一种回心康片的制备方法及其在抑制肛门肉瘤细胞S-180细胞增殖药物中的应用
阅读：503发布：2023-02-28
专利汇可以提供一种回心康片的制备方法及其在抑制肛门肉瘤细胞S-180细胞增殖药物中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于中药技术领域，具体涉及一种回心康片的制备方法及应用。本发明的回心康片的制备方法，由钩藤780g、回心草910g、何首乌26g、黄芪260g、三七26g、山楂650g、甘草260g作为 原料药 制成，采用超临界萃取和 微波 萃取制备而成，使得人参皂苷Rg1含量有很大提高。本发明还提供了回心康片在制备抑制小鼠肛 门 肉瘤细胞S-180 细胞增殖 药物中的应用。，下面是一种回心康片的制备方法及其在抑制肛门肉瘤细胞S-180细胞增殖药物中的应用专利的具体信息内容。
1.一种回心康片的制备方法，由钩藤780g、回心草910g、何首乌26g、黄芪260g、三七
26g、山楂650g、甘草260g作为原料药制成，其特征在于，所述的制备方法由下列步骤组成：
取三七、何首乌、回心草，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量l-3ml/g生药·min，萃取时间180-220min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入10L的60%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600-800W，萃取2次，每次5-10分钟，合并萃取液，浓缩，加到Dl01大孔吸附树脂柱上，60%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成400片，每片重0.3g。
2.根据权利要求l所述的回心康片的制备方法，其特征在于，所述CO2超临界萃取中夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
3.根据权利要求l所述的回心康片的制备方法，其特征在于，所述CO2超临界萃取中萃取压力为25 MPa。
4.根据权利要求l所述的回心康片的制备方法，其特征在于，所述CO2超临界萃取中萃取温度为40℃。
5.根据权利要求l所述的回心康片的制备方法，其特征在于，所述CO2超临界萃取中CO2流量2ml/g生药·min。
6.根据权利要求l所述的回心康片的制备方法，其特征在于，所述CO2超临界萃取中萃取时间为200min。
7.根据权利要求l所述的回心康片的制备方法，其特征在于，所述微波萃取功率为
700W。
8.根据权利要求l所述的回心康片的制备方法，其特征在于，所述微波萃取每次萃取时间为8分钟。
9.权利要求l所述的回心康片在制备抑制小鼠肛门肉瘤细胞S-180细胞增殖药物中的应用。
一种回心康片的制备方法及其在抑制肛门肉瘤细胞S-180
细胞增殖药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种回心康片的制备方法及其在抑制小鼠肛门肉瘤细胞S-180细胞增殖药物中的应用。
背景技术
[0002] 回心康胶囊标准号WS-10737(ZD-0737)-2002，记载于国家中成药标准汇编内科心系分册。由钩藤780g、回心草910g、何首乌26g、黄芪260g、三七26g、山楂650g、甘草260g作为原料药制成，具有益气活血，镇静平肝的功效。用于气虚血瘀，肝阳上亢引起的胸痹，眩晕，症见胸痹，胸闷，心悸，头晕等症，冠心病，高血压属上述证候者。
发明内容
[0004] 为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种回心康片的制备方法。
[0005] 本发明的另一个目的在于提供一种回心康片在制备抑制小鼠肛门肉瘤细胞S-180细胞增殖药物中的应用。
[0006] 本发明的目的是通过如下的方案实现的：
[0007] 一种回心康片的制备方法，由钩藤780g、回心草910g、何首乌26g、黄芪260g、三七26g、山楂650g、甘草260g作为原料药制成，所述的制备方法由下列步骤组成：取，三七、何首乌、回心草，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6％，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量l-3ml/g生药·min，萃取时间
180-220min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入10L的60％乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600-800W，萃取2次，每次5-10分钟，合并萃取液，浓缩，加到Dl01大孔吸附树脂柱上，60％乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70％乙醇制颗粒，干燥，压片，制成400片，每片重0.3g。
180-220min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入10L的60％乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600-800W，萃取2次，每次5-10分钟，合并萃取液，浓缩，加到Dl01大孔吸附树脂柱上，60％乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70％乙醇制颗粒，干燥，压片，制成400片，每片重0.3g。
[0008] 上述的回心康片的制备方法中，所述CO2超临界萃取中夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5％。
[0009] 上述的回心康片的制备方法中，所述CO2超临界萃取中萃取压力为25MPa。
[0010] 上述的回心康片的制备方法中，所述CO2超临界萃取中萃取温度为40℃。
[0011] 上述的回心康片的制备方法中，所述CO2超临界萃取中CO2流量2ml/g生药·min。
[0012] 上述的回心康片的制备方法中，所述CO2超临界萃取中萃取时间为200min。
[0013] 上述的回心康片的制备方法中，所述微波萃取功率为700W。
[0014] 上述的回心康片的制备方法中，所述微波萃取每次萃取时间为8分钟。
[0015] 上述的回心康片在制备抑制小鼠肛门肉瘤细胞S-180细胞增殖药物中的应用。
[0016] 现有技术中，回心康胶囊每次5粒，一日3次。回心康胶囊服药量大。采用本发明方法制备成的回心康片每片重0.3g，每次仅需2片，一日服用3次。在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。且制备成片剂，患者随水吞下即可，服药量小且无苦味，患者易于接受。
[0017] 试验一、不同方法制备的回心康片中人参皂苷Rg1含量的比较
[0018] l、仪器及试药本发明回心康片：按实施例1方法制备，使用3012g原料药，经提取制成400片，每片重0.3g。原回心康胶囊，按照WS-10737(ZD-0737)-2002标准方法制备。Agilent1200高效液相色谱仪；METTLER AE240电子分析天平；人参皂苷Rg1对照品(中国药品生物制品检定所)。
[0019] 2、方法
[0020] 照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录V D)测定。
[0022] 对照品溶液的制备取在60℃减压干燥2小时的人参皂苷Rg11对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
[0023] 本发明产品供试品溶液的制备取本发明的回心康片，研细，精密称定，研细，取1.2g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流1小时，弃去乙醚液，药渣挥去乙醚，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取至无色，甲醇液蒸干，残渣加水20ml温热使溶解，放冷，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用1％氢氧化钠溶液振摇提取2次，每次30ml，弃去碱液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次
30ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加水15ml，分次温热溶解，放冷，通过已处理好的D101型大孔树脂柱(内径1.5cm，长15cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用20％乙醇50ml洗脱，弃去20％乙醇洗脱液，继用70％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并定量转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
30ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加水15ml，分次温热溶解，放冷，通过已处理好的D101型大孔树脂柱(内径1.5cm，长15cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用20％乙醇50ml洗脱，弃去20％乙醇洗脱液，继用70％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并定量转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
[0024] 对照产品供试品溶液的制备取本对照的40片(薄膜衣片除去包衣)，精密称定，研细，取3g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流1小时，弃去乙醚液，药渣挥去乙醚，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取至无色，甲醇液蒸干，残渣加水20ml温热使溶解，放冷，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用1％氢氧化钠溶液振摇提取2次，每次30ml，弃去碱液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次30ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加水15ml，分次温热溶解，放冷，通过已处理好的D101型大孔树脂柱(内径1.5cm，长15cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用20％乙醇50ml洗脱，弃去20％乙醇洗脱液，继用70％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并定量转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
[0025] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0026] 3、结果
[0027] 结果表明，本发明回心康片中人参皂苷Rg1的含量为2-4mg/片；而原回心康胶囊中人参皂苷Rg1的含量为0.38mg/袋，每次服用量2片的人参皂苷Rg1含量为原颗粒剂含量的2-4倍，在服用量减少的情况下，人参皂苷Rg1含量有很大提高。
[0028] 上述研究表明，采用本发明制备方法制备的回心康片，有效成分含量远远高于WS-10737(ZD-0737)-2002标准记载的方法制备的回心康胶囊。
具体实施方式
[0029] 下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0030] 实施例1
[0031] 取钩藤780g、回心草910g、何首乌26g、黄芪260g、三七26g、山楂650g、甘草260g，取三七、何首乌、回心草加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5％，萃取压力25MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间200min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入10L的60％乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率700W，萃取2次，每次8分钟，合并萃取液，浓缩，加到Dl01大孔吸附树脂柱上，60％乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70％乙醇制颗粒，干燥，压片，制成400片，每片重0.3g。
[0032] 经检测，成品中人参皂苷Rg1的含量为3.89mg/片。
[0033] 实施例2
[0034] 取钩藤780g、回心草910g、何首乌26g、黄芪260g、三七26g、山楂650g、甘草260g，取三七、何首乌、回心草加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4％，萃取压力30MPa，温度50℃，CO2流量3ml/g生药·min，萃取时间180min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入10L的60％乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600W，萃取2次，每次5分钟，合并萃取液，浓缩，加到Dl01大孔吸附树脂柱上，60％乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70％乙醇制颗粒，干燥，压片，制成400片，每片重0.3g。
[0035] 经检测，成品中人参皂苷Rg1的含量为2.59mg/片。
[0036] 实施例3
[0037] 取钩藤780g、回心草910g、何首乌26g、黄芪260g、三七26g、山楂650g、甘草260g，取三七、何首乌、回心草加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6％，萃取压力15MPa，温度30℃，CO2流量1ml/g生药·min，萃取时间220min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入10L的60％乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率800W，萃取2次，每次10分钟，合并萃取液，浓缩，加到Dl01大孔吸附树脂柱上，60％乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70％乙醇制颗粒，干燥，压片，制成400片，每片重0.3g。
[0038] 经检测，成品中人参皂苷Rg1的含量为1.98mg/片。
[0039] 实施例4：回心康片抑制小鼠肛门肉瘤细胞S-180细胞增殖的实验研究资料[0040] 1.实验材料
[0041] 1.1实验用细胞株
[0042] 小鼠肛门肉瘤细胞S-180细胞，山东大学实验室细胞库，DMEM+10％FBS常规培养。
[0043] 1.2实验药物
[0044] 研究药物：本发明回心康片：按实施例1方法制备。
[0045] 药液储液：称取100mg回心康片，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μldoff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
[0046] 1.3实验试剂
[0047] DMEM(GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137)；胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419)；NaHC03(上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387)；Trypsin(AMRESCO 公 司 )；EDTA(AMRESCO 公 司 )；Penicillin G Sodium Salt(AMRESCO公司1)；Streptomycin Sulfate(AMRESCO)；无水乙醇(淄博亚杜兰经贸有限公司)；MTT(Biosharp批号：0793)：PBS(实验室自配)；
[0048] 1.4实验器材
[0049] 莱卡倒置显微镜(德国Leica型号：DMIL)；可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号：SPECTRAMAX 190)；C02培养箱(FORMA型号：3111)；超净台(苏净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD)；纯水仪(美国Sprlng公司型号：S/N 020579)；精密移液器(法国吉尔森公司型号：P2)；电子天平(德国赛多利斯有限公司型号：BT323S)；全自动高压灭菌锅(日本SANYO公司型号：MLS-3020)；台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号：DHG9123A)；冰箱(西门子公司型号：KG18V21TI)；液氮罐(CBS型号：2001)；低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000)；0.2μm滤器(MILLIPORE型号：SLGP033RB)；1cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司)；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
[0050] 2.实验方法
[0051] 1)L5178Y细胞用DMEM+10％FBS于37℃、5％C02进行常规培养(10cm培养皿)，当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml 0.25％胰蛋白酶-0.04％EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其4
转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×10个/ml。
转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×10个/ml。
[0052] 2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中(37℃，5％C02)常规培养。
[0053] 3)根据细胞生长情况，一般长至50％-70％，加入回心康片溶液，继续培养24h。
[0054] 4)24h后加入20μl MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，继续培养4h。
[0055] 5)4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔如入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
[0056] 6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)，每组设定6个复孔。
[0057] 7)结果以药物对细胞的抑制率表示：细胞增值抑制率(％)＝(对照孔OD值-给药孔OD值)、对照孔OD值×100％。实验重复3次。
[0058] 3.统计处理
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种伊曲茶碱原料药及其制备方法 | 2020-05-12 | 1025 |
| 一种马钱苷原料药的制备方法 | 2020-05-12 | 902 |
| 富马酸二甲酯原料药的质量检测方法 | 2020-05-12 | 798 |
| 一种效果好的降压药原料药配方 | 2020-05-13 | 137 |
| 一种制备III晶型氟康唑原料药的方法 | 2020-05-13 | 344 |
| 一种原料药合成装置 | 2020-05-11 | 884 |
| 原料药生产用盐酸罐 | 2020-05-11 | 138 |
| 一种化学原料药输出量控制设备及原料药输出控制方法 | 2020-05-12 | 29 |
| 一种生发药原料药配方 | 2020-05-11 | 710 |
| 卡格列净原料药和制剂 | 2020-05-11 | 810 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
原料药热门专利
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈