多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭MOF，是防治极其困难、死 亡率极高的人类疾病。目前现代科学还没有能够干预治疗多器官功能障碍综 合征MODS-多器官功能衰竭MOF的有效药物。

本发明公开了一种能够干预治疗多器官功能障碍综合征MODS-多器官功 能衰竭MOF的有效药物促红细胞生成素EPO抗体、EPO受体与制造方法，揭 示多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭MOF的触发启动细胞因子促 红细胞生成素EPO的分子生物调控机制的动物模型及实验方法，揭示能够干 预治疗多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭MOF的有效药物促红细 胞生成素EPO抗体、EPO受体的分子生物调控机制的动物模型及实验方法。
本发明的目的是，提供一种干预治疗多器官功能障碍综合征MODS-多器官 功能衰竭MOF的有效药物促红细胞生成素EPO抗体、EPO受体，能够通过创 造揭示多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭MOF的触发启动细胞因 子促红细胞生成素EPO的分子生物调控机制的动物模型及实验方法，与创造 揭示能够干预治疗多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭MOF的有效 药物促红细胞生成素EPO抗体、EPO受体的分子生物调控机制的动物模型及 实验方法，证实能够干预治疗多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭 MOF的有效药物促红细胞生成素EPO抗体、EPO受体的干预治疗作用机制， 与揭示EPO抗体、EPO受体相应的干预治疗分子生物调控机制。和提供一种 制造促红细胞生成素EPO抗体、EPO受体的方法。
促红细胞生成素EPO，是包括人类在内的哺乳类动物的多器官功能障碍 综合征MODS-多器官功能衰竭MOF的触发启动细胞因子；特别是它在啮齿类动 物生命机体缺氧应激表达有12~24小时持续升高增加表达峰值期、在人类生 命机体缺氧应激表达有48小时持续升高增加表达峰值期；特别是它在包括人 类在内的哺乳类动物的MODS-MOF的发生器官脑组织存在旁分泌表达细胞、 有脑神经组织细胞能够表达针对它的特异受体，“近年来已证实在脑组织中 也存在EPO受体，星状胶质细胞可能生成EPO，脑组织中的EPO可保护因 低氧或缺血造成的脑损伤并可促进神经原对抗古氨酸盐的毒性作用”；特别是 它在包括人类在内的哺乳类动物的MODS-MOF的发生器官肾组织和肝组织存 在分泌表达细胞；特别是它受体EPO受体EPO-R的PLCγ1信号传导通路， 可以使PLCγ1的酪氨酸残基磷酸化，可和机质网上的受体结合，而导致机质 网贮存钙的释放，使细胞内钙离子浓度明显升高，是能够造成缺氧细胞累积 损伤的机制；特别是它受体EPO受体EPO-R的P13K信号传导通路，可刺激 细胞的增殖和存活、也抑制细胞的凋亡，“新近有资料表明，EPO-R的激活效 应主要是抑制细胞的凋亡(具体机制尚不清楚)”。作者可以为协作相关 MODS-MOF动物模型实验的科学研究单位提供促红细胞生成素EPO。促红细胞 生成素EPO，是针对包括人类在内的哺乳类动物的伤害自我保护“应激”MODS -MOF的触发启动机制，与同时伴生的伤害自我保护“应激”有害机制累积构 成，促使“MODS-MOF发生系统”从混沌变化走向有序变化、从低级有序变化 走向高级有序变化、以及从有序变化又转化为混沌的具体机理和共同发生规 律，导致动物机体和人体发生MODS-MOF的综合生物调控网络，对包括人类在 内的哺乳类动物的MODS-MOF的发生器官组织能够造成微循环障碍，造成包 括人类在内的哺乳类动物的MODS-MOF的发生器官功能丧失或部分功能丧失、 与发生器官组织细胞损伤。创造相应的揭示多器官功能障碍综合征MODS-多器 官功能衰竭MOF的触发启动细胞因子促红细胞生成素EPO的分子生物调控机 制的动物模型及实验方法，能够揭示多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能 衰竭MOF的触发启动细胞因子促红细胞生成素EPO的分子生物调控机制。创 造相应的揭示干预治疗多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭MOF的 有效药物促红细胞生成素EPO抗体、EPO受体的分子生物调控机制的动物模 型及实验方法，能够证实干预治疗多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰 竭MOF的有效药物促红细胞生成素EPO抗体、EPO受体的干预治疗作用机制。 提供制造促红细胞生成素EPO抗体、EPO受体的方法，使相关实验能够实施。
创造相应的揭示多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭MOF的触 发启动细胞因子促红细胞生成素EPO的分子生物调控机制的动物模型及实验 方法：把促红细胞生成素EPO注射到实验动物体内，对实验动物实施快速放 血创造多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭MOF的动物模型；把促红 细胞生成素EPO抗体或EPO受体注射到实验动物体内，对实验动物实施快速 放血创造多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭MOF的动物模型。
创造相应的揭示干预治疗多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭 MOF的有效药物促红细胞生成素EPO抗体、EPO受体的分子生物调控机制的 动物模型及实验方法：对多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭MOF 的动物模型实施，注射促红细胞生成素EPO抗体或EPO受体、与输入新鲜红 细胞加吸氧加扩容等治疗方法相结合的综合治疗方法。
制造促红细胞生成素EPO抗体的方法：把促红细胞生成素EPO注射到小 鼠体内，通过免疫小鼠获得促红细胞生成素EPO抗体。
制造促红细胞生成素EPO受体的方法：克隆促红细胞生成素EPO受体的 表达基因，在原核或真核表达系统表达生产促红细胞生成素EPO受体EPO-R。

为达到上述目的，实施本发明采用的方案：
1、把促红细胞生成素EPO注射到实验动物兔体内，对实验动物实施快速 放血创造多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭MOF的动物模型。
2、把促红细胞生成素EPO抗体或EPO受体注射到实验动物兔体内，对 实验动物实施快速放血创造多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭MOF 的动物模型。
3、对多器官功能障碍综合征MODS-多器官功能衰竭MOF的动物模型实施， 注射促红细胞生成素EPO抗体或EPO受体、与输入新鲜红细胞加吸氧加扩容 等治疗方法相结合的综合治疗方法。
4、分别在0、14天给小鼠静脉或腹腔或皮下免疫接种100ug的促红细胞 生成素EPO加等量免疫佐剂，28、42天给小鼠免疫接种50ug的促红细胞生 成素EPO；1～2周后，从被促红细胞生成素EPO免疫的小鼠心脏取血，从获 取的血液——血清中提取抗促红细胞生成素EPO的特异性多克隆IgG抗体。 从被促红细胞生成素EPO免疫的小鼠脾脏中分离致敏B淋巴细胞，与小鼠骨 髓瘤细胞相融合，分离出能够表达促红细胞生成素EPO的特异IgG抗体制的 杂交瘤细胞克隆，建立杂交瘤细胞株；将106个杂交瘤细胞植入小鼠腹腔，7～10 天后收集腹水，从收集的腹水中提取抗促红细胞生成素EPO的特异单克隆IgG 抗体。应用上述方法，用人的促红细胞生成素EPO免疫小鼠，从杂交瘤细胞 的基因组中分离鉴别出鼠抗人的促红细胞生成素EPO单克隆抗体的功能性的 VL与VH基因，分别与人的抗体轻、重链恒定区基因相连接，构建人-鼠嵌合 的抗体重链和轻链基因，然后把构建的人-鼠嵌合的抗体重链和轻链基因转染 骨髓瘤细胞，使之表达DNA基因重组的人-鼠嵌合的抗人的促红细胞生成素 EPO抗体；或把构建的人-鼠嵌合的抗体重链和轻链基因，在原核或真核表达 系统表达生产DNA基因重组的人-鼠嵌合的抗人的促红细胞生成素EPO抗体； 这种嵌合有人的重链和轻链的抗人的促红细胞生成素EPO抗体、包含有人的 重链和轻链的抗人的促红细胞生成素EPO抗体，与鼠抗人的促红细胞生成素 EPO抗体相比：具有可在一定程度上减轻临床治疗中在人体内诱导的抗异种 蛋白反应。
5、克隆在鼠的染色体上的促红细胞生成素EPO受体EPO-R的表达cDNA 基因或DNA基因，在原核或真核表达系统表达生产DNA基因重组的鼠的促 红细胞生成素EPO受体EPO-R。
6、克隆在人类的染色体19P上的促红细胞生成素EPO受体EPO-R的表 达cDNA基因或DNA基因，在原核或真核表达系统表达生产DNA基因重组 的人源促红细胞生成素EPO受体EPO-R。这种人源促红细胞生成素EPO受 体EPO-R具有：可减有效轻临床治疗中在人体内诱导的抗异种蛋白反应。
               不同物种动物的MODS-MOF模型
1.1 实验动物及分组
选用清洁级健康日本大耳白兔或新西兰兔60只，体重2.5kg。实验前3～ 5天转入动物实验室喂养以适应实验环境。随机分为以下7组。
1.1.1MODS-MOF动物模型I(SDDI组，n＝12)  术前禁食12小时。称重 后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部备皮后， 分离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。首先经 股动脉注射含有150~200U/kg促红细胞生成素EPO的生理盐水3～5ml，5～10 分钟后放血相当全身血总容量40％~60％约60~80ml、使血压下降至平均动脉压 MAP＝5.33 kPa＝40mmHg，在放血中加入50U/ml肝素抗凝，造成失血性休克 维持30分钟，然后回输加入肝素抗凝的失血和相当1倍失血量的林格平衡液 复苏，而后结扎缝合手术切口。12小时后再通过耳静脉注射含有150~200U/kg 促红细胞生成素EPO的生理盐水3～5ml。每天行密切观察，必要时给予支持 治疗。(不能复苏或在24小时内死亡的动物不在SDDI组计数)
1.1.2MODS-MOF动物模型II(SDD II组，n＝12)术前禁食12小时。称重 后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部备皮后， 分离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。首先经 股动脉注射含有能够中和10~20U/kg促红细胞生成素EPO抗体或EPO受体的 生理盐水3～5ml，5～10分钟后放血相当全身血总容量40％~60％约60~80ml、使 血压下降至平均动脉压MAP＝5.33 kPa＝40mmHg，在放血中加入50U/ml肝素 抗凝，造成失血性休克维持30分钟，然后回输加入肝素抗凝的失血和相当1 倍失血量的林格平衡液复苏，而后结扎缝合手术切口。12小时后再通过耳静 脉注射含有能够中和10~20U/kg促红细胞生成素EPO抗体或EPO受体的生理 盐水3～5ml。每天行密切观察，必要时给予支持治疗。(不能复苏或在24小时 内死亡的动物不在SDDII组计数)
1.1.3MODS-MOF动物模型对照动物组I(CONI组，n＝8)  术前禁食12小 时。称重后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部 备皮后，分离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。 首先经股动脉注射含有150~200U/kg促红细胞生成素EPO的生理盐水3～5ml， 在与MODS-MOF动物模型组I的相同时间内输入相当MODS-MOF动物模型组I 的1倍失血量的林格平衡液，而后结扎缝合手术切口。12小时后再通过耳静 脉注射含有150~200U/kg促红细胞生成素EPO的生理盐水3～5ml。
1.1.4MODS-MOF动物模型对照动物组II(CONII组，n＝8)  术前禁食12小 时。称重后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部 备皮后，分离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。 首先经股动脉注射含有能够中和10~20U/kg促红细胞生成素EPO抗体或EPO 受体的生理盐水3～5ml，在与MODS-MOF动物模型组II的相同时间内输入相当 MODS-MOF动物模型组II的1倍失血量的林格平衡液，而后结扎缝合手术切口。 12小时后再通过耳静脉注射含有能够中和10~20U/kg促红细胞生成素EPO抗 体或EPO受体的生理盐水3～5ml。
1.1.5MODS-MOF动物模型对照动物组III(CONIII，n＝8)术前禁食12小 时。称重后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部 备皮后，分离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。 首先经股动脉注射生理盐水3～5ml，5～10分钟后放血相当全身血总容量 40％~60％约60~80ml、使血压下降至平均动脉压MAP＝5.33 kPa＝40mmHg，在 放血中加入50U/ml肝素抗凝，造成失血性休克维持30分钟，然后回输加入 肝素抗凝的失血和相当1倍失血量的林格平衡液复苏，而后结扎缝合手术切 口。12小时后再通过耳静脉注射生理盐水3～5ml。每天行密切观察，必要时 给予支持治疗。
1.1.6正常动物组手术损伤I(AI组，n＝8)术前禁食12小时。称重后给 予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部备皮后，分离 一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。首先经股动 脉注射生理盐水3～5ml，生理盐水3～5ml，在与MODS-MOF动物模型组相同时 间内输入相当MODS-MOF动物模型组1倍失血量的林格平衡液，而后结扎缝合 手术切口。12小时后再通过耳静脉注射生理盐水3～5ml。
1.1.7正常动物手术损伤组II(AII组，n＝4)  术前禁食12小时。称重后给 予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部备皮后，分离 一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，在与MODS-MOF动物模型组相同 时间内结扎缝合手术切口。12小时后再通过耳静脉注射生理盐水3～5ml。
1.2观察指标及方法
1.2.1针对以上各组动物各器官功能指标观察经颈动脉插管测量血压，并 采血作血气分析、肝肾功、血常规、和电解质检查。
1.2.2以上各组动物出现动物在24小时后死亡时，要迅速解剖动物取出内 脏各个器官；当其中有一组动物死亡到第4只动物时，乙醚麻醉处死各组的 所有动物，要迅速解剖动物取出内脏各个器官。把迅速解剖动物取出的内脏 各个器官切为1cm×1cm×0.4cm小块，置于2％多聚甲醛、0.5％戊二醛、0.2％ 苦味酸、0.1mol/L磷酸缓冲液的4℃固定液中固定浸泡4~6小时后，用PBS 液漂洗5次，每次20分钟后；置于1％~2％锇酸、0.1mol/L磷酸缓冲液的4℃ 固定液中固定4~6小时后，用4℃双蒸馏水冲洗3次，每次1小时；做脱水 处理。对每一个固定好的动物器官组织做扫描电镜、或透射电镜连续断层切 片。
1.2.3应用扫描电镜、或透射电镜对比分析观察在各组动物内脏各个器官发 生存在的，组织形态学、细胞形态学、亚细胞细胞器形态学的MODS-MOF生理 /病理发生状况。(1)、揭示MODS-MOF发生器官功能障碍、和组织细胞损伤、 和组织细胞凋亡的，与触发启动细胞因子促红细胞生成素EPO相关的细胞损 伤、或抑制细胞凋亡保护的生物机制；(2)、揭示MODS-MOF发生器官功能障 碍、和组织细胞损伤、和组织细胞凋亡的，与触发启动细胞因子促红细胞生 成素EPO抗体、EPO受体相关的细胞损伤、或造成细胞凋亡的生物机制。
其它不同物种的非灵长类哺乳实验动物如豚鼠、小鼠、大鼠、狗、猪、 羊等与灵长类哺乳实验动物如猕猴、狒狒等的MODS-MOF模型，参照与上法相 同的方法予以实施。
             相关实验MODS-MOF动物模型简化方案1
1.1实验动物及分组与实验检测对比分析方法，参考上述“不同物种动物的 MODS-MOF模型”实施。
1.1.1MODS-MOF动物模型I(SDDI组，n＝12)  术前禁食12小时。称重 后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，腹部备皮后，用电刀 切开腹部分离肝的、或肾的、或脾的、或小肠的动脉和静脉血管。首先经动 脉(肝的门静脉)注射含有10~15U促红细胞生成素EPO的生理盐水3～5ml 后，立刻用无损伤止血钳关闭该器官的动脉和静脉血管20~30分钟后开放血 管，再缓慢注射含有15~20U/促红细胞生成素EPO的生理盐水5～10ml约 50～100分钟后止血，缝合手术切口。每天行密切观察，必要时给予支持治疗。 (不能复苏或在24小时内死亡的动物不在SDDI组计数)
1.1.2MODS-MOF动物模型II(SDDII组，n＝12)  术前禁食12小时。称重 后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，用电刀切开腹部分离 肝的、或肾的、或脾的、或小肠的动脉和静脉血管。首先经动脉(肝的门静 脉)注射含有能够中和10~15U促红细胞生成素EPO抗体或EPO受体的生理 盐水3～5ml后，立刻用无损伤止血钳关闭该器官的动脉和静脉血管20~30分 钟后开放血管，再缓慢注射含有能够中和15~20U/促红细胞生成素EPO或EPO 受体的生理盐水5～10ml约50～100分钟后止血，缝合手术切口。每天行密切 观察，必要时给予支持治疗。(不能复苏或在24小时内死亡的动物不在SDD II组计数)
1.1.3MODS-MOF动物模型对照动物组I(CONI组，n＝8)  术前禁食12小 时。称重后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，用电刀切开 腹部分离肝的、或肾的、或脾的、或小肠的动脉和静脉血管。首先经动脉(肝 的门静脉)注射生理盐水3～5ml后，立刻用无损伤止血钳关闭该器官的动脉 和静脉血管20~30分钟后开放血管，再缓慢注射生理盐水5～10ml约50～100 分钟后止血，缝合手术切口。
1.1.4MODS-MOF动物模型对照动物组II(CONII组，n＝8)  术前禁食12小 时。称重后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，用电刀切开 腹部分离肝的、或肾的、或脾的、或小肠的动脉和静脉血管。在与MODS-MOF 动物模型相同时间内缝合手术切口。
1.2观察指标及方法
1.2.1针对以上各组动物各器官功能指标观察、尤其是在实施手术的那个器 官功能指标观察  经颈动脉插管测量血压，并采血作血气分析、肝肾功、血 常规、和电解质检查。
1.2.2以上各组动物出现动物在24小时后死亡时，要迅速解剖动物取出内 脏各个器官；当其中有一组动物死亡到第4只动物时，乙醚麻醉处死各组的 所有动物，要迅速解剖动物取出内脏各个器官。把迅速解剖动物取出的内脏 各个器官切为1cm×1cm×0.4cm小块，置于2％多聚甲醛、0.5％戊二醛、0.2％ 苦味酸、0.1mol/L磷酸缓冲液的4℃固定液中固定浸泡4~6小时后，用PBS 液漂洗5次，每次20分钟后；置于1％~2％锇酸、0.1mol/L磷酸缓冲液的4℃ 固定液中固定4~6小时后，用4℃双蒸馏水冲洗3次，每次1小时；做脱水 处理。对每一个固定好的动物器官组织做扫描电镜、或透射电镜连续断层切 片。
1.2.3应用扫描电镜、或透射电镜对比分析观察在各组动物内脏各个器官发 生存在的、尤其是在实施手术的那个器官发生存在的，组织形态学、细胞形 态学、亚细胞细胞器形态学的MODS-MOF生理/病理发生状况。(1)、揭示 MODS-MOF发生器官尤其是在实施手术的那个器官的功能障碍、和组织细胞损 伤、和组织细胞凋亡的，与触发启动细胞因子促红细胞生成素EPO相关的细 胞损伤、或抑制细胞凋亡保护的生物机制；(2)、揭示MODS-MOF发生器官尤 其是在实施手术的那个器官的功能障碍、和组织细胞损伤、和组织细胞凋亡 的，与触发启动细胞因子促红细胞生成素EPO抗体、EPO受体相关的细胞损 伤、或造成细胞凋亡的生物机制。
其它不同物种的非灵长类哺乳实验动物如豚鼠、小鼠、大鼠、狗、猪、 羊等与灵长类哺乳实验动物如猕猴、狒狒等的MODS-MOF模型，参照与上法相 同的方法予以实施。
          相关实验MODS-MOF动物模型简化方案2
1.1实验动物应用体重350g~400g的不同个体之间体重相差尽可能小的近交 系大鼠，其分组与实验检测对比分析方法，参考上述“不同物种动物的 MODS-MOF模型”实施。
1.1.1MODS-MOF动物模型I(SDDI组，n＝24)  术前禁食12小时。称重 后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥45mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部备皮后， 分离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。首先经 股动脉注射含有150~200U/kg促红细胞生成素EPO的生理盐水1～2ml，5～10 分钟后放血相当全身血总容量40％~60％约10~15ml、使血压下降至平均动脉压 MAP＝5.33 kPa＝40mmHg，在放血中加入50U/ml肝素抗凝，造成失血性休克 维持2小时，然后回输加入肝素抗凝的失血和相当1倍失血量的林格平衡液 复苏，而后结扎缝合手术切口。12小时后再通过尾静脉注射含有150~200U/kg 促红细胞生成素EPO的生理盐水1～2ml。每天行密切观察，必要时给予支持 治疗。(不能复苏或在24小时内死亡的动物不在SDDI组计数)
1.1.2MODS-MOF动物模型II(SDDII组，n＝24)  术前禁食12小时。称重 后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥45mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部备皮后， 分离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。首先经 股动脉注射含有能够中和10~20U/kg促红细胞生成素EPO抗体或EPO受体的 生理盐水1～2ml，5～10分钟后放血相当全身血总容量40％~60％约10~15ml、使 血压下降至平均动脉压MAP＝5.33 kPa＝40mmHg，在放血中加入50U/ml肝素 抗凝，造成失血性休克维持2小时，然后回输加入肝素抗凝的失血和相当1 倍失血量的林格平衡液复苏，而后结扎缝合手术切口。12小时后再通过尾静 脉注射含有能够中和10~20U/kg促红细胞生成素EPO抗体或EPO受体的生理 盐水1～2ml。每天行密切观察，必要时给予支持治疗。(不能复苏或在24小时 内死亡的动物不在SDDII组计数)
1.1.3MODS-MOF动物模型对照动物组I(CONI组，n＝24)  术前禁食12小 时。称重后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥45mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部 备皮后，分离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。 首先经股动脉注射含有150~200U/kg促红细胞生成素EPO的生理盐水1～2ml， 在与MODS-MOF动物模型组I的相同时间内输入相当MODS-MOF动物模型组I 的1倍失血量的林格平衡液，而后结扎缝合手术切口。12小时后再通过尾静 脉注射含有150~200U/kg促红细胞生成素EPO的生理盐水1～2ml。
1.1.4MODS-MOF动物模型对照动物组II(CONII组，n＝24)  术前禁食12小 时。称重后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥45mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部 备皮后，分离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。 首先经股动脉注射能够中和10~20U/kg促红细胞生成素EPO抗体或EPO受体 的生理盐水1～2ml，在与MODS-MOF动物模型组II的相同时间内输入相当 MODS-MOF动物模型组II的1倍失血量的林格平衡液，而后结扎缝合手术切口。 12小时后再通过尾静脉注射含有能够中和10~20U/kg促红细胞生成素EPO抗 体或EPO受体的生理盐水1～2ml。
1.1.5MODS-MOF动物模型对照动物组III(CONIII，n＝24)  术前禁食12小 时。称重后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥45mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部 备皮后，分离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。 首先经股动脉注射生理盐水1～2ml，5～10分钟后放血相当全身血总容量 40％~60％约10~15ml、使血压下降至平均动脉压MAP＝5.33 kPa＝40mmHg，在 放血中加入50U/ml肝素抗凝，造成失血性休克维持2小时，然后回输加入肝 素抗凝的失血和相当1倍失血量的林格平衡液复苏，而后结扎缝合手术切口。 12小时后再通过尾静脉注射生理盐水1～2ml。每天行密切观察，必要时给予 支持治疗。
1.1.6正常动物组手术损伤I(AI组，n＝24)  术前禁食12小时。称重后 给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥45mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部备皮后，分 离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。首先经股 动脉注射生理盐水1～2ml，在与MODS-MOF动物模型组相同时间内输入相当 MODS-MOF动物模型组1倍失血量的林格平衡液，而后结扎缝合手术切口。12 小时后再通过尾静脉注射生理盐水1～2ml。
1.1.7正常动物手术损伤组II(AII组，n＝24)  术前禁食12小时。称重后 给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥45mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部备皮后，分 离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，在与MODS-MOF动物模型组相 同时间内结扎缝合手术切口。12小时后再通过尾静脉注射生理盐水1～2ml。
1.2观察指标及方法
1.2.1针对以上各组动物分别在开始实施手术后的15分钟、30分钟、60分 钟、2小时、8小时、24小时、72小时各自抽取3只动物的各器官功能指标 观察经颈动脉插管测量血压，并采血作血气分析、肝肾功、血常规、和电 解质检查。并应用大鼠生物芯片对采血，分别检测各组实验动物模型血液成 分，在不同时间发生进程各种分子物质发生的上调变化或下调变化；分析揭 示促红细胞生成素EPO、EPO抗体或EPO受体在MODS-MOF综合体液分子生 物调控网络的分子生物调控机制，分析揭示促红细胞生成素EPO、或EPO受 体在MODS-MOF综合体液分子生物调控网络的分子生物表达机制，分析揭示在 MODS-MOF综合体液分子生物调控网络的各个分子生物调控机制。乙醚麻醉处 死各自抽取的3只动物，要迅速解剖动物取出内脏各个器官。把迅速解剖动 物取出的内脏各个器官切为1cm×1cm×0.4cm小块，置于2％多聚甲醛、0.5％ 戊二醛、0.2％苦味酸、0.1mol/L磷酸缓冲液的4℃固定液中固定浸泡4~6小 时后，用PBS液漂洗5次，每次20分钟后；置于1％~2％锇酸、0.1mol/L磷酸 缓冲液的4℃固定液中固定4~6小时后，用4℃双蒸馏水冲洗3次，每次1 小时；做脱水处理。对每一个固定好的动物器官组织做扫描电镜、或透射电 镜连续断层切片。
1.2.2对动物器官组织做的扫描电镜、或透射电镜连续断层切片分为3组。 分别应用抗大鼠的红细胞生成素EPO抗体、抗大鼠的红细胞生成素EPO受体 的抗体、抗大鼠的红细胞生成素EPO受体mRNA的抗体，分别做能够检测组 织细胞的大鼠的红细胞生成素EPO生物表达、大鼠的红细胞生成素EPO受体 生物表达、大鼠的红细胞生成素EPO受体mRNA生物表达组织切片的免疫组 织化学处理。
1.2.3应用扫描电镜、或透射电镜对比分析观察在各组动物内脏各个器官发 生存在的，组织形态学、细胞形态学、亚细胞细胞器形态学的MODS-MOF生理 /病理发生状况。(1)、揭示MODS-MOF发生器官功能障碍、和组织细胞损伤、 和组织细胞凋亡的，与触发启动细胞因子促红细胞生成素EPO相关的细胞损 伤、或抑制细胞凋亡保护的生物机制；(2)、揭示MODS-MOF发生器官功能障 碍、和组织细胞损伤、和组织细胞凋亡的，与触发启动细胞因子促红细胞生 成素EPO抗体、EPO受体相关的细胞损伤、或造成细胞凋亡的生物机制。
              相关实验MODS-MOF动物模型简化方案3
1.1实验动物应用体重250g的不同个体之间体重相差尽可能小的近交系大 鼠，或应用体重25g的不同个体之间体重相差尽可能小的近交系小鼠，其分 组与实验检测对比分析方法，参考上述“不同物种动物的MODS-MOF模型”实 施。
1.1.1MODS-MOF动物模型(SDD组，n＝36)  术前禁食12小时。称重后 给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥45mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部备皮后，分 离两侧颈动脉一侧股动脉。首先经股动放血相当全身血总容量40％~60％约 5.5~9.6ml或约0.8~1.2ml、使血压下降至平均动脉压MAP＝5.33 kPa＝40mmHg 后结扎两侧颈动脉维持8分钟后开放，在放血中加入50U/ml肝素抗凝，造成 失血性休克维持8分钟，然后回输加入肝素抗凝的失血和相当1倍失血量的 林格平衡液复苏，而后结扎缝合手术切口。每天行密切观察，必要时给予支 持治疗。(不能复苏或在24小时内死亡的动物不在SDD组计数)
1.1.2MODS-MOF动物模型对照动物组I(CONI组，n＝36)  术前禁食12小 时。称重后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥45mg/kg腹腔内麻醉，分离两侧颈 动脉一侧股动脉。维持10分钟后缝合手术切口。
1.1.3MODS-MOF动物模型对照动物组II(CONII组，n＝36)  术前禁食12小 时。称重后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥45mg/kg腹腔内麻醉。
1.2观察指标及方法
1.2.1针对以上各组动物分别在MODS-MOF动物模型开始实施结扎两侧颈动 脉手术后的3分钟、5分钟、10分钟、15分钟、45分钟、2小时、5小时、 12小时、24小时、48小时各自抽取3只动物的各器官功能指标观察经颈动 脉插管测量血压，并采血作血气分析、肝肾功、血常规、和电解质检查。并 应用大鼠或小鼠生物芯片对采血分别检测各组实验动物模型血液成分，在不 同时间发生进程各种分子物质发生的上调变化或下调变化；分析揭示促红细 胞生成素EPO、或EPO受体在MODS-MOF综合体液分子生物调控网络的分子 生物调控机制，分析揭示促红细胞生成素EPO、或EPO受体在MODS-MOF综 合体液分子生物调控网络的表达机制，分析揭示在MODS-MOF综合体液分子生 物调控网络的各个分子生物调控机制。断头处死各自抽取的3只动物，要迅 速把断头置于液氮中冷冻处理后，剥离取出脑组织切为1cm×1cm×0.4cm小 块，要迅速解剖动物取出内脏各个器官切为1cm×1cm×0.4cm小块。置于2％ 多聚甲醛、0.5％戊二醛、0.2％苦味酸、0.1mol/L磷酸缓冲液的4℃固定液中 固定浸泡4~6小时后，用PBS液漂洗5次，每次20分钟后；置于1％~2％锇酸、 0.1mol/L磷酸缓冲液的4℃固定液中固定4~6小时后，用4℃双蒸馏水冲洗 3次，每次1小时；做脱水处理。对每一个固定好的动物器官组织做扫描电镜、 或透射电镜连续断层切片。
1.2.2对动物器官组织做的扫描电镜、或透射电镜连续断层切片分为3组。 分别应用抗大鼠或抗小鼠的红细胞生成素EPO抗体、抗大鼠或抗小鼠的红细 胞生成素EPO受体的抗体、抗大鼠或抗小鼠的红细胞生成素EPO受体mRNA 的抗体，分别做能够检测组织细胞的大鼠或小鼠的红细胞生成素EPO生物表 达、大鼠或小鼠的红细胞生成素EPO受体生物表达、大鼠或小鼠的红细胞生 成素EPO受体mRNA生物表达组织切片的免疫组织化学处理。
 1.2.3应用扫描电镜、或透射电镜对比分析观察在各组动物内脏各个器官发 生存在的、尤其是在实施手术的脑组织器官发生存在的，组织形态学、细胞 形态学、亚细胞细胞器形态学的MODS-MOF生理/病理发生状况。(1)、揭示 MODS-MOF发生器官尤其是在实施手术的脑组织器官的功能障碍、和组织细胞 损伤、和组织细胞凋亡的，与触发启动细胞因子促红细胞生成素EPO相关的 细胞损伤、或抑制细胞凋亡保护的生物机制；(2)、揭示MODS-MOF发生器官 尤其是在实施手术的脑组织器官的功能障碍、和组织细胞损伤、和组织细胞 凋亡的，与触发启动细胞因子促红细胞生成素EPO受体相关的细胞损伤、或 造成细胞凋亡的生物机制。
            相关实验MODS-MOF动物模型简化方案4
1.1实验动物及分组
选用清洁级健康日本大耳白兔或新西兰兔36只，体重2.5kg。实验前3～ 5天转入动物实验室喂养以适应实验环境。随机分为以下3组。
1.1.1MODS-MOF动物模型I(SDDI组，n＝12)  术前禁食12小时。称重 后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部备皮后， 分离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。首先经 股动脉放血相当全身血总容量40％~60％约60~80ml、使血压下降至平均动脉压 MAP＝5.33 kPa＝40mmHg，在放血中加入50U/ml肝素抗凝，造成失血性休克 维持2小时，然后回输加入肝素抗凝的失血和相当1倍失血量的林格平衡液 复苏，而后结扎缝合手术切口。(不能复苏或在24小时内死亡的动物不在SDDI 组计数)静脉输入动物全身血容量20％～30％新鲜红细胞加吸氧加扩容，静脉 或腹腔注射含有能够中和10~20U/kg促红细胞生成素EPO抗体或EPO受体的 生理盐水5～10ml，每日2次。
1.1.2MODS-MOF动物模型II(SDD II组，n＝12)  术前禁食12小时。称重 后给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部备皮后， 分离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。首先经 股动脉放血相当全身血总容量40％~60％约60~80ml、使血压下降至平均动脉压 MAP＝5.33 kPa＝40mmHg，在放血中加入50U/ml肝素抗凝，造成失血性休克 维持2小时，然后回输加入肝素抗凝的失血和相当1倍失血量的林格平衡液 复苏，而后结扎缝合手术切口。(不能复苏或在24小时内死亡的动物不在SDD II组计数)静脉输入动物全身血容量20％～30％新鲜红细胞加吸氧加扩容，静 脉或腹腔注射生理盐水3～5ml，每日2次。
1.1.3MODS-MOF动物模型III(SDDIII，n＝12)  术前禁食12小时。称重后 给予乙醚轻度麻醉或戊巴比妥30mg/kg腹腔内麻醉，颈部及腹部备皮后，分 离一侧颈动脉和股动脉。颈动脉插管测量血压，股动脉插管备用。首先经股 动脉放血相当全身血总容量40％~60％约60~80ml、使血压下降至平均动脉压MAP ＝5.33 kPa＝40mmHg，在放血中加入50U/ml肝素抗凝，造成失血性休克维持 2小时，然后回输加入肝素抗凝的失血和相当1倍失血量的林格平衡液复苏， 而后结扎缝合手术切口。(不能复苏或在24小时内死亡的动物不在SDDIII计 数)静脉或腹腔注射生理盐水3～5ml，每日2次。
1.2观察指标及方法
1.2.1针对以上各组动物各器官功能指标观察经颈动脉插管测量血压，并 采血作血气分析、肝肾功、血常规、和电解质检查。
1.2.2以上各组动物出现动物在24小时后死亡时，要迅速解剖动物取出内 脏各个器官；当其中有一组动物死亡到第4只动物时，乙醚麻醉处死各组的 所有动物，要迅速解剖动物取出内脏各个器官。把迅速解剖动物取出的内脏 各个器官切为1cm×1cm×0.4cm小块，置于2％多聚甲醛、0.5％戊二醛、O.2％ 苦味酸、0.1mol/L磷酸缓冲液的4℃固定液中固定浸泡4~6小时后，用PBS 液漂洗5次，每次20分钟后；置于1％~2％锇酸、0.1mol/L磷酸缓冲液的4℃ 固定液中固定4~6小时后，用4℃双蒸馏水冲洗3次，每次1小时；做脱水 处理。对每一个固定好的动物器官组织做扫描电镜、或透射电镜连续断层切 片。
1.2.3应用扫描电镜、或透射电镜对比分析观察在各组动物内脏各个器官发 生存在的，组织形态学、细胞形态学、亚细胞细胞器形态学的MODS-MOF生理 /病理发生状况。(1)、揭示MODS-MOF发生器官功能障碍、和组织细胞损伤、 和组织细胞凋亡的，与触发启动细胞因子促红细胞生成素EPO相关的细胞损 伤、或抑制细胞凋亡保护的生物机制；(2)、揭示MODS-MOF发生器官功能障 碍、和组织细胞损伤、和组织细胞凋亡的，与触发启动细胞因子促红细胞生 成素EPO抗体、EPO受体相关的细胞损伤、或造成细胞凋亡的生物机制。
寻找出能够早期干预治疗MODS-MOF的最佳有效治疗机制方案，为临床有 效珍疗MODS-MOF干预治疗机制、方法及药物提供相关科学依据。
其它不同物种的非灵长类哺乳实验动物如豚鼠、小鼠、大鼠、狗、猪、 羊等与灵长类哺乳实验动物如猕猴、狒狒等的MODS-MOF模型，参照与上法相 同的方法予以实施。