技术领域
[0001] 本
发明涉及苗木
无性繁殖技术领域，特别涉及一种早实核桃的组培方法。
背景技术
[0002] 核桃按结实时间的早晚分类可分为早实核桃和晚实核桃。早实核桃是核桃的一种分类名称。通常是指自然
播种苗和嫁接苗结果速度较快的品种。一般早实品种播种苗2～3年开始结果、嫁接苗1～2年开始结果。早实核桃因结果早、丰产、经济效益高等优点而受果农青睐，目前核桃各种加工产品在国际市场上供不应求，但由于其栽培面积的迅速扩大，常规的扦插繁殖已经满足不了市场对种苗的需求。
现有技术中早实核桃的组培方法中容易出现黄化现象，芽增殖系数低。因此开发一种早实核桃的组培方法，使得早实核桃丛生芽芽增殖系数高，从而有效解决早实核桃的规模化育苗问题。
发明内容
[0003] 本发明的目的在于克服现有技术之
缺陷，提供了一种早实核桃的组培方法，改良了传统的增殖分化培养基，在DKW的
基础培养基上添加了0.7～0.9mg/L KT、0.2～0.5mg/L
琥珀酸盐，避免了早实核桃组培苗出现的黄化现象，使早实核桃组培苗能正常分化和生长，早实核桃丛生芽芽增殖系数达到6.8～8.4倍/月。可在短时间内提供成活率高的早实核桃优质种苗，有效解决早实核桃的规模化育苗问题。
[0004] 本发明是这样实现的：
[0005] 本发明提供一种早实核桃的组培方法，具体包括如下步骤：
[0006] 步骤1、外植体的选择与处理；
[0007] 步骤2、愈伤组织的诱导：将预处理后的外植体接种于诱导培养基中常温培养条件下培养，诱导得到愈伤组织；
[0008] 步骤3、愈伤组织增殖分化培养：将步骤2中得到的愈伤组织置于增殖分化培养基中进行增殖分化培养获得丛芽；所述增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.7～0.9mg/L KT、0.2～0.5mg/L琥珀酸盐、30g/L
蔗糖和5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
[0009] 步骤4、生根培养：将步骤3中得到的丛芽分成单芽置于生根培养基中进行培养得到完整带根苗；
[0010] 步骤5、炼苗移栽：将步骤4得到的带根苗经炼苗后移栽。
[0011] 本发明具有以下有益效果：
[0012] 本发明提供的一种早实核桃的组培方法，改良了传统的增殖分化培养基，在DKW的基础培养基上添加了0.7～0.9mg/L KT、0.2～0.5mg/L琥珀酸盐，避免了早实核桃组培苗出现的黄化现象，使早实核桃组培苗能正常分化和生长，早实核桃丛生芽增殖系数达到6.8～8.4倍/月。
[0013] 本发明进一步采用本发明特制的生根培养基，生根率最高可达85％以上，移栽成活率在90％以上，可在短时间内提供成活率高的早实核桃优质种苗，有效解决早实核桃的规模化育苗问题；
具体实施方式
[0015] 本实施例提供的一种早实核桃的组培方法，具体包括如下步骤：
[0016] 步骤1、外植体的选择与处理：将采集到的核桃嫩枝梢剪成只保留顶芽或2～3cm长带
腋芽的茎段作为外植体，经消毒处理：用洗洁精
水溶液清洗表面污垢后，进行流水冲洗；将清洗后的嫩枝条于2℃～4℃冷藏避光处理4～8h；移至超净
工作台上，用0.1％v/v HgC12浸泡、用75％v/v酒精将
种子和芽浸泡30s，20％的Na2S2O3浸泡1min，无菌水冲洗8～10次，用无菌
滤纸吸干外植体表面水分；
[0017] 步骤2、愈伤组织的诱导：将预处理后的外植体接种于诱导培养基中常温培养条件下培养，诱导得到愈伤组织；所述诱导培养基为DKW基本培养基中添加15mg/L
活性炭、3mg/L IAA、30g/L蔗糖和6g/L的琼脂，pH值为5.5～6.0。培养
温度为25℃，培养时间为10天，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天。
[0018] 步骤3、愈伤组织增殖分化培养：将步骤2中得到的愈伤组织置于增殖分化培养基中进行增殖分化培养获得丛芽；所述增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.8mg/L KT、0.3mg/L琥珀酸盐、30g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；在培养温度25℃、光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养。
[0019] 步骤4、生根培养：将步骤3中得到的丛芽分成单芽置于生根培养基中进行培养得到完整带根苗；生根培养基为5mg/L维生素C、7mg/L IBA、30g/L蔗糖和6g/L的琼脂，pH值为5.5～6.0；生根培养条件为：培养温度为25℃±2℃，光照时间为12～16小时/天，光照强度为1000-2000lux。
[0020] 步骤5、移栽炼苗：将步骤4得到的完整带根苗洗净后移至工厂化棚炼苗；且完整带根苗洗净后采用杜菌林浸泡再移至工厂化棚的基质中。移栽后21-40天，施0.2％
硝酸钾、0.2％
硫酸钾、0.2％
磷酸二氢钾和EDTA螯合的
铁盐的
叶面肥。
[0021] 实施例2
[0022] 本实施例提供的一种早实核桃的组培方法，具体包括如下步骤：
[0023] 步骤1、外植体的选择与处理：将采集到的核桃嫩枝梢剪成只保留顶芽或2～3cm长带腋芽的茎段作为外植体，经消毒处理：用洗洁精水溶液清洗表面污垢后，进行流水冲洗；将清洗后的嫩枝条于2℃～4℃冷藏避光处理4～8h；移至超净工作台上，用0.1％v/v HgC12浸泡、用75％v/v酒精将种子和芽浸泡30s，20％的Na2S2O3浸泡1min，无菌水冲洗8～10次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分；
[0024] 步骤2、愈伤组织的诱导：将预处理后的外植体接种于诱导培养基中常温培养条件下培养，诱导得到愈伤组织；所述诱导培养基为DKW基本培养基中添加10mg/L活性炭、2mg/L IAA、30g/L蔗糖和6g/L的琼脂，pH值为5.5～6.0。培养温度为23℃，培养时间为12天，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天。
[0025] 步骤3、愈伤组织增殖分化培养：将步骤2中得到的愈伤组织置于增殖分化培养基中进行增殖分化培养获得丛芽；所述增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.7mg/L KT、0.2mg/L琥珀酸盐、30g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；在培养温度23℃、光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养。
[0026] 步骤4、生根培养：将步骤3中得到的丛芽分成单芽置于生根培养基中进行培养得到完整带根苗；生根培养基为4mg/L维生素C、5mg/L IBA、30g/L蔗糖和6g/L的琼脂，pH值为5.5～6.0；生根培养条件为：培养温度为25℃±2℃，光照时间为12～16小时/天，光照强度为1000-2000lux。
[0027] 步骤5、移栽炼苗：将步骤4得到的完整带根苗洗净后移至工厂化棚炼苗；且完整带根苗洗净后采用杜菌林浸泡再移至工厂化棚的基质中。移栽后21-40天，施0.2％硝酸钾、0.2％
硫酸钾、0.2％磷酸二氢钾和EDTA螯合的铁盐的叶面肥。
[0028] 实施例3
[0029] 本实施例提供的一种早实核桃的组培方法，具体包括如下步骤：
[0030] 步骤1、外植体的选择与处理：将采集到的核桃嫩枝梢剪成只保留顶芽或2～3cm长带腋芽的茎段作为外植体，经消毒处理：用洗洁精水溶液清洗表面污垢后，进行流水冲洗；将清洗后的嫩枝条于2℃～4℃冷藏避光处理4～8h；移至超净工作台上，用0.1％v/v HgC12浸泡、用75％v/v酒精将种子和芽浸泡30s，20％的Na2S2O3浸泡1min，无菌水冲洗8～10次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分；
[0031] 步骤2、愈伤组织的诱导：将预处理后的外植体接种于诱导培养基中常温培养条件下培养，诱导得到愈伤组织；所述诱导培养基为DKW基本培养基中添加20mg/L活性炭、5mg/L IAA、30g/L蔗糖和6g/L的琼脂，pH值为5.5～6.0。培养温度为27℃，培养时间为12天，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天。
[0032] 步骤3、愈伤组织增殖分化培养：将步骤2中得到的愈伤组织置于增殖分化培养基中进行增殖分化培养获得丛芽；所述增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.9mg/L KT、0.5mg/L琥珀酸盐、30g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；在培养温度27℃、光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养。
[0033] 步骤4、生根培养：将步骤3中得到的丛芽分成单芽置于生根培养基中进行培养得到完整带根苗；生根培养基为6mg/L维生素C、10mg/L IBA、30g/L蔗糖和6g/L的琼脂，pH值为5.5～6.0；生根培养条件为：培养温度为25℃±2℃，光照时间为12～16小时/天，光照强度为1000-2000lux。
[0034] 步骤5、移栽炼苗：将步骤4得到的完整带根苗洗净后移至工厂化棚炼苗；且完整带根苗洗净后采用杜菌林浸泡再移至工厂化棚的基质中。移栽后21-40天，施0.2％硝酸钾、0.2％硫酸钾、0.2％磷酸二氢钾和EDTA螯合的铁盐的叶面肥。
[0035] 对比例1
[0036] 该对比例中步骤3所用的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.8mg/L KT、30g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；其余步骤均同实施例1。
[0037] 对比例2
[0038] 该对比例中步骤3所用的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.3mg/L琥珀酸盐、30g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；其余步骤均同实施例1。
[0039] 实验例1
[0040] 1、分别观察并计算以上实施例1～实施例3，以及对比例1-2中早实核桃的芽增殖系数、生根率以及移栽存活率并统计如下：
[0041] 表1
[0042] 生根率 芽增殖系数/月 移栽存活率实施例1 98.5％ 8.4 96.6％
实施例2 93.4％ 6.8 94.3％
实施例3 94.6％ 7.9 95.7％
对比例1 36.8％ 4.3 45.1％
对比例2 45.3％ 3.5 53.4％
[0043] 由表1可知，本发明提供的一种早实核桃的组培方法，芽增殖系数达到6.8～8.4倍/月，生根率最高可达98.5％以上，移栽成活率在96.6％以上，可在短时间内提供成活率高的早实核桃优质种苗，有效解决早实核桃的规模化育苗问题。
[0044] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何
修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
