本发明涉及含有酶和改进了的酶稳定剂的液态组合物。

含酶液体的储存稳定性问题是人们熟知的。特别是在含酶液态 洗涤剂中(尤其当此洗涤剂含有蛋白酶时)，一个主要问题是长时间 内保证酶活性。

现有技术中已为提高储存稳定性做了大量工作，例如通过加入 蛋白酶抑制剂。

已知硼酸和一烃硼酸(boronic acid)可逆性地抑制蛋白水解酶。 Molecular & Cellular Biochemistry51，1983，P.5—32中论讨了一烃基 硼酸对一种丝氨酸蛋白酶—枯草杆菌蛋白酶—的抑制作用。

作为枯草杆菌蛋白酶抑制剂，一烃基硼酸的性能差别很大。只含 烷基如甲基、丁基或2—环己基乙基的一烃基硼酸是弱抑制剂，甲基 硼酸是最弱的抑制剂；而带有芳基如苯基、4—甲氧苯基、3，5—二氯 苯基的一烃基硼酸是非常好的抑制剂，3，5—二氯苯基硼酸是尤其有 效的一种(见Keller等，Biochem.Biophys.Res.Com.176，1991，P401— 405)。

有专利还指出相对硼的3—位有取代的芳基硼酸是出人意料的 良好的可逆性蛋白酶抑制剂。特别指出乙酰氨基苯基硼酸是蛋白水 解酶的极佳抑制剂(见WO92/19707)。

抑制常数(Ki)常用来恒量抑制酶活性的能力，Ki值越低表示抑 制剂越强。但早先已发现一烃基硼酸的Ki值不总说明抑制剂的效力 如何(例如参见WO92/19707)。

本发明中令人惊异地发现某些特定的一烃基硼酸和二烃基硼酸 (borinic avcid)衍生物作为酶稳定剂具有异乎寻常的优异性能。

从而，本发明涉及含有酶和作为酶稳定剂的下式一烃基硼酸或 二烃基硼酸衍生物的液态组合物：

其中R1为含14—18个环碳原子的可任意取代的稠合芳环结 构，或含至多17个环碳原子的可任意取代的单环或稠合芳杂环结 构，或含至多18个环碳原子的可任意取代的单环或稠合醌型环结 构； R2为下式基因： 其中X相同或不同，选自氢、C1-6烷基、取代的C1-6烷基、芳基、取代 芳基、羟基、羟基衍生物、卤原子、胺、烷基化胺、胺衍生物、硝基、硫 醇、硫醇衍生物、醛、酸、酸盐、酯、磺酸酯或瞵酸酯，o、p和q可相同 或不同，各自可为0.1或2；m和n可相同或不同，各自可为0或1； R3与R1相同或不同，选自R1，或R3为羟基，或R1和R3均为可任意 取代的单环或双环芳环结构。

在本文中，可任意取代的环结构指该环结构上的取代基可自由 选择，但优先选自氢、C1-6烷基、取代的C1-6烷基、芳基、取代芳基、 羟基、羟基衍生物、卤原子、胺、烷基化胺、胺衍生物、硝基、硫醇、硫醇 衍生物、醛、酸、酸盐、酯、磺酸酯或膦酸酯。 一烃基硼酸和二烃基硼酸衍生物的制备

一烃基硼酸和二烃基硼酸衍生物可通过本领域技术人员熟知的 方法来制备，例如用下列方法之一：

a)不饱和物质即烯烃和炔用儿茶硼烷(1，3，2苯并二氧杂硼杂 茂)或二氯硼烷—二甲基化硫复合物作为硼氢化剂进行硼氢化反应， 参见H.C.Brown，S.K.Gupta JACS 97，1975，P5249—5255和H.C. Brown，N.Ravindran，S.U.Kuikarni J.Org.Chem.45(1980)，P.384。

b)格氏试剂与硼酸三正丁基酯或硼酸三甲基酯反应，然后水解 所形式的一烃基硼酸酯，参见F.R.Bean，J.R.Johnson JACS 54， 1932，P.4415—4425和S.H.Dandegaonher，S.P.Ingleshwar Journal of shivasi University 6，1932，P.11—13。没有市场供应的溴代起始物可 经两步方便地从相应羧酸制得：用LiAlH4还原，然后用CBr4处理。

c)有机锂试剂与硼酸丁酯反应，参见S.O.Lanesson Thiophene Chemistry，第7部分，第387—395页，和D.Florentin，B.Roques C.R- .Acad.sc.Paris t.270(1970年5月11日)，P1608—1610。

d)按方法b制备二烃基硼酸衍生物。但所用格氏试剂与硼酸酯 的比率为2∶1。

e)任何核取代或功能团保护均采用本领域技术人员熟知的标准 方法进行。 稳定剂

根据本发明，液态组合物所含高达500mM的稳定剂(一烃基硼 酸或二烃基硼酸衍生物)，优选液态组合物含0.001—250mM的稳定 剂，更优选液态组合物含0.005—100mM的稳定剂，最优选液态组合 物含0.01—10mM的稳定剂。 酶：

根据本发明，液态组合物中至少含有一种酶。可以是任何有商业 供应的酶，尤其是选自蛋白酶、淀粉酶、脂酶、纤维素酶或过氧化物酶 及它们的任意混合物的酶。相同种类(如脂酶)的酶混合物也包括在 内。

组合物中所用酶的量可根据酶的种类及应用目的而变化。如果 该液体是洗涤液，那么各种酶的典型含量为0.2—40μM，尤其是0.4 —20μM(一般为5—1000mg/l，尤其是10—500mg/l)，均以纯酶蛋白 计。

蛋白酶：任何适于在液态组合物中使用的蛋白酶均可使用。适宜 蛋白酶包括那些动物、植物或微生物来源的蛋白酶。微生物来源的酶 是优选的。包括发生化学或遗传改变的突变型。它可以是丝氨酸蛋 白酶，碱性微生物蛋白酶或类胰蛋白酶蛋白酶更好。碱性蛋白酶的例 子是枯草杆菌蛋白酶，尤其是从芽孢杆菌属衍生来的那些，如枯草杆 菌蛋白酶NoVo、枯草杆菌蛋白酶Cartsberg、枯草杆菌蛋白酶309、枯 草杆菌蛋白酶147及枯草杆菌蛋白酶168(描述于WO89/06279 中)。有商业供应的芽孢杆菌属枯草杆菌蛋白酶的例子有Alcalase 、Savinase、Esperase及Durazym等Novo Nordisk A/S的产 品。胰蛋白酶类蛋白酶的例子是胰蛋白酶(如猪或牛来源的)和镰刀 菌属蛋白酶(WO89/06270中有述)。

淀粉酶：任何适用于液态组合物中的淀粉酶均可使用。适宜的淀 粉酶包括那些细菌和真菌来源的酶。包括那些发生化学或遗传学改 变的突变型。如，淀粉酶包括从地衣芽孢杆菌的一个特殊菌株中获得 的α—淀粉酶(英国专利说明书第1,296,839号对其有更详尽说明) 更优选的是可从Novo Nordisk A/S得到的Termamyl。

脂酶：任何适用于液态组合物的脂酶均可使用。适用的脂酶包括 那些细菌及真菌来源的酶。发生化学或遗传学改变的突变型也包括 在内。通过克隆柔毛腐殖霉H.lanuginosa的基因并在米曲霉中表达 而得到的脂酶是尤为优选的(EP 0,258,068中对其有说明)，Novo Nordisk A/S以商标Lipolase供应。

纤维素酶：任何适用于液态组合物的纤维素酶均可使用。适宜的 纤维素酶包括那些细菌及真菌来源的酶。发生化学或遗传学改变的 突变型也包括在内。US4,435,307揭示了适宜的纤维素酶。腐殖霉 H.insolens的一个菌株所产生的CelluzymeTM是尤为优选的，由Novo NordiskA/S供应。

过氧化物酶：任何适用于液态洗涤剂组合物中的过氧化物酶可 应用于此。适宜的过氧化物酶包括那些植物、细菌及真菌来源的酶。 发生化学或遗传学改变的突变型也包括在内。适宜的过氧化物酶的 例子是从鬼伞属的菌株如灰盖鬼伞属，或长根鬼伞属衍生来的或从 芽孢杆菌属的菌株如短小芽孢杆菌衍生来的过氧化物酶，尤其是 PCT/DK90/00260中的过氧化物酶。 洗涤剂：

如果本发明的液态组合物是一种洗涤剂，那么除了酶和稳定剂 外还含有表面活性剂。

液体洗涤剂可以是水型的。典型地含70％的水和0—30％的有 机溶剂，也可是非水型的。

洗涤剂组合物中含一种或多种表面活性剂，每种都可以是阴离 子、非离子、阳离子或两性离子型。通常洗涤剂含有0—50％的阴离 子表面活性剂如线性烷基苯磺酸盐(LAS)，α—烯属磺酸盐(AOS)，烷 基硫酸盐(脂肪醇硫酸酯)，乙氧基化醇硫酸酯(AEOS或AFS)，二级 烷磺酸盐(SAS)，α—磺基脂酸甲酯，烷基或烯基琥珀酸或皂。还可以 含0—40％的非离子表面活性剂如醇乙氧基化物(AEO或AE)，羧基 化醇的乙氧基化物，壬基酚乙氧基化物，烷基聚乙二醇甙，烷基二甲 胺氧化物，乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺，脂肪酸单乙醇酰胺，或多经 基烷基脂肪酸酰胺(如WO92/06154中所述)。

洗涤剂中可含有1—65％的洗涤剂助洗剂或配合剂如沸石、二 磷酸盐、三磷酸盐、膦酸盐、柠檬酸盐、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺 四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTMPA)、烷基或烯基琥珀 酸、可溶性硅酸盐或层叠式硅酸盐(如从Hoechst得到的SKS—6)。洗 涤剂可以是不带助洗剂的，即基本上不含洗涤剂助洗剂。

洗涤剂可含一种或多种聚合物。例如：羧甲基纤维素(CMC)、聚 (乙烯基吡咯烷酮)(PVP)、聚乙二醇(PEG)、聚(乙烯基醇)(PVA)、多 羧基化物如聚丙烯酸、马来酸/丙烯酸共聚物和异丁烯酸月桂基酯/ 丙烯酸共聚物。

洗涤剂可含有漂白系统，其中可包括H2O2源如过硼酸盐或过碳 酸盐，它们可以和过酸形成型漂白活化剂如四乙酰乙二胺(TAED)或 壬酰氧基苯磺酸盐(NOBS)结合使用。或者漂白系统可含有过氧酸如 酰胺、酰亚胺、或砜类。

本发明的洗涤剂组合物中的酶可用常规的稳定剂来稳定，如丙 二醇或甘油之类的多羟基化合物、糖或糖醇、乳酸、硼酸、或硼酸衍生 物如硼酸芳酯，此组合物可按WO.92/19709和WO92/19708中所述 方法配制。

该洗涤剂中还可含有其他洗涤剂常规组分如包括粘土的织物调 理剂、泡沫促进剂、抑泡剂、防腐剂、污垢悬浮剂、防污垢再沉剂、染 料、杀菌剂、荧光增白剂、或香味剂。

PH值(在使用浓度的水溶液中测定)通常为中性或碱性，如7— 11。

本发明范围内的特定洗涤剂组合物包括： 1)水型液态洗涤剂组合物含有： —线性烷基苯磺酸盐(按酸计算)               15—21％ —醇乙基氧化物，(如C12-15醇、7个

EO或C12—15醇，5个EO)                  12—18％

—脂肪酸皂(如油酸)                     3—13％

—烯基琥珀酸(C12—14)                  0—13％

—氨基乙醇                             8—18％

—柠檬酸                               2—8％

—膦酸盐                               0—3％

—聚合物(如PVP.PEG)                    0—3％

—硼酸盐(B4O7计)                    0—2％

—乙醇                                 0—3％

—丙二醇                                     8—14％

—酶                                          0—5％

—微量成份                                    0—5％

(如分散剂，抑泡剂，香味剂，荧光增白剂)。 2)水型结构化液体洗涤剂组合物，包括：

—线性烷基苯磺酸盐(按酸计)                  15—21％

—醇乙氧基化物(如C12-15醇，

含7个EO或C12-15醇，5个EO)                     3—9％

—脂肪酸皂(如油酸)                           3—10％

—沸石(如NaAlSiO4)                         14—22％

—柠檬酸钾                                   9—18％

—硼酸盐(以B4V7计)                         0—2％

—羧甲基纤维素                                0—2％

—聚合物(如PEG，PVP)                          0—3％

—结合聚合物                                  0—3％

(如甲基丙烯酸月桂基酯/丙烯酸共聚物，

摩尔比率25∶1；分子量3800)

—甘油                                        0—5％

—酶                                          0—5％

—微量成分                                    0—5％

(如分散剂，抑泡剂，香味剂，荧光增白剂) 3)水型液体洗涤剂组合物，含有

—线性烷基苯磺酸盐                          15—23％

(以酸计)

—乙氧基化醇硫酸酯(如C12-15的醇，2—3个EO)  8—15％

—醇乙氧基化物(如C12-15的醇，

7个EO或C12-15醇，5个EO)                      3—9％

—脂肪酸皂(如月桂酸)                         0—3％

—氨基乙醇                                   1—5％

—柠檬酸钠                                  5—10％

—水溶助长剂(如甲苯磺酸钠)                   2—6％

—硼酸盐(以B4O7计)                        0—2％

—羧甲基纤维素                               0—1％

—乙醇                                       1—3％

—丙二醇                                     2—5％

—酶                                         0—5％

—微量成分

(如聚合物，分散剂，香味剂，荧光增白剂)       0—5％ 4)水型液体洗涤剂组合物含有：

—线性烷基苯磺酸盐

(以酸计)                                   20—32％

—醇乙氧基化物                              6—12％

(如C12-15醇，有7个EO或C12-15醇，5个EO)。

—氨基乙醇                                   2—6％

—柠檬酸                                    8—14％

—硼酸盐(以B4O7计)                        1—3％

—聚合物(如马来酸/丙烯酸共聚物，             0—3％

结合聚合物如甲基丙烯酸月桂基酯/

丙烯酸共聚物和CMC)

—甘油                                  3—8％

—酶                                    0—5％

—微量成分                              0—5％

(如水溶助长剂、分散剂、香味剂、荧光增白剂) 5)1)—4)中所述洗涤剂配方，其中线性烷基苯磺酸盐(或其一部分) 被烷基硫酸盐(C12—C18)所取代。 6)1)—5)中所述洗涤剂配方，其中含有作为附加成分或作为已指出 的漂白系统的取代物的稳定化或包封的过酸。 7)配制成非水洗涤液的洗涤剂组合物，其中含有液体非离子表面活 性剂如线性烷氧基化伯醇，助洗系统(如磷酸盐)，酶和碱。该洗涤剂 还可含有阴离子表面活性剂和/或漂白系统。 稳定剂检测：

本发明的每种稳定剂的效果可用下列三个实验中的一个或多个 来检测。 a)液体洗涤剂中的储存稳定性实验：

在液体洗涤剂配制物中加入酶和稳定剂，并在充分限定的条件 下储存。测定作为时间函数的每一种酶的活性，如在第0、3、7、14天 测定。

为根据储存稳定数据计算抑制效果而提出了一种反应机制。下 列反应给出一个含有蛋白酶(P)、脂酶(L)及抑制剂(I)的液体洗涤剂 的相对简单、但仍可行的机制： I)蛋白酶的自动消化：

P＋P→Dp＋P

II) 蛋白酶变性：

P→Dp III)蛋白酶抑制：

P＋IPI IV) 被抑制酶的蛋白酶消化：

P＋PI→P＋Dp＋I V ) 受抑制酶的变性：

PI→Dp＋I VI) 脂酶的蛋白酶消化：

P＋L→P＋DL VII)脂酶变性：

L→DL 其中Dp和DL是变性的(即无活性的)蛋白酶和脂酶。

从以上反应推衍出三个偶联的不同方程式来描述P、L和PI的 失活。用一种参数估计方法(Leven berg改进的高斯—牛顿法)从储存 稳定性数据中推出反应速度常数。储存稳定性数据给出作为时间的 函数的(P＋PI)及L的浓度。

反应III比其他反应要快得多，平衡是计算中假定的。从系统中排 除反应IV，以减少参数，从而可仅用一个反应速度常数来描述受抑制 酶的稳定性(从等式V中得到)。

所有实验中，抑制剂分子数与蛋白酶分子数相比有大量剩余，即 假定抑制剂浓度恒定(与加入的抑制剂量相应)是有理由的。

反应速度常数的特定值对数据的小变化有一定敏感性，但通过 把这一结果与从硼酸得到的值相比可大大减低敏感性。从而可以得 到一个改进因子：

              IF1＝KI(硼酸)/KI(抑制剂)

IF1用来测定从反应III得到的抑制常数KI给出的抑制效果。 b)“乳液”实验：在本实验中，把要检测的稳定剂与参照抑制剂(硼酸) 相比。该实验详细描述如下：

“抑制剂”乳液的制备：称取0.0759CaCl2(干燥，纯，细小颗粒状， Merck)，0.169 3，3—二甲基戊二酸(SIGMA)和2.5毫摩尔稳定剂/ 抑制剂并溶于50ml去离子水中。用NaOH调节PH接近于6。在 100ml的烧杯中称取6.0g脱脂奶粉(脱水的，DIFco实验室)，并加入 盐＋缓冲剂＋稳定剂/抑制剂溶液。将混合物用力振摇数分钟以确保 任何存在的团块分散开。此后再将混合物振摇30分钟，用NaOH调 节PH值到6.5。可用瓶装脱脂奶代替奶粉。在一次试验中对所有的 稳定剂/抑制剂要使用同一瓶中的牛奶。

酶的制备：在硼酸缓冲液中制备大约30KNPV/升的Savinase (从Novo Nordisk A/S获得)溶液(见下)。相对酶标准测定Savinase的 活性。丹麦的Novo.NordiskA/S可根据请求提供说明测定Savinase活 性的分析方法的文件AF220/1—GB。该文件包括在本文中作为参考 文献。例如：称取1.0g的16KNPULG的液体Savinase，并加入50ml 硼酸缓冲液。将混合物振摇1.5分钟。取出10ml加入100ml烧瓶中， 并加入硼酸缓冲液至100ml。然后将混合物振摇15分钟。硼酸缓冲 液的制备：将2.59硼酸(Merck)溶于500ml去离子水中，并用NaOH调节PH值到9.0。凝结：在试管中加入10.0ml稳定剂/抑制剂，将3 支加入稳定剂/抑制剂的试管置于30℃水浴中，放置1小时。在试管 中加入1.00ml Savinase溶液并用秒表计时。将试管在振荡器上混匀 10秒钟，然后置于水浴中。凝结开始时，停止计时。三支试管的凝结 时间差不应超过大约10秒钟。应在实践学习凝结怎样开始和何时开 始，应由同一个人对所有样品进行处理。参照抑制剂(硼酸)的凝结时 间应为大约3—4分钟(如果凝结时间更长，则应使用更强的蛋白 酶)。凝结时间应大致与蛋白酶活性的倒数成线性比例关系。可将结 果作为一个如下定义的改进因子IF进行报告：(稳定剂凝结时间)/ (参照物凝结时间)。 c)Ki测定：抑制常数Ki可用标准方法测定，参见Keller等Biochem. Biophys.Res.Com.176，1991，PP401—405；J.Bieth Bayer—Symposium “Proteinase Inhibitoris”P.463—469，Springer—Verlag 1974及Novo Nordisk A/S和哥本哈根大学1991年博士论文Lone Kierstein Hansen 的文章“用蛋白酶活性、分子量、动力学参数及抑制动力学测定选定 洗涤剂蛋白酶的比活性。”

在下列实施例中进一步说明本发明，但无意对所要求的本发明 范围进行任何限制。 实施例1

3—噻吩硼酸的制备：

将含有0.043m 3—溴噻吩的100ml钠干燥的乙醚降温至— 60℃。快速加入1M丁基锂30ml。搅拌混合物3分钟，然后加入含有 0.043m硼酸三正丁基酯或硼酸三甲酯的钠干燥乙醚25ml。搅拌混 合物4小时，并温热至室温。然后用1M盐酸处理反应混合物，分离 乙醚层。水层用乙醚萃取(两次，每次25ml)。合并的乙醚层用1M- NaOH萃取。用盐酸(10％)酸化碱性溶液，从而沉淀出所需一烃基硼 酸。将一烃基硼酸分离出来并从水/乙醇中重结晶，在空气中干燥。 C4H5BO2S，mpt，163—164℃。 二苯基硼酸的制备：

用上面的方法制备。格氏试剂用溴苯和镁条制备。但每摩尔硼 酸三正丁酯基要用2摩尔格氏试剂。如此生成的二苯基硼酸通过与 乙醇胺反应分离出来，这样产生二苯基硼酸—乙醇胺配合物 ((C6H5)2BO.CH2CH2NH2)，它更易于处理。Mpt：192—194℃。 实施例2： Ki测定：

在下列条件下，用标准方法分别测定抑制Alcalase和Savinase的 抑制常数Ki： 底物：琥珀酰—丙氨酸—丙氨酸—脯氨酸—苯丙氨酸—N—对硝基 苯胺＝SAAPFpNA(Sigmas—7388)。 缓冲液：0.1MTris—HCl PH8.6，25℃。 待测酶浓度： Alcalase：1×10-10—3×10-10M Savinase：1×10-10—3×10-10M

底物水解的起始速度用Cobas Fara自动分光光度计在0.01— 2mM范围内的9个底物浓度点上测定。动力学参数Vmax和Km用 ENZFITTER(一种非线性回归数据分析程序)来测定。用等式Vmax ＝Kcat×〔Eo〕来计算Kcat。用紧密结合蛋白质的蛋白酶抑制剂进行 活性位点滴定来测定活性酶的浓度〔Eo〕。将Km/Kcat的值作为抑制 剂浓度的函数作图，并算出抑制常数Ki。假设抑制剂的纯度为 100％，并用重量数与分子量来计算摩尔浓度。

受检的酶稳定剂一烃基硼酸及二烃基硼酸衍生物的抑制常数 Ki的结果如下： 表1：

不同一烃基硼酸及二烃基硼酸衍生物抑制Alaclase及Savinase 的抑制常数，包括硼酸以作为对照。 抑制剂                 对Alcalale的Ki    对Savinase的Ki 硼酸                        30mM               20mM 噻吩—3—硼酸                2mM                2mM 噻吩—2—硼酸                2mM                2mM 4—甲基噻吩—2—硼酸       1.8mM                3mM 5—乙基噻吩—2—硼酸       0.7mM              0.9mM 5—甲基噻吩—2—硼酸         2mM                3mM 5—甲基噻吩—2—硼酸         2mM                3mM 5—溴噻吩—2—硼酸         0.4mM              0.2mM 5—氯噻吩—2—硼酸         0.3mM              0.2mM 硫芴—1—硼酸              0.9mM              1.5mM 氧芴—1—硼酸              1.1mM              1.5mM 氧芴—4—硼酸              0.9mM              1.1mM 甲基吡啶—2—硼酸            3mM                4mM 二苯基硼酸(乙醇胺复          2mM                4mM 合物) 5—甲氧基噻吩—2—硼         2mM                1mM 酸 硫茚—1—硼酸                2mM                3mM 呋喃—2—硼酸                3mM                4mM 呋喃—3—硼酸                 10mM      7mM 2，5—二甲基—噻吩—                      3mM      6mM 3—硼酸 苯并呋喃—1—硼酸              1mM    0.8mM 3—甲氧基噻吩—2—硼           3mM    1.2mM 酸 5—正丙基噻吩—2—硼         1.5mM      3mM 酸 5—甲氧基呋喃—2—硼           2mM      3mM 酸 3—溴噻吩—2—硼酸             2mM      1mM 5—乙基呋喃—2—硼酸           2mM      3mM 4—咔唑乙基硼酸                1mM      2mM 实施例3：液体洗涤剂中的储存稳定性实验

在如下条件下，按前述方法对液体洗涤剂中不同种类的一烃基 硼酸及二烃基硼酸衍生物酶稳定剂的储存稳定性进行了测试： 洗涤剂基质(美式)

重量百分比(按纯成分计) Nansa 1169/P    10.3(线性烷基苯磺酸盐，LAS) Berol 452       3.5(烷基醚硫酸盐，AES) 油酸            0.5 椰子脂肪酸      0.5 Dobanol 25—7   6.4(醇乙氧基化物，AEO) 二甲苯磺酸钠    5.1 乙醇              0.7 MPG               2.7(单丙二醇) 甘油              0.5 硫酸钠            0.4 碳酸钠            2.7 柠檬酸钠          4.4 柠檬酸            1.5 水                60.8 酶剂量：          1％W/W Savinase(14KNPU/g)+

              10％W/W Lipolase(100KLU/g) 酶稳定剂剂量：    5mmol/kg(硼酸为160mnole/kg) 储存：            30℃下保存0、3、7及14天

受检的一烃基硼酸及二烃基硼酸衍生物酶稳定剂的抑制效果 IF1的结果如下： 表2：

不同的一烃基硼酸及二烃基硼酸衍生物酶稳定剂和相应的IF1， 以硼酸为对照。 抑制剂                            改进因子IF1 硼酸                                    1 噻吩—2—硼酸                           72 噻吩—3—硼酸                           63 4—甲基噻吩—2—硼酸                    4 5—乙基噻吩—2—硼酸                    66 5—溴噻吩—2—硼酸                      124 5—氯噻吩—2—硼酸                   123 硫芴—1—硼酸                        12 苯并呋喃—1—硼酸                    9 5—甲基噻吩—2—硼酸                 12 5—甲氧基噻吩—2—硼酸               14 呋喃—2—硼酸                        13 二甲基噻吩—3—硼酸                  7 呋喃—3—硼酸                        32 3—甲氧基噻吩—2—硼酸               8 苯并呋喃—2—硼酸                    190 硫茚—1—硼酸                        20 氧芴—4—硼酸                        19

比较表1和表2的结果，似乎可看出洗涤剂中二烃基硼酸或二 烃基硼酸稳定剂的效果可根据从缓冲系统得到的结果来判断，反之 亦然。