本发明涉及一种养殖甲壳纲动物特别是养殖虾的方法的改进 或修改。

对甲壳纲动物包括特别是虾的持续的需求，已导致了在控制条 件下养殖它们的一个根基稳固的产业。虽然该产业在泰国具有特 殊的重要性，在亚洲的其它地方，包括大陆和海上岛屿以及美洲和 大洋洲，它仍广泛可见。

从生产规模来看，虾通常养殖在含有适宜于所养虾种类的水的 露天池中。在很多情况下，采用盐水。由孵化场来的幼虾被转移并 养殖在池中直至它们在那里养殖达到期望的重量。如果喂养和照 料得好，虾能够在它们的养殖池里长得很快，但是它们的生长可被 不利环境如疾病或捕食者所抑制。例如，需要保持池中浮游植物的 兴盛，它不仅对通常加入的营养提供一个虾食物的补充，而且还作 为一个保护虾特别是幼虾免受正午太阳的强光的手段。绿色浮游 植物是有益的，然而，如果浮游生物增殖得太快，便观察到它们被一 种褐色有害种类所代替至一增加程度。因此，人们认识到需要控制 浮游植物的生长(例如通过选择适宜的化学处理)至这样一种程度， 即浮游植物既没有被铲除也不允许增殖得太快。

即使浮游植物增殖被适当地控制，虾仍可受到致病微生物的不 利影响，包括致病细菌，例如弧菌和其它菌的菌株，它们可导致高的 发病率和最终高的死亡率。任一种结果都是以求将营养食物和幼 虾大量地转化成为可收获产品的养虾主所不欢迎的。因此，人们 进一步认识到，防止这些致病微生物增殖，如选择适宜的化学处理， 为内在的需求。

虾面临一个更进一步的危险。它位于食物链的一个中间位置 ，扮演着鱼类的一口美味，这些鱼包括罗非鱼和象它大小的能生活 在池中的鱼类。除去活的捕食鱼类增加了虾的寿命和由此增加由 一批幼虾来的虾的重量产量。一控制方法可包括一个在杀死鱼类 的足够高的浓度下的化学处理。

对于任何化学处理，即养殖主可能在虾的生长期采用来抵抗 一个或多个上面已确定的三个危险，都存在一个主要制约。虾也 是活的生物。虽然该处理需要足够有效来获得期望的效果，但它必 须对虾而言是足够无效，以保证它们生存。

可以考虑利用含有氯气的消毒剂如次氯酸盐以完成上面已确 定的一个或多个化学处理，但是消费者对进行氯性质的处理表现出 日益增加的抵制，立法者继续介绍对这些处理的限制，因此开发和 利用可替换它们的处理方法变得日益需要。

过氧化合物如过氧化氢或过氧酸已被利用作为杀虫剂或生物 抑制剂。具体地说，过氧化合物业已在日本专利公开03/147727中 被Nippon Peroxide建议以重量计0.1至6％的浓度处理鱼类或有壳 的水生动物的养殖池底部沙地。本文中考虑的过氧化合物包括酸性 的过硫酸钾，过乙酸，过苯甲酸和一过氧邻苯二甲酸镁。虽然这种 处理，在池使用之前或在一批虾养殖之后正被打扫时以及下一轮开 始之前，对于处理池可能是有效的，这些用过酸的处理对于含有活 的甲壳纲动物如虾的池来说是不适宜的，因为它将杀死它们。

本发明在某些方面的一个目的是提供一个在养殖甲壳纲动物 期间用过氧化合物处理池的方法，该方法可避免或改善上面已确定 的一个或多个危险，同时使甲壳纲动物能够存活。

本发明在一些或另外方面的第二个目的是提供一个在养殖甲 壳纲动物期间用过酸处理池的方法，该方法同时控制浮游植物的生 长并且使甲壳纲动物能够存活。

本发明在一些或其它方面的第三个目的是提供一个在养殖甲 壳纲动物期间用过酸处理池的方法，该方法同时抑制或控制致病微 生物包括细菌的生长，并且使甲壳纲动物能够存活。

本发明的其它目的可以通过阅读在此的详细描述而确定。

根据本发明，提供了一种处理含有活的甲壳纲动物的池的方法， 其中过酸被采用至池中以提供一个对于甲壳纲动物是不到致死剂量 的过酸浓度。

通过在对于甲壳纲动物是不到致死剂量的范围中的合适的过酸 浓度的选择，有可能选择一种浓度，它能实现控制浮游植物的增殖， 抑制或控制致病微生物的生长以及致死地控制鱼类的捕食者(小鱼) 。一个或多个目的。一般来说，过酸溶液在很低浓度时是对于甲壳纲 动物是不到致死剂量。不到致死浓度的上限可通过在普通条件下将 甲壳纲动物与一增加的过酸浓度接触，直至见着它们的一半在试验 期间，通常为24小时，死亡。

在本发明的许多优越的实施方案中，最理想的是为养殖的甲壳 纲动物从0.5mg/L直至按重量计50％的LC50(24小时)浓度中选择一 个过酸浓度。在某些优选的实施方案中，池中的过酸浓度在达约 5mg/L的范围中，如0.5至5mg/L。在各种有效处理中，过酸的浓度达 3mg/L过酸，在一些例子中从约1至2mg/L过酸，它以过乙酸的摩尔当 量计算。通过选择过酸特别是过乙酸浓度，例如达约3mg/L，特别是 1-2mg/L，浮游植物的兴盛可被控制，以致保持它们一种既不过度增 殖又不完全杀死的繁殖状态。

通过在0.5至5mg/L范围中选择过酸浓度，致病细菌可被控制， 总的细菌数被降低或防止其增殖的范围和用量取决于它的实际浓 度。可考虑一稍高浓度对病原体的休克剂量处理，如8-10mg/L，对 甲壳纲动物仍然为不到致死，优选在老虾而不是幼虾存在下。

通过在0.5至5mg/L的范围中选择过酸浓度，可施用一鱼类的致 死剂量，而它对甲壳纲动物仍是不到致死的。

采用的过酸理想地选自低分子量的脂族过酸，典型地含有达6 个碳原子。优选的过酸包含C2至C4的过酸，或者从功效以及易获得 方面来看过乙酸(C2)尤为方便。可考虑的替代过酸包括一过苯二 甲酸，最方便和安全被提供的是它的一镁盐。

提供低分子量脂族酸如过乙酸或类似过酸的组合物由使用者 自行处理。如需要，可采用蒸馏组合物的形式。然而蒸馏步骤可使 过酸变得更加昂贵，最方便的是，过酸可采用含水组合物形式，典型 地通过将含水过氧化氢和相应的羧酸或酐反应，并且含有剩余浓度 的过氧化氢和羧酸来制备。在该含水组合物中，这里描述的特别考 虑过乙酸，过乙酸浓度通常在按重量计约1％至45％的范围内，在许多 情况下，为按重量计的约5％至20％。剩余乙酸的浓度通常在按重量 计的2％至45％的范围中选择，在许多情况下，为按重量计的约5％至 30％。同样，该组合物的过氧化氢浓度在约2％至35％的范围中选择， 许多情况下，为按重量计的约5％至25％。

在一些特别方便的组合物中，过乙酸的浓度在10％至17％W/W的 范围中选择，乙酸选自15％至30％W/W，过氧化氢选自12％至20％W/W。 在许多情况下，这些浓度使该组合物处于平衡状态，也可很方便地 让在贮存期间出现的羧酸和/或过氧化氢的一个或两个物质过量使 过酸缓慢地产生。在一些实际组合物中，施用到虾池中的过乙酸溶液 含有剩余的过氧化氢和剩余的乙酸，它们与过乙酸的重量比分别为 从约0.5∶1至约2∶1以及0.7∶1至2.5∶1。

该过乙酸组合物可包含一些附加组分，如需要，如稳定剂，包括 膦酸，如羟基亚乙基二膦酸，和/或吡啶二羧酸以及酸催化剂如硫酸。 稳定剂的量一般约达组合物的2％，催化剂的量，如果存在，与稳定剂 不同，一般为组合物W/W的0至1％。优选采用一无表面活化剂的过 酸组合物以减少起泡。

虽然本发明被描述作为对含有甲壳纲动物的池的处理，但它将 被认为这里的池是被采用来作为一个一般概念，它包括在土地中挖 崛出来的或用土墙建起或者例如人工封闭的池。

在池中将过酸组合物放入到水中的方式由使用者自行处理。 虽然过酸组合物可不经稀释地放入，也可预先稀释组合物，如按2至 100倍进行，以降低或消除组合物放入部位或附近的任何局部的高 浓度的影响。放入的一个方便方法包括将过酸组合物倒在池中通 常采用的表面通气器附近的池的表面上，或者通过一出口或类似设 置的多个出口将组合物泵入。甚至过酸在整个池水中的分配可用 多部位放入来辅助。这在大的池塘中自然有很大好处。

用过酸对池塘的处理经常在多种情况下进行，在养殖虾期间的 间隔中，根据养殖虾的种类通常是约3至6个月的周期。在早期阶段， 处理通常进行得相对少些，如1和2周之间的间隔，在后期阶段，处理 进行得更经常。在末尾阶段，可在每天进行过酸处理，但实际上3或 4天的间隔是通常可以接受的。这种处理方法至少有几分是预防性 的。可以认识到如果在虾中发现疾病，可进行下一步处理，如果认 为有利，可采用一比正常浓度高的浓度，虽然它还是处于本发明的 考虑范围中。

虽然本文采用“虾”一词，可以理解为对于相关种类可采用的替 代包括对虾(prawn)，本发明同时可考虑对含有龙虾的池进行处理。 本发明考虑特别是对含有热带和亚热带种类的虾和龙虾的池进行 处理，它们大多数养殖在盐水环境中。养殖的虾或对虾通常为当地 种类，因为它已适应并很好地适宜于当地普通环境。其中在亚洲商 业上比较重要的对虾类虾为虎虾(P.monodon)，其它重要的包括白 虾或印度虾(P.indicus)，墨吉对虾(P.merguiensis)，绿虎虾或熊 虾(P.semilcatus)，明虾(P.oriertalis或chinensis)和长毛对 虾(P.penicillatus)，根据本发明的方法，可望对其它虾在它们的 养殖期间进行处理的包括P.japonicus，P.kerathurus，P.notialis， P.vannamei和P.stylirostris。

这里，对虾类虾的养殖环境包括利用含有浓度为约10至30g/l 的氯化钠的池中的盐水以及环境温度，在热带环境下对这段时间的 重要阶段，它通常在约28℃至35℃的范围。采用的水通常具有约6 .5至7.5的pH值或者被调节到这个范围，例如通过加石灰的办法。 典型的，给池通气和如普遍采用的养殖方式有规律地喂养虾，此养 殖方式中业已采用其它的疾病防治剂。

至少在本发明的某些方面，选择也中过乙酸的浓度以控制而不 是消除池水中浮游植物，特别是蓝绿藻(Chroococcus sp)和硅藻 (Chaetoceros sp)的生长，在本发明其它或相同方面，控制池水中 的过乙酸浓度以阻止活的病原体增殖或消除它们，病原体包括致病 细菌如弧菌属，气单胞菌属，双球菌属，和赛氏杆菌属，例如弧菌(V .harveyi)，副溶血弧菌，弧菌(V，vulnificus)，弧菌(V.damsela)， 霍乱弧菌，气单胞菌(A.hydrophila)，假单胞杆菌，双球菌，和赛氏 杆菌，它们感染栖居在该热带地中的虾类以及其他动物群落。

有利地，在虾放入池塘和/或水放入池塘之前，本发明的方法可 与用从上面已确定的那类过酸中选出的相同或其他过酸，特别是过 乙酸，对池水进行的预处理结合起来。在该预处理中，只要当溶液 与甲壳纲动物接触时，过酸浓度已降下或者被降低到虾的可耐受水 平，在甲壳纲动物存在时，不需受所用过酸浓度的限制。因此，例如， 在该预处理中，过酸浓度可由普遍认可的接触时间和要控制的病 原体来决定，例如从5至250mg/l的过酸。选择用于预处理和在养殖 期间处理中的过酸，使使用者能够减少处理所采用的化学物质的数 量，并且减少早期处理的化学物质的残余浓度与养殖过程中采用的 化学物质之间所产生的任何相互的损伤作用。例如为次氯酸盐再 加上过酸。

用一般概念描述完本发明之后，仅通过实验来更详细地描述它 在这些方面的特定实施方案。 实例施1.过乙酸对虾和鱼类的毒性实验

在本实验中，在含有2升在实验开始之前已通气一天的海水 (30ppt)和10只虎虾的玻璃圆柱形容器中测定虾的24小时的LC50。 增加过乙酸浓度直至在该环境条件下仅有50％的虾存活24小时。在 每次试验开始阶段采用单独剂量的过乙酸，使剩余过氧化氢和乙酸 与过乙酸重量比分别为1∶1和2∶1，在试验期间不通气。对10天后期 幼体和15天后期幼体进行重复试验，得到相同结果，每一达到的24 小时的LC50平均为近36mg/l过乙酸，最小观察结果为约28/29mg/l。

在类似条件下进行类似试验以确定一代表性盐水鱼罗非鱼 (Tilapia Mosambica)的过乙酸浓度的24小时的LC50，这种鱼能在 虾的水也中存活和生长。这种鱼近1.5至2.5厘米长。该鱼的24小 时的LC50达到2-3mg/l过乙酸。

比较虾和鱼的24小时的LC50，看出可选择一杀死鱼而同时保证 虾存活的过乙酸剂量。

实施例2.控制浮游植物和细菌群落存活的浓度的确定。

在这个实验中，测定了过乙酸对浮游植物的效果。试验在一玻 璃纤维容器中进行，该容器装有取自虎虾池中并充分通气的海水 (30ppt，150升)。每个容器含有细菌群落和两种浮游植物，蓝绿藻 (CC-Chroococcus sp)和硅藻(CH-chaetoceros sp)的初始细胞密 度以每毫升浮游生物细胞数X105的数目表示列于下表1。总的细菌 计数通过常规的琼脂平面培养技术来确定，所得结果总结于下表2， 计数的变化以它的对数换算因子(LRF)表示。在对照中没有采用过 乙酸。在试验1中，将过乙酸投药至容器中使其浓度为1mg/l，同时 过氧化氢的浓度约为1mg/l，及乙酸的浓度为约2mg/l。在试验 2中，投药至容器中的过乙酸浓度为2mg/l，相应地，过氧化氢和乙酸 的浓度分别为2mg/l和4mg/l。每个试验在两个容器中进行，所得结 果为平均值。在连续日子里测量浮游生物的数量，1天和7天之后的 结果如下所示。

                               表1

试验号                      浮游生物计数×105    使用过酸前        1天后         7天后 CC  CH  CC  CH     CC  CH 对照 2.2  2.2  5.2  7.9     10.2  30.0  1 2.8  2.3  1.9  5.6     4.7  26.5  2 2.8  2.2  2.8  1.7     7.8  4.0

                   表2

试验号 总的细菌计数 使用过酸前     LRF  6小时后     LRF     7天后 对照 2.1×105     0     2.2  1 3.3×105     1     3.3  2 2.9×105     2.1     3.2

从表1中，可以看出采用选择浓度的过乙酸使浮游植物的生长 受到控制，同时残留的种群能够保持存活。从表2中，可以看出，只 有在1或2mg/l的过乙酸浓度时才产生一比对照例更快速和更大的 细菌数目的降低。通过将表1和表2数据与以前确定的虾的24小时 的LC50比较，可以看出，适宜于控制浮游植物以及阻止细菌增殖的 过乙酸浓度比导致显著的虾的死亡率时的浓度低许多。

实施例3.致病细菌的对照实验

在这些试验中，通过在表3已确定的致病细菌(这些细菌由虾池 中的动物群分离而来)的盐水悬浮液中采用过乙酸进行了一系列试 验，以确定阻止细菌生长的试剂的最小浓度。这些试验运用由美国 临床实验室全国委员会描述的标准计算方法的变化形式来进行。 试验通过将从海水中选择的细菌的悬浮液与每日制备的稀释的过 乙酸的贮备溶液混合的提供数试管试验溶液来进行，每管中含有约105 CFU/ml以及一系列浓度的过乙酸，其最低浓度为0.25mg/l，连续高 的浓度为它的2倍。该溶液含有过氧化氢和乙酸，它们与过乙酸的 重量比分别为1∶1和2∶1。将这些试管在28℃温育24小时，并将液体 划线至琼脂平板上，温育过夜至出现细菌生长。没有观察到细菌生 长的过乙酸的最低浓度(MBC)记录在表3中。

                     表3

菌株 过乙酸的最低浓度(mg/l) 弧菌(V.harveyi) 1.5至8 副溶血弧菌 1.5至3 弧菌(V.Vunificus) 2 弧菌(V.alginolyticus) 1.5 弧菌(V.damsela) 1 霍乱弧菌 6 产气单胞菌(A.sorbria) 1 假单胞杆菌 8 双球菌 2 赛氏杆菌 6 虾池中的水 4

从表3中，可以看出过乙酸的浓度在低浓度时控制致病细菌有 效。

上面数据表明可选取一过乙酸浓度，它既保证虾的健康，同时 控制浮游植物和致病细菌，并杀死罗非鱼。 实施例4.虾池中细菌的防治

用过乙酸过理2个虾池，第一个使用1ppm浓度的过酸，第二个使 用5ppm的浓度。采用的过酸溶液为含有12％W/W过乙酸，19％W/W过 氧化氢和20％W/W乙酸的平衡产物。第三个池用作未处理的对照池。 每个池平均深度为1.4m。用来填装池的水在加入之前贮存在一水 库中达2周，盐度为33ppt。在开始试验之前，每个池中的水通气24 小时。在加入过酸前和加入过酸6小时后马上测量包括对照在内的 每个池中的细菌的总浓度。过酸被迅速散于池中以确保一均匀的 处理。总的细菌计数，用cfu/ml表示示于下表4中。

              表4

采用的处理     某一时刻总的细菌计数     初始     6小时 对照     8950     4925 1ppm过乙酸     7250     500 5ppm过乙酸     9700     40

表4的结果表明，与对照相比，1ppm和5ppm的过乙酸处理使虾池 中的细菌数目迅速减少。 实施例5

将2个虾池，池1和池2，用1ppm过乙酸处理。采用的过酸溶液为 包含12％W/W过乙酸，19％W/W过氧化氢和20％W/W乙酸的平衡产物。 第三个池，池3，用于作为对照。每个池平均深度为1.4m，池水的盐度 为20ppt。在试验开始四周前，每个池储有虾。在加入过酸之前以 及过酸加入6小时之后马上测定包括对照在内的细菌总浓度以及每 个池中弧菌浓度。过酸被迅速地分散于池中以确保一均匀的处理。 总的细菌的及弧菌计数用cfu/m表示示于下表5中。

                      表5

处理池    总的细菌计数       弧菌计数  初始     6小时     初始    6小时 1  4230     2110     307    138 2  3540     1360     275    106 3(对照)  3220     3690     505    798

表5结果表明，与对照相比，运用1ppm的处理使贮存虾池的总的 细菌计数和弧菌计数明显减少。