一种高污染本底真菌的分离纯化检验方法
专利汇可以提供一种高污染本底真菌的分离纯化检验方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且一种高污染本底 真菌 的分离纯化检验方法，采用双面正向真菌纯化分离培养方法，双面正向分离法是基于两面培养基在一个培养皿中，利用空气作为分离介质，通过 化感物质 诱导促进气生菌丝向目标培养层探长，或者经过饲养层诱导产孢子，利用真菌孢囊开裂弹射孢子，实现单孢子分离纯化。可以提高 生物 安全性，降低实验时间提高实验效率，减少耗材使用及有毒物质添加使用；该方法具有灵活性强，可以在任意一个培养层添加一种或多种抑制物或刺激生长物，也可以通过化感物质作为 信号 来干预真菌的生长，达到分离纯化目的；可以对工业用真菌的 噬菌体 污染实现很好的分离，有利于 净化 被噬菌体污染的菌株；方法简便易于普及，具有很好的真菌检验适应性。，下面是一种高污染本底真菌的分离纯化检验方法专利的具体信息内容。
1.一种高污染本底真菌的分离纯化检验方法，其特征在于：
采用双面正向真菌纯化分离培养方法，
双面正向分离法是基于两面培养基在一个培养皿中，利用空气作为分离介质，通过化感物质诱导促进气生菌丝向目标培养层探长，或者经过饲养层诱导产孢子，利用真菌孢囊开裂弹射孢子，实现单孢子分离纯化。
2.根据权利要求1所述的高污染本底真菌的分离纯化检验方法，其特征在于，具体操作方法为：
将水琼脂培养基经过115 125℃温度下消毒10 20min，铺平厚度3±1mm，凝固后，形成~ ~
滋养层培养基待用；
将目标培养层铺平厚度3±1mm，冷却，形成分离层培养基备用；
称取土壤2g,用无菌涂布棒在滋养层培养基上铺成直径20mm直径的圆状；将周边水琼脂去除制备成样品分离皿；
将玻璃环消毒后贴在分离层培养基上制备好分离皿，和样品分离皿对扣，正置放入培养箱培养；
通过培养皿观察到样品分离皿中滋养层培养基上土壤所产生的丝状真菌气生菌丝刚接触到顶部的分离层培养基时，将上部倒扣的分离层培养基分离皿移走，并用无菌平皿盖盖好倒置培养，
样品分离皿依据需要再次扣上分离皿继续分离；
分离鉴定：
在上述条件下培养的，在分离皿中培养基上生长的霉菌菌斑具有透明环，具有此环时的真菌证明具有分解纤维素和产生纤维素酶的能力，所要分离功能性真菌；
挑取具有透明环的菌丝重新接种到新的纤维素培养基中，培养，并做插片，观察插片生长的菌丝及孢子证明属于木霉菌属且具备产生纤维素酶水解纤维素；
纯化的木霉进一步做真菌生化实验或分子学鉴定试验。
3.根据权利要求2所述的高污染本底真菌的分离纯化检验方法，其特征在于：所述滋养层培养基培养基为质量比为1 2.5%的水琼脂。
~
4.根据权利要求2所述的高污染本底真菌的分离纯化检验方法，其特征在于：所述滋养层培养基中添加有质量比为0.5 1.5%的抑制物质。
~
5.根据权利要求2所述的高污染本底真菌的分离纯化检验方法，其特征在于：所述目分离层培养基是指以PDA培养基为基底，添加VB1、目标测试底物、化感物质的分离选择性培养基。
6.根据权利要求5所述的高污染本底真菌的分离纯化检验方法，其特征在于：所述化感物质为植物提取液、3-己烯-1-醇、水芹烯、2-蒈烯、α-蒎烯或者、莰烯中的一种或多种，化感物质添加的量为培养基基底每1000ml 添加1μg。
7.根据权利要求2所述的高污染本底真菌的分离纯化检验方法，其特征在于：培养温度为2—25℃。
8.根据权利要求7所述的高污染本底真菌的分离纯化检验方法，其特征在于：培养温度为22℃作为通用温度。
一种高污染本底真菌的分离纯化检验方法
技术领域
背景技术
发明内容
双面正向分离法是基于两面培养基在一个培养皿中，利用空气作为分离介质，通过化感物质诱导促进气生菌丝向目标培养层探长，或者经过饲养层诱导产孢子，利用真菌孢囊开裂弹射孢子，实现单孢子分离纯化。
滋养层培养基待用；
将目标培养层铺平厚度3±1mm，冷却，形成分离层培养基备用；
称取土壤2g,用无菌涂布棒在滋养层培养基上铺成直径20mm直径的圆状；将周边水琼脂去除制备成样品分离皿；
将玻璃环消毒后贴在分离层培养基上制备好分离皿，和样品分离皿对扣，正置放入培养箱培养；
通过培养皿观察到样品分离皿中滋养层培养基上土壤所产生的丝状真菌气生菌丝刚接触到顶部的分离层培养基时，将上部倒扣的分离层培养基分离皿移走，并用无菌平皿盖盖好倒置培养，
样品分离皿依据需要再次扣上分离皿继续分离；
分离鉴定：
在上述条件下培养的，在分离皿中培养基上生长的霉菌菌斑具有透明环，具有此环时的真菌证明具有分解纤维素和产生纤维素酶的能力，所要分离功能性真菌；
挑取具有透明环的菌丝重新接种到新的纤维素培养基中，培养，并做插片，观察插片生长的菌丝及孢子证明属于木霉菌属且具备产生纤维素酶水解纤维素；
纯化的木霉进一步做真菌生化实验或分子学鉴定试验。
(2)本方法的建立具有分离实验结果可靠性高对多中丝状真菌混合的样品也可以实现相互的分离；
(3)该方法具有灵活性强，可以在任意一个培养层添加一种或多种抑制物或刺激生长物，也可以通过化感物质作为信号来干预真菌的生长，达到分离纯化目的；
(4)可以对工业用真菌的噬菌体污染实现很好的分离，有利于净化被噬菌体污染的菌株；
(5)方法简便易于普及，具有很好的真菌检验适应性。
具体实施方式
双面正向分离法是基于两面培养基在一个培养皿中，利用空气作为分离介质，通过化感物质诱导促进气生菌丝向目标培养层探长，或者经过饲养层诱导产孢子，利用真菌孢囊开裂弹射孢子，实现单孢子分离纯化。
滋养层培养基待用；
将目标培养层铺平厚度3±1mm，冷却，形成分离层培养基备用；
称取土壤2g,用无菌涂布棒在滋养层培养基上铺成直径20mm直径的圆状；将周边水琼脂去除制备成样品分离皿；
将玻璃环消毒后贴在分离层培养基上制备好分离皿，和样品分离皿对扣，正置放入培养箱培养；
通过培养皿观察到样品分离皿中滋养层培养基上土壤所产生的丝状真菌气生菌丝刚接触到顶部的分离层培养基时，将上部倒扣的分离层培养基分离皿移走，并用无菌平皿盖盖好倒置培养，
样品分离皿依据需要再次扣上分离皿继续分离；
分离鉴定：
在上述条件下培养的，在分离皿中培养基上生长的霉菌菌斑具有透明环，具有此环时的真菌证明具有分解纤维素和产生纤维素酶的能力，所要分离功能性真菌；
挑取具有透明环的菌丝重新接种到新的纤维素培养基中，培养，并做插片，观察插片生长的菌丝及孢子证明属于木霉菌属且具备产生纤维素酶水解纤维素；
纯化的木霉进一步做真菌生化实验或分子学鉴定试验。
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