技术领域
[0001] 本
发明属于培养基制备领域，具体涉及一种培育高活性
植物促生菌的培养基及其制备方法。
背景技术
[0002] 植物促生菌(Plantgrowthpromotingrhizobacteria，PGPR)是一类能够促进植物生长、防治病害、增加作物产量的
微生物。PGPR对
土壤中有害病原微生物与非寄生性
根际有害微生物(deleteriousrizospheremicroorganisms，简称DRMO)都有一定的生防作用，而且对植物吸收利用矿物质营养也有促进作用，并可以产生有益植物生长的代谢产物，从而促进植物的生长发育。近年来已有很多学者研究表明，植物生长促生菌可以间接通过产生抗生素和分泌
铁载体等方式抑制或减轻植物病害对植物产生的不良影响，还能通过解磷、固氮、产生植物
激素、酶解降低乙烯
水平等方式直接刺激和调节植物生长。许多植物根际促生菌可以产生吲哚乙酸(Indole-3-aceticacid，IAA)、维生素(antibiotic)等，以及利用并降解植物产生的乙烯合成前体1-
氨基环丙-1-
羧酸(1-aminocyclopropane-1-carboxylate，ACC))，使ACC分解成A-丁
酮酸和氨，从而降低了逆境条件下植物体内产生大量的乙烯，促进植物的生长发育。所以植物生长促生菌，特别是含ACC脱氨酶的植物促生菌备受各界关注，尤其被认为在逆境条件下能有效促进植物生长。
[0003] 植物促生菌(PGPR)指生存在植物根圈范围中，对植物生长有促进或对病原菌有拮抗作用的有益的细菌。它既可以单独使用，也可以与微生物
肥料复合使用，使促生作用、生防作用和肥效作用更好地结合起来，以提高和加强应用效果，能够被广泛应用在生物肥复合制剂、绿色食品生产、有机食品生产及发展生态农业中。但是现有培养植物促生菌(PGPR)的培养基针对性差和培养出的促生菌活菌数量低的
缺陷。
发明内容
[0004] 为了解决上述难题，本发明提供了一种培育高活性植物促生菌的培养基及其制备方法，该培养基含有乙酸双
氧铀二水合物和1-氨基环丙烷-1-羧酸培养得到的植物促生菌，将其用于植物中可提高植物的抗盐
碱性和提高植物种ACC的分泌量，本发明的技术方案如下：一种培育高活性植物促生菌的培养基，每1000mL所述的培育高活性植物促生菌的培养基中含有
牛肉膏8 12g、蛋白胨10 20g、
氯化钠4 5g、乙酸双氧铀二水合物4 6g、甘油8 12g~ ~ ~ ~ ~
和1-氨基环丙烷-1-羧酸70 90mg。
~
[0005] 在本发明的有的
实施例中，以所述的牛肉膏的重量为100wt%，所述的牛肉膏的固含量为75 85wt%。~
[0006] 在本发明的有的实施例中，所述的1-氨基环丙烷-1-羧酸的制备方法为：以硝基乙酸酯和1，2-二卤代乙烷为原料，经过
烃化环合、硝基还原和羧基
水解反应得到粗1-氨基环丙烷-1-羧酸，然后将所述的粗1-氨基环丙烷-1-羧酸进行分离、纯化、结晶得到高含量和高纯度的1-氨基环丙烷-1-羧酸。
[0007] 在本发明的有的实施例中，每100g所述的蛋白胨中含有20g胰酪胨、5g乳糖、2.75g氯
磷酸氢二
钾、2.75g磷酸二氢钾、5.0g氯化钠和0.1g十二烷基
硫酸钠。
[0008] 在本发明的有的实施例中，所述的培育高活性植物促生菌的培养基的pH为7.0~7.2，所述的培养基混合均匀后于120℃下灭菌15min。
[0009] 本发明的另外一个目的在于提供一种培育高活性植物促生菌的培养基的制备方法，所述的培育高活性植物促生菌的培养基的制备方法包括以下步骤：步骤1：将牛肉膏、蛋白胨依次加入水中搅拌，
微波处理，加入甘油、氯化钠搅拌均匀；
步骤2：将乙酸双氧铀二水合物、1-氨基环丙烷-1-羧酸、水混合均匀，高压
蒸汽灭菌得到所说的培育高活性植物促生菌的培养基。
[0010] 在本发明的有的实施例中，所述的步骤1中搅拌时间为10 16min，搅拌
温度为70~ ~80℃。
[0011] 在本发明的有的实施例中，所述的步骤2中高压蒸汽灭菌时间为20 30min，灭菌温~度为110 120℃。
~
[0012] 与
现有技术相比，本发明的有益效果在于：1、本发明的一种培育高活性植物促生菌的培养基配方体系中含有牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、乙酸双氧铀二水合物、甘油和1-氨基环丙烷-1-羧酸，其中乙酸双氧铀二水合物的添加可以培养出耐盐碱性更高的植物促生菌，使用该培养基培育出来的植物促生菌的针对性更好。
[0013] 2、本发明的一种培育高活性植物促生菌的培养基的配方体系中含有1-氨基环丙烷-1-羧酸，使得该培养基培养得到的植物促生菌具有更高的活性，使用该植物促生菌可以促进植株分泌更多的ACC脱氨酶（ACCdeaminase，ACCD），植物促生菌通过代谢生产乙烯的前体1-氨基环丙烷-1-羧酸来降低乙烯水平，进而影响植物乙烯内源稳态，促进根伸长。
具体实施方式
[0014] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，以使本领域的技术人员能够更好的理解本发明的优点和特征，从而对本发明的保护范围做出更为清楚的界定。本发明所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0015] 实施例1一种培育高活性植物促生菌的培养基，其中每1000mL所述的培育高活性植物促生菌的培养基中含有牛肉膏10g、蛋白胨15g、氯化钠4.5g、乙酸双氧铀二水合物5g、甘油10g和1-氨基环丙烷-1-羧酸80mg。
[0016] 其中，以所述的牛肉膏的重量为100wt%，所述的牛肉膏的固含量为80wt%。
[0017] 其中，1-氨基环丙烷-1-羧酸的制备方法为：以硝基乙酸酯和1，2-二卤代乙烷为原料，经过烃化环合、硝基还原和羧基水解反应得到粗1-氨基环丙烷-1-羧酸，然后将所述的粗1-氨基环丙烷-1-羧酸进行分离、纯化、结晶得到高含量和高纯度的1-氨基环丙烷-1-羧酸。
[0018] 其中，每100g所述的蛋白胨中含有20g胰酪胨、5g乳糖、2.75g氯
磷酸氢二钾、2.75g磷酸二氢钾、5.0g氯化钠和0.1g十二烷基硫酸钠。
[0019] 其中，培育高活性植物促生菌的培养基的pH为7.1，所述的培养基混合均匀后于120℃下灭菌15min。
[0020] 一种培育高活性植物促生菌的培养基的制备方法包括以下步骤：步骤1：将牛肉膏、蛋白胨依次加入水中搅拌，微波处理，加入甘油、氯化钠搅拌均匀；
步骤2：将乙酸双氧铀二水合物、1-氨基环丙烷-1-羧酸、水混合均匀，高压蒸汽灭菌得到所说的培育高活性植物促生菌的培养基。
[0021] 其中，步骤1中搅拌时间为13min，搅拌温度为75℃。
[0022] 其中，步骤2中高压蒸汽灭菌时间为25min，灭菌温度为115℃。
[0023] 实施例2一种培育高活性植物促生菌的培养基，其中每1000mL所述的培育高活性植物促生菌的培养基中含有牛肉膏8g、蛋白胨20g、氯化钠4g、乙酸双氧铀二水合物4g、甘油8g和1-氨基环丙烷-1-羧酸70mg。
[0024] 其中，以所述的牛肉膏的重量为100wt%，所述的牛肉膏的固含量为80wt%。
[0025] 其中，1-氨基环丙烷-1-羧酸的制备方法为：以硝基乙酸酯和1，2-二卤代乙烷为原料，经过烃化环合、硝基还原和羧基水解反应得到粗1-氨基环丙烷-1-羧酸，然后将所述的粗1-氨基环丙烷-1-羧酸进行分离、纯化、结晶得到高含量和高纯度的1-氨基环丙烷-1-羧酸。
[0026] 其中，每100g所述的蛋白胨中含有20g胰酪胨、5g乳糖、2.75g氯磷酸氢二钾、2.75g磷酸二氢钾、5.0g氯化钠和0.1g十二烷基硫酸钠。
[0027] 其中，培育高活性植物促生菌的培养基的pH为7.1，所述的培养基混合均匀后于120℃下灭菌15min。
[0028] 一种培育高活性植物促生菌的培养基的制备方法包括以下步骤：步骤1：将牛肉膏、蛋白胨依次加入水中搅拌，微波处理，加入甘油、氯化钠搅拌均匀；
步骤2：将乙酸双氧铀二水合物、1-氨基环丙烷-1-羧酸、水混合均匀，高压蒸汽灭菌得到所说的培育高活性植物促生菌的培养基。
[0029] 其中，步骤1中搅拌时间为13min，搅拌温度为75℃。
[0030] 其中，步骤2中高压蒸汽灭菌时间为25min，灭菌温度为115℃。
[0031] 实施例3一种培育高活性植物促生菌的培养基，其中每1000mL所述的培育高活性植物促生菌的培养基中含有牛肉膏12g、蛋白胨10g、氯化钠5g、乙酸双氧铀二水合物6g、甘油12g和1-氨基环丙烷-1-羧酸90mg。
[0032] 其中，以所述的牛肉膏的重量为100wt%，所述的牛肉膏的固含量为80wt%。
[0033] 其中，1-氨基环丙烷-1-羧酸的制备方法为：以硝基乙酸酯和1，2-二卤代乙烷为原料，经过烃化环合、硝基还原和羧基水解反应得到粗1-氨基环丙烷-1-羧酸，然后将所述的粗1-氨基环丙烷-1-羧酸进行分离、纯化、结晶得到高含量和高纯度的1-氨基环丙烷-1-羧酸。
[0034] 其中，每100g所述的蛋白胨中含有20g胰酪胨、5g乳糖、2.75g氯磷酸氢二钾、2.75g磷酸二氢钾、5.0g氯化钠和0.1g十二烷基硫酸钠。
[0035] 其中，培育高活性植物促生菌的培养基的pH为7.1，所述的培养基混合均匀后于120℃下灭菌15min。
[0036] 一种培育高活性植物促生菌的培养基的制备方法包括以下步骤：步骤1：将牛肉膏、蛋白胨依次加入水中搅拌，微波处理，加入甘油、氯化钠搅拌均匀；
步骤2：将乙酸双氧铀二水合物、1-氨基环丙烷-1-羧酸、水混合均匀，高压蒸汽灭菌得到所说的培育高活性植物促生菌的培养基。
[0037] 其中，步骤1中搅拌时间为13min，搅拌温度为75℃。
[0038] 其中，步骤2中高压蒸汽灭菌时间为25min，灭菌温度为115℃。
[0039] 实施例4一种培育高活性植物促生菌的培养基，其中每1000mL所述的培育高活性植物促生菌的培养基中含有牛肉膏10g、蛋白胨15g、氯化钠4.5g、乙酸双氧铀二水合物5g、甘油10g和1-氨基环丙烷-1-羧酸80mg。
[0040] 其中，以所述的牛肉膏的重量为100wt%，所述的牛肉膏的固含量为75wt%。
[0041] 其中，1-氨基环丙烷-1-羧酸的制备方法为：以硝基乙酸酯和1，2-二卤代乙烷为原料，经过烃化环合、硝基还原和羧基水解反应得到粗1-氨基环丙烷-1-羧酸，然后将所述的粗1-氨基环丙烷-1-羧酸进行分离、纯化、结晶得到高含量和高纯度的1-氨基环丙烷-1-羧酸。
[0042] 其中，每100g所述的蛋白胨中含有20g胰酪胨、5g乳糖、2.75g氯磷酸氢二钾、2.75g磷酸二氢钾、5.0g氯化钠和0.1g十二烷基硫酸钠。
[0043] 其中，培育高活性植物促生菌的培养基的pH为7.0，所述的培养基混合均匀后于120℃下灭菌15min。
[0044] 一种培育高活性植物促生菌的培养基的制备方法包括以下步骤：步骤1：将牛肉膏、蛋白胨依次加入水中搅拌，微波处理，加入甘油、氯化钠搅拌均匀；
步骤2：将乙酸双氧铀二水合物、1-氨基环丙烷-1-羧酸、水混合均匀，高压蒸汽灭菌得到所说的培育高活性植物促生菌的培养基。
[0045] 其中，步骤1中搅拌时间为10min，搅拌温度为70℃。
[0046] 其中，步骤2中高压蒸汽灭菌时间为20min，灭菌温度为110℃。
[0047] 实施例5一种培育高活性植物促生菌的培养基，其中每1000mL所述的培育高活性植物促生菌的培养基中含有牛肉膏10g、蛋白胨15g、氯化钠4.5g、乙酸双氧铀二水合物5g、甘油10g和1-氨基环丙烷-1-羧酸80mg。
[0048] 其中，以所述的牛肉膏的重量为100wt%，所述的牛肉膏的固含量为85wt%。
[0049] 其中，1-氨基环丙烷-1-羧酸的制备方法为：以硝基乙酸酯和1，2-二卤代乙烷为原料，经过烃化环合、硝基还原和羧基水解反应得到粗1-氨基环丙烷-1-羧酸，然后将所述的粗1-氨基环丙烷-1-羧酸进行分离、纯化、结晶得到高含量和高纯度的1-氨基环丙烷-1-羧酸。
[0050] 其中，每100g所述的蛋白胨中含有20g胰酪胨、5g乳糖、2.75g氯磷酸氢二钾、2.75g磷酸二氢钾、5.0g氯化钠和0.1g十二烷基硫酸钠。
[0051] 其中，培育高活性植物促生菌的培养基的pH为7.2，所述的培养基混合均匀后于120℃下灭菌15min。
[0052] 一种培育高活性植物促生菌的培养基的制备方法包括以下步骤：步骤1：将牛肉膏、蛋白胨依次加入水中搅拌，微波处理，加入甘油、氯化钠搅拌均匀；
步骤2：将乙酸双氧铀二水合物、1-氨基环丙烷-1-羧酸、水混合均匀，高压蒸汽灭菌得到所说的培育高活性植物促生菌的培养基。
[0053] 其中，步骤1中搅拌时间为16min，搅拌温度为80℃。
[0054] 其中，步骤2中高压蒸汽灭菌时间为30min，灭菌温度为120℃。
[0055] 本发明的配方体系中含有牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、乙酸双氧铀二水合物、甘油和1-氨基环丙烷-1-羧酸，其中乙酸双氧铀二水合物的添加可以培养出耐盐碱性更高的植物促生菌，使用该培养基培育出来的植物促生菌的针对性更好，由于1-氨基环丙烷-1-羧酸的添加，使得该培养基培养得到的植物促生菌具有更高的活性，培育得到的植物促生菌可以促进植株分泌更多的ACC脱氨酶，植物促生菌通过代谢生产乙烯的前体1-氨基环丙烷-1-羧酸来降低乙烯水平来影响植物乙烯内源稳态，促进根伸长。
[0056] 最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行
修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
