超灵敏检测癌细胞的电致化学发光细胞传感器的制备方法
专利汇可以提供超灵敏检测癌细胞的电致化学发光细胞传感器的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种超灵敏检测癌细胞的电致 化学发光 细胞 传感器 的制备方法。通过原位生长法制备具有大的 比表面积 、良好的 生物 相容性 和 导电性 的三维花状的纸金 电极 ，利用其捕获目标癌细胞，通过癌细胞与特定适配体的特异性结合作用，将修饰有 银 纳米粒子 的多枝杂交链负载在电极表面，然后在多枝杂交链上修饰和沉积大量的 石墨 烯 量子点 和银纳米粒子，完成电致化学发光细胞传感器的制备，利用多枝杂交链 信号 放大技术和银纳米粒子可以增强 石墨烯 量子点电致化学发光的性能实现信号放大，进而实现对癌细胞的超灵敏、准确检测。，下面是超灵敏检测癌细胞的电致化学发光细胞传感器的制备方法专利的具体信息内容。
1.一种超灵敏检测癌细胞的电致化学发光细胞传感器的制备方法，其特征是包括以下步骤：
（1）在计算机上利用Adobe illustrator CS4软件设计微流控纸芯片的疏水蜡打印图案，将设计好的打印图案通过蜡打印机打印在色谱纸上，然后将打印过的色谱纸放在烘箱中，在130 ℃加热50秒使蜡融化并渗透整个色谱纸的厚度，形成疏水墙；
（2）在计算机上设计与步骤（1）中获得的蜡打印图案相匹配的工作电极、对电极和参比电极的印刷图案，并利用丝网印刷技术在步骤（1）中获得的蜡打印色谱纸上印刷碳工作电极、碳对电极和Ag/AgCl参比电极；
（3）利用原位生长法在步骤（2）中获得的碳工作电极的工作区域生长三维花状的金；
（4）将伴刀豆球蛋白A修饰在步骤（3）中获得的纸芯片的工作区域，采用牛血清白蛋白封闭非特异性结合位点，然后利用伴刀豆球蛋白A捕获癌细胞；
（5）将AgNPs修饰的多枝杂交链固定在步骤（4）中获得的纸芯片的工作区域；
（6）将GQDs修饰在步骤（5）中获得的多枝杂交链上；
（7）在步骤（6）中获得的多枝杂交链上沉积AgNPs；
（8）在步骤（7）中获得的纸芯片的工作区域，滴加10 μL包含0.1 M K2S2O8的pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液（PBS），在电压范围为0 -1.6V进行ECL信号检测，光电倍增管电压为800 V，~
绘制ECL强度与癌细胞浓度的标准曲线，实现对癌细胞的检测。
2.根据权利要求书1所述一种超灵敏检测癌细胞的电致化学发光细胞传感器的制备方法，其特征是，所述的利用原位生长法在步骤（2）中获得的碳工作电极的工作区域生长三维花状的金的具体步骤为：
（1）合成金纳米粒子：首先将90 mL 二次水置于单口烧瓶中并加热到90 ℃，然后加入
0.8 mL 1% 氯金酸，继续水浴加热到96 ℃，待反应进行1 min后，再加入2.8 mL 1%柠檬酸钠，在磁力搅拌下反应15 min，获得酒红色的溶液；
（2）取10-20 μL金纳米粒子滴加到工作区域，在室温下静置反应30-60 min，用二次水洗涤除去多余的金纳米粒子，取10-20 μL新鲜制备的氯金酸和抗坏血酸的混合溶液滴加到工作区域，所述的氯金酸的浓度为10-15mM，抗坏血酸的浓度为80-120 mM，在室温下生长
20-40 min后，用二次水清洗工作区域并在室温下自然干燥30 min。
3.根据权利要求书1所述一种超灵敏检测癌细胞的电致化学发光细胞传感器的制备方法，其特征是，所述的将伴刀豆球蛋白A修饰在步骤（3）中获得的纸芯片的工作区域，采用牛血清白蛋白封闭非特异性结合位点，然后利用伴刀豆球蛋白A捕获癌细胞的具体步骤为：取
10 μL伴刀豆球蛋白A滴到纸工作区域，在室温下孵化30 min，用pH 7.4 PBS洗涤除去多余的伴刀豆球蛋白A后，滴加10 μL 1%的牛血清白蛋白用于封堵非特异性结合位点，利用pH
7.4 PBS洗涤后，继续滴加10 μL不同浓度的癌细胞，在37 ℃下孵化40 min，随后用pH 7.4 PBS洗涤除去未反应的癌细胞。
4.根据权利要求书1所述一种超灵敏检测癌细胞的电致化学发光细胞传感器的制备方法，其特征是，所述的将AgNPs修饰的多枝杂交链固定在步骤（4）中获得的纸芯片的工作区域的具体步骤为：
a．合成AgNPs：首先制备20 mL硝酸银和柠檬酸钠的混合溶液，所述的硝酸银和柠檬酸钠的浓度均为0.1-0.5 mM且摩尔比为1:1，在磁力搅拌作用下，向混合液中加入0.5-1 mL新鲜制备的浓度为10-20 mM硼氢化钠，继续搅拌20-50秒，获得AgNPs溶液；
b．在发夹DNA分子H1和发夹DNA分子H2上连接AgNPs：将发夹DNA分子H1和发夹DNA分子H2溶解于pH 5.0的三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐中，静置处理1 h，随后将活化的发夹DNA分子H1和发夹DNA分子H2用C18分离填充柱脱盐，并进行冷冻干燥，然后将冷冻干燥后的发夹DNA分子H1和发夹DNA分子H2溶解在1 mL 浓度为0.5 M，pH 7.6的4-羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）中，获得的发夹DNA分子H1和发夹DNA分子H2浓度均为10 μM且摩尔比为1:1，继续加入500 μL AgNPs，缓慢地震荡5 min后，加入15 μL 浓度为0.5 M，pH 3.0的柠檬酸盐缓冲溶液，在室温下孵化5 min，随后继续加入15 μL 浓度为0.5 M，pH 3.0的柠檬酸盐缓冲溶液，在室温下孵化25 min后，用pH 7.6 HEPES将混合液调节至中性，并用pH 7.6 HEPES离心洗涤5次，获得H1-Ag和H2-Ag；
c．多枝杂交链反应：将上述获得的H1-Ag和H2-Ag溶解在1 mL杂交链反应缓冲溶液中，所述的杂交链反应缓冲溶液为pH 8.0，浓度为20 mM且含有50 mM MgCl2的Tris缓冲溶液，然后用PTC-200热循环仪在95 ºC加热10 min，并在30 s 内冷却到4 ºC，随后加入100 μL捕获癌细胞的适配体链和引物链的混合液，所述的捕获癌细胞的适配体链和引物链的浓度均为5 μM且摩尔比为1:1，最后将获得的混合液在37 ºC反应12 h，获得AgNPs修饰的多枝杂交链；
d．取10 μL上述获得的AgNPs修饰的多枝杂交链滴加到步骤（4）中获得的纸芯片的工作区域，在37 ºC孵化30 min后，用pH 7.4 PBS洗涤除去未反应的多枝杂交链。
5.根据权利要求书1所述一种超灵敏检测癌细胞的电致化学发光细胞传感器的制备方法，其特征是，所述的在步骤（6）中获得的多枝杂交链上沉积AgNPs的具体步骤为：将10-15 μL包含硝酸银和抗坏血酸的银沉积溶液滴加到步骤（6）中获得的纸芯片的工作区域，所述的硝酸银的浓度为0.1-0.5 mM，抗坏血酸的浓度为0.1-0.25 mM，在室温下，黑暗处孵化5-
10 min后，用pH 7.4 PBS洗涤除去未反应的溶液。
超灵敏检测癌细胞的电致化学发光细胞传感器的制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
7.4 PBS洗涤后，继续滴加10 μL不同浓度的癌细胞，在37 ℃下孵化40 min，随后用pH 7.4 PBS洗涤除去未反应的癌细胞。
5-10 min后，用pH 7.4 PBS洗涤除去未反应的溶液。
95 ºC加热10 min，并在30 s 内冷却到4 ºC，随后加入100 μL捕获MCF-7细胞的适配体链和引物链的混合液，所述的捕获MCF-7细胞的适配体链和引物链的浓度均为5 μM且摩尔比为
1:1，最后将获得的混合液在37 ºC反应12 h，获得AgNPs修饰的多枝杂交链；取10 μL上述获得的AgNPs修饰的多枝杂交链滴加到步骤（4）中获得的纸芯片的工作区域，在37 ºC孵化30 min后，用pH 7.4 PBS洗涤除去未反应的多枝杂交链；
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