背景技术
[0001] 心脑
血管疾病是心脏血管和脑
血管疾病的统称，其病因通常由于高脂血症、血液黏稠、动脉粥样硬化、
高血压等所导致的心脏、大脑及全身组织发生的缺血性或出血性疾病。心脑血管疾病是一种严重威胁人类，特别是50岁以上中老年人健康的常见病，具有高患病率、高致残率和高死亡率的特点，即使应用目前最先进、完善的
治疗手段，仍可有50％以上的脑血管意外幸存者生活不能完全自理，全世界每年死于心脑血管疾病的人数高达1500万人，居各种死因首位。因而，针对心脑血管疾病的治疗药物已经成为迫切的需求。
[0002] 近些年，心脑血管疾病的治疗用药较多，主要为西药及生化药物，包括抗血栓药和神经保护剂等。虽然也有一些中成药，但是临床上未见有疗效好、毒性低、结构明确的中药提取的小分子化合物作为活性成分使用。而目前许多研究表明中药及其活性成分可以缓解由缺血引起的脑组织损伤，其机理主要从活血化瘀，改善脑部血循环以及清除
氧自由基等方面对治疗起到积极作用。脑缺血损伤是一个多环节、多因素、多途径损伤的酶促级联反应，而中药往往通过多靶点发挥其生理效应，且多数有较好的药效学实验
基础及一定的临床疗效。同时，中药的毒
副作用相对较小，可以解决许多药物在临床应用中存在的不良反应严重的问题，如口干、面红、头疼、骨质疏松等副作用。
[0003] 来源于天然药物的天然产物的结构改造，是迄今为止新药开发的最有效途径之一，而对天然化合物的结构修饰，本质上就是基于保持药物的基本骨架构型，仅对其中的某些官能团进行化学修饰，从而达到改善化合物理化性质、增加成药性或增效减毒等目的。
[0004] 丹参酮IIA是传统中药丹参中主要的有效成分之一，具有广泛、突出的生物活性：其对短暂的局灶性大鼠脑缺血损伤具有保护作用(Phytomedicine，2003，10：286-291)、对永久性的局灶性脑缺血也表现出较好的保护作用(Phytotherapy Research，2009，23：608-
613)、抗
心律失常(哈尔滨医科大学学报，2002，36(2)： 112-114；中国病理生理杂志，1997，
13(1)：43-45)、抗心肌肥厚、缺血，可抑制AngII所诱导的心肌细胞的凋亡和肥大(Cardiovascular Research，1999，44(1)：5-9；Pharmazie，2009，64(5)：332-336；Journal of Cardiovascular Pharmacology，2008，51(4)：396-401；高血压杂志，2004，12(4)：359)、显著改善自发性高血压大鼠的左心室肥厚(中华实用中西医杂志，2004，17(8)：1096)、对大鼠肝星状细胞氧应激所致脂质过氧化有抑制作用，在细胞水平上表现出显著的抗肝
纤维化效应(实用医学杂志，2003，19(11)：1191)以及通过改善脑线粒体
能量代谢、抗氧化作用对脑缺血
再灌注损伤的保护作用(中国临床药学杂志，2006，15(3)，176-179)。另外，实验表明，它对
乳腺癌(International Journal of Molecular Medicine.2009，24(6)，773-
780)、白血病(Life Sciences，2008，83(11-12)，394-403)等
肿瘤疾病也显示出较好的治疗价值。随着研究的深入展开，可望将丹参酮IIA开发成对心脑血管疾病、肿瘤等具有良好治疗作用的新药。
[0005] 然而，丹参酮IIA的最大
缺陷是生物利用度极低，其原因归结于：一是由于
水溶性差导致吸收差，这与其结构特点密不可分。丹参酮IIA作为一个二萜醌类化合物，是一个疏水性很强的平面分子，分子无极性基团，极性很小，在水中几乎不溶，在甲醇、
乙醇中
溶解度也不大，只在一些弱极性
有机溶剂如氯仿、乙酸乙酯、乙醚等中具有较好的溶解度，这一特点极大地限制了其临床应用。二是由于丹参酮IIA在经口
给药后存在严重的肝首过效应，导致进入血液循环后血药浓度极低，其生物利用度小于3.5％。因此，至今没能开发出一种有效的直接以丹参酮IIA做成的药物制剂用于临床。改善这种状况的有效途径是将丹参酮IIA进行结构修饰，既保持其原有的活性，又能增强其水溶性，以便于制成各种药物剂型，充分发挥丹参酮IIA的药理作用。
发明内容
[0006] 本发明所要解决的技术问题即在于克服丹参酮IIA上述不足之处，设计、合成一种水溶性增强的丹参酮IIA衍生物。
[0007] 本发明提供了一种水溶性丹参酮IIA衍生物，所述丹参酮IIA衍生物为下式所示的化合物1的
磷酸盐衍生物或磷酰胺衍生物：
[0008]
[0009] 其中，R为氢、烷基、羟基、羟甲基、
醛基、羧基、烷氧基、芳基、卤代烷基、
氨基或铵基；
[0010] 所述烷基为C1-C6的直连或支链烷基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、戊基或己基，优选甲基；所述烷氧基选自甲氧基、乙氧基或苄氧基；所述芳基为苯基或取代苯基；
[0011] R′为式W所示的磷酰基、磷酰基可药用盐或磷酰胺衍生物；
[0012]
[0013] 所述的可药用盐为化合物1中R′为式W所示的磷酰基与有机
碱或无机碱进行反应生成的可药用盐；
[0014] 所述的磷酰胺衍生物为化合物1中R′为式W所示的磷酰基与胺类或氨基酸类化合物反应生成的磷酰胺衍生物。
[0015] 本发明所述水溶性丹参酮IIA衍生物为化合物1的磷酸盐或磷酰胺衍生物，优选丹参酮IIA磷酸盐，特别优选丹参酮IIA磷酸二钠。
[0016] 本发明另一目的是提供了所述水溶性丹参酮IIA衍生物的制备方法。
[0017] 本发明所述制备方法包括丹参酮IIA磷酸盐衍生物的制备方法(方法I)和丹参酮IIA磷酰胺衍生物的制备方法(方法II)。
[0018] 具体的，本发明提供了所述丹参酮IIA磷酸盐的制备方法(方法I)，该方法包括下列步骤：
[0019] (a)还原酰化反应：将丹参酮IIA(化合物2)还原成酚，然后酰化得到酰化丹参酮IIA(化合物3)；
[0020] (b)卤代反应：将酰化丹参酮IIA(化合物3)的2-位进行卤代(碘代或溴代)反应得到2-卤代酰化丹参酮IIA(化合物4)；
[0021] (c)偶联反应：将2-卤代酰化丹参酮IIA(化合物4)与
亚磷酸酯在催化剂存在下发生偶联反应得到酰化丹参酮IIA-2-磷酸酯(化合物5)；
[0022] (d)脱磷酰基保护反应：脱去酰化丹参酮IIA-2-磷酸酯(化合物5)中磷酰基上的保护基，制得酰化丹参酮IIA-2-磷酸(化合物6)；
[0023] (e)脱酰基保护、成盐反应：脱去酰化丹参酮IIA-2-磷酸(化合物6)中酚羟基上的酰基保护基，同时2-位磷酸成盐制得丹参酮IIA-2-磷酸盐(化合物1)。
[0024] 本发明制备方法I所述步骤(b)卤代反应与(c)偶联反应可以由酰化丹参酮IIA(化合物3)中呋喃环2-位直接经磷酸酯化反应(氧化偶联法)代替，制得酰化丹参酮IIA-2-磷酸酯(化合物5)，如反应式一中A步骤所示。
[0025] 本发明所述制备方法I以下列反应式一所示：
[0026]
[0027] 反应式中：R为氢、烷基、羟基、羟甲基、醛基、羧基、烷氧基、芳基、卤代烷基、氨基或铵基等；所述烷基为C1-C6的直连或支链烷基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、戊基或己基，优选甲基；所述烷氧基选自甲氧基、乙氧基或苄氧基；所述芳基为苯基或取代苯基；
[0028] R1为酰基；所述酰基选自甲酰基，乙酰基，丙酰基、氯乙酰基、苯甲酰基、取代苯甲酰基等；
[0029] X为碘、溴或氯；
[0030] R2为甲氧基、乙氧基、苯氧基、叔丁氧基或苄氧基；
[0031] R3为羟基或羟基与碱形成的盐。
[0032] 本发明制备方法I所述步骤(a)还原酰化反应，指在适当溶剂中，一定
温度条件下，钯催化剂存在下将丹参酮IIA(化合物2)氢化还原为邻苯二酚类衍生物，然后在碱存在下与酰化
试剂反应生成酰化丹参酮IIA(化合物3)。
[0033] 步骤(a)所述溶剂为
非质子溶剂，选自
甲苯、二甲苯、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、丙酮或丁酮，优选甲苯、乙酸乙酯或四氢呋喃；所述钯催化剂为钯
碳或氢氧化钯。
[0034] 所述钯催化剂与丹参酮IIA(化合物2)的重量百分比为1％-200％∶1，优选10％-50％∶1。酰化试剂与化合物2的摩尔比为2∶1-100∶1，优选4∶1-20∶1。
[0035] 所述碱为有机碱或者无机碱，有机碱选自二乙胺、三乙胺、吡啶、哌啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)或1，4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(DABCO)，优选三乙胺或吡啶；无机碱选自碳酸
钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸氢钾、
碳酸氢钠、
醋酸钠、醋酸钾、磷酸钠或磷酸钾，优选醋酸钠或醋酸钾；所述酰化试剂为酸酐或酰氯，选自醋酐、乙酰氯、丙酐或丙酰氯；所述反应温度0℃-60℃，优选5℃-35℃，特别优选15℃-25℃。所述酰化试剂与化合物2的摩尔比为2∶1-100∶1，优选4∶1-20∶1；碱与化合物2的摩尔比为2∶1-100∶1，优选4∶1-20∶1
[0036] 本发明制备方法I步骤(b)卤代反应，指在适当溶剂中，一定温度条件下，卤代试剂存在下酰化丹参酮IIA(化合物3)发生2位卤代反应。
[0037] 步骤(b)所述溶剂选自甲苯、二甲苯、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿丙酮或丁酮，优选二氯乙烷或四氢呋喃；所述卤代试剂为液溴、N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)+酸、碘+酸、N-碘代琥珀酰亚胺(NIS)+酸；卤代试剂组合中所述酸选自碘酸、三氟
甲酸、三氟乙酸、三氟甲烷磺酸或甲酸，优选三氟乙酸。所述卤代试剂与化合物3的摩尔比为1∶1-5∶1，优选1∶1-2∶1；酸与化合物3的摩尔比为1∶1-5∶1，优选1∶1-2∶1。
[0038] 本发明制备方法I步骤(c)偶联反应，指在适当溶剂中，一定温度及碱存在条件下，将2-卤代酰化丹参酮IIA(化合物4)在催化剂存在下与亚磷酸酯偶联生成酰化丹参酮IIA-2-磷酸酯(化合物5)的反应。
[0039] 步骤(c)所述溶剂为质子或非质子溶剂，选自甲醇、乙醇、二甲基亚砜、N，N-二甲基甲酰胺、甲苯、二甲苯、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙酸乙酯、 二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、丙酮或丁酮，优选甲苯或四氢呋喃。
[0040] 所述碱为有机碱或者无机碱，有机碱选自二乙胺、三乙胺、吡啶、哌啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)或1，4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(DABCO)，优选三乙胺；无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸氢钾、碳酸氢钠、醋酸钠、醋酸钾、磷酸钠或磷酸钾，优选醋酸钠或醋酸钾；
[0041] 所述催化剂为不加配体使用的催化剂和加配体使用催化剂两类；所述不加配体使用的催化剂选自四三苯基膦钯、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂
铁]二氯化钯[PdCl2(dppf)]、双三苯基磷二氯化钯[PdCl2(PPh3)2]、双乙腈氯化钯(II)[PdCl2(CH3CN)2]或三(二亚苄基丙酮)二钯[Pd2(dba)3]；
[0042] 所述加配体使用的催化剂选自醋酸钯、氯化钯、溴化钯、醋酸镍、氯化镍或溴化镍，优选醋酸钯或1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯[PdCl2(dppf)]。
[0043] 所述配体为膦配体，选自三苯基膦、三丁基膦、三邻甲苯基膦[P(o-Tol)3]、2-双环己基磷-2′，6′-二甲氧基联苯、2-二环己基磷-2′，4′，6′-三异丙基联苯、2，2′-双-(二苯膦基)-1，1′-联
萘、1，1′-双二苯基膦二茂铁、1，3-双(二苯基膦)丙烷或三(二亚苄基丙酮)二钯，优选三邻甲苯基膦[P(o-Tol)3]。
[0044] 所述亚磷酸酯选自亚磷酸二甲酯、亚磷酸二乙酯、亚磷酸二叔丁酯、亚磷酸二苯酯或亚磷酸二苄酯。所述反应温度为20℃-150℃，优选35℃-125℃，特别优选90℃-110℃。所述催化剂与化合物4的重量比为0.5％-100％∶1，优选2％-10％∶1。所述亚磷酸酯与化合物4的摩尔比为1∶1-10∶1，优选1.2∶1-3∶1。所述碱与化合物4的摩尔比为1∶1-30∶1，优选2∶1-8∶1。
[0045] 本发明制备方法I所述步骤(d)脱磷酰基保护反应，指酰化丹参酮IIA-2-磷酸酯(化合物5)在适当溶剂中，一定温度条件下，氢气、钯催化剂或
路易斯酸催化脱去2-位磷酰基上保护基生成酰化丹参酮IIA-2-磷酸(化合物6)的反应。
[0046] 步骤(d)所述适当的溶剂为常规
有机溶剂，选自乙酸乙酯、甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、四氢呋喃或2-甲基四氢呋喃，优选二氯甲烷。所述钯催化剂为钯碳或氢氧化钯；所述路易斯酸选自三氟乙酸、三甲基溴
硅烷、三甲基碘硅烷、三甲基
铝硅烷、
三氯化铝、三碘化铝、四氯化
锡、三溴化
硼或三氯化硼，优选三甲基碘硅烷或三甲基溴硅烷。所述反应温度为-20℃-60℃， 优选-15℃-35℃，特别优选0℃-20℃。
[0047] 本发明制备方法I所述步骤(e)脱酰基保护、成盐反应，指酰化丹参酮IIA-2-磷酸(化合物6)在适当溶剂中，一定温度条件下，碱催化脱去酚羟基上的酰基保护基、同时2-位磷酸与碱反应生成化合物丹参酮IIA-2-磷酸盐(化合物1)的反应。
[0048] 步骤(e)所述的溶剂选自水、甲醇、乙醇、异丙醇、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿或丙酮，优选甲醇或水。
[0049] 所述碱为有机碱或无机碱，无机碱选自甲醇钠、醋酸钠、甲醇钾、醋酸钾、碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢化钠、氢化钾、磷酸钠或磷酸钾，优选碳酸钾；有机碱选自碱性氨基酸、胺类化合物、
氨水、二乙胺、三乙胺、吡啶、哌啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)或1，4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(DABCO)，优选碱性氨基酸。所述碱与化合物6的摩尔比为4∶1-50∶1，优选8∶1-15∶1。所述反应温度为-20℃-60℃，优选-15℃-35℃，特别优选0℃-20℃。
[0050] 本发明制备方法I所述步骤(b)卤代反应与(c)偶联反应可以由酰化丹参酮IIA(化合物3)中呋喃环2-位直接经磷酸酯化反应(氧化偶联法)代替，制得酰化丹参酮IIA-2-磷酸酯(化合物5)，如反应式一中A步骤所示。
[0051] 本发明制备方法I所述步骤A氧化偶联反应(即步骤2、3的替代路线)：其中步骤A所述溶剂为常规有机溶剂或其与水的混合物，所述有机溶剂选自醋酸、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或乙腈；所述催化剂选自醋酸
铜、醋酸锰、醋酸钴、醋酸钯或
银盐；其中银盐选自
硝酸银、醋酸银、三氟乙酸银、
硫酸银、碳酸银或氧化银，优选硝酸银；所述
氧化剂选自氧气、叔丁基过氧化氢(TBHP)、二叔丁基过氧化物(DTBP)、醋酸二碘苯或过二
硫酸钾(K2S2O8)，优选氧气或过二硫酸钾(K2S2O8)；所述反应温度为0℃-80℃，优选15℃-25℃。所述催化剂与化合物3的重量百分比为0.5％-100％，优选5％-20％；所述氧化剂与化合物3的摩尔比为1∶1-10∶1，优选1.2∶1-4∶1。
[0052] 本发明提供了所述丹参酮IIA磷酰胺衍生物的制备方法(方法II)，该方法包括下列步骤：
[0053] (f)磷酰胺化反应：酰化丹参酮IIA-2-磷酸(化合物6)中2位磷酸发生磷 酰胺化反应生成酰化丹参酮IIA-2-磷酰胺(化合物7)；
[0054] (g)脱酰基保护反应：脱去酰化丹参酮IIA-2-磷酰胺(化合物7)中酚羟基上的酰基保护基，制得丹参酮IIA磷酰胺(化合物8)。
[0055] 本发明所述制备方法II以下列反应式二所示：
[0056]
[0057] 反应式中：R为氢、烷基、羟基、羟甲基、醛基、羧基、烷氧基、芳基、卤代烷基、氨基或铵基等；所述烷基为C1-C6的直连或支链烷基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、戊基或己基，优选甲基；所述烷氧基选自甲氧基、乙氧基或苄氧基；所述芳基为苯基或取代苯基；
[0058] R1为酰基；这里的酰基选自甲酰基，乙酰基，丙酰基、氯乙酰基、苯甲酰基、取代苯甲酰基等；
[0059] R4为氢、烷基、羟甲基、羟乙基、苄基、苯基、氨基酸
侧链；
[0060] R5为氢、烷基、羟甲基、羟乙基、苄基、苯基、氨基酸侧链；
[0061] R4和R5可以相同，也可以不同。
[0062] 本发明制备方法II所述步骤(f)磷酰胺化反应，指酰化丹参酮IIA-2-磷酸(化合物6)在适当溶剂中，先与酰氯化试剂反应，再在碱存在下与胺类化合物反应生成酰化丹参酮IIA-2-磷酰胺(化合物7)的反应；
[0063] 步骤(f)所述的溶剂为非质子溶剂，选自二氯甲烷、二氯乙烷、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或四氢呋喃。所述的酰氯化试剂选自二氯亚砜，五氯化磷或草酰氯；所述的碱为有机碱或者无机碱，有机碱选自二乙胺、三乙胺、吡啶、哌啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)或1，4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(DABCO)，优选三乙胺或吡啶；无机碱选自碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸氢钾、碳酸氢钠、醋酸钠、醋酸钾、磷酸钠或磷酸钾，优选醋酸钠或醋酸钾。
[0064] 所述胺类化合物包括脂肪族胺、芳香族胺及氨基酸类化合物，如甲胺、乙胺、 丙胺，二甲胺、二乙胺、哌啶、吗啉、苯胺或甘氨酸；优选脂肪族胺和氨基酸类化合物，如二甲胺、二乙胺、哌啶、吗啉、甘氨酸、丙氨酸、赖氨酸或精氨酸；特别优选氨基酸类化合物，如甘氨酸、丙氨酸、赖氨酸、精氨酸。
[0065] 所述酰氯化试剂化合物6的摩尔比为2∶1-50∶1，优选3∶1-12∶1；所述的碱与化合物6的摩尔比为2∶1-20∶1，优选2.2∶1-5∶1。
[0066] 本发明制备方法II所述步骤(g)脱酰基保护反应，指酰化丹参酮IIA-2-磷酰胺(化合物7)在适当溶剂中，一定温度条件下，碱催化脱去酚羟基上的酰基保护基、生成化合物丹参酮IIA磷酰胺(化合物8)的反应。
[0067] 步骤(g)所述的溶剂选自水、甲醇、乙醇、异丙醇、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿或丙酮，优选甲醇或水。所述碱为有机碱或无机碱，无机碱选自甲醇钠、醋酸钠、甲醇钾、醋酸钾、碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢化钠、氢化钾、磷酸钠或磷酸钾，优选碳酸钾；有机碱选自碱性氨基酸、胺类化合物、氨水、二乙胺、三乙胺、吡啶、哌啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)或1，4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(DABCO)，优选1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)。所述碱与化合物6的摩尔比为4∶1-50∶1，优选8∶1-15∶1。所述反应温度为-20℃-60℃，优选-15℃-35℃，特别优选0℃-20℃。
[0068] 本发明所述水溶性丹参酮IIA的可药用盐是化合物1的磷酰基与有机碱或无机碱反应生成的可药用盐。可药用盐是不引起药理副作用的、其常规使用的盐形式，没有特别的限制。
[0069] 所述的盐选自钠盐、
钾盐或锂盐的碱金属盐；或
钙盐或镁盐的碱土金属盐；或铝盐、铁盐、锌盐、铜盐、镍盐或钴盐的金属盐；或铵盐的无机盐；或铵盐的有机盐；所述的铵盐包括但不限于碱性氨基酸盐，选自甲胺盐、乙胺盐、二甲胺盐、二乙胺盐、三乙胺盐、吗啉盐、胍盐、普鲁卡因盐、
葡萄糖铵盐、哌嗪盐、苯甲胺盐或苯乙胺盐。优选碱金属盐、铵盐或碱性氨基酸盐，更优选钠盐、钾盐、铵盐、赖氨酸盐或精氨酸盐，最优选钠盐、赖氨酸盐或精氨酸盐。
[0070] 所述水溶性丹参酮IIA的可药用盐中每一个所述磷酰基形成一盐或者二盐。即每一个磷酰基中的一个或两个酸根与有机碱或无机碱反应成盐。
[0071] 在本发明的一个具体实施方案中，所述水溶性丹参酮IIA的可药用盐中每一 个所述磷酰基与碱
金属离子化合物、氨水或碱性的氨基化合物形成一盐或二盐。所述碱金属
离子化合物选自锂、钠或钾的碱性化合物，包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾、碳酸钠或碳酸钾。
[0072] 所述碱性的氨基化合物为含有氮
原子的呈碱性的化合物，其中的氮原子为三价，可以以伯胺、仲胺和叔胺的形式存在，包括但不限于碱性氨基酸：赖氨酸、精氨酸或组氨酸，诸如吗啉、胍、普鲁卡因、多巴胺、葡萄糖胺、N-甲基葡萄糖胺、二环己基胺、哌嗪，以及一些生物碱如麻黄碱、伪麻黄碱、奎宁、阿托品、烟碱、莨菪碱等。
[0073] 在本发明的优选实施方案中，所述水溶性丹参酮IIA的可药用盐包括化合物1的碱金属盐或铵盐、胺盐。选自碱金属盐、铵盐或氨基酸盐；优选钠盐、钾盐、铵盐、赖氨酸盐或精氨酸盐，最优选钠盐、赖氨酸盐或精氨酸盐。
[0074] 所述化合物1的胺盐是指其磷酰基中的酸根与氨基化合物的氨基结合所形成的胺盐。
[0075] 所述化合物1的碱性氨基酸盐是指其磷酰基中的酸根与碱性氨基酸的侧链氨基反应形成的盐，包括但不限于其赖氨酸或精氨酸盐。
[0076] 本发明的特别优选实施方案中，所述水溶性丹参酮IIA衍生物为化合物1的磷酸盐或磷酰胺衍生物，优选丹参酮IIA磷酸盐，特别优选丹参酮IIA磷酸二钠。
[0077] 本发明丹参酮IIA衍生物经动物实验表明：丹参酮IIA磷酸盐衍生物经
腹腔注射对线栓法大脑中动脉阻断(MCAO)建立的大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型和结扎大鼠
冠状动脉前降支造成的心肌缺血模型具有良好的药效，因此，本发明丹参酮IIA衍生物可用于制备治疗心脑血管疾病药物。
[0078] 本发明又一目的是提供了所述丹参酮IIA衍生物在制药中的应用。
[0079] 优选的，本发明提供了所述丹参酮IIA衍生物在制备治疗心脑血管疾病药物制药中的应用。
[0080] 本发明提供的丹参酮IIA衍生物在制药中的应用，所述应用为化合物1的磷酸盐或磷酰胺衍生物在制药中的应用，优选丹参酮IIA磷酸盐在制药中的应用，特别优选丹参酮IIA磷酸二钠在制药中的应用。
[0081] 本发明所述药物为由丹参酮IIA衍生物作为活性成分与药用辅料组成的药 物组合物。
[0082] 本发明所述药物为由丹参酮IIA衍生物化合物1的磷酸盐或磷酰胺衍生物作为活性成分与药用辅料组成的药物组合物。
[0083] 本发明所述药物为由丹参酮IIA磷酸盐作为活性成分与药用辅料组成的药物组合物。
[0084] 本发明所述药物为由丹参酮IIA磷酸二钠作为活性成分与药用辅料组成的药物组合物。
[0085] 本发明所述药物组合物为冻干粉针剂、片剂、胶囊剂、口崩剂、滴丸、喷雾剂、气雾剂或注射剂，优选注射剂或冻干粉针剂。
[0086] 本发明的丹参酮IIA磷酸盐衍生物具备良好的水溶性，可以方便地制成注射剂或冻干粉针剂型，为治疗心脑血管疾病提供了新的药物，有较大的临床应用价值。
具体实施方式
[0087]
实施例一：丹参酮IIA磷酸二钠的制备：
[0088] (1)乙酰化丹参酮IIA的合成：取丹参酮IIA(1.47g，5mmol)、10％钯碳(318mg，3mmol)于20mL干燥四氢呋喃中，氢气置换三次，在氢气氛围中室温(15-25℃)搅拌至红色退为无色溶液，
注射器注入醋酐(2.1g，20mmol)，后缓慢注入吡啶(1.6g，20mmol)，10分钟左右滴加完毕，室温15-25℃搅拌3小时，过滤，25℃，
真空度0.1Mpa
旋转蒸发仪减压浓缩蒸出溶剂，50mL乙酸乙酯稀释，等体积1M稀
盐酸和水洗各洗一次，乙酸乙酯液在25℃，真空度
0.1Mpa
旋转蒸发仪减压浓缩得粗产物，粗产物悬浮于30mL甲醇中，加热至完全溶解，25℃旋转蒸发仪浓缩至15mL，将剩余甲醇液温度降至5-15℃，有固体析出，过滤，40℃真空干燥得白色固体产物(1.71g，90％)。
[0089]
[0090] 1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.95(d，J＝9.0Hz，1H)，7.45(s，1H)，7.35(d，J＝8.5Hz，1H)，3.24(t，J＝6.5Hz，2H)，2.46(s，6H)，2.19(s，3H)，1.85-1.77(m，2H)， 1.76-1.69(m，+
2H)，1.34(s，6H)；ESI-MS：m/z 403.1[M+Na]。
[0091] (2)乙酰化丹参酮IIA的碘代：取(1)中制得的乙酰化丹参酮IIA(1.9g，5mmol)、N-碘代丁二酰亚胺(1.25g，5.2mmol)溶于干燥30mL二氯甲烷或者四氢呋喃中，降温至0℃条件下滴入三氟乙酸(0.59g，5.2mmol)，滴加完后继续反应2小时，待薄层色谱显示反应完全后(展开条件为：石油醚/乙酸乙酯＝8∶1或石油醚/二氯甲烷＝5∶2)，向反应
混合液中加入20mL 3M
硫代硫酸钠水溶液，分液，水相部分用20mL二氯甲烷萃取，合并有机相，20mL水洗一次，25℃，真空度0.1MPa旋转蒸发仪减压浓缩，粗产物悬浮于35mL甲醇中，加热至完全溶解，
25℃旋转蒸发仪浓缩至15mL，将剩余甲醇液降温至5-15℃，有固体产物析出，过滤，40℃真空干燥得白色固体产物(2.32g，92％)。
[0092]
[0093] 1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.05(d，J＝9.0Hz，1H)，7.55(d，J＝8.5Hz，1H)，3.21(t，J＝6.5Hz，2H)，2.37(s，6H)，2.21(s，3H)，1.84-1.79(m，2H)，1.71-1.68(m，2H)，1.33(s，6H)；ESI-MS：m/z 529.1[M+Na]+。
[0094] (3)2-磷酸二乙酯乙酰化丹参酮IIA的合成：取步骤(2)中制得的2-碘代乙酰化丹参酮IIA(2g，4mmol)、1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯[PdCl2(dppf)](150mg，0.2mmol)溶于25mL干燥甲苯中，反应装置用氩气置换五次，用注射器注入三乙胺(1.2g，12mmol)、亚磷酸二乙酯(1.1g，8mmol)，将反应混合物升温至90至95摄氏度反应约8小时，原料消耗完全，将反应液降至15-25℃，静置过夜，
硅藻土过滤，45℃，真空度0.1MPa旋转蒸发仪减压浓缩，向浓缩液中加入乙酸乙酯45mL稀释，70mL水洗(35mL/每次)两次，35℃，真空度0.1MPa旋转蒸发仪建业浓缩，硅胶柱层析(硅胶GF254，200-300目；洗脱条件石油醚/乙酸乙酯＝2∶1)得产物无色粘稠固体(1.73g，85％)。
[0095]
[0096] 1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.17(d，J＝8.5Hz，1H)，7.60(d，J＝9.0Hz，1H)，4.28-4.11(m，4H)，3.23(s，6H)，2.57(d，J＝2.5Hz，3H)，2.41(s，6H)，1.84-1.79(m，2H)，1.71-1.68(m，2H)，1.36(d，J＝7.0Hz，6H)，1.35(s，6H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ169.02，168.56，151.91，
151.81，145.86，142.06，140.20，135.65，134.76，131.78，129.26，129.05，126.91，125.80，
119.14，118.97，117.28，117.17，62.95，62.91，38.14，35.01，31.93，29.69，21.04，20.43，
20.04，16.26，16.21，9.60；ESI-MS：m/z 539.1[M+Na]+。
[0097] (4)2-磷酸二乙酯乙酰化丹参酮IIA的合成(氧化偶联法)：取(1)中制得的乙酰化丹参酮IIA(2.28g，6mmol)、亚磷酸二乙酯HOP(OEt)2(1.1g，8mmol)溶于二氯甲烷/水1∶1混合溶剂35mL中，再加入K2S2O8(3.3g，12mmol)、硝酸银(205mg，1.2mmol)，所得反应液避光室温搅拌反应8小时。反应完成后，反应液静置，分液，有机相水洗两次，无水硫酸钠干燥，快速柱层析(洗脱条件：石油醚/乙酸乙酯＝2∶1)得产物(2.32g，75％)。
[0098] ESI-MS：m/z 539.1[M+Na]+.
[0099] (5)丹参酮IIA磷酸二钠的合成：上述磷酸酯产物2-磷酸二乙酯乙酰化丹参酮IIA(515mg，1mmol)溶于10mL无水二氯甲烷中，氩气保护下0℃滴入三甲基溴硅烷(0.76g，5mmol)，滴加完毕后任反应液自然恢复至室温25℃继续搅拌反应过夜，薄层层析显示只有一个点(展开条件：二氯甲烷∶甲醇∶醋酸＝2∶4∶1)，15℃，真空度0.1MPa旋转蒸发仪减压浓缩至近干，向剩余物中加甲醇20mL，室温搅拌30分钟；接着将反应瓶置于冷肼中，-5℃中滴入碳酸钠水溶液(0.85g，8mmol，2mL)，滴加完毕后保持5℃至10℃搅拌过夜，此时反应液为血红色。反应完成后，向反应体系中加入甲醇50mL，析出大量的盐，25℃，真空度0.1MPa旋转蒸发仪减压浓缩，剩余物加20mL甲醇，搅拌均匀，降低温度至-5-5℃继续搅拌0.5小时，再过滤出去另一部分少量的盐。滤液在25℃，真空度0.1MPa旋转蒸发减压浓缩至10mL，向剩余液中慢慢滴入丙酮，逐渐析出红色固体产物， 过滤，40℃真空干燥得产物(350mg，85％)。
[0100]
[0101] 1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.81(d，J＝8Hz，1H)，7.73(d，J＝8Hz，1H)，3.15(t，J＝6.5Hz，2H)，2.46(s，3H)，1.82-1.78(m，2H)，1.69-1.66(m，2H)，1.32(s，6H)；ESI-MS：m/z
373.1[M-2Na+H]-。
[0102] (6)丹参酮IIA丙氨酸磷酰胺的合成：取2-磷酸二乙酯乙酰化丹参酮IIA(515mg，1mmol)溶于10mL无水二氯甲烷，氩气保护下0℃滴入三甲基溴硅烷(0.76g，5mmol)，滴加完毕后任反应液自然恢复至室温搅拌过夜，薄层色谱显示只有一个点(展开条件：二氯甲烷∶甲醇∶醋酸＝2∶4∶1)，15℃，真空度0.1MPa旋转蒸发仪减压浓缩，剩余物加甲醇20mL，室温搅拌30分钟，25℃，真空度0.1MPa旋转蒸发仪减压浓缩至近干，将所得浓缩物溶于15mL无水二氯甲烷中，-5℃条件下，滴入草酰氯(0.34mL，4mmol)，加一滴干燥DMF催化，所得混合液于
15-25℃下搅拌反应5小时，将反应液浓缩至近干，再加入L-丙氨酸叔丁酯盐酸盐(545mg，
3mmol)、15mL无水二氯甲烷、0.5mL三乙胺，于室温搅拌反应6小时。反应液依次经稀盐
酸洗、水洗，有机相在25℃，真空度0.1Mpa旋转蒸发仪减压浓缩后产物溶于15mL二氯甲烷中，0℃下向二氯甲烷液中滴入0.3mL三氟乙酸，室温25℃搅拌2小时，30℃蒸干溶剂得粗产物。粗产物悬浮于10mL乙腈中，30℃加热至完全溶解，25℃旋蒸浓缩至5mL，然后温度降至5℃左右，保温1小时，有固体产物析出，过滤，40℃真空干燥得血红色固体产物(370mg，72％)。
[0103]
[0104] 1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.51(d，J＝8Hz，1H)，7.13(d，J＝8Hz，1H)，3.18(t，J＝6.5Hz，2H)，2.43(s，3H)，1.86-1.79(m，2H)，1.65-1.61(m，2H)，1.34(s， 6H)；ESI-MS：m/z + -
539.1[M+Na]，514.1[M-2H]。
[0105] 实施例二：丹参酮IIA磷酸二钠对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用[0106] (1)实验目的
[0107] 采用线栓法大脑中动脉阻断(MCAO)建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，观察丹参酮IIA磷酸二钠对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的防治作用。
[0108] (2)实验材料
[0109] 2.1受试药物
[0110] 名称：丹参酮IIA磷酸二钠(实施例一制得)；性状：红褐色粉状；溶剂：0.9％
氯化钠注射液；
[0111] 受试物浓度：3mg/ml
[0112] 2.2试验对照
[0113] 空白对照(假手术组)：0.9％氯化钠注射液；
[0114] 阴性对照(模型组)：0.9％氯化钠注射液；
[0115] 阳性对照：依达拉奉注射液(必存)；规格：5ml：10mg；
[0116] 提供单位：南京先声东元制药有限公司
[0117] 2.3实验动物
[0118] 品系：SD大鼠；级别：SPF级；性别：雄性；体重：220g；
[0119] 来源：由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供
[0120] 动物总数：70只
[0121] 动物生产
许可证号码：SCXK(沪)2013-0016
[0122] 饲养条件：室温20～25℃，湿度40～70％，标准
饲料，动物自由饮食和饮水，光线12小时明暗自动转换。
[0123] 2.4实验仪器及试剂
[0124] 2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)：BIO BASICINC，批号：LJ0508B1009J；
[0125] 水合氯醛：国药集团化学试剂有限公司，批号：20130426；
[0126] 0.9％氯化钠注射液：浙江天瑞药业有限公司，批号：713011407；
[0127] DHP-9272型电热恒温
培养箱：上海一恒科技有限公司；
[0128]
电子天平：JA2003A型，上海精天电子仪器有限公司。
[0129] (3)实验方法
[0130] 3.1线栓法大脑中动脉阻断(MCAO)建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型及给药[0131] 大鼠适应性饲养后进行试验。将大鼠用10％水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉，仰卧位固定，颈正中切口，分离、结扎左侧颈总动脉近心端、颈外动脉及其分支动脉，根部结扎该分枝。分离左侧颈内动脉，沿颈内动脉向下分离翼颚动脉，在颈内动脉近端备线、远端放置动脉夹，颈总动脉分叉切口，插入栓线，其深度为18mm，栓线进入颈内动脉，入颅至大脑前动脉，阻断大脑中动脉所有血流来源。撤掉动脉夹，扎紧备线，外留1cm长线头，缝合
皮肤。脑缺血2h后，勿需再次麻醉和切开皮肤，轻轻提拉所留线头至有阻
力时提示尼龙线头端已至颈总动脉切口处，血流再通即再灌注。假手术组除不插线处理外，其余步骤同上。术后保持
环境温度在25℃-30℃，放入笼中饲养观察。各组在脑缺血前30min、及缺血后6h腹腔注射各1次。脑缺血2h再灌注24h后存活大鼠测定指标。
[0132] 3.2试验分组
[0133] 实验共分4组，见下表：
[0134]
[0135] 3.3给药方法
[0136] 给药途径为腹腔注射，给药体积为10ml/kg；参照实验方法3.1所述方案给药2次。
[0137] (4)检测指标
[0138] 4.1神经行为学评分
[0139] 脑缺血2h再灌注24h后存活大鼠，参考经典Zea Longa评分标准进行神经行为学评分。
[0140] 0分：无神经功能受损体征，活动正常；
[0141] 1分：不能完全伸展对侧前爪；
[0142] 2分：行走时向对侧转圈；
[0143] 3分：向对侧倾倒；
[0144] 4分：不能自发行走，意识丧失。
[0145] 4.2脑梗死程度测定
[0146] 大鼠行为学评分后，腹腔注射10％水合氯醛(300mg/kg)麻醉大鼠，腹主动脉
放血处死，迅速断头取脑。脑组织取出后立即放入-20℃低温
冰箱快速冷冻20min，去除嗅球、小脑和低位脑干，由前向后冠状面切片，每片2mm，均匀切6片。将脑
组织切片放入含1％TTC溶液的玻璃器皿中，TTC溶液浸没脑组织切片，在37℃恒温培养箱中避光
染色15min后，将脑组织切片翻过来继续染色15min。正常脑组织染色呈红色，脑梗死灶染色呈苍白色。将染好色的脑切片置于4％多聚甲醛溶液中固定4h。经固定后的脑组织切片，由前到后排列，用
扫描仪进行扫描，然后通过Photoshop图像
软件统计脑梗死面积，计算脑梗死比例(脑梗死比例％＝梗死区面积/全脑面积×100)。
[0147] (5)统计处理
[0148] 实验数据以均值±标准差 表示，采用SPSS17.0软件进行统计处理，采用单因素方差分析(ONA-way ANOVA)进行差异的显著性检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。
[0149] (6)实验结果
[0150] 6.1对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经行为学评分的影响
[0151] 大鼠脑缺血再灌注后出现明显的行为学改变；模型组大鼠神经行为学评分2.33±0.52；与模型组比较，丹参酮IIA磷酸二钠组神经行为学评分降低，神经行为学评分为1.50±0.55，差异具有统计学意义(P＜0.05)。阳性对照依达拉奉组显著降低大鼠神经行为学评分(P＜0.05)。结果见表1.
[0152] 表1对大鼠脑缺血2h再灌注24h损伤后神经行为学评分的影响
[0153]
[0154]
[0155] 注：*P＜0.05vs模型组.
[0156] 6.2对大鼠脑梗死的影响
[0157] 大鼠脑缺血2h再灌注24h脑组织出现梗死，模型组大鼠的脑梗死比例为28.60±9.46％；与模型组相比，丹参酮IIA磷酸二钠组脑梗死比例降低，脑梗死比例为17.58±
3.83％，差异具有统计学意义(P＜0.05)。阳性对照依达拉奉组显著降低大鼠脑梗死比例(P＜0.05)，结果见表2。
[0158] 表2对大鼠脑梗死比例的影响
[0159]
[0160] 注：*P＜0.05vs模型组.
[0161] (7)实验结论
[0162] 丹参酮IIA磷酸二钠对脑缺血再灌注损伤有保护作用。
[0163] 实施例三：丹参酮IIA磷酸二钠对大鼠心肌缺血的影响实验研究
[0164] (1)目的：观察丹参酮IIA磷酸二钠对大鼠心肌缺血的影响
[0165] (2)材料与方法
[0166] 2.1受试药物
[0167] 名称：丹参酮IIA磷酸二钠；性状：红褐色粉状；溶剂：0.9％氯化钠注射液[0168] 受试物浓度：3mg/ml
[0169] 2.2试验对照
[0170] 空白对照(假手术组)：0.9％氯化钠注射液；
[0171] 阴性对照(模型组)：0.9％氯化钠注射液；
[0172] 2.3动物
[0173] 品系：SD大鼠；级别：SPF级；性别：雄性；体重：220g
[0174] 来源：由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供
[0175] 动物总数：70只
[0176] 动物生产许可证号码：SCXK(沪)2013-0016
[0177] 饲养条件：室温20～25℃，湿度40～70％，标准饲料，动物自由饮食和饮水，光线12小时明暗自动转换。
[0178] 2.4分组及给药
[0179] 大鼠体重分组，随机分为6组，一组1只。
[0180] 1)正常对照组；2)假手术组；3)模型组；
[0181] 4)受试药物高剂量组60mg/kg；
[0182] 5)受试药物中剂量组30mg/kg；
[0183] 6)受试药物低剂量组15mg/kg
[0184] 给药方法：术前进食过夜，自由饮水。术后给药7天，末次给药1h取材。
[0185] 2.5动物模型制备
[0186] 动物以戊巴比妥腹腔注射麻醉(30mg/kg)，仰位固定，以标准II
导联监测动物
心电图；切开气管，插入气管
导管，接动物人工
呼吸机行人工呼吸(90次/分，呼吸比值1.5∶1)左侧第4-5肋间开胸，破开心包膜，暴露心脏，与冠状动脉前降支根部穿线(3/8弧带针缝合线，0/3尼龙线)，备结扎用；穿线后稳定10分钟，结扎物(ST段及T波改变者淘汰)，缝合胸壁，恢复自然呼吸。
[0187] 2.6主要仪器
[0188] 16道生理记录仪MP-150，美国BIOPAC；JA2003A型电子天平，上海精天电子仪器有限公司。
[0189] 2.7统计处理
[0190] 实验数据以均值±标准差 表示，采用SPSS17.0软件进行统计处理，采用单因素方差分析(ONA-way ANOVA)进行差异的显著性检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。
[0191] 2.8指标检测
[0192] 大鼠心肌梗塞面积的测定：末次给药后1h取材，摘取心脏，放置-20℃冰箱30分钟后取出，沿心脏结扎线以下横切6片，置1％红四氮唑磷酸缓冲液中染色10分钟-15分钟(37℃水浴)。肉眼观察，梗死区呈灰白色，未梗死区呈红色。沿
坏死组织边缘分离将梗死心肌组织与未梗死心肌组织分别称重，以梗死心肌占整个 心脏重量的百分比表示梗死范围。
[0193] (3)结果
[0194] 丹参酮IIA磷酸二钠对大鼠心肌梗塞面积的影响：大鼠结扎冠状动脉前降支后心肌缺血明显，给予丹参酮IIA磷酸二钠7天后心肌缺血情况均有不同程度的改善，与模型组比较P＜0.05。
[0195] 表1丹参酮IIA磷酸二钠对大鼠心肌梗塞面积的影响( N＝10)
[0196]
[0197] (4)小结
[0198] 采用结扎大鼠冠状动脉前降支造成心肌缺血模型，给药7天。结果：丹参酮IIA磷酸二钠在高、中、低剂量能够减轻大鼠心肌缺血程度，与模型组比较差异显著(P＜0.05)。
[0199] (5)结论
[0200] 丹参酮IIA磷酸二钠能够降低大鼠心肌梗死面积，具有抗大鼠心肌缺血作用。
