFR抗体诸如帕尼单抗，扎芦木单抗或GA201的不利的皮肤反应或处于这样的风险。
[0082] 即使本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体导致少的和仅弱的不利的皮肤反应，其在临床试验中展示在治疗几种不同EGFR阳性癌类型，包括但不限于结直肠癌，肾癌，肺癌，胃癌和食管癌中的高治疗性功效。在持续临床研究中，在大量的患者中观察到对患者的清楚的治疗性益处，包括长期稳定的疾病，部分和甚至完全应答，及已以低抗体剂量到这些显著治疗性益处(见下例)。此是尤其显著的，由于本领域相信，EGFR抑制物诸如抗-EGFR抗体的治疗性功效与由治疗导致的不利的皮肤反应的严重性直接关联。此教条被本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体意外地证伪，其治疗高度有效，和在广剂量范围仍显示显著地减少的及仅弱的不利的皮肤反应的发生率。
[0083] 还重要的发现是，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体针对不同形式的肾癌是高度有效的。肾细胞癌通常被认为不易被化学治疗或基于抗体的治疗治疗。但是，临床研究展示，不同类型的肾细胞癌，包括透明细胞以及非-透明细胞肾细胞癌，可由本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体有效治疗。由此，为患肾癌，尤其是患透明细胞或非-透明细胞肾癌的患者提供新治疗法。用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗是尤其是适合的，如果所述患者已之前用EGFR抑制物，尤其是抗-EGFR抗体治疗，且其中所述之前治疗因为在治疗期间不利的皮肤反应发生而间断，终止或其中所述EGFR抑制物的剂量需减少。本发明的抗-EGFR抗体可尤其用于治疗患肾癌，尤其是患透明细胞或非-透明细胞肾癌的患者，其具有针对导致该严重的皮肤反应的抗-EGFR抗体(尤其是西妥昔单抗( )或帕尼单抗)的知道的3或4级的严重的皮肤反应。
[0084] 作为另一重要特征，用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗在治疗的癌患者中显著地减少恶性泻流，和甚至达到患者中泻流的完全去除。恶性泻流是与癌疾病关联的并发症及导致患者大不适和疼痛(见以上)。如在临床研究中展示，本抗-EGFR抗体能缓和这些并发症，及改善治疗的患者的一般情况和健康状况，除了癌的有效治疗之外。用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗是尤其是适合的，如果所述患者已之前用EGFR抑制物，尤其是抗-EGFR抗体治疗，且其中所述之前治疗因为在治疗期间发生的不利的皮肤反应而间断，终止或其中所述EGFR抑制物的剂量需减少。本发明的抗-EGFR抗体可尤其用于治疗患恶性泻流的患者，其具有针对导致该严重的皮肤反应的抗-EGFR抗体，尤其是西妥昔单抗( )或帕尼单抗的知道的3或4级的严重的皮肤反应。
[0085] 此外，用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗也不受对常规抗-EGFR抗体提出问题的患者或肿瘤的特定特征阻碍。尤其是，本发明的抗体显示一贯地良好治疗性功效，无论是否肿瘤包含KRAS突变体，及无论患者的FcγRIIIa同种异型。这些是本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的还有利的特征。常规使用的抗-EGFR抗体 例如，不适合用于治疗KRAS突变肿瘤，和的确是仅被批准用于治疗KRAS野生型癌。此外，高岩藻糖抗-EGFR抗体诸如 在具有不利的FcγRIIIa同种异型的患者中具有
高度减少的ADCC活性，由此在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是苯丙氨酸纯合的患者(FcγRIIIa-158F/F)或在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是缬氨酸和苯丙氨酸杂合的患者(FcγRIIIa-158V/F)中显示减少的功效。
高度减少的ADCC活性，由此在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是苯丙氨酸纯合的患者(FcγRIIIa-158F/F)或在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是缬氨酸和苯丙氨酸杂合的患者(FcγRIIIa-158V/F)中显示减少的功效。
[0086] 因此，本发明提供具有大大改善的治疗特征的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体，及用所述抗体提供新治疗性治疗，尤其是新患者组。
[0087] 随后描述本发明的抗-EGFR抗体和个体治疗的优选的实施方式，及在权利要求中提及。
[0088] 【本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体】
[0089] 如上所述，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的重要特征是观察到的不利的皮肤反应的显著减小。通常由现有技术抗-EGFR抗体导致的不利的皮肤反应包括但不限于疹和/或脱屑诸如痤疮样疹，红斑多形性和手-足皮肤反应；瘙痒症；瘙痒；甲变化；及溃疡形成(见也以上)。美国国家健康学会的癌治疗的不利的事件评估程序3.0版的常见的术语标准给出不利的皮肤反应以及它们的分类及分级的概观。而现有技术抗-EGFR抗体在患者(例如在 的情况中～80％或甚至～90％的患者)中常导致不利的皮肤反应，不利的皮肤反应用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体欠常发生。由此，根据一实施方式，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于80％，不多于75％，不多于70％，不多于65％，不多于60％、优选不多于55％和更优选不多于50％的治疗的患者中导致不利的皮肤反应(包括任何级)。
[0090] 如上所述，现有技术抗-EGFR抗体特别成问题的是发生3或4级的不利的皮肤反应(对于分级，见美国国家健康学会的癌治疗的不利的事件评估程序3.0版的常见的术语标准)，临床指示改动及有时甚至中断治疗。尤其成问题的是3或4级的皮疹。3级皮疹包括例如严重的、泛发性红皮病，斑疹，丘疹或小泡疹和/或脱屑覆盖至少50％的身体皮肤区。4级皮疹包括例如泛发性剥脱性、溃疡性和/或大疱性皮炎。3级或更高的痤疮样疹与疼痛、毁容、溃疡形成和/或脱屑特别关联。以上详细描述由于该3级或更高的不利的皮肤反应发生的健康问题，及在之前治疗中迎对3级或更高的不利的皮肤反应或具有会在用常规抗-EGFR抗体诸如例如 治疗期间发生的该不利的皮肤反应的风险的该患者有对新治疗选项的大需求。由本公开提供该新治疗法。
[0091] 在本发明的一方面，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体具有在不多于20％，不多于19％，不多于18％，不多于17％，不多于16％，不多于15％，不多于14％，不多于13％，不多于12％，不多于11％、优选不多于10％，不多于9％，不多于8％，不多于7％，不多于6％，更优选不多于5％，不多于4％，不多于3％，不多于2.5％，不多于2％，不多于1.5％，不多于
1.25％，不多于1％，不多于0.75％，不多于0.5％，或不多于0.25％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应的特征。在持续临床研究中，仍观察到无3级或更高的不利的皮肤反应。尤其是，临床指示无因为在研究期间不利的皮肤反应而治疗中断，剂量减小或施用延迟。
1.25％，不多于1％，不多于0.75％，不多于0.5％，或不多于0.25％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应的特征。在持续临床研究中，仍观察到无3级或更高的不利的皮肤反应。尤其是，临床指示无因为在研究期间不利的皮肤反应而治疗中断，剂量减小或施用延迟。
[0092] 在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于70％，不多于65％，不多于60％，不多于55％、优选不多于50％，不多于45％，不多于40％，不多于35％，更优选不多于30％，不多于25％，或不多于20％的治疗的患者中导致皮疹和/或痤疮样疹。根据一实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于20％、优选不多于19％，不多于18％，不多于17％，不多于16％，不多于15％，不多于14％，不多于13％，不多于12％，不多于11％、优选不多于10％，不多于9％，不多于8％，不多于7％，不多于6％，更优选不多于5％，不多于4％，不多于3％，不多于2.5％，不多于2％，不多于1.5％，不多于1.25％，不多于1％，不多于0.75％，不多于0.5％，或不多于0.25％的治疗的患者中导致3级或更高的痤疮样皮疹。
通常与现有技术抗体关联的痤疮样皮疹尤其是相关于疼痛、毁容、溃疡形成和/或脱屑。如由本申请中提供的临床数据显示，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在治疗的患者中导致仅大致20％的低发生率的痤疮样疹(任何级,即包括1和2级)。观察的痤疮样疹仅弱和尤其是至今无3级或更高的痤疮样疹发生。本文所用的术语"痤疮样疹"或"痤疮样皮疹"尤其是也包括及指称"痤疮样皮炎"。
通常与现有技术抗体关联的痤疮样皮疹尤其是相关于疼痛、毁容、溃疡形成和/或脱屑。如由本申请中提供的临床数据显示，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在治疗的患者中导致仅大致20％的低发生率的痤疮样疹(任何级,即包括1和2级)。观察的痤疮样疹仅弱和尤其是至今无3级或更高的痤疮样疹发生。本文所用的术语"痤疮样疹"或"痤疮样皮疹"尤其是也包括及指称"痤疮样皮炎"。
[0093] 在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于30％，不多于20％，不多于15％，不多于12％，不多于10％不多于9％，不多于8％，或不多于7％的治疗的患者中导致低镁血症和/或低钾血症。根据一实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于10％、优选不多于9％，不多于8％，不多于7％，不多于6％，不多于5％，不多于4％，不多于3％，不多于2％，不多于1.5％，不多于1％，不多于0.75％，不多于0.5％，或不多于0.25％的治疗的患者中导致3级或更高的低镁血症和/或低钾血症。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于40％，不多于35％，不多于30％，不多于27％不多于25％，不多于23％，或不多于22％的治疗的患者中导致腹泻。根据一实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于15％、优选不多于12％，不多于10％，不多于7％，不多于6％，不多于5％，不多于4％，不多于3％，不多于2％，不多于1.5％，不多于1％，不多于0.75％，不多于0.5％，或不多于0.25％的治疗的患者中导致3级或更高的腹泻。
[0094] 在特定实施方式中，本文讨论的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体当以至少10mg/剂量，，优选至少50mg/剂量，至少100mg/剂量，至少200mg/剂量，至少240mg/剂量，至少300mg/剂量，至少350mg/剂量，至少400mg/剂量，至少500mg/剂量，至少600mg/剂量或至少700mg/剂量的量施用时，在不多于指示的百分率的治疗的患者中导致不利的反应。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体施用至少4个剂量，优选至少6个剂量，至少8个剂量或至少10个剂量，尤其是至少每隔2周，优选至少每隔一周或至少每周。在特定实施方式中，本文讨论的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体当以至少每周200mg，尤其是至少每周240mg，至少每周300mg，至少每周350mg，至少每周400mg，至少每周500mg，至少每周600mg或至少每周700mg的平均量施用至少4周，尤其是至少6周，至少8周或至少10周时，在不多于指示的百分率的治疗的患者中导致不利的反应。
[0095] 关于此，本发明还提供减少用EGFR抑制物治疗患EGFR阳性肿瘤形成疾病的患者中的不利的反应的方法，包括用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗患者的步骤。尤其是，方法包括终止用EGFR抑制物治疗及起始用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗。优选地，不利的反应降至本文所述的水平，尤其是上述。例如，一种或更多类型的不利的反应的严重性可减少和/或一种或更多类型的不利的反应的发生可预防。优选地，不利的皮肤反应，尤其是疹或痤疮样疹的严重性或级减少。在特定实施方式中，患者患3级或更高或4级或更高的不利的反应，尤其是3级或更高或4级或更高的不利的皮肤反应诸如疹或痤疮样疹，及所述不利的反应的级降至2或更低，优选降至1，或所述不利的反应完全除去，因为用本发明的抗-EGFR抗体治疗。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选以高剂量给患者施用。尤其是，用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗患者包括以至少200mg/剂量，优选至少500mg/剂量，至少700mg/剂量，或至少900mg/剂量的量给患者施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选以每5天1个剂量～每3周1个剂量之间的间隔，更优选每周或每隔一周给患者施用。在特定实施方式中，患者遭受由在之前治疗中使用的EGFR抑制物导致的痤疮样皮疹，尤其是3级或更高的痤疮样皮疹。
EGFR抑制物尤其是在70％或更多，80％或更多或90％或更多的治疗的患者中导致不利的皮肤反应。在特定实施方式中，EGFR抑制物在25％或更多，30％或更多或35％或更多的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。此外，EGFR抑制物可在60％或更多，70％或更多或甚至80％或更多的治疗的患者中导致痤疮样皮疹，尤其是在25％或更多，30％或更多或甚至35％或更多的治疗的患者中导致3级或更高的痤疮样皮疹。在特定实施方式中，之前治疗中使用的EGFR抑制物是抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗( )，帕尼
单抗( )，扎芦木单抗和GA201。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的本文所述的全
部特征和实施方式也应用于本发明的方法。
EGFR抑制物尤其是在70％或更多，80％或更多或90％或更多的治疗的患者中导致不利的皮肤反应。在特定实施方式中，EGFR抑制物在25％或更多，30％或更多或35％或更多的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。此外，EGFR抑制物可在60％或更多，70％或更多或甚至80％或更多的治疗的患者中导致痤疮样皮疹，尤其是在25％或更多，30％或更多或甚至35％或更多的治疗的患者中导致3级或更高的痤疮样皮疹。在特定实施方式中，之前治疗中使用的EGFR抑制物是抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗( )，帕尼
单抗( )，扎芦木单抗和GA201。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的本文所述的全
部特征和实施方式也应用于本发明的方法。
[0096] 由抗-EGFR抗体导致的不利的皮肤反应的存在或缺失优选在施用抗-EGFR抗体之后至少2天，更优选至少3天或至少4天测定。在优选的实施方式中，为测定由抗-EGFR抗体导致的不利的皮肤反应的存在或缺失，仅考虑存在至少2天，优选至少3天或至少4天的不利的皮肤反应。为测定由抗-EGFR抗体导致的不利的皮肤反应，优选仅考虑自在第1次施用抗-EGFR抗体之后2天至在最后施用抗-EGFR抗体之后3周的间隔，更优选自在第1次施用之后3天至在最后施用之后2周的间隔，或自在第1次施用之后4天至在最后施用之后1周的间隔发生的不利的皮肤反应。由此，仅考虑由抗-EGFR抗体的生物学和/或治疗性活性导致的皮肤反应，而排除通过输注药物组合物导致的皮肤反应(输注-相关的反应(IRR))。不利的反应，尤其是不利的皮肤反应，如在本文所述，尤其是不包括输注-相关的反应。
[0097] 认为，用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗的患者中不利的皮肤反应的低发生，其也相比现有技术抗体更弱，是由于向患者的皮肤的粒细胞迁移抑制或减少的诱导，导致皮肤区中低浓度的粒细胞。不受任何理论束缚，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的优化的Fc糖基化，其也可影响免疫细胞，尤其是白细胞诸如粒细胞的结合，可负责此效应(见下)。
[0098] 发现本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体，尤其是具有本文所述的优选的糖基化特征，与其他抗-EGFR抗体，诸如高岩藻糖抗-EGFR抗体 比较，与免疫细胞相互作用中显示差异。例如，发现存在于人血样品中的几乎全部粒细胞和大量的NK细胞被本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体结合。相反，高岩藻糖西妥昔单抗( )仅结合样品中的少于5％的粒细胞和NK细胞(见实施例7)。关于此，在临床研究的全部测试的患者中观察到，在用本发明的抗-EGFR抗体治疗之后循环NK细胞也减小，指示NK细胞向受影响的肿瘤组织的刺激和迁移。不受任何理论束缚，认为，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的改变的免疫细胞结合相关于或甚至负责及至少反映不利的皮肤反应的减少的发生。在优选的实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能在人血样品中结合至少60％、优选至少
80％的人粒细胞或特定类型的人粒细胞，尤其是CD66阳性人粒细胞。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以高岩藻糖抗-EGFR抗体 的至少10-倍，优选至少
20-倍强度结合人粒细胞。此外，在一些实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能在人血样品中结合至少10％、优选至少20％的人NK细胞，尤其是CD16和CD56阳性人NK细胞。尤其是，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以高岩藻糖抗-EGFR抗体 的至少5-倍，优选
至少10-倍强度结合人NK细胞。结合行为可在适当的测定中测定。为这些结合测定，优选使人血样品与约10μg/ml浓度的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体接触，和通过使用携带可检测的信号诸如荧光团的第二抗体检测抗体与血细胞的结合。与不同血细胞的结合可如在以下实施例7中描述测定。此外，用本发明的抗-EGFR抗体治疗的全部分析的患者中测定趋化因子IP-10的快和强刺激。此指示应答本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体而涉及巨噬细胞。在它们的刺激后由巨噬细胞分泌IP-10，和因此是巨噬细胞活性的标志物。
80％的人粒细胞或特定类型的人粒细胞，尤其是CD66阳性人粒细胞。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以高岩藻糖抗-EGFR抗体 的至少10-倍，优选至少
20-倍强度结合人粒细胞。此外，在一些实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能在人血样品中结合至少10％、优选至少20％的人NK细胞，尤其是CD16和CD56阳性人NK细胞。尤其是，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以高岩藻糖抗-EGFR抗体 的至少5-倍，优选
至少10-倍强度结合人NK细胞。结合行为可在适当的测定中测定。为这些结合测定，优选使人血样品与约10μg/ml浓度的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体接触，和通过使用携带可检测的信号诸如荧光团的第二抗体检测抗体与血细胞的结合。与不同血细胞的结合可如在以下实施例7中描述测定。此外，用本发明的抗-EGFR抗体治疗的全部分析的患者中测定趋化因子IP-10的快和强刺激。此指示应答本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体而涉及巨噬细胞。在它们的刺激后由巨噬细胞分泌IP-10，和因此是巨噬细胞活性的标志物。
[0099] 这些发现展示，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能经不同作用机理攻击EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞(靶细胞)。
[0100] 与靶细胞的表面上的EGFR结合之后，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性(ADCC)。尤其是，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体经它们的Fcγ受体III，尤其是Fcγ受体IIIa结合及活化自然杀伤细胞(NK细胞)和其他免疫细胞。活化的NK细胞释放细胞因子诸如IFN-γ，和/或含有穿孔素的细胞毒性颗粒和/或进入靶细胞及通过引发凋亡或细胞裂解来促进细胞死亡的粒酶。因此，靶细胞经ADCC的诱导而被减少岩藻糖的抗-EGFR抗体毁坏。
[0101] 在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能通过阻断靶细胞上的EGFR来减少细胞增殖和/或诱导细胞死亡或凋亡。在特定靶细胞中，增殖和/或存活需要EGFR信号传导。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体与靶细胞的表面上的EGFR结合之后，EGFR的配体结合和/或活化被抑制。此外，被抗体结合的EGFR由靶细胞内化，由此减少细胞表面上的EGFR量。由这些机理，EGFR信号传导通路的活化，其导致细胞存活，增殖和凋亡抑制，被减少或甚至防止。由于靶细胞对减少岩藻糖的抗-EGFR抗体与EGFR结合直接反应，细胞不增殖及诱导凋亡。
[0102] 在进一步作用机理中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能在肿瘤形成疾病位点结合及活化粒细胞。活化的粒细胞释放颗粒和由此在靶细胞中诱导凋亡，裂解和/或坏死。在实施例中展示粒细胞被减少岩藻糖的抗-EGFR抗体强结合及活化。尤其是，在使全血样品与本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在靶细胞的存在下温育之后，观察到活性氧和乳铁蛋白，活化的粒细胞的颗粒的组分的产生。由此，在实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能经粒细胞，尤其是嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的活化攻击靶细胞。在特定实施方式中，用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病涉及粒细胞，尤其是嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，被与EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体结合及活化；及诱导所述活化的粒细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。在本发明的一方面，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于在人患者中诱导针对EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞的粒细胞-驱动的免疫反应。粒细胞-驱动的免疫反应优选涉及粒细胞被与所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体结合及活化；及诱导所述活化的粒细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。
[0103] 此外，在实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能活化攻击及毁坏靶细胞的巨噬细胞。其可展示，在施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体后，在治疗的患者中释放趋化因子IP-10。IP-10由活化的巨噬细胞分泌。患者中IP-10浓度的增加是巨噬细胞活化的强指标。因此，在这些实施方式中减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能经巨噬细胞的活化攻击靶细胞。在实施方式中，用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病涉及巨噬细胞被与EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体活化；及诱导所述活化的巨噬细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。在本发明的一方面，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于在人患者中诱导针对EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞的巨噬细胞-驱动的免疫反应。巨噬细胞-驱动的免疫反应优选涉及巨噬细胞被与所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体活化；及诱导所述活化的巨噬细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。毁坏细胞，如在本文所述，尤其是指及包括诱导凋亡，诱导细胞裂解和/或诱导所述细胞坏死。
[0104] 本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的有利的特征是其改善的糖基化模式，其明显也负责本发明的抗-EGFR抗体的显著的治疗性特征。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体是IgG抗体，优选IgG1抗体，其在重链的第2恒定区(CH2)中具有糖基化位点。抗体正常具有2个具有同一氨基酸序列的重链。因此，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选具有至少2个糖基化位点，各其2个CH2结构域中一个。此糖基化位点尤其是在对应于根据Kabat编号重链的氨基酸第297位的氨基酸位置，及具有氨基酸序列基序Asn Xaa Ser/Thr，其中Xaa可为除了脯氨酸之外的任何氨基酸。细节也以上描述和参照以上公开。在Asn297的N-联糖基化在哺乳动物IgG中以及在其他抗体同种型的同源区中保守。由于可存在于可变区或其他序列修饰的任选的另外的氨基酸，此保守的糖基化位点的实际位置可在抗体的氨基酸序列中改变。在特定实施方式中，在组合物中包含的至少80％、优选至少85％，至少90％或至少95％，更优选至少98％的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体中，至少一个CH2结构域，优选2个CH2结构域的糖基化位点携带碳水化合物结构。在Fc区中的此糖基化位点(也被称为Fc岩藻糖基化)确定本文所述的CH2结构域中岩藻糖基化的量。优选地，附接于减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的至少90％，更优选至少95％的聚糖是双触角复合N型-连接的碳水化合物结构，优选包含至少以下结构：
[0105] Asn-GlcNAc-GlcNAc-Man-(Man-GlcNAc)2
[0106] 其中Asn是抗体的多肽部分的天冬酰胺残基；GlcNAc是N-乙酰葡萄糖胺和Man是甘露糖。末端GlcNAc残基可还携带半乳糖残基，其任选地可携带唾液酸残基。还一个GlcNAc残基(命名为截开型GlcNAc)可附接于与多肽最近的Man。岩藻糖可结合到附接于Asn的GlcNAc。图6显示复合N型-连接的碳水化合物结构的示意表示。
[0107] 减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在附接于CH2结构域的碳水化合物链中具有50％或更少，40％或更少，30％或更少或甚至25％或更少，更优选20％或更少或15％～0％的量的岩藻糖。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体甚至无岩藻糖基化，由此不包含任何岩藻糖。但是，在优选的实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在Fc糖基化中包含至少2％，至少3％和优选至少5％的至少残量的岩藻糖。在特定实施方式中，在CH2结构域携带岩藻糖的碳水化合物链的量优选在1％～30％，更优选2％～25％，最优选3％～20％或4％～15％范围。
[0108] 具有减少的量的岩藻糖基化的抗-EGFR抗体，包括不携带任何岩藻糖的抗体，如本文所用可由各种手段获得。例如可在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗-EGFR抗体。具有改变的糖基化机制的细胞已在本领域描述，和可用作产生在它们的Fc区具有减少的岩藻糖基化的重组抗-EGFR抗体的宿主细胞，如本文所述。例如，EP1,176,195由Hang等人描述了具有功能性地破坏的FUT8基因的细胞系，所述基因编码岩藻糖基转移酶，使得在该细胞系中表达的抗体呈现低岩藻糖基化。因此，在一实施方式中，在本发明的组合物中包含的抗体由在呈现低岩藻糖基化模式的细胞系，例如，具有编码岩藻糖基转移酶的FUT8基因的缺陷表达的哺乳动物细胞系中重组表达产生。WO 03/035835描述具有减少的使岩藻糖附接于Asn(297)-连接的碳水化合物的能力的变体CHO细胞系，Lecl3细胞，也导致该宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖基化(也见Shields,R.L.et al.,2002J.Biol.Chem.277:26733-26740)。本发明的抗体可在为哺乳动物-样糖基化模式加工的和能产生缺少岩藻糖作为糖基化模式的抗体的酵母或丝状真菌中产生(见例如EP 1 297 172 B1)。优选地，在具有减少的或甚至无岩藻糖基化容量的人细胞系中由重组表达获得减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。相应减少的或缺乏的岩藻糖基化容量可例如通过减少对于岩藻糖基化必需的酶(例如.由基因FUT8编码的α1,6-岩藻糖基转移酶或由GMD基因编码的GDP-D-甘露糖-4,6-脱水酶(GMD))的表达，或通过，例如由基因敲除消除相应基因功能来达到。相应效应也可通过使用诱导基因敲落的化合物诸如例如介导RNA干涉的反义分子或化合物达到。介导RNA干涉的化合物包括但不限于短干扰核酸(siNA)，短干扰RNA(siRNA)，微RNA(miRNA)，短发夹RNA(shRNA)以及其前体，其在细胞内被加工为实际RNAi诱导化合物。
在RNA水平靶向靶基因的选择的/鉴定的靶序列的适合的siRNA可通过使用适当的计算的方法，应用特定设计-算法鉴定。为了获得针对靶转录物的siRNA，双-链化的分子可直接转染进细胞。或者，siRNA可来自由dicer(使长dsRNA或小发夹RNA(shRNA)转变为siRNA的酶)处理。这些前体或最终siRNA分子可外源地(人工)产生，可然后由各种转染方法被导入细胞。根据进一步实施方式，RNAi诱导化合物由载体表达，该载体被转染进宿主细胞。为siRNA，此可例如通过在2个链之间导入环来进行，由此产生单转录物，其可然后在宿主细胞中加工为有功能的siRNA。根据一实施方式，该siRNA提供载体被稳定地整合进宿主细胞的基因组。
在RNA水平靶向靶基因的选择的/鉴定的靶序列的适合的siRNA可通过使用适当的计算的方法，应用特定设计-算法鉴定。为了获得针对靶转录物的siRNA，双-链化的分子可直接转染进细胞。或者，siRNA可来自由dicer(使长dsRNA或小发夹RNA(shRNA)转变为siRNA的酶)处理。这些前体或最终siRNA分子可外源地(人工)产生，可然后由各种转染方法被导入细胞。根据进一步实施方式，RNAi诱导化合物由载体表达，该载体被转染进宿主细胞。为siRNA，此可例如通过在2个链之间导入环来进行，由此产生单转录物，其可然后在宿主细胞中加工为有功能的siRNA。根据一实施方式，该siRNA提供载体被稳定地整合进宿主细胞的基因组。
[0109] 减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选在人细胞系，优选人血细胞系，尤其是人骨髓样白血病细胞系中重组产生。为产生减少岩藻糖的抗-EGFR抗体使用的细胞系优选具有减少的或缺乏的岩藻糖基化活性，和/或减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在导致抗体的减少的或甚至缺乏的岩藻糖基化的条件下产生。如本文所述，减少的或缺乏的岩藻糖基化活性可通过操作对岩藻糖基化必需的酶(例如.FUT8或GMD)的表达或活性来达到。可用于产生减少岩藻糖的抗-EGFR抗体，尤其是Fuc-西妥昔单抗的优选的人细胞系，以及适合的产生过程描述于WO 2008/028686 A2，通过引用在本文合并。在特定实施方式中，低岩藻糖抗-EGFR抗体通过在源于由Glycotope GmbH，Robert- -Str.10，13125柏林(DE)，于2010年7月28日以保藏号No.DSM ACC3078，在DSMZ-德意志微生物和细胞培养物保藏中心，Inhoffenstraβe7B，D-38124Braunschweig(DE)保藏的人细胞系GT-5s的具有减少的岩藻糖基化活性的细胞系中表达来获得。
[0110] 在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的岩藻糖基化水平可在其由细胞系产生之后，例如由用岩藻糖苷酶体外处理或由非-岩藻糖基化的抗体的选择性富集而减少。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的岩藻糖基化水平在其由细胞系产生之后不或不显著地减少。尤其是，根据一实施方式，抗-EGFR抗体未被酶学地体外处理以便达到岩藻糖的减小。在特定实施方式中，抗-EGFR抗体的糖基化模式在宿主细胞中产生之后不由影响糖基化模式的体外过程改变。
[0111] 在优选的实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体包含截开型N-乙酰葡萄糖胺(bisGlcNAc)。其可在附接于CH2结构域的碳水化合物链中包含至少2％、优选至少5％或至少8％，更优选至少10％，最优选至少13％的量的bisGlcNAc。bisGlcNAc的量优选在5％～50％、优选7％～40％，更优选8％～35％和最优选10％～30％范围。发现，Fc聚糖中减少量的核心岩藻糖及同时增加量的bisGlcNAc提供减少岩藻糖的抗-EGFR抗体，其显示在肿瘤裂解中强增加，强抗-转移性功效和此外，显著地减少的不利的反应特征。
[0112] 在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体包含至少50％、优选至少55％，至少60％，至少65％或至少70％的量的附接于CH2结构域的半乳糖基化的碳水化合物链。半乳糖基化的碳水化合物链的量优选在50％～99％，更优选60％～97％，最优选65％～
95％范围。尤其是，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选包含至少10％、优选至少15％，至少20或至少25％的量的附接于CH2结构域的携带2个半乳糖单元的碳水化合物链。在CH2结构域的携带2个半乳糖单元的碳水化合物链的量优选在10％～70％，更优选15％～60％，最优选20％～50％范围。此外，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选包含至少1％、优选至少
1.5％，至少2％或至少2.5％的量的附接于CH2结构域的唾液酸化的碳水化合物链。尤其是，至少0.5％、优选至少1％的附接于CH2结构域的碳水化合物链携带2个唾液酸单元。在CH2结构域携带至少1个唾液酸的碳水化合物链的量优选在1％～18％，更优选2％～14％范围和/或在CH2结构域携带2个唾液酸的碳水化合物链的量优选在0.5％～6％，更优选
1％～5％范围。
95％范围。尤其是，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选包含至少10％、优选至少15％，至少20或至少25％的量的附接于CH2结构域的携带2个半乳糖单元的碳水化合物链。在CH2结构域的携带2个半乳糖单元的碳水化合物链的量优选在10％～70％，更优选15％～60％，最优选20％～50％范围。此外，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选包含至少1％、优选至少
1.5％，至少2％或至少2.5％的量的附接于CH2结构域的唾液酸化的碳水化合物链。尤其是，至少0.5％、优选至少1％的附接于CH2结构域的碳水化合物链携带2个唾液酸单元。在CH2结构域携带至少1个唾液酸的碳水化合物链的量优选在1％～18％，更优选2％～14％范围和/或在CH2结构域携带2个唾液酸的碳水化合物链的量优选在0.5％～6％，更优选
1％～5％范围。
[0113] 在特定实施方式中，本发明的低岩藻糖抗-EGFR抗体在CH2结构域中具有以下糖基化特征中的一个或更多，或至少2个，至少3个，至少4个，至少5个或优选全部：
[0114] (i)30％或更少、优选25％或更少，尤其是在1％～20％范围的携带岩藻糖残基的聚糖的相对量；
[0115] (ii)至少5％、优选至少10％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
[0116] (iii)至少50％、优选至少60％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；
[0117] (iv)至少10％、优选至少15％的携带2个半乳糖的聚糖的相对量；
[0118] (v)至少1％、优选至少2％的携带至少1个唾液酸的聚糖的相对量；
[0119] (vi)任选地，至少0.5％、优选至少1％的携带2个唾液酸的聚糖的相对量。
[0120] 在优选的实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在其Fab片段，尤其是在重链可变区VH包含另外的糖基化位点。在优选的实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体包含2个具有同一氨基酸序列的重链和2个具有同一氨基酸序列的轻链。因此，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在特定实施方式中包含2个另外的糖基化位点，尤其是在各其2个VH结构域一个。附接于Fab片段的碳水化合物链优选包含低量的岩藻糖和高量的唾液酸，半乳糖及截开型GlcNAc。在附接于VH结构域的碳水化合物链中岩藻糖的量优选是40％或更少，35％或更少，30％或更少或甚至25％或更少，更优选22％或更少，最优选20％或更少。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可在附接于VH结构域的碳水化合物链中包含至少30％、优选至少35％或至少40％，更优选的至少45％，最优选的至少50％的量的bisGlcNAc。在VH结构域bisGlcNAc的量优选在30％～95％、优选35％～90％，更优选40％～85％和最优选45％～80％范围。此外，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选包含至少75％、优选至少85％，至少90％，至少95％或至少97％的量的附接于VH结构域的半乳糖基化的碳水化合物链。尤其是，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选包含至少60％、优选至少70％，至少75％，至少80％，至少85％或至少90％的量的附接于VH结构域的携带至少2个半乳糖单元的碳水化合物链。在VH结构域携带至少2个半乳糖单元的碳水化合物链的量优选在70％～99％，更优选75％～98％，最优选80％～97％范围。此外，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选包含至少50％、优选至少60％，至少65％，至少70％，至少75％或至少80％的量的附接于VH结构域的唾液酸化的碳水化合物链。尤其是，至少35％、优选至少40％，至少45％或至少50％的附接于VH结构域的碳水化合物链携带至少2个唾液酸单元。
[0121] 因此，在特定实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在重链可变区包含糖基化位点，及在VH结构域具有以下糖基化特征中的一个或更多，2个或更多或优选全部：
[0122] (i)40％或更少、优选35％或更少的携带岩藻糖残基的聚糖的相对量；
[0123] (ii)至少35％、优选至少40％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
[0124] (iii)至少85％、优选至少90％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；
[0125] (iv)至少70％、优选至少80％的携带至少2个半乳糖的聚糖的相对量；
[0126] (v)至少50％、优选至少60％的携带至少1个唾液酸的聚糖的相对量；
[0127] (vi)至少35％、优选至少45％的携带至少2个唾液酸的聚糖的相对量。
[0128] 尤其是，与上述CH2结构域的糖基化特征组合，VH结构域的这些糖基化特征存在于本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体中。
[0129] 在一些实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体包含CH2结构域中的糖基化位点和VH结构域中的糖基化位点及对于整个抗体具有以下糖基化特征中的一个或更多，或至少2个，至少3个，至少4个或优选全部：
[0130] (i)30％或更少、优选25％或更少的携带岩藻糖残基的聚糖的相对量；
[0131] (ii)至少20％、优选至少25％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
[0132] (iii)至少60％、优选至少70％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；
[0133] (iv)至少30％、优选至少35％的携带至少2个半乳糖的聚糖的相对量；
[0134] (v)至少10％、优选至少15％的携带至少1个唾液酸的聚糖的相对量；
[0135] (vi)至少4％、优选至少6％的携带至少2个唾液酸的聚糖的相对量。
[0136] 在此实施方式中，为测定糖基化特征考虑附接于抗体的Fc部分的聚糖和附接于抗体的Fab部分的聚糖。优选地，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在其糖基化模式中不包含可检测的量的NeuGc和/或Galα1,3-Gal。
[0137] 糖基化包含bisGlcNAc，上述半乳糖和唾液酸是人糖基化模式的特征和可通过在上述人细胞系中表达抗-EGFR抗体来获得。本文提及的唾液酸优选指称优选经α2,6-，α2,3-或α2,8-键偶联于半乳糖的N-乙酰神经氨酸。根据优选的实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体包含可检测的量的α2,6-偶联的N-乙酰神经氨酸(NeuAc)。
[0138] 如上所述，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选具有本文所述的人糖基化特征。该特征可通过在人细胞系，优选人骨髓样白血病细胞系中表达抗-EGFR抗体来获得(见以上描述及实施例1)。人糖基化特征优选表征为至少70％、优选至少80％，至少85％或更多优选至少90％的附接于减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的碳水化合物链是复合类型聚糖结构，优选双触角复合类型聚糖结构。尤其是，附接于减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的具有高甘露糖类型或混合型聚糖结构的碳水化合物链的量是20％或更少、优选15％或更少或10％或更少，更优选5％或更少，最优选约0％。
[0139] 具有人糖基化特征的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体特别不包含可检测的量的N-羟乙酰神经氨酸(NeuGc)和/或Galα1,3-Gal结构。相应糖基化结构见于在非-人细胞系诸如啮齿动物细胞系中产生的抗体。由于不包括Galα1,3-Gal结构的人糖基化模式，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可用于治疗显示免疫应答和尤其是产生针对Galα1,3-Gal结构的抗体诸如IgE抗体的患者。相应抗体可存在，例如如果患者已之前用在产生具有Galα1,3-Gal结构的抗体的啮齿动物细胞系或其他细胞中产生的抗体治疗。但是，针对Galα1,3-Gal结构的IgE抗体也可由于其他特征存在，和也可依赖于食性。尤其是，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可在用在啮齿动物细胞中产生的抗-EGFR抗体治疗患者之后使用。例如，常规抗-EGFR抗体 在啮齿动物细胞中产生及携带Galα1,3-Gal结构。由此， 倾向于诱导针对所述结构的免疫反应。这些反应可自弱形式跨至更极端和威胁生命的应答，诸如肾衰竭。它们也可降低治疗的有效性，或创建未来反应，如果患者被给予含有相应抗体的随后治疗。达50％的用具有啮齿动物糖基化模式的抗体治疗的患者发展针对上述特定非-人糖基化结构的抗体。此可为问题，尤其是在长期治疗期间。本发明的抗-EGFR抗体具有人糖基化模式，因此致使患者治疗显示针对非-人糖基化结构诸如NeuGc和Galα1,3-Gal结构的免疫应答，尤其是严重的免疫应答。在临床研究中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体至今不导致针对所述抗体的过敏性反应。此是相比现有技术抗-EGFR抗体的重要优势。例如。 在显著数的病例中显示基于外源Gal-Gal
结构的严重的过敏性超敏反应(Chung等人,2008,N.Engl.J.Med)，其可导致致死的过敏性休克。由于此原因， 在具有发展该反应的高似然性的特定区中甚至不使用，例如因为既有Gal-Gal IgE抗体。因此，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可有利地用于治疗在之前治疗中发展了针对不同抗-EGFR抗体的过敏性反应的人患者。此外，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可用于治疗具有既有Gal-Gal IgE抗体的人患者。此外，本发明的抗-EGFR抗体可用于无需伴随抗-过敏性治疗诸如抗-组胺治疗，例如用H1和/或H2阻断剂治疗地治疗。
结构的严重的过敏性超敏反应(Chung等人,2008,N.Engl.J.Med)，其可导致致死的过敏性休克。由于此原因， 在具有发展该反应的高似然性的特定区中甚至不使用，例如因为既有Gal-Gal IgE抗体。因此，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可有利地用于治疗在之前治疗中发展了针对不同抗-EGFR抗体的过敏性反应的人患者。此外，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可用于治疗具有既有Gal-Gal IgE抗体的人患者。此外，本发明的抗-EGFR抗体可用于无需伴随抗-过敏性治疗诸如抗-组胺治疗，例如用H1和/或H2阻断剂治疗地治疗。
[0140] 减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选是IgG抗体，更优选IgG1抗体。其具有特异性结合其靶表位的能力和结合Fcγ受体，尤其是Fcγ受体IIIa的能力。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性(ADCC)反应。本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能相比高岩藻糖抗-EGFR抗体诱导更强ADCC。高岩藻糖抗-EGFR抗体在下文定义。尤其是，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以高岩藻糖抗-EGFR抗体的至少2-倍，至少3-倍，至少5-倍，至少7-倍，至少10-倍，至少20-倍，至少30-倍，至少40-倍或至少50-倍的力度诱导ADCC，如可在体外ADCC测定中测定。如这里显示，当比较Fuc-西妥昔单抗(根据本发明)与Fuc+西妥昔单抗(现有技术)时，观察到ADCC抗-肿瘤活性的达10～50倍改善。诱导ADCC的更高效力优选指称高岩藻糖抗-EGFR抗体的X分之一的对于诱导相同的水平的ADCC(诸如裂解的靶细胞的比)，优选以高岩藻糖抗-EGFR抗体的95％的最大裂解相同的特异性裂解必需的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体浓度。例如，如果减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以高岩藻糖抗-EGFR抗体的5分之一的浓度诱导相同的水平的ADCC，则在诱导ADCC中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的力度是高岩藻糖抗-EGFR抗体的力度的5-倍。
如由实验数据显示，当代替对应高岩藻糖抗-EGFR抗体而使用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体时，相同的ADCC应答需要10～50分之一的抗体浓度。在特定实施方式中，诱导ADCC中的X-倍效力测定为各不同FcγRIIIa同种异型诱导的ADCC的平均值。但是，在特定实施方式中，诱导ADCC中的X-倍效力指称用具有特定FcγRIIIa同种异型诸如FcγRIIIa-158F/F同种异型，FcγRIIIa-158V/V同种异型或FcγRIIIa-158F/V同种异型的供体的效应细胞诱导的ADCC。如由实验数据显示，本发明的减少岩藻糖的抗体显示相比对应高岩藻糖抗-EGFR抗体通常更高ADCC。对于FcγRIIIa-158F/F和F/V同种异型(高岩藻糖抗体显示最小的活性的那些同种异型)的ADCC活性的增加，可甚至比上述更显著。尤其是，在具有FcγRIIIa-158F/F同种异型或FcγRIIIa-158F/V同种异型的患者中，或在使用来自具有FcγRIIIa-158F/F同种异型或FcγRIIIa-158F/V同种异型的供体的效应细胞测定ADCC活性的体外测定中，在诱导ADCC中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体是高岩藻糖抗-EGFR抗体的力度的至少20-倍，至少30-倍，至少40-倍，至少50-倍，至少70-倍，至少100-倍，至少150-倍或至少200-倍。由于此对于欠有利的同种异型(FcγRIIIa-158F/F或FcγRIIIa-158F/V同种异型)的强增加，其中所述高岩藻糖抗-EGFR抗体仅足够诱导ADCC，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在各患者组中以可比较的水平诱导ADCC。因此，抗-EGFR抗体可在全部ADCC受体同种异型有效介导ADCC。更高ADCC活性也被相信负责用本领域知道的高岩藻糖抗-EGFR抗体诸如 不可治疗的KRAS突变肿瘤的有效治疗。
如由实验数据显示，当代替对应高岩藻糖抗-EGFR抗体而使用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体时，相同的ADCC应答需要10～50分之一的抗体浓度。在特定实施方式中，诱导ADCC中的X-倍效力测定为各不同FcγRIIIa同种异型诱导的ADCC的平均值。但是，在特定实施方式中，诱导ADCC中的X-倍效力指称用具有特定FcγRIIIa同种异型诸如FcγRIIIa-158F/F同种异型，FcγRIIIa-158V/V同种异型或FcγRIIIa-158F/V同种异型的供体的效应细胞诱导的ADCC。如由实验数据显示，本发明的减少岩藻糖的抗体显示相比对应高岩藻糖抗-EGFR抗体通常更高ADCC。对于FcγRIIIa-158F/F和F/V同种异型(高岩藻糖抗体显示最小的活性的那些同种异型)的ADCC活性的增加，可甚至比上述更显著。尤其是，在具有FcγRIIIa-158F/F同种异型或FcγRIIIa-158F/V同种异型的患者中，或在使用来自具有FcγRIIIa-158F/F同种异型或FcγRIIIa-158F/V同种异型的供体的效应细胞测定ADCC活性的体外测定中，在诱导ADCC中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体是高岩藻糖抗-EGFR抗体的力度的至少20-倍，至少30-倍，至少40-倍，至少50-倍，至少70-倍，至少100-倍，至少150-倍或至少200-倍。由于此对于欠有利的同种异型(FcγRIIIa-158F/F或FcγRIIIa-158F/V同种异型)的强增加，其中所述高岩藻糖抗-EGFR抗体仅足够诱导ADCC，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在各患者组中以可比较的水平诱导ADCC。因此，抗-EGFR抗体可在全部ADCC受体同种异型有效介导ADCC。更高ADCC活性也被相信负责用本领域知道的高岩藻糖抗-EGFR抗体诸如 不可治疗的KRAS突变肿瘤的有效治疗。
[0141] 减少岩藻糖的抗-EGFR抗体包含重链可变区(VH)和CH2结构域，更优选结构域VH，CH1，CH2和CH3。此外，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选包含轻链可变区(VL)，优选结构域VL和VH。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可包含2个重链和2个轻链。其优选是重组单克隆抗体诸如人，人源化的或嵌合抗体及在特定实施方式中是嵌合抗体。
[0142] 减少岩藻糖的抗-EGFR抗体介导ADCC及根据优选的实施方式能特异性结合EGFR的细胞外部分，尤其是EGFR的结构域III。根据特定实施方式，其具有至少1个，优选至少2个，更优选全部以下活性：(i)其能阻断配体结合EGFR，(ii)其能阻断EGFR的二聚化，(iii)其能阻断EGFR，尤其是EGFR的激酶活性的活化和/或(iv)其能减少细胞表面上EGFR的量，尤其是通过诱导EGFR向细胞内化。优选地，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体具有全部上述的特征。优选地，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体与抗体西妥昔单抗显示交叉-特异性和尤其是与抗体西妥昔单抗结合相同的表位。优选地，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在结合及Fv介导的抗-肿瘤性质中与西妥昔单抗相当，但是，由于本文所述的改善的糖基化而显示增加的ADCC介导的抗-肿瘤性质及改善的副作用特征。在优选的实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体与西妥昔单抗包含相同的重链和优选也相同的轻链CDR序列。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的重链和优选也轻链的整个氨基酸序列可与西妥昔单抗的对应氨基酸序列具有至少85％同一性，至少90％同一性，至少95％同一性或至少97％同一性。优选地，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的氨基酸序列源于西妥昔单抗的对应氨基酸序列。
[0143] 在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体包含重链可变区，其包含互补决定区(CDR)CDR-H1，CDR-H2和CDR-H3，其中所述CDR-H1具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或CDR-H2具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或CDR-H3具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列。优选地，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的重链可变区包含全部3个这些CDR序列和尤其是包含SEQ ID NO:7或9的氨基酸序列。在优选的实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体包含轻链可变区，其包含互补决定区(CDR)CDR-L1，CDR-L2和CDR-L3，其中所述CDR-L1具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或CDR-L2具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或CDR-L3具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列。优选地，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的轻链可变区包含全部3个这些CDR序列和尤其是包含SEQ ID NO:8或10的氨基酸序列。此外，在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体包含重链可变区，其包含与SEQ ID NO:7或9的氨基酸序列具有至少85％同一性，至少90％同一性或至少95％同一性的氨基酸序列，和/或轻链可变区，其包含与SEQ ID NO:8或10的氨基酸序列具有至少85％同一性，至少90％同一性或至少95％同一性的氨基酸序列。如上所述，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选在结合及Fv介导的抗-肿瘤性质中与西妥昔单抗相当。
[0144] 在特定优选的实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体包含重链可变区，其包含SEQ ID NO:7或9的氨基酸序列或与之具有至少80％，至少85％、优选至少90％，更优选至少95％同一性的氨基酸序列，其中所述CDR1具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列，CDR2具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列和CDR3具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列。优选地，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体另外地包含轻链可变区，其包含SEQ ID NO:8或10的氨基酸序列或与之具有至少80％，至少85％、优选至少90％，更优选的至少95％同一性的氨基酸序列，其中所述CDR1具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列，CDR2具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列和CDR3具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
[0145] 根据一实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体介导ADCC和能特异性结合EGFR及阻断EGFR的二聚化，尤其是与表皮生长因子受体家族的其他成员诸如HER2，HER3和HER4的异源EGFR的二聚化。还上述了其他特征。
[0146] 在一实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体作为缀合物提供，其包含与其他剂诸如治疗活性物质缀合的抗体。其他剂优选是在癌的治疗和/或监测中有用的。例如，其他剂可选自：放射性核素，化学治疗剂，抗体，尤其是与减少岩藻糖的抗-EGFR抗体不同物种和/或不同特异性的那些，酶，相互作用结构域，可检测的标记物，毒素，细胞裂解组分，免疫调节物，免疫效应子，MHC I类或II类抗原，放射性同位素和脂质体。其他剂，如果包含，可为共价，尤其是通过融合或化学偶联，或非-共价附接于抗体。特定优选的其他剂是能杀灭癌细胞的放射性核素或细胞毒性剂，诸如化学治疗剂，尤其是那些在本文别处所述的。可作为其他剂缀合的化学治疗剂的特定例包括烷化剂诸如顺铂，抗代谢药，种植生物碱和类萜，长春花生物碱，鬼臼毒素，紫杉烷诸如泰素，拓扑异构酶抑制物诸如伊立替康和托泊替康，或抗肿瘤剂诸如多柔比星。本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可缀合于任何本文所述的化学治疗剂和/或抗体。根据一实施方式，其也在实施例中使用，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体未缀合于其他剂。
[0147] 【EGFR阳性肿瘤形成疾病和待治疗的患者】
[0148] 减少岩藻糖的抗-EGFR抗体甚至当作为单治疗剂使用时，在本文特别定义的患者组中显示意外地高治疗性功效。细节在以下描述。在临床研究中展示不同癌患者的有效治疗，包括具有结肠癌(KRAS突变体和野生型)，肺癌，胃癌，食管癌，肾细胞癌，胆囊癌，卵巢癌，阴茎癌和直肠癌的患者。尤其是，显著的效应也见于不同肾细胞癌，包括透明细胞和非-透明细胞肾细胞癌的治疗。
[0149] 待由减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗的EGFR阳性肿瘤形成疾病优选是EGFR阳性癌以上详细定义及描述的。如所述，不同形式的EGFR阳性癌以及转移可用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗。EGFR阳性癌可尤其是选自：恶性上皮肿瘤，结肠癌，结直肠癌，直肠癌，肾癌，卵巢癌，胃癌，食管癌，肺癌，胆囊癌，阴茎癌，头颈癌，卵巢癌，乳腺癌和子宫癌。可治疗的EGFR阳性癌的特定例是结直肠癌，结肠癌，直肠癌，非-小细胞肺癌，鳞状细胞肺癌，肾细胞癌，三重阴性乳腺癌，头和颈鳞状细胞癌，食管腺癌，胃腺癌，胃食管连接处腺癌，子宫内膜癌或肉瘤和子宫颈癌，包括其转移性形式。其他EGFR阳性癌包括肾细胞癌诸如透明细胞肾细胞癌，乳头肾细胞癌(嗜碱性和嗜酸性粒细胞)，嫌色细胞肾细胞癌，Bellini管癌/收集管癌，及肾的多形性(肉瘤样)癌；非小细胞肺癌诸如鳞状非小细胞肺癌(sNSCLC)，及非鳞状非小细胞肺癌(nsNSCLC)，尤其是腺癌和大细胞癌；小细胞肺癌(SCLC)；头和颈上皮肿瘤诸如头和颈鳞状细胞癌(SCCHN)，尤其是非-分化的，分化的，腺样-鳞状和疣状SCCHN；及胃癌诸如腺癌，尤其是管状腺癌，乳头腺癌和粘液腺癌，印戒细胞癌，腺样-鳞状癌，鳞状癌，髓质胃癌，小细胞胃癌，及非-分化的胃癌。胃癌可位于幽门窦，胃体或胃底，或可为在整个胃的扩散胃癌。在特定实施方式中，癌是转移癌。如由实施例显示，本发明的抗-EGFR抗体是特别适合用于治疗转移性癌和转移瘤。EGFR阳性癌可包括任何类型的转移，诸如皮肤转移，淋巴结转移，肺转移，肝转移，腹膜转移，胸膜转移和/或脑转移瘤。在特定实施方式中，EGFR阳性肿瘤形成疾病是大肠的转移性癌或头和颈鳞状细胞癌，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体对这些单独或组合放射治疗和/或其他抗癌医学使用。
[0150] 本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可用于治疗可用常规抗-EGFR抗体诸如治疗的患者。尤其，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可用于治疗患者，其具有
[0151] -局部或区域性地进展的头和颈鳞状细胞癌组合放射治疗；
[0152] -复发的局部区域疾病或转移性头和颈鳞状细胞癌组合用5-FU的基于铂的治疗；和/或
[0153] -在基于铂的治疗之后复发的或转移性头和颈鳞状细胞癌进展。
[0154] 此外，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可用于治疗患者，其
[0155] -具有K-Ras突变-阴性(野生型)，表达EGFR的，转移性结直肠癌(可例如由FDA-批准的测试测定)组合FOLFIRI(甲酰四氢叶酸,5-FU和伊立替康)用于第1-线治疗；
[0156] -在对于基于伊立替康的化学治疗是难治性的患者中组合伊立替康；和/或[0157] -在基于奥沙利铂的和基于伊立替康的化学治疗失效或对于伊立替康不耐受的患者中作为单剂。
[0158] 此外，如本文所述，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的特定特征提供新治疗机会，由此允许治疗用常规抗-EGFR抗体无法或无法再治疗的患者组。
[0159] 优选地，EGFR阳性肿瘤形成疾病具有可检测的，优选可由免疫组织化学或原位杂交检测的EGFR表达。其尤其包括细胞具有由免疫组织化学或原位杂交可检测的EGFR表达。尤其是，EGFR基因扩增是可检测的，优选由原位杂交诸如荧光原位杂交(FISH)，银原位杂交(SISH)或色原原位杂交(CISH)。细节也以上描述。根据特定实施方式，在治疗之前确定患者的EGFR状态。
[0160] 在特定实施方式中，EGFR阳性肿瘤形成疾病包括在EGFR具有突变的细胞。该EGFR突变可为可检测的，优选由序列分析使用例如PCR分析，杂交分析或限制性分析。根据特定实施方式，在治疗之前测定是否患者的EGFR携带突变。
[0161] 在特定实施方式中，EGFR阳性肿瘤形成疾病包括具有KRAS突变，尤其是导致组成性有活性的K-Ras蛋白的突变的细胞。相应K-Ras突变体的例是在氨基酸编号12具有突变的K-Ras诸如K-Ras G12V，K-Ras G12D，K-Ras G12C，K-Ras G12S，K-Ras G12A和K-Ras G12R；在氨基酸编号13具有突变的K-Ras诸如K-Ras G13D和K-Ras G13R；及在氨基酸编号61具有突变的K-Ras诸如K-Ras Q61H，K-Ras Q61K和K-Ras Q61L。如在临床研究和体外实验中展示，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体对KRAS突变肿瘤和癌细胞显示强活性和良好治疗结果。由于本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体也在KRAS野生型癌中有效，其可用于治疗KRAS wt以及用于治疗KRAS突变癌。因此，在进一步实施方式中，EGFR阳性肿瘤形成疾病是KRAS野生型，即其不包含具有KRAS突变的细胞。在特定实施方式中，本发明的抗-EGFR抗体用于治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病，其中所述待治疗的患者具有未知的KRAS突变状态，和/或减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于与其KRAS突变状态无关地治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病。
[0162] 在特定实施方式中，待治疗的患者患EGFR阳性肾癌。在特定实施方式中，待治疗的患者患转移肾癌。肾癌包括肾细胞癌和泌尿道上皮细胞癌。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗肾细胞癌。肾细胞癌可为透明细胞肾细胞癌，乳头肾细胞癌包括嗜碱性和嗜酸性粒细胞乳头肾细胞癌，嫌色细胞肾细胞癌，收集管癌或Bellini管癌，多形性和/或肉瘤样癌或透明细胞乳头肾细胞癌。该EGFR阳性肾癌的特定例是透明细胞肾细胞癌和非-透明细胞肾细胞癌诸如乳头肾细胞癌。患肾癌的患者通常具有非常差的预后，由于通常肾癌不应答化学治疗和放射治疗。由于此缺乏应答，肾癌，尤其是肾细胞癌，已知是全部生殖泌尿肿瘤中最致死的。转移性肾细胞癌给肿瘤科医生呈现特定挑战，由于约70％的患者在它们的疾病过程期间发展转移，及患转移性肾细胞癌的患者的5年存活在5和15％之间。此外，目前无建立的在手术切除原发性肿瘤和可见的转移之后肾细胞癌的辅助的治疗。非特异性细胞因子的使用已至今显示无效。不像多数其他癌，肾细胞癌抵抗多数细胞毒性和细胞生长抑制剂，其严重限制可能的有效辅助的治疗。癌疫苗试验，放射治疗，化学治疗，免疫治疗或生物学治疗很少成功，及完全切除的高-风险肾细胞癌的目前护理标准是紧密观察而无其他治疗。本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体显示针对不同形式的肾细胞癌，尤其是透明细胞肾细胞癌和非-透明细胞癌的强治疗性功效。此是显著的，由于之前用高-岩藻糖西妥昔单抗的临床研究受阻及未在肾细胞癌患者中显示治疗性功效(见,例如,Motzer等人。(2003)Investigational New Drugs 21,99～101)。因此，本发明提供使用本发明的低岩藻糖抗-EGFR抗体治疗肾细胞癌，包括透明细胞以及非-透明细胞肾细胞癌的新可能性。这些治疗选项尤其对亍用其他抗-EGFR抗体无法治疗或无法持续治疗的患者是重要的，因为它们在用其他抗-EGFR抗体治疗期间具有例如突变的KRAS或未知的KRAS状态，不利的FcγIIIa受体同种异型(158F/F或158V/F)，发展的过敏性反应针对其他抗-EGFR抗体和/或发展的不利的皮肤反应，尤其是3级或更高的不利的皮肤反应。
[0163] EGFR阳性肿瘤形成疾病可在用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗之前抵抗或可在用一种或更多抗-癌剂诸如化学治疗剂和/或治疗性抗体，尤其是一种或更多本文所述的化学治疗剂治疗之后，和/或在用一种或更多本文所述的现有技术抗-EGFR抗体治疗之后进展了。例如，EGFR阳性肿瘤形成疾病可抵抗或在用至少一种本文所述的高岩藻糖抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗( )治疗之后和/或在用在多于10％，尤其是多于15％或多于20％的治疗的患者中导致3级或更高的严重的不利的皮肤反应的一种或更多抗-EGFR抗体治疗之后可进展。如描述于前言，不同于本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的无岩藻糖基化的抗体，诸如GA201也可导致3级或更高的不利的皮肤反应。此外，EGFR阳性癌可抵抗或可在放射治疗后进展。
[0164] 待治疗的患者可为任何患EGFR阳性肿瘤形成疾病诸如癌的人患者。在特定实施方式中，患者是重度预治疗的癌患者，尤其是在用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗之前经历一次或更多，优选2次或更多，或3次或更多癌治疗的患者。也在下文描述表征待治疗的患者的相应在前治疗；参照以下公开。
[0165] 如由实验数据展示，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体关无于供体的Fcγ受体IIIa同种异型地对外周血单核细胞(PBMC)有效诱导ADCC。与在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是缬氨酸纯合的患者(FcγRIIIa-158V/V)中相比在其他患者中，高岩藻糖抗-EGFR抗体具有更高得多的ADCC活性相比，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体诱导ADCC的功效对于全部Fcγ受体IIIa同种异型类似。因此，用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗的患者可具有任何Fcγ受体IIIa同种异型和尤其是可在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是缬氨酸纯合(FcγRIIIa-158V/V)，在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是苯丙氨酸纯合(FcγRIIIa-158F/F)或在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是缬氨酸和苯丙氨酸杂合(FcγRIIIa-158V/F)。在优选的实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于与所述抗体的FcγRIIIa同种异型无关地治疗患者。
[0166] 临床研究显示，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体良好耐受由患者和导致仅少不利的反应。尤其是，不利的反应的频度和严重性与常见的 治疗相比显著地更低和更弱。尤其，不利的皮肤反应是与使用常见的EGFR抑制物，尤其是抗-EGFR抗体治疗关联的通用问题。例如，4名接收西妥昔单抗( )治疗的患者中多于3名患痤疮样疹，达17％具有严重的形式(3级或更高)。一旦发展，疹也不消，直到在 治疗终止或剂量减少之后。类似情况也在本领域描述的其他EGFR抑制物，包括减少岩藻糖的抗-EGFR抗体中发现。在本领域，皮疹甚至已被认为是用于指示EGFR抑制物的治疗性功效的指标。与此相反，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体极罕导致和仅弱级的不利的皮肤反应，然而其显示强治疗性功效。至今，临床研究中未观察到3级或更高的不利的皮肤反应。因此，本发明的抗-EGFR抗体反驳了高治疗性功效必需伴随强皮肤反应的教条。
[0167] 与高岩藻糖抗-EGFR抗体，尤其是西妥昔单抗( )关联的另一频繁的不利的反应的例是低镁血症。在临床单一治疗试验中用 治疗的几乎全部患者经历血清镁水平的进行性降低。在多于50％的患者中发生低镁血症。但是，在用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的临床研究中，甚至在治疗几周之后少于6％的患者具有降低的血镁水平。
[0168] 因此，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体对于治疗患EGFR阳性肿瘤形成疾病的人患者尤其有用，其中所述患者患或处于患针对EGFR抑制物的不利的反应的风险，或其中之前用EGFR抑制物，尤其是用抗-EGFR抗体治疗中发生不利的反应。本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可尤其用于治疗无法或无法再用常规EGFR抑制物，尤其用高岩藻糖抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗( )治疗的患者，因为由所述常规EGFR抑制物导致的预期的或已发生不利的反应。例如，患者可处于发展针对常规EGFR抑制物的不利的反应的风险，或考虑到之前治疗可已知发展该不利的反应，或由于持续或最近终止用常规EGFR抑制物诸如抗-EGFR抗体治疗而可目前患该不利的反应。不利的反应尤其是如此严重，它们重于用常规EGFR抑制物治疗的益处。由此，本发明的抗-EGFR抗体可尤其用于治疗性设置，其中用EGFR抑制物诸如抗-EGFR抗体治疗导致不利的反应，由于所述不利的反应而无法实施或持续。在该设置中，本发明提供有价值的新治疗选项。在优选的实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗在用EGFR抑制物治疗之后因为针对所述EGFR抑制物的不利的反应而治疗被终止或间断的人患者。尤其是，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗在用EGFR抑制物的之前治疗中遭受针对所述EGFR抑制物，尤其是抗-EGFR抗体的不利的反应，尤其是3级或更高的不利的皮肤反应和/或过敏性反应的人患者。在另一实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗处于差的一般健康状况和尤其是无法耐受针对EGFR抑制物的不利反应诸如3级或更高的皮肤反应的具有EGFR阳性肿瘤形成疾病的人患者。
[0169] 在本文所说的不利的反应尤其根据美国国家健康学会的癌治疗的不利的事件评估程序3.0版的常见的术语标准确定，分类及分级。不利的反应(也被称为不利的事件)的级根据其严重性指1级：弱的不利的反应，2级：中等不利的反应，3级：严重的不利的反应，4级：威胁生命的或伤残性不利的反应，及5级：与不利的反应相关的死亡。
[0170] 在特定实施方式中，针对在之前治疗中使用的EGFR抑制物，尤其是抗-EGFR抗体的不利的反应选自：皮肤反应诸如疹，代谢反应诸如低血清镁水平和/或低血清钾水平，及胃肠反应诸如腹泻，恶心，呕吐和/或便秘。尤其是，针对之前使用的EGFR抑制物，尤其是抗-EGFR抗体的不利的反应是不利的皮肤反应，尤其是包括疹或脱屑诸如痤疮样疹，红斑多形性和手-足皮肤反应；瘙痒症；瘙痒；甲变化；和/或溃疡形成。在特定实施方式中，由之前使用的EGFR抑制物导致的不利的皮肤反应是3或4级的严重的不利的皮肤反应。在特定实施方式中，由之前使用的EGFR抑制物导致的不利的皮肤反应包括皮疹或痤疮样皮疹，尤其是严重的皮疹或严重的痤疮样皮疹，尤其3级或4级的。3级皮疹尤其是包括严重的、泛发性红皮病和/或斑疹，丘疹或小泡疹；和/或覆盖至少50％的身体皮肤区的脱屑。4级皮疹尤其是包括泛发性剥脱性、溃疡性和/或大疱性皮炎。至少3级的痤疮样疹尤其是与疼痛、毁容、溃疡形成和/或脱屑关联。在特定实施方式中，在用EGFR抑制物，尤其是抗-EGFR抗体之前治疗期间发生的不利的皮肤反应相关于感染，尤其是细菌或病毒感染，例如皮肤或血的感染。
[0171] 此外，针对之前使用的EGFR抑制物的不利的反应可为代谢不利的反应包括低镁血症(低血清镁水平)和低钾血症(低血清钾血清水平)。在之前治疗期间发生的不利的代谢反应可具有2级或更高，尤其是3级或4级。2级低镁血症指称1.2～0.9mg/dl或0.5～0.4mmol/l之间的血镁水平。3级低镁血症指称0.9～0.7mg/dl或0.4～0.3mmol/l之间的血镁水平。4级低镁血症指称少于0.7mg/dl或少于0.3mmol/l的血镁水平。3级低钾血症指称3.0～2.5mmol/l之间的血钾水平和4级低钾血症指称少于2.5mmol/l的血钾水平。在特定实施方式中，针对之前使用的抗-EGFR抗体的不利的反应包括2级或更高的低镁血症。
[0172] 导致不利的反应的之前治疗中使用的EGFR抑制物在特定实施方式中选自：抗-EGFR抗体诸如Fuc+西妥昔单抗( )，帕木单抗(Vectibix)，GA201和酪氨
酸激酶抑制物诸如吉非替尼，厄洛替尼和拉帕替尼。
酸激酶抑制物诸如吉非替尼，厄洛替尼和拉帕替尼。
[0173] 在本发明的再一方面，患EGFR阳性肿瘤形成疾病和泻流的人患者用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗。关于此，泻流指称人身体中的不规则的第3-空间流体收集，尤其是体腔中的流体收集，其中所述流体自其他身体部位逃逸。胸腔积液是胸膜腔中的流体收集，和腹膜泻流或腹水是腹膜腔中流体收集。术语"腹膜泻流"和"腹水"在本文作为同义词使用。癌患者常常患泻流，如果癌也影响间皮，即衬不同体腔的膜。原发性肿瘤侵袭间皮或转移定居间皮和由此扰乱其在调控流体循环中的功能。例如，涉及胸膜可导致胸腔积液，而涉及腹膜可导致腹膜泻流或腹水。因此，在本文，泻流尤其是指恶性泻流，即由癌导致的泻流，尤其是恶性胸腔积液或恶性腹膜泻流(恶性腹水)。
[0174] 本文公开的临床数据展示，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在具有泻流，尤其是胸腔积液或腹膜泻流的癌患者中显示显著的功效。临床研究显示，用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗导致泻流显著减少，从而手动穿刺及排出泻流不再必需，和泻流最终不再可检测。此是重要发现，由于患者严重遭受泻流和其必需频繁排出，而这二者与不适和疼痛关联，及造成并发症的风险。因此，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可用于在患EGFR阳性肿瘤形成疾病，尤其是癌的患者中治疗泻流，尤其是恶性泻流诸如恶性胸腔积液和恶性腹膜泻流。因此，本发明提供使用本发明的低岩藻糖抗-EGFR抗体治疗腹膜泻流，尤其是恶性腹水的新可能性。这些治疗选项对用其他抗-EGFR抗体无法治疗或无法持续治疗的患者尤其重要，因为它们具有例如突变的KRAS或未知的KRAS状态，不利的FcγIIIa受体同种异型(158F/F或158V/F)，针对其他抗-EGFR抗体的发展的过敏性反应和/或发展的不利的反应，尤其是3级或更高的，诸如不利的皮肤反应，在用其他抗-EGFR抗体治疗期间。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病，尤其是EGFR阳性癌，及治疗上述泻流。
[0175] 患泻流的患者的EGFR阳性肿瘤形成疾病优选选自：胰腺癌，卵巢癌，胃癌，食管癌，结肠癌，乳腺癌和肺癌。根据一实施方式，癌是转移癌。腹膜泻流常常与胰腺，卵巢，胃，食管或结肠癌关联，和胸腔积液常常与乳腺，肺，胃或食管癌关联。但是，患泻流的患者的EGFR阳性肿瘤形成疾病也可为本文所述的任何其他类型的癌，尤其是转移癌，包括本文所述的肾癌诸如肾细胞癌。肿瘤形成疾病尤其是影响间皮，尤其胸膜和/或腹膜。在特定实施方式中，肿瘤形成疾病包括在间皮，尤其是胸膜和/或腹膜上或中的肿瘤或转移瘤。在特定实施方式中，患泻流的患者具有胃和/或食管癌诸如胃癌或食管/胃连接处的腺癌。
[0176] 减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可用于作为单一治疗治疗。使用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体作为单一治疗具有可达到治疗效果而由于本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的有利的性质而可预期仅少数副作用的优势。当治疗进展的状态的患者诸如之前治疗的患者时这是优势，其中尽管治疗但所述疾病进展和/或患者患转移性癌，由于此患者组常常处于差的健康状况，由此，自进一步攻击性的治疗被排除。但是，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体也可用于联合治疗，其中所述癌用一种或更多抗-癌治疗剂诸如化学治疗剂或其他抗-癌抗体另外地治疗，以进一步改善患者的治疗性益处。由于本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在低剂量，和尤其是以相比常规高岩藻糖抗-EGFR抗体更低剂量有效，该组合治疗提供再次新和有用的治疗性选项。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体与一种或更多抗-癌剂诸如化学治疗剂和/或一种或更多不同于本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的其他抗体组合使用。在本文中，也可使用为高岩藻糖抗-EGFR抗体，尤其是西妥昔单抗建立的组合治疗，诸如例如与伊立替康的联合治疗。治疗也可与放射治疗和/或手术组合。
[0177] 可与减少岩藻糖的抗-EGFR抗体组合使用的抗-癌剂可选自任何化学治疗剂，尤其是知道有效用于治疗EGFR阳性癌的化学治疗剂。化学治疗剂的类型也依赖于待治疗的EGFR阳性癌。特别是，优选的是与用于西妥昔单抗( )的抗-癌剂组合。组合偶体可选自：紫杉烷诸如紫杉醇(泰素)，多西他赛(泰素帝)和SB-T-1214；环磷酰胺；
拉帕替尼；厄洛替尼；伊马替尼；帕唑帕尼；卡培他滨；阿糖胞苷；长春瑞滨；吉西他滨；蒽环类抗生素诸如柔红霉素，多柔比星，表柔比星，伊达比星，戊柔比星和米托蒽醌；芳香酶抑制物诸如氨鲁米特，睾内酯(Teslac)，阿那曲唑(Arimidex)，来曲唑(Femara)，依西美坦(Aromasin)，伏氯唑(Rivizor)，福美坦(Lentaron)，法倔唑(Afema)，4-羟雄烯二酮，
1,4,6-雄烷三烯-3,17-二酮(ATD)和4-雄烯-3,6,17-三酮(6-OXO)；拓扑异构酶抑制物诸如伊立替康，托泊替康，喜树碱，片螺素D，依托泊苷(VP-16)，替尼泊苷，多柔比星，柔红霉素，米托蒽醌，安吖啶，艾力替新，金精三羧酸和HU-331；基于铂的化学治疗剂诸如顺式-二氨二氯铂(II)(顺铂)，顺式-二氨(1,1-环丁烷二羧酸根合)铂(II)(卡铂)和[(1R,2R)-环己烷-1,2-二胺](乙二酸根合-O,O')铂(II)(奥沙利铂)，及抗代谢剂，尤其是抗叶酸剂诸如甲氨喋呤，培美曲塞，雷替曲塞和普拉曲沙，嘧啶类似物诸如氟尿嘧啶，吉西他滨，氟尿苷，5-氟尿嘧啶和替加氟-尿嘧啶，及嘌呤类似物，选择性雌激素受体调节物和雌激素受体下调物。如果作为联合治疗使用，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选与基于铂的化学治疗剂或拓扑异构酶抑制物诸如伊立替康组合使用，尤其是组合亚叶酸，氟尿嘧啶和奥沙利铂(FOLFOX)或组合亚叶酸，氟尿嘧啶和伊立替康(FOLFIRI)。此特别，如果减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在其结合行为和Fv介导的抗-肿瘤性质中基本上对应于西妥昔单抗。在进一步优选的实施方式，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体与选自下列的一种或更多化学治疗剂组合使用：顺铂，卡铂，奥沙利铂，伊立替康，氟尿嘧啶(5-FU)和卡培他滨。
在本文中，当在联合治疗中使用高岩藻糖抗-EGFR抗体，例如西妥昔单抗时，可使用与用于现有技术中的基本上相同的组合进程和施用方案。
拉帕替尼；厄洛替尼；伊马替尼；帕唑帕尼；卡培他滨；阿糖胞苷；长春瑞滨；吉西他滨；蒽环类抗生素诸如柔红霉素，多柔比星，表柔比星，伊达比星，戊柔比星和米托蒽醌；芳香酶抑制物诸如氨鲁米特，睾内酯(Teslac)，阿那曲唑(Arimidex)，来曲唑(Femara)，依西美坦(Aromasin)，伏氯唑(Rivizor)，福美坦(Lentaron)，法倔唑(Afema)，4-羟雄烯二酮，
1,4,6-雄烷三烯-3,17-二酮(ATD)和4-雄烯-3,6,17-三酮(6-OXO)；拓扑异构酶抑制物诸如伊立替康，托泊替康，喜树碱，片螺素D，依托泊苷(VP-16)，替尼泊苷，多柔比星，柔红霉素，米托蒽醌，安吖啶，艾力替新，金精三羧酸和HU-331；基于铂的化学治疗剂诸如顺式-二氨二氯铂(II)(顺铂)，顺式-二氨(1,1-环丁烷二羧酸根合)铂(II)(卡铂)和[(1R,2R)-环己烷-1,2-二胺](乙二酸根合-O,O')铂(II)(奥沙利铂)，及抗代谢剂，尤其是抗叶酸剂诸如甲氨喋呤，培美曲塞，雷替曲塞和普拉曲沙，嘧啶类似物诸如氟尿嘧啶，吉西他滨，氟尿苷，5-氟尿嘧啶和替加氟-尿嘧啶，及嘌呤类似物，选择性雌激素受体调节物和雌激素受体下调物。如果作为联合治疗使用，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选与基于铂的化学治疗剂或拓扑异构酶抑制物诸如伊立替康组合使用，尤其是组合亚叶酸，氟尿嘧啶和奥沙利铂(FOLFOX)或组合亚叶酸，氟尿嘧啶和伊立替康(FOLFIRI)。此特别，如果减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在其结合行为和Fv介导的抗-肿瘤性质中基本上对应于西妥昔单抗。在进一步优选的实施方式，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体与选自下列的一种或更多化学治疗剂组合使用：顺铂，卡铂，奥沙利铂，伊立替康，氟尿嘧啶(5-FU)和卡培他滨。
在本文中，当在联合治疗中使用高岩藻糖抗-EGFR抗体，例如西妥昔单抗时，可使用与用于现有技术中的基本上相同的组合进程和施用方案。
[0178] 此外，也可将治疗性抗体用作减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的组合偶体。其可为不同于减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的癌治疗中有用的任何抗体。尤其是，其他抗体被批准用于治疗癌，诸如美国Food and Drug Administration(FDA)，欧洲Medicines Agency(EMA,以前EMEA)和Bundesinstitut für Arzneimittel und Medizinprodukte(BfArM)。可用于与用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗联合的其他抗体的例是抗-EGFR抗体诸如帕木单抗(Vectibix)和尼妥珠单抗(Theraloc)(其特别可行，如果减少岩藻糖的抗-EGFR抗体与西妥昔单抗，和优选减少的岩藻糖西妥昔单抗抗体显示交叉-特异性)，抗-HER2抗体诸如曲妥珠单抗(赫赛汀)和培妥珠单抗；抗-VEGF抗体诸如贝伐珠单抗(阿瓦斯丁)；抗-CD52抗体诸如阿仑珠单抗(Campath)；抗-CD30抗体诸如brentuximab(Adcetris)；抗-CD33抗体诸如吉妥珠单抗(Mylotarg)；及抗-CD20抗体诸如利妥昔单抗(利妥昔单抗,Mabthera)，托西莫单抗(Bexxar)和替伊莫单抗(Zevalin)。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体与贝伐珠单抗组合使用。根据一实施方式，本发明的减少岩藻糖的抗体不与已知导致3级或更高的不利的皮肤反应的抗-EGFR抗体，诸如 帕尼单抗或GA201组合使
用。根据一实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体不与另一EGFR抑制物组合使用。
用。根据一实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体不与另一EGFR抑制物组合使用。
[0179] 如显示于例，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在治疗肾细胞癌中尤其有效。因此，在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体不需求及在特定实施方式中不与针对肾细胞癌的有治疗活性其他剂组合。
[0180] 本文提供的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体优选用于治疗EGFR阳性原发性肿瘤，EGFR阳性复发的肿瘤和/或该肿瘤的EGFR阳性转移，及尤其是对于在手术之前，期间或之后治疗及对于预防或治疗转移有用。如由本发明展示，用本文所述的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗也是对于治疗，包括防止，泻流，尤其是胸膜和腹膜泻流特别有用的。
[0181] 减少岩藻糖的抗-EGFR抗体尤其用于作为辅助的治疗治疗患者。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于作为新辅助治疗或以组合的新辅助-辅助的治疗治疗患者。此外，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于作为减轻性治疗治疗患者。
[0182] 如由实施例显示，用本文教导的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗是治疗成功的，和尤其是可导致肿瘤或转移缓解或疾病稳定。尤其是，在分析的患者中，观察到疾病的显著稳定，这尤其是对于基本上无或仅具有有限的进一步治疗性选项的重度预治疗的患者组是重要的成功。尤其是，该例显示，用本文所述的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗可导致肿瘤生长的抑制，肿瘤尺寸的减小，进一步转移的防止(相同或不同类型)和/或转移数或尺寸减小。治疗的还有益结果包括由肿瘤和/或转移导致的损伤减小和/或泻流减小，尤其是胸膜或腹部泻流。此外，观察到重要肿瘤标志物诸如CEA和CA19-9的显著减小。此对于治疗效果也是重要指标。由于用本发明的治疗获得的治疗效果，可达到无进展的存活和/或寿命增加，以及患者的一般健康状况的改善。
[0183] 在特定实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗原发性或复发的肿瘤和/或治疗转移，包括腹膜转移，胸膜转移，肺转移和/或肝转移瘤。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗由肿瘤或转移导致的损伤，尤其是间皮，尤其是胸膜和/或腹膜损伤。此外，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可用于治疗泻流，尤其是胸腔积液和/或腹膜泻流诸如腹水。
[0184] 用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗优选导致肿瘤生长的抑制和尤其是肿瘤尺寸的减小。此外，预防进一步转移的发生和/或它们的数由治疗降低。尤其是，用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗导致由肿瘤和/或一种或更多转移导致的损伤的减小。在特定实施方式中，治疗导致肿瘤标志物，优选肿瘤标志物CEA和/或CA19-9水平减少。用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗也可导致泻流体积，尤其是胸膜和/或腹部泻流减小。治疗优选导致无进展的存活增加；和/或寿命由此总体存活增加。
[0185] 如在本文展示，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体由几个不同作用机理发挥其治疗性活性。这些包括EGFR对肿瘤细胞的直接抑制，ADCC的诱导，基于粒细胞的免疫应答的诱导和基于巨噬细胞的免疫应答的诱导。在优选的实施方式中，EGFR阳性肿瘤形成疾病用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗涉及以下之一个或更多，2个或更多或优选全部：
[0186] (i)在EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞上抑制EGFR活化，尤其是经所述EGFR被减少岩藻糖的抗-EGFR抗体结合；
[0187] (ii)由与所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体诱导针对EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞的抗体-依赖性细胞毒性，尤其是经活化免疫细胞，优选然杀伤细胞；
[0188] (iii)诱导粒细胞，尤其是嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，以攻击和优选毁坏EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞，尤其是经粒细胞被与所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体结合及活化；和/或
[0189] (iv)诱导巨噬细胞以攻击和优选毁坏EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞，尤其是经巨噬细胞被与所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体活化。
[0190] 在优选的实施方式中，用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病涉及由结合到EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的粒细胞，尤其是嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的结合及活化；及诱导所述活化的粒细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。此外，用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病优选涉及由结合到EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的巨噬细胞的活化；及诱导所述活化的巨噬细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。
[0191] 在特定方面，本发明提供在CH2结构域具有糖基化位点的抗-EGFR抗体，其中附接于所述糖基化位点的聚糖的50％或更少携带岩藻糖(减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)，且其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性反应，用于在人患者中诱导针对EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞的粒细胞-驱动的免疫反应。粒细胞-驱动的免疫反应优选涉及粒细胞被与所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体结合及活化；及诱导所述活化的粒细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。粒细胞可例如是嗜中性粒细胞和/或嗜酸性粒细胞。
[0192] 在再一方面，本发明提供在CH2结构域具有糖基化位点的抗-EGFR抗体，其中附接于所述糖基化位点的聚糖的50％或更少携带岩藻糖(减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)，且其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性反应，用于在人患者中诱导针对EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞的巨噬细胞-驱动的免疫反应。巨噬细胞-驱动的免疫反应优选涉及巨噬细胞被与所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体活化；及诱导所述活化的巨噬细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。
[0193] 在特定实施方式中，用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗包括在施用第1剂量的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体之后细胞因子释放的诱导。细胞因子可选自：IFN-γ，IL-6，IL-8，TNF-α，IP-10和IL-1ra。优选全部这些细胞因子被释放。细胞因子尤其是释放到患者血流中，及在患者的血中可检测。在至少10％、优选至少20％，至少30％，至少40％或至少50％的治疗的患者中，一种或更多，优选全部这些细胞因子尤其是被释放。优选地，细胞因子的释放导致患者的血中所述细胞因子的浓度的至少2-倍，优选至少5-倍或至少10-倍的峰增加。
[0194] 在特定实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗人患者中的EGFR阳性肿瘤形成疾病，其中使用用于当使用所述其他抗-EGFR抗体时，在至少50％，尤其是至少60％或至少70％的患者中导致不利的皮肤反应的至少一种其他抗-EGFR抗体的治疗条件。尤其是，至少一种其他抗-EGFR抗体选自：高岩藻糖西妥昔单抗( )，帕尼单抗，扎芦木单抗和GA201。用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗优选在不多于
45％、优选不多于40％，更优选不多于35％的治疗的患者中导致不利的皮肤反应(包括任何级)。不利的皮肤反应尤其是皮疹和/或痤疮样疹。细节如上述。
45％、优选不多于40％，更优选不多于35％的治疗的患者中导致不利的皮肤反应(包括任何级)。不利的皮肤反应尤其是皮疹和/或痤疮样疹。细节如上述。
[0195] 在进一步实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗人患者中的肿瘤形成疾病，其中使用用于当使用所述其他抗-EGFR抗体时，在至少12％，尤其是至少15％或至少17％的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应的至少一种其他抗-EGFR抗体的治疗条件。尤其是，至少一种其他抗-EGFR抗体选自：高岩藻糖西妥昔单抗(
)，帕尼单抗，扎芦木单抗和GA201。用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗优选在不多于10％，不多于8％、优选不多于6％，更优选不多于5％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。不利的皮肤反应尤其是皮疹和/或痤疮样疹。
)，帕尼单抗，扎芦木单抗和GA201。用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗优选在不多于10％，不多于8％、优选不多于6％，更优选不多于5％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。不利的皮肤反应尤其是皮疹和/或痤疮样疹。
[0196] 治疗条件尤其是包括剂量方案，包括每剂量施用的抗体量，施剂间隔和/或施用类型；和/或治疗的患者的状况。优选地，在临床研究中测定不利的皮肤反应的百分率发生率。不利的皮肤反应的百分率发生率尤其是在对于本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体和其他抗-EGFR抗体的类似或相同的条件下测定，优选包括类似，重叠或相同的剂量范围，类似或相同的施用间隔和在龄，肿瘤级和肿瘤类型方面的类似患者组。
[0197] 根据特定实施方式，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗患EGFR阳性肿瘤形成疾病的人患者，对于该疾病，已显示，至少一种其他抗-EGFR抗体在多于50％，多于60％或多于70％的治疗的患者中显示不利的皮肤反应。该EGFR阳性肿瘤形成疾病的例和优选的实施方式在本文所述及参照相应公开。
[0198] 【在前治疗】
[0199] 本发明人发现，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体甚至在多种现有抗-癌治疗，尤其是用化学治疗剂和/或其他抗-癌抗体，尤其是抗-EGFR抗体诸如高岩藻糖抗-EGFR抗体(例如. )的预治疗失效的患者中显示高治疗性功效和临床成功。观察的效应是显著的，由于癌治疗更倾向于失败，其他疾病进展了，及尤其是如果转移进展了。在多种治疗之后，癌细胞常常高度突变，及由此更容易逃避治疗。此外，肿瘤负荷，即患者中肿瘤细胞数，随疾病进展而增加。在更高肿瘤细胞数，一些肿瘤细胞的杀灭可被余下肿瘤细胞增殖盖过。转移的发展也相同。因此，在重度预治疗的患者，和尤其是具有广泛扩散的转移的患者中减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的显示的治疗效果是显著的及预料不到的，及也为新患者组提供新治疗选项。
[0200] 考虑到这些发现，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体是特别用于在接收了一种或更多所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的之前治疗的患者中治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病，尤其是EGFR阳性癌。肿瘤形成疾病的在前治疗包括用一种或更多化学治疗剂，放射治疗(放射治疗)治疗，用一种或更多不同于减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的治疗性抗体治疗，尤其是用一种或更多高岩藻糖抗-EGFR抗体治疗，抗体，和2种或更多这些治疗的组合。在特定实施方式中，在前治疗包括用至少一种EGFR抑制物诸如抗-EGFR抗体治疗，其中所述患者遭受由所述EGFR抑制物导致的不利的皮肤反应。在特定实施方式中，用EGFR抑制物在前治疗需间断或中止，或EGFR抑制物的剂量需减少，因为所述不利的皮肤反应的发生，尤其是因为3或4级不利的皮肤反应的发生。在用EGFR抑制物诸如抗-EGFR抗体之前治疗期间发生的不利的皮肤反应可尤其是包括本文所述的皮疹和/或痤疮样皮疹和/或可为严重的不利的皮肤反应，尤其是3级或更高的，如本文所述。
[0201] 此外，EGFR阳性肿瘤形成疾病可已在用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗之前由手术治疗。根据一实施方式，患者的在前治疗涉及癌手术，优选手术移除至少一部分原发性肿瘤和/或转移瘤。
[0202] 在优选的实施方式中，在用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗之前使患者经历2种或更多，优选3种或更多在前抗-癌治疗。在前治疗可包含至少一种用高岩藻糖抗-EGFR抗体诸如尤其是西妥昔单抗作为单一治疗或组合其他治疗诸如一种或更多化学治疗剂和/或放射治疗和/或一种或更多针对不同于EGFR的抗原的其他抗体的治疗。在特定实施方式中，患者在用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗之前，已用至少2种，优选至少3种或至少4种不同抗-癌剂诸如化学治疗剂和/或治疗性抗体治疗。在前治疗后，一种或更多，尤其是全部在前治疗失效，及EGFR阳性癌再发或进展。
[0203] 但是，在特定实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗未用化学治疗剂或抗-癌抗体之前治疗的EGFR阳性肿瘤形成疾病。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体因此可用作第1-线治疗。
[0204] 【在前治疗中使用的高岩藻糖抗-EGFR抗体】
[0205] 在本发明的特定方面和实施方式中，在用EGFR抑制物，尤其是高岩藻糖抗-EGFR抗体治疗因为本文所述的由所述EGFR抑制物导致的不利的反应诸如不利的皮肤反应而中止之后，和/或在用在之前治疗中使用的高岩藻糖抗-EGFR抗体的失效的患者治疗之后，使用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。优选地，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体和高岩藻糖抗-EGFR基于相同的抗体，由此尤其是结合相同的抗原，及包含相同的CDR区，但在Fc区中它们的糖基化，尤其是在它们的岩藻糖的量上彼此不同。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体相比高岩藻糖抗-EGFR抗体具有更低岩藻糖的量，和能介导更强ADCC应答。此外，其优选具有更高量的上述bisGlcNAc。
[0206] 现有治疗中使用的高岩藻糖抗-EGFR抗体优选在其CH2结构域具有60％或更多，65％或更多，70％或更多，或75％或更多的量的岩藻糖。当在标准细胞系诸如CHO细胞或SP2/0细胞中产生抗体时，获得相应高岩藻糖抗体。例如在SP2/0细胞中产生的抗体西妥昔单抗( )是在附接于CH2结构域的碳水化合物链中具有多于70％岩藻糖的高
岩藻糖抗-EGFR抗体。在优选的实施方式中，在减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的CH2结构域中岩藻糖的量是至少20个百分点，优选至少30个百分点，更优选至少40个百分点，至少45个百分点或至少50个百分点，或甚至至少55个百分点少于高岩藻糖抗-EGFR抗体的CH2结构域中的岩藻糖的量。例如，如果高岩藻糖抗-EGFR抗体具有70％的岩藻糖含量，和减少岩藻糖的抗-EGFR抗体具有50个百分点更低的岩藻糖含量，则其具有20％的岩藻糖含量。
根据一实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体无岩藻糖基化及不包含岩藻糖。
岩藻糖抗-EGFR抗体。在优选的实施方式中，在减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的CH2结构域中岩藻糖的量是至少20个百分点，优选至少30个百分点，更优选至少40个百分点，至少45个百分点或至少50个百分点，或甚至至少55个百分点少于高岩藻糖抗-EGFR抗体的CH2结构域中的岩藻糖的量。例如，如果高岩藻糖抗-EGFR抗体具有70％的岩藻糖含量，和减少岩藻糖的抗-EGFR抗体具有50个百分点更低的岩藻糖含量，则其具有20％的岩藻糖含量。
根据一实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体无岩藻糖基化及不包含岩藻糖。
[0207] 在进一步实施方式中，现有治疗中使用的高岩藻糖抗-EGFR抗体在CH2结构域中具有10％或更少，7％或更少或5％或更少，更优选4％或更少的量的bisGlcNAc或不包含bisGlcNAc。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的CH2结构域中bisGlcNAc的量优选是相比高岩藻糖抗-EGFR抗体的CH2结构域中bisGlcNAc的量至少5个百分点，更优选至少7个百分点，最优选至少10个百分点更高。此外，高岩藻糖抗-EGFR抗体可包含80％或更少，70％或更少或65％或更少，尤其是60％或更少的量的半乳糖。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的半乳糖的量优选是相比高岩藻糖抗-EGFR抗体的半乳糖的量至少10个百分点更高，更优选至少15个百分点更高或至少20个百分点更高，最优选至少25个百分点更高。在特定实施方式中，高岩藻糖抗-EGFR抗体包含40％或更少，35％或更少或30％或更少，尤其是25％或更少的量的携带2个半乳糖单元的聚糖。减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的携带2个半乳糖单元的聚糖的量优选是相比高岩藻糖抗-EGFR抗体的携带2个半乳糖单元的聚糖的量至少15个百分点更高，更优选至少10个百分点更高或至少15个百分点更高，最优选至少20个百分点更高。
[0208] 高岩藻糖抗-EGFR抗体优选与减少岩藻糖的抗-EGFR抗体具有相同的抗体类型，及尤其是IgG抗体，优选IgG1抗体。优选地，高岩藻糖抗-EGFR抗体能与本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体特异性结合相同的表位，和/或与减少岩藻糖的抗-EGFR抗体显示交叉-特异性。在特定实施方式中，高岩藻糖抗-EGFR抗体具有与减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的对应氨基酸序列具有至少80％，至少90％或至少95％，更优选100％同一性的重链和/或轻链氨基酸序列。尤其是，重链CDR和/或轻链CDR的氨基酸序列与减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的CDR的对应氨基酸序列相同。在优选的实施方式中，用于预治疗的高岩藻糖抗-EGFR抗体是抗体西妥昔单抗( )或与抗体西妥昔单抗显示交叉-特异性。
[0209] 根据一实施方式，用于预治疗的高岩藻糖抗-EGFR抗体能阻断配体结合和/或EGFR的二聚化，尤其是与表皮生长因子受体家族的其他成员诸如HER2，HER3和HER4的异源EGFR的二聚化。
[0210] 根据一实施方式，用于预治疗的高岩藻糖抗-EGFR抗体特异性结合不同于减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的表位的EGFR表位。在此实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体和高岩藻糖抗-EGFR抗体具有不同CDR序列。在特定实施方式中，高岩藻糖抗-EGFR抗体是抗体帕尼单抗(Vectibix)或与抗体帕尼单抗显示交叉-特异性。
[0211] 高岩藻糖抗-EGFR抗体可为完全抗体或抗体的片段或衍生物。预治疗中使用的高岩藻糖抗-EGFR抗体可缀合于其他治疗剂。适合的治疗剂的例是放射性核素和化学治疗剂，尤其是本文所述的化学治疗剂，例如美坦辛。根据一实施方式，之前治疗中使用的高岩藻糖抗-EGFR抗体无缀合物。用高岩藻糖抗-EGFR抗体在前治疗可为单一治疗或与一种或更多化学治疗剂和/或一种或更多其他抗体和/或放射治疗一起联合治疗。适合的化学治疗剂和其他抗体是在本文别处所述的那些。
[0212] 如显示于实施例，根据本发明使用的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体相比对应高岩藻糖抗-EGFR抗体具有更高治疗性功效。也观察到，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的治疗性功效相比对应高岩藻糖抗-EGFR抗体的治疗性功效仍是更高，甚至当减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以相同的剂量但相比高岩藻糖抗-EGFR抗体更低频度施用时，和/或当减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以相同的频度但相比高岩藻糖抗-EGFR抗体更低剂量施用时。因此，有利地，当使用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体时，剂量可降低，及治疗循环可延长。此外，在临床研究中观察到显著地少和更弱不利的皮肤反应，这也是重要优势。由于用现有技术抗-EGFR抗体观察到的不利的皮肤反应是剂量相关的，本发明的抗-EGFR抗体的有利的特征也允许增加剂量，如果需要。因此，当使用本发明的抗-EGFR抗体时，可使用的剂量范围增宽，这对于治疗是重要的。
[0213] 【在前治疗中使用的其他抗体】
[0214] 根据一实施方式，人患者已用抗-EGFR抗体之前治疗，其中因为在治疗期间发生的不利的皮肤反应，尤其是3级或更高的不利的皮肤反应而所述之前治疗间断，终止或其中所述抗-EGFR抗体的剂量需减少。根据一实施方式，人患者已用抗-EGFR抗体之前治疗，其中所述用抗-EGFR抗体的之前治疗，因为针对所述抗-EGFR抗体发生的不利的皮肤反应，尤其是3或4级的不利的皮肤反应而不或无法持续。已知道在显著数的患者中导致该严重的皮肤反应的抗-EGFR抗体包括但不限于 GA201，帕尼单抗和扎芦木单抗。
[0215] 根据一实施方式，在前治疗中使用至少一种不同于减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的治疗性抗体。相应抗体也可包括针对其他抗原和/或不特异性结合EGFR的抗体。可已用于预治疗的这些其他抗体优选特异性结合存在于肿瘤细胞及优选不存在于非-肿瘤细胞或以更低量存在于非-肿瘤细胞或在抗体不可接近的位点的抗原。优选地，其他抗体被批准用于癌治疗，诸如美国Food and Drug Administration(FDA)，欧洲Medicines Agency(EMA,以前EMEA)和Bundesinstitut für Arzneimittel und Medizinprodukte(BfArM)。其他抗体的优选的例是抗-HER2抗体诸如曲妥珠单抗(赫赛汀)和培妥珠单抗(Omnitarg)；抗-VEGF抗体诸如贝伐珠单抗(阿瓦斯丁)；抗-CD52抗体诸如阿仑珠单抗(Campath)；
抗-CD30抗体诸如brentuximab(Adcetris)；抗-CD33抗体诸如吉妥珠单抗(Mylotarg)；及抗-CD20抗体诸如利妥昔单抗(利妥昔单抗,Mabthera)，托西莫单抗(Bexxar)和替伊莫单抗(Zevalin)。
抗-CD30抗体诸如brentuximab(Adcetris)；抗-CD33抗体诸如吉妥珠单抗(Mylotarg)；及抗-CD20抗体诸如利妥昔单抗(利妥昔单抗,Mabthera)，托西莫单抗(Bexxar)和替伊莫单抗(Zevalin)。
[0216] 抗体还可为完全抗体或抗体的片段或衍生物。在一实施方式中，抗体还缀合于其他治疗剂。该治疗剂的例是放射性核素和化学治疗剂，尤其是本文所述的化学治疗剂。根据一实施方式，用于在前治疗的其他抗体无缀合物。
[0217] 【在前治疗中使用的化学治疗剂】
[0218] 在特定实施方式中，在前治疗包括用一种或更多化学治疗剂或用2种或更多化学治疗剂的组合治疗，任选地组合一种或更多不同于减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的治疗性抗体。化学治疗剂可为任何化学治疗剂和可选自：环磷酰胺；拉帕替尼；卡培他滨；阿糖胞苷；长春瑞滨；吉西他滨；美坦辛；蒽环类抗生素诸如柔红霉素，多柔比星，表柔比星，伊达比星，戊柔比星和米托蒽醌；紫杉烷诸如紫杉醇(泰素)，多西他赛(泰素帝)和SB-T-1214；
芳香酶抑制物诸如氨鲁米特，睾内酯(Teslac)，阿那曲唑(Arimidex)，来曲唑(Femara)，依西美坦(Aromasin)，伏氯唑(Rivizor)，福美坦(Lentaron)，法倔唑(Afema)，4-羟雄烯二酮，1,4,6-雄烷三烯-3,17-二酮(ATD)和4-雄烯-3,6,17-三酮(6-OXO)；拓扑异构酶抑制物诸如伊立替康，托泊替康，喜树碱，片螺素D，依托泊苷(VP-16)，替尼泊苷，多柔比星，柔红霉素，米托蒽醌，安吖啶，艾力替新，金精三羧酸和HU-331；基于铂的化学治疗剂诸如顺式-二氨二氯铂(II)(顺铂)，顺式-二氨(1,1-环丁烷二羧酸根合)铂(II)(卡铂)和[(1R,2R)-环己烷-1,2-二胺](乙二酸根合-O,O')铂(II)(奥沙利铂)；烷化剂诸如达卡巴嗪；及抗代谢剂，尤其是抗叶酸剂诸如甲氨喋呤，培美曲塞，雷替曲塞和普拉曲沙，嘧啶类似物诸如氟尿嘧啶，吉西他滨，氟尿苷，5-氟尿嘧啶和替加氟-尿嘧啶，及嘌呤类似物。尤其是，在前治疗包括一种或更多用不同化学治疗剂的组合诸如亚叶酸和氟尿嘧啶和奥沙利铂(FOLFOX)的组合，或亚叶酸和氟尿嘧啶和伊立替康(FOLFIRI)的组合的治疗。在特定实施方式中，这些化学治疗剂的组合还与一种或更多上述抗-癌抗体，尤其是高岩藻糖抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗( )或抗-VEGF抗体诸如贝伐珠单抗(阿瓦斯丁)组合。
芳香酶抑制物诸如氨鲁米特，睾内酯(Teslac)，阿那曲唑(Arimidex)，来曲唑(Femara)，依西美坦(Aromasin)，伏氯唑(Rivizor)，福美坦(Lentaron)，法倔唑(Afema)，4-羟雄烯二酮，1,4,6-雄烷三烯-3,17-二酮(ATD)和4-雄烯-3,6,17-三酮(6-OXO)；拓扑异构酶抑制物诸如伊立替康，托泊替康，喜树碱，片螺素D，依托泊苷(VP-16)，替尼泊苷，多柔比星，柔红霉素，米托蒽醌，安吖啶，艾力替新，金精三羧酸和HU-331；基于铂的化学治疗剂诸如顺式-二氨二氯铂(II)(顺铂)，顺式-二氨(1,1-环丁烷二羧酸根合)铂(II)(卡铂)和[(1R,2R)-环己烷-1,2-二胺](乙二酸根合-O,O')铂(II)(奥沙利铂)；烷化剂诸如达卡巴嗪；及抗代谢剂，尤其是抗叶酸剂诸如甲氨喋呤，培美曲塞，雷替曲塞和普拉曲沙，嘧啶类似物诸如氟尿嘧啶，吉西他滨，氟尿苷，5-氟尿嘧啶和替加氟-尿嘧啶，及嘌呤类似物。尤其是，在前治疗包括一种或更多用不同化学治疗剂的组合诸如亚叶酸和氟尿嘧啶和奥沙利铂(FOLFOX)的组合，或亚叶酸和氟尿嘧啶和伊立替康(FOLFIRI)的组合的治疗。在特定实施方式中，这些化学治疗剂的组合还与一种或更多上述抗-癌抗体，尤其是高岩藻糖抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗( )或抗-VEGF抗体诸如贝伐珠单抗(阿瓦斯丁)组合。
[0219] 【包含减少岩藻糖的抗-EGFR抗体和剂量的组合物】
[0220] 减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可包含在药物组合物中。优选所述药物组合物适宜于静脉内注射。其可为包含抗体的水溶液，或可用于制备适合于静脉内注射的组合物的组合物，例如冷冻干燥的抗体组合物。包含减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的组合物可另外地包含一种或更多选自下列的其他组分：溶剂，稀释剂和赋形剂。组合物的组分优选是全部药学可接受的。组合物可为固体或流体组合物，尤其是优选水溶液，乳剂或悬浮液或冷冻干燥的粉。用于将抗体制备为药物组合物的制剂在现有技术中熟知，由此，不需求任何详述。
[0221] 组合物优选以1mg/ml～100mg/ml，更优选2mg/ml～50mg/ml，2.5mg/ml～30mg/ml或3mg/ml～25mg/ml范围，尤其是约5mg/ml或约15mg/ml的浓度包含减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
[0222] 减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可由任何适合的施用途径，优选由静脉内注射施用于患者。在优选的实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以0.5～50mg，2～40mg，4～30mg，优选6～25mg，更优选8～20mg/kg患者体重范围的剂量施用。在本文中发现，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可以甚至当作为单一治疗给出时仍引发治疗效果的低剂量施用。因此，有利地可使用更低剂量。但是，由于改善的治疗性特征和尤其是显著地减少的和仅弱的不利的反应诸如尤其是不利的皮肤反应发生率，也可使用高剂量。由此，与通常为抗-EGFR抗体诸如 使用的那些相同的或甚至更高的剂量也是适合的。因此，可应用的剂量范围显著地增宽。尤其是，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以每周750mg或更少，优选每周
700mg或更少，每周600mg或更少，每周500mg或更少，每周400mg或更少，每周650mg或更少，更优选每周300mg或更少，每周250mg或更少，每周200mg或更少，每周175mg或更少，最优选每周150mg或更少的量施用。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以
10mg～2500mg，50mg～2250mg，优选100mg～2000mg，150mg～1900mg，175mg～1800mg，
200mg～ 1750mg，225mg～ 1700mg，250mg～ 1600mg，275mg～ 1500mg，300mg～ 1400mg，
325mg ～ 1300mg，350mg ～ 1200mg，375mg ～ 1100mg，400mg ～ 1000mg，425mg ～ 950mg，
450mg～900mg，475mg～850mg和500mg～800mg范围内的每次施用剂量施用。由于由本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体诱导的不利的皮肤反应和其他不利的反应的低发生率，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体也可以更高剂量，尤其是以500mg～2000mg，优选600mg～1500mg或700mg～1400mg范围的剂量，尤其以800mg或更多，优选900mg或更多或1000mg或更多
2
的剂量施用。有时，代替绝对剂量而将剂量表示为mg/m身体表面。在此情况中，上述的每
2 2
次施用的绝对剂量除以2，以指示剂量/m人身体表面积粗略是约2m 。
700mg或更少，每周600mg或更少，每周500mg或更少，每周400mg或更少，每周650mg或更少，更优选每周300mg或更少，每周250mg或更少，每周200mg或更少，每周175mg或更少，最优选每周150mg或更少的量施用。在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以
10mg～2500mg，50mg～2250mg，优选100mg～2000mg，150mg～1900mg，175mg～1800mg，
200mg～ 1750mg，225mg～ 1700mg，250mg～ 1600mg，275mg～ 1500mg，300mg～ 1400mg，
325mg ～ 1300mg，350mg ～ 1200mg，375mg ～ 1100mg，400mg ～ 1000mg，425mg ～ 950mg，
450mg～900mg，475mg～850mg和500mg～800mg范围内的每次施用剂量施用。由于由本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体诱导的不利的皮肤反应和其他不利的反应的低发生率，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体也可以更高剂量，尤其是以500mg～2000mg，优选600mg～1500mg或700mg～1400mg范围的剂量，尤其以800mg或更多，优选900mg或更多或1000mg或更多
2
的剂量施用。有时，代替绝对剂量而将剂量表示为mg/m身体表面。在此情况中，上述的每
2 2
次施用的绝对剂量除以2，以指示剂量/m人身体表面积粗略是约2m 。
[0223] 优选地，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以1天～4周，优选2天～3周，更优选3天～2周或5天～9天范围内的间隔施用，及尤其是每周或每隔一周施用。根据一实施方式，治疗包含以相比随后剂量更高的初始剂量给患者施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。例如，初始剂量包含1.1～10倍正常剂量，上述例如，优选1.2～2倍正常剂量或1.3～1.6倍正常剂量。关于此，术语"正常剂量"指称在初始剂量之后施用的随后剂量。优选地，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于长期治疗。在优选的实施方式中，用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗患者包括至少4次，优选至少5次，至少6次，至少7次，至少8次，至少10次，至少12次，至少15次，至少20次或至少25次施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。患者尤其是用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗至少4周，优选至少5周，至少6周，至少7周，至少8周，至少10周，至少3个月，至少4个月，至少6个月，至少9个月或至少1年。治疗由此旨在用于长期治疗。
[0224] 在特定实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以1周间隔，用800mg～1200mg，尤其是950mg～1050mg范围内诸如约990mg的初始剂量，及用500mg～950mg，尤其是自650mg～800mg范围内诸如约720mg的随后剂量施用。在特定实施方式中，此剂量范围也可用于每隔一周施用。在另一实施方式中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以2周间隔，以1100mg～1700mg，优选1300mg～1450mg范围内，尤其是约1370mg的各剂量施用。
[0225] 通过注射，包括输注的抗体施用，可在患者的身体中导致不利的反应，尤其是输注相关的反应(IRR)。相应效应也可当施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体时发生。为了减少相应输注相关的反应，可将减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的治疗与用于治疗，减小或防止该输注相关的反应的量度和/或手段组合。
[0226] 根据本发明的一实施方式，IRR的防止或减小通过减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的治疗与具有镇痛和/或解热性质的剂的麻醉前用药的组合达到。所述剂可具有一个或更多以下特征：其是非-类阿片镇痛药，其是非-水杨酸镇痛药，其是苯胺镇痛药/苯胺衍生物，其是乙酰苯胺衍生物，其是氨基苯酚衍生物，其是乙酰基氨基酚，其是环-加氧酶抑制物和/或其是前列腺素抑制物。优选将N-(4-羟苯基)乙酰胺(对乙酰胺基酚或醋氨酚)用作镇痛和/或解热剂。剂例如静脉内或经口施用。
[0227] 由发明人发现，该麻醉前用药显著地减少与减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的施用关联的IRR。因此在本发明的一方面，使用此麻醉前用药来预防或治疗通过施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体导致的IRR。例示输注相关的反应是发热，水肿诸如血管性水肿，关节痛及寒战。
[0228] 具有镇痛和/或解热性质的剂优选以250mg～1500mg，至少500mg，优选至少700mg，至少800mg，至少900mg，更优选1000mg剂量施用。其优选在施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体之前，优选以一个单剂量或以2个或更多，优选2个分离的剂量施用。
[0229] 在优选的实施方式中，所述剂在施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体之前5min～6h，优选10min～4h，15min～3h或20min～2h，更优选30min～90min，尤其是1小时，尤其是作为单剂量施用。
[0230] 在特定优选的实施方式中，所述剂以2个剂量施用，然而第1剂量在施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体之前8h～48h，优选12h～36h或16h～24h，尤其是一晚(即约12小时之前)施用。第2剂量在施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体之前5min～6h，优选10min～4h，15min～3h或20min～2h，更优选30min～90min，尤其是1小时施用。在特定优选的实施方式中，所述剂的第1剂量在施用抗体之前一晚施用，和第2剂量在施用抗体之前1小时给予。优选两个剂量是1000mg的剂。此施用方案的特定优选的剂是N-(4-羟苯基)乙酰胺。
[0231] 在优选的实施方式中，具有镇痛和/或解热性质的剂仅在第1次施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体之前，和任选地另外地在减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的任何施用之前，在输注相关的反应被减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的之前施用诱导之后施用。在进一步实施方式中，所述剂在对减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的施用的输注相关的反应发生后施用。通过局限数的针对IRR的麻醉前用药，由减少岩藻糖的抗-EGFR抗体诱导的所述麻醉前用药对ADCC的功效的潜在负面效应可被最小化。
[0232] 具有镇痛和/或解热性质的剂可施用组合一种或更多甾，优选糖皮质类固醇，诸如皮质醇，乙酸可的松，cloprenol，泼尼松，泼尼松龙，地夫可特，氟可龙，曲安西龙，倍他米松或地塞米松，尤其是甲泼尼龙。甾优选在施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体之前5min～4h，更优选地，15min～1h，最优选约30min施用。甾优选以25～500mg，更优选50～250mg或100～150mg的剂量，尤其是以约125mg的剂量施用。
[0233] 在本发明的特定优选的实施方式中，患者用抗-EGFR抗体的治疗如下与用N-(4-羟苯基)乙酰胺和任选地甲泼尼龙麻醉前用药组合，以便有效减少或防止IRR：
[0234] (a)在施用抗体之前一晚1000mg的N-(4-羟苯基)乙酰胺的第1剂量，
[0235] (b)在施用抗体之前1小时1000mg的N-(4-羟苯基)的第2剂量，及
[0236] (c)任选地在施用抗体之前30min一个剂量的125mg甲泼尼龙。
[0237] 在此方案中，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以上述剂量施用；参照以上公开。
[0238] 在特定实施方式中，无甾被施用，优选为减少或预防通过本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的施用导致的输注相关的反应施用无甾和无抗组胺剂。如上所述，因为本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的有利的糖基化特征，未观察到过敏性反应，尤其是IgE介导的。未观察到显著组胺或ECP释放。根据一实施方式，输注相关的反应仅用具有镇痛和/或解热性质的剂治疗或预防。
[0239] 在另一方面，本发明提供具有镇痛和/或解热性质的剂，其用于治疗或预防通过施用抗-EGFR抗体导致的输注相关的反应。抗-EGFR抗体优选是本文定义的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。本发明的其他方面的特征和实施方式因此应用于本发明的此方面。
[0240] 另一减少输注-相关的反应的方法是使用改善的施用方案。如由本文提供的实验数据展示，输注-相关的反应可有效防止通过将本发明的第1剂量的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体分为2部分及将所述部分剂量依次施用给患者，优选在短时帧之内。
[0241] 在特定优选的实施方式中，第1剂量的本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体被作为2个或更多分离的部分剂量，尤其是作为2个分离的部分剂量施用于患者。优选第1剂量的全部部分剂量在3天之内，优选在2天之内，尤其是在36小时之内施用给患者。在优选的实施方式中，将包含150mg或更少，优选100mg或更少，更优选80mg或更少，尤其是约60mg的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的第1部分剂量施用给患者。第1部分剂量优选经输注，尤其是静脉内输注经至少1小时，优选至少1.5小时，更优选至少2小时，尤其是约2.5小时的时期施用给患者。在优选的实施方式中，第1剂量被分为2个分离的部分剂量。优选地，第2部分剂量包含未包含在第1部分剂量的余下量的第1剂量的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。第2部分剂量优选经输注，尤其是静脉内输注，在10小时或更少，优选8小时或更少，更优选6小时或更少时期之内，尤其是约5.5小时之内给患者施用。第1剂量的第1和第2部分剂量优选在2个连日施用。
[0242] 在特定实施方式中，尤其是其中使用以上施用方案，无甾被施用，优选无甾和无抗组胺剂被施用，更优选也无具有镇痛和/或解热性质的剂被施用而用于减小或防止输注相关的反应。尤其是，输注相关的反应仅通过使用改善的施用方案减少或防止。此尤其是有利的，由于在特定情况中，其可展示，针对IRR的麻醉前用药，尤其是用甾和/或抗组胺剂和/或具有镇痛和/或解热性质的剂麻醉前用药可减少本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的治疗性活性。因此，在特定有利的实施方式中，患者不为减少或防止通过本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的施用导致的输注相关的反应而接收麻醉前用药。在另一实施方式中，将改善的施用方案与上述镇痛和/或解热剂的施用组合。
[0243] 使用上述麻醉前用药和尤其是改善的施用方案，输注相关的反应(IRR)可减少。例如，在用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体的临床研究中，仅约50％的患者显示IRR，其主要局限于抗体的第1输注及未再现。观察的IRR也仅为1或2级。此外，临床研究中见的IRR至今未包括任何过敏性反应。
[0244] 【本发明的特定实施方式】
[0245] 本发明的特定和特别优选的实施方式会在以下再次描述：
[0246] 在特定实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体具有以下特征：
[0247] (i)其包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:7或9的氨基酸序列或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列及包含CDR1，其具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列，及CDR3，其具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列；
[0248] (ii)其包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8或10的氨基酸序列或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列及包含，CDR1，其具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列，及CDR3，其具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列；
[0249] (iii)其在CH2结构域中具有以下糖基化特征：
[0250] (a)30％或更少、优选25％或更少的携带岩藻糖残基的聚糖的相对量；
[0251] (b)至少5％、优选至少10％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
[0252] (c)至少50％、优选至少60％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；以及[0253] (d)至少10％、优选至少15％的携带2个半乳糖的聚糖的相对量；
[0254] (e)至少1％、优选至少2％的携带至少1个唾液酸的聚糖的相对量；以及[0255] (f)任选地至少0.5％、优选至少1％的携带2个唾液酸的聚糖的相对量；
[0256] (iv)其任选地在VH结构域内包含糖基化位点，其中如果所述糖基化位点存在，其具有以下糖基化特征：
[0257] (a)40％或更少、优选35％或更少的携带岩藻糖残基的聚糖的相对量；
[0258] (b)至少35％、优选至少40％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
[0259] (c)至少85％、优选至少90％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；以及[0260] (d)至少70％、优选至少80％的携带至少2个半乳糖的聚糖的相对量；
[0261] (e)至少50％、优选至少60％的携带至少1个唾液酸的聚糖的相对量；
[0262] (f)至少35％、优选至少45％的携带至少2个唾液酸的聚糖的相对量。
[0263] 在优选的实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以1周间隔，用900mg～1100mg范围的初始剂量，及用600mg～850mg范围的随后剂量施用。在另一实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体以2周间隔，用1250mg～1500mg范围的各剂量施用。
[0264] 在特别优选的实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体当以每周至少240mg的量施用至少6周时，在不多于10％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应，和/或在不多于35％的治疗的患者中导致痤疮样皮疹。
[0265] 在特定实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗下列任何人患者：
[0266] (i)已之前用西妥昔单抗( )，帕尼单抗( )和/或GA201治疗，在患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应；
[0267] (ii)针对西妥昔单抗( )，帕尼单抗( )和/或GA201具有知道的3级或更高的严重的不利的皮肤反应；
[0268] (iii)在用西妥昔单抗( )，帕尼单抗( )和/或GA201治疗期间具有增加的发展3级或更高的严重的不利的反应的风险；
[0269] (iv)已之前用抗-EGFR抗体治疗，且其中因为在所述治疗期间发生的针对所述抗-EGFR抗体的不利的皮肤反应而所述之前治疗被间断，终止或其中所述抗-EGFR抗体的剂量需减少，其中所述抗-EGFR抗体是西妥昔单抗( )，帕尼单抗( )或GA201；
[0270] (v)已之前用抗-EGFR抗体治疗，且其中所述用抗-EGFR抗体的之前治疗因为针对所述抗-EGFR抗体发生的不利的皮肤反应而不或无法持续，其中所述抗-EGFR抗体是西妥昔单抗( )，帕尼单抗( )或GA201。
[0271] 在特定实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于在人患者中治疗EGFR阳性肾细胞癌，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能在患者中诱导抗体-依赖性细胞毒性反应；且其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于10％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应和/或在不多于35％的治疗的患者中导致痤疮样皮疹。在进一步实施方式中，本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于在具有EGFR阳性肿瘤形成疾病的人患者中治疗恶性胸膜或腹膜泻流，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能在患者中诱导抗体-依赖性细胞毒性反应；且其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于10％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应和/或在不多于35％的治疗的患者中导致痤疮样皮疹。在特定实施方式中，在用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗之前，患者之前用导致该不利的皮肤反应的抗-EGFR抗体，诸如例如 治疗，和在前治疗因为针对所述抗-EGFR抗体的不利的皮肤反应而被终止或间断。
[0272] 根据一实施方式，提供在CH2结构域具有糖基化位点的抗-EGFR抗体，其中附接于所述糖基化位点的聚糖的50％或更少携带岩藻糖(减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)，且其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性反应，用于治疗人患者中的EGFR阳性肿瘤形成疾病，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于10％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。根据一实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于5％的治疗的患者中导致3级或更高的痤疮样皮疹。
[0273] 根据一实施方式，所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗患EGFR阳性肿瘤形成疾病的人患者，所述疾病已显示，至少一种其他抗-EGFR抗体在多于50％的治疗的患者中显示不利的皮肤反应和/或在至少12％的患者中显示3级或更高的不利的皮肤反应。根据一实施方式，所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗人患者中的EGFR阳性肿瘤形成疾病，其中使用的治疗条件对于至少一种其他抗-EGFR抗体而言，当使用所述其他抗-EGFR抗体时，在至少50％的患者中导致不利的皮肤反应，或当使用所述其他抗-EGFR抗体时，在至少12％的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。根据一实施方式，所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗已之前用至少一种在所述患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应的EGFR抑制物治疗的人患者。EGFR抑制物可为抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗()，帕尼单抗( )和GA201。
[0274] EGFR阳性肿瘤形成疾病可为选自下列的EGFR阳性癌：结肠癌，直肠癌，非-小细胞肺癌，鳞状细胞肺癌，肾细胞癌，三重阴性乳腺癌，头和颈鳞状细胞癌，食管腺癌，胃腺癌，胃食管连接处腺癌，子宫内膜癌或肉瘤，子宫颈癌。
[0275] 根据一实施方式，所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗人患者中的肾癌，其中，优选，肾癌选自透明细胞肾细胞癌和乳头肾细胞癌。
[0276] 根据一实施方式，所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗具有EGFR阳性肿瘤形成疾病的人患者中的恶性泻流。泻流可为胸腔积液或腹膜泻流，且其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病是胃癌或食管/胃连接处的腺癌。
[0277] 根据优选的实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在CH2结构域的糖基化位点包含全部以下糖基化特征：
[0278] (i)20％～0％、优选15％～3％的携带岩藻糖残基的聚糖的相对量；
[0279] (ii)至少5％、优选至少10％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
[0280] (iii)至少50％、优选至少60％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；
[0281] (iv)至少10％、优选至少15％的携带2个半乳糖的聚糖的相对量；
[0282] (v)至少1％、优选至少2％的携带至少1个唾液酸、尤其是NeuAc的聚糖的相对量；
[0283] (vi)至少0.5％、优选至少1％的携带2个唾液酸、尤其是NeuAc的聚糖的相对量；以及
[0284] (vii)其不包含Galα1,3-Gal。
[0285] 此外，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可在重链可变区VH内包含另外的糖基化位点和可在VH结构域的糖基化位点包含全部以下糖基化特征：
[0286] (i)40％或更少、优选35％或更少的携带岩藻糖残基的聚糖的相对量；
[0287] (ii)至少35％、优选至少40％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
[0288] (iii)至少85％、优选至少90％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；
[0289] (iv)至少70％、优选至少80％的携带至少2个半乳糖的聚糖的相对量；
[0290] (v)至少50％、优选至少60％的携带至少1个唾液酸的聚糖的相对量；
[0291] (vi)至少35％、优选至少45％的携带至少2个唾液酸的聚糖的相对量。
[0292] 上述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体可包含重链可变区，其包含具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR1，具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR2，及具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR3；及可包含轻链可变区，其包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR1，具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR2，及具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR3。
[0293] 根据一实施方式，EGFR阳性肿瘤形成疾病包含K-RAS突变。
[0295] 根据特定实施方式，用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病涉及
[0296] (i)粒细胞，尤其是嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，被与EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体结合及活化；及诱导所述活化的粒细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞；和/或
[0297] (ii)巨噬细胞被与EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体活化；及诱导所述活化的巨噬细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。
[0298] 根据特定实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗下列人患者
[0299] (i)针对导致该严重的不利的皮肤反应的EGFR抑制物具有知道的3级或更高的严重的不利的皮肤反应；
[0300] (ii)在用尤其是在多于10％的患者中导致3级或更高的严重的不利的皮肤反应的EGFR抑制物治疗期间具有增加的发展3级或更高的严重的不利的反应的风险；
[0301] (iii)已之前用EGFR抑制物治疗，且其中所述之前治疗因为在所述治疗期间发生的针对所述EGFR抑制物的不利的皮肤反应而被间断，终止或其中所述EGFR抑制物的剂量需减少；和/或
[0302] (iv)已之前用EGFR抑制物治疗，且其中所述之前用EGFR抑制物治疗因为针对所述EGFR抑制物发生的不利的皮肤反应而不或无法持续。
[0303] 根据特定实施方式，患者在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是苯丙氨酸纯合(FcγRIIIa-158F/F)，患者在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是缬氨酸和苯丙氨酸杂合(FcγRIIIa-158V/F)或其中所述患者在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是缬氨酸纯合(FcγRIIIa-158V/V)，且其中，优选，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于与所述抗体的FcγRIIIa同种异型无关地治疗患者。
[0304] 根据特定实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗在之前治疗中发展了针对抗-EGFR抗体的过敏性反应的人患者和/或用于治疗具有既有Gal-Gal IgE抗体的人患者。
[0305] 根据特定实施方式，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗已之前用一种或更多抗-癌治疗治疗且其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病在所述之前治疗之后抵抗或进展的人患者。
[0306] 本发明尤其是属于以下实施方式：
[0307] 实施方式1：在CH2结构域具有糖基化位点的抗-EGFR抗体，其中附接于所述糖基化位点的聚糖的50％或更少携带岩藻糖(减少岩藻糖的抗-EGFR抗体)，且其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体能诱导抗体-依赖性细胞毒性反应，用于治疗人患者中的EGFR阳性肿瘤形成疾病，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于10％的治疗的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。
[0308] 实施方式1的实施方式2：抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在不多于5％的治疗的患者中导致3级或更高的痤疮样皮疹。
[0309] 实施方式1或2的实施方式3：抗-EGFR抗体，用于治疗患EGFR阳性肿瘤形成疾病的人患者，所述疾病已显示，至少一种其他抗-EGFR抗体在多于50％的治疗的患者中显示不利的皮肤反应和/或在至少12％的患者中显示3级或更高的不利的皮肤反应。
[0310] 实施方式4：实施方式1～3之一项或多项的抗-EGFR抗体，用于治疗人患者中的EGFR阳性肿瘤形成疾病，其中使用这样的治疗条件，该条件对于至少一种其他抗-EGFR抗体而言，当使用所述其他抗-EGFR抗体时，在至少50％的患者中导致不利的皮肤反应，或当使用所述其他抗-EGFR抗体时，在至少12％的患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应。
[0311] 实施方式5：实施方式1～4之一项或多项的抗-EGFR抗体，用于治疗已之前用至少一种在人患者中导致3级或更高的不利的皮肤反应的EGFR抑制物治疗的所述患者。
[0312] 实施方式5的实施方式6：抗-EGFR抗体，其中所述EGFR抑制物是抗-EGFR抗体诸如西妥昔单抗( )，帕尼单抗( )和GA201。
[0313] 实施方式7：实施方式1～6之一项或多项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病是选自下列的EGFR阳性癌：结肠癌，直肠癌，非-小细胞肺癌，鳞状细胞肺癌，肾细胞癌，三重阴性乳腺癌，头和颈鳞状细胞癌，食管腺癌，胃腺癌，胃食管连接处腺癌，子宫内膜癌或肉瘤，子宫颈癌。
[0314] 实施方式8：实施方式1～7之一项或多项的抗-EGFR抗体，用于治疗人患者中的肾癌，其中，优选，肾癌选自透明细胞肾细胞癌和乳头肾细胞癌。
[0315] 实施方式9：实施方式1～8之一项或多项的抗-EGFR抗体，用于治疗具有EGFR阳性肿瘤形成疾病的人患者中的恶性泻流。
[0316] 实施方式9的实施方式10：抗-EGFR抗体，其中所述泻流是胸腔积液或腹膜泻流，且其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病是胃癌或食管/胃连接处的腺癌。
[0317] 实施方式11：实施方式1～10之一项或多项的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在CH2结构域的糖基化位点包含全部以下糖基化特征：
[0318] (i)20％～0％、优选15％～3％的携带岩藻糖残基的聚糖的相对量；
[0319] (ii)至少5％、优选至少10％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
[0320] (iii)至少50％、优选至少60％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；
[0321] (iv)至少10％、优选至少15％的携带2个半乳糖的聚糖的相对量；
[0322] (v)至少1％、优选至少2％的携带至少1个唾液酸、尤其是NeuAc的聚糖的相对量；
[0323] (vi)至少0.5％、优选至少1％的携带2个唾液酸、尤其是NeuAc的聚糖的相对量；
[0324] (vii)其不包含Galα1,3-Gal。
[0325] 实施方式12：实施方式1～11之一项或多项，尤其是实施方式11的抗-EGFR抗体，其中所述减少岩藻糖的抗-EGFR抗体在重链可变区VH内包含另外的糖基化位点，及在VH结构域的糖基化位点包含全部以下糖基化特征：
[0326] (i)40％或更少、优选35％或更少的携带岩藻糖残基的聚糖的相对量；
[0327] (ii)至少35％、优选至少40％的携带截开型GlcNAc的聚糖的相对量；
[0328] (iii)至少85％、优选至少90％的携带至少1个半乳糖的聚糖的相对量；
[0329] (iv)至少70％、优选至少80％的携带至少2个半乳糖的聚糖的相对量；
[0330] (v)至少50％、优选至少60％的携带至少1个唾液酸的聚糖的相对量；
[0331] (vi)至少35％、优选至少45％的携带至少2个唾液酸的聚糖的相对量。
[0332] 实施方式13：实施方式1～12之一项或多项的抗-EGFR抗体，包含重链可变区，所述重链可变区包含：CDR1，其具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列，及CDR3，其具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列；及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含：CDR1，其具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列，及CDR3，其具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
[0333] 实施方式14：实施方式1～13之一项或多项的抗-EGFR抗体，其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病包含K-RAS突变。
[0334] 实施方式15：实施方式1～14之一项或多项的抗-EGFR抗体，其中所述治疗包括以250～1500mg，优选350～1250mg的量，每周每剂量或更低频率施用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体。
[0335] 实施方式16：实施方式1～15之一项或多项的抗-EGFR抗体，其中所述用减少岩藻糖的抗-EGFR抗体治疗EGFR阳性肿瘤形成疾病涉及
[0336] (i)粒细胞，尤其是嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，被与EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体结合及活化；及诱导所述活化的粒细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞；和/或
[0337] (ii)巨噬细胞被与EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞结合的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体活化；及诱导所述活化的巨噬细胞而毁坏所述EGFR阳性肿瘤形成疾病的细胞。
[0338] 实施方式17：实施方式1～16之一项或多项的抗-EGFR抗体，用于治疗人患者[0339] (i)针对导致该严重的不利的皮肤反应的EGFR抑制物具有知道的3级或更高的严重的不利的皮肤反应；
[0340] (ii)在用尤其是在多于10％的患者中导致3级或更高的严重的不利的皮肤反应的EGFR抑制物治疗期间具有增加的发展3级或更高的严重的不利的反应的风险；
[0341] (iii)已之前用EGFR抑制物治疗，且其中所述之前治疗因为在所述治疗期间发生的针对所述EGFR抑制物的不利的皮肤反应而被间断，终止或其中所述EGFR抑制物的剂量需减少；和/或
[0342] (iv)已之前用EGFR抑制物治疗，且其中所述之前用EGFR抑制物治疗因为发生针对所述EGFR抑制物的不利的皮肤反应而不或无法持续。
[0343] 实施方式18：实施方式1～17之一项或多项的抗-EGFR抗体，具有一个或更多以下特征：
[0344] (i)患者在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是苯丙氨酸纯合(FcγRIIIa-158F/F)，患者在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是缬氨酸和苯丙氨酸杂合(FcγRIIIa-158V/F)或其中所述患者在Fcγ受体IIIa的氨基酸第158位是缬氨酸纯合(FcγRIIIa-158V/V)，且其中，优选，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于与所述抗体的FcγRIIIa同种异型无关地治疗患者；
[0345] (ii)减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗在之前治疗中发展了针对抗-EGFR抗体的过敏性反应的人患者和/或用于治疗具有既有Gal-Gal IgE抗体的人患者；和/或[0346] (iii)减少岩藻糖的抗-EGFR抗体用于治疗已之前用一种或更多抗-癌治疗治疗且其中所述EGFR阳性肿瘤形成疾病在所述之前治疗之后抵抗或进展的人患者。
[0347] 本文所述的数字范围包括限定范围的数。本文提供的标题不限制本发明的各方面或实施方式，其可为参考说明书作为全体而读。根据一实施方式，本文所述的主题如在方法的情况中包含特定步骤或如在组合物的情况中包含特定成分指称由相应步骤或成分组成的主题。优选选择及组合本文所述的优选的方面和实施方式，及出自优选的实施方式的相应组合的特定主题也属于本公开。
[0349] 图1显示在第1输注减少岩藻糖的抗-EGFR抗体之后24h之内例示患者中的IP-10应答。1ng/ml以上的血清浓度已是提升的水平，和>10ng/ml的值被认为是强应答。
[0350] 图2显示在与指示的抗体或PBS温育4h之后例示患者的全血样品中的细胞因子释放。
[0351] 图3显示Fuc-西妥昔单抗(本发明)，Fuc+西妥昔单抗( )和对照人IgG1抗体(hIgG1)与不同人血细胞类型的结合。(A)与根据它们的分化(CD)基因簇的表达分选的不同血细胞类型的结合。(B)A的更低轴区细节。
[0352] 图4显示在表达EGFR的靶细胞的存在(+A-431)或缺失(-A-431；对照)下与不同浓度的Fuc-西妥昔单抗(本发明)或Fuc+西妥昔单抗( )温育之后全血样品中活性氧的产生。(A)显示就活性氧染色的细胞的百分率。(B)血样品中活性氧的浓度。
[0353] 图5显示在表达EGFR的靶细胞的存在(+A-431)或缺失(-A-431；对照)下与不同浓度的Fuc-西妥昔单抗(本发明)或Fuc+西妥昔单抗( )温育之后全血样品中乳铁蛋白的分泌。指示的是血浆中乳铁蛋白的浓度。
[0354] 图6显示附接于CH2中的糖基化位点和任选地抗体的VH结构域的碳水化合物链的双触角复合物-型结构的示意图。黑色矩形表示N-乙酰葡萄糖胺残基(GlcNAc)，灰色圆形表示甘露糖残基(Man)，白色圆形表示半乳糖残基(Gal)，灰色菱形表示唾液酸残基(SA)，黑色三角形表示岩藻糖残基(Fuc)和灰色矩形表示截开型N-乙酰葡萄糖胺残基(bisGlcNAc)。在双触角复合物-型结构中，碳水化合物的枝中的Gal和SA，bisGlcNAc以及Fuc仅任选地存在于碳水化合物结构中和也可为缺乏。【实施例】
[0355] 【实施例1：西妥昔单抗变体的糖基化分析】
[0356] 本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体，在这儿是西妥昔单抗的低岩藻糖基化变体(Fuc-西妥昔单抗)通过在源于细胞系GT-5s(DSM ACC 3078)的人骨髓样白血病细胞系中表达来获得，但其中所述细胞系通过修饰GMD表达来被改变而具有减少的岩藻糖基化活性。在小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0中产生高岩藻糖抗-EGFR抗体西妥昔单抗(Fuc+西妥昔单抗)，由此，基本上对应于西妥昔单抗( )。此抗体也在随后体外研究中作为参照使用(实施例4,6,7和8)。
[0357] 为了更详细表征Fuc-西妥昔单抗的糖基化模式，实施糖表征研究。嵌合人/小鼠IgG1抗体西妥昔单抗在重链恒定区2包含一个N-糖基化位点(Fc糖基化位点)及在重链可变区包含一个N-糖基化位点(Fab糖基化位点)。为了糖表征，从蛋白核心释放完整N-聚糖，和将N-聚糖的减少端用荧光标志物标记。标记的N-聚糖的纯化的样品由UPLC分离。基于荧光计量检测的峰面积用于计算N-聚糖结构的相对摩尔丰度。抗体的全部N-糖基化位点上总体糖基化的估计的数据总结于表1。值表示含有目标单糖类型(例如岩藻糖)的N-聚糖的相对摩尔含量。
[0358] 【表1】
[0359]
[0360] *聚糖结构的相对丰度与N-聚糖总量相关。
[0361] F＝岩藻糖基化的N-聚糖；S>0＝唾液酸化的N-聚糖；S2＝具有2个唾液酸的N-聚糖；G>0＝半乳糖基化的N-聚糖；G2＝具有2个半乳糖的N-聚糖；B＝具有截开型N-乙酰葡萄糖胺的N-聚糖；M：高甘露糖-型和杂交体-型N-聚糖；Gal：带有galili表位的N-聚糖。
[0362] 糖表征显示，相比在小鼠SP2/0细胞(如用于产生 )中表达的Fuc+西妥昔单抗，Fuc-西妥昔单抗具有显著更低岩藻糖含量和更高bisGlcNAc，唾液酸和半乳糖含量。此外，Fuc+西妥昔单抗显示显著量的高甘露糖-型和杂交体-型N-聚糖，而Fuc-西妥昔单抗唯独与复合物-型N-聚糖糖基化。此外，Fuc-西妥昔单抗由于人细胞系中产生而具有人糖基化特征，由此，无可检测的NeuGc和无可检测的Galα1,3-Gal(Galili表位)。
[0363] 为了进一步表征Fuc-西妥昔单抗，也分析在不同糖基化位点的糖基化模式(Fab糖基化和Fc糖基化)。为了分别在Fc和Fab糖基化位点的糖基化特征的分离的确定，将抗体消化，及在聚糖分析之前分离为Fab和Fc部分。
[0364] 【表2】
[0365]
[0366] *聚糖结构的相对丰度与N-聚糖总量相关。
[0367] F＝岩藻糖基化的N-聚糖；S>0＝唾液酸化的N-聚糖；S2＝具有2个唾液酸的N-聚糖；G>0＝半乳糖基化的N-聚糖；G2＝具有2个半乳糖的N-聚糖；B＝具有截开型N-乙酰葡萄糖胺的N-聚糖。
[0368] 在不同可比性研究中分析Fuc-西妥昔单抗和Fuc+西妥昔单抗( )的靶结合，特异性，亲和性和Fv介导的抗-肿瘤活性(也见下例)，尤其是EGFR抗原ELISA，流式细胞术分析，EGFR下调，VEGF产生的减少，肿瘤增殖的抑制和肿瘤凋亡的诱导。结果确认，本发明的Fuc-西妥昔单抗显示肿瘤细胞增殖抑制和肿瘤细胞凋亡诱导的全维持。因此，Fuc-西妥昔单抗和Fuc+西妥昔单抗在结合及Fv介导的抗-肿瘤性质中基本上相当。
由此，关于治疗性功效和尤其是抗-转移性活性的改善与减少岩藻糖的抗EGFR抗体的改善的糖基化特征相关。
由此，关于治疗性功效和尤其是抗-转移性活性的改善与减少岩藻糖的抗EGFR抗体的改善的糖基化特征相关。
[0369] 将在实施例1中描述的Fuc-西妥昔单抗用于随后分析及实施例。
[0370] 【实施例2：临床研究】
[0371] 实施在患局部进展的或转移性EGFR-阳性固体恶性肿瘤的患者中Fuc-西妥昔单抗(见实施例1)作为单一治疗的临床I期剂量升高研究。在研究中包括患几种不同肿瘤类型的患者，包括患结肠癌，肺癌，胃癌，食管癌，肾细胞癌包括透明细胞肾细胞癌和乳头肾细胞癌，胆囊癌，卵巢癌和直肠癌的患者。使用每周或每2周施剂方案。患者接收12mg，60mg，120mg，240mg，480mg，720mg，990mg或1370mg的Fuc-西妥昔单抗。全部患者在临床研究起始之前具有进行性疾病状态。治疗是安全的，和用弱至中等输注-相关的反应(IRR)，仅以可由对乙酰胺基酚和/或改善的施用方案控制的第1输注是非常良好耐受的。
[0372] 显著的治疗性功效见于用于治疗各种不同肿瘤的晚期阶段患者。尤其是，在肿瘤类型诸如结肠(包括KRAS突变体以及KRAS野生型肿瘤)，直肠，胃，肾/肾细胞，肺，卵巢和阴茎癌中可获得疾病状态的稳定达870天。至少在研究中包括的全部患者的多于50％中达到疾病状态的稳定(临床益处)，具有约6个月的稳定的疾病的平均持续时间。在接收至少8个剂量(或本发明的4每两周)的Fuc-西妥昔单抗的那些患者中，甚至82％显示临床益处。在具有进展的病症和重预治疗的进行性患者中，在用Fuc-西妥昔单抗作为单剂治疗的约18％的患者观察到部分或甚至完全应答。这是显著的效应，由于这些患者具有特别差的预后。由此，它们无法与第1或第2次接收治疗的患者比较。全部患者的46％显示肿瘤减小。此外，获得肺或腹膜中泻流的全减小。主要临床益处见于结肠癌，包括在 失败之后的患者和K-Ras野生型以及K-Ras突变患者中的发展者，及非-典型抗-EGFR抗体指示诸如NSCLC，清楚的和非-清楚的肾细胞癌，胃和食管癌，及胆囊。因此，减少岩藻糖的抗-EGFR抗体提供重要新治疗选项。
[0373] 关于不同癌类型，结肠癌的稳定的疾病的最长持续时间是约400天，具有约180天的平均持续时间。约80％的结肠癌患者显示临床益处，包括用 治疗后进行性的患者和患K-Ras突变肿瘤的患者。患肾细胞癌的患者显示约240天的稳定的疾病的平均持续时间，至今见达400天的最长持续时间。
[0374] 特别值得注意的是，研究中包括的患肾细胞癌的全部患者显示疾病的稳定化，其在全部情况中已用每周12mg～120mg Fuc-西妥昔单抗的低量获得。肾细胞癌观察到达35％的肿瘤损伤之和的减小。患肾细胞癌的患者的无进展的存活的最长持续时间至今达
400天。
400天。
[0375] 患肺癌或胃/食管癌的患者也显示对本发明的Fuc-西妥昔单抗抗体的显著的应答。两组均包括具有完全应答的患者。非-小细胞肺癌患者的仍持续治疗导致稳定疾病现在多于870天。此外，用Fuc-西妥昔单抗抗体治疗导致患胃或食管癌的患者中肿瘤标志物的强减小和腹膜泻流(腹水)的完全减小。
[0376] 这些临床结果是尤其显著的，由于其是全部剂量同群(包括每周接收仅12mg的Fuc-西妥昔单抗的患者)的结果。尤其是，在以低Fuc-西妥昔单抗剂量(12mg～240mg)治疗患者的多于70％中观察到稳定的疾病。此外，多于40％的全部患者在靶损伤中显示肿瘤减小。用Fuc-西妥昔单抗治疗也减少受此影响的癌患者中的胸膜和腹膜泻流。
[0377] 临床研究的另一惊异结果是由抗-EGFR抗体导致的不利的反应的显著地低速度，其允许本文所述的新治疗剂治疗。常规抗-EGFR抗体诸如 导致不利的皮肤反应，尤其是疹，在80％～90％的治疗的患者中。约15％或更多的皮肤反应是严重的(至少
3级)，包括具有皮肤坏死的情况。此外，用Fuc+西妥昔单抗 治疗的几乎全部患者遭受进行性镁损失，在达55％的患者中导致低镁血症(见,例如伴随European Medicine Agency(EMEA)和美国Food and Drug Administration(FDA)的 的销售授权的
文献，及British Columbia Cancer Agency的Cetuximab Cancer Drug Manual)。与此相反，本研究的仅约40％的患者发展皮肤反应，多数是仅弱反应(1级)和余下是中等反应(2级)。无3或4级不利的皮肤反应发生。尤其是，仅24％的患者遭受痤疮样皮疹，和甚至那些患者仅发展弱形式的痤疮样皮疹。无3级或更高的痤疮样皮疹被观察到。此外，在用Fuc-西妥昔单抗的临床研究期间，在分别少于8％和少于9％的患者中观察到降低的镁和钾水平。无针对Fuc-西妥昔单抗的过敏性反应被观察的，这归因于改善的糖基化。当与比较时，也观察到本发明的抗-EGFR抗体导致其他不利的副作用诸如腹泻的更
低发生率。尤其是，仅24％的治疗的患者具有3级或更高的不利的事件，其中无不利的皮肤反应。临床研究期间不必因为该副作用而中断，施用延迟，或减小剂量。认为，本发明的Fuc-抗体的总体改善的糖基化模式以及各种人血细胞类型的结合差异(明显与改善的糖基化模式关联(见实施例6))可负责此有利的不利的反应特征，基于此，如在本文所述提供新治疗机会。
3级)，包括具有皮肤坏死的情况。此外，用Fuc+西妥昔单抗 治疗的几乎全部患者遭受进行性镁损失，在达55％的患者中导致低镁血症(见,例如伴随European Medicine Agency(EMEA)和美国Food and Drug Administration(FDA)的 的销售授权的
文献，及British Columbia Cancer Agency的Cetuximab Cancer Drug Manual)。与此相反，本研究的仅约40％的患者发展皮肤反应，多数是仅弱反应(1级)和余下是中等反应(2级)。无3或4级不利的皮肤反应发生。尤其是，仅24％的患者遭受痤疮样皮疹，和甚至那些患者仅发展弱形式的痤疮样皮疹。无3级或更高的痤疮样皮疹被观察到。此外，在用Fuc-西妥昔单抗的临床研究期间，在分别少于8％和少于9％的患者中观察到降低的镁和钾水平。无针对Fuc-西妥昔单抗的过敏性反应被观察的，这归因于改善的糖基化。当与比较时，也观察到本发明的抗-EGFR抗体导致其他不利的副作用诸如腹泻的更
低发生率。尤其是，仅24％的治疗的患者具有3级或更高的不利的事件，其中无不利的皮肤反应。临床研究期间不必因为该副作用而中断，施用延迟，或减小剂量。认为，本发明的Fuc-抗体的总体改善的糖基化模式以及各种人血细胞类型的结合差异(明显与改善的糖基化模式关联(见实施例6))可负责此有利的不利的反应特征，基于此，如在本文所述提供新治疗机会。
[0378] 施用本发明的减少岩藻糖的抗-EGFR抗体(在这里是Fuc-西妥昔单抗)后具有主要应答的患者的选择的记录(见实施例1)描述于下列实施例。
[0379] 【实施例3：用Fuc-西妥昔单抗治疗的EGFR阳性癌患者的例示情况】
[0380] 【例示情况1】
[0381] 在以下在前治疗之后，将患有进展的结肠癌(KRAS wt)及肺，肝和腹膜转移的患者(FcγRIIIa-158V/V)用1370mg Fuc-西妥昔单抗治疗
[0382] 1.FOLFOX和贝伐珠单抗
[0383] 2.FOLFIRI和Fuc+西妥昔单抗( )
[0384] 3.FOLFOX
[0385] 4.达卡巴嗪
[0386] 5.卡培他滨及丝裂霉素
[0387] 在用Fuc-西妥昔单抗治疗期间，患者经历肝功能的标准化和肿瘤标志物的显著减少(Ca19.9自362U/ml降低至150U/ml和CEA自398ng/ml降低至15ng/ml)，这指示治疗功效。计算的层析成像(CT)扫描记载肿瘤负荷的26.2％减小。治疗良好耐受，由于患者就发展1级痤疮样疹和镁水平的1级减小。
[0388] 【例示情况2】
[0389] 在用FOLFOX不成功的第3线化学治疗之后，将患进展的HER2阴性胃癌(粟粒性腹膜癌扩散和腹水)的患者(FcγRIIIa-158F/F)用1370mg Fuc-西妥昔单抗治疗。在用Fuc-西妥昔单抗头2个月的治疗之后，患者经历肿瘤标志物的显著减少(Ca19.9：2359至443U/ml)，这指示治疗功效。在肠系膜节点的可测量的损伤自13×11cm减小至12×8cm。
此外，达到腹部泻流的显著减小，这是几乎不可再检测的。治疗最佳耐受，由于患者就发展
1级痤疮样疹。镁水平保持在正常范围之内。
此外，达到腹部泻流的显著减小，这是几乎不可再检测的。治疗最佳耐受，由于患者就发展
1级痤疮样疹。镁水平保持在正常范围之内。
[0390] 【例示情况3】
[0391] 将患食管/胃连接处的腺癌包括胸膜和腹膜转移的患者(FcγRIIIa-158F/F)每周用1370mg Fuc-西妥昔单抗治疗。但是，癌不显示HER2过表达，EGFR基因扩增检测由FISH。患者另外地遭受胸膜和腹膜泻流，这必须经常穿刺及排出。由于用Fuc-西妥昔单抗的治疗惯例，胸腔积液未需求再次排出和患者的总体条件显著地改善。已在一轮Fuc-西妥昔单抗治疗之后，肿瘤标志物显著地下降(肿瘤标志物Ca19-9自1769U/ml下降至204U/ml和肿瘤标志物CEA自444ng/ml下降至104ng/ml)。达到全部测试的肿瘤标志物全减小至正常水平(Ca19-9：12.4U/ml和CEA：4.4ng/ml)组合腹部泻流全减小至无更可测量的腹水，导致具有完全临床应答的患者。
[0392] 【例示情况4】
[0393] 将患进展的非-小细胞肺癌的患者(FcγRIIIa-158V/V)每周用720mg Fuc-西妥昔单抗治疗，及由放射学和CT扫描确认，发展完全应答>397天。当起始用Fuc-西妥昔单抗治疗时，患者具有之前细支气管镜检，以及放射化学治疗(用顺铂和长春瑞滨)和化学治疗(用多西他赛)治疗1年。在伴随麻醉前用药的头18次输注期间以及在无麻醉前用药的进一步输注期间，治疗非常良好耐受。在第1输注期间肿瘤损伤停在恒定。然后肿瘤损伤开始缩小，及在～10.5个月的治疗之后，起始达到根据RECIST 1.1的完全应答。在8周之内2次连续CT扫描中确认全部肿瘤损伤的消失。总体健康状况是良好的，和患者是甚至再次工作。此是高度显著的事件，由于具有可比较的初始癌状态的患者的正常健康状况和预后离追求它们的专业的可能性太遥远。治疗目前在持续。
[0394] 【例示情况5】
[0395] 将患乳头肾细胞癌的患者(FcγRIIIa-158F/F)每周用120mg Fuc-西妥昔单抗治疗。总和的靶损伤区被Fuc-西妥昔单抗治疗降低35％，相对于靶损伤之和的最大尺寸减小45％。
[0396] 【例示情况6】
[0397] 患具有肺，肝和淋巴结转移的进展的结肠癌的患者(在用FOLFIRI加阿瓦斯丁(贝伐珠单抗)和另一化学治疗2次在前治疗之后)每隔一周用990mg治疗。患者在第1次扫描中显示根据RECIST1.1的部分应答，肿瘤靶损伤之和～35％减小组合快速症状性缓解和实验室测试(肝功能)和CEA水平的标准化。治疗最佳耐受，由于患者仅发展弱的皮肤毒性。
[0398] 【例示情况7】
[0399] 将患乳头肾细胞癌的患者(FcγRIIIa-158F/V)每周用60mg Fuc-西妥昔单抗治疗。患者显示稳定的疾病多于1年。
[0400] 【例示情况8】
[0401] 将患具有突变KRAS的透明细胞肾细胞癌的患者(FcγRIIIa-158F/F)每周用120mg Fuc-西妥昔单抗治疗。在治疗4个月之后肿瘤显示仅慢生长。
[0402] 【例示情况9】
[0403] 将患透明细胞肾细胞癌的患者(FcγRIIIa-158F/F)每周用12mgFuc-西妥昔单抗治疗。肿瘤生长停止5个月，之后仅检测到慢生长。
[0404] 【实施例4：应答Fuc-西妥昔单抗而涉及NK细胞和巨噬细胞】
[0405] 为了分析本发明的Fuc-西妥昔单抗的治疗性活性中自然杀伤细胞(NK细胞)和巨噬细胞的涉及，在抗体施用之前，期间及之后，从临床研究的全部患者得到血清样品。
[0406] 作为Fuc-西妥昔单抗诱导的NK细胞(提升的IFN-γ水平的主要源)刺激的指示物分析IFN-γ。在稍微多于50％的患者中观察到低程度的IFN-γ诱导。由于IFN-γ已知被非常瞬时诱导，在几个患者中另外地分析IFN-γ-诱导的蛋白10(IP-10)。用IFN-γ刺激后由巨噬细胞分泌IP-10，及作为由NK细胞的IFN-γ分泌和巨噬细胞的活化的更稳定的指示物。在起始输注之后6h之内，在多数患者中观察到IP-10分泌的快和强刺激(88％)(图1)。
[0407] 此外，也通过温育在用本发明的Fuc-西妥昔单抗，Fuc+西妥昔单抗，针对B-及T-淋巴细胞表位的抗体MabCampath作为阳性对照和PBS作为阴性对照抗体治疗之前取的患者血样品体外分析由Fuc-西妥昔单抗抗体的各种细胞因子的诱导。结果，可观察到细胞因子IFN-γ，IL-6，IL-8和TNF-α的增加(图2)。
[0408] IFN-γ和IP-10释放的诱导指示应答Fuc-西妥昔单抗而涉及巨噬细胞和NK细胞。此外，这些和其他细胞因子的释放的诱导也是临床研究中使用的Fuc-西妥昔单抗抗体的治疗性功效的n指示物。诱导的细胞因子展示，由抗体引发免疫反应，和此外活化患者的免疫系统用于以下抗体治疗。
[0409] 【实施例5：输注相关的反应的防止】
[0410] 在用于评定Fuc-西妥昔单抗的治疗性活性的临床研究中，也在第1同群的患者中，在第1输注期间观察到通过输注Fuc-西妥昔单抗导致的弱至中等不利的反应(输注相关的反应,IRR)。为了防止IRR，在Fuc-西妥昔单抗输注之前，余下患者用对乙酰胺基酚预治疗。对乙酰胺基酚预治疗包括在Fuc-西妥昔单抗输注之前一晚一个1000mg剂量及在Fuc-西妥昔单抗输注之前1h一个1000mg剂量。患者的预治疗导致IRR减少。
[0411] 在第2方法中，优化第1输注的施用方案而减少IRR。根据此优化的施用方案，第1剂量分为在2个连日给的2个输注。第1输注含有60mg的Fuc-西妥昔单抗及施用2.5小时。第2输注含有余下量的第1剂量的Fuc-西妥昔单抗，及通过在5.5小时之内输注次日施用。通过改善第1输注的施用方案，IRR的发生可还{|减少至50％。此施剂方案也允许向第1输注的麻醉前用药的极小化，和如果向在IRR之后的下一输注(仅)的麻醉前用药，则IRR发生。此是重要的，因为麻醉前用药，尤其甾，在文献中描述抑制NK-细胞和ADCC活性，这是Fuc-西妥昔单抗的关键功能，以及减小巨噬细胞和嗜中性粒细胞活性，及单核细胞计数。在少麻醉前用药治疗的患者中，本发明的抗-EGFR抗体也显示更高抗-肿瘤功效。
[0412] 此外，需注意，在整个临床研究期间，在第1输注期间主要观察到使用麻醉前用药或改善的施用方案输注相关的反应，及仅是弱或中等严重性(1或2级)。此外，治疗的患者未显示针对本发明的抗-EGFR抗体的过敏性反应。
[0413] 这些发现展示，由Fuc-西妥昔单抗输注导致的IRR可由用镇痛剂诸如对乙酰胺基酚的预治疗和/或通过使用为第1剂量优化的施用进程防止。
[0414] 【实施例6：在临床前体外和体内研究中针对抗原EGFR的不同岩藻糖基化的抗体变体的分析】
[0415] 在几体外和体内研究中，在实施临床研究之前，表征本发明的Fuc-西妥昔单抗抗体。尤其是，也与Fuc+西妥昔单抗抗体做比较。这些研究涉及抗体与抗原EGFR的结合，和它们对抗原EGFR的效应，它们对不同肿瘤细胞表达EGFR的生物学效应(包括ADCC)，及它们在体内肿瘤模型中的功效。
[0416] 【抗原结合测定】
[0417] 测定Fuc-西妥昔单抗抗体的抗原结合，及在使用固定的EGFR的ELISA测定中及通过就抗体的结合染色表达EGFR的细胞由细胞计量术与Fuc+西妥昔单抗相比较。在这些体外测定中，本发明的Fuc-西妥昔单抗抗体显示与Fuc+西妥昔单抗的结合相当的与EGFR的强结合。
[0418] 【对表达EGFR的细胞的直接效应】
[0419] 测定Fuc-西妥昔单抗和Fuc+西妥昔单抗在表达EGFR的人肿瘤细胞中抑制EGFR磷酸化及诱导凋亡的活性。在由配体结合活化之后，EGFR二聚化及自磷酸化。可通过测定EGFR的磷酸化的减小来分析由于西妥昔单抗的结合的EGFR活化的抑制。此通过用特异性抗体染色磷酸化的EGFR来测量。分析显示，本发明的Fuc-西妥昔单抗以及Fuc+西妥昔单抗在表达EGFR的肿瘤细胞系A431(外阴的人表皮样癌细胞系)细胞和LS174T(人上皮结肠腺癌)中有效抑制EGFR磷酸化。此外，两种抗体能在表达EGFR的肿瘤细胞中诱导凋亡。此通过测量A431细胞与抗体接触后线粒体脱氢酶的释放来分析。显示本发明的Fuc-西妥昔单抗以及Fuc+西妥昔单抗的抑制EGFR磷酸化和诱导凋亡的活性相当。
[0420] 【ADCC测定】
[0421] 抗体Fc结构域中的糖基化位点之内岩藻糖含量的减少被报道导致ADCC活性的增加，抗体-依赖性细胞毒性(导致抗原阳性肿瘤细胞的特异性裂解)。此效应通过在自然杀伤细胞上岩藻糖-减少的抗体与FcγRIIIa受体的更高亲和性结合导致。在氨基酸第158位的此受体的2种同种异型(V158F)已知与人IgG1具有不同亲和性，相比F等位基因受体，V等位基因与人IgG1具有更高亲和性。因此，使用用EGFR-阳性肿瘤细胞系(LS174T,SKOV3,SK-BR3)作为靶细胞的铕释放测定来在纯合VV，纯合FF和杂合FV供体上分析与 比较，Fuc-西妥昔单抗的ADCC活性。
[0422] 结果显示，在全部供体上，相比Fuc+西妥昔单抗，Fuc-西妥昔单抗介导强烈增强的ADCC活性。用Fuc-西妥昔单抗达到的最大裂解相比Fuc+西妥昔单抗显著地增加，和对于达到特定裂解速度必需的Fuc-西妥昔单抗浓度强烈降低。当考虑供体效应细胞具有FcγRIIIa受体的VF或FF基因型时，此甚至更显著。
[0423] 在进一步ADCC测定中，将人肺腺癌上皮细胞系A549的细胞用作靶细胞。这些细胞中的K-Ras基因在密码子12包含突变，导致具有Gly-12-Ser突变的组成性有活性的K-Ras蛋白。结果，展示，本发明的Fuc-西妥昔单抗能经ADCC诱导靶细胞裂解，甚至对于包含组成性有活性的EGFR信号转导通路的靶癌细胞，即其不可通过阻断EGFR配体结合来治疗。
[0424] 【体内药理学研究】
[0425] 在小鼠和短尾猴中实施几个体内研究，以研究Fuc-西妥昔单抗的药理学效应，将它们中的一些与Fuc+西妥昔单抗比较实施。在异种移植来自人细胞系(A431,DU145)或来自患者来源的NSCLC(非-小细胞肺癌)和CRC(结直肠癌)来源的癌异种移植物的EGFR阳性肿瘤细胞的无胸腺裸鼠中研究Fuc-西妥昔单抗的抗肿瘤活性。
[0426] 可显示，相比PBS治疗的动物，两种抗体，Fuc-西妥昔单抗以及Fuc+西妥昔单抗，剂量-依赖性地抑制肿瘤生长。在任何剂量组中发现，Fuc-西妥昔单抗治疗的组和Fuc+西妥昔单抗治疗的组中在相对肿瘤体积之间无显著差异。预期Fuc-西妥昔单抗和Fuc+西妥昔单抗的相当的功效，由于Fuc-西妥昔单抗的增加的ADCC活性的优势在小鼠(小鼠不具有FcγRIIIa同种异型变异，如人)中不关联。
[0427] 向具有高度EGFR表达肿瘤NSCLC#7466和CRC#8060小鼠施用Fuc-西妥昔单抗的治疗导致强肿瘤生长抑制和甚至显著百分率的肿瘤缓解。此外，展示，本发明的Fuc-西妥昔单抗有效抑制携带K-Ras的致癌，恒定有活性的G12D突变体的肿瘤细胞CRC#8397(源于患者的结直肠癌细胞)的生长。
[0428] 如上所示，本发明的Fuc-西妥昔单抗独立于肿瘤细胞的K-Ras突变状态地抑制肿瘤生长。
[0429] 【实施例7：不同岩藻糖基化的抗体变体与人血细胞的结合】
[0430] 为了评价人身体中不同岩藻糖基化的抗-EGFR抗体变体的行为的差异，分析所述抗体与各种人血细胞的结合。关于此，用Fuc-西妥昔单抗，Fuc+西妥昔单抗或不相关的人IgG1抗体染色人血细胞，及就不同血细胞类型分选。简言之，在流式细胞术分析中测量在主要人血细胞上Fuc-西妥昔单抗和Fuc+西妥昔单抗与Fc受体的结合。对冷冻的PBMC解冻，将结合的天然抗体自表面剥离，和将细胞与10μg/mL浓度的Fuc-西妥昔单抗，Fuc+西妥昔单抗或hIgG1(作为阴性对照)温育。通过使用针对人IgG Fab2片段的Cy2-偶联的Fab2片段检测抗体结合，及将细胞用特异于不同细胞群的鉴定的标志物共染。用Pluriselect-试剂盒CD15自健康自愿者的新鲜血样品纯化粒细胞，及因此染色。通过使用全血及生物素化的抗体实施血小板分析。结果可观察到，展示，Fuc-西妥昔单抗和Fuc+西妥昔单抗二者强烈与单核细胞(CD14+)和血小板(CD61+)结合，而与B细胞(CD19+)仅非常低结合。但是，与Fuc+西妥昔单抗相比，Fuc-西妥昔单抗也强烈结合粒细胞(CD66+)和NK细胞(CD16+CD56+)(图3)。认为，与后者血细胞类型，尤其是与粒细胞(CD66+)和NK细胞(CD16+CD56+)结合，相比Fuc+西妥昔单抗，可至少部分负责减少Fuc-西妥昔单抗的不利的皮肤反应。明显的是，具有类似于Fuc-cetugex的Fc糖基化模式(包括类似地低岩藻糖基化)的Fc糖基化模式的对照抗体显示相比Fuc-西妥昔单抗显著更低粒细胞结合。血样品中的仅约20％的粒细胞(CD66+)被所述对照Fuc-抗体结合而Fuc-西妥昔单抗结合几乎100％的粒细胞。因此，强粒细胞结合是本发明的Fuc-西妥昔单抗抗体的特定特征。
[0431] 【实施例8：粒细胞由不同岩藻糖基化的抗体变体的活化】
[0432] 为了测定抗-EGFR抗体活化粒细胞的能力，分析活性氧的产生和乳铁蛋白的分泌。粒细胞形成颗粒，分泌囊泡，其含有由被称为由免疫刺激的粒细胞的活化后去粒的过程释放的细胞毒性分子的混合物。颗粒中含有的细胞毒性分子的例是涉及毒性氧化合物，溶菌酶和乳铁蛋白的形成的化合物。因此，血样品的上清液中活性氧和乳铁蛋白的增加指示粒细胞的活化。简言之，将全血样品在表达EGFR的靶细胞(肿瘤细胞系A431(外阴的人表皮样癌细胞系))的存在或缺失(对照)下与Fuc-西妥昔单抗或Fuc+西妥昔单抗温育。通过添加对氧化反应的染料监测活性氧的产生。测定氧化的染料的量以及产生活性氧的细胞数。此外，通过使用AssayPro的AssayMax人乳铁蛋白ELISA试剂盒(St.Charles,MO,USA)分析血浆中乳铁蛋白的浓度。
[0433] 结果，本发明的Fuc-西妥昔单抗显示基础活化(0μg/ml抗体)以上的显著数的活化的粒细胞(图4A)。最显著地，活性氧的产生是对照的约7-倍(图4B)。相反，Fuc+西妥昔单抗Fuc+西妥昔单抗不显示任何活性氧的诱导。此外，本发明的Fuc-西妥昔单抗也显示Fuc+西妥昔单抗的约2-倍的乳铁蛋白释放诱导(图5)。
[0434] 【根据用于保藏DSM ACC3078的PCT/RO/134表的另外的指示】
[0435] 申请人在这里为那些具有仅可由独立的，指定的专家提供申请中提到的保藏材料的样品的相应规定的国家请求(“专家解决方案”的请求，其中尤其可应用于澳大利亚,加拿大,克罗地亚,丹麦,芬兰,德国,冰岛,挪威,新加坡,西班牙，瑞典，英国，欧洲)。
[0436] 对于欧洲，申请人因此请求，保藏的生物材料样品会根据条款33(1)(2)EPC可利用，直到公开被授予专利权或自提交日起20年，如果申请被驳回或撤回或被视为撤回，仅由向由请求样品的人指定的专家发出样品(条款32EPC)。
[0437]
[0438]
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 杂芳族化合物及其作为多巴胺D1配体的用途 | 2020-05-20 | 505 |
| 精神病阴性四步疗法系列药物 | 2020-05-14 | 238 |
| 稠合噻吩化合物及其医药用途 | 2020-05-16 | 449 |
| 生物标志物鉴定 | 2020-05-19 | 646 |
| 精神病阴性四步疗法系列药物 | 2020-05-13 | 603 |
| 具有谷氨酸NMDA活性的新型精神病治疗剂 | 2020-05-19 | 621 |
| 一种低剂量抗精神病药物组合物 | 2020-05-18 | 605 |
| 精神病阴性四步疗法系列药物 | 2020-05-14 | 486 |
| 一种治疗精神分裂症的药物组合物及其应用 | 2020-05-15 | 682 |
| 一种非典型抗精神病药物组合物 | 2020-05-17 | 226 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈