使用GFAP和UCH-L1的组合辅助诊断和评价人类受试者中创伤性脑损伤的方法
阅读：811发布：2020-05-13
专利汇可以提供使用GFAP和UCH-L1的组合辅助诊断和评价人类受试者中创伤性脑损伤的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本文公开了辅助诊断和评估已遭受或可能已遭受头部损伤的受试者的方法。例如，本公开通过检测或测量在该受试者已遭受或可能已遭受头部损伤后的48小时内的各个时间点采集的样品中的泛素羧基末端 水 解 酶L1(UCH-L1)和神经胶质 纤维 酸性蛋白(GFAP)的水平的组合，提供了用于辅助诊断和评估受试者以确定该受试者是否已遭受创伤性脑损伤(TBI)的方法。，下面是使用GFAP和UCH-L1的组合辅助诊断和评价人类受试者中创伤性脑损伤的方法专利的具体信息内容。
1.一种辅助诊断或确定已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者是否患有中度至重度创伤性脑损伤(TBI)的方法，所述方法包括：
对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及
当在所述样品中的GFAP的水平等于约105pg/ml至约890pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中的UCH-L1的水平等于约110pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者未遭受中度、重度、或中度至重度TBI。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，在进行所述测定之前或之后，所述受试者已接受过格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分，并且其中基于所述GCS评分，所述受试者疑似患有中度、重度或中度至重度TBI。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，基于3-12的GCS评分，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平与患有中度至重度TBI的受试者相关联。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中：(a)所述GFAP的参考水平为约105pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约840pg/mL；(b)所述GFAP的参考水平为约150pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(c)所述GFAP的参考水平为约240pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约860pg/mL；(d)所述GFAP的参考水平为约265pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约860pg/mL；(e)所述GFAP的参考水平为约370pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；(f)所述GFAP的参考水平为约505pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1580pg/mL；(g)所述GFAP的参考水平为约695pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约
1570pg/mL；(h)所述GFAP的参考水平为约890pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约920pg/mL。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度等于或大于约79％且特异度等于或大于约33％的测定来确定。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，所述样品是在所述实际或疑似损伤后的约8小时至约16小时内从所述受试者获得的。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，所述测定具有比单独测量或检测GFAP或UCH-L1的测定高至少2％的灵敏度和高至少3％的特异度。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，所述样品是在以下时间内从所述受试者获得的：
(a)在所述实际或疑似损伤后的约8小时至约12小时；其中所述GFAP的参考水平为约
240pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约860pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于
97％的灵敏度和等于或大于51％的特异度；
(b)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约
105pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约840pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于
97.5％的灵敏度和等于或大于36％的特异度；
(c)在所述实际或疑似损伤后的约8小时至约12小时；其中，所述GFAP的参考水平为约
890pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约920pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于
90％的灵敏度和等于或大于79％的特异度；或
(d)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约
505pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1580pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于
90％的灵敏度和等于或大于66％的特异度。
9.一种辅助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者进行头部计算机断层(CT)扫描的方法，所述方法包括：
对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及
当在所述样品中的GFAP的水平等于约50pg/ml至约975pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中的UCH-L1的水平等于约90pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者不需要CT扫描。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，在进行所述测定之前或之后，所述受试者已接受过CT扫描，并且其中基于所述CT扫描结果，所述受试者疑似患有TBI。
11.根据权利要求9所述的方法，其中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平与阴性CT扫描结果相关联。
12.根据权利要求9-11中任一项所述的方法，其中，(a)所述GFAP的参考水平为约50pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(b)所述GFAP的参考水平为约95pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(c)所述GFAP的参考水平为约110pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(d)所述GFAP的参考水平为约115pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；(e)所述GFAP的参考水平为约140pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(f)所述GFAP的参考水平为约150pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约190pg/mL；(g)所述GFAP的参考水平为约190pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约90pg/mL；(h)所述GFAP的参考水平为约240pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约300pg/mL；(i)所述GFAP的参考水平为约285pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约190pg/mL；(j)所述GFAP的参考水平为约500pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1450pg/mL；(k)所述GFAP的参考水平为约555pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约810pg/mL；(1)所述GFAP的参考水平为约800pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约900pg/mL；(m)所述GFAP的参考水平为约
840pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(n)所述GFAP的参考水平为约880pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约810pg/mL；或(o)所述GFAP的参考水平为约975pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1580pg/mL。
13.根据权利要求9-12中任一项所述的方法，其中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度等于或大于约54％和特异度等于或大于约32％的测定来确定。
14.根据权利要求9-13中任一项所述的方法，其中，所述样品是在所述实际或疑似损伤后的约4小时至约16小时内从所述受试者获得的。
15.根据权利要求9-14中任一项所述的方法，其中，所述测定具有比单独测量或检测GFAP或UCH-L1的测定高至少2％的灵敏度和高至少4％的特异度。
16.根据权利要求9-15中任一项所述的方法，其中，所述样品是在以下时间内从所述受试者获得的：
(a)在所述实际或疑似损伤后的约4小时至约8小时；其中所述GFAP的参考水平为约
110pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于
95％的灵敏度和等于或大于62％的特异度；
(b)在所述实际或疑似损伤后的约8小时至约12小时；其中所述GFAP的参考水平为约
240pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约300pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于
91.5％的灵敏度和等于或大于52％的特异度；或
(c)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约
190pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约90pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于
99％的灵敏度和等于或大于36％的特异度。
17.一种辅助确定已遭受头部损伤的人类受试者是否已遭受创伤性脑损伤(TBI)的方法，所述方法包括：
对在损伤后约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及当在所述样品中的GFAP的水平等于约15pg/ml至约40pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中的UCH-L1的水平等于从约70pg/mL至约150pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者有可能患有TBI。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，(a)GFAP的参考水平为约10pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约60pg/mL；(b)GFAP的参考水平为约15pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约70pg/mL；(c)GFAP的参考水平为约15pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约90pg/mL；(d)GFAP的参考水平为约15pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约150pg/mL；(e)GFAP的参考水平为约20pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约60pg/mL；(f)GFAP的参考水平为约30pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约70pg/mL；(g)GFAP的参考水平为约30pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约110pg/mL。
19.根据权利要求17或18所述的方法，其中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度等于或大于约90％和特异度等于或大于约35％的测定来确定。
20.根据权利要求17-19中任一项所述的方法，其中，所述样品是在所述损伤后的约4小时至约16小时内从所述受试者获得的。
21.根据权利要求17-20中任一项所述的方法，其中，所述测定具有比单独测量或检测GFAP或UCH-L1的测定高至少3％的灵敏度和高至少17％的特异度。
22.根据权利要求17-21中任一项所述的方法，其中，所述样品是在以下时间内从所述受试者获得的：
(a)在所述损伤后的约8小时至约12小时；其中所述GFAP的参考水平为约30pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于92％的灵敏度和等于或大于99％的特异度；
(b)在所述损伤后约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约30pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于99％的特异度；
(c)在所述损伤后约4小时至约8小时；其中，所述GFAP的参考水平为约40pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约100pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于94％的特异度；
(d)在所述损伤后约8小时至约12小时；其中，所述GFAP的参考水平为约15pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约150pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于82％的特异度；或
(e)在所述损伤后约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约20pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约60pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于65％的特异度。
23.一种辅助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者进行头部磁共振成像(MRI)程序的方法，所述方法包括：
对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及
(a)当在所述样品中的GFAP水平低于约15pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平低于约50pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者不需要MRI程序；或(b)当在所述样品中的GFAP水平等于约15pg/mL至约1000pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平等于约50pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者有可能需要MRI程序；或
(c)当在所述样品中的GFAP水平大于约1000pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平大于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定受试者有可能需要MRI程序。
24.根据权利要求23所述的方法，其中，在进行所述测定之后，所述受试者已接受过MRI，并且其中基于所述MRI的结果，所述受试者疑似患有TBI。
25.根据权利要求23所述的方法，其中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平与阴性MRI结果相关联。
26.根据权利要求23-25中任一项所述的方法，其中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度为约80％至约98％且特异度为约30％至约85％的测定来确定。
27.根据权利要求23-26中任一项所述的方法，其中所述受试者在进行所述测定之前曾接受过阴性的CT扫描结果。
28.一种用于辅助预测已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者的预后的方法，所述方法包括：
对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量或检测在所述样品中的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)水平；以及
当在所述样品中的GFAP水平等于约80pg/mL至约2000pg/mL的GFAP的参考水平且在所述样品中的UCH-L1水平等于约130pg/ml至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，预测所述受试者可能具有不利的预后。
29.根据权利要求28所述的方法，其中，在进行所述测定之后，所述受试者已接受过扩展的格拉斯哥预后量表(GOSE)评分，并且其中基于所述GOSE评分，所述受试者疑似具有较差的预后。
30.根据权利要求29所述的方法，其中，基于1的GOSE评分，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平与具有较差预后的受试者相关联。
31.根据权利要求28-30中任一项所述的方法，其中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度为约80％至约97％和特异度为约30％至约95％的测定来确定。
32.根据权利要求1-31中任一项所述的方法，其中，测量GFAP的水平包括：
(a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
(1)至少一种GFAP捕获抗体，其与GFAP或GFAP片段上的表位结合以形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原复合物，和
(2)至少一种GFAP检测抗体，其包含可检测标记并与GFAP上的未与所述GFAP捕获抗体结合的表位结合，以形成GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物，从而形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物；以及
(b)基于由所述至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中GFAP的量或浓度。
33.根据权利要求1-32中任一项所述的方法，其中，测量UCH-L1的水平包括：
(a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
(1)至少一种UCH-L1捕获抗体，其与UCH-L1或UCH-L1片段上的表位结合以形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原复合物，和
(2)至少一种UCH-L1检测抗体，其包含可检测标记并与UCH-L1上的未与所述至少一种UCH-L1捕获抗体结合的表位结合，以形成UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物，从而形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1-检测抗体复合物；以及(b)基于由所述至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中UCH-L1的量或浓度。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中，所述样品选自由全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品组成的组。
35.根据权利要求1-34中任一项所述的方法，其中，所述样品：
(a)在受试者遭受因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得；
(b)在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得；
(c)从患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者获得。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的方法，其中，所述方法可以在任何受试者上进行，而无需考虑选自由所述受试者的临床状况，所述受试者的实验室值，所述受试者遭受的轻度、中度、重度创伤性脑损伤的分类，所述受试者表现出的UCH-L1的低水平或高水平，以及其中所述受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间所组成的组的因素。
37.根据权利要求1-36中任一项所述的方法，其进一步包括用创伤性脑损伤疗法治疗所述受试者。
38.根据权利要求1-37中任一项所述的方法，还包括监测所述受试者。
39.根据权利要求1-37中任一项所述的方法，其中，所述样品是在所述受试者遭受了骨科损伤后获得的。
40.根据权利要求1-39中任一项所述的方法，其中，所述样品是：(a)全血样品；(b)血清样品；或(c)血浆样品。
41.根据权利要求1-40中任一项所述的方法，其中所述测定是：(a)免疫测定；(b)临床化学测定；或(c)单分子检测测定。
使用GFAP和UCH-L1的组合辅助诊断和评价人类受试者中创伤
性脑损伤的方法
[0001] 相关申请
[0002] 本申请要求2017年12月9日提交的美国申请号62/596,814、2017年12月27日提交的美国申请号62/610,805、2018年4月27日提交的美国申请号62/663,811、和2018年5月4日提交的美国申请号62/667,227的优先权，其每项申请的内容均通过引用并入本文。
技术领域
[0003] 本公开涉及辅助诊断和评估已经遭受或可能已经遭受头部损伤的受试者的方法。例如，本公开提供了通过检测或测量在受试者已遭受或可能已遭受头部损伤后48小时内的不同时间点所采集的样品中的泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的组合来辅助诊断和评估受试者以确定受试者是否遭受了创伤性脑损伤(TBI)的方法。
背景技术
[0004] 仅在美国，每年就发生超过500万起轻度创伤性脑损伤(TBI)。当前，没有简单、客观、准确的测量可用于辅助患者评估。实际上，许多TBI评估和诊断都基于主观数据。不幸的是，在评估轻度TBI时，诸如头部CT和格拉斯哥/昏迷评分(GCS)之类的客观测量结果并不十分全面或灵敏。此外，头部CT对于轻度TBI绝大部分时间都无法显示，价格昂贵，并且使患者暴露于不必要的辐射之下。另外，头部CT阴性也并不意味着该患者已免于脑震荡。相反，这仅意味着不需进行某些干预，例如手术。遭受创伤(例如骨科损伤(orthopedicinjury))的患者也可能患有TBI。临床医生和患者需要客观、可靠的信息来准确评估该病症，以促进适当的分类和恢复。迄今为止，在急诊环境中使用UCH-L1和GFAP来辅助患者评估和管理的数据有限。
[0005] 轻度的TBI或脑震荡很难客观地检测到，且在全球范围内提出成为日常挑战。脑震荡通常不会引起大出血等病理性疾病，在常规的计算机断层扫描中也不会引起异常，但会导致快速发作的神经元功能障碍，并在几天到几周内自行消失。大约15％的轻度TBI患者患有持续性认知功能障碍。骨科患者和轻度TBI受害者迫切需要在现场、急诊室和诊所、医院、运动场和军事活动(例如战斗)中评估其TBI状况。发明内容
[0006] 一方面，本公开涉及一种辅助诊断或确定已遭受或可能已遭受头部损伤的受试者是否患有中度、重度或中度至重度的创伤性脑损伤(TBI)的方法。该方法包括以下步骤：
[0007] 对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量或检测在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及
[0008] (a)当在所述样品中的GFAP的水平小于约105pg/mL的GFAP的参考水平且在所述样品中的UCH-L1的水平小于约110pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者未遭受中度、重度或中度至重度TBI；或
[0009] (b)当在所述样品中的GFAP水平等于约105pg/mL至约890pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中的UCH-L1的水平等于约110pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者未遭受中度、重度或中度至重度TBI；或
[0010] (c)当样品中的GFAP水平大于约890pg/mL的GFAP的参考水平且在所述样品中的UCH-L1的水平大于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者更有可能遭受中度、重度或中度至重度TBI。
[0011] 在上述方法的一个实施方案中，在进行所述测定之前或之后，所述受试者可能已接受过格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分。在另一个实施方案中，基于所确定的GCS评分，已接受过这种GCS评分的受试者疑似患有中度TBI。在另一个实施方案中，已接受过这种GCS评分的受试者疑似患有重度TBI。在另一个实施方案中，基于所确定的GCS评分，已接受过这种GCS评分的受试者疑似患有中度至重度TBI。在又一个实施方式中，在上述方法中，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与3-8(重度TBI)的格拉斯哥昏迷量表评分相关联或相对应。在其他方面，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与9-12(中度TBI)的格拉斯哥昏迷量表评分相关联。在其他方面，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与3-12(中度至重度TBI)的格拉斯哥昏迷量表评分相关联或相对应。
[0012] 在上述方法中，在一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约0至约4小时内对获得自受试者的样品进行测定。在另一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约4小时至约8小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约8小时至约12小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约12小时至约16小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约16小时至约20小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约20小时至约24小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约28小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约28小时至约32小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约32小时至约36小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或可疑损伤后约36小时至约40小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，对获得自受试者的样品进行测定。受试者在实际损伤或疑似损伤后约40小时至约44小时内。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约44至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。
[0013] 在上述方法的另一个实施方案中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度等于或大于约79％且特异度等于或大于约33％的测定来确定。
[0014] 在上述方法的又一个实施方案中，所述样品是在所述实际或疑似损伤后的约8小时至约16小时内从所述受试者获得的。
[0015] 在上述方法的又一个实施方案中，所述测定具有比单独测量或检测GFAP或UCH-L1的测定高至少2％的灵敏度和高至少3％的特异度。
[0016] 在上述方法的又一个实施例中：
[0017] a.在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时内从受试者获得样品；其中GFAP的参考水平为约240pg/mL，UCH-L1的参考水平为约860pg/mL。并且其中所述测定具有等于或大于97％的灵敏度和等于或大于51％的特异度；或
[0018] b.在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时内从受试者获得样品；其中GFAP的参考水平为约105pg/mL，UCH-L1的参考水平为约840pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于97.5％的灵敏度和等于或大于36％的特异度；或
[0019] c.在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时内从受试者获得样品；其中GFAP的参考水平为约890pg/mL，UCH-L1的参考水平为约920pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于79％的特异度；或
[0020] d.在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时内从受试者获取样品；其中GFAP的参考水平为约505pg/mL，UCH-L1的参考水平为约1580pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于66％的特异度。
[0021] 在上述方法的又一个实施例中，测量GFAP的水平包括：
[0022] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0024] (2)至少一种GFAP检测抗体，其包含可检测标记并与GFAP上的未与所述GFAP捕获抗体结合的表位结合，以形成GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物，从而形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物；以及
[0026] 在又一个实施例中，上述方法中UCH-L1的测量包括：
[0027] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0028] (1)至少一种UCH-L1捕获抗体，其与UCH-L1或UCH-L1片段上的表位结合以形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原复合物，和
[0029] (2)至少一种UCH-L1检测抗体，其包含可检测标记并与UCH-L1上的未与所述至少一种UCH-L1捕获抗体结合的表位结合，以形成UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物，从而形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1-检测抗体复合物；
[0030] 以及
[0031] (b)基于由所述至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中UCH-L1的量或浓度。
[0032] 一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有重度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度至重度的TBI。在进一步的方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为未患有TBI。
[0033] 上述方法可以进一步包括使用针对TBI的疗法(例如手术治疗、治疗性治疗或其组合)治疗被评估或评价为患有中度、重度或中度至重度TBI的人类受试者。可以使用本领域已知的并且在本文中进一步描述的任何这种疗法。此外，在另一方面，还可以任选地在任何治疗过程中和之后监测任何正在接受TBI治疗的受试者。可选地，所述方法可以进一步包括监测被评估为患有中度、重度或中度至重度TBI的受试者(例如那些至今尚未接受任何治疗的受试者)。
[0034] 在上述方法中，样品可以选自全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品。在一些实施方案中，样品是全血样品。在一些实施方案中，样品是血浆样品。在其他实施方案中，样品是血清样品。这样的样品可以以多种方式获得。例如，该样品可以在受试者遭受因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得。或者，该样品可以在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得。化学物质或毒素的实例为火、霉菌、石棉、农药、杀虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体、有机金属、滥用药物或其一种或多种组合。更进一步，该样品可以从患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者获得。
[0035] 上述任何方法可以在任何人类受试者上进行，而无需考虑选自所述人类受试者的临床状况，所述人类受试者的实验室值，所述人类受试者遭受的轻度、中度、重度或或中度至重度TBI的分类，所述人类受试者表现出的UCH-L1、GFAP和/或UCH-L1和GFAP的低水平或高水平，以及其中所述人类受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间的因素。
[0036] 在上述方法中，所述测定是免疫测定。在一些实施方案中，所述测定是即时测定。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定。在其他实施方案中，所述测定是单分子检测测定。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是全血。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，并且所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，并且所述样品是血清。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是血浆。在另外的实施方案中，该测定是单分子检测测定，所述样品是血浆。
[0037] 在另一方面，本公开涉及一种辅助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者进行头部计算机断层(CT)扫描的方法。该方法包括以下步骤：
[0038] 对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量或检测在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及
[0039] (a)当样品中的GFAP水平小于约50pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平小于约90pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者不需要进行CT扫描；或者[0040] (b)当样品中的GFAP水平等于约50pg/mL到约975pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平等于约90pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者不需要进行CT扫描；或者
[0041] (c)当样品中的GFAP水平大于约975pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平大于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者更有可能需要进行CT扫描。
[0042] 在上述方法的一个实施例中，受试者在进行所述测定之前或之后已接受过CT扫描，并且其中基于该CT扫描结果，该受试者疑似患有TBI。在另一个实施例中，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与阴性CT扫描结果相关联。
[0043] 更具体地说，在上述用于确定或评估是否进行头部CT的方法中，根据已经或曾经进行过的CT扫描，受试者可能被怀疑患有创伤性脑损伤(意味着在该测定进行之前)。例如，取决于受试者的医疗状况(例如，患者是否昏迷)，可以在受试者到达急诊室、创伤中心或其他部位后不久进行CT扫描，以便评估和/或评价受试者是否患有TBI。这种CT扫描可以在进行测定之前进行，以确信和确定该受试者是否患有轻度或中度至重度TBI。在进行测定之后，可以基于测定结果执行一次或多次后续CT扫描，作为医生(或其他医务人员)管理TBI的一部分(例如，确定是否手术和/或是否需要药理干预)。
[0044] 在上述方法的某些方面，基于CT扫描，受试者疑似患有创伤性脑损伤。例如，基于CT扫描，受试者疑似患有轻度TBI。或者，基于CT扫描，受试者疑似患有中度TBI。或者，基于CT扫描，受试者疑似患有重度TBI。可选地，基于CT扫描，受试者疑似患有中度至重度TBI。更进一步，基于CT扫描，受试者疑似不患有TBI。
[0045] 在上述方法的某些方面，所使用的参考水平与阳性头部计算机断层摄影术是相关的或对应的。例如，参考水平可以与具有阳性头部计算机断层摄影术的受试者相关联或相对应(例如通过参考水平的增加或降低)。可替代地，参考水平可以与具有阴性头部计算机断层摄影术的受试者相关联或相对应(例如通过参考水平的增加或降低)。更进一步替代地，参考水平可以与正在经历脑出血或脑出血改善或恶化的受试者相关联或相对应(例如通过增加或降低参考水平)。在上述方法的其他方面，参考水平与未遭受任何TBI的对照受试者相关联或相对应。
[0046] 在上述方法中，在一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约0至约4小时内对获得自受试者的样品进行测定。在另一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约4小时至约8小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约8小时至约12小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约12小时至约16小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约16小时至约20小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约20小时至约24小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约28小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约28小时至约32小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约32小时至约36小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或可疑损伤后约36小时至约40小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，对获得自受试者的样品进行测定。受试者在实际损伤或疑似损伤后约40小时至约44小时内。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约44至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。
[0047] 在上述方法的另一个实施方案中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度等于或大于约54％且特异度等于或大于约32％的测定来确定。
[0048] 在上述方法的又一个实施方案中，所述样品是在所述实际或疑似损伤后的约4小时至约16小时内从所述受试者获得的。
[0049] 在上述方法的又一个实施方案中，所述测定具有比单独测量或检测GFAP或UCH-L1的测定高至少2％的灵敏度和高至少4％的特异度。
[0050] 在上述方法的又一个实施例中：
[0051] a.在实际或疑似损伤后约4小时至约8小时内从受试者获得样品；其中GFAP的参考水平为约110pg/mL，UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于62％的特异度；
[0052] b.在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时内从受试者获取样品；其中GFAP的参考水平为约240pg/mL，UCH-L1的参考水平为约300pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于91.5％的灵敏度和等于或大于52％的特异度；或
[0053] c.在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时内从受试者获得样品；其中GFAP的参考水平为约190pg/mL，UCH-L1的参考水平为约90pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于99％的灵敏度和等于或大于36％的特异度。
[0054] 在上述方法的又一个实施例中，GFAP水平的测量包括：
[0055] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0056] (1)至少一种GFAP捕获抗体，其与GFAP或GFAP片段上的表位结合以形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原复合物，和
[0057] (2)至少一种GFAP检测抗体，其包含可检测标记并与GFAP上的未与所述GFAP捕获抗体结合的表位结合，以形成GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物，从而形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物；以及
[0058] (b)基于由所述至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中GFAP的量或浓度。
[0059] 在又一个实施例中，上述方法中UCH-L1的测量包括：
[0060] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0061] (1)至少一种UCH-L1捕获抗体，其与UCH-L1或UCH-L1片段上的表位结合以形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原复合物，和
[0062] (2)至少一种UCH-L1检测抗体，其包含可检测标记并与UCH-L1上的未与所述至少一种UCH-L1捕获抗体结合的表位结合，以形成UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物，从而形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1-检测抗体复合物；
[0063] 以及
[0064] (b)基于由所述至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中UCH-L1的量或浓度。
[0065] 一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有轻度TBI。在一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有重度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度至重度的TBI。在进一步的方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为未患有TBI。
[0066] 上述方法可以进一步包括使用针对TBI的疗法(例如手术治疗、治疗性治疗或其组合)治疗被评估或评价为患有TBI(例如轻度、中度、重度、或中度至重度TBI)的人类受试者。可以使用本领域已知的并且在本文中进一步描述的任何这种疗法。此外，在另一方面，还可以任选地在任何治疗过程中和之后监测任何正在接受TBI治疗的受试者。可选地，所述方法可以进一步包括监测被评估为患有中度、重度或中度至重度TBI的受试者(例如那些至今尚未接受任何治疗的受试者)。
[0067] 在上述方法中，样品可以选自全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品。在一些实施方案中，样品是全血样品。在一些实施方案中，样品是血浆样品。在其他实施方案中，样品是血清样品。这样的样品可以以多种方式获得。例如，该样品可以在受试者遭受因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得。或者，该样品可以在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得。化学物质或毒素的实例为火、霉菌、石棉、农药、杀虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体、有机金属、滥用药物或其一种或多种组合。更进一步，该样品可以从患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者获得。
[0068] 上述任何方法可以在任何人类受试者上进行，而无需考虑选自所述人类受试者的临床状况，所述人类受试者的实验室值，所述人类受试者遭受的轻度、中度、重度或中度至重度TBI的分类，所述人类受试者表现出的UCH-L1、GFAP和/或UCH-L1和GFAP的低水平或高水平，以及其中所述人类受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间的因素。
[0069] 在上述方法中，所述测定是免疫测定。在一些实施方案中，所述测定是即时测定。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定。在其他实施方案中，所述测定是单分子检测测定。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是全血。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，并且所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，并且所述样品是血清。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是血浆。在另外的实施方案中，该测定是单分子检测测定，所述样品是血浆。
[0070] 在又一方面，本公开涉及一种辅助确定已遭受头部损伤的人类受试者是否已遭受创伤性脑损伤(TBI)的方法。该方法包括以下步骤：对在损伤后约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；和
[0071] (a)当样品中的GFAP水平小于约15pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平小于约70pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者未遭受TBI；或者
[0072] (b)当样品中的GFAP水平等于约15pg/mL到约40pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平等于约70pg/mL至约150pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者更有可能已遭受TBI；或者
[0073] (c)当样品中的GFAP水平大于约40pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平大于约150pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者更有可能已遭受TBI。
[0074] 在上述方法中，在一个实施方案中，对在损伤后约0至约4小时内从受试者获得的样品进行测定。在另一个实施方案中，对在损伤后约4小时至约8小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约8小时至约12小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约12小时至约16小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约16小时至约20小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约20小时至约24小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约24小时至约28小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤或疑似损伤后约24小时至约48小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约28小时至约32小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约32小时至约36小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约36小时至约40小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约40小时至约44小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约44至约48小时内从受试者获得的样品进行测定。
[0075] 在上述方法的另一个实施方案中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度等于或大于约90％和特异度等于或大于约35％的测定来确定。
[0076] 在上述方法的另一个实施方案中，所述样品可以是在所述损伤后的约4小时至约16小时内从所述受试者获得的。
[0077] 在又一个实施方案中，所述测定具有比单独测量或检测GFAP或UCH-L1的测定高至少3％的灵敏度和高至少17％的特异度。
[0078] 在上述方法的又一个实施例中：
[0079] 所述样品是在所述损伤后的约8小时至约12小时内从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约30pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于92％的灵敏度和等于或大于99％的特异度；或
[0080] 所述样品是在所述损伤后约12小时至约16小时内从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约30pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于99％的特异度；或
[0081] 所述样品是在所述损伤后约4小时至约8小时内从所述受试者获得的；其中，所述GFAP的参考水平为约40pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约100pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于94％的特异度；或
[0082] 所述样品是在所述损伤后约8小时至约12小时内从所述受试者获得的；其中，所述GFAP的参考水平为约15pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约150pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于82％的特异度；或
[0083] 所述样品是在所述损伤后约12小时至约16小时内从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约20pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约60pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于65％的特异度。
[0084] 在上述方法中，可以使用免疫测定或临床化学测定来测量或检测GFAP和UCH-L1的水平。可选地，在上述方法中，可以使用单分子检测测定法来测量或检测GFAP和UCH-L1的水平。
[0085] 在上述方法的又一个实施例中，GFAP水平的测量包括：
[0086] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0087] (1)至少一种GFAP捕获抗体，其与GFAP或GFAP片段上的表位结合以形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原复合物，和
[0088] (2)至少一种GFAP检测抗体，其包含可检测标记并与GFAP上的未与所述GFAP捕获抗体结合的表位结合，以形成GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物，从而形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物；以及
[0089] (b)基于由所述至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中GFAP的量或浓度。
[0090] 在又一个实施例中，上述方法中UCH-L1的测量包括：
[0091] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0092] (1)至少一种UCH-L1捕获抗体，其与UCH-L1或UCH-L1片段上的表位结合以形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原复合物，和
[0093] (2)至少一种UCH-L1检测抗体，其包含可检测标记并与UCH-L1上的未与所述至少一种UCH-L1捕获抗体结合的表位结合，以形成UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物，从而形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1-检测抗体复合物；
[0094] 以及
[0095] (b)基于由所述至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中UCH-L1的量或浓度。
[0096] 一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有轻度的FBI。一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有重度的TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度至重度TBI。在使用上述方法的又一个方面，受试者被评估或评价为未患有TBI。
[0097] 上述方法可以进一步包括使用针对TBI的疗法(例如手术治疗、治疗性治疗或其组合)治疗被评估或评价为患有TBI(例如轻度、中度、重度、或中度至重度TBI)的人类受试者。可以使用本领域已知的并且在本文中进一步描述的任何这种疗法。此外，在另一方面，还可以任选地在任何治疗过程中和之后监测任何正在接受TBI治疗的受试者。可选地，所述方法可以进一步包括监测被评估为患有中度、重度或中度至重度TBI的受试者(例如那些至今尚未接受任何治疗的受试者)。
[0098] 在上述方法中，样品可以选自全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品。在一些实施方案中，样品是全血样品。在一些实施方案中，样品是血浆样品。在其他实施方案中，样品是血清样品。这样的样品可以以多种方式获得。例如，该样品可以在受试者遭受因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得。或者，该样品可以在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得。化学物质或毒素的实例为火、霉菌、石棉、农药、杀虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体、有机金属、滥用药物或其一种或多种组合。更进一步，该样品可以从患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者获得。
[0099] 上述任何方法可以在任何人类受试者上进行，而无需考虑选自所述人类受试者的临床状况，所述人类受试者的实验室值，所述人类受试者遭受的轻度、中度、重度或中度至重度TBI的分类，所述人类受试者表现出的UCH-L1、GFAP和/或UCH-L1和GFAP的低水平或高水平，以及其中所述人类受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间的因素。
[0100] 在上述方法中，所述测定是免疫测定。在一些实施方案中，所述测定是即时测定。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定。在其他实施方案中，所述测定是单分子检测测定。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是全血。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，并且所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，并且所述样品是血清。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是血浆。在另外的实施方案中，该测定是单分子检测测定，所述样品是血浆。
[0102] 对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及
[0103] (a)当在所述样品中的GFAP水平低于约15pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平低于约50pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者不需要MRI程序；或
[0104] (b)当在所述样品中的GFAP水平等于约15pg/mL至约1000pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平等于约50pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者有可能需要MRI程序；或
[0105] (c)当在所述样品中的GFAP水平大于约1000pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平大于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定受试者有可能需要MRI程序。
[0106] 在上述方法中，在进行所述测定之后，所述受试者已接受过MRI，并且其中基于所述MRI的结果，所述受试者疑似患有TBI。在又一个实施方案中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平与阴性MRI结果相关联。
[0107] 在上述方法中，在一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约0至约4小时内对获得自受试者的样品进行测定。在另一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约4小时至约8小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约8小时至约12小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约12小时至约16小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约16小时至约20小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约20小时至约24小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约28小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约28小时至约32小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约32小时至约36小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或可疑损伤后约36小时至约40小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，对获得自受试者的样品进行测定。受试者在实际损伤或疑似损伤后约40小时至约44小时内。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约44至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。
[0108] 在上述用于确定或评估是否进行MRI的方法中，根据已进行或曾经进行过的MRI或CT扫描，受试者可能被怀疑患有创伤性脑损伤(意味着在该测定进行之前)。例如，取决于受试者的医疗状况(例如，患者是否昏迷)，可以在受试者到达急诊室、创伤中心或其他部位后不久进行MRI或CT扫描，以便评估和/或评价受试者是否患有TBI。这种MRI或CT扫描可以在进行测定之前进行，以确信和确定该受试者是否患有轻度、中度、重度或中度至重度TBI。在进行测定之后，可以基于测定结果执行一次或多次后续MRI(或CT扫描)，作为医生(或其他医务人员)管理TBI的一部分(例如，确定是否手术和/或是否需要药理干预)。
[0109] 在上述方法的某些方面，基于MRI，受试者疑似患有创伤性脑损伤。例如，基于MRI，受试者疑似患有轻度TBI。或者，基于MRI，受试者疑似患有中度TBI。或者，基于MRI，受试者疑似患有重度TBI。可选地，基于MRI，受试者疑似患有中度至重度TBI。更进一步，基于MRI，受试者疑似不患有TBI。
[0110] 在上述方法的又一个实施方案中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度为约80％至约98％且特异度为约30％至约85％的测定来确定。
[0111] 在上述方法的另一个实施方案中，所述受试者在进行所述测定之前曾接受过阴性的CT扫描结果。
[0112] 一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有轻度TBI。在一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有重度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度至重度的TBI。在进一步的方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为未患有TBI。
[0113] 上述方法可以进一步包括使用针对TBI的疗法(例如手术治疗、治疗性治疗或其组合)治疗被评估或评价为患有TBI(例如轻度、中度、重度、或中度至重度TBI)的人类受试者。可以使用本领域已知的并且在本文中进一步描述的任何这种疗法。此外，在另一方面，还可以任选地在任何治疗过程中和之后监测任何正在接受TBI治疗的受试者。可选地，所述方法可以进一步包括监测被评估为患有中度、重度或中度至重度TBI的受试者(例如那些至今尚未接受任何治疗的受试者)。
[0114] 在上述方法中，样品可以选自全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品。在一些实施方案中，样品是全血样品。在一些实施方案中，样品是血浆样品。在其他实施方案中，样品是血清样品。这样的样品可以以多种方式获得。例如，该样品可以在受试者遭受因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得。或者，该样品可以在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得。化学物质或毒素的实例为火、霉菌、石棉、农药、杀虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体、有机金属、滥用药物或其一种或多种组合。更进一步，该样品可以从患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者获得。
[0115] 上述任何方法可以在任何人类受试者上进行，而无需考虑选自所述人类受试者的临床状况，所述人类受试者的实验室值，所述人类受试者遭受的轻度、中度、重度或中度至重度TBI的分类，所述人类受试者表现出的UCH-L1、GFAP和/或UCH-L1和GFAP的低水平或高水平，以及其中所述人类受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间的因素。
[0116] 在上述方法中，所述测定是免疫测定。在一些实施方案中，所述测定是即时测定。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定。在其他实施方案中，所述测定是单分子检测测定。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是全血。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，并且所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，并且所述样品是血清。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是血浆。在另外的实施方案中，该测定是单分子检测测定，所述样品是血浆。
[0117] 在另一方面，本公开涉及一种辅助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者进行头部磁共振成像(MRI)程序的方法。所述方法包括如下步骤：
[0118] 对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及
[0119] (a)当在所述样品中的GFAP水平等于约0pg/mL至约68pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平等于约0pg/mL至约99pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者不需要MRI程序；或
[0120] (b)当在所述样品中的GFAP水平大于约68pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平大于约99pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定受试者有可能需要MRI程序。
[0121] 在上述方法中，在一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约0至约4小时内对获得自受试者的样品进行测定。在另一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约4小时至约8小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约8小时至约12小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约12小时至约16小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约16小时至约20小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约20小时至约24小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约28小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约28小时至约32小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约32小时至约36小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或可疑损伤后约36小时至约40小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，对获得自受试者的样品进行测定。受试者在实际损伤或疑似损伤后约40小时至约44小时内。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约44至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。
[0122] 在上述方法中，在进行所述测定之后，所述受试者已接受过MRI，并且其中基于所述MRI的结果，所述受试者疑似患有TBI。在又一个实施方案中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平与阴性MRI结果相关联。
[0123] 在上述用于确定或评估是否进行MRI的方法中，根据已进行或曾经进行过的MRI或CT扫描，受试者可能被怀疑患有创伤性脑损伤(意味着在该测定进行之前)。例如，取决于受试者的医疗状况(例如，患者是否昏迷)，可以在受试者到达急诊室、创伤中心或其他部位后不久进行MRI或CT扫描，以便评估和/或评价受试者是否患有TBI。这种MRI或CT扫描可以在进行测定之前进行，以确信和确定该受试者是否患有轻度、中度、重度或中度至重度TBI。在进行测定之后，可以基于测定结果执行一次或多次后续MRI(或CT扫描)，作为医生(或其他医务人员)管理TBI的一部分(例如，确定是否手术和/或是否需要药理干预)。
[0124] 在上述方法的某些方面，基于MRI，受试者疑似患有创伤性脑损伤。例如，基于MRI，受试者疑似患有轻度TBI。或者，基于MRI，受试者疑似患有中度TBI。或者，基于MRI，受试者疑似患有重度TBI。可选地，基于MRI，受试者疑似患有中度至重度TBI。更进一步，基于MRI，受试者疑似不患有TBI。
[0125] 在上述方法的某些方面，所使用的参考水平与阳性头部计算机断层摄影术是是相关的或对应的。例如，参考水平可以与具有阳性头部计算机断层摄影术的受试者相关联或相对应(例如通过参考水平的增加或降低)。可替代地，参考水平可以与具有阴性头部计算机断层摄影术的受试者相关联或相对应(例如通过参考水平的增加或降低)。更进一步替代地，参考水平可以与正在经历脑出血或脑出血改善或恶化的受试者相关联或相对应(例如通过增加或降低参考水平)。在上述方法的其他方面，参考水平与未遭受任何TBI的对照受试者相关联或相对应。
[0126] 在上述方法的另一个实施方案中，所述GFAP的参考水平通过灵敏度为约90％至约95％且特异度为约31％至约46％的测定来确定。在上述方法的另一个实施方案中，所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度为约81％至约84％且特异度为约31％至约46％的测定来确定。
[0127] 在上述方法的另一个实施方案中，在进行测定之前，受试者可已接接受过阴性CT扫描结果。
[0128] 一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有轻度TBI。在一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有重度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度至重度的TBI。在进一步的方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为未患有TBI。
[0129] 上述方法可以进一步包括使用针对TBI的疗法(例如手术治疗、治疗性治疗或其组合)治疗被评估或评价为患有TBI(例如轻度、中度、重度、或中度至重度TBI)的人类受试者。可以使用本领域已知的并且在本文中进一步描述的任何这种疗法。此外，在另一方面，还可以任选地在任何治疗过程中和之后监测任何正在接受TBI治疗的受试者。可选地，所述方法可以进一步包括监测被评估为患有中度、重度或中度至重度TBI的受试者(例如那些至今尚未接受任何治疗的受试者)。
[0130] 在上述方法中，样品可以选自全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品。在一些实施方案中，样品是全血样品。在一些实施方案中，样品是血浆样品。在其他实施方案中，样品是血清样品。这样的样品可以以多种方式获得。例如，该样品可以在受试者遭受因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得。或者，该样品可以在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得。化学物质或毒素的实例为火、霉菌、石棉、农药、杀虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体、有机金属、滥用药物或其一种或多种组合。更进一步，该样品可以从患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者获得。
[0131] 上述任何方法可以在任何人类受试者上进行，而无需考虑选自所述人类受试者的临床状况，所述人类受试者的实验室值，所述人类受试者遭受的轻度、中度、重度或中度至重度TBI的分类，所述人类受试者表现出的UCH-L1、GFAP和/或UCH-L1和GFAP的低水平或高水平，以及其中所述人类受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间的因素。
[0132] 在上述方法中，所述测定是免疫测定。在一些实施方案中，所述测定是即时测定。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定。在其他实施方案中，所述测定是单分子检测测定。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是全血。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，并且所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，并且所述样品是血清。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是血浆。在另外的实施方案中，该测定是单分子检测测定，所述样品是血浆。
[0133] 在又一方面，本公开涉及一种用于辅助预测已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者的预后的方法。该方法包括以下步骤：
[0134] 对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量或检测在所述样品中的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)水平；以及
[0135] (a)当样品中的GFAP水平小于约80pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平小于约130pg/mL的UCH-L1的参考水平时，预测所述受试者具有良好的预后；或者[0136] (b)当样品中的GFAP水平等于约80pg/mL到约2000pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平等于约130pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，预测所述受试者可能具有不利的预后；或者
[0137] (c)当样品中的GFAP水平大于约2000pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平大于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，预测所述受试者可能具有不利的预后。
[0138] 在上述方法的另一个实施方案中，在进行该方法之后，受试者可能已接受过扩展的格拉斯哥预后量表(GOSE)评分，并且其中基于该GOSE评分，该受试者疑似预后较差。在又一个实施方案中，基于1的GOSE评分，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与具有较差预后的受试者相关联。
[0139] 在上述方法中，在一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约0至约4小时内对获得自受试者的样品进行测定。在另一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约4小时至约8小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约8小时至约12小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约12小时至约16小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约16小时至约20小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约20小时至约24小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约28小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约28小时至约32小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约32小时至约36小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或可疑损伤后约36小时至约40小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，对获得自受试者的样品进行测定。受试者在实际损伤或疑似损伤后约40小时至约44小时内。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约44至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。
[0140] 在上述方法的又一个实施例中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度为约80％至约97％和特异度为约30％至约95％的测定来确定。
[0141] 在上述方法中，使用免疫测定法或临床化学测定法测量或检测GFAP和UCH-L1的水平。可选地，在上述方法中，使用单分子检测测定法测量或检测GFAP和UCH-L1的水平。
[0142] 在上述方法的又一个实施例中，GFAP水平的测量包括：
[0143] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0144] (1)至少一种GFAP捕获抗体，其与GFAP或GFAP片段上的表位结合以形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原复合物，和
[0145] (2)至少一种GFAP检测抗体，其包含可检测标记并与GFAP上的未与所述GFAP捕获抗体结合的表位结合，以形成GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物，从而形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物；以及
[0146] (b)基于由所述至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中GFAP的量或浓度。
[0147] 在又一个实施例中，上述方法中UCH-L1的测量包括：
[0148] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0149] (1)至少一种UCH-L1捕获抗体，其与UCH-L1或UCH-L1片段上的表位结合以形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原复合物，和
[0150] (2)至少一种UCH-L1检测抗体，其包含可检测标记并与UCH-L1上的未与所述至少一种UCH-L1捕获抗体结合的表位结合，以形成UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物，从而形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1-检测抗体复合物；
[0151] 以及
[0152] (b)基于由所述至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中UCH-L1的量或浓度。
[0153] 一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有轻度TBI。在一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有重度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度至重度的TBI。在进一步的方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为未患有TBI。
[0154] 上述方法可以进一步包括使用针对TBI的疗法(例如手术治疗、治疗性治疗或其组合)治疗被评估或评价为患有TBI(例如轻度、中度、重度、或中度至重度TBI)的人类受试者。可以使用本领域已知的并且在本文中进一步描述的任何这种疗法。此外，在另一方面，还可以任选地在任何治疗过程中和之后监测任何正在接受TBI治疗的受试者。可选地，所述方法可以进一步包括监测被评估为患有中度、重度或中度至重度TBI的受试者(例如那些至今尚未接受任何治疗的受试者)。
[0155] 在上述方法中，样品可以选自全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品。在一些实施方案中，样品是全血样品。在一些实施方案中，样品是血浆样品。在其他实施方案中，样品是血清样品。这样的样品可以以多种方式获得。例如，该样品可以在受试者遭受因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得。或者，该样品可以在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得。化学物质或毒素的实例为火、霉菌、石棉、农药、杀虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体、有机金属、滥用药物或其一种或多种组合。更进一步，该样品可以从患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者获得。
[0156] 上述任何方法可以在任何人类受试者上进行，而无需考虑选自所述人类受试者的临床状况，所述人类受试者的实验室值，所述人类受试者遭受的轻度、中度、重度或中度至重度TBI的分类，所述人类受试者表现出的UCH-L1、GFAP和/或UCH-L1和GFAP的低水平或高水平，以及其中所述人类受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间的因素。
[0157] 在上述方法中，所述测定是免疫测定。在一些实施方案中，所述测定是即时测定。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定。在其他实施方案中，所述测定是单分子检测测定。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是全血。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，并且所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，并且所述样品是血清。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是血浆。在另外的实施方案中，该测定是单分子检测测定，所述样品是血浆。
[0158] 在另一方面，本公开涉及一种辅助诊断或确定已遭受或可能已遭受头部损伤的受试者是否遭受中度、重度或中度至重度创伤性脑损伤(TBI)的方法。该方法包括以下步骤：
[0159] 对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及
[0160] 当在所述样品中的GFAP的水平等于约105pg/ml至约890pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中的UCH-L1的水平等于约110pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者未遭受中度、重度、或中度至重度TBI。
[0161] 在上述方法中，在一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约0至约4小时内对获得自受试者的样品进行测定。在另一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约4小时至约8小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约8小时至约12小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约12小时至约16小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约16小时至约20小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约20小时至约24小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约28小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约28小时至约32小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约32小时至约36小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或可疑损伤后约36小时至约40小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，对获得自受试者的样品进行测定。受试者在实际损伤或疑似损伤后约40小时至约44小时内。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约44至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。
[0162] 在上述方法的一个实施方案中，在进行所述测定之前或之后，所述受试者可能已接受过格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分。在另一个实施方案中，基于所确定的GCS评分，已接受过这种GCS评分的受试者疑似患有中度TBI。在另一个实施方案中，已接受过这种GCS评分的受试者疑似患有重度TBI。在另一个实施方案中，基于所确定的GCS评分，已接受过这种GCS评分的受试者疑似患有中度至重度TBI。在又一个实施方式中，在上述方法中，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与3-8(重度TBI)的格拉斯哥昏迷量表评分相关联或相对应。在其他方面，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与9-12(中度TBI)的格拉斯哥昏迷量表评分相关联。在其他方面，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与3-12(中度至重度TBI)的格拉斯哥昏迷量表评分相关联或相对应。
[0163] 在上述方法的另一个实施方案中：(a)所述GFAP的参考水平为约105pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约840pg/mL；(b)所述GFAP的参考水平为约150pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(c)所述GFAP的参考水平为约240pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约860pg/mL；(d)所述GFAP的参考水平为约265pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约860pg/mL；(e)所述GFAP的参考水平为约370pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；(f)所述GFAP的参考水平为约505pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1580pg/mL；(g)所述GFAP的参考水平为约695pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1570pg/mL；(h)所述GFAP的参考水平为约890pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约920pg/mL。
[0164] 在上述方法的另一个实施方案中，样品是在以下时间内从所述受试者获得的：(a)在所述实际或疑似损伤后的约8小时至约12小时；其中所述GFAP的参考水平为约240pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约860pg/mL；(b)在所述实际或疑似损伤后的约8小时至约12小时；其中所述GFAP的参考水平为约265pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约860pg/mL；(c)在所述实际或疑似损伤后的约8小时至约12小时；其中，所述GFAP的参考水平为约
890pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约920pg/mL；(d)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约105pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约
804pg/mL；(e)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约370pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；(f)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约370pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；(g)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约505pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1590pg/mL；(h)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约695pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1570pg/mL；或(i)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约150pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL。
890pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约920pg/mL；(d)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约105pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约
804pg/mL；(e)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约370pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；(f)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约370pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；(g)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约505pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1590pg/mL；(h)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约695pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1570pg/mL；或(i)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约150pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL。
[0165] 在上述方法的另一个实施方案中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度等于或大于约79％且特异度等于或大于约33％的测定来确定。
[0166] 在上述方法的又一个实施方案中，所述样品是在所述实际或疑似损伤后的约8小时至约16小时内从所述受试者获得的。
[0167] 在上述方法的又一个实施方案中，所述测定具有比单独测量或检测GFAP或UCH-L1的测定高至少2％的灵敏度和高至少3％的特异度。
[0168] 在上述方法的又一个实施例中：
[0169] e.所述样品是在所述实际或疑似损伤后的约8小时至约12小时内从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约240pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约860pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于97％的灵敏度和等于或大于51％的特异度；或
[0170] f.所述样品是在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时内从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约105pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约840pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于97.5％的灵敏度和等于或大于36％的特异度；或[0171] g.所述样品是在所述实际或疑似损伤后的约8小时至约12小时内从所述受试者获得的；其中，所述GFAP的参考水平为约890pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约920pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于79％的特异度；或
[0172] h.所述样品是在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时内从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约505pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1580pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于66％的特异度。
[0173] 在上述方法的又一个实施例中，测量GFAP的水平包括：
[0174] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0175] (1)至少一种GFAP捕获抗体，其与GFAP或GFAP片段上的表位结合以形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原复合物，和
[0176] (2)至少一种GFAP检测抗体，其包含可检测标记并与GFAP上的未与所述GFAP捕获抗体结合的表位结合，以形成GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物，从而形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物；以及
[0177] (b)基于由所述至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中GFAP的量或浓度。
[0178] 在又一个实施例中，上述方法中UCH-L1的测量包括：
[0179] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0180] (1)至少一种UCH-L1捕获抗体，其与UCH-L1或UCH-L1片段上的表位结合以形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原复合物，和
[0181] (2)至少一种UCH-L1检测抗体，其包含可检测标记并与UCH-L1上的未与所述至少一种UCH-L1捕获抗体结合的表位结合，以形成UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物，从而形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1-检测抗体复合物；
[0182] 以及
[0183] (b)基于由所述至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中UCH-L1的量或浓度。
[0184] 一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有重度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度至重度的TBI。在进一步的方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为未患有TBI。
[0185] 上述方法可以进一步包括使用针对TBI的疗法(例如手术治疗、治疗性治疗或其组合)治疗被评估或评价为患有中度、重度或中度至重度TBI的人类受试者。可以使用本领域已知的并且在本文中进一步描述的任何这种疗法。此外，在另一方面，还可以任选地在任何治疗过程中和之后监测任何正在接受TBI治疗的受试者。可选地，所述方法可以进一步包括监测被评估为患有中度、重度或中度至重度TBI的受试者(例如那些至今尚未接受任何治疗的受试者)。
[0186] 在上述方法中，样品可以选自全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品。在一些实施方案中，样品是全血样品。在一些实施方案中，样品是血浆样品。在其他实施方案中，样品是血清样品。这样的样品可以以多种方式获得。例如，该样品可以在受试者遭受因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得。或者，该样品可以在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得。化学物质或毒素的实例为火、霉菌、石棉、农药、杀虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体、有机金属、滥用药物或其一种或多种组合。更进一步，该样品可以从患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者获得。
[0187] 上述任何方法可以在任何人类受试者上进行，而无需考虑选自所述人类受试者的临床状况，所述人类受试者的实验室值，所述人类受试者遭受的轻度、中度、重度或或中度至重度TBI的分类，所述人类受试者表现出的UCH-L1、GFAP和/或UCH-L1和GFAP的低水平或高水平，以及其中所述人类受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间的因素。
[0188] 在上述方法中，所述测定是免疫测定。在一些实施方案中，所述测定是即时测定。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定。在其他实施方案中，所述测定是单分子检测测定。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是全血。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，并且所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，并且所述样品是血清。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是血浆。在另外的实施方案中，该测定是单分子检测测定，所述样品是血浆。
[0189] 在另一方面，本公开涉及一种辅助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者进行头部计算机断层(CT)扫描的方法。该方法包括以下步骤：
[0190] 对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量或检测在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及
[0191] 当样品中的GFAP水平等于约50pg/mL到约975pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平等于约90pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者不需要进行CT扫描。
[0192] 在上述方法的一个实施例中，受试者在进行所述测定之前或之后已接受过CT扫描，并且其中基于该CT扫描结果，该受试者疑似患有TBI。在另一个实施例中，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与阴性CT扫描结果相关联。
[0193] 更具体地说，在上述用于确定或评估是否进行头部CT的方法中，根据已经或曾经进行过的CT扫描，受试者可能被怀疑患有创伤性脑损伤(意味着在该测定进行之前)。例如，取决于受试者的医疗状况(例如，患者是否昏迷)，可以在受试者到达急诊室、创伤中心或其他部位后不久进行CT扫描，以便评估和/或评价受试者是否患有TBI。这种CT扫描可以在进行测定之前进行，以确信和确定该受试者是否患有轻度或中度至重度TBI。在进行测定之后，可以基于测定结果执行一次或多次后续CT扫描，作为医生(或其他医务人员)管理TBI的一部分(例如，确定是否手术和/或是否需要药理干预)。
[0194] 在上述方法的某些方面，基于CT扫描，受试者疑似患有创伤性脑损伤。例如，基于CT扫描，受试者疑似患有轻度TBI。或者，基于CT扫描，受试者疑似患有中度TBI。或者，基于CT扫描，受试者疑似患有重度TBI。可选地，基于CT扫描，受试者疑似患有中度至重度TBI。更进一步，基于CT扫描，受试者疑似不患有TBI。
[0195] 在上述方法的某些方面，所使用的参考水平与阳性头部计算机断层摄影术是是相关的或对应的。例如，参考水平可以与具有阳性头部计算机断层摄影术的受试者相关联或相对应(例如通过参考水平的增加或降低)。可替代地，参考水平可以与具有阴性头部计算机断层摄影术的受试者相关联或相对应(例如通过参考水平的增加或降低)。更进一步替代地，参考水平可以与正在经历脑出血或脑出血改善或恶化的受试者相关联或相对应(例如通过增加或降低参考水平)。在上述方法的其他方面，参考水平与未遭受任何TBI的对照受试者相关联或相对应。
[0196] 在上述方法中，在一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约0至约4小时内对获得自受试者的样品进行测定。在另一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约4小时至约8小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约8小时至约12小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约12小时至约16小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约16小时至约20小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约20小时至约24小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约28小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约28小时至约32小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约32小时至约36小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或可疑损伤后约36小时至约40小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，对获得自受试者的样品进行测定。受试者在实际损伤或疑似损伤后约40小时至约44小时内。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约44至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。
[0197] 在上述方法的另一个实施方案中，(a)所述GFAP的参考水平为约50pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(b)所述GFAP的参考水平为约95pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(c)所述GFAP的参考水平为约110pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(d)所述GFAP的参考水平为约115pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；(e)所述GFAP的参考水平为约140pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(f)所述GFAP的参考水平为约150pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约190pg/mL；(g)所述GFAP的参考水平为约190pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约90pg/mL；(h)所述GFAP的参考水平为约240pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约300pg/mL；(i)所述GFAP的参考水平为约285pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约190pg/mL；(j)所述GFAP的参考水平为约500pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1450pg/mL；(k)所述GFAP的参考水平为约555pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约810pg/mL；(1)所述GFAP的参考水平为约
800pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约900pg/mL；(m)所述GFAP的参考水平为约840pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(n)所述GFAP的参考水平为约880pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约810pg/mL；或(o)所述GFAP的参考水平为约975pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1580pg/mL。
800pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约900pg/mL；(m)所述GFAP的参考水平为约840pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(n)所述GFAP的参考水平为约880pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约810pg/mL；或(o)所述GFAP的参考水平为约975pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1580pg/mL。
[0198] 在上述方法的又一个实施方案中，样品是在以下时间内从所述受试者获得的：(a)在所述实际或疑似损伤后的约4小时至约8小时；其中所述GFAP的参考水平为约50pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(b)在所述实际或疑似损伤后的约4小时至约8小时；其中所述GFAP的参考水平为约110pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(c)在所述实际或疑似损伤后的约4小时至约8小时；其中，所述GFAP的参考水平为约140pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；(d)在所述实际或疑似损伤后的约4小时至约8小时；其中所述GFAP的参考水平为约500pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1450pg/mL；(e)在所述实际或疑似损伤后的约4小时至约8小时；其中所述GFAP的参考水平为约
890pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约920pg/mL；(f)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约105pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约
840pg/mL；(g)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约370pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；(h)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约505pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1580pg/mL；(i)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约695pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1570pg/mL；或(j)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约150pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL。
890pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约920pg/mL；(f)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约105pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约
840pg/mL；(g)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约370pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；(h)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约505pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1580pg/mL；(i)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约695pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约1570pg/mL；或(j)在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约150pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL。
[0199] 在上述方法的另一个实施方案中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度等于或大于约54％且特异度等于或大于约32％的测定来确定。
[0200] 在上述方法的又一个实施方案中，所述样品是在所述实际或疑似损伤后的约4小时至约16小时内从所述受试者获得的。
[0201] 在上述方法的又一个实施方案中，所述测定具有比单独测量或检测GFAP或UCH-L1的测定高至少2％的灵敏度和高至少4％的特异度。
[0202] 在上述方法的又一个实施例中：
[0203] d.在实际或疑似损伤后约4小时至约8小时内从受试者获得样品；其中所述GFAP的参考水平为约110pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于62％的特异度；
[0204] e.在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时内从受试者获取样品；其中所述GFAP的参考水平为约240pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约300pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于91.5％的灵敏度和等于或大于52％的特异度；或
[0205] f.在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时内从受试者获得样品；其中所述GFAP的参考水平为约190pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约90pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于99％的灵敏度和等于或大于36％的特异度。
[0206] 在上述方法的又一个实施例中，GFAP水平的测量包括：
[0207] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0208] (1)至少一种GFAP捕获抗体，其与GFAP或GFAP片段上的表位结合以形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原复合物，和
[0209] (2)至少一种GFAP检测抗体，其包含可检测标记并与GFAP上的未与所述GFAP捕获抗体结合的表位结合，以形成GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物，从而形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物；以及
[0210] (b)基于由所述至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中GFAP的量或浓度。
[0211] 在又一个实施例中，上述方法中UCH-L1的测量包括：
[0212] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0213] (1)至少一种UCH-L1捕获抗体，其与UCH-L1或UCH-L1片段上的表位结合以形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原复合物，和
[0214] (2)至少一种UCH-L1检测抗体，其包含可检测标记并与UCH-L1上的未与所述至少一种UCH-L1捕获抗体结合的表位结合，以形成UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物，从而形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1-检测抗体复合物；
[0215] 以及
[0216] (b)基于由所述至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中UCH-L1的量或浓度。
[0217] 一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有轻度TBI。在一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有重度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度至重度的TBI。在进一步的方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为未患有TBI。
[0218] 上述方法可以进一步包括使用针对TBI的疗法(例如手术治疗、治疗性治疗或其组合)治疗被评估或评价为患有TBI(例如轻度、中度、重度、或中度至重度TBI)的人类受试者。可以使用本领域已知的并且在本文中进一步描述的任何这种疗法。此外，在另一方面，还可以任选地在任何治疗过程中和之后监测任何正在接受TBI治疗的受试者。可选地，所述方法可以进一步包括监测被评估为患有中度、重度或中度至重度TBI的受试者(例如那些至今尚未接受任何治疗的受试者)。
[0219] 在上述方法中，样品可以选自全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品。在一些实施方案中，样品是全血样品。在一些实施方案中，样品是血浆样品。在其他实施方案中，样品是血清样品。这样的样品可以以多种方式获得。例如，该样品可以在受试者遭受因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得。或者，该样品可以在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得。化学物质或毒素的实例为火、霉菌、石棉、农药、杀虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体、有机金属、滥用药物或其一种或多种组合。更进一步，该样品可以从患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者获得。
[0220] 上述任何方法可以在任何人类受试者上进行，而无需考虑选自所述人类受试者的临床状况，所述人类受试者的实验室值，所述人类受试者遭受的轻度、中度、重度或中度至重度TBI的分类，所述人类受试者表现出的UCH-L1、GFAP和/或UCH-L1和GFAP的低水平或高水平，以及其中所述人类受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间的因素。
[0221] 在上述方法中，所述测定是免疫测定。在一些实施方案中，所述测定是即时测定。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定。在其他实施方案中，所述测定是单分子检测测定。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是全血。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，并且所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，并且所述样品是血清。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是血浆。在另外的实施方案中，该测定是单分子检测测定，所述样品是血浆。
[0222] 在又一方面，本公开涉及一种辅助确定已遭受头部损伤的人类受试者是否已遭受创伤性脑损伤(TBI)的方法。该方法包括以下步骤：
[0223] 对在损伤后约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及
[0224] 当样品中的GFAP水平等于约15pg/mL到约40pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平等于约70pg/mL至约150pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者更有可能已遭受TBI。
[0225] 在上述方法中，在一个实施方案中，对在损伤后约0至约4小时内从受试者获得的样品进行测定。在另一个实施方案中，对在损伤后约4小时至约8小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约8小时至约12小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约12小时至约16小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约16小时至约20小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约20小时至约24小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约24小时至约28小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤或疑似损伤后约24小时至约48小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约28小时至约32小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约32小时至约36小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约36小时至约40小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约40小时至约44小时内从受试者获得的样品进行测定。在又一个实施方案中，对在损伤后约44至约48小时内从受试者获得的样品进行测定。
[0226] 在上述方法的又一个实施方案中，(a)GFAP的参考水平为约10pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约60pg/mL；(b)GFAP的参考水平为约15pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约70pg/mL；(c)GFAP的参考水平为约15pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约90pg/mL；(d)GFAP的参考水平为约15pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约150pg/mL；(e)GFAP的参考水平为约20pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约60pg/mL；(f)GFAP的参考水平为约30pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约70pg/mL；(g)GFAP的参考水平为约30pg/mL并且UCH-L1的参考水平为约110pg/mL。
[0227] 在上述方法的另一个实施方案中，所述样品是在以下时间内从所述受试者获得的：(a)在所述损伤后的约4小时至约8小时；其中所述GFAP的参考水平为约15pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约70pg/mL；(b)在所述损伤后的约4小时至约8小时；其中所述GFAP的参考水平为约30pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约70pg/mL；(c)在所述损伤后的约4小时至约8小时；其中所述GFAP的参考水平为约40pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约100pg/mL；(d)在所述损伤后的约8小时至约12小时；其中所述GFAP的参考水平为约15pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约90pg/mL；(e)在所述损伤后的约8小时至约12小时；其中所述GFAP的参考水平为约15pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约150pg/mL；(f)在所述损伤后的约8小时至约12小时；其中所述GFAP的参考水平为约30pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；(g)在所述损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约
10pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约60pg/mL；(h)在所述损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约20pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约60pg/mL；或(i)在所述损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约30pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL。
10pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约60pg/mL；(h)在所述损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约20pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约60pg/mL；或(i)在所述损伤后的约12小时至约16小时；其中所述GFAP的参考水平为约30pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL。
[0228] 在上述方法的另一个实施方案中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度等于或大于约90％和特异度等于或大于约35％的测定来确定。
[0229] 在上述方法的另一个实施方案中，所述样品可以是在所述损伤后的约4小时至约16小时内从所述受试者获得的。
[0230] 在又一个实施方案中，所述测定具有比单独测量或检测GFAP或UCH-L1的测定高至少3％的灵敏度和高至少17％的特异度。
[0231] 在上述方法的又一个实施例中：
[0232] 所述样品是在所述损伤后的约8小时至约12小时内从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约30pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于92％的灵敏度和等于或大于99％的特异度；或
[0233] 所述样品是在所述损伤后约12小时至约16小时内从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约30pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于99％的特异度；或
[0234] 所述样品是在所述损伤后约4小时至约8小时内从所述受试者获得的；其中，所述GFAP的参考水平为约40pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约100pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于94％的特异度；或
[0235] 所述样品是在所述损伤后约8小时至约12小时内从所述受试者获得的；其中，所述GFAP的参考水平为约15pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约150pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于82％的特异度；或
[0236] 所述样品是在所述损伤后约12小时至约16小时内从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约20pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约60pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于65％的特异度。
[0237] 在上述方法中，可以使用免疫测定或临床化学测定来测量或检测GFAP和UCH-L1的水平。可选地，在上述方法中，可以使用单分子检测测定法来测量或检测GFAP和UCH-L1的水平。
[0238] 在上述方法的又一个实施例中，GFAP水平的测量包括：
[0239] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0240] (1)至少一种GFAP捕获抗体，其与GFAP或GFAP片段上的表位结合以形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原复合物，和
[0241] (2)至少一种GFAP检测抗体，其包含可检测标记并与GFAP上的未与所述GFAP捕获抗体结合的表位结合，以形成GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物，从而形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物；以及
[0242] (b)基于由所述至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中GFAP的量或浓度。
[0243] 在又一个实施例中，上述方法中UCH-L1的测量包括：
[0244] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0245] (1)至少一种UCH-L1捕获抗体，其与UCH-L1或UCH-L1片段上的表位结合以形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原复合物，和
[0246] (2)至少一种UCH-L1检测抗体，其包含可检测标记并与UCH-L1上的未与所述至少一种UCH-L1捕获抗体结合的表位结合，以形成UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物，从而形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1-检测抗体复合物；
[0247] 以及
[0248] (b)基于由所述至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中UCH-L1的量或浓度。
[0249] 一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有轻度的FBI。一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有重度的TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度至重度TBI。在使用上述方法的又一个方面，受试者被评估或评价为未患有TBI。
[0250] 上述方法可以进一步包括使用针对TBI的疗法(例如手术治疗、治疗性治疗或其组合)治疗被评估或评价为患有TBI(例如轻度、中度、重度、或中度至重度TBI)的人类受试者。可以使用本领域已知的并且在本文中进一步描述的任何这种疗法。此外，在另一方面，还可以任选地在任何治疗过程中和之后监测任何正在接受TBI治疗的受试者。可选地，所述方法可以进一步包括监测被评估为患有中度、重度或中度至重度TBI的受试者(例如那些至今尚未接受任何治疗的受试者)。
[0251] 在上述方法中，样品可以选自全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品。在一些实施方案中，样品是全血样品。在一些实施方案中，样品是血浆样品。在其他实施方案中，样品是血清样品。这样的样品可以以多种方式获得。例如，该样品可以在受试者遭受因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得。或者，该样品可以在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得。化学物质或毒素的实例为火、霉菌、石棉、农药、杀虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体、有机金属、滥用药物或其一种或多种组合。更进一步，该样品可以从患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者获得。
[0252] 上述任何方法可以在任何人类受试者上进行，而无需考虑选自所述人类受试者的临床状况，所述人类受试者的实验室值，所述人类受试者遭受的轻度、中度、重度或中度至重度TBI的分类，所述人类受试者表现出的UCH-L1、GFAP和/或UCH-L1和GFAP的低水平或高水平，以及其中所述人类受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间的因素。
[0253] 在上述方法中，所述测定是免疫测定。在一些实施方案中，所述测定是即时测定。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定。在其他实施方案中，所述测定是单分子检测测定。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是全血。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，并且所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，并且所述样品是血清。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是血浆。在另外的实施方案中，该测定是单分子检测测定，所述样品是血浆。
[0254] 在另一方面，本公开涉及辅助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者进行头部磁共振成像(MRI)程序的方法。该方法包括以下步骤：
[0255] 对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及
[0256] (a)当在所述样品中的GFAP水平低于约15pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平低于约50pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者不需要MRI程序；或
[0257] (b)当在所述样品中的GFAP水平等于约15pg/mL至约1000pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平等于约50pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者有可能需要MRI程序；或
[0258] (c)当在所述样品中的GFAP水平大于约1000pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平大于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定受试者有可能需要MRI程序。
[0259] 在上述方法中，在进行所述测定之后，所述受试者已接受过MRI，并且其中基于所述MRI的结果，所述受试者疑似患有TBI。在又一个实施方案中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平与阴性MRI结果相关联。
[0260] 在上述方法中，在一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约0至约4小时内对获得自受试者的样品进行测定。在另一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约4小时至约8小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约8小时至约12小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约12小时至约16小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约16小时至约20小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约20小时至约24小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约28小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约28小时至约32小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约32小时至约36小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或可疑损伤后约36小时至约40小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，对获得自受试者的样品进行测定。受试者在实际损伤或疑似损伤后约40小时至约44小时内。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约44至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。
[0261] 在上述用于确定或评估是否进行MRI的方法中，根据已进行或曾经进行过的MRI或CT扫描，受试者可能被怀疑患有创伤性脑损伤(意味着在该测定进行之前)。例如，取决于受试者的医疗状况(例如，患者是否昏迷)，可以在受试者到达急诊室、创伤中心或其他部位后不久进行MRI或CT扫描，以便评估和/或评价受试者是否患有TBI。这种MRI或CT扫描可以在进行测定之前进行，以确信和确定该受试者是否患有轻度、中度、重度或中度至重度TBI。在进行测定之后，可以基于测定结果执行一次或多次后续MRI(或CT扫描)，作为医生(或其他医务人员)管理TBI的一部分(例如，确定是否手术和/或是否需要药理干预)。
[0262] 在上述方法的某些方面，基于MRI，受试者疑似患有创伤性脑损伤。例如，基于MRI，受试者疑似患有轻度TBI。或者，基于MRI，受试者疑似患有中度TBI。或者，基于MRI，受试者疑似患有重度TBI。可选地，基于MRI，受试者疑似患有中度至重度TBI。更进一步，基于MRI，受试者疑似不患有TBI。
[0263] 在上述方法的又一个实施方案中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度为约80％至约98％且特异度为约30％至约85％的测定来确定。
[0264] 在上述方法的另一个实施方案中，所述受试者在进行所述测定之前曾接受过阴性的CT扫描结果。
[0265] 一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有轻度TBI。在一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有重度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度至重度的TBI。在进一步的方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为未患有TBI。
[0266] 上述方法可以进一步包括使用针对TBI的疗法(例如手术治疗、治疗性治疗或其组合)治疗被评估或评价为患有TBI(例如轻度、中度、重度、或中度至重度TBI)的人类受试者。可以使用本领域已知的并且在本文中进一步描述的任何这种疗法。此外，在另一方面，还可以任选地在任何治疗过程中和之后监测任何正在接受TBI治疗的受试者。可选地，所述方法可以进一步包括监测被评估为患有中度、重度或中度至重度TBI的受试者(例如那些至今尚未接受任何治疗的受试者)。
[0267] 在上述方法中，样品可以选自全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品。在一些实施方案中，样品是全血样品。在一些实施方案中，样品是血浆样品。在其他实施方案中，样品是血清样品。这样的样品可以以多种方式获得。例如，该样品可以在受试者遭受因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得。或者，该样品可以在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得。化学物质或毒素的实例为火、霉菌、石棉、农药、杀虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体、有机金属、滥用药物或其一种或多种组合。更进一步，该样品可以从患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者获得。
[0268] 上述任何方法可以在任何人类受试者上进行，而无需考虑选自所述人类受试者的临床状况，所述人类受试者的实验室值，所述人类受试者遭受的轻度、中度、重度或中度至重度TBI的分类，所述人类受试者表现出的UCH-L1、GFAP和/或UCH-L1和GFAP的低水平或高水平，以及其中所述人类受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间的因素。
[0269] 在上述方法中，所述测定是免疫测定。在一些实施方案中，所述测定是即时测定。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定。在其他实施方案中，所述测定是单分子检测测定。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是全血。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，并且所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，并且所述样品是血清。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是血浆。在另外的实施方案中，该测定是单分子检测测定，所述样品是血浆。
[0270] 在又一方面，本公开涉及一种用于辅助预测已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者的预后的方法。该方法包括以下步骤：
[0271] 对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量或检测在所述样品中的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)水平；以及
[0272] 当样品中的GFAP水平等于约80pg/mL到约2000pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平等于约130pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，预测所述受试者可能具有不利的预后。
[0273] 在上述方法的另一个实施方案中，在进行该方法之后，受试者可能已接受过扩展的格拉斯哥预后量表(GOSE)评分，并且其中基于该GOSE评分，该受试者疑似预后较差。在又一个实施方案中，基于1的GOSE评分，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与具有较差预后的受试者相关联。
[0274] 在上述方法中，在一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约0至约4小时内对获得自受试者的样品进行测定。在另一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约4小时至约8小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约8小时至约12小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约12小时至约16小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约16小时至约20小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约20小时至约24小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约28小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约24小时至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约28小时至约32小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约32小时至约36小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，在实际损伤或可疑损伤后约36小时至约40小时内对获得自受试者的样品进行测定。在又一个实施方案中，对获得自受试者的样品进行测定。受试者在实际损伤或疑似损伤后约40小时至约44小时内。在又一个实施方案中，在实际损伤或疑似损伤后约44至约48小时内对获得自受试者的样品进行测定。
[0275] 在上述方法的又一个实施例中，所述GFAP的参考水平和所述UCH-L1的参考水平通过灵敏度为约80％至约97％和特异度为约30％至约95％的测定来确定。
[0276] 在上述方法中，使用免疫测定法或临床化学测定法测量或检测GFAP和UCH-L1的水平。可选地，在上述方法中，使用单分子检测测定法测量或检测GFAP和UCH-L1的水平。
[0277] 在上述方法的又一个实施例中，GFAP水平的测量包括：
[0278] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0279] (1)至少一种GFAP捕获抗体，其与GFAP或GFAP片段上的表位结合以形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原复合物，和
[0280] (2)至少一种GFAP检测抗体，其包含可检测标记并与GFAP上的未与所述GFAP捕获抗体结合的表位结合，以形成GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物，从而形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物；以及
[0281] (b)基于由所述至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中GFAP的量或浓度。
[0282] 在又一个实施例中，上述方法中UCH-L1的测量包括：
[0283] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0284] (1)至少一种UCH-L1捕获抗体，其与UCH-L1或UCH-L1片段上的表位结合以形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原复合物，和
[0285] (2)至少一种UCH-L1检测抗体，其包含可检测标记并与UCH-L1上的未与所述至少一种UCH-L1捕获抗体结合的表位结合，以形成UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物，从而形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1-检测抗体复合物；
[0286] 以及
[0287] (b)基于由所述至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物中的所述可检测标记产生的信号，测量所述样品中UCH-L1的量或浓度。
[0288] 一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有轻度TBI。在一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有重度TBI。在另一方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为患有中度至重度的TBI。在进一步的方面，使用上述方法，受试者被评估或评价为未患有TBI。
[0289] 上述方法可以进一步包括使用针对TBI的疗法(例如手术治疗、治疗性治疗或其组合)治疗被评估或评价为患有TBI(例如轻度、中度、重度、或中度至重度TBI)的人类受试者。可以使用本领域已知的并且在本文中进一步描述的任何这种疗法。此外，在另一方面，还可以任选地在任何治疗过程中和之后监测任何正在接受TBI治疗的受试者。可选地，所述方法可以进一步包括监测被评估为患有中度、重度或中度至重度TBI的受试者(例如那些至今尚未接受任何治疗的受试者)。
[0290] 在上述方法中，样品可以选自全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品。在一些实施方案中，样品是全血样品。在一些实施方案中，样品是血浆样品。在其他实施方案中，样品是血清样品。这样的样品可以以多种方式获得。例如，该样品可以在受试者遭受因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得。或者，该样品可以在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得。化学物质或毒素的实例为火、霉菌、石棉、农药、杀虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体、有机金属、滥用药物或其一种或多种组合。更进一步，该样品可以从患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者获得。
[0291] 上述任何方法可以在任何人类受试者上进行，而无需考虑选自所述人类受试者的临床状况，所述人类受试者的实验室值，所述人类受试者遭受的轻度、中度、重度或中度至重度TBI的分类，所述人类受试者表现出的UCH-L1、GFAP和/或UCH-L1和GFAP的低水平或高水平，以及其中所述人类受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间的因素。
[0292] 在上述方法中，所述测定是免疫测定。在一些实施方案中，所述测定是即时测定。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定。在其他实施方案中，所述测定是单分子检测测定。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是全血。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，并且所述样品是全血。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，并且所述样品是血清。在另外的实施方案中，所述测定是单分子检测测定，所述样品是血清。在其他实施方案中，所述测定是免疫测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，该测定是即时测定，所述受试者是人类，所述样品是血浆。在其他实施方案中，所述测定是临床化学测定，所述样品是血浆。在另外的实施方案中，该测定是单分子检测测定，所述样品是血浆。
附图说明
附图说明
[0293] 图1A-1B包括描述在损伤后48小时内各个时间点针对中度/重度TBI、轻度TBI以及轻度和中度/重度TBI组的平均GFAP(图1A)和UCH-L1(图1B)水平的代表性图。
[0294] 图2A-2B包括描述在损伤后48小时内的各个时间点针对轻度TBI、健康对照组和骨科对照组平均GFAP(图2A)和UCH-L1(图2B)水平的代表性图。
[0295] 图3A-3D包括在指定GCS评分(13-15＝轻度TBI：9-12＝中度TBI；小于或等于8＝重度TBI)的受试者中按时间点划分的中位值GFAP水平的代表性图(图3A和3B)，以及基于成像结果(图3C中为CT扫描结果；图3D中为MRI结果)。
[0296] 图4A-4D包括在指定的GCS评分(13-15＝轻度TBI；9-12＝中度FBI；小于或等于8＝重度TBI)的受试者中按时间点的中位值GFAP水平的代表性图(图4A和4B)，以及基于成像结果(图4C中为CT扫描结果；图4D中为MRI结果)。
[0297] 图5A-5B包括在根据GOSE评分分组的受试者中的GFAP(图5A)和UCH-L1(图5B)水平的代表性箱线图。
[0298] 图6是比较在基于CT扫描结果诊断为患有TBI的受试者(CT阳性)和健康对照受试者(CT阴性)中针对各种GFAP和UCH-L1水平的测定灵敏度和特异度的代表性图。
[0299] 图7是比较在指定的GCS评分的受试者中针对各种GFAP和UCH-L1水平的测定灵敏度和特异度的代表性图；GCS评分≤12的受试者指定为阳性(中度或重度TBI)，而GCS评分12>的受试者指定为阴性(轻度TBI或健康对照)。
[0300] 图8是比较在基于MRI结果被诊断为患有TBI的受试者(阳性MRI)和健康对照受试者(阴性MRI)中针对各种GFAP和UCH-L1水平的测定灵敏度和特异度的代表性图。
[0301] 图9是比较基于GOSE评分诊断为患有TBI的受试者(1＝TBI/死亡)和健康对照受试者(8＝健康/恢复)针对各种GFAP和UCH-L1水平的测定灵敏度和特异度的代表性图。
[0302] 图10是比较基于MRI结果被诊断为患有TBI的受试者(阳性MRI)和骨科对照受试者(阴性MRI)中针对各种GFAP和UCH-L1水平的测定灵敏度和特异度的代表性图。
[0303] 图11是比较基于GOSE评分诊断为患有TBI的受试者(1＝TBI/死亡)和健康的骨科受试者(8＝健康/康复)中针对各种GFAP和UCH-L1水平的测定灵敏度和特异度的代表性图。
具体实施方式
[0304] 本公开内容涉及辅助诊断和评估已遭受或可能已遭受头部损伤的受试者的方法。特别地，本公开通过检测或测量在该受试者已遭受或可能已遭受头部损伤后的48小时内的各个时间点采集的样品中的泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平的组合，提供了用于辅助诊断和评估受试者以确定该受试者是否已遭受创伤性脑损伤(TBI)的方法。基于对GFAP和UCH-L1水平的综合评估，该方法的实施例还包括辅助确定已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者是否将从中受益并因此接受诸如磁共振成像(MRI)或头部计算机断层(CT)扫描的成像程序。该方法可以涉及在在头部损伤或头部疑似损伤后的约48小时(例如0至约12小时)内获得自人类受试者的一个或多个样品中的GFAP和UCH-L1水平。在头部损伤或疑似损伤后的约第一个48小时内的检测到的GFAP和UCH-L1水平高于参考水平，则提供辅助以确定人类受试者是否应该接受成像程序(即，“决定”成像程序)。例如，GFAP和UCH-L1水平高于参考水平的人类受试者也可能被确定为头部CT扫描阳性或MRI阳性(例如存在颅内病变，从而表明潜在的TBI)，因此可以从头部CT扫描或MRI中受益。或者，某些水平的GFAP和UCH-L1可用于“排除”进一步医学干预的需求。例如，可以将GFAP和UCH-L1水平低于参考水平的人类受试者确定为头部CT扫描阴性或MRI阴性(即没有颅内病变，因此没有无需头部CT扫描或MRI)。
[0305] 本公开涉及检测在头部损伤或头部疑似损伤后48小时内在不同时间点从人类受试者获取的一个或多个样品中的GFAP和UCH-L1水平的方法。GFAP和UCH-L1组合水平增加或升高的检测也可以辅助诊断特定类型的TBI。例如，高于特定参考水平的GFAP和UCH-L1水平可以表明受试者患有中度、重度或中度至重度TBI，并且相应地，GFAP和UCH-L1的水平低于该参考水平可以表明受试者患有轻度TBI。在一些情况下，GFAP和UCH-L1的组合水平也可以辅助确定遭受骨科损伤的受试者是否也患有轻度TBI并由此需要进一步的医学干预以诊断是否存在轻度TBI。
[0306] 本章节和本文的整个公开中使用的章节标题仅用于组织目的并且不旨在是限制性的。
[0307] 1.定义
[0308] 除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常所理解的相同的含义。当发生冲突时，以本文件(包括定义)为准。虽然在本发明的实践或测试中可以使用与本文所描述的那些方法和材料类似或等效的方法和材料，但以下描述了优选的方法和材料。本文提及的所有公开、专利申请、专利以及其它参考文献通过引用整体并入本文。本文公开的材料、方法和实例仅是示例性的并且不旨在是限制性的。
[0309] 如本文所用，术语“包含”、“包括”、“具有”、“有”、“可以”、“含有”以及其变化形式意图是不排除另外行为或结构的可能性的开放式连接词、术语或词语。除非上下文另外清楚地说明，否则单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数引用。本公开还涵盖“包括本文所呈现的实施方式或要素”、“由本文所呈现的实施方式或要素组成”以及“主要由本文所呈现的实施方式或要素组成”的其它实施方式，无论是否明确地提出。
[0310] 对于本文数值范围的叙述来说，明确地涵盖具有相同精确度的介于其间的每个中间数字。例如，对于范围6-9，除6和9之外还涵盖数字7和8，并且对于范围6.0-7.0，明确涵盖数字6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9和7.0。
[0311] “亲和力成熟抗体”在本文用于指在一个或多个CDR中具有一个或多个变化的抗体，所述变化导致所述抗体与不具有所述变化的亲本抗体相比对于靶抗原的亲和力(即KD、kd或ka)提高。示例性亲和力成熟抗体将对于靶抗原具有纳摩尔浓度或甚至皮摩尔浓度的亲和力。用于产生亲和力成熟抗体的多种程序在本领域中是已知的，包括对使用生物展示制备的组合抗体文库的筛选。例如，Marks等人,BioTechnology 10:779-783(1992)描述了通过VH和VL结构域改组进行的亲和力成熟。对CDR和/或框架残基的随机诱变由以下描述：Barbas等人,Proc.Nat.Acad.Sci.USA,91:3809-3813(1994)；Schier等人,Gene,169:147-
155(1995)；Yelton等人,J.Immunol.,155:1994-2004(1995)；Jackson等人,J.Immunol.,
154(7):3310-3319(1995)；和Hawkins等人,J.Mol.Biol.,226:889-896(1992)。在选择性诱变位置和在接触或超突变位置由活性增强氨基酸残基进行的选择性突变描述于美国专利号6,914,128B1。
155(1995)；Yelton等人,J.Immunol.,155:1994-2004(1995)；Jackson等人,J.Immunol.,
154(7):3310-3319(1995)；和Hawkins等人,J.Mol.Biol.,226:889-896(1992)。在选择性诱变位置和在接触或超突变位置由活性增强氨基酸残基进行的选择性突变描述于美国专利号6,914,128B1。
[0312] 如本文所用的“抗体”和“多种抗体”是指单克隆抗体、单特异性抗体(例如，可以是单克隆抗体，也可以通过除从普通生殖细胞中产生以外的其他方式产生)、多特异性抗体、人类抗体、人源化抗体(完全或部分人源化的)、动物抗体诸如但不限于鸟(例如鸭或鹅)、鲨鱼、鲸鱼和哺乳动物(包括非灵长类动物(例如牛、猪、骆驼、美洲驼、马、山羊、兔子、绵羊、仓鼠、豚鼠、猫、狗、大鼠、小鼠等)或非人灵长类动物(例如猴子、黑猩猩等))、重组抗体、嵌合抗体、单链Fv(“scFv”)、单链抗体、单结构域抗体、Fab片段、F(ab')片段、F(ab')2片段、二硫键连接的Fv(“sdFv”)和抗独特型(“抗Id”)抗体、双结构域抗体、双可变结构域(DVD)或三可变结构域(TVD)抗体(双可变结构域免疫球蛋白及其制备方法描述于Wu,C等人,Nature Biotechnology,25(11):1290-1297(2007)和PCT国际申请WO 2001/058956，其各自内容通过引用并入本文)，或结构域抗体(dAb)(例如，如Holt等(2014)Trends in Biotechnology 21:484-490中所述)，包括天然存在的单结构域抗体sdAb，例如在软骨鱼类和骆驼科动物中，或其为合成的，例如纳米抗体、VHH或其他域结构)，以及任何上述抗体的功能活性的表位结合片段。具体地，抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性片段，即含有分析物结合位点的分子。免疫球蛋白分子可具有任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。为简单起见，针对分析物的抗体在本文中通常称为“抗分析物抗体”或仅仅是“分析物抗体”(例如抗GFAP抗体，GFAP抗体、抗UCH-L1抗体或UCH-L1抗体)。
[0313] 如本文所用的“抗体片段”是指包含抗原结合位点或可变区的完整抗体的一部分。所述部分不包括完整抗体Fc区的恒定重链结构域(即CH2、CH3或CH4，取决于抗体同种型)。
抗体片段的实例包括但不限于Fab片段、Fab'片段、Fab'-SH片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、双抗体、单链Fv(scFv)分子、仅含有一个轻链可变域的单链多肽、含有轻链可变域的三个CDR的单链多肽、仅含有一个重链可变区的单链多肽，以及含有重链可变区的三个CDR的单链多肽。
抗体片段的实例包括但不限于Fab片段、Fab'片段、Fab'-SH片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、双抗体、单链Fv(scFv)分子、仅含有一个轻链可变域的单链多肽、含有轻链可变域的三个CDR的单链多肽、仅含有一个重链可变区的单链多肽，以及含有重链可变区的三个CDR的单链多肽。
[0314] “曲线下面积”或“AUC”是指ROC曲线下的面积。ROC曲线下的AUC是精确度的度量。AUC为1表示完美测试，而AUC为0.5表示无意义的测试。优选的AUC可以是至少大约0.700、至少大约0.750、至少大约0.800、至少大约0.850、至少大约0.900、至少大约0.910、至少大约
0.920、至少大约0.930、至少大约0.940、至少大约0.950、至少大约0.960、至少大约0.970、至少大约0.980、至少大约0.990、或至少大约0.995。
0.920、至少大约0.930、至少大约0.940、至少大约0.950、至少大约0.960、至少大约0.970、至少大约0.980、至少大约0.990、或至少大约0.995。
[0315] “珠粒”和“颗粒”在本文中可互换使用，并且是指基本上球形的固体支持物。珠粒或颗粒的一个实例是微粒。可用于本文的微粒可以是本领域中已知的任何类型。例如，珠粒或颗粒可以是磁性珠粒或磁性颗粒。磁性珠粒/颗粒可以是铁磁性的、亚铁磁性的、顺磁性的、超顺磁性的或铁磁流体的。示例性铁磁材料包括Fe、Co、Ni、Gd、Dy、CrO2、MnAs、MnBi、EuO以及NiO/Fe。亚铁磁材料的实例包括NiFe2O4、CoFe2O4、Fe3O4(或FeO.Fe2O3)。珠粒可以具有磁性的实心核心部分并且被一个或多个非磁性层包围。另选地，磁性部分可以是围绕非磁性核心的层。微粒可具有在本文所述方法中起作用的任何尺寸，例如约0.75至约5nm、或约1至约5nm、或约1至约3nm。
[0316] “结合蛋白”在本文中用于指与结合配偶体结合并与其形成复合物的单体或多聚体蛋白质，诸如多肽、抗原、化学化合物或其它分子、或任何种类的底物。结合蛋白特异性地结合至结合配偶体。结合蛋白包括抗体，以及其抗原结合片段和其本领域中已知的和下文所述的其它各种形式和衍生物，以及包含一个或多个结合抗原分子或抗原分子上的特定位点(表位)的抗原结合域的其它分子。因此，结合蛋白包括但不限于抗体、四聚体免疫球蛋白、IgG分子、IgG1分子、单克隆抗体、嵌合抗体、CDR嫁接抗体、人源化抗体、亲和力成熟抗体、和任何此类抗体的保留结合抗原的能力的片段。
[0317] “双特异性抗体”在本文中用于指通过以下技术产生的全长抗体：四源杂交瘤技术(参见Milstein等人,Nature,305(5934):537-540(1983))；通过两个不同单克隆抗体的化学缀合(参见Staerz等人,Nature,314(6012):628-631(1985))；或通过在Fc区中引入突变的旋钮-入-孔(knob-into-holes)法或类似方法(参见Holliger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90(14):6444-6448(1993))，所述方法产生多种不同免疫球蛋白物质，其中仅一者是功能性双特异性抗体。双特异性抗体在其两个结合臂的一者(一对HC/LC)上结合一种抗原(或表位)，且其第二臂(一对不同的HC/LC)上结合不同的抗原(或表位)。根据这个定义，双特异性抗体具有两个不同抗原结合臂(在特异性和CDR序列两方面)，并且对于其结合的各抗原而言是单价的。
[0318] “CDR”在本文中用于指关于抗体可变序列内的“互补决定区”。在重链和轻链的每个可变区中存在三个CDR。对于每个可变区，从重链或轻链的N末端开始，这些区域表示为“CDR1”、“CDR2”和“CDR3”。如本文所用的术语“CDR组”是指存在于单一可变区中的结合抗原的三个CDR的组。因此，抗原结合位点可以包括六个CDR，其包含来自重链和轻链可变区中的每一个的CDR组。包含单个CDR(例如CDR1、CDR2或CDR3)的多肽可以称为“分子识别单元”。抗原-抗体复合物的晶体学分析已证明CDR的氨基酸残基与结合的抗原形成广泛接触，其中最广泛的抗原接触是与重链CDR3。因此，分子识别单元可能主要负责抗原结合位点的特异性。总体上，CDR残基直接地并且最实质性地涉及影响抗原结合。
[0319] 这些CDR的精确边界已根据不同系统加以不同界定。由Kabat(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of
Health,Bethesda,Md.(1987)和(1991))所述的系统不仅提供可适用于抗体的任何可变区的明确残基编号系统，而且也提供界定三个CDR的精确残基边界。这些CDR可称为“Kabat CDR”。Chothia和同事(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.,196:901-917(1987)以及Chothia等人,Nature 342:877-883(1989))发现尽管在氨基酸序列的层面上具有巨大多样性，但Kabat CDR内的某些子部分采用几乎相同的肽骨架构象。这些子部分被指定为“L1”、“L2”和“L3”或“H1”、“H2”和“H3”，其中“L”和“H”分别表示轻链区和重链区。这些区域可称为“Chothia CDR”，其具有与Kabat CDR重叠的边界。界定与Kabat CDR重叠的CDR的其它边界已由Padlan,FASEB J.,9:133-139(1995)和MacCallum,J.Mol.Biol,262(5):732-745
(1996)描述。其它CDR边界定义可能不严格遵循本文中系统之一，但将仍然与Kabat CDR重叠，但鉴于特定残基或残基群组或甚至整个CDR不会显著影响抗原结合的预测或实验发现而可将它们缩短或延长。本文所用的方法可利用根据这些系统中的任一个定义的CDR，但某些实施方式使用Kabat或Chothia定义的CDR。
Health,Bethesda,Md.(1987)和(1991))所述的系统不仅提供可适用于抗体的任何可变区的明确残基编号系统，而且也提供界定三个CDR的精确残基边界。这些CDR可称为“Kabat CDR”。Chothia和同事(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.,196:901-917(1987)以及Chothia等人,Nature 342:877-883(1989))发现尽管在氨基酸序列的层面上具有巨大多样性，但Kabat CDR内的某些子部分采用几乎相同的肽骨架构象。这些子部分被指定为“L1”、“L2”和“L3”或“H1”、“H2”和“H3”，其中“L”和“H”分别表示轻链区和重链区。这些区域可称为“Chothia CDR”，其具有与Kabat CDR重叠的边界。界定与Kabat CDR重叠的CDR的其它边界已由Padlan,FASEB J.,9:133-139(1995)和MacCallum,J.Mol.Biol,262(5):732-745
(1996)描述。其它CDR边界定义可能不严格遵循本文中系统之一，但将仍然与Kabat CDR重叠，但鉴于特定残基或残基群组或甚至整个CDR不会显著影响抗原结合的预测或实验发现而可将它们缩短或延长。本文所用的方法可利用根据这些系统中的任一个定义的CDR，但某些实施方式使用Kabat或Chothia定义的CDR。
[0320] “组分”、“多种组分”或“至少一种组分”通常指可以包括在用于根据本文所述的方法和本领域中已知的其它方法测定测试样品(诸如患者尿液、全血、血清或血浆样品)的试剂盒中的捕获抗体、检测物或缀合物、校准物、对照、敏感性组、容器、缓冲液、稀释剂、盐、酶、酶的辅因子、检测试剂、预处理试剂/溶液、底物(例如作为溶液)、终止液等。一些组分可以在溶液中或被冻干以进行重构用于在测定中使用。如本文所用，“对照”通常是指一种试剂，其目的是评估测量系统的性能，以确保其继续在允许的边界内产生结果(例如，边界范围一端从适合于一项研究用途测定的测量到达另一端由质量规范确定的用于商业分析的分析边界)。为了做到这一点，对照应该指示患者结果，并且可选地应该以某种方式评估误差对测量的影响(例如，由于试剂稳定性、校准物可变性、仪器可变性等引起的误差)。如本文所用，“对照受试者”涉及未遭受创伤性脑损伤(TBI)的一个或多个受试者。本文所用的“骨科对照”涉及(例如基于)来自遭受了骨科损伤但未遭受明显的TBI的受试者的样品或信息。如本文所用，“骨科对照受试者”涉及遭受骨科损伤但未遭受明显的TBI的一个或多个受试者。在某些情况下，“骨科对照受试者”是成年的骨科患者，其肢体和/或骨盆损伤和/或肋骨骨折的损伤评分≤4(不威胁生命)。本文所用的“健康对照”涉及(例如基于)来自一个或多个被认为健康并且没有遭受明显的TBI或骨科损伤的受试者的样品或信息。如本文所用，“健康对照受试者”涉及被认为是健康的并且没有遭受明显的TBI或骨科损伤的受试者。
[0321] 如本文所用的“与…相关联”是指与…是可比的。
[0322] 如本文所用的“CT扫描”是指计算机断层(CT)扫描。CT扫描组合了从不同角度拍摄的一系列X射线图像，并且使用计算机处理来创建您体内骨骼、血管和软组织的横截面图像或切片。CT扫描可以使用X射线CT、正电子发射断层扫描(PET)、单光子发射计算机断层扫描(SPECT)、计算机轴向断层扫描(CAT扫描)或计算机辅助断层扫描。CT扫描可以是常规CT扫描或螺旋/螺旋式CT扫描。在常规的CT扫描中，逐个切片地进行扫描，并且在每个切片之后扫描停止并向下移动到下一个切片，例如，从腹部的顶部向下移动到骨盆。常规的CT扫描要求患者屏住呼吸以避免运动伪影。螺旋/螺旋式CT扫描是连续扫描，其以螺旋方式拍摄，并且是其中扫描图像是连续的更快过程。
[0323] 如本文所用的抗体的“衍生物”可以是指与真正或亲本抗体相比具有对其氨基酸序列的一个或多个修饰的抗体并且表现出修饰的结构域结构。衍生物仍然可以能够采用天然抗体中发现的典型结构域配置，以及能够特异性结合靶标(抗原)的氨基酸序列。抗体衍生物的典型实例是与其它多肽偶联的抗体、重排的抗体结构域、或抗体片段。衍生物还可以包含至少一种其它化合物，例如蛋白质结构域，所述蛋白质结构域通过共价或非共价键连接。根据本领域中已知的方法，连接可以基于遗传融合。存在于包含抗体的融合蛋白中的另外的结构域可优选地通过柔性接头、有利地是肽接头连接，其中所述肽接头包含多个亲水的肽键合的氨基酸，其长度足以跨越另外的蛋白质结构域的C末端与抗体的N末端之间的距离，反之亦然。抗体可以与效应分子连接，所述效应分子具有适于生物活性或选择性结合例如固体支持物、生物活性物质(例如细胞因子或生长激素)、化学试剂、肽、蛋白质或药物的构象。
[0324] “通过测定法确定的”在本文中用于指通过任何适当的测定法对参考水平的确定。参考水平的确定在一些实施方式中可以通过与待应用于来自受试者的样品的测定法相同类型的测定法来实现(例如通过免疫测定法、临床化学测定法、单分子检测测定法、蛋白质免疫沉淀法、免疫电泳法、化学分析法、SDS-PAGE和蛋白质印迹分析法、或蛋白质免疫染色法、电泳分析法、蛋白质测定法、竞争性结合测定法、功能性蛋白质测定法或色谱或光谱法，诸如高效液相色谱法(HPLC)或液相色谱-质谱法(LC/MS))。参考水平的确定在一些实施方式中可以通过与待应用于来自受试者的样品的测定法相同类型的测定法和在相同的测定条件下实现。如本文所指出的，本公开提供了示例性参考水平(例如通过比较不同时间点的参考水平计算)。基于本公开提供的描述针对其它测定法修改本文的公开以获得用于那些其它测定法的测定法特异性参考水平是完全在本领域普通技术人员的能力范围内的。例如，一组训练样品，包括从已知已遭受对头部的损伤的人类受试者获得的样品(且更具体地，从已知已遭受(i)轻度TBI；和/或(ii)中度、重度或中度至重度TBI的人类受试者获得的样品和从已知未遭受对头部的损伤的人类受试者获得的样品)可用于获得测定法特异性参考水平。应当理解，“通过测定法确定的”并具有所列举的“敏感性”和/或“特异性”水平的参数水平在本文中用于指这样的参考水平，所述参考水平已被确定当在本公开的方法中采用时提供所列举的敏感性和/或特异性的方法。例如通过对使用多个不同的可能参考水平的测定数据的重复统计分析确定与本公开方法中给定参考水平相关的敏感性和特异性是完全在本领域普通技术人员的能力范围内的。
[0325] 实际上，当区分受试者为患有创伤性脑损伤或未患创伤性脑损伤或受试者为患有轻度与中度、重度或中度至重度创伤性脑损伤时，熟练人员将平衡提高敏感性和特异性的截止值的影响。升高或降低截止值将对敏感性和特异性以及其它标准统计测量产生明确且可预测的影响。众所周知，提高截止值将改善特异性，但可能会恶化敏感性(与那些测试呈阳性的疾病患者成比例)。相比之下，降低截止值将改善特异性，但将会恶化敏感性(与测试呈阴性的未患疾病的那些成比例)。用于检测创伤性脑损伤或确定轻度相对中度、重度或中度至重度创伤性脑损伤的后果对于本领域技术人员而言将是显而易见的。在区分受试者是否患有创伤性脑损伤或轻度相对中度、重度或中度至重度创伤性脑损伤时，截止值越高，特异性越高，因为更多的真阴性数(即未患创伤性脑损伤、未患轻度创伤性脑损伤、未患中度创伤性脑损伤、未患重度创伤性脑损伤或未患中度至重度创伤性脑损伤的受试者)与那些患有创伤性脑损伤、轻度创伤性脑损伤、中度创伤性脑损伤、重度创伤性脑损伤或中度至重度创伤性脑损伤的那些区分开来。但是同时，提高截止值会减少鉴别为总体上阳性的病例数，以及真阳性的病例数，因此敏感性必然降低。相反地，截止值越低，敏感性越高，因为更多的真阳性数(即患有创伤性脑损伤、患有轻度创伤性脑损伤、患有中度创伤性脑损伤、患有重度创伤性脑损伤或患有中度至重度创伤性脑损伤的受试者)与那些未患创伤性脑损伤、轻度创伤性脑损伤、中度创伤性脑损伤、重度创伤性脑损伤或中度至重度创伤性脑损伤的那些区分开来。但是同时，降低截止值会增加鉴别为总体上阳性的病例数，以及假阳性的数目，因此特异性必然降低。
[0326] 通常，高敏感性值有助于技术人员排除疾病或病状(诸如创伤性脑损伤、轻度创伤性脑损伤、中度创伤性脑损伤、重度创伤性脑损伤或中度至重度创伤性脑损伤)且高特异性值有助于技术人员纳入疾病或病状。技术人员是要排除疾病还是要纳入疾病取决于每种错误类型对患者的后果。因此，在不完全公开有关如何选择值的基础信息的情况下，无法知道或预测用于得出测试截止值的精确平衡。敏感性对特异性及其它因素之间的平衡将基于情况而不同。这就是为什么有时优选提供替代的截止值(例如参考值)，以便医师或医生可以选择。
[0327] “滥用药物”在本文中用于指由于非医学原因(诸如娱乐和/或改变心智的效果)而摄取的一种或多种添加剂物质(诸如药物)。过度沉溺、使用或依赖此类滥用药物常常被称为“药物滥用”。滥用药物的实例包括酒精、巴比妥类药物、苯二氮卓类药物、大麻、可卡因、致幻剂(诸如氯胺酮、墨斯卡灵(mescaline)(皮约特(peyote))、PCP、裸盖菇素、DMT和/或LSD)、甲喹酮、阿片类药物、安非他明(amphetamine)(包括甲基苯丙胺)、合成代谢类固醇、吸入剂(即含有具有作用于精神的特性的挥发性物质的物质，诸如亚硝酸盐、喷雾涂料、清洁液、标记物、胶水等)及其组合。
[0328] “双重特异性抗体”在本文中用于指可在其两个结合臂中的每一个(一对HC/LC)中结合两种不同抗原(或表位)的全长抗体(参见PCT公开WO02/02773)。因此，双重特异性结合蛋白具有两个具备相同特异性和相同CDR序列的相同抗原结合臂，且对于其结合的每种抗原而言是二价的。
[0329] “双重可变结构域”在本文中用于指结合蛋白上的两个或更多个抗原结合位点，所述结合蛋白可以为二价的(两个抗原结合位点)、四价的(四个抗原结合位点)或多价结合蛋白。DVD可以为单特异性的，即能够结合一种抗原(或一个特异性表位)、或多特异性的，即能够结合两种或更多种抗原(即相同靶抗原分子的两个或更多个表位或不同靶抗原的两个或更多个表位)优选的DVD结合蛋白包含两条重链DVD多肽和两条轻链DVD多肽并且被称为“DVD免疫球蛋白”或“DVD-Ig”。这样的DVD-Ig结合蛋白因此是四聚体的并且类似于IgG分子，但提供比IgG分子更多的抗原结合位点。因此，四聚体DVD-Ig分子的每一半都类似于IgG分子的一半，并且包含重链DVD多肽和轻链DVD多肽，但与IgG分子的提供单抗原结合结构域的一对重链和轻链不同，DVD-Ig的一对重链和轻链提供两个或更多个抗原结合位点。
[0330] DVD-Ig结合蛋白的每个抗原结合位点可以源自供体(“亲本”)单克隆抗体，因此包含具有每个抗原结合位点均参与抗原结合的总共六个CDR的重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)。因此，结合两个不同表位的DVD-Ig结合蛋白(即两个不同抗原分子的两个不同表位或相同抗原分子的两个不同表位)包含源自第一亲本单克隆抗体的抗原结合位点和第二亲本单克隆抗体的抗原结合位点。
[0331] 在PCT公开号WO 2007/024715、美国专利号7,612,181和Wu等人,Nature Biotech.,25:1290-1297(2007)中提供了对DVD-Ig结合分子的设计、表达和表征的描述。此类DVD-Ig分子的优选实例包含含有结构式VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n的重链，其中VD1是第一重链可变结构域，VD2是第二重链可变结构域，C是重链恒定结构域，X1是接头(前提条件是它不是CH1，X2是Fc区)，且n是0或1，但优选1；和含有VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n的轻链，其中VD1是第一轻链可变结构域，VD2是第二轻链可变结构域，C是轻链恒定结构域，X1是接头(前提条件是它不是CH1，且X2不包含Fc区)；且n是0或1，但优选1。这种DVD-Ig可以包含两条这样的重链和两条这样的轻链，其中每条链包含串联连接的可变结构域，而在可变区之间没有间插的恒定区，其中重链和轻链缔合形成串联功能性抗原结合位点，并且一对重链和轻链可以与另一对重链和轻链缔合形成具有四个功能性抗原结合位点的四聚体结合蛋白。在另一个实例中，DVD-Ig分子可以包含这样的重链和轻链，每个所述重链和轻链包含串联连接的三个可变结构域(VD1、VD2、VD3)，而在可变结构域之间没有间插恒定区，其中一对重链和轻链可以缔合形成三个抗原结合位点，并且其中一对重链和轻链可以与另一对重链和轻链缔合形成具有六个抗原结合位点的四聚体结合蛋白。
[0332] 在优选的实施方式中，DVD-Ig结合蛋白不仅结合由其亲本单克隆抗体结合的相同靶分子，而且还具有一种或多种其亲本单克隆抗体中的一种或多种所需特性。优选地，这种另外的特性是亲本单克隆抗体中的一者或多者的抗体参数。可以从其亲本单克隆抗体中的一种或多种促成DVD-Ig结合蛋白的抗体参数包括但不限于抗原特异性、抗原亲和力、效力、生物学功能、表位识别、蛋白质稳定性、蛋白质溶解性、产生效率、免疫原性、药代动力学、生物利用度、组织交叉反应性和直系同源抗原结合。
[0333] DVD-Ig结合蛋白结合GFAP和/或UCH-L1的至少一个表位。DVD-Ig结合蛋白的非限制性实例包括结合GFAP和/或UCH-L1的一个或多个表位的DVD-Ig结合蛋白、结合人类GFAP和/或UCH-L1的表位和另一物种(例如小鼠)的GFAP和/或UCH-L1的表位的DVD-Ig结合蛋白、和结合人类GFAP和/或UCH-L1的表位和另一靶分子的表位的DVD-Ig结合蛋白。
[0334] 如本文所用的“动态范围”是指测定读数与被分析样品中的靶分子或分析物的量成比例的范围。
[0335] “表位”或“多个表位”或“感兴趣表位”是指任何分子上被识别并且可以结合其特异性结合配偶体上的互补位点的位点。分子和特异性结合配偶体是特异性结合对的一部分。例如，表位可以是在多肽、蛋白质、半抗原、糖类抗原(诸如但不限于糖脂、糖蛋白或脂多糖)或多糖。其特异性结合配偶体可以是但不限于抗体。
[0336] 如本文所用的“片段抗原结合片段”或“Fab片段”是指抗体的片段，其结合抗原并且含有一个抗原结合位点、一条完整的轻链、和一条重链的一部分。Fab是由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段。Fab由重链和轻链中的每一个的一个恒定结构域和一个可变结构域组成。可变结构域含有互补位(抗原结合位点)，其包含在单体的氨基末端的一组互补决定区。因此Y的每个臂结合抗原上的表位。Fab片段可以如本领域已描述的那样产生，例如，使用酶木瓜蛋白酶，其可以用于将免疫球蛋白单体裂解成两个Fab片段和Fc片段，或者可以通过重组方法产生。
[0337] 如本文所用的“F(ab')2片段”是指通过胃蛋白酶消化整个IgG抗体以除去大部分Fc区，同时使一些铰链区完整而产生的抗体。F(ab')2片段具有通过二硫键连接在一起的两个抗原结合F(ab)部分，因此是二价的，分子量为约110kDa。二价抗体片段(F(ab')2片段)小于整个IgG分子并且能够更好地渗透到组织中，从而促进免疫组织化学中更好的抗原识别。F(ab')2片段的使用还避免了对活细胞上的Fc受体或蛋白A/G的非特异性结合。F(ab')2片段可以结合并沉淀抗原。
[0338] 如本文所用的“框架”(FR)或“框架序列”可以意指可变区减去CDR的剩余序列。因为CDR序列的精确界定可通过不同系统(例如参见上文)来确定，所以框架序列的含义易受相应不同解释。六个CDR(轻链的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3以及重链的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)也将轻链和重链上的框架区分成各链上的四个子区域(FR1、FR2、FR3和FR4)，其中CDR1位于FR1与FR2之间，CDR2位于FR2与FR3之间，并且CDR3位于FR3与FR4之间。在不将特定子区指定为FR1、FR2、FR3或FR4的情况下，如其它所提及的框架区表示单一天然存在的免疫球蛋白链的可变区内的组合FR。如本文所用，FR表示四个子区域中的一个，并且FR表示构成框架区的四个子区域中的两个或更多个。
[0339] 人类重链和轻链FR序列在本领域是已知的，其可用作重链和轻链“接受者”框架序列(或者简单的说是“接受者”序列)以使用本领域中已知的技术来人源化非人类抗体。在一个实施方式中，人类重链和轻链接受者序列选自在公众可获得的数据库诸如V-base(hypertext transfer protocol://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)或国际
信息系统(hypertext transfer protocol://
imgt.cines.fr/texts/IMGTrepertoire/LocusGenes/)中列出的框架序列。
信息系统(hypertext transfer protocol://
imgt.cines.fr/texts/IMGTrepertoire/LocusGenes/)中列出的框架序列。
[0340] 如本文所用的“功能性抗原结合位点”可以意指结合蛋白(例如抗体)上能够结合靶抗原的位点。抗原结合位点的抗原结合亲和力可以不如与抗原结合位点所源自的亲本结合蛋白，例如亲本抗体一样强，但结合抗原的能力必须是可使用已知用于评价蛋白质，例如抗体与抗原结合的多种方法中的任一者测量。此外，本文中的多价蛋白质，例如多价抗体的每个抗原结合位点的抗原结合亲和力无需在数量上相同。
[0341] “GFAP”在本文中用于描述胶质细胞原纤维酸性蛋白。GFAP是由人类中的GFAP基因编码，并且可以产生(例如通过重组方式，在其它物种中)的蛋白质。
[0342] “GFAP状态”可以意指在某个时间点的GFAP的水平或量(诸如使用GFAP的单个测量值)、与监测相关的GFAP的水平或量(诸如对受试者进行重复测试以鉴定GFAP量的增加或减少)、与创伤性脑损伤(无论是原发性脑损伤和/或继发性脑损伤)的治疗相关的GFAP的水平或量或其组合。
[0343] 如本文所用的“格拉斯哥昏迷量表”或“GCS”是指用于基于总体社交能力或对其它的依赖来估计和分类脑损伤结果的15分量表。所述测试使用以下值测量运动反应、言语反应和睁眼反应：I.运动反应(6-完全服从命令；5-伤害性刺激时定位；4-从伤害性刺激缩回；3-异常屈曲，即去皮层状态；2-伸展反应，即去脑状态；和1-无反应)；II.言语反应(5-警觉且定向；4-说话混乱，但连贯；3-字词不恰当且由字词组成的短语混乱；2-难以理解的声音；
和1-没有声音；和III.睁眼(4-自发睁眼；3-说话时睁眼；2-疼痛时睁眼；和1-不睁眼)。通过添加I+II+III的值来确定最终评分。最终评分可分为四个可能的生存水平，较低的数字指示更严重的损伤和更差的预后：轻度(13-15)；中度失能(9-12)(意识丧失超过30分钟；可能或可能消退的身体或认知障碍：并从康复中获益)；重度失能(3-8)(昏迷：无意识状态。没有有意义的反应，没有自愿活动)；和植物状态(小于3)(睡醒周期；觉醒，但没有与环境的相互作用；对疼痛没有定位反应)。中度脑损伤定义为导致意识丧失20分钟至6小时且格拉斯哥昏迷量表为9至12分的脑损伤。重度脑损伤定义为导致意识丧失大于6小时且格拉斯哥昏迷量表为3至8的脑损伤。
和1-没有声音；和III.睁眼(4-自发睁眼；3-说话时睁眼；2-疼痛时睁眼；和1-不睁眼)。通过添加I+II+III的值来确定最终评分。最终评分可分为四个可能的生存水平，较低的数字指示更严重的损伤和更差的预后：轻度(13-15)；中度失能(9-12)(意识丧失超过30分钟；可能或可能消退的身体或认知障碍：并从康复中获益)；重度失能(3-8)(昏迷：无意识状态。没有有意义的反应，没有自愿活动)；和植物状态(小于3)(睡醒周期；觉醒，但没有与环境的相互作用；对疼痛没有定位反应)。中度脑损伤定义为导致意识丧失20分钟至6小时且格拉斯哥昏迷量表为9至12分的脑损伤。重度脑损伤定义为导致意识丧失大于6小时且格拉斯哥昏迷量表为3至8的脑损伤。
[0344] 如本文所用，“格拉斯哥结局量表”是指用于功能性结局的全球量表，其将患者状态评定为以下五个类别之一：死亡、植物人状态、重度失能、中度失能或恢复良好。
[0345] 如本文中可互换使用的“扩展的格拉斯哥结局量表”或“GOSE”通过将重度失能、中度失能和良好恢复的类别细分为表1中的低级类别和高级类别来提供更详细的八种分类。
[0346] 表1
[0347]
[0348] 术语“人源化抗体”在本文中用于描述包含来自非人类物种(例如小鼠)的重链和轻链可变区序列但其中VH和/或VL序列中的至少一部分已变得更“类人”，即与人类生殖系可变序列更相似的抗体。“人源化抗体”为抗体或其变体、衍生物、类似物或片段，其免疫特异性地结合感兴趣抗原且包含基本上具有人抗体的氨基酸序列的框架(FR)区和基本上具有非人抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)。如本文所用，在CDR的背景下的术语“基本上”是指氨基酸序列与非人抗体CDR的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％相同的CDR。人源化抗体包含至少一个且通常两个可变结构域的基本上全部(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)，其中全部或基本上全部CDR区对应于非人免疫球蛋白(即供体抗体)的那些CDR区并且全部或基本上全部框架区是人免疫球蛋白共有序列的那些。在一个实施方式中，人源化抗体也包含免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常人免疫球蛋白的恒定区)的至少一部分。在一些实施方式中，人源化抗体含有轻链以及至少重链的可变结构域。抗体也可以包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。在一些实施方式中，人源化抗体仅含有人源化轻链。在一些实施方式中，人源化抗体仅含有人源化重链。在特定实施方式中，人源化抗体仅含有轻链和/或人源化重链的人源化可变结构域。
[0349] 人源化抗体可以选自免疫球蛋白的任何类别，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何同种型，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。人源化抗体可以包含来自多于一种类别或同种型的序列，并且可以使用本领域中熟知的技术选择特定的恒定结构域以优化所需的效应子功能。
[0350] 人源化抗体的框架区和CDR无需精确对应于亲本序列，例如可以通过取代、插入或/或缺失至少一个氨基酸残基来对供体抗体CDR或共有框架进行诱变以使该位点处的CDR或框架残基不对应于供体抗体或共有框架。然而，在优选的实施方式中，此类突变将不是广泛的。通常，至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、且最优选至少95％的人源化抗体残基将对应于亲本FR和CDR序列的那些。如本文所用，术语“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。如本文所用，术语“共有免疫球蛋白序列”是指由相关免疫球蛋白序列家族中最常出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如Winnaker,From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,1987))。因此，“共有免疫球蛋白序列”可以包含“共有框架区”和/或“共有CDR”。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的每个位置由家族中最常出现在那个位置的氨基酸占据。如果两个氨基酸同等频繁地出现，那么共有序列中可包括任一者。
[0351] 如本文在两种或更多种多肽或多核苷酸序列的背景下所使用的“相同的”或“同一性”可意指序列在指定区域上具有指定百分比的相同残基。可通过以下来计算所述百分比：最佳地比对两个序列、在指定区域比较两个序列、确定在两个序列中相同的残基的位置的数量以产生匹配位置的数量、以匹配位置的数量除以在指定区域内的位置的总数量，并且将结果乘以100以产生序列同一性的百分比。在两个序列具有不同长度或比对产生一个或多个交错末端并且比较的指定区域仅包含单个序列的情况下，单个序列的残基包括于计算的分母而不是分子中。
[0352] 如本文所用，“成像程序”是指允许检查身体内部以诊断、治疗和监测健康状况的医学测试。成像程序可以是非侵入性过程，其可以诊断疾病和损伤而不会造成侵入。成像程序的示例包括MRI、CT扫描、X射线、正电子发射断层扫描(PET)扫描、单光子发射计算机断层扫描(SPECT)和弥散张量成像(DTI)扫描。
[0353] 如本文中可互换使用的“对头部的损伤”或“头部损伤”是指对头皮、颅骨或大脑的任何创伤。此类损伤可能包括颅骨上的仅轻微的撞击或可能是严重的脑损伤。此类损伤包括大脑的原发性损伤和/或大脑的继发性损伤。原发性脑损伤发生在最初的侵害期间，并且由大脑的物理结构的移位引起。更具体地，原发性脑损伤是在创伤事件期间发生的对实质(组织、血管)的物理伤害，导致对周围脑组织的剪切和压迫。继发性脑损伤发生在原发性损伤之后，并且可能涉及一系列细胞过程。更具体地，继发性脑损伤是指在原发性脑损伤后的一段时间(从数小时到数天)内发展出的变化。它包括促成进一步破坏脑组织的大脑中细胞、化学、组织或血管变化的整个级联。
[0354] 对头部的损伤可以是闭合性的或开放性的(穿透性的)。闭合性头部损伤是指其中颅骨没有被撞击物体穿透的头皮、颅骨或大脑的创伤。开放性头部损伤是指其中颅骨被撞击物体穿透的头皮、颅骨或大脑的创伤。对头部的损伤可以是由人的身体摇动、由导致闭合性或开放性头部创伤的外部机械或其它力(例如，诸如汽车、飞机、火车等情况下的交通事故；诸如用棒球棒或来自枪械的头部猛击)产生的钝性冲击、脑血管意外(例如中风)、一次或多次跌倒(例如，如运动或其它活动)、爆炸或冲击波(统称为“冲击波伤”)以及由其它类型的钝力创伤引起的。另选地，对头部的损伤可能由摄入和/或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合引起。此类化学物质和/或毒素的实例包括火、霉菌、石棉、杀虫剂和杀昆虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体(诸如一氧化碳、硫化氢和氰化物)、有机金属(诸如甲基汞、四乙基铅和有机锡)和/或一种或多种滥用药物。另选地，对头部的损伤可能是由于受试者罹患自身免疫疾病、代谢紊乱、脑肿瘤、一种或多种病毒、脑膜炎、脑积水、缺氧或其任何组合引起的。在一些情况下，无法确定是否发生过任何此类事件或损伤。例如，患者或受试者可能没有病史，受试者可能无法说话，受试者可能不知道他们所经历的事件或没有对其具有充分的信息，等等。此类情况在本文中被描述为受试者“可能已遭受头部损伤。”在本文的某些实施方式中，闭合性头部损伤不包括并且特别地排除脑血管意外，诸如中风。
[0355] 如本文所用，“颅内病变”是指脑内的损伤区域。颅内病变可以是在成像程序或脑成像测试(例如MRI或CT扫描)中看到的异常。在CT或MRI扫描中，脑部病变可能表现为看起来不像正常脑组织的暗点或亮点。
[0356] 如本文所用的“分离的多核苷酸”可以意指多核苷酸(例如基因组、cDNA或合成来源或其组合的多核苷酸)，根据其来源，所述多核苷酸不与“分离的聚核苷酸”见于自然界中所处的多核苷酸的全部或一部分缔合；可操作地连接至其在自然界中不连接的多核苷酸；或不作为较大序列的一部分存在于自然界中。
[0357] 如本文所用的“标记”和“可检测标记”是指附接至抗体或分析物，以使抗体与分析物之间的反应可检测的部分，并且如此标记的抗体或分析物被称为“可检测地标记的”。标记可以产生可通过视觉或仪器手段检测到的信号。各种标记包括产生信号的物质，诸如发色团、荧光化合物、化学发光化合物、放射性化合物等。标记的代表性实例包括产生光的部分，例如吖啶鎓化合物，和产生荧光的部分，例如荧光素。本文描述了其它标记。在这方面，所述部分本身可以是不可检测的，但在与另一部分反应时可以变得可检测。术语“可检测地标记的”的使用旨在涵盖这种标记。
[0358] 可使用如在本领域中已知的任何适合的可检测标记。例如，可检测标记可为放射性标记(诸如3H、14C、32P、33P、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho和153Sm)、酶标记(诸如辣根过氧化酶、碱性过氧化酶、葡萄糖6-磷酸脱氢酶等)、化学发光标记(诸如吖啶酯、硫酯或磺酰胺；鲁米诺、异鲁米诺、菲啶鎓酯等)、荧光标记(诸如荧光素(例如5-荧光素、6-羧基荧光素、3'6-羧基荧光素、5(6)-羧基荧光素、6-六氯-荧光素、6-四氯荧光素、异硫氰酸荧光素等))、若丹明、藻胆蛋白、R-藻红素、量子点(例如硫化锌封盖的硒化镉)、测温标记或免疫聚合酶链反应标记。标记、标记程序和标记检测的绪论见于Polak和Van Noorden,Introduction to Immunocytochemistry,第2版,Springer Verlag,N.Y.(1997)；和Haugland,Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals(1996)(其是由Molecular Probes,Inc.,Eugene,Oregon出版的组合手册和目录)中。荧光标记可用于FPIA中(参见例如美国专利号5,593,896、5,573,904、5,496,925、5,359,093和5,352,803，其通过引用整体并入本文)。吖啶化合物可在均质化学发光测定法中用作可检测标记(参见例如，Adamczyk等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.16:1324-1328(2006)；Adamczyk等人,
Bioorg.Med.Chem.Lett.4:2313-2317(2004)；Adamczyk等人,Biorg.Med.Chem.Lett.14:
3917-3921(2004)；和Adamczyk等人,Org.Lett.5:3779-3782(2003))。
Bioorg.Med.Chem.Lett.4:2313-2317(2004)；Adamczyk等人,Biorg.Med.Chem.Lett.14:
3917-3921(2004)；和Adamczyk等人,Org.Lett.5:3779-3782(2003))。
[0359] 在一个方面，吖啶化合物是吖啶-9-甲酰胺。用于制备吖啶9-甲酰胺的方法描述于Mattingly,J.Biolumin.Chemilumin.6:107-114(1991)；Adamczyk等人,J.Org.Chem.63:5636-5639(1998)；Adamczyk等人,Tetrahedron 55:10899-10914(1999)；Adamczyk等人,Org.Lett.1:779-781(1999)；Adamczyk等人,Bioconjugate Chem.11:714-724(2000)；
Mattingly等人,In Luminescence Biotechnology:Instruments and Applications；
Dyke,K.V.编辑；CRC Press:Boca Raton,第77-105页(2002)；Adamczyk等人,Org.Lett.5:
3779-3782(2003)；和美国专利号5,468,646、5,543,524和5,783,699(每个所述文献的关于此方面的教导均通过引用整体并入本文)中。
Mattingly等人,In Luminescence Biotechnology:Instruments and Applications；
Dyke,K.V.编辑；CRC Press:Boca Raton,第77-105页(2002)；Adamczyk等人,Org.Lett.5:
3779-3782(2003)；和美国专利号5,468,646、5,543,524和5,783,699(每个所述文献的关于此方面的教导均通过引用整体并入本文)中。
[0360] 吖啶化合物的另一个实例是吖啶-9-羧酸芳基酯。具有式II的吖啶-9-羧酸芳基酯的一实例是10-甲基-9-(苯氧基羰基)吖啶氟磺酸酯(可购自Cayman Chemical,Ann Arbor,MI)。用于制备吖啶-9-羧酸芳基酯的方法描述于McCapra等人,Photochem.Photobiol.4:1111-21(1965)；Razavi等人,Luminescence 15:245-249(2000)；Razavi等人,
Luminescence 15:239-244(2000)；和美国专利号5,241,070(其各自通过引用整体并入本文用于其在关于该方面的教导)中。此类吖啶-9-羧酸芳基酯是针对在由至少一种氧化酶氧化分析物中产生的过氧化氢的、在信号强度和/或信号迅速度方面均高效的化学发光指示剂。吖啶-9-羧酸芳基酯的化学发光发射过程迅速完成，即在1秒内完成，而吖啶-9-甲酰胺化学发光发射延续到2秒。然而，吖啶-9-羧酸芳基酯在蛋白质存在下失去其化学发光特性。
因此，其使用需要在信号生成和检测期间不存在蛋白质。用于分离或去除样品中蛋白质的方法是本领域技术人员熟知的，并且包括但不限于超滤、提取、沉淀、透析、色谱法和/或消化(参见例如Wells,High Throughput Bioanalytical Sample Preparation.Methods and Automation Strategies,Elsevier(2003))。从测试样品中去除或分离的蛋白质的量可为约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％。关于吖啶-9-羧酸芳基酯及其用途的更多细节阐述于2007年4月9日提交的美国专利申请号11/697,835中。吖啶-9-羧酸芳基酯可以溶解在任何合适的溶剂中，诸如脱气的无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)或含水胆酸钠。
Luminescence 15:239-244(2000)；和美国专利号5,241,070(其各自通过引用整体并入本文用于其在关于该方面的教导)中。此类吖啶-9-羧酸芳基酯是针对在由至少一种氧化酶氧化分析物中产生的过氧化氢的、在信号强度和/或信号迅速度方面均高效的化学发光指示剂。吖啶-9-羧酸芳基酯的化学发光发射过程迅速完成，即在1秒内完成，而吖啶-9-甲酰胺化学发光发射延续到2秒。然而，吖啶-9-羧酸芳基酯在蛋白质存在下失去其化学发光特性。
因此，其使用需要在信号生成和检测期间不存在蛋白质。用于分离或去除样品中蛋白质的方法是本领域技术人员熟知的，并且包括但不限于超滤、提取、沉淀、透析、色谱法和/或消化(参见例如Wells,High Throughput Bioanalytical Sample Preparation.Methods and Automation Strategies,Elsevier(2003))。从测试样品中去除或分离的蛋白质的量可为约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％。关于吖啶-9-羧酸芳基酯及其用途的更多细节阐述于2007年4月9日提交的美国专利申请号11/697,835中。吖啶-9-羧酸芳基酯可以溶解在任何合适的溶剂中，诸如脱气的无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)或含水胆酸钠。
[0361] “连接序列”或“连接肽序列”是指与一种或多种感兴趣多肽序列(例如，全长、片段等)连接的天然或人工多肽序列。术语“连接的”是指连接序列与感兴趣多肽序列的接合。此类多肽序列优选地通过一个或多个肽键接合。连接序列可以具有约4至约50个氨基酸的长度。优选地，连接序列的长度为约6至约30个氨基酸。可以通过氨基酸取代、添加或缺失来修饰天然连接序列以产生人工连接序列。连接序列可用于许多目的，包括用于重组Fab中。示例性连接序列包括但不限于：(i)组氨酸(His)标签，诸如6X His标签，其具有HHHHHH(SEQID NO：3)的氨基酸序列，可用作连接序列以有利于分离和纯化感兴趣多肽和抗体；(ii)肠激酶裂解位点，如His标签，用于分离和纯化感兴趣的蛋白质和抗体。常常，将肠激酶裂解位点与His标签一起用于分离和纯化感兴趣的蛋白质和抗体。各种肠激酶裂解位点在本领域中是已知的。肠激酶裂解位点的实例包括但不限于DDDDK(SEQ ID NO：4)的氨基酸序列及其衍生物(例如ADDDDK(SEQ ID NO：5)等)；(iii)杂项序列可用于链接或连接单链可变区片段的轻链和/或重链可变区。其它连接序列的实例可见于Bird等人,Science 242:423-426(1988)；Huston等人,PNAS USA 85:5879-5883(1988)；和McCafferty等人,Nature348:552-554(1990)中。还可以修饰连接序列以用于另外的功能，诸如药物的附接或附接于固体支持物。
在本公开的上下文中，单克隆抗体例如可以含有连接序列，诸如His标签、肠激酶裂解位点或两者。
在本公开的上下文中，单克隆抗体例如可以含有连接序列，诸如His标签、肠激酶裂解位点或两者。
[0362] 如本文所用的“单克隆抗体”是指自基本上均质抗体的群体获得的抗体，即除可以少量存在的可能天然存在的突变之外，构成所述群体的个别抗体是相同的。单克隆抗体针对单一抗原具有高度特异性。此外，与通常包括针对不同决定子(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定子。本文的单克隆抗体具体地包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，而所述链的剩余部分与源自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体以及这类抗体的片段中的对应序列相同或同源，只要它们表现出所需的生物性。
[0363] 如本文可互换使用的“磁共振成像”或“MRI”是指在放射学中用于形成人体在健康和疾病中的解剖结构和生理过程的图片的医学成像技术(例如，在本文中可互换地称为如“MRI”、“MRI程序”或“MRI扫描”)。MRI是医学成像的一种形式，可测量人体组织的原子核在强磁场中时对高频无线电波的响应，并产生内部器官的图像。基于核磁共振(NMR)科学的MRI扫描仪使用强磁场，无线电波和场梯度来生成人体内部图像。
[0364] 术语“多价结合蛋白”在本文中用于指包含两个或更多个抗原结合位点(在本文中也称为“抗原结合结构域”)的结合蛋白。多价结合蛋白优选地被工程化以具有三个或更多个抗原结合位点，并且通常不是天然存在的抗体。术语“多特异性结合蛋白”是指可以结合两个或更多个相关或不相关靶标的结合蛋白，包括能够结合相同靶分子的两个或更多个不同表位的结合蛋白。
[0365] 如本文中可互换使用的“阴性预测值”或“NPV”是指假定它们具有阴性测试结果(即，针对希望的结果进行测试的受试者不具有希望的结果)时受试者具有阴性预后(即，缺少希望的结果)的概率。
[0366] “即时设备”(Point-of-care device)是指用于在照护处或附近(即在实验室外)的现场、在患者护理的时间和地方(诸如在医院、医师办公室、紧急或其它医疗护理机构、患者家、养老院和/或长期护理和/或临终关怀设施中)提供医学诊断测试的装置。即时设备的实例包括由Abbott Laboratories(Abbott Park，IL)生产的装置(例如i-STAT和i-STAT Alinity，普适的生物传感器(Rowville，Australia)(参见US 2006/0134713)、Axis-Shield PoC AS(Oslo，Norway)和临床实验室产品(Los Angeles，USA)。
[0367] 如本文中可互换使用的“阳性预测值”或“PPV”是指假定它们具有阳性测试结果(即，针对希望的结果进行测试的受试者具有希望的结果)时受试者具有阳性预后(即，存在希望的结果)的概率。
[0368] 在本文所述的免疫测定法和试剂盒的背景下的“质量控制试剂”包括但不限于校准物、对照物和敏感性组。通常使用“校准物”或“标准物”(例如一种或多种，诸如复数种)来建立校正(标准)曲线以内插分析物(诸如抗体或分析物)的浓度。另选地，可以使用接近参考水平或对照水平(例如“低”、“中等”或“高”水平)的单一校准物。可联合使用多种校准物(即多于一种的校准物或不同量的校准物)以构成“敏感性组”。
[0369] “接受者操作特征”曲线或“ROC”曲线是指说明二元分类系统在其鉴别阈变化时的性能的图形绘图。例如，ROC曲线可以是对于诊断测试的不同可能截止点的真阳性率相比于假阳性率的绘图。它是通过在各种阈值设置下将阳性中的真阳性分数(TPR＝真阳性率)相对于阴性中的假阳性分数(FPR＝假阳性率)进行绘图产生的。TPR也称为敏感性，并且FPR是一减去特异性或真阴性率。ROC曲线展示了敏感性与特异性之间的权衡(敏感性的任何增加都伴随着特异性的降低)；曲线越紧密地沿着ROC空间的左边界，然后是顶部边界，测试越准确；曲线越靠近ROC空间的45度对角线，测试越不准确；截止点处的切线斜率给出该测试值的似然率(LR)；并且曲线下面积是测试准确度的度量。
[0370] “重组抗体”和“多种重组抗体”是指通过一个或多个步骤制备的抗体，包括通过重组技术将编码一种或多种单克隆抗体的全部或部分的核酸序列克隆到适当的表达载体中，并随后在适当的宿主细胞中表达抗体。所述术语包括但不限于重组产生的单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体(全部或部分人源化)、由抗体片段形成的多特异性或多价结构、双功能抗体、异源缀合Ab、DVD- 和本文(i)中描述的其它抗体。(双可变结构域免疫球蛋白及其制备方法描述于Wu,C等人,Nature Biotechnology,25:1290-1297(2007)中)。如本文中使用的术语“双功能抗体”是指包括对一个抗原位点具有特异性的第一臂和对不同抗原位点具有特异性的第二臂的抗体，即双功能抗体具有双重特异性。
[0371] 如本文所用的“参考水平”是指用于评估诊断、预后或治疗功效的测定临界值，在本文中已将其与各种临床参数(例如疾病的存在、疾病阶段、疾病严重性、疾病的进展、未进展或改善等)联系起来或相关联。本公开提供示例性参考水平。然而，众所周知，参考水平可以根据免疫测定法的性质(例如使用的抗体、反应条件、样品纯度等)而变化，并且可以比较和标准化测定法。如本文所用，术语“临界值”是指极限(例如，数字)，在该极限以上具有确定的或特定的临床结果，在其之下具有不同的确定的或特定的临床结果。
[0372] 本公开提供示例性参考水平。然而，众所周知，参考水平可以根据免疫测定的性质(例如，所用抗体、反应条件、样品纯度等)而变化，并且可以对测定进行比较和标准化。基于本公开提供的描述针对其它免疫测定法修改本文的公开以获得用于那些其它免疫测定法的免疫测定法特异性参考水平进一步完全在本领域普通技术人员的能力范围内。尽管参考水平的精确值可以在测定法之间变化，但是如本文所述的发现应是普遍适用的并且能够外推至其它测定法。
[0373] 如本文所用的对受试者(例如患者)的“风险评估”、“风险分类”、“风险鉴定”或“风险分层”是指评价包括生物标记物的因素，以预测包括疾病发作或疾病进展的未来事件发生的风险，以便可以在更加知情的基础上做出关于受试者的治疗决策。
[0374] “样品”、“测试样品”、“样本”、“来自受试者的样品”和“患者样品”可以在本文中交换使用并且可以是血液(诸如全血)样品、组织、尿、血清、血浆、羊水、脑脊髓液、胎盘细胞或组织、内皮细胞、白细胞或单核细胞。样品可以如从患者获得地直接使用，或者可预处理，诸如通过过滤、蒸馏、提取、浓缩、离心、对干扰组分进行灭活、添加试剂等，从而以如本文中讨论的或如其它本领域已知的一些方式来修改样品的特征。
[0375] 可以利用多种细胞类型、组织或体液来获得样品。此类细胞类型、组织和流体可以包括组织切片，诸如活检和尸检样品、取得用于组织学目的的冷冻切片、血液(例如全血)、血浆、血清、红细胞、血小板、间质液、脑脊髓液等。在一些实施方式中，样品是全血样品。在一些实施方式中，样品是血清样品。在又其它实施方式中，样品是血浆样品。细胞类型和组织还可以包括淋巴液、脑脊髓液、由组织或细胞类型收集的流体可以通过从人类和非人动物中除去细胞样品来提供，但也可以通过使用先前分离的细胞(例如通过其它人分离的、在其它时间、和/或用于其它目的)来完成。也可以使用归档组织，诸如具有治疗或结局史的那些。可能不需要蛋白质或核苷酸分离和/或纯化。
[0376] 如本文所用的测定的“灵敏度”是指结局为阳性的受试者中被正确鉴定为阳性(例如正确鉴定那些患有他们正被测试的疾病或医学病状的受试者)的比例。例如，这可能包括将受试者从未患TBI的那些中正确鉴定为患有TBI、将受试者从患有轻度TBI的那些中正确地鉴定为患有中度、重度或中度至重度TBI、将受试者从患有中度、重度或中度至重度TBI的那些中正确地鉴定为患有轻度TBI、将受试者从未患TBI的那些中正确地鉴定为患有中度、重度或中度至重度TBI或将受试者从未患TBI的那些中正确地鉴定为患有轻度TBI，将受试者从不可能从头部CT扫描或MRI中受益的受试者中正确地鉴定为可能从头部CT扫描或MRI中受益等)。
[0377] 如本文所用的测定法的“特异性”是指结局为阴性的受试者中被正确鉴定为阴性(例如正确鉴定那些未患有他们正被测试的疾病或医学病状的受试者)的比例。例如，这可能包括从未患TBI的那些中正确鉴定受试者患有TBI、从患有轻度TBI的那些中正确地鉴定受试者未患中度、重度或中度至重度TBI、从患有中度、重度或中度至重度TBI的那些中正确地鉴定受试者为未患轻度TBI、或将受试者鉴定为未患任何TBI，或将受试者从未患TBI的那些中正确地鉴定为患有轻度TBI等)。
[0378] “校准组合物系列”是指包含已知浓度的分析物(例如GFAP和UCH-L1)的多种组合物，其中每种组合物与所述系列中的其它组合物的不同之处在于分析物(例如GFAP和UCH-L1)的浓度。
[0379] 如本文所用，术语“单分子检测”是指以非常低的浓度水平(例如pg/mL或飞克/mL的水平)检测和/或测量测试样品中分析物的单个分子。许多不同的单分子分析仪或设备是本领域已知的，包括纳米孔和纳米孔设备。纳米孔设备的实例在国际专利公开号WO 2016/161402中描述，其通过引用整体并入本文。纳米孔设备的实例在国际专利公开号WO 2016/
161400中描述，其通过引用整体并入本文。
161400中描述，其通过引用整体并入本文。
[0380] 如本文中可互换使用的“固相”或“固体支持物”是指可用于附接和/或吸引且固定化(1)一种或多种捕获剂或捕获特异性结合配偶体，或(2)一种或多种检测剂或检测特异性结合配偶体的任何材料。固相可以就其吸引和固定化捕获剂的固有能力进行选择。另选地，固相可以在其上粘附连接剂，所述连接剂具有吸引和固定化(1)捕获剂或捕获特异性结合配偶体，或(2)检测剂或检测特异性结合配偶体。例如，连接剂可包括带电物质，其相对于捕获剂(例如捕获特异性结合配偶体)或检测剂(例如检测特异性结合配偶体)本身或相对于与(1)捕获剂或捕获特异性结合配偶体，或(2)检测剂或检测特异性结合配偶体缀合的带电物质是带相反电荷的。一般来讲，连接剂可以是任何结合配偶体(优选是特异性的)，其固定化在(附接至)固相上并且具有通过结合反应来固定化(1)捕获剂或捕获特异性结合配偶体，或(2)检测剂或检测特异性结合配偶体的能力。连接剂使得捕获剂在性能测定之前或性能测定期间间接地与固相材料结合。例如，固相可以是塑料、衍生塑料、磁性或非磁性金属、玻璃或硅，包括例如试管、微量滴定孔、薄片、珠粒、微粒、芯片和本领域普通技术人员已知的其它构造。
[0381] 如本文所用的“特异性结合”或“特异性地结合”可以是指抗体、蛋白质或肽与第二化学物质的相互作用，其中相互作用依赖于化学物质上具体结构(例如抗原决定簇或表位)的存在；例如，抗体识别并结合特定的蛋白质结构，而不是广泛结合蛋白质。如果抗体对表位“A”具有特异性，则在含被标记的“A”和抗体的反应中，含表位A的分子(或者游离的未标记A)的存在将会降低与抗体结合的被标记的A的量。
[0382] “特异性结合配偶体”是特异性结合对的成员。特异性结合对包含两个不同分子，其通过化学或物理方式彼此特异性结合。因此，除常见免疫测定法的抗原与抗体特异性结合对之外，其它特异性结合对可包括生物素与抗生物素蛋白(或链霉抗生物素蛋白)；碳水化合物与凝集素；互补核苷酸序列；效应分子与受体分子；辅因子与酶；酶与酶抑制剂等。此外，特异性结合对可包括是原始特异性结合成员的类似物的成员，例如分析物-类似物。免疫反应性特异性结合成员包括分离的或重组产生的抗原、抗原片段和抗体，包括单克隆和多克隆抗体以及其复合物和片段。
[0383] 如本文所用的“统计学上显著的”是指两个或更多个变量之间的关系由除随机机会之外的其它因素引起的可能性。将统计假设检验用于确定数据集的结果是否具有统计学上的显著性。在统计假设检验中，只要观察到的检验统计量的p值小于研究定义的显著性水平，就获得了统计学显著性结果。p值是假定零假设是真时获得至少与观察到的结果一样极端的结果的概率。统计假设分析的实例包括Wilcoxon符号秩次检验、t检验、卡方或费舍尔精确检验。如本文所用的“显著性的”是指尚未确定为具有统计学显著性的变化(例如，其可能尚未经历统计假设检验)。
[0384] 如本文使用的“受试者”和“患者”可互换地用于指任何脊椎动物，包括但不限于哺乳动物(例如牛、猪、骆驼、美洲驼、马、山羊、兔、绵羊、仓鼠、豚鼠、猫、狗、大鼠和小鼠、非人灵长类动物(例如猴子，诸如食蟹猴或恒河猴、黑猩猩等)和人类)。在一些实施方式中，受试者可以为人类或非人类。在一些实施方式中，受试者为人类。受试者或患者可以经历其它形式的治疗。在一些实施方式中，受试者是可能正在接受其它形式的治疗的人类。受试者或患者可能正在接受其他形式的治疗。在一些实施方案中，当所述受试者是人时，所述受试者不包括遭受脑血管意外(例如中风)的任何人。在一些实施方案中，该受试者头部疑似遭受了伤害。在一些实施方案中，已知该受试者遭受头部损伤。在一些实施方案中，该受试者疑似遭受了轻度、中度、重度或中度至重度TBI。在一些实施方案中，该受试者疑似患有轻度TBI。在一些实施方案中，怀疑受试者患有中度TBI。在一些实施方案中，怀疑受试者患有重度TBI。
[0385] “治疗(Treat/treating/treatment)”各自在本文中可互换用于描述逆转、减轻或抑制这种术语所适用的疾病和/或损伤的进展，或这种疾病的一种或多种症状。根据受试者的病状，所述术语还是指预防疾病，并且包括预防疾病的发作或预防与疾病相关的症状。治疗可以以急性或慢性方式进行。所述术语还是指在受疾病折磨之前降低与这种疾病相关的疾病或症状的严重性。在折磨之前的这种预防疾病或降低疾病严重性是指不在受疾病折磨的施用时间将药物组合物施用至受试者。“预防”还是指预防疾病或与这种疾病相关的一种或多种症状的复发。“治疗”和“治疗性地”是指治疗的行为，正如“治疗”如上所定义的。
[0386] 如本文可互换使用的“创伤性脑损伤”或“TBI”是指具有广谱症状和失能的复杂损伤。TBI很多时候是类似于其它损伤的急性事件。TBI可分为“轻度”、“中度”、“重度”。TBI的原因是多种多样的，并且包括例如人的身体摇动、车祸、枪械损伤、脑血管意外(例如中风)、跌倒、爆炸或冲击波以及其它类型的钝力创伤。TBI的其它原因包括摄入和/或暴露于一种或多种化学品或毒素(诸如火、霉菌、石棉、杀虫剂和杀昆虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体(诸如一氧化碳、硫化氢和氰化物)、有机金属(诸如甲基汞、四乙基铅和有机锡)、一种或多种滥用药物或其组合)。另选地，TBI可能在罹患自身免疫疾病、代谢紊乱、脑肿瘤、一种或多种病毒、脑膜炎、脑积水、缺氧或其组合的受试者中发生。青年人和老年人是TBI风险最高的年龄组。在本文的某些实施方式中，创伤性脑损伤或TBI不包括并且特别地排除脑血管意外，诸如中风。
[0387] 如本文所用的“轻度TBI”是指脑损伤，其中意识丧失是短暂的并且通常是几秒或几分钟并且/或者混乱和定向障碍短于1小时。轻度TBI也被称为脑震荡、轻微头部创伤、轻微TBI、轻微脑损伤和轻微头部损伤。虽然MRI和CT扫描可能是正常的，但患有轻度TBI的个体可能具有认知问题，诸如头痛、思维困难、记忆问题、注意力缺陷、情绪波动和沮丧。
[0388] 轻度TBI是最普遍的TBI，并且在初始损伤时常常被忽略。通常，受试者具有的格拉斯哥昏迷量表数在13-15之间(诸如13-15或14-15)。百分之十五(15％)的轻度TBI患者的症状持续3个月或更长时间。轻度TBI定义为头部的强力运动或导致不到30分钟的精神状态短暂变化(混乱、定向障碍或记忆丧失)或意识丧失的冲击力的结果。轻度TBI的常见症状包括疲劳、头痛、视力障碍、记忆力丧失、注意力/集中力差、睡眠障碍、头晕/失去平衡、应激性情绪障碍、抑郁情感和癫痫。与轻度TBI相关的其它症状包括恶心、嗅觉丧失、对光和声音的敏感性、情绪变化、迷茫或混乱、和/或思维迟钝。
[0389] 如本文所用的“中度TBI”是指脑损伤，其中意识丧失和/或混乱和定向障碍在1至24小时之间并且受试者具有的格拉斯哥昏迷量表数在9-13(诸如9-12或9-13)之间。患有中度TBI的个体具有异常的脑成像结果。如本文所用的“重度TBI”是指脑损伤，其中意识丧失超过24小时并且在损伤或穿透性颅骨损伤后记忆丧失时间超过24小时并且受试者具有的格拉斯哥昏迷量表数在3-8之间。缺陷的范围为从较高水平的认知功能损害到昏迷状态。幸存者可能具有有限的手臂或腿部功能、言语或语言异常、思维能力丧失或情绪问题。具有重度损伤的个体可能会长期处于无反应状态。对于许多患有重度TBI的人来说，通常需要长期康复以最大限度地发挥功能和独立性。
[0390] 如本文所用的“中度至重度”TBI是指包括中度至重度的广泛脑损伤且因此涵盖单独的中度TBI、单独的重度TBI和中度至重度TBI的组合。患有中度至重度TBI的受试者可能具有3-13之间的格拉斯哥昏迷评分数(例如3-12或3-13)。例如，在某些临床情况下，最初可以将受试者诊断为患有中度TBI，但是随着时间的推移(几分钟、几小时或几天)，该受试者会发展为患有重度TBI(例如在有脑出血的某些情况下)。这类受试者将是可能分类为“中度至重度”的患者实例。中度至重度TBI的常见症状包括认知缺陷，包括注意力、集中力、注意力分散性、记忆力、运算速度方面的困难、混乱、持续言语、冲动、语言处理和/或“执行功能”、不理解口语词(感觉性失语症)、说话和被理解困难(表达性失语症)、言语不清、说话速度很快或很慢、阅读问题、写作问题、解释触摸、温度、运动、肢体位置和精细辨别困难、将感觉印象整合或模式化成对心理有意义的数据、部分或全部视力丧失、眼肌无力和双视(复视)、视力模糊、判断距离的问题、不自主的眼球运动(眼球震颤)、不耐受光(畏光)、听力(诸如听力减弱或丧失、耳中有鸣声(耳鸣)、对声音的敏感度增加)、嗅觉丧失或减弱(嗅觉缺失症)、味觉丧失或减弱、与癫痫相关的惊厥，所述惊厥可能是几种类型并且可能涉及意识、感官知觉或运动肌移动、对肠和膀胱的控制中断、失眠、耐力丧失、食欲改变、体温调节、月经困难、依赖行为、情绪化能力、缺乏动力、易怒、攻击性、抑郁、去抑制或拒绝/缺乏意识。
[0391] 如本文可互换使用的“泛素羧基末端水解酶L1”或“UCH-L1”是指人类中由UCH-L1基因编码的去泛素化酶。UCH-L1也称为泛素羧基末端酯酶L1和泛素硫酯酶，是其产物水解泛素的小C末端加合物以产生泛素单体的基因家族的成员。
[0392] “UCH-L1状态”可以意指在某个时间点的UCH-L1的水平或量(诸如使用UCH-L1的单个测量值)、与监测相关的UCH-L1的水平或量(诸如对受试者进行重复测试以鉴定UCH-L1量的增加或减少)、与创伤性脑损伤(无论是原发性脑损伤和/或继发性脑损伤)的治疗相关的UCH-L1的水平或量或其组合。
[0393] “变体”在本文中用于描述通过氨基酸的插入、缺失或保守性取代而在氨基酸序列方面不同，但保留至少一种生物活性的肽或多肽。“生物活性”的代表性实例包括被特异性抗体结合或促进免疫应答的能力。变体还在本文中用于描述具有与参考蛋白质基本上相同的氨基酸序列的蛋白质，所述参考蛋白质具有保留至少一种生物活性的氨基酸序列。氨基酸的保守性取代，即以相似特性(例如亲水性、带电区域的程度和分布)的不同氨基酸来替换氨基酸，在本领域中被公认为通常涉及微小变化。这些微小变化可以部分地通过考虑氨基酸的亲水性指数来鉴定，如本领域中所理解的。Kyte等人,J.Mol.Biol.157:105-132(1982)。氨基酸的亲水性指数是基于其疏水性和电荷的考虑。本领域中已知的是相似的亲水性指数的氨基酸可被取代并仍然保留蛋白质功能。在一个方面，亲水性指数为±2的氨基酸被取代。氨基酸的亲水性还可用于揭示将产生保留生物功能的蛋白质的取代。在肽的背景下考虑氨基酸的亲水性允许计算该肽最大的局部平均亲水性，其是一种已被报道与抗原性和免疫原性良好关联的有用量度。美国专利号4,554,101通过引用整体并入本文。如本领域中所了解的，具有相似亲水性值的氨基酸的取代可以产生保留生物活性(例如免疫原性)的肽。可用具有彼此在±2内的亲水性值的氨基酸进行取代。氨基酸的疏水性指数和亲水性值两者都受该氨基酸的特定侧链影响。与所述观察一致的是，与生物功能相容的氨基酸取代被理解为取决于所述氨基酸的相对相似性，并且特别是那些氨基酸的侧链，如通过疏水性、亲水性、电荷、大小以及其它特性所揭示的。“变体”也可用于指抗分析物(例如GFAP和/或UCH-L1)抗体的抗原反应性片段，其在氨基酸序列方面与抗分析物(例如GFAP和/或UCH-L1)抗体的相应片段不同，但仍具有抗原反应性并且可以与用于与分析物(例如GFAP和/或UCH-L1)结合的抗分析物(例如GFAP和/或UCH-L1)抗体的相应片段竞争。“变体”也可用于描述已差别地加工(诸如通过蛋白水解、磷酸化或其它翻译后修饰)，但仍保留它的抗原反应性的多肽或其片段。
[0394] “载体”在本文中用于描述可以转运其已连接的另一核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，所述质粒是指可以将额外的DNA区段连接到其中的环状双链DNA环。另一种类型的载体是病毒载体，其中额外的DNA区段可以被连接到病毒基因组中。某些载体可以在它们被引入的宿主细胞中自主复制(例如具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其它载体(例如非附加型哺乳动物载体)可在引入到宿主细胞中之后整合到宿主细胞的基因组中，并且由此与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导它们所可操作地连接的基因的表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简称为“表达载体”)。一般而言，适用于重组DNA技术中的表达载体常常呈质粒形式。“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，可以使用起等同功能的其它形式的表达载体，诸如病毒载体(例如复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)。就这一点而言,载体的RNA型式(包括RNA病毒载体)也可以用于本公开的上下文中。
[0395] 除非本文另外定义，否则结合本公开使用的科学和技术术语将具有由本领域普通技术人员通常所理解的含义。例如，结合本文中描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学和蛋白质及核酸化学以及杂交使用的任何命名法以及其技术是本领域中熟知并且常用的那些。术语的含义和范围应为清晰的；然而，如果存在任何隐含歧义，则本文中所提供的定义优先于任何字典或外来定义。此外，除非另外通过上下文要求，否则单数的术语应包括复数并且复数术语应包括单数。
[0396] 2.使用GFAP和UCH-L1参考水平的组合辅助诊断已遭受或疑似已遭受头部损伤的受试者的方法
[0397] 除其他方法外，本发明还涉及一种辅助诊断和评估已遭受或可能已遭受头部损伤的受试者的方法。特别地，通过检测或测量在受试者已遭受或可能已遭受头部损伤后的48小时内的各个时间点采集的样品中的泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平的组合，本公开提供了用于辅助诊断和评估受试者以确定该受试者是否已遭受创伤性脑损伤(TBI)的方法，例如重度至重度创伤性脑损伤。如本文所公开的，对疑似患有TBI的受试者的诊断和评估包括基于与各种参考水平相比的GFAP和UCH-L1的水平确定是否进行成像程序，以及其他医学评估(例如，临床评估)。这种基于GFAP和UCH-L1水平的诊断和评估可以辅助确定受试者是否更有可能具有阳性MRI扫描和/或阳性头部CT扫描(即存在颅内病变)。在一些实施方案中，所述方法可基于与参考水平相比的GFAP和UCH-L1水平来辅助确定遭受头部损伤的受试者是否遭受了创伤性脑损伤。根据这些实施方案，该方法可以包括以下步骤：对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及(a)当样品中的GFAP水平小于约15pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平小于约70pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者未遭受TBI；或者(b)当样品中的GFAP水平等于约15pg/mL到约40pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平等于约70pg/mL至约150pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者更有可能已遭受TBI；或者(c)当样品中的GFAP水平大于约40pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平大于约150pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者更有可能已遭受TBI。
[0398] 在一些实施方案中，该方法可包括在受试者疑似损伤的约48小时内获得样品并且使该样品与UCH-L1和/或GFAP的抗体接触，以允许形成抗体和UCH-L1和/或GFAP的复合物。该方法还包括检测所得的抗体GFAP/UCH-L1复合物。根据这些方法，可以在进行该方法之前或之后测量或检测GFAP和UCH-L1水平，然后将其与一个或多个临床参数(例如，GCS评分和/或CT扫描)相关联，以便建立可用于确定受试者是否患有TBI的GFAP和UCH-L1的参考水平。
[0399] 在一些实施方案中，如本文进一步所述，GFAP和UCH-L1的参考水平可以用作具有至少约35％的特异度和至少约90％的灵敏度的测定的一部分。另外，在其他实施方案中，与单独测量或检测GFAP或UCH-L1的方法或测定法相比，该方法用作测定法时具有高至少3％的灵敏度和高至少17％的特异度。在其他实施方案中，与单独测量或检测GFAP或UCH-L1的方法或测定法相比，该方法用作测定法时具有高至少5％的灵敏度和高至少20％的特异度。在其他实施方案中，与单独测量或检测GFAP或UCH-L1的方法或测定法相比，该方法用作测定法时具有高至少8％的灵敏度和高至少25％的特异度。
[0400] 在一些实施方案中，通过具有至少约70％至约100％的灵敏度和至少约30％至约100％的特异度的测定法确定GFAP和UCH-L1的参考水平。在一些实施例中，灵敏度为至少约
70％至约100％、至少约70％至至少约99％、至少约70％至至少约95％、至少约70％至至少约90％、至少约70％至至少约85％、至少约75％至约100％、至少约75％至至少约99％、至少约75％至至少约95％、至少约75％至至少约90％、至少约75％至至少约85％、至少约80％至约100％、至少约80％至至少约99％、至少约80％至至少约95％、至少约80％至至少约90％、至少约80％至至少约85％、至少约85％至约100％、至少约85％至至少约99％、至少约85％至至少约95％、至少约85％至至少约90％、至少约90％至约100％、至少约90％至至少约
99％、至少约90％至至少约95％、至少约95％至约100％、或至少约95％至至少约99％。在一些实施例中，灵敏度为至少约70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约
87.5％、至少约90.0％、至少约95.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。
70％至约100％、至少约70％至至少约99％、至少约70％至至少约95％、至少约70％至至少约90％、至少约70％至至少约85％、至少约75％至约100％、至少约75％至至少约99％、至少约75％至至少约95％、至少约75％至至少约90％、至少约75％至至少约85％、至少约80％至约100％、至少约80％至至少约99％、至少约80％至至少约95％、至少约80％至至少约90％、至少约80％至至少约85％、至少约85％至约100％、至少约85％至至少约99％、至少约85％至至少约95％、至少约85％至至少约90％、至少约90％至约100％、至少约90％至至少约
99％、至少约90％至至少约95％、至少约95％至约100％、或至少约95％至至少约99％。在一些实施例中，灵敏度为至少约70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约
87.5％、至少约90.0％、至少约95.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。
[0401] 在一些实施方案中，特异度在至少约30％至约100％之间、在至少约30％至约99％之间、在至少约30％至约95％之间、在至少约30％至约90％之间、在至少约30％至约85％之间、在至少约30％至约80％之间、在至少约30％至约75％之间、在至少约30％至约70％之间、在至少约30％至约60％之间、在至少约30％至约50％之间、在至少约40％至约100％之间、在至少约40％至约99％之间、在至少约40％至约95％之间、在至少约40％至约90％之间、在至少约40％至约85％之间、在至少约40％至约80％之间、在至少约40％至约75％之间、在至少约40％至约70％之间、在至少约40％至约60％之间、在至少约40％至约50％之间、在至少约50％至约100％之间、在至少约50％至约99％之间、在至少约50％至约95％之间、在至少约50％至约90％之间、在至少约50％至约85％之间、在至少约50％至约80％之间、在至少约50％至约75％之间、在至少约50％至约70％之间、在至少约50％至约60％之间、在至少约60％至约100％之间、在至少约60％至约99％之间、在至少约60％至约95％之间、在至少约60％至约90％之间、在至少约60％至约85％之间、在至少约60％至约80％之间、在至少约60％至约75％之间、在至少约60％至约70％之间、在至少约70％至约100％之间、在至少约70％至约99％之间、在至少约70％至约95％之间、在至少约70％至约90％之间、在至少约70％至约85％之间、在至少约70％至约80％之间、在至少约70％至约75％之间、在至少约80％至约100％之间、在至少约80％至约99％之间、在至少约80％至约95％之间、在至少约80％至约90％之间、在至少约80％至约85％之间、在至少约90％至约100％之间、在至少约90％至约99％之间、在至少约90％至约95％之间、在至少约95％至约99％之间、或者在至少约95％至约100％之间。在一些实施方案中，特异度为至少约30.0％、至少约31.0％、至少约32.0％、至少约33.0％、至少约34.0％、至少约35.0％、至少约36.0％、至少约37.0％、至少约38.0％、至少约39.0％、至少约40.0％、至少约45.0％、至少约50.0％、至少约55.0％、至少约60.0％、至少约65.0％、至少约70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约90.0％、至少约91.0％、至少约92.0％、至少约93.0％、至少约
94.0％、至少约95.0％、至少约96.0％、至少约97.0％、至少约98.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。例如，在一些实施方案中，灵敏度为至少约99％并且特异度为至少约75％、灵敏度为至少约99％并且特异度为至少约
99％、或者灵敏度为至少约100％并且特异度为至少约100％。在一些实施方案中，GFAP和UCH-L1的参考水平可以用作具有至少约35％的特异度和至少约90％的灵敏度的测定的一部分。
94.0％、至少约95.0％、至少约96.0％、至少约97.0％、至少约98.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。例如，在一些实施方案中，灵敏度为至少约99％并且特异度为至少约75％、灵敏度为至少约99％并且特异度为至少约
99％、或者灵敏度为至少约100％并且特异度为至少约100％。在一些实施方案中，GFAP和UCH-L1的参考水平可以用作具有至少约35％的特异度和至少约90％的灵敏度的测定的一部分。
[0402] 在一些实施方案中，样品在人类受试者头部损伤或疑似损伤的约48小时内获得，例如在约0至约4小时内、在约0至约8小时内、在约0至约12小时内、在约0至约16小时内、在约0至约20小时内、在约0至约24小时内以及在约0到大约48小时。在一些实施方案中，在约4小时至约8小时内、约8小时至约12小时内、约12小时至约16小时内、约16小时至约20小时内、在约20小时至约24小时内、以及在约24小时至约48小时内，从人类受试者中获取样品。在其他实施方案中，可以在头部损伤或疑似损伤的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约
19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时内，从人类受试者中获取样品。在一些实施方案中，GFAP和UCH-L1的组合的存在的发生出现在头部损伤后的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时。
一方面，样品在损伤后约4小时至约16小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约4至约8小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约8至约12小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约12至约16小时内从受试者获得。
19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时内，从人类受试者中获取样品。在一些实施方案中，GFAP和UCH-L1的组合的存在的发生出现在头部损伤后的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时。
一方面，样品在损伤后约4小时至约16小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约4至约8小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约8至约12小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约12至约16小时内从受试者获得。
[0403] 在一些实施方案中，样品在损伤后(或损伤过后)约4小时至约8小时内从受试者获得，并且GFAP的参考水平为约40pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约100pg/mL，并且测定具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于94％的特异度。
[0404] 在一些实施方案中，样品在损伤后(或损伤过后)约8小时至约12小时内从受试者获得，GFAP的参考水平为约15pg/mL，UCH-L1的参考水平约为150pg/mL，并且测定的灵敏度等于或大于95％，特异度等于或大于82％。
[0405] 在一些实施方案中，样品是在损伤后(或损伤过后)约12小时至约16小时内从受试者获得的，GFAP的参考水平为约20pg/mL，UCH-L1为约60pg/mL，并且测定具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于65％的特异度。
[0406] 在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约15pg/mL至约40pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约70pg/mL至约150pg/mL之间。在其他实施方案中，GFAP的参考水平可以在约20pg/mL至约40pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约80pg/mL至约150pg/mL之间。在其他实施方案中，GFAP的参考水平可以在约25pg/mL至约40pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约90pg/mL至约150pg/mL之间。在其他实施方案中，GFAP的参考水平可以在约30pg/mL至约40pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约100pg/mL至约150pg/mL之间。在其他实施方案中，GFAP的参考水平可以在约15pg/mL至约
30pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约70pg/mL至约140pg/mL之间。在其他实施方案中，GFAP的参考水平可以在至少约15pg/mL至约25pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约70pg/mL至约130pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平为约
40pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约100pg/mL。在其他实施方案中，GFAP的参考水平为约
15pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约150pg/mL。在其他实施方案中，GFAP的参考水平为约
20pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约60pg/mL。
30pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约70pg/mL至约140pg/mL之间。在其他实施方案中，GFAP的参考水平可以在至少约15pg/mL至约25pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约70pg/mL至约130pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平为约
40pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约100pg/mL。在其他实施方案中，GFAP的参考水平为约
15pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约150pg/mL。在其他实施方案中，GFAP的参考水平为约
20pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约60pg/mL。
[0407] 在一些实施方案中，受试者在进行测定之前或之后已经接受了成像程序，例如MRI或CT扫描，或者在某些情况下，两者都接受。在一些实施方案中，基于成像程序怀疑受试者患有脑外伤。在一些实施方案中，UCH-L1和GFAP的参考水平与MRI阳性扫描和/或CT头部阳性扫描(即颅内病变的存在)相关。在一些实施例中，GFAP和UCH-L1的参考水平可用于指示受试者是否需要MRI程序，而与执行CT扫描无关，并且与CT扫描为阴性(即表明未遭受TBI)无关。通常，可以将生物标志物的参考水平，例如UCH-L1或GFAP，及其组合用作基准，以评估在分析测试样品中的GFAP和UCH-L1后获得的结果。例如，在进行这种比较时，可以通过在适当的条件下进行足够多次的特定测定，以获得GFAP和UCH-L1的参考水平，从而可以得到分析物的存在、量或浓度与TBI的特定阶段或终点或者与特定的标记的联系或关联。通常，通过对参考受试者(或受试者群体)样品进行测定获得的GFAP和UCH-L1的参考水平。所测量的GFAP和UCH-L1可以包括其片段、其降解产物和/或其酶促裂解产物。
[0408] 在其他实施方案中，该方法可基于与参考水平相比的GFAP和UCH-L1水平，辅助诊断受试者可能已遭受TBI的类型(例如，中度至重度TBI)。根据这些实施方案，该方法可以包括以下步骤：对在疑似头部损伤后约48小时内从受试者获得的样品进行测定，以测量或检测样品中的GFAP水平和UCH-L1水平的组合；并且(a)当在所述样品中的GFAP的水平小于约105pg/mL的GFAP的参考水平且在所述样品中的UCH-L1的水平小于约110pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者未遭受中度、重度或中度至重度TBI；或(b)当在所述样品中的GFAP水平等于约105pg/mL至约890pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中的UCH-L1的水平等于约110pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者未遭受中度、重度或中度至重度TBI；或(c)当样品中的GFAP水平大于约890pg/mL的GFAP的参考水平且在所述样品中的UCH-L1的水平大于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者更有可能遭受中度、重度或中度至重度TBI。
[0409] 在一些实施方案中，该方法可以包括在受试者疑似损伤的约48小时内获得样品，并且使该样品与UCH-L1和/或GFAP的抗体接触，以允许形成抗体和UCH-L1和/或GFAP的复合物。该方法还包括检测所得的抗体GFAP/UCH-L1复合物。根据这些方法，可以在进行该方法之前或之后测量或检测GFAP和UCH-L1水平，然后将其与一个或多个临床参数(例如，GCS评分和/或CT扫描)相关联，以便建立可用于确定受试者是否患有TBI的GFAP和UCH-L1的参考水平。例如在一些实施例中，对象可以在进行该方法之前或之后已经接受到格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分。如果GCS评分小于或等于12，则该受试者可能会疑似患有中度至重度TBI。
[0410] GFAP和UCH-L1的参考水平可以用作具有至少约30％特异度和至少约90％灵敏度的测定的一部分，如下文进一步描述。
[0411] 在一些实施方案中，在头部损伤或疑似损伤的约48小时内，例如在约0至约4小时内、在约0至约8小时内、在约0至约12小时内、在约0至约16小时内、在约0至约20小时内、在约0至约24小时内、以及在约0至约48小时内，从所述人类受试者中获得样品。在一些实施方案中，在约4小时至约8小时内、约8小时至约12小时内、约12小时至约16小时内、约16小时至约20小时内、约20小时至约24小时内、以及24小时至约48小时内，从所述人类受试者中获得样品。在其他实施方案中，可以在头部损伤或疑似损伤的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、或约24小时内从所述人类受试者采集所述样品。在一些实施方案中，GFAP和UCH-L1的组合的存在的开始出现在头部损伤的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、或约24小时内。一方面，样品在实际或疑似损伤后约8小时至约16小时内从受试者获得。在另一方面，样品在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时内从受试者获得。在另一方面，样品在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时内从受试者获得。
[0412] 在一些实施方案中，在进行测定之前或之后，受试者已接受了成像程序，例如MRI或CT扫描。在一些实施方案中，基于成像程序，受试者疑似患有创伤性脑损伤。在一些实施方案中，UCH-L1和GFAP的参考水平与阳性MRI扫描和/或阳性头部CT扫描(即存在颅内病变)相关联。在一些实施例中，GFAP和UCH-L1的参考水平可以用来指示受试者是否需要进行MRI程序，而与执行CT扫描无关，并且与CT扫描为阴性(即表明未遭受TBI)无关。
[0413] 通常，生物标记物(例如UCH-1或GFAP及其组合)的参考水平可用作基准，用以评估在分析测试样品中GFAP和UCH-L1后获得的结果。例如，在进行这种比较时，可以通过在适当的条件下进行足够多次的特定测定，以获得GFAP和UCH-L1的参考水平，从而可以得到分析物的存在、量或浓度与TBI的特定阶段或终点或者与特定的标记的联系或关联。通常，通过对参考受试者(或受试者群体)样品进行测定获得的GFAP和UCH-L1的参考水平。所测量的GFAP和UCH-L1可以包括其片段、其降解产物和/或其酶促裂解产物。
[0414] 在一些实施方案中，GFAP和UCH-L1的参考水平通过具有至少约70％至约100％之间的灵敏度和至少约30％至约100％之间的特异度的测定法来确定。在一些实施例中，灵敏度在至少约70％至约100％之间、在至少约70％至约99％之间、在至少约70％至约95％之间、在至少约70％至约90％之间、在至少约70％至约85％之间、在至少约75％至约100％之间、在至少约75％至约99％之间、在至少约75％至约95％之间、在至少约75％至约90％之间、在至少约75％至约85％之间、在至少约80％至约100％之间、在至少约80％至约99％之间、在至少约80％至约95％之间、在至少约80％至约90％之间、在至少约80％至约85％之间、在至少约85％至约100％之间、在至少约85％至约99％之间、在至少约85％至约95％之间、在至少约85％至约90％之间、在至少约90％至约100％之间、在至少约90％至约99％之间、在至少约90％至约95％之间、在至少约95％至约100％之间、或在至少约95％至约99％之间。在一些实施方案中，灵敏度为至少约70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约87.5％、至少约90.0％、至少约95.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。
[0415] 在一些实施方式中，特异度在至少约30％至约100％之间、在至少约30％至约99％之间、在至少约30％至约95％之间、在至少约30％至约90％之间、在至少约30％至约85％之间、在至少约30％至约80％之间、在至少约30％至约75％之间、在至少约30％至约70％之间、在至少约30％至约60％之间、在至少约30％至约50％之间、在至少约40％至约100％之间、在至少约40％至约99％之间、在至少约40％至约95％之间、在至少约40％至约90％之间、在至少约40％至约85％之间、在至少约40％至约80％之间、在至少约40％至约75％之间、在至少约40％至约70％之间、在至少约40％至约60％之间、在至少约40％至约50％之间、在至少约50％至约100％之间、在至少约50％至约99％之间、在至少约50％至约95％之间、在至少约50％至约90％之间、在至少约50％至约85％之间、在至少约50％至约80％之间、在至少约50％至约75％之间、在至少约50％至约70％之间、在至少约50％至约60％之间、在至少约60％至约100％之间、在至少约60％至约99％之间、在至少约60％至约95％之间、在至少约60％至约90％之间、在至少约60％至约85％之间、在至少约60％至约80％之间、在至少约60％至约75％之间、在至少约60％至约70％之间、在至少约70％至约100％之间、在至少约70％至约99％之间、在至少约70％至约95％之间、在至少约70％至约90％之间、在至少约70％至约85％之间、在至少约70％至约80％之间、在至少约70％至约75％之间、在至少约80％至约100％之间、在至少约80％至约99％之间、在至少约80％至约95％之间、在至少约80％至约90％之间、在至少约80％至约85％之间、在至少约90％至约100％之间、在至少约90％至约99％之间、在至少约90％至约95％之间、在至少约95％至约99％之间、或在至少约95％至约100％。在一些实施方式中，特异度为至少约30.0％、至少约31.0％、至少约32.0％、至少约33.0％、至少约34.0％、至少约35.0％、至少约36.0％、至少约37.0％、至少约38.0％、至少约39.0％、至少约40.0％、至少约45.0％、至少约50.0％、至少约55.0％、至少约60.0％、至少约65.0％、至少约70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约90.0％、至少约91.0％、至少约92.0％、至少约93.0％、至少约
94.0％、至少约95.0％、至少约96.0％、至少约97.0％、至少约98.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。例如，在一些实施方式中，灵敏度为至少约99％并且特异度为至少约75％、灵敏度为至少约99％并且特异度为至少约
99％、或者灵敏度为至少约100％并且特异度为至少约100％。作为另一示例，在一些实施例中，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平通过具有等于或大于约79％的灵敏度和等于或大于约33％的特异度的测定来确定。另外，在其他实施方案中，与单独测量或检测GFAP或UCH-L1的方法或测定法相比，该方法用作测定法时具有高至少3％的灵敏度和高至少17％的特异度。在其他实施方案中，与单独测量或检测GFAP或UCH-L1的方法或测定法相比，该方法用作测定法时具有高至少5％的灵敏度和高至少20％的特异度。在其他实施方案中，与单独测量或检测GFAP或UCH-L1的方法或测定法相比，该方法用作测定法时具有高至少8％的灵敏度和高至少25％的特异度。
94.0％、至少约95.0％、至少约96.0％、至少约97.0％、至少约98.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。例如，在一些实施方式中，灵敏度为至少约99％并且特异度为至少约75％、灵敏度为至少约99％并且特异度为至少约
99％、或者灵敏度为至少约100％并且特异度为至少约100％。作为另一示例，在一些实施例中，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平通过具有等于或大于约79％的灵敏度和等于或大于约33％的特异度的测定来确定。另外，在其他实施方案中，与单独测量或检测GFAP或UCH-L1的方法或测定法相比，该方法用作测定法时具有高至少3％的灵敏度和高至少17％的特异度。在其他实施方案中，与单独测量或检测GFAP或UCH-L1的方法或测定法相比，该方法用作测定法时具有高至少5％的灵敏度和高至少20％的特异度。在其他实施方案中，与单独测量或检测GFAP或UCH-L1的方法或测定法相比，该方法用作测定法时具有高至少8％的灵敏度和高至少25％的特异度。
[0416] 在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约50pg/mL至约2000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约100pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平或UCH-L1的参考水平可以在至少约10pg/mL至约500pg/mL之间、至少约10pg/mL至约400pg/mL之间、至少约10pg/mL至约300pg/mL之间、至少约10pg/mL至约200pg/mL之间、至少约10pg/mL至约100pg/mL之间、至少约10pg/mL至约50pg/mL之间、至少约10pg/mL至约40pg/mL之间、至少约10pg/mL至约30pg/mL之间、至少约20pg/mL至约500pg/mL之间、至少约
20pg/mL至约400pg/mL之间、至少约20pg/mL至约300pg/mL之间、至少约20pg/mL至约200pg/mL之间、至少约20pg/mL至约100pg/mL之间、至少约20pg/mL至约50pg/mL之间、至少约20pg/mL至约40pg/mL之间、至少约20pg/mL至约30pg/mL之间、至少约30pg/mL至约500pg/mL之间、至少约30pg/mL至约400pg/mL之间、在至少约30pg/mL至约300pg/mL之间、在至少约30pg/mL至约200pg/mL之间、至少约30pg/mL至约100pg/mL之间、至少约30pg/mL至约50pg/mL之间、至少约30pg/mL至约40pg/mL之间、至少约40pg/mL至约500pg/mL之间、至少约40pg/mL至约
400pg/mL之间、至少约40pg/mL至约300pg/mL之间、至少约40pg/mL至约200pg/mL之间、至少约40pg/mL至约100pg/mL之间、至少约40pg/mL至约50pg/mL之间、至少约50pg/mL至约
500pg/mL之间、至少约50pg/mL至约400pg/mL之间、至少约50pg/mL至约300pg/mL之间、至少约50pg/mL至约200pg/mL之间、至少约50pg/mL至约100pg/mL之间、至少约75pg/mL至约
500pg/mL之间、至少约75pg/mL至约400pg/mL之间、至少约75pg/mL至约300pg/mL之间、至少约75pg/mL至约200pg/mL之间、至少约75pg/mL至约100pg/mL之间、至少约100pg/mL至约
500pg/mL之间、至少约100pg/mL至约400pg/mL之间、至少约100pg/mL至约300pg/mL之间、至少约100pg/mL至约200pg/mL之间、至少约150pg/mL至约500pg/mL之间、至少约150pg/mL至约400pg/mL之间、至少约150pg/mL至约300pg/mL之间、至少约150pg/mL至约200pg/mL之间、至少约200pg/mL至约500pg/mL之间、至少约200pg/mL至约400pg/mL之间、或至少约200pg/mL至约300pg/mL之间。例如，UCH-L1的参考水平可在至少约80pg/mL至约150pg/mL和GFAP的参考水平之间可以在至少约20pg/mL至约200pg/mL之间。作为另一示例，在其他实施方式中，GFAP的参考水平为约105pg/mL至约890pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约110pg/mL至约
2000pg/mL。在一些实施方案中，GFAP的参考水平为约105pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约
110pg/mL。在一些实施方案中，GFAP的参考水平为约890pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约
920ng/ml。在其他实施方案中，GFAP的参考水平为约505pg/mL，UCH-L1的参考水平为约
1580pg/mL。
20pg/mL至约400pg/mL之间、至少约20pg/mL至约300pg/mL之间、至少约20pg/mL至约200pg/mL之间、至少约20pg/mL至约100pg/mL之间、至少约20pg/mL至约50pg/mL之间、至少约20pg/mL至约40pg/mL之间、至少约20pg/mL至约30pg/mL之间、至少约30pg/mL至约500pg/mL之间、至少约30pg/mL至约400pg/mL之间、在至少约30pg/mL至约300pg/mL之间、在至少约30pg/mL至约200pg/mL之间、至少约30pg/mL至约100pg/mL之间、至少约30pg/mL至约50pg/mL之间、至少约30pg/mL至约40pg/mL之间、至少约40pg/mL至约500pg/mL之间、至少约40pg/mL至约
400pg/mL之间、至少约40pg/mL至约300pg/mL之间、至少约40pg/mL至约200pg/mL之间、至少约40pg/mL至约100pg/mL之间、至少约40pg/mL至约50pg/mL之间、至少约50pg/mL至约
500pg/mL之间、至少约50pg/mL至约400pg/mL之间、至少约50pg/mL至约300pg/mL之间、至少约50pg/mL至约200pg/mL之间、至少约50pg/mL至约100pg/mL之间、至少约75pg/mL至约
500pg/mL之间、至少约75pg/mL至约400pg/mL之间、至少约75pg/mL至约300pg/mL之间、至少约75pg/mL至约200pg/mL之间、至少约75pg/mL至约100pg/mL之间、至少约100pg/mL至约
500pg/mL之间、至少约100pg/mL至约400pg/mL之间、至少约100pg/mL至约300pg/mL之间、至少约100pg/mL至约200pg/mL之间、至少约150pg/mL至约500pg/mL之间、至少约150pg/mL至约400pg/mL之间、至少约150pg/mL至约300pg/mL之间、至少约150pg/mL至约200pg/mL之间、至少约200pg/mL至约500pg/mL之间、至少约200pg/mL至约400pg/mL之间、或至少约200pg/mL至约300pg/mL之间。例如，UCH-L1的参考水平可在至少约80pg/mL至约150pg/mL和GFAP的参考水平之间可以在至少约20pg/mL至约200pg/mL之间。作为另一示例，在其他实施方式中，GFAP的参考水平为约105pg/mL至约890pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约110pg/mL至约
2000pg/mL。在一些实施方案中，GFAP的参考水平为约105pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约
110pg/mL。在一些实施方案中，GFAP的参考水平为约890pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约
920ng/ml。在其他实施方案中，GFAP的参考水平为约505pg/mL，UCH-L1的参考水平为约
1580pg/mL。
[0417] 在一些实施方案中，样品在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时内从受试者获得，并且GFAP的参考水平为约890pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约920pg/mL，并且该方法具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于79％的特异度。在另一个实施方案中，样品在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时内从受试者获得，并且GFAP的参考水平为约505pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约1580pg/mL，并且该方法具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于66％的特异度。
[0418] 在一些实施例中，该方法还包括用创伤性脑损伤疗法来治疗人类受试者和/或监测人类受试者，如下所述。
[0419] 本文所述方法中采用的测定法的性质并不关键，并且测试可以是本领域中已知的任何测定法，诸如免疫测定法、蛋白质免疫沉淀法、免疫电泳法、化学分析法、SDS-PAGE和免疫印迹分析、或蛋白质免疫染色法、电泳分析法、蛋白质测定法、竞争性结合测定法、功能性蛋白质测定法、或色谱或光谱法，诸如高效液相色谱法(HPLC)或液体色谱-质谱法(LC/MS)。但是，将采用能够执行所要求保护的方法的测试或测定法，诸如具有如本文所述的各种敏感性和敏感性的测定法。另外，用于本文所述方法中的测定法可以以临床化学形式采用，诸如将由本领域普通技术人员已知的。此类测定法在本文的第5-9章节中进一步详细描述。本领域已知，在采用特定样品类型的测定法中使用的值(例如参考水平、截止值、阈值、特异性、敏感性、校准物和/或对照的浓度等)(例如，诸如利用血清的免疫测定法或采用全血的即时(Point-of-care)装置)可以使用本领域已知的技术外推至其它测定形式，诸如测定标准化。例如，可以进行测定标准化的一种方式是通过将一个因子应用于测定法中采用的校准物，以使样品浓度读数更高或更低，以获得与比较器方法一致的斜率。将一种测定法上获得的结果标准化至另一种测定法的其它方法是众所周知的并且已在文献中描述(参见例如David Wild,Immunoassay Handbook,第4版,第3.5章,第315-322页，其内容通过引用并入本文)。
[0420] 3.辅助确定对已遭受头部损伤的人类受试者是否进行成像的方法
[0421] 除了其它方法，本公开涉及一种辅助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者进行成像程序(例如MRI或CT)扫描的方法。如本文所用，“确定是否对人类受试者进行成像程序(例如MRI或CT)”是指以下事实：可以与其它信息(例如临床评估数据)一起使用所述方法来确定受试者更可能患有具有阳性MRI扫描或阳性头部CT扫描(即，存在颅内病变)。
[0422] 在一些实施例中，该方法可基于相比于参考水平的GFAP、UCH-L1或GFAP和UCH-L1的水平，辅助确定遭受TBI的受试者是否需要计算机断层(CT)扫描。根据这些实施方案，该方法可以包括以下步骤：对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中GFAP的水平和UCH-L1的水平的组合；以及a)当样品中的GFAP水平小于约50pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平小于约90pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者不需要进行CT扫描；或者(b)当样品中的GFAP水平等于约50pg/mL到约975pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平等于约90pg/mL至约
2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者不需要进行CT扫描；或者(c)当样品中的GFAP水平大于约975pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平大于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者更有可能需要进行CT扫描。
2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者不需要进行CT扫描；或者(c)当样品中的GFAP水平大于约975pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平大于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者更有可能需要进行CT扫描。
[0423] 在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约50pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约90pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约100pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约100pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约200pg/mL与约
975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约200pg/mL与约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约300pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约300pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约400pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约400pg/mL至约
2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约500pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约500pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约110pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约90pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约240pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约300pg/mL至约2000pg/mL之间。
在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约190pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约90pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平为至少110pg/mL并且UCH-L1的参考水平为至少2000pg/mL。在一些实施方案中，GFAP的参考水平为至少240pg/mLUCH-L1的参考水平为至少300pg/mL。在一些实施方案中，GFAP的参考水平为至少190pg/mLUCH-L1的参考水平为至少90pg/mL。
975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约200pg/mL与约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约300pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约300pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约400pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约400pg/mL至约
2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约500pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约500pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约110pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约90pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约240pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约300pg/mL至约2000pg/mL之间。
在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约190pg/mL至约975pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约90pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平为至少110pg/mL并且UCH-L1的参考水平为至少2000pg/mL。在一些实施方案中，GFAP的参考水平为至少240pg/mLUCH-L1的参考水平为至少300pg/mL。在一些实施方案中，GFAP的参考水平为至少190pg/mLUCH-L1的参考水平为至少90pg/mL。
[0424] 在一些实施方案中，在人类受试者的头部损伤或疑似损伤的约48小时内获得样品，例如在约0至约4小时内、在约0至约8小时内、在约0至约12小时内、在约0至约16小时内、在约0至约20小时内、在约0至约24小时内、以及在约0至约48小时内。在一些实施方案中，在约4小时至约8小时内、约8小时至约12小时内、约12小时至约16小时内、约16小时至约20小时内、在约20小时至约24小时内、以及在约24小时至约48小时内，从人类受试者中获取样品。在其他实施方案中，可以在头部损伤或疑似损伤的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时内，从人类受试者中获取样品。在一些实施方案中，GFAP和UCH-L1的组合的存在的发生出现在头部损伤后的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时。
一方面，样品在损伤后约4小时至约16小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约4至约8小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约8至约12小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约12至约16小时内从受试者获得。
一方面，样品在损伤后约4小时至约16小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约4至约8小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约8至约12小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约12至约16小时内从受试者获得。
[0425] 在一些实施方案中，如本文进一步讨论的，通过具有等于或大于约54％的灵敏度和等于或大于约32％的特异度的方法确定GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平。
[0426] 在一些实施方案中，GFAP和UCH-L1的参考水平通过具有至少约50％至约100％之间的灵敏度和至少约30％至约100％之间的特异度的测定来确定。在一些实施例中，灵敏度在至少约50％至约100％之间、在至少约50％至至少约99％之间、在至少约50％至至少约95％之间、在至少约50％至至少约90％之间、在至少约50％至至少约85％之间、在至少约
55％至约100％之间、在至少约55％至至少约99％之间、在至少约55％至至少约95％之间、在至少约55％至至少约90％之间、在至少约55％至至少约85％之间、在至少约60％至约
100％之间、在至少约60％至至少约99％之间、在至少约60％至至少约95％之间、在至少约
60％至至少约90％之间、在至少约60％至至少约85％之间、在至少约70％至约100％之间、在至少约70％至至少约99％之间、在至少约70％至至少约95％之间、在至少约70％至至少约90％之间、在至少约70％至至少约85％,在至少约80％至约100％之间、在至少约80％至至少约99％之间、在至少约80％至至少约95％之间、在至少约80％至至少约90％之间、在至少约80％至至少约85％之间、在至少约85％至约100％之间、在至少约85％至至少约99％之间、在至少约85％至至少约95％之间、在至少约85％至至少约90％之间、在至少约90％至约
100％之间、在至少约90％至至少约99％之间、在至少约90％至至少约95％之间、在至少约
95％至约100％、或在至少约95％至至少约99％。在一些实施方案中，灵敏度为至少50％、至少51％、至少52％、至少53％、至少54％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约
70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约87.5％、至少约90.0％、至少约95.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约
100.0％。在一些实施方案中，测定的灵敏度等于或大于54％。
55％至约100％之间、在至少约55％至至少约99％之间、在至少约55％至至少约95％之间、在至少约55％至至少约90％之间、在至少约55％至至少约85％之间、在至少约60％至约
100％之间、在至少约60％至至少约99％之间、在至少约60％至至少约95％之间、在至少约
60％至至少约90％之间、在至少约60％至至少约85％之间、在至少约70％至约100％之间、在至少约70％至至少约99％之间、在至少约70％至至少约95％之间、在至少约70％至至少约90％之间、在至少约70％至至少约85％,在至少约80％至约100％之间、在至少约80％至至少约99％之间、在至少约80％至至少约95％之间、在至少约80％至至少约90％之间、在至少约80％至至少约85％之间、在至少约85％至约100％之间、在至少约85％至至少约99％之间、在至少约85％至至少约95％之间、在至少约85％至至少约90％之间、在至少约90％至约
100％之间、在至少约90％至至少约99％之间、在至少约90％至至少约95％之间、在至少约
95％至约100％、或在至少约95％至至少约99％。在一些实施方案中，灵敏度为至少50％、至少51％、至少52％、至少53％、至少54％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约
70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约87.5％、至少约90.0％、至少约95.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约
100.0％。在一些实施方案中，测定的灵敏度等于或大于54％。
[0427] 在一些实施方案中，特异度在至少约30％至约100％之间、在至少约30％至约99％之间、在至少约30％至约95％之间、在至少约30％至约90％之间、在至少约30％至约85％之间、在至少约30％至约80％之间、在至少约30％至约75％之间、在至少约30％至约70％之间、在至少约30％至约60％之间、在至少约30％至约50％之间、在至少约40％至约100％之间、在至少约40％至约99％之间、在至少约40％至约95％之间、在至少约40％至约90％之间、在至少约40％至约85％之间、在至少约40％至约80％之间、在至少约40％至约75％之间、在至少约40％至约70％之间、在至少约40％至约60％之间、在至少约40％至约50％之间、在至少约50％至约100％之间、在至少约50％至约99％之间、在至少约50％至约95％之间、在至少约50％至约90％之间、在至少约50％至约85％之间、在至少约50％至约80％之间、在至少约50％至约75％之间、在至少约50％至约70％之间、在至少约50％至约60％之间、在至少约60％至约100％之间、在至少约60％至约99％之间、在至少约60％至约95％之间、在至少约60％至约90％之间、在至少约60％至约85％之间、在至少约60％至约80％之间、在至少约60％至约75％之间、在至少约60％至约70％之间、在至少约70％至约100％之间、在至少约70％至约99％之间、在至少约70％至约95％之间、在至少约70％至约90％之间、在至少约70％至约85％之间、在至少约70％至约80％之间、在至少约70％至约75％之间、在至少约80％至约100％之间、在至少约80％至约99％之间、在至少约80％至约95％之间、在至少约80％至约90％之间、在至少约80％至约85％之间、在至少约90％至约100％之间、在至少约90％至约99％之间、在至少约90％至约95％之间、在至少约95％至约99％、或在至少约95％至约100％。在一些实施方案中，特异度为至少约30.0％、至少约31.0％、至少约32.0％、至少约33.0％、至少约34.0％、至少约35.0％、至少约36.0％、至少约37.0％、至少约38.0％、至少约39.0％、至少约40.0％、至少约45.0％、至少约50.0％、至少约55.0％、至少约60.0％、至少约65.0％、至少约70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约90.0％、至少约91.0％、至少约92.0％、至少约93.0％、至少约94.0％、至少约95.0％、至少约96.0％、至少约97.0％、至少约98.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。例如，在一些实施方案中，灵敏度为至少约99％并且特异度为至少约75％，灵敏度为至少约99％并且特异度为至少约99％，或灵敏度为至少约100％并且特异度为至少约100％。
[0428] 在其他实施方案中，样品是在所述实际或疑似损伤后的约4小时至约8小时从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约110pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约2000pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于62％的特异度；
在另一其他实施方案中，样品是在所述实际或疑似损伤后的约8小时至约12小时从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约240pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约
300pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于91.5％的灵敏度和等于或大于52％的特异度。在另外的实施方案中，样品是在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约190pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约
90pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于99％的灵敏度和等于或大于36％的特异度。
在另一其他实施方案中，样品是在所述实际或疑似损伤后的约8小时至约12小时从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约240pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约
300pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于91.5％的灵敏度和等于或大于52％的特异度。在另外的实施方案中，样品是在所述实际或疑似损伤后的约12小时至约16小时从所述受试者获得的；其中所述GFAP的参考水平为约190pg/mL并且所述UCH-L1的参考水平为约
90pg/mL；并且其中所述测定具有等于或大于99％的灵敏度和等于或大于36％的特异度。
[0429] 在其他实施方案中，该方法可以基于与参考水平比较的GFAP和UCH-L1的水平辅助确定遭受TBI的受试者是否需要MRI程序。根据这些实施方案，该方法可以包括以下步骤：对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；以及(a)当在所述样品中的GFAP水平低于约15pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平低于约50pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者不需要MRI程序；或(b)当在所述样品中的GFAP水平等于约15pg/mL至约1000pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平等于约50pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者有可能需要MRI程序；或(c)当在所述样品中的GFAP水平大于约1000pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平大于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定受试者有可能需要MRI程序。
[0430] 在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约10pg/mL至约1000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约40pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约15pg/mL至约1000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约50pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约25pg/mL至约
1000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约75pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约50pg/mL至约1000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约100pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约75pg/mL至约1000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约150pg/mL至约
2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约100pg/mL至约1000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约200pg/mL至约2000pg/mL。
1000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约75pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约50pg/mL至约1000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约100pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约75pg/mL至约1000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约150pg/mL至约
2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约100pg/mL至约1000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约200pg/mL至约2000pg/mL。
[0431] 在一些实施方案中，在头部损伤或疑似损伤的约48小时内，例如在约0至约4小时内、在约0至约8小时内、在约0至约12小时内、在约0至约16小时内、在约0至约20小时内、在约0至约24小时内、以及在约0至约48小时内，从所述人类受试者中获得样品。在一些实施方案中，在约4小时至约8小时内、约8小时至约12小时内、约12小时至约16小时内、约16小时至约20小时内、约20小时至约24小时内、以及24小时至约48小时内，从所述人类受试者中获得样品。在其他实施方案中，可以在头部损伤或疑似损伤的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、或约24小时内从所述人类受试者采集所述样品。在一些实施方案中，GFAP和UCH-L1的组合的存在的开始出现在头部损伤的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、或约24小时内。一方面，样品在实际或疑似损伤后约8小时至约16小时内从受试者获得。在另一方面，样品在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时内从受试者获得。在另一方面，样品在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时内从受试者获得。
[0432] 在某些实施方案中，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平通过灵敏度为80％至98％、特异度为30％至85％的方法确定，如以下更详细讨论。
[0433] 在一些实施方案中，通过具有至少约70％至约100％之间的灵敏度和至少约30％至约100％之间的特异度的测定法确定GFAP和UCH-L1的参考水平。
[0434] 在一些实施方式中，灵敏度在至少约70％至约100％之间、在至少约70％至至少约99％之间、在至少约70％至至少约95％之间、在至少约70％至至少约90％之间、在至少约
70％至至少约85％之间、在至少约75％至约100％之间、在至少约75％至至少约99％之间、在至少约75％至至少约95％之间、在至少约75％至至少约90％之间、在至少约75％至至少约85％之间、在至少约80％至约100％之间、在至少约80％至至少约99％之间、在至少约
80％至至少约95％之间、在至少约80％至至少约90％之间、在至少约80％至至少约85％之间、在至少约85％至约100％之间、在至少约85％至至少约99％之间、在至少约85％至至少约95％之间、在至少约85％至至少约90％之间、在至少约90％至约100％之间、在至少约
90％至至少约99％之间、在至少约90％至至少约95％之间、在至少约95％至约100％、或在至少约95％至至少约99％。在一些实施方式中，灵敏度为至少约70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约87.5％、至少约90.0％、至少约95.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约
99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。
70％至至少约85％之间、在至少约75％至约100％之间、在至少约75％至至少约99％之间、在至少约75％至至少约95％之间、在至少约75％至至少约90％之间、在至少约75％至至少约85％之间、在至少约80％至约100％之间、在至少约80％至至少约99％之间、在至少约
80％至至少约95％之间、在至少约80％至至少约90％之间、在至少约80％至至少约85％之间、在至少约85％至约100％之间、在至少约85％至至少约99％之间、在至少约85％至至少约95％之间、在至少约85％至至少约90％之间、在至少约90％至约100％之间、在至少约
90％至至少约99％之间、在至少约90％至至少约95％之间、在至少约95％至约100％、或在至少约95％至至少约99％。在一些实施方式中，灵敏度为至少约70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约87.5％、至少约90.0％、至少约95.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约
99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。
[0435] 在一些实施方式中，特异度在至少约30％至约100％之间、在至少约30％至约99％之间、在至少约30％至约95％之间、在至少约30％至约90％之间、在至少约30％至约85％之间、在至少约30％至约80％之间、在至少约30％至约75％之间、在至少约30％至约70％之间、在至少约30％至约60％之间、在至少约30％至约50％之间、在至少约40％至约100％之间、在至少约40％至约99％之间、在至少约40％至约95％之间、在至少约40％至约90％之间、在至少约40％至约85％之间、在至少约40％至约80％之间、在至少约40％至约75％之间、在至少约40％至约70％之间、在至少约40％至约60％之间、在至少约40％至约50％之间、在至少约50％至约100％之间、在至少约50％至约99％之间、在至少约50％至约95％之间、在至少约50％至约90％之间、在至少约50％至约85％之间、在至少约50％至约80％之间、在至少约50％至约75％之间、在至少约50％至约70％之间、在至少约50％至约60％之间、在至少约60％至约100％之间、在至少约60％至约99％之间、在至少约60％至约95％之间、在至少约60％至约90％之间、在至少约60％至约85％之间、在至少约60％至约80％之间、在至少约60％至约75％之间、在至少约60％至约70％之间、在至少约70％至约100％之间、在至少约70％至约99％之间、在至少约70％至约95％之间、在至少约70％至约90％之间、在至少约70％至约85％之间、在至少约70％至约80％之间、在至少约70％至约75％之间、在至少约80％至约100％之间、在至少约80％至约99％之间、在至少约80％至约95％之间、在至少约80％至约90％之间、在至少约80％至约85％之间、在至少约90％至约100％之间、在至少约90％至约99％之间、在至少约90％至约95％之间、在至少约95％至约99％、或在至少约95％至约100％之间。在一些实施方式中，特异度为至少约30.0％、至少约31.0％、至少约32.0％、至少约33.0％、至少约34.0％、至少约35.0％、至少约36.0％、至少约37.0％、至少约38.0％、至少约39.0％、至少约40.0％、至少约45.0％、至少约50.0％、至少约55.0％、至少约60.0％、至少约65.0％、至少约70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约90.0％、至少约91.0％、至少约92.0％、至少约93.0％、至少约94.0％、至少约95.0％、至少约96.0％、至少约97.0％、至少约98.0％、至少约99.0％、至少约
99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。在一些实施方式中，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平通过具有约80％至约98％的灵敏度和约30％至约85％的特异度的方法来确定。
99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。在一些实施方式中，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平通过具有约80％至约98％的灵敏度和约30％至约85％的特异度的方法来确定。
[0436] 在一些实施方案中，样品是在损伤后约24小时至约48小时内从受试者获得的，并且GFAP的参考水平为约35pg/mL，该测定法的灵敏度等于或大于94％，并且特异度等于或大于30％。在其他实施方案中，样品是在损伤后约24小时至约48小时内从受试者获得的，并且GFAP的参考水平为约143pg/mL，该测定法的灵敏度等于或大于88％，并且特异度等于或大于50％。样品是在损伤后约24小时至约48小时内从受试者获得的，GFAP的参考水平为约602pg/mL，该测定法的灵敏度等于或大于57％，特异度等于或大于超过95％。
[0437] 在一些实施方案中，该方法是在进行测定之前或之后已经接受了CT扫描的受试者上进行的，并且在某些情况下，CT扫描表明未发生TBI(即，正常的CT扫描)。在这种情况下，例如，如果受试者的GFAP和UCH-L1水平表明需要进行MRI程序，则该方法可以包括确定应执行MRI程序以诊断和评估受试者，和/或确定受试者所遭遇的TBI类型而与CT扫描结果无关。在一些实施方案中，在进行测定之前或之后，受试者未接受CT扫描。在这种情况下，例如，如果受试者的GFAP和UCH-L1水平表明需要进行MRI程序，则该方法可以包括确定应执行MRI程序以诊断和评估受试者，和/或确定受试者所遭遇的TBI的类型而与不存在阴性CT扫描无关。在一些实施方式中，GFAP和UCH-L1的参考水平与MRI阳性扫描或头部CT阳性扫描(即颅内病变的存在)相关联。
[0438] 在另一个实施例中，该方法可以基于与参考水平相比的GFAP或UCH-L1水平辅助确定已遭受TBI的受试者是否需要MRI程序。根据这些实施方案，该方法可以包括以下步骤：对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量在所述样品中GFAP的水平和UCH-L1的水平的组合；以及(a)当在所述样品中的GFAP水平等于约0pg/mL至约68pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平等于约0pg/mL至约99pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定所述受试者不需要MRI程序；或(b)当在所述样品中的GFAP水平大于约68pg/mL的GFAP的参考水平并且在所述样品中UCH-L1的水平大于约99pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定受试者有可能需要MRI程序。
[0439] 在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约1pg/mL至约68pg/mL之间，或者UCH-L1的参考水平可以在至少约1pg/mL至约99pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约5pg/mL至约68pg/mL之间，或者UCH-L1的参考水平可以在至少约5pg/mL至约99pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约5pg/mL至约65pg/mL之间，或者UCH-L1的参考水平可以在至少约5pg/mL至约95pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约5pg/mL至约60pg/mL之间，或者UCH-L1的参考水平可以在至少约5pg/mL至约90pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约5pg/mL至约55pg/mL之间，或者UCH-L1的参考水平可以在至少约5pg/mL至约85pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约5pg/mL和约50pg/mL之间，或者UCH-L1的参考水平可以在至少约5pg/mL至约80pg/mL之间。
[0440] 在一些实施方案中，样品在人类受试者头部损伤或疑似损伤的约48小时内获得，例如在约0至约4小时内、在约0至约8小时内、在约0至约12小时内、在约0至约16小时内、在约0至约20小时内、在约0至约24小时内以及在约0到大约48小时。在一些实施方案中，在约4小时至约8小时内、约8小时至约12小时内、约12小时至约16小时内、约16小时至约20小时内、在约20小时至约24小时内、以及在约24小时至约48小时内，从人类受试者中获取样品。在其他实施方案中，可以在头部损伤或疑似损伤的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约
19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时内，从人类受试者中获取样品。在一些实施方案中，GFAP和UCH-L1的组合的存在的发生出现在头部损伤后的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时。
一方面，样品在损伤后约4小时至约16小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约4至约8小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约8至约12小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约12至约16小时内从受试者获得。
19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时内，从人类受试者中获取样品。在一些实施方案中，GFAP和UCH-L1的组合的存在的发生出现在头部损伤后的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时。
一方面，样品在损伤后约4小时至约16小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约4至约8小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约8至约12小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约12至约16小时内从受试者获得。
[0441] 在一些实施方案中，GFAP的参考水平通过具有约90％至约95％的灵敏度和约31％至约46％的特异度的方法来确定，如下表更详细地示出的。
[0442]
[0443] 在一些实施方案中，GFAP的参考水平通过具有约81％至约84％的灵敏度和约31％至约34％的特异度的方法来确定，如下表更详细地示出的：
[0444]
[0445] 在一些实施方案中，该方法是在进行测定之前或之后已经接受了CT扫描的受试者上进行的，并且在某些情况下，CT扫描表明未发生TBI(即，正常的CT扫描)。在这种情况下，例如，如果受试者的GFAP和UCH-L1水平表明需要进行MRI程序，则该方法可以包括确定应执行MRI程序以诊断和评估受试者，和/或确定受试者所遭遇的TBI类型而与CT扫描结果无关。在一些实施方案中，在进行测定之前或之后，受试者未接受CT扫描。在这种情况下，例如，如果受试者的GFAP和UCH-L1水平表明需要进行MRI程序，则该方法可以包括确定应执行MRI程序以诊断和评估受试者，和/或确定受试者所遭遇的TBI的类型而与不存在阴性CT扫描无关。在一些实施方式中，GFAP和UCH-L1的参考水平与MRI阳性扫描或头部CT阳性扫描(即颅内病变的存在)相关联。
[0446] 4.辅助预测已遭受头部损伤的人类受试者的预后的方法
[0447] 除其他方法外，本公开涉及预测已遭受或可能已遭受头部损伤的受试者的预后的方法。如本文所述，预测已遭受头部损伤的受试者的预后包括基于与参考水平相比的GFAP和UCH-L1的水平预测已遭受TBI的受试者的有利或不利的预后。根据这些实施方案，该方法可以包括以下步骤：对在实际或疑似损伤后的约48小时内获得自所述受试者的样品进行测定，以测量或检测在所述样品中的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)水平；以及
[0448] 在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约70pg/mL至约2000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约100pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约100pg/mL至约2000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约150pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约200pg/mL至约
2000pg/mL之间，而UCH-L1的参考水平可以在至少约200pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约300pg/mL至约2000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约300pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约80pg/mL和约2000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约130pg/mL至约
2000pg/mL之间。
2000pg/mL之间，而UCH-L1的参考水平可以在至少约200pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约300pg/mL至约2000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约300pg/mL至约2000pg/mL之间。在一些实施方案中，GFAP的参考水平可以在约80pg/mL和约2000pg/mL之间，并且UCH-L1的参考水平可以在至少约130pg/mL至约
2000pg/mL之间。
[0449] 在一些实施方案中，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平通过具有约80％至约97％的灵敏度和约30％至约95％的特异度的方法来确定，如下更详细讨论的。
[0450] 在一些实施方案中，受试者在执行该方法之后已接接受过扩展的格拉斯哥预后量表(GOSE)评分，并且基于该GOSE评分被预测为具有有利或不利(例如，较差)的预后。在一些实施方案中，基于1的GOSE评分，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平将与具有较差预后的受试者相关。
[0451] 在一些实施例中，该方法是在尚未接受针对TBI的医学诊断的受试者上执行的(例如，在该受试者已遭受或可能已遭受头部损伤但是尚未诊断出TBI的情况下)。在这样的情况下，例如如果受试者的GFAP和UCH-L1水平高于参考水平预测不利的预后，则该方法可以包括确定需要进一步的医学干预，例如进行CT扫描和/或MRI程序以诊断和评估受试者，和/或确定受试者可能已遭受的TBI类型。在一些实施方案中，受试者可能已经接受了已遭遇TBI的诊断。在这种情况下，该方法可以包括确定受试者的GFAP和UCH-L1水平是否高于参考水平，从而确认诊断并预测不利预后。但是，在某些实施方案中，受试者的GFAP和UCH-L1水平可能低于GFAP和UCH-L1的参考水平，因此可能通过预测良好的预后而与TBI诊断相抵触。在这种情况下，该方法可以包括例如通过MRI程序或头部CT扫描(即，检测颅内病变的存在)来重新评估受试者是否已经患有TB1。
[0452] 在一些实施方案中，通过具有至少约70％至约100％之间的灵敏度和至少约30％至约100％之间的特异度的测定法来确定GFAP和UCH-L1的参考水平。在一些实施例中，灵敏度在在至少约70％至约100％之间、在至少约70％至至少约99％之间、在至少约70％至至少约95％之间、在至少约70％至至少约90％之间、在至少约70％至至少约85％之间、在至少约75％至约100％之间、在至少约75％至至少约99％之间、在至少约75％至至少约95％之间、在至少约75％至至少约90％之间、在至少约75％至至少约85％之间、在至少约80％至约
100％之间、在至少约80％至至少约99％之间、在至少约80％至至少约95％之间、在至少约
80％至至少约90％之间、在至少约80％至至少约85％之间、在至少约85％至约100％之间、在至少约85％至至少约99％之间、在至少约85％至至少约95％之间、在至少约85％至至少约90％之间、在至少约90％至约100％之间、在至少约90％至至少约99％之间、在至少约
90％至至少约95％之间、在至少约95％至约100％、或在至少约95％至至少约99％。在一些实施例中，灵敏度为至少约70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约
87.5％、至少约90.0％、至少约95.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。
100％之间、在至少约80％至至少约99％之间、在至少约80％至至少约95％之间、在至少约
80％至至少约90％之间、在至少约80％至至少约85％之间、在至少约85％至约100％之间、在至少约85％至至少约99％之间、在至少约85％至至少约95％之间、在至少约85％至至少约90％之间、在至少约90％至约100％之间、在至少约90％至至少约99％之间、在至少约
90％至至少约95％之间、在至少约95％至约100％、或在至少约95％至至少约99％。在一些实施例中，灵敏度为至少约70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约
87.5％、至少约90.0％、至少约95.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。
[0453] 在一些实施例中，特异度在至少约30％至约100％之间、在至少约30％至约99％之间、在至少约30％至约95％之间、在至少约30％至约90％之间、在至少约30％至约85％之间、在至少约30％至约80％之间、在至少约30％至约75％之间、在至少约30％至约70％之间、在至少约30％至约60％之间、在至少约30％至约50％之间、在至少约40％至约100％之间、在至少约40％至约99％之间、在至少约40％至约95％之间、在至少约40％至约90％之间、在至少约40％至约85％之间、在至少约40％至约80％之间、在至少约40％至约75％之间、在至少约40％至约70％之间、在至少约40％至约60％之间、在至少约40％至约50％之间、在至少约50％至约100％之间、在至少约50％至约99％之间、在至少约50％至约95％之间、在至少约50％至约90％之间、在至少约50％至约85％之间、在至少约50％至约80％之间、在至少约50％至约75％之间、在至少约50％至约70％之间、在至少约50％至约60％之间、在至少约60％至约100％之间、在至少约60％至约99％之间、在至少约60％至约95％之间、在至少约60％至约90％之间、在至少约60％至约85％之间、在至少约60％至约80％之间、在至少约60％至约75％之间、在至少约60％至约70％之间、在至少约70％至约100％之间、在至少约70％至约99％之间、在至少约70％至约95％之间、在至少约70％至约90％之间、在至少约70％至约85％之间、在至少约70％至约80％之间、在至少约70％至约75％之间、在至少约80％至约100％之间、在至少约80％至约99％之间、在至少约80％至约95％之间、在至少约80％至约90％之间、在至少约80％至约85％之间、在至少约90％至约100％之间、在至少约90％至约99％之间、在至少约90％至约95％之间、在至少约95％至约99％、或在至少约95％至约100％。在一些实施例中，特异度为至少约30.0％、至少约31.0％、至少约32.0％、至少约33.0％、至少约34.0％、至少约35.0％、至少约36.0％、至少约37.0％、至少约38.0％、至少约39.0％、至少约40.0％、至少约45.0％、至少约50.0％、至少约55.0％、至少约60.0％、至少约65.0％、至少约70.0％、至少约75.0％、至少约80.0％、至少约85.0％、至少约90.0％、至少约91.0％、至少约92.0％、至少约93.0％、至少约94.0％、至少约
95.0％、至少约96.0％、至少约97.0％、至少约98.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。在一些实施方案中，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平通过具有约80％至约97％的灵敏度和约30％至约95％的特异度的方法测定。
在一些实施方案中，样品在人类受试者头部损伤或疑似损伤的约48小时内获得，例如在约0至约4小时内、在约0至约8小时内、在约0至约12小时内、在约0至约16小时内、在约0至约20小时内、在约0至约24小时内以及在约0到大约48小时。在一些实施方案中，在约4小时至约8小时内、约8小时至约12小时内、约12小时至约16小时内、约16小时至约20小时内、在约20小时至约24小时内、以及在约24小时至约48小时内，从人类受试者中获取样品。在其他实施方案中，可以在头部损伤或疑似损伤的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约
12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时内，从人类受试者中获取样品。在一些实施方案中，GFAP和UCH-L1的组合的存在的发生出现在头部损伤后的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约
18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时。一方面，样品在损伤后约4小时至约16小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约4至约8小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约8至约12小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约12至约16小时内从受试者获得。
95.0％、至少约96.0％、至少约97.0％、至少约98.0％、至少约99.0％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100.0％。在一些实施方案中，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平通过具有约80％至约97％的灵敏度和约30％至约95％的特异度的方法测定。
在一些实施方案中，样品在人类受试者头部损伤或疑似损伤的约48小时内获得，例如在约0至约4小时内、在约0至约8小时内、在约0至约12小时内、在约0至约16小时内、在约0至约20小时内、在约0至约24小时内以及在约0到大约48小时。在一些实施方案中，在约4小时至约8小时内、约8小时至约12小时内、约12小时至约16小时内、约16小时至约20小时内、在约20小时至约24小时内、以及在约24小时至约48小时内，从人类受试者中获取样品。在其他实施方案中，可以在头部损伤或疑似损伤的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约
12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时内，从人类受试者中获取样品。在一些实施方案中，GFAP和UCH-L1的组合的存在的发生出现在头部损伤后的约0分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约
18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时。一方面，样品在损伤后约4小时至约16小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约4至约8小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约8至约12小时内从受试者获得。在另一方面，样品在损伤后约12至约16小时内从受试者获得。
[0454] 5.遭受头部损伤的受试者的治疗和监测
[0455] 可以治疗或监测在上述方法中被鉴定或评估为患有创伤性脑损伤，诸如轻度创伤性脑损伤或中度至重度创伤性脑损伤的受试者。在一些实施方式中，所述方法进一步包括用创伤性脑损伤疗法(诸如本领域已知的任何疗法)治疗被评估为患有创伤性脑损伤的人类受试者。例如，创伤性脑损伤的治疗可以采取多种形式，这取决于对头部的损伤的严重性。例如，对于患有轻度TBI的受试者，治疗可以包括以下中的一种或多种：休息、避免加重症状的活动(例如体育运动)、在光照下避光或戴墨镜、症状管理例如缓解头痛或偏头痛的药物、抗恶心药物等。针对患有重度TBI的患者的治疗可能包括施用一种或多种合适的药物(诸如利尿剂、抗惊厥药物、用于使个体镇静并使其陷入药物引发的昏迷的药物，或其它药物或生物药物)(无论是已知还是将来开发用于TBI治疗)、一种或多种手术程序(诸如去除血肿、修复颅骨骨折、减压颅骨切除术等)和一种或多种疗法(诸如一种或多种康复、认知行为疗法、愤怒管理、心理咨询等)。在一些实施方式中，该方法进一步包括监测被评估为患有创伤性脑损伤(例如轻度或中度至重度创伤性脑损伤。在一些实施方式中，可以用CT扫描或MRI监测被鉴定为患有创伤性脑损伤(诸如轻度创伤性脑损伤或重度创伤性脑损伤)的受试者。
[0456] 6.用于测量UCH-L1的水平的方法
[0457] 在上文所述的方法中，UCH-L1水平可以通过任何手段测量，所述手段诸如抗体依赖性方法，诸如免疫测定法、蛋白质免疫沉淀法、免疫电泳法、化学分析法、SDS-PAGE和蛋白质印迹分析、或蛋白质免疫染色法、电泳分析法、蛋白质测定法、竞争性结合测定法、功能性蛋白质测定法、或色谱或光谱法，诸如高效液相色谱法(HPLC)或液体色谱-质谱法(LC/MS)。另外，测定法可以以临床化学形式或单分子检测测定使用，诸如将由本领域技术人员已知的。
[0458] 在一些实施方式中，测量UCH-L1的水平包括使样品与第一特异性结合成员和第二特异性结合成员接触。在一些实施方式中，第一特异性结合成员是捕获抗体，并且第二特异性结合成员是检测抗体。在一些实施方式中，测量UCH-L1的水平包括使样品同时或以任何顺序依次与以下接触：(1)至少一种捕获抗体(例如UCH-L1捕获抗体)，其结合UCH-L1或UCH-L1片段上的表位以形成至少一种捕获抗体-UCH-L1抗原复合物(例如UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原复合物)，和(2)至少一种检测抗体(例如UCH-L1检测抗体)，其包括可检测标记并且结合UCH-L1上未被捕获抗体结合的表位，以形成UCH-L1抗原-至少一种检测抗体复合物(例如UCH-L1抗原-UCH-L1检测抗体复合物)，使得形成捕获抗体-UCH-L1抗原-检测抗体复合物(例如UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-UCH-L1检测抗体复合物)，以及基于通过至少一种捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种检测抗体复合物中的可检测标记生成的信号，测量样品中UCH-L1的量或浓度。
[0459] 在一些实施方案中，该方法进一步包括第三特异性结合成员，例如第二检测抗体，其包括可检测标记并且结合UCH-L1上的未被捕获抗体和第一检测抗体结合的表位。
[0460] 在一些实施方式中，将第一特异性结合成员固定化在固体支持物上。在一些实施方式中，将第二特异性结合成员固定化在固体支持物上。在一些实施方式中，第一特异性结合成员是如下所述的UCH-L1抗体。
[0461] 在一些实施方式中，样品是经稀释的或未经稀释的。样品可以是约1至约25微升、约1至约24微升、约1至约23微升、约1至约22微升、约1至约21微升、约1至约20微升、约1至约18微升、约1至约17微升、约1至约16微升、约15微升或约1升、约2微升、约3微升、约4微升、约
5微升、约6微升、约7微升、约8微升、约9微升、约10微升、约11微升、约12微升、约13微升、约
14微升、约15微升、约16微升、约17微升、约18微升、约19微升、约20微升、约21微升、约22微升、约23微升、约24微升或约25微升。在一些实施方式中，样品为约1至约150微升或更少或约1至约25微升或更少。
5微升、约6微升、约7微升、约8微升、约9微升、约10微升、约11微升、约12微升、约13微升、约
14微升、约15微升、约16微升、约17微升、约18微升、约19微升、约20微升、约21微升、约22微升、约23微升、约24微升或约25微升。在一些实施方式中，样品为约1至约150微升或更少或约1至约25微升或更少。
[0462] 除即时设备外的一些仪器(诸如Abbott Laboratories仪器 和其它核心实验室仪器)可能能够测量样品中高于或大于25000pg/mL的UCH-L1水平。
[0463] 其它检测方法包括使用纳米孔装置或纳米井装置或可以适于在纳米孔装置或纳米井装置上使用，例如用于单分子检测。纳米孔装置的实例描述于国际专利公开号WO 2016/161402中，其在此通过引用整体并入。纳米井装置的实例描述于国际专利公开号WO
2016/161400中，其在此通过引用整体并入。用于单分子检测的其他装置和方法也可以使用。
2016/161400中，其在此通过引用整体并入。用于单分子检测的其他装置和方法也可以使用。
[0464] 7.UCH-L1抗体
[0465] 本文描述的方法可以使用特异性结合泛素羧基末端水解酶L1(“UCH-L1”)(或其片段)的分离的抗体，称之为“UCH-L1抗体”。UCH-L1抗体可用于评估作为创伤性脑损伤的量度的UCH-L1状态、检测样品中UCH-L1的存在、定量样品中存在的UCH-L1的量、或检测样品中UCH-L1的存在并定量其量。
[0466] a.泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)
[0467] 泛素羧基末端酯酶L1(“UCH-L1”)，也称为“泛素C末端水解酶”，是去泛素化酶。UCH-L1是其产物水解泛素的小C末端加合物以产生泛素单体的基因家族的成员。UCH-L1的表达对神经元和弥漫性神经内分泌系统及其肿瘤的细胞具有高度特异性。它大量存在于所有神经元(占总脑蛋白的1％-2％)中，在神经元和睾丸/卵巢中特异性表达。UCH-L1的催化三联体含有在第90位的半胱氨酸、在第176位的天冬氨酸和在第161位的组氨酸，它们负责其水解酶活性。
[0468] 人类UCH-L1可具有以下氨基酸序列：
[0469] MQLKPMEINPEMLNKVLSRLGVAGQWRFVDVLGLEEESLGSVPAPACALLLLFPLTAQHENFRKKQIEELKGQEVSPKVYFMKQTIGNSCGTIGLIHAVANNQDKLGFEDGSVLKQFLSETEKMSPEDRAKCFEKNEAIQAAHDAVAQEGQCRVDDKVNFHFILFNNVDGHLYELDGRMPFPVNHGASSEDTLLKDAAKVCREFTEREQGEVRFSAVALCKAA(SEQ ID NO:1)。
[0470] 人类UCH-L1可以是SEQ ID NO：1的片段或变体。UCH-L1的片段的长度可以是在5与225个氨基酸之间、10与225个氨基酸之间、50与225个氨基酸之间、60与225个氨基酸之间、
65与225个氨基酸之间、100与225个氨基酸之间、150与225个氨基酸之间、100与175个氨基酸之间或175与225个氨基酸之间。片段可以包含来自SEQ ID NO：1的多个连续氨基酸。
65与225个氨基酸之间、100与225个氨基酸之间、150与225个氨基酸之间、100与175个氨基酸之间或175与225个氨基酸之间。片段可以包含来自SEQ ID NO：1的多个连续氨基酸。
[0471] b.UCH-L1识别抗体
[0472] 抗体是与UCH-L1、其片段、UCH-L1的表位或其变体结合的抗体。抗体可以是抗UCH-L1抗体的片段或其变体或衍生物。抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体。抗体可以是嵌合抗体、单链抗体、亲和力成熟抗体、人抗体、人源化抗体、完全人抗体或抗体片段(诸如Fab片段)，或其混合物。抗体片段或衍生物可包括F(ab')2、Fv或scFv片段。抗体衍生物可以通过模拟肽产生。此外，描述用于产生单链抗体的技术可以适用于产生单链抗体。
[0473] 抗UCH-L1抗体可以是嵌合抗UCH-L1或人源化抗UCH-L1抗体。在一个实施方式中，人源化抗体和嵌合抗体都是单价的。在一个实施方式中，人源化抗体和嵌合抗体均包含与Fc区连接的单个Fab区。
[0474] 人抗体可以源自噬菌体展示技术或源自表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠。人抗体可以作为人体内免疫应答的结果产生并且被分离。参见例如Funaro等人,BMC Biotechnology,2008(8):85。因此，抗体可以是人而非动物谱系的产物。因为它是人源性的，所以可以最小化对自身抗原反应的风险。另选地，标准酵母展示文库和展示技术可用于选择和分离人抗UCH-L1抗体。例如，天然人单链可变片段(scFv)的文库可用于选择人抗UCH-L1抗体。转基因动物可用于表达人抗体。
[0475] 人源化抗体可以是结合所需抗原的来自非人物种的抗体分子，其具有一个或多个来自非人物种的互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的框架区。
[0476] 所述抗体与已知抗体的区别在于它具有与本领域中已知的抗体不同的生物学功能。
[0477] (1)表位
[0478] 抗体可以免疫特异性结合UCH-L1(SEQ ID NO：1)、其片段或其变体。抗体可以免疫特异性识别并结合表位区域内的至少三个氨基酸、至少四个氨基酸、至少五个氨基酸、至少六个氨基酸、至少七个氨基酸、至少八个氨基酸、至少九个氨基酸或至少十个氨基酸。抗体可以免疫特异性识别并结合这样的表位，所述表位具有表位区域的至少三个连续氨基酸、至少四个连续氨基酸、至少五个连续氨基酸、至少六个连续氨基酸、至少七个连续氨基酸、至少八个连续氨基酸、至少九个连续氨基酸或至少十个连续氨基酸。
[0479] c.示例性抗UCH-L1抗体
[0480] 可以使用本文所述的技术以及使用本领域已知的常规技术来产生抗UCH-L1抗体。在一些实施方案中，抗UCH-L1抗体可以是未缀合的UCH-L1抗体，例如购自United State Biological(目录号：031320)、Cell Signaling Technology(目录号：3524)、Sigma-Aldrich(目录号：HPA005993)、Santa Cruz Biotechnology、Inc.目录号：sc-58593或sc-
58594)、R&D Systems(目录号：MAB6007)、Novus Biologicals(目录号：NB600-1160)、Biorbyt(目录号：orb33715)、Enzo Life Sciences、Inc.(目录号：ADI-905-520-1)、Bio-Rad(目录号：VMA00004)、BioVision(目录号：6130-50)、Abcam(Catalog Numbers:ab75275或ab104938)、Invitrogen Antibodies(Catalog Numbers:480012)、ThermoFisher Scientific(Catalog Numbers:MA1-46079、MA5-17235、MA1-90008、或MA1-83428)、EMD Millipore(目录号：MABN48)、或Sino Biological Inc.(目录号：50690-R011)。可以将抗UCH-L1抗体与荧光团缀合，例如可从BioVision(目录号：6960-25)或Aviva Systems Biology(目录号：OAAF01904-FITC)。可用于本文所述方法的其他UCH-L1抗体包括WO 2018/
081649中所述的那些，其内容通过引用并入本文。
58594)、R&D Systems(目录号：MAB6007)、Novus Biologicals(目录号：NB600-1160)、Biorbyt(目录号：orb33715)、Enzo Life Sciences、Inc.(目录号：ADI-905-520-1)、Bio-Rad(目录号：VMA00004)、BioVision(目录号：6130-50)、Abcam(Catalog Numbers:ab75275或ab104938)、Invitrogen Antibodies(Catalog Numbers:480012)、ThermoFisher Scientific(Catalog Numbers:MA1-46079、MA5-17235、MA1-90008、或MA1-83428)、EMD Millipore(目录号：MABN48)、或Sino Biological Inc.(目录号：50690-R011)。可以将抗UCH-L1抗体与荧光团缀合，例如可从BioVision(目录号：6960-25)或Aviva Systems Biology(目录号：OAAF01904-FITC)。可用于本文所述方法的其他UCH-L1抗体包括WO 2018/
081649中所述的那些，其内容通过引用并入本文。
[0481] d.抗体制备/生产
[0482] 抗体可以通过多种技术，包括本领域技术人员熟知的那些技术中的任一种制备。一般来讲，抗体可以通过细胞培养技术产生，所述细胞培养技术包括经由常规技术或通过将抗体基因、重链和/或轻链转染到合适的细菌或哺乳动物细胞宿主中以允许产生抗体(其中抗体可以是重组的)来进行单克隆抗体的生成。各种形式的术语“转染”旨在涵盖通常用于将外源DNA引入到原核或真核宿主细胞中的广泛多种技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-聚葡萄糖转染等。尽管有可能在原核或真核宿主细胞中表达抗体，但优选在真核细胞且最优选哺乳动物宿主细胞中表达抗体，因为此类真核细胞(且特别是哺乳动物细胞)相比于原核细胞更有可能组装和分泌经过正确折叠且具有免疫学活性的抗体。
[0483] 用于表达重组抗体的示例性哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)(包括Urlaub和Chasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216-4220(1980)中所述的dhfr-CHO细胞)，其与DHFR可选择标记物一起使用，例如如Kaufman和Sharp,J.Mol.Biol,159:601-621(1982)中所述；NS0骨髓瘤细胞；COS细胞和SP2细胞。当将编码抗体基因的重组表达载体引入到哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养一段足以允许抗体在宿主细胞中表达或者更优选使抗体分泌到宿主细胞所生长的培养基中的时间来产生抗体。抗体可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收。
[0484] 宿主细胞也可用于产生功能性抗体片段，诸如Fab片段或scFv分子。应当理解，可以对上述程序进行变型。例如，可能合乎需要的是用编码抗体的轻链和/或重链的功能性片段的DNA转染宿主细胞。重组DNA技术也可用于除去一些或全部编码并非结合感兴趣抗原所必需的轻链和重链中的任一个或两者的DNA。所述抗体也涵盖由此类截短DNA分子表达的分子。此外，可通过用标准化学交联方法使抗体与第二抗体交联来产生双功能抗体，其中一个重链和一个轻链是抗体(即结合人UCH-L1)且另一重链和另一轻链对除人UCH-L1以外的抗原具有特异性。
[0485] 在用于重组表达抗体、或其抗原结合部分的一个优选系统中，通过磷酸钙介导的转染法将编码抗体重链和抗体轻链两者的重组表达载体引入到dhfr-CHO细胞中。在重组表达载体内，使抗体重链和轻链基因各自可操作地连接至CMV增强子/AdMLP启动子调控元件以驱动基因高度转录。重组表达载体也带有DHFR基因，其允许使用甲氨蝶呤选择/扩增来选择已用载体转染的CHO细胞。培养所选择的转化株宿主细胞以便允许表达抗体重链和轻链并且从培养基中回收完整抗体。将标准分子生物学技术用于制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化株、培养宿主细胞，并且从培养基中回收抗体。更进一步地，合成重组抗体的方法可以通过在适合培养基中培养宿主细胞，直到合成重组抗体进行。所述方法可以进一步包括从培养基中分离重组抗体。
[0486] 制备单克隆抗体的方法涉及制备能够产生具有所需特异性的抗体的永生细胞系。此类细胞系可以由从免疫动物获得的脾细胞产生。可以用UCH-L1或其片段和/或变体免疫动物。用于免疫动物的肽可以包含编码人Fc(例如片段可结晶区)或人抗体的尾区的氨基酸。然后可以通过例如与骨髓瘤细胞融合配偶体的融合使脾细胞永生化。可以采用多种融合技术。例如，可以将脾细胞和骨髓瘤细胞与非离子洗涤剂合并几分钟，然后以低密度接种在支持杂交细胞生长但不支持骨髓瘤细胞生长的选择性培养基上。一种这样的技术使用次黄嘌呤、氨基喋呤、胸苷(HAT)选择。另一种技术包括电融合。经过足够的时间，通常约1至2周后，观察到杂交体的集落。选择单一集落并测试其培养物上清液对多肽的结合活性。可以使用具有高反应性和特异性的杂交瘤。
[0487] 可以从生长的杂交瘤集落的上清液中分离单克隆抗体。此外，可以采用各种技术来提高产量，诸如将杂交瘤细胞系注射到合适的脊椎动物宿主(诸如小鼠)的腹膜腔中。然后可以从腹水或血液中收获单克隆抗体。可以通过常规技术，诸如色谱法、凝胶过滤、沉淀和提取从抗体中除去污染物。亲和色谱法是可以在纯化抗体的过程中使用的方法的实例。
[0488] 蛋白水解酶木瓜蛋白酶优先裂解IgG分子以产生数个片段，其中两个(F(ab)片段)各自包含包括完整抗原结合位点的共价异二聚体。胃蛋白酶能够裂解IgG分子以提供几个片段，包括包含两个抗原结合位点的F(ab')2片段。
[0489] Fv片段可以通过IgM的优先蛋白水解裂解以及偶尔蛋白水解裂解IgG或IgA免疫球蛋白分子来产生。可以使用重组技术衍生Fv片段。Fv片段包括非共价VH::VL异二聚体，其包括保留了天然抗体分子的大部分抗原识别能力和结合能力的抗原结合位点。
[0490] 抗体、抗体片段或衍生物可包含分别插置在重链框架(“FR”)组和轻链框架(“FR”)组之间的重链互补决定区(“CDR”)组和轻链互补决定区(“CDR”)组，所述框架组为CDR提供支撑并限定CDR相对于彼此的空间关系。CDR组可含有重链或轻链V区的三个高变区。
[0491] 可以使用产生或分离具有必需特异性的抗体的其它合适方法，包括但不限于从肽或蛋白质文库(例如但不限于噬菌体、核糖体、寡核苷酸、RNA、cDNA、酵母等展示库)中选择重组抗体的方法；例如，如使用本领域中已知的方法可从各种商业供应商诸如Cambridge Antibody Technologies(Cambridgeshire,UK)、MorphoSys(Martinsreid/Planegg,Del.)、Biovation(Aberdeen,Scotland,UK)BioInvent(Lund,Sweden)获得的。参见美国专利号4,704,692、5,723,323、5,763,192、5,814,476、5,817,483、5,824,514、5,976,862。另选的方法依赖于免疫能够产生人抗体谱系的转基因动物(例如SCID小鼠，Nguyen等人(1997)Microbiol.Immunol.41:901-907；Sandhu等人(1996)Crit.Rev.Biotechnol.16:95-118；
Eren等人(1998)Immunol.93:154-161)，如本领域中已知的和/或如本文所述的。此类技术包括但不限于核糖体展示(Hanes等人(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94:4937-4942；
Hanes等人(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95:14130-14135)；单细胞抗体产生技术(例如选择的淋巴细胞抗体方法(“SLAM”)(美国专利号5,627,052，Wen等人(1987)J.Immunol.17:
887-892；Babcook等人(1996)Proc.Natl.Acad Sci.USA 93:7843-7848)；凝胶微滴和流式细胞术(Powell等人(1990)Biotechnol.8:333-337；One Cell Systems,(Cambridge,Mass).；Gray等人(1995)J.Imm.Meth.182:155-163；Kenny等人(1995)Bio/Technol.13:
787-790)；B细胞选择(Steenbakkers等人(1994)Molec.Biol.Reports 19:125-134
(1994))。
Eren等人(1998)Immunol.93:154-161)，如本领域中已知的和/或如本文所述的。此类技术包括但不限于核糖体展示(Hanes等人(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94:4937-4942；
Hanes等人(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95:14130-14135)；单细胞抗体产生技术(例如选择的淋巴细胞抗体方法(“SLAM”)(美国专利号5,627,052，Wen等人(1987)J.Immunol.17:
887-892；Babcook等人(1996)Proc.Natl.Acad Sci.USA 93:7843-7848)；凝胶微滴和流式细胞术(Powell等人(1990)Biotechnol.8:333-337；One Cell Systems,(Cambridge,Mass).；Gray等人(1995)J.Imm.Meth.182:155-163；Kenny等人(1995)Bio/Technol.13:
787-790)；B细胞选择(Steenbakkers等人(1994)Molec.Biol.Reports 19:125-134
(1994))。
[0492] 亲和力成熟抗体可以通过本领域中已知的多种程序中的任一种产生。例如，参见Marks等人,BioTechnology 10:779-783(1992)描述了通过VH和VL结构域改组进行的亲和力成熟。对CDR和/或框架残基的随机诱变由以下文献描述：Barbas等人,Proc.Nat.Acad.Sci.USA,91:3809-3813(1994)；Schier等人.,Gene,169:147-155(1995)；
Yelton等人,J.Immunol.,155:1994-2004(1995)；Jackson等人,J.Immunol.,154(7):3310-
3319(1995)；Hawkins等人,J.Mol.Biol,226:889-896(1992)。在选择性诱变位置和在接触或超突变位置由活性增强氨基酸残基进行的选择性突变描述于美国专利号6,914,128B1。
Yelton等人,J.Immunol.,155:1994-2004(1995)；Jackson等人,J.Immunol.,154(7):3310-
3319(1995)；Hawkins等人,J.Mol.Biol,226:889-896(1992)。在选择性诱变位置和在接触或超突变位置由活性增强氨基酸残基进行的选择性突变描述于美国专利号6,914,128B1。
[0493] 抗体变体还可以利用以下方式制备：将编码抗体的多核苷酸递送至合适的宿主，诸如以提供在其乳汁中产生此类抗体的转基因动物或哺乳动物，诸如山羊、牛、马、绵羊等来制备。这些方法在本领域中是已知的并且例如描述于美国专利号5,827,690、5,849,992、4,873,316、5,849,992、5,994,616、5,565,362和5,304,489中。
[0494] 抗体变体也可通过以下方式制备：递送多核苷酸以提供转基因植物和培养的植物细胞(例如但不限于烟草、玉米和浮萍)，它们在植物部分或由其培养的细胞中产生此类抗体、特定部分或变体。例如，Cramer等人(1999)Curr.Top.Microbiol.Immunol 240:95-118和其中引用的参考文献描述了例如使用诱导型启动子产生表达大量重组蛋白的转基因烟草叶。转基因玉米已用于以商业生产水平表达哺乳动物蛋白质，其生物活性与在其它重组系统中产生的或从天然来源纯化的那些相当。参见例如Hood等人,Adv.Exp.Med.Biol.(1999)464:127-147和其中引用的参考文献。抗体变体也可以由包括抗体片段，诸如单链抗体(scFv)的转基因植物种子，包括烟草种子和马铃薯块茎大量产生。参见例如Conrad等人(1998)Plant Mol.Biol.38:101-109和其中引用的参考文献。因此，根据已知方法，也可以使用转基因植物产生抗体。
[0495] 可以例如通过添加外源性序列来修饰免疫原性或降低、增强或修饰结合、亲和力、缔合速率、解离速率、亲合力、特异性、半衰期或任何其它合适的特征来产生抗体衍生物。一般来讲，保持非人或人CDR序列的一部分或全部，同时用人或其它氨基酸替换可变区和恒定区的非人序列。
[0496] 小抗体片段可以是具有两个抗原结合位点的双体，其中片段包含于同一多肽链(VH VL)中与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)。参见例如EP 404,097；WO 93/11161；和Hollinger等人,(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448。通过使用太短而不允许在相同链上的两个结构域之间配对的接头，迫使结构域与另一链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。还参见授予Chen等人的美国专利号6,632,926，其通过引用整体并入本文，并且公开了抗体变体，所述抗体变体具有一个或多个插入到亲本抗体的高变区中的氨基酸并且对靶抗原的结合亲和力比亲本抗体对抗原的结合亲和力强至少约2倍。
[0497] 抗体可以是线性抗体。用于制备线性抗体的程序在本领域中是已知的并描述于Zapata等人,(1995)Protein Eng.8(10):1057-1062。简而言之，这些抗体包含一对串联Fd片段(VH-CH1-VH-CH1)，所述片段形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性的或单特异性的。
[0498] 可以通过已知方法从重组细胞培养物中回收和纯化抗体，所述已知方法包括但不限于蛋白A纯化、硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阳离子交换色谱法、磷酸纤维素色谱法、疏水相互作用色谱法、亲和色谱法、羟基磷灰石色谱法和凝集素色谱法。高效液相色谱法(“HPLC”)也可用于纯化。
[0499] 可检测地标记抗体可能是有用的。用于将抗体缀合至这些试剂的方法在本领域中是已知的。仅出于说明的目的，可以用可检测部分，诸如放射性原子、发色团、荧光团等标记抗体。此类标记的抗体可以在体内或在分离的测试样品中用于诊断技术。它们可以与细胞因子、配体、另一种抗体连接。用于偶联抗体以实现抗肿瘤作用的合适试剂包括细胞因子，诸如白介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子(TNF)；用于光动力疗法中的光敏剂，包括酞菁四磺酸铝(III)、血卟啉和酞菁；放射性核素，诸如碘-131(131I)、钇-90(90Y)、铋-212(212Bi)、铋-213(213Bi)、锝-99m(99mTc)、铼-186(186Re)和铼-188(188Re)；抗生素，诸如多柔比星、阿霉素、柔红霉素、甲氨蝶呤、道诺霉素、新抑癌素和卡铂；细菌、植物和其它毒素，诸如白喉毒素、假单胞菌外毒素A、葡萄球菌肠毒素A、相思豆毒素蛋白-A毒素、蓖麻毒素A(去糖基化蓖麻毒素A和天然蓖麻毒素A)、TGF-α毒素、来自中华眼镜蛇(眼镜蛇(naja naja atra))的细胞毒素和白树毒素(一种植物毒素)；来自植物、细菌和真菌的核糖体失活蛋白，诸如局限曲菌素(一种由局限曲霉(Aspergillus restrictus)产生的核糖体失活蛋白)、皂草素(一种来自石碱草(Saponaria officinalis)的核糖体失活蛋白)和RNase；酪氨酸激酶抑制剂；
ly207702(二氟化嘌呤核苷)；含有反囊性剂的脂质体(例如反义寡核苷酸、编码毒素的质粒、甲氨蝶呤等)；和其它抗体或抗体片段，诸如F(ab)。
ly207702(二氟化嘌呤核苷)；含有反囊性剂的脂质体(例如反义寡核苷酸、编码毒素的质粒、甲氨蝶呤等)；和其它抗体或抗体片段，诸如F(ab)。
[0500] 经由使用杂交瘤技术、选择的淋巴细胞抗体方法(SLAM)、转基因动物和重组抗体文库进行的抗体产生在下面更详细地描述。
[0501] (1)使用杂交瘤技术的抗UCH-L1单克隆抗体
[0502] 单克隆抗体可以使用本领域中已知的多种技术(包括使用杂交瘤、重组体和噬菌体展示技术或其组合)来制备。例如，可以使用杂交瘤技术产生单克隆抗体，所述杂交瘤技术包括本领域中已知的并且例如在以下中教导的那些：Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,第二版,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,1988)；Hammerling等人,In Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas,(Elsevier,N.Y.,1981)。还应注意，如本文所用的术语“单克隆抗体”并不限于通过杂交瘤技术产生的抗体。术语“单克隆抗体”是指源自单一克隆的抗体，包括任何真核生物、原核生物或噬菌体克隆，而不是指产生所述抗体的方法。
[0503] 产生单克隆抗体的方法以及由所述方法产生的抗体可以包括培养分泌抗体的杂交瘤细胞，其中杂交瘤优选通过以下方式产生：将从用UCH-L1免疫的动物，例如大鼠或小鼠分离的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，然后筛选由融合产生的杂交瘤中分泌能够结合多肽的抗体的杂交瘤克隆。简而言之，可以用UCH-L1抗原免疫大鼠。在优选的实施方式中，将UCH-L1抗原与佐剂一起施用以刺激免疫应答。此类佐剂包括完全或不完全弗氏佐剂、RIBI(胞壁酰二肽)或ISCOM(免疫刺激复合物)。此类佐剂可以通过将多肽隔离在局部储库中来保护多肽免于快速分散，或者它们可以含有刺激宿主分泌对巨噬细胞和免疫系统的其它组分具有趋化性的因子的物质。优选地，如果正在施用多肽，则免疫程序将涉及多肽的两次或更多次施用，散布于数周内；然而，也可以使用多肽的单次施用。
[0504] 在用UCH-L1抗原免疫动物后，可以从动物获得抗体和/或产生抗体的细胞。通过将动物放血或处死，从动物获得含有抗UCH-L1抗体的血清。可以按从动物获得的原样使用血清，可以从血清中获得免疫球蛋白部分，或者可以从血清中纯化抗UCH-L1抗体。以这种方式获得的血清或免疫球蛋白是多克隆的，因此具有异质的一系列特性。
[0505] 一旦检测到免疫应答，例如，在大鼠血清中检测到对抗原UCH-L1具有特异性的抗体，就收获大鼠脾并且分离脾细胞。然后通过熟知的技术使脾细胞与任何适合骨髓瘤细胞(例如来自可从American Type Culture Collection(ATCC,Manassas,Va.,US)获得的细胞系SP20的细胞)融合。通过限制稀释法选择和克隆杂交瘤。然后通过本领域中已知的方法测定杂交瘤克隆中分泌能够结合UCH-L1的抗体的细胞。可以通过用阳性杂交瘤克隆免疫大鼠来产生通常含有高水平抗体的腹水。
[0506] 在另一个实施方式中，产生抗体的永生化杂交瘤可以从免疫化动物制备。在免疫之后，将动物处死并且将脾B细胞按本领域熟知的那样融合至永生化骨髓瘤细胞。参见例如Harlow和Lane，同上。在优选的实施方式中，骨髓瘤细胞不分泌免疫球蛋白多肽(非分泌性细胞系)。在融合和抗生素选择后，使用UCH-L1或其部分或表达UCH-L1的细胞筛选杂交瘤。在优选的实施方式中，使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)或放射免疫测定法(RIA)，优选ELISA进行初始筛选。PCT公开号WO 00/37504中提供了ELISA筛选的实例。
[0507] 选择产生抗UCH-L1抗体的杂交瘤、将其克隆并且进一步针对所需特征，包括稳健的杂交瘤生长、高抗体产生和所需的抗体特征进行筛选。杂交瘤可以在同系动物、缺乏免疫系统的动物(例如裸鼠)中体内培养和扩增，或者在细胞培养物中体外培养和扩增。选择、克隆和扩增杂交瘤的方法是本领域普通技术人员所熟知的。
[0508] 在优选的实施方式中，杂交瘤是大鼠杂交瘤。在另一个实施方式中，杂交瘤在非人、非大鼠物种，诸如小鼠、绵羊、猪、山羊、牛或马中产生。在又另一个优选的实施方式中，杂交瘤是人杂交瘤，其中人非分泌性骨髓瘤与表达抗UCH-L1抗体的人细胞融合。
[0509] 可通过已知技术产生识别特定表位的抗体片段。例如，可以通过使用酶(诸如木瓜蛋白酶(以产生两个相同的Fab片段)或胃蛋白酶(以产生F(ab')2片段))对免疫球蛋白分子进行蛋白水解裂解来产生的Fab和F(ab')2片段。IgG分子的F(ab')2片段保留了较大(“亲本”)IgG分子的两个抗原结合位点，包括轻链(含有可变轻链区和恒定轻链区)、重链的CH1结构域、和亲本IgG分子的形成二硫键的铰链区。因此，F(ab')2片段仍然能够交联抗原分子，如亲本IgG分子。
[0510] (2)使用SLAM的抗UCH-L1单克隆抗体
[0511] 在另一个方面，使用本领域中称为选择的淋巴细胞抗体方法(SLAM)的方法，从单个分离的淋巴细胞产生重组抗体，如美国专利号5,627,052；PCT公开号WO 92/02551；和Babcook等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93:7843-7848(1996)中所述。在该方法中，使用抗原特异性溶血空斑测定法筛选分泌感兴趣抗体的单细胞，例如源自任何一只免疫动物的淋巴细胞，其中使用接头(诸如生物素)将抗原UCH-L1、UCH-L1的亚基或其片段与绵羊红细胞偶联，并且用于鉴定分泌对UCH-L1具有特异性的抗体的单细胞。在鉴定感兴趣抗体分泌细胞后，通过逆转录酶-PCR(RT-PCR)从细胞中挽救重链和轻链可变区cDNA，然后这些可变区可以在哺乳动物宿主细胞，诸如COS或CHO细胞中、在适当的免疫球蛋白恒定区(例如人恒定区)的背景下表达。用源自体内选择的淋巴细胞的扩增的免疫球蛋白序列转染的宿主细胞然后可以在体外进行进一步的分析和选择，例如，通过淘选转染的细胞以分离表达针对UCH-L1的抗体的细胞。扩增的免疫球蛋白序列可以进一步在体外操纵，诸如通过体外亲和力成熟方法。参见例如PCT公开号WO 97/29131和PCT公开号WO 00/56772。
[0512] (3)使用转基因动物的抗UCH-L1单克隆抗体
[0513] 在另一个实施方式中，通过用UCH-L1抗原免疫包含一些或全部人免疫球蛋白基因座的非人动物来产生抗体。在一个实施方式中，非人动物是 转基因小鼠，一种包含人免疫球蛋白基因座的较大片段且缺乏小鼠抗体产生的工程化小鼠品系。参见例如Green等人,Nature Genetics,7:13-21(1994)和美国专利号5,916,771、5,939,598、
5,985,615、5,998,209、6,075,181、6,091,001、6,114,598和6,130,364。还参见PCT公开号WO 91/10741、WO94/02602、WO 96/34096、WO 96/33735、WO 98/16654、WO 98/24893、WO98/
50433、WO 99/45031、WO 99/53049、WO 00/09560和WO 00/37504。 转基
因小鼠产生完全人抗体的成人样人谱系，并且产生抗原特异性人单克隆抗体。
转基因小鼠通过引入人重链基因座和x轻链基因座的兆碱基大小的种
系构型YAC片段而含有约80％的人抗体谱系。参见Mendez等人,Nature Genetics,15:146-
156(1997)；Green和Jakobovits,J.Exp.Med.,188:483-495(1998)，其公开在此通过引用并入。
5,985,615、5,998,209、6,075,181、6,091,001、6,114,598和6,130,364。还参见PCT公开号WO 91/10741、WO94/02602、WO 96/34096、WO 96/33735、WO 98/16654、WO 98/24893、WO98/
50433、WO 99/45031、WO 99/53049、WO 00/09560和WO 00/37504。 转基
因小鼠产生完全人抗体的成人样人谱系，并且产生抗原特异性人单克隆抗体。
转基因小鼠通过引入人重链基因座和x轻链基因座的兆碱基大小的种
系构型YAC片段而含有约80％的人抗体谱系。参见Mendez等人,Nature Genetics,15:146-
156(1997)；Green和Jakobovits,J.Exp.Med.,188:483-495(1998)，其公开在此通过引用并入。
[0514] (4)使用重组抗体文库的抗UCH-L1单克隆抗体
[0515] 体外方法也可用于制备抗体，其中筛选抗体文库以鉴定具有所需的UCH-L1结合特异性的抗体。关于重组抗体文库的这种筛选的方法在本领域中是熟知的，且包括在以下中描述的方法：例如美国专利号5,223,409(Ladner等人)；PCT公开号WO 92/18619(Kang等人)；PCT公开号WO 91/17271(Dower等人)；PCT公开号WO 92/20791(Winter等人)；PCT公开号WO 92/15679(Markland等人)；PCT公开号WO 93/01288(Breitling等人)；PCT公开号WO 92/01047(McCafferty等人)；PCT公开号WO 92/09690(Garrard等人)；Fuchs等人,Bio/Technology,9:1369-1372(1991)；Hay等人,Hum.Antibod Hybridomas,3:81-85(1992)；
Huse等人.,Science,246:1275-1281(1989)；McCafferty等人,Nature,348:552-554
(1990)；Griffiths等人.,EMBO J.,12:725-734(1993)；Hawkins等人.,J.Mol.Biol.,226:
889-896(1992)；Clackson等人.,Nature,352:624-628(1991)；Gram等人.,
Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:3576-3580(1992)；Garrard等人.,Bio/Technology,9:1373-
1377(1991)；Hoogenboom等人.,Nucl.Acids Res.,19:4133-4137(1991)；Barbas等人.,Proc.Natl.Acad Sci.USA,88:7978-7982(1991)；美国专利申请公开号2003/0186374；和PCT公开号WO 97/29131，其各自内容通过引用并入本文。
Huse等人.,Science,246:1275-1281(1989)；McCafferty等人,Nature,348:552-554
(1990)；Griffiths等人.,EMBO J.,12:725-734(1993)；Hawkins等人.,J.Mol.Biol.,226:
889-896(1992)；Clackson等人.,Nature,352:624-628(1991)；Gram等人.,
Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:3576-3580(1992)；Garrard等人.,Bio/Technology,9:1373-
1377(1991)；Hoogenboom等人.,Nucl.Acids Res.,19:4133-4137(1991)；Barbas等人.,Proc.Natl.Acad Sci.USA,88:7978-7982(1991)；美国专利申请公开号2003/0186374；和PCT公开号WO 97/29131，其各自内容通过引用并入本文。
[0516] 重组抗体文库可来自用UCH-L1或UCH-L1的一部分免疫的受试者。另选地，重组抗体文库可来自初试受试者，即尚未用UCH-L1免疫的受试者，诸如来自尚未用人UCH-L1免疫的人受试者的人抗体文库。通过用包括人UCH-L1的肽筛选重组抗体文库以由此选择识别UCH-L1的那些抗体来选择的抗体。用于进行这种筛选和选择的方法在本领域中是熟知的，诸如先前段落中的参考文献中所述。为选择对UCH-L1具有特定结合亲和力的抗体，诸如以特定Koff速率常数自人UCH-L1解离的抗体，可使用本领域中已知的表面等离子体共振方法来选择具有所需Koff速率常数的抗体。为选择对hUCH-L1具有特定中和活性的抗体，诸如具有特定IC50的抗体，可使用本领域中已知用于评估对UCH-L1活性的抑制的标准方法。
[0517] 在一个方面，本公开涉及一种结合人UCH-L1的分离的抗体、或其抗原结合部分。优选地，抗体是中和抗体。在各种实施方式中，抗体是重组抗体或单克隆抗体。
[0518] 例如，也可使用本领域中已知的各种噬菌体展示方法来产生抗体。在噬菌体展示方法中，将功能性抗体结构域展示于携带编码它们的多核苷酸序列的噬菌体颗粒的表面上。这种噬菌体可用于展示自谱系或组合抗体文库(例如人或鼠类)表达的抗原结合结构域。可用抗原，例如使用标记的抗原或结合于或捕获于固体表面或珠粒的抗原来选择或鉴定表达结合感兴趣抗原的抗原结合结构域的噬菌体。这些方法中使用的噬菌体通常是丝状噬菌体，其包括fd和M13结合结构域，由具有重组融合至噬菌体基因III或基因VIII蛋白质的Fab、Fv或二硫键稳定的Fv抗体结构域的噬菌体表达。可用于制备抗体的噬菌体展示方法的实例包括在以下中公开的方法：Brinkmann等人,J.Immunol.Methods,182:41-50(1995)；Ames等人,J.Immunol.Methods,184:177-186(1995)；Kettleborough等人,Eur.J.Immunol,
24:952-958(1994)；Persic等人,Gene,187:9-18(1997)；Burton等人,Advances in Immunology,57:191-280(1994)；PCT公开号WO 92/01047；PCT公开号WO 90/02809；WO 91/
10737；WO 92/01047；WO 92/18619；WO93/11236；WO 95/15982；WO 95/20401；和美国专利号
5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,
698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743和5,969,108。
24:952-958(1994)；Persic等人,Gene,187:9-18(1997)；Burton等人,Advances in Immunology,57:191-280(1994)；PCT公开号WO 92/01047；PCT公开号WO 90/02809；WO 91/
10737；WO 92/01047；WO 92/18619；WO93/11236；WO 95/15982；WO 95/20401；和美国专利号
5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,
698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743和5,969,108。
[0519] 如上述参考文献中所述，在噬菌体选择后，可从噬菌体分离抗体编码区并用于产生完整抗体，包括人抗体，或任何其它所需的抗原结合片段，并且在任何所需宿主中表达，所述宿主包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母和细菌，例如如下文所述。例如，也可使用本领域中已知的方法来采用用于重组产生Fab、Fab'和F(ab')2片段的技术，诸如以下中所公开的技术：PCT公开号WO 92/22324；Mullinax等人,BioTechniques,12(6):864-869(1992)；Sawai等人,Am.J.Reprod.Immunol,34:26-34(1995)；和Better等人,Science,
240:1041-1043(1988)。可用于产生单链Fv和抗体的技术的实例包括美国专利号4,946,778和5,258,498；Huston等人,Methods in Enzymology,203:46-88(1991)；Shu等人,
Proc.Natl.Acad,Sci.USA,90:7995-7999(1993)；和Skerra等人,Science,240:1038-1041(1988)中所述的技术。
240:1041-1043(1988)。可用于产生单链Fv和抗体的技术的实例包括美国专利号4,946,778和5,258,498；Huston等人,Methods in Enzymology,203:46-88(1991)；Shu等人,
Proc.Natl.Acad,Sci.USA,90:7995-7999(1993)；和Skerra等人,Science,240:1038-1041(1988)中所述的技术。
[0520] 作为通过噬菌体展示来筛选重组抗体文库的替代方案，本领域中已知用于筛选大型组合文库的其它方法可应用于鉴定抗体。如PCT公开号WO 98/31700(Szostak和Roberts)和Roberts和Szostak,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94:12297-12302(1997)中所述，一类替代性表达系统是重组抗体文库表达为RNA-蛋白质融合物的表达系统。在这个系统中，通过在体外翻译于3'末端处带有嘌呤霉素(一种肽基受体抗生素)的合成mRNA来在mRNA与其编码的肽或蛋白质之间产生共价融合物。因此，可基于所编码的肽或蛋白质(例如抗体或其部分)的特性(诸如抗体或其部分与双重特异性抗原的结合)，自mRNA的复杂混合物(例如组合文库)富集特异性mRNA。可通过如上所述的重组方式(例如在哺乳动物宿主细胞中)表达从筛选此类文库所回收的编码抗体或其部分的核酸序列，并且另外可通过对突变已引入到最初选择的序列中的mRNA-肽融合物进行更多轮筛选或通过如上所述的用于重组抗体的体外亲和力成熟的其它方法来经受进一步亲和力成熟。该方法的优选实例是PROfusion展示技术。
[0521] 在另一种途径中，抗体也可使用本领域中已知的酵母展示方法来产生。在酵母展示方法中，使用遗传方法将抗体结构域系栓至酵母细胞壁并且使它们展示于酵母表面上。具体来说，这种酵母可用于展示从谱系或组合抗体文库(例如人或鼠类)表达的抗原结合结构域。可用于制备抗体的酵母展示方法的实例包括通过引用并入本文的美国专利号6,699,
658(Wittrup等人)中公开的方法。
658(Wittrup等人)中公开的方法。
[0522] e.重组UCH-L1抗体的生产
[0523] 抗体可通过本领域中已知的许多技术中的任一个产生。例如，从宿主细胞表达，其中通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染至宿主细胞中。各种形式的术语“转染”旨在涵盖通常用于将外源DNA引入到原核或真核宿主细胞中的广泛多种技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-聚葡萄糖转染等。尽管有可能在原核或真核宿主细胞中表达抗体，但优选在真核细胞且最优选哺乳动物宿主细胞中表达抗体，因为此类真核细胞(且特别是哺乳动物细胞)相比于原核细胞更有可能组装和分泌经过正确折叠且具有免疫学活性的抗体。
[0524] 用于表达重组抗体的示例性哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)(包括Urlaub和Chasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216-4220(1980)中所述的dhfr-CHO细胞，其与DHFR可选择标记物一起使用，例如如Kaufman和Sharp,J.Mol.Biol.,159:601-621(1982)中所述；NS0骨髓瘤细胞；COS细胞和SP2细胞。当将编码抗体基因的重组表达载体引入到哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养一段足以允许抗体在宿主细胞中表达或者更优选使抗体分泌到宿主细胞所生长的培养基中的时间来产生抗体。抗体可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收。
[0525] 宿主细胞也可用于产生功能性抗体片段，诸如Fab片段或scFv分子。应当理解，可以对上述程序进行变型。例如，可能合乎需要的是用编码抗体的轻链和/或重链的功能性片段的DNA转染宿主细胞。重组DNA技术也可用于除去一些或全部编码并非结合感兴趣抗原所必需的轻链和重链中的任一个或两者的DNA。抗体也涵盖由此类截短DNA分子表达的分子。此外，可通过用标准化学交联方法使抗体与第二抗体交联来产生双功能抗体，其中一个重链和一个轻链是抗体(即结合人UCH-L1)且另一重链和另一轻链对非人UCH-L1的抗原具有特异性。
[0526] 在用于重组表达本发明抗体、或其抗原结合部分的一个优选系统中，通过磷酸钙介导的转染法将编码抗体重链和抗体轻链两者的重组表达载体引入到dhfr-CHO细胞中。在重组表达载体内，使抗体重链和轻链基因各自可操作地连接至CMV增强子/AdMLP启动子调控元件以驱动基因高度转录。重组表达载体也带有DHFR基因，其允许使用甲氨蝶呤选择/扩增来选择已用载体转染的CHO细胞。培养所选择的转化株宿主细胞以便允许表达抗体重链和轻链并且从培养基中回收完整抗体。将标准分子生物学技术用于制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化株、培养宿主细胞，并且从培养基中回收抗体。更进一步地，本发明提供了合成本发明的重组抗体的方法，所述方法通过在适合培养基中培养本发明的宿主细胞，直到合成本发明的重组抗体进行。所述方法可以进一步包括从培养基中分离重组抗体。
[0527] (1)人源化抗体
[0528] “人源化抗体”可以是抗体或其变体、衍生物、类似物或部分，其免疫特异性地结合感兴趣抗原且包含基本上具有人抗体的氨基酸序列的框架(FR)区和基本上具有非人抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)。人源化抗体可以来自结合所需抗原的非人物种抗体，其具有一个或多个来自非人物种的互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的框架区。
[0529] 如本文所用，在CDR的背景下的术语“基本上”是指氨基酸序列与非人抗体CDR的氨基酸序列至少90％、至少95％、至少98％或至少99％相同的CDR。人源化抗体包含至少一个且通常两个可变结构域的基本上全部(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)，其中全部或基本上全部CDR区对应于非人免疫球蛋白(即供体抗体)的那些CDR区并且全部或基本上全部框架区是人免疫球蛋白共有序列的那些。根据一个方面，人源化抗体也包含免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常人免疫球蛋白的恒定区)的至少一部分。在一些实施方式中，人源化抗体含有轻链以及至少重链的可变结构域两者。抗体也可以包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。在一些实施方式中，人源化抗体仅含有人源化轻链。在一些实施方式中，人源化抗体仅含有人源化重链。在特定实施方式中，人源化抗体仅含有轻链和/或重链的人源化可变结构域。
[0530] 人源化抗体可以选自免疫球蛋白的任何类别，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何同种型，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。人源化抗体可以包含来自多于一种类别或同种型的序列，并且可以使用本领域中熟知的技术选择特定的恒定结构域以优化所需的效应子功能。
[0531] 人源化抗体的框架区和CDR区无需精确对应于亲本序列，例如可以通过取代、插入或/或缺失至少一个氨基酸残基来对供体抗体CDR或共有框架进行诱变以使该位点处的CDR或框架残基不对应于供体抗体或共有框架。然而，在一个实施方式中，此类突变将不是广泛的。通常，至少90％、至少95％、至少98％、或至少99％的人源化抗体残基将对应于亲本FR和CDR序列的那些。如本文所用，术语“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。如本文所用，术语“共有免疫球蛋白序列”是指由相关免疫球蛋白序列家族中最常出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如Winnaker,From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany 1987))。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的每个位置由家族中最常出现在那个位置的氨基酸占据。如果两个氨基酸同等频繁地出现，那么共有序列中可包括任一者。
[0532] 可以设计人源化抗体以使对啮齿动物抗人抗体的不想要的免疫应答最小化，这限制了那些部分在人类接受者中的治疗应用的持续时间和有效性。人源化抗体可以具有从非人来源引入其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人残基常常被称为“输入”残基，其通常取自可变结构域。可以通过用高变区序列取代人抗体的相应序列来进行人源化。因此，此类“人源化”抗体是嵌合抗体，其中显著小于完整的人可变结构域已被来自非人物种的相应序列取代。例如，参见美国专利号4,816,567，其内容通过引用并入本文。人源化抗体可以是人抗体，其中一些高变区残基和可能的一些FR残基被来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代。可以使用任何已知方法进行对本发明抗体的人源化或工程化，诸如但不限于美国专利号5,723,323、5,976,862、5,824,514、5,817,483、5,814,476、5,763,192、5,723,323、5,766,886、5,714,352、6,204,023、6,180,370、5,693,762、5,530,101、5,585,089、5,225,539和4,816,567中所述的方法。
[0533] 人源化抗体可以保留对UCH-L1的高亲和力和其它有利的生物特性。可以使用亲本序列和人源化序列的三维模型，通过亲本序列和各种概念性人源化的产物的分析方法制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是可获得的。说明和展示所选候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构的计算机程序是可获得的。这些展示的检查允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。以这种方式，可从接受者和输入序列中选择和合并FR残基，从而实现所需的抗体特征，诸如增加的对UCH-L1的亲和力。一般来讲，高变区残基可能直接且最实质性地涉及影响抗原结合。
[0534] 作为人源化的替代方案，可以产生人抗体(在本文中也称为“完全人抗体”)。例如，可以经由PROfusion和/或酵母相关技术从文库中分离人抗体。还可以产生转基因动物(例如小鼠)，所述转基因动物能够在免疫后在不存在内源性免疫球蛋白产生的情况下产生人抗体的全谱系。例如，在嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合子缺失导致完全抑制内源性抗体产生。人种系免疫球蛋白基因阵列在这种种系突变小鼠中的转移将导致在抗原激发后产生人抗体。人源化或完全人抗体可以根据美国专利号5,770,429、5,833,985、5,837,243、5,922,845、6,017,517、6,096,311、6,111,166、6,270,765、6,303,
755、6,365,116、6,410,690、6,682,928和6,984,720中所述的方法来制备，其各自内容通过引用并入本文。
755、6,365,116、6,410,690、6,682,928和6,984,720中所述的方法来制备，其各自内容通过引用并入本文。
[0535] 8.GFAP水平的测定方法
[0536] 在上文所述的方法中，GFAP水平可以通过任何手段测量，所述手段诸如抗体依赖性方法，诸如免疫测定法、蛋白质免疫沉淀法、免疫电泳法、化学分析法、SDS-PAGE和蛋白质印迹分析、或蛋白质免疫染色法、电泳分析法、蛋白质测定法、竞争性结合测定法、功能性蛋白质测定法、或色谱或光谱法，诸如高效液相色谱法(HPLC)或液体色谱-质谱法(LC/MS)。另外，测定法可以以临床化学形式或单分子检测测定采用，诸如将由本领域技术人员已知的。
[0537] 在一些实施方式中，测量GFAP的水平包括使样品与第一特异性结合成员和第二特异性结合成员接触。在一些实施方式中，第一特异性结合成员是捕获抗体，并且第二特异性结合成员是检测抗体。在一些实施方式中，测量GFAP的水平包括使样品同时或以任何顺序依次与以下接触：(1)至少一种捕获抗体(例如GFAP捕获抗体)，其结合GFAP或GFAP片段上的表位以形成至少一种捕获抗体-GFAP抗原复合物(例如GFAP捕获抗体-GFAP抗原复合物)，和(2)至少一种检测抗体(例如GFAP检测抗体)，其包括可检测标记并且结合GFAP上未被捕获抗体结合的表位，以形成GFAP抗原-至少一种检测抗体复合物(例如GFAP抗原-GFAP检测抗体复合物)，使得形成至少一种捕获抗体-GFAP抗原-至少一种检测抗体复合物(例如GFAP捕获抗体-GFAP抗原-GFAP检测抗体复合物)，以及基于通过至少一种捕获抗体-GFAP抗原-至少一种检测抗体复合物中的可检测标记生成的信号，测量样品中GFAP的量或浓度。
[0538] 在一些实施方式中，将第一特异性结合成员固定化在固体支持物上。在一些实施方式中，将第二特异性结合成员固定化在固体支持物上。在一些实施方式中，第一特异性结合成员是如下所述的GFAP抗体。
[0539] 在一些实施方式中，样品是经稀释的或未经稀释的。样品可以是约1至约25微升、约1至约24微升、约1至约23微升、约1至约22微升、约1至约21微升、约1至约20微升、约1至约18微升、约1至约17微升、约1至约16微升、约15微升或约1升、约2微升、约3微升、约4微升、约
5微升、约6微升、约7微升、约8微升、约9微升、约10微升、约11微升、约12微升、约13微升、约
14微升、约15微升、约16微升、约17微升、约18微升、约19微升、约20微升、约21微升、约22微升、约23微升、约24微升或约25微升。在一些实施方式中，样品为约1至约150微升或更少、或约1至约25微升或更少。
5微升、约6微升、约7微升、约8微升、约9微升、约10微升、约11微升、约12微升、约13微升、约
14微升、约15微升、约16微升、约17微升、约18微升、约19微升、约20微升、约21微升、约22微升、约23微升、约24微升或约25微升。在一些实施方式中，样品为约1至约150微升或更少、或约1至约25微升或更少。
[0540] 除即时设备外的一些仪器(诸如Abbott Laboratories仪器 和其它核心实验室仪器)可能能够测量样品中高于或大于50,000pg/mL的GFAP水平。
[0541] 其它检测方法包括使用纳米孔装置或纳米井装置或可以适于在纳米孔装置或纳米井装置上使用，例如用于单分子检测。纳米孔装置的实例描述于国际专利公开号WO 2016/161402中，其在此通过引用整体并入。纳米井装置的实例描述于国际专利公开号WO
2016/161400中，其在此通过引用整体并入。单分子检测的其他装置和方法也可以适合于采用。
2016/161400中，其在此通过引用整体并入。单分子检测的其他装置和方法也可以适合于采用。
[0542] 9.GFAP抗体
[0543] 本文描述的方法可以使用特异性结合胶质细胞原纤维酸性蛋白(“GFAP”)(或其片段)的分离的抗体，称之为“GFAP抗体”。GFAP抗体可用于评估作为创伤性脑损伤的量度的GFAP状态、检测样品中GFAP的存在、定量样品中存在的GFAP的量、或检测样品中GFAP的存在并定量其量。
[0544] a.胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)
[0545] 胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)是一种50kDa的胞浆内丝状蛋白，构成星形胶质细胞中细胞骨架的一部分，它已被证明是星形细胞来源的最具特异性的标记物。GFAP蛋白质由人类中的GFAP基因编码。GFAP是成熟星形胶质细胞的主要中间丝。在分子的中央棒状结构域中，GFAP与其它中间丝共有大量结构同源性。GFAP通过为星形胶质细胞过程提供结构稳定性来参与星形胶质细胞的活动性和形状。胶质细胞原纤维酸性蛋白及其分解产物(GFAP-BDP)是在创伤性脑损伤(TBI)后作为病理生理反应的一部分释放到血液中的脑特异性蛋白。在创伤、遗传病症或化学物质对人类CNS造成损伤之后，星形胶质细胞增殖并显示出广泛的细胞体肥大和过程，且GFAP明显上调。相比之下，随着星形胶质细胞恶性增加，存在GFAP产生的渐进损失。也可以在以下中检测到GFAP：施万细胞(Schwann cell)、肠胶质细胞、唾液腺赘生物、转移性肾癌、会厌软骨、垂体细胞、未成熟少突胶质细胞、乳头状脑膜瘤和乳腺肌上皮细胞。
[0546] 人类GFAP可具有以下氨基酸序列：
[0547] MERRRITSAARRSYVSSGEMMVGGLAPGRRLGPGTRLSLARMPPPLPTRVDFSLAGALNAGFKETRASERAEMMELNDRFASYIEKVRFLEQQNKALAAELNQLRAKEPTKLADVYQAELRELRLRLDQLTANSARLEVERDNLAQDLATVRQKLQDETNLRLEAENNLAAYRQEADEATLARLDLERKIESLEEEIRFLRKIHEEEVRELQEQLARQQVHVELDVAKPDLTAALKEIRTQYEAMASSNMHEAEEWYRSKFADLTDAAARNAELLRQAKHEANDYRRQLQSLTCDLESLRGTNESLERQMREQEERHVREAASYQEALARLEEEGQSLKDEMARHLQEYQDLLNVKLALDIEIATYRKLLEGEENRITIPVQTFSNLQIRETSLDTKSVSEGHLKRNIVVKTVEMRDGEVIKESKQEHKDVM(SEQ ID NO:2)。
[0548] 人类GFAP可以是SEQ ID NO：2的片段或变体。GFAP的片段的长度可以在5与400个氨基酸之间、10与400个氨基酸之间、50与400个氨基酸之间、60与400个氨基酸之间、65与400个氨基酸之间、100与400个氨基酸之间、150与400个氨基酸之间、100与300个氨基酸之间或200与300个氨基酸之间。片段可以包含来自SEQ ID NO：2的多个连续氨基酸。SEQ ID NO：2的人类GFAP片段或变体可为GFAP分解产物(BDP)。GFAP BDP可为38kDa、42kDa(弱
41kDa)、47kDa(弱45kDa)；25kDa(弱23kDa)；19kDa或20kDa。
41kDa)、47kDa(弱45kDa)；25kDa(弱23kDa)；19kDa或20kDa。
[0549] 已经发现，使用至少两种结合GFAP分解产物(BDP)内的非重叠表位的抗体，例如GFAP蛋白序列的氨基酸(SEQ ID NO：2)的60-383所定义的38kDaBDP，可能有助于维持免疫测定的动态范围和低端(low end)灵敏度。一方面，至少两种抗体结合38kDa BDP的N末端附近的非重叠表位。另一方面，至少两种抗体结合SEQ ID NO：2的氨基酸60-383之间的非重叠表位。在另一方面，至少一种第一抗体(例如捕获抗体)结合在38kDa BDP的N末端附近的表位，并且至少一种第二抗体(例如检测抗体)结合不与第一抗体重叠的在38kDa BDP的中段附近的表位。在另一方面，至少一种第一抗体(例如捕获抗体)结合SEQID NO：2的氨基酸60-383之间的表位，并且至少一种第二抗体结合SEQ ID NO：2的氨基酸60-383之间不与第一抗体重叠的表位。第一抗体结合的表位的长度可以是10个氨基酸、11个氨基酸、12个氨基酸、
13个氨基酸、14个氨基酸或15个氨基酸。第二抗体结合的表位的长度可以是10个氨基酸、11个氨基酸、12个氨基酸、13个氨基酸、14个氨基酸或15个氨基酸。使用本领域已知的常规技术，本领域技术人员可以容易地确定与由SEQ ID NO：2的氨基酸60-383所定义的38kDa BDP内非重叠表位结合的抗体。
13个氨基酸、14个氨基酸或15个氨基酸。第二抗体结合的表位的长度可以是10个氨基酸、11个氨基酸、12个氨基酸、13个氨基酸、14个氨基酸或15个氨基酸。使用本领域已知的常规技术，本领域技术人员可以容易地确定与由SEQ ID NO：2的氨基酸60-383所定义的38kDa BDP内非重叠表位结合的抗体。
[0550] 同样，有可能选择其他类似抗体，以辅助维持免疫测定的动态范围和低端的灵敏度。例如，选择与38kDa BDP的N末端附近的表位结合的至少一种第一抗体(例如捕获抗体)和与38kDa BDP的中段附近的表位(例如在38kDa BDP的中段附近)结合并且不与第一抗体重叠的至少一种第二抗体(例如检测抗体)可能是有用的。其他变化也是可能的，并且可以由普通技术人员容易地测试，例如通过检查与短肽的结合来确认抗体与不同表位的结合，然后使用低校准物浓度筛选抗体对。此外，选择对GFAP的亲和力不同的抗体也可以辅助维持或增加测定的动态范围。GFAP抗体已在文献中进行了描述，并且可以商购获得。
[0551] b.GFAP识别抗体
[0552] 抗体是与GFAP、其片段、GFAP的表位或其变体结合的抗体。抗体可以是抗GFAP抗体的片段或其变体或衍生物。抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体。抗体可以是嵌合抗体、单链抗体、亲和力成熟抗体、人抗体、人源化抗体、完全人抗体或抗体片段(诸如Fab片段)，或其混合物。抗体片段或衍生物可包括F(ab')2、Fv或scFv片段。抗体衍生物可以通过模拟肽产生。此外，描述用于产生单链抗体的技术可以适用于产生单链抗体。
[0553] 抗GFAP抗体可以是嵌合抗GFAP或人源化抗GFAP抗体。在一个实施方式中，人源化抗体和嵌合抗体都是单价的。在一个实施方式中，人源化抗体和嵌合抗体均包含与Fc区连接的单个Fab区。
[0554] 人抗体可以源自噬菌体展示技术或源自表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠。人抗体可以作为人体内免疫应答的结果产生并且被分离。参见例如Funaro等人,BMC Biotechnology,2008(8):85。因此，抗体可以是人而非动物谱系的产物。因为它是人源性的，所以可以最小化对自身抗原反应的风险。另选地，标准酵母展示文库和展示技术可用于选择和分离人抗GFAP抗体。例如，天然人单链可变片段(scFv)的文库可用于选择人抗GFAP抗体。转基因动物可用于表达人抗体。
[0555] 人源化抗体可以是结合所需抗原的来自非人物种的抗体分子，其具有一个或多个来自非人物种的互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的框架区。
[0556] 所述抗体与已知抗体的区别在于它具有与本领域中已知的抗体不同的生物学功能。
[0557] (1)表位
[0558] 抗体可以免疫特异性结合GFAP(SEQ ID NO：2)、其片段或其变体。抗体可以免疫特异性识别并结合表位区域内的至少三个氨基酸、至少四个氨基酸、至少五个氨基酸、至少六个氨基酸、至少七个氨基酸、至少八个氨基酸、至少九个氨基酸或至少十个氨基酸。抗体可以免疫特异性识别并结合这样的表位，所述表位具有表位区域的至少三个连续氨基酸、至少四个连续氨基酸、至少五个连续氨基酸、至少六个连续氨基酸、至少七个连续氨基酸、至少八个连续氨基酸、至少九个连续氨基酸或至少十个连续氨基酸。
[0559] c.示例性的抗GFAP抗体
[0560] 可以使用本文所述的技术以及使用本领域已知的常规技术来产生抗GFAP抗体。在一些实施方案中，抗GFAP抗体可以是未缀合的GFAP抗体，例如可从以下获得的GFAP抗体：Dako(目录号：M0761)、ThermoFisher Scientific(目录号：MA5-12023、A-21282、13-0300、MA1-19170、MA1-19395、MA5-15086、MA5-16367、MA1-35377、MA1-06701、或MA1-20035)、AbCam(目录号：ab10062、ab4648、ab68428、ab33922、ab207165、ab190288、ab115898、或ab21837)、EMDMillipore(目录号：FCMAB257P、MAB360、MAB3402、04-1031、04-1062、MAB5628)、Santa Cruz(目录号：sc-166481、sc-166458、sc-58766、sc-56395、sc-51908、sc-
135921、sc-71143、sc-65343、或sc-33673)、Sigma-Aldrich(目录号：G3893或G6171)或Sino Biological Inc.(目录号：100140-R012-50)。可以将抗GFAP抗体与荧光团偶联，例如可从如下获得的缀合的GFAP抗体：ThermoFisherScientific(目录号：A-21295或A-21294)、EMD Millipore(目录号：MAB3402X、MAB3402B、MAB3402B、或MAB3402C3)或AbCam(目录号：
ab49874或ab194325)。可以在本文描述的方法中使用的其他GFAP抗体包括在WO2018/
081649中描述的那些，其内容通过引用并入本文。
135921、sc-71143、sc-65343、或sc-33673)、Sigma-Aldrich(目录号：G3893或G6171)或Sino Biological Inc.(目录号：100140-R012-50)。可以将抗GFAP抗体与荧光团偶联，例如可从如下获得的缀合的GFAP抗体：ThermoFisherScientific(目录号：A-21295或A-21294)、EMD Millipore(目录号：MAB3402X、MAB3402B、MAB3402B、或MAB3402C3)或AbCam(目录号：
ab49874或ab194325)。可以在本文描述的方法中使用的其他GFAP抗体包括在WO2018/
081649中描述的那些，其内容通过引用并入本文。
[0561] d.抗体制备/生产
[0562] 抗体可以通过多种技术，包括本领域技术人员熟知的那些技术中的任何一种制备。一般来讲，抗体可以通过细胞培养技术产生，所述细胞培养技术包括经由常规技术或通过将抗体基因、重链和/或轻链转染到合适的细菌或哺乳动物细胞宿主中以允许产生抗体(其中抗体可以是重组的)来进行单克隆抗体的生成。各种形式的术语“转染”旨在涵盖通常用于将外源DNA引入到原核或真核宿主细胞中的广泛多种技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-聚葡萄糖转染等。尽管有可能在原核或真核宿主细胞中表达抗体，但优选在真核细胞且最优选哺乳动物宿主细胞中表达抗体，因为此类真核细胞(且特别是哺乳动物细胞)相比于原核细胞更有可能组装和分泌经过正确折叠且具有免疫学活性的抗体。
[0563] 用于表达重组抗体的示例性哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)(包括Urlaub和Chasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216-4220(1980)中所述的dhfr-CHO细胞)，其与DHFR可选择标记物一起使用，例如如Kaufman和Sharp,J.Mol.Biol,159:601-621(1982)中所述；NS0骨髓瘤细胞；COS细胞和SP2细胞。当将编码抗体基因的重组表达载体引入到哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养一段足以允许抗体在宿主细胞中表达或者更优选使抗体分泌到宿主细胞所生长的培养基中的时间来产生抗体。抗体可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收。
[0564] 宿主细胞也可用于产生功能性抗体片段，诸如Fab片段或scFv分子。应当理解，可以对上述程序进行变型。例如，可能合乎需要的是用编码抗体的轻链和/或重链的功能性片段的DNA转染宿主细胞。重组DNA技术也可用于除去一些或全部编码并非结合感兴趣抗原所必需的轻链和重链中的任一个或两者的DNA。所述抗体也涵盖由此类截短DNA分子表达的分子。此外，可通过用标准化学交联方法使抗体与第二抗体交联来产生双功能抗体，其中一个重链和一个轻链是抗体(即结合人GFAP)且另一重链和另一轻链对除人GFAP以外的抗原具有特异性。
[0565] 在用于重组表达抗体、或其抗原结合部分的一个优选系统中，通过磷酸钙介导的转染法将编码抗体重链和抗体轻链两者的重组表达载体引入到dhfr-CHO细胞中。在重组表达载体内，使抗体重链和轻链基因各自可操作地连接至CMV增强子/AdMLP启动子调控元件以驱动基因高度转录。重组表达载体也带有DHFR基因，其允许使用甲氨蝶呤选择/扩增来选择已用载体转染的CHO细胞。培养所选择的转化株宿主细胞以便允许表达抗体重链和轻链并且从培养基中回收完整抗体。将标准分子生物学技术用于制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化株、培养宿主细胞，并且从培养基中回收抗体。更进一步地，合成重组抗体的方法可以通过在适合培养基中培养宿主细胞，直到合成重组抗体进行。所述方法可以进一步包括从培养基中分离重组抗体。
[0566] 制备单克隆抗体的方法涉及制备能够产生具有所需特异性的抗体的永生细胞系。此类细胞系可以由从免疫动物获得的脾细胞产生。可以用GFAP或其片段和/或变体免疫动物。用于免疫动物的肽可以包含编码人Fc(例如片段可结晶区)或人抗体的尾区的氨基酸。
然后可以通过例如与骨髓瘤细胞融合配偶体的融合使脾细胞永生化。可以采用多种融合技术。例如，可以将脾细胞和骨髓瘤细胞与非离子洗涤剂合并几分钟，然后以低密度接种在支持杂交细胞生长但不支持骨髓瘤细胞生长的选择性培养基上。一种这样的技术使用次黄嘌呤、氨基喋呤、胸苷(HAT)选择。另一种技术包括电融合。经过足够的时间，通常约1至2周后，观察到杂交体的集落。选择单一集落并测试其培养物上清液对多肽的结合活性。可以使用具有高反应性和特异性的杂交瘤。
然后可以通过例如与骨髓瘤细胞融合配偶体的融合使脾细胞永生化。可以采用多种融合技术。例如，可以将脾细胞和骨髓瘤细胞与非离子洗涤剂合并几分钟，然后以低密度接种在支持杂交细胞生长但不支持骨髓瘤细胞生长的选择性培养基上。一种这样的技术使用次黄嘌呤、氨基喋呤、胸苷(HAT)选择。另一种技术包括电融合。经过足够的时间，通常约1至2周后，观察到杂交体的集落。选择单一集落并测试其培养物上清液对多肽的结合活性。可以使用具有高反应性和特异性的杂交瘤。
[0567] 可以从生长的杂交瘤集落的上清液中分离单克隆抗体。此外，可以采用各种技术来提高产量，诸如将杂交瘤细胞系注射到合适的脊椎动物宿主(诸如小鼠)的腹膜腔中。然后可以从腹水或血液中收获单克隆抗体。可以通过常规技术，诸如色谱法、凝胶过滤、沉淀和提取从抗体中除去污染物。亲和色谱法是可以在纯化抗体的过程中使用的方法的实例。
[0568] 蛋白水解酶木瓜蛋白酶优先裂解IgG分子以产生数个片段，其中两个(F(ab)片段)各自包含包括完整抗原结合位点的共价异二聚体。胃蛋白酶能够裂解IgG分子以提供几个片段，包括包含两个抗原结合位点的F(ab')2片段。
[0569] Fv片段可以通过IgM的优先蛋白水解裂解以及偶尔蛋白水解裂解IgG或IgA免疫球蛋白分子来产生。可以使用重组技术衍生Fv片段。Fv片段包括非共价VH::VL异二聚体，其包括保留了天然抗体分子的大部分抗原识别能力和结合能力的抗原结合位点。
[0570] 抗体、抗体片段或衍生物可包含分别插置在重链框架(“FR”)组和轻链框架(“FR”)组之间的重链互补决定区(“CDR”)组和轻链互补决定区(“CDR”)组，所述框架组为CDR提供支撑并限定CDR相对于彼此的空间关系。CDR组可含有重链或轻链V区的三个高变区。
[0571] 可以使用产生或分离具有必需特异性的抗体的其它合适方法，包括但不限于从肽或蛋白质文库(例如但不限于噬菌体、核糖体、寡核苷酸、RNA、cDNA、酵母等展示库)中选择重组抗体的方法；例如，如使用本领域中已知的方法可从各种商业供应商诸如Cambridge Antibody Technologies(Cambridgeshire,UK)、MorphoSys(Martinsreid/Planegg,Del.)、Biovation(Aberdeen,Scotland,UK)BioInvent(Lund,Sweden)获得的。参见美国专利号4,704,692、5,723,323、5,763,192、5,814,476、5,817,483、5,824,514、5,976,862。另选的方法依赖于免疫能够产生人抗体谱系的转基因动物(例如SCID小鼠，Nguyen等人(1997)Microbiol.Immunol.41:901-907；Sandhu等人(1996)Crit.Rev.Biotechnol.16:95-118；
Eren等人(1998)Immunol.93:154-161)，如本领域中已知的和/或如本文所述的。此类技术包括但不限于核糖体展示(Hanes等人(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94:4937-4942；
Hanes等人(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95:14130-14135)；单细胞抗体产生技术(例如选择的淋巴细胞抗体方法(“SLAM”)(美国专利号5,627,052，Wen等人(1987)J.Immunol.17:
887-892；Babcook等人(1996)Proc.Natl.Acad Sci.USA 93:7843-7848)；凝胶微滴和流式细胞术(Powell等人(1990)Biotechnol.8:333-337；One Cell Systems,(Cambridge,Mass).；Gray等人(1995)J.Imm.Meth.182:155-163；Kenny等人(1995)Bio/Technol.13:
787-790)；B细胞选择(Steenbakkers等人(1994)Molec.Biol.Reports 19:125-134
(1994))。
Eren等人(1998)Immunol.93:154-161)，如本领域中已知的和/或如本文所述的。此类技术包括但不限于核糖体展示(Hanes等人(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94:4937-4942；
Hanes等人(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95:14130-14135)；单细胞抗体产生技术(例如选择的淋巴细胞抗体方法(“SLAM”)(美国专利号5,627,052，Wen等人(1987)J.Immunol.17:
887-892；Babcook等人(1996)Proc.Natl.Acad Sci.USA 93:7843-7848)；凝胶微滴和流式细胞术(Powell等人(1990)Biotechnol.8:333-337；One Cell Systems,(Cambridge,Mass).；Gray等人(1995)J.Imm.Meth.182:155-163；Kenny等人(1995)Bio/Technol.13:
787-790)；B细胞选择(Steenbakkers等人(1994)Molec.Biol.Reports 19:125-134
(1994))。
[0572] 亲和力成熟抗体可以通过本领域中已知的多种程序中的任一种产生。例如，参见Marks等人,BioTechnology 10:779-783(1992)描述了通过VH和VL结构域改组进行的亲和力成熟。对CDR和/或框架残基的随机诱变由以下文献描述：Barbas等人,Proc.Nat.Acad.Sci.USA,91:3809-3813(1994)；Schier等人.,Gene,169:147-155(1995)；
Yelton等人,J.Immunol.,155:1994-2004(1995)；Jackson等人,J.Immunol.,154(7):3310-
3319(1995)；Hawkins等人,J.Mol.Biol,226:889-896(1992)。在选择性诱变位置和在接触或超突变位置由活性增强氨基酸残基进行的选择性突变描述于美国专利号6,914,128B1。
Yelton等人,J.Immunol.,155:1994-2004(1995)；Jackson等人,J.Immunol.,154(7):3310-
3319(1995)；Hawkins等人,J.Mol.Biol,226:889-896(1992)。在选择性诱变位置和在接触或超突变位置由活性增强氨基酸残基进行的选择性突变描述于美国专利号6,914,128B1。
[0573] 抗体变体还可以利用以下方式制备：将编码抗体的多核苷酸递送至合适的宿主，诸如以提供在其乳汁中产生此类抗体的转基因动物或哺乳动物，诸如山羊、牛、马、绵羊等来制备。这些方法在本领域中是已知的并且例如描述于美国专利号5,827,690、5,849,992、4,873,316、5,849,992、5,994,616、5,565,362和5,304,489中。
[0574] 抗体变体也可通过以下方式制备：递送多核苷酸以提供转基因植物和培养的植物细胞(例如但不限于烟草、玉米和浮萍)，它们在植物部分或由其培养的细胞中产生此类抗体、特定部分或变体。例如，Cramer等人(1999)Curr.Top.Microbiol.Immunol 240:95-118和其中引用的参考文献描述了例如使用诱导型启动子产生表达大量重组蛋白的转基因烟草叶。转基因玉米已用于以商业生产水平表达哺乳动物蛋白质，其生物活性与在其它重组系统中产生的或从天然来源纯化的那些相当。参见例如Hood等人,Adv.Exp.Med.Biol.(1999)464:127-147和其中引用的参考文献。抗体变体也可以由包括抗体片段，诸如单链抗体(scFv)的转基因植物种子，包括烟草种子和马铃薯块茎大量产生。参见例如Conrad等人(1998)Plant Mol.Biol.38:101-109和其中引用的参考文献。因此，根据已知方法，也可以使用转基因植物产生抗体。
[0575] 可以例如通过添加外源性序列来修饰免疫原性或降低、增强或修饰结合、亲和力、缔合速率、解离速率、亲合力、特异性、半衰期或任何其它合适的特征来产生抗体衍生物。一般来讲，保持非人或人CDR序列的一部分或全部，同时用人或其它氨基酸替换可变区和恒定区的非人序列。
[0576] 小抗体片段可以是具有两个抗原结合位点的双体，其中片段包含于同一多肽链(VH VL)中与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)。参见例如EP 404,097；WO 93/11161；和Hollinger等人,(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448。通过使用太短而不允许在相同链上的两个结构域之间配对的接头，迫使结构域与另一链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。还参见授予Chen等人的美国专利号6,632,926，其通过引用整体并入本文，并且公开了抗体变体，所述抗体变体具有一个或多个插入到亲本抗体的高变区中的氨基酸并且对靶抗原的结合亲和力比亲本抗体对抗原的结合亲和力强至少约2倍。
[0577] 抗体可以是线性抗体。用于制备线性抗体的程序在本领域中是已知的并描述于Zapata等人,(1995)Protein Eng.8(10):1057-1062。简而言之，这些抗体包含一对串联Fd片段(VH-CH1-VH-CH1)，所述片段形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性的或单特异性的。
[0578] 可以通过已知方法从重组细胞培养物中回收和纯化抗体，所述已知方法包括但不限于蛋白A纯化、硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阳离子交换色谱法、磷酸纤维素色谱法、疏水相互作用色谱法、亲和色谱法、羟基磷灰石色谱法和凝集素色谱法。高效液相色谱法(“HPLC”)也可用于纯化。
[0579] 可检测地标记抗体可能是有用的。用于将抗体缀合至这些试剂的方法在本领域中是已知的。仅出于说明的目的，可以用可检测部分，诸如放射性原子、发色团、荧光团等标记抗体。此类标记的抗体可以在体内或在分离的测试样品中用于诊断技术。它们可以与细胞因子、配体、另一种抗体连接。用于偶联抗体以实现抗肿瘤作用的合适试剂包括细胞因子，诸如白介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子(TNF)；用于光动力疗法中的光敏剂，包括酞菁四磺酸铝(III)、血卟啉和酞菁；放射性核素，诸如碘-131(131I)、钇-90(90Y)、铋-212(212Bi)、铋-213(213Bi)、锝-99m(99mTc)、铼-186(186Re)和铼-188(188Re)；抗生素，诸如多柔比星、阿霉素、柔红霉素、甲氨蝶呤、道诺霉素、新抑癌素和卡铂；细菌、植物和其它毒素，诸如白喉毒素、假单胞菌外毒素A、葡萄球菌肠毒素A、相思豆毒素蛋白-A毒素、蓖麻毒素A(去糖基化蓖麻毒素A和天然蓖麻毒素A)、TGF-α毒素、来自中华眼镜蛇(眼镜蛇(naja naja atra))的细胞毒素和白树毒素(一种植物毒素)；来自植物、细菌和真菌的核糖体失活蛋白，诸如局限曲菌素(一种由局限曲霉(Aspergillus restrictus)产生的核糖体失活蛋白)、皂草素(一种来自石碱草(Saponaria officinalis)的核糖体失活蛋白)和RNase；酪氨酸激酶抑制剂；
ly207702(二氟化嘌呤核苷)；含有反囊性剂的脂质体(例如反义寡核苷酸、编码毒素的质粒、甲氨蝶呤等)；和其它抗体或抗体片段，诸如F(ab)。
ly207702(二氟化嘌呤核苷)；含有反囊性剂的脂质体(例如反义寡核苷酸、编码毒素的质粒、甲氨蝶呤等)；和其它抗体或抗体片段，诸如F(ab)。
[0580] 经由使用杂交瘤技术、选择的淋巴细胞抗体方法(SLAM)、转基因动物和重组抗体文库进行的抗体产生在下面更详细地描述。
[0581] (1)使用杂交瘤技术的抗GFAP单克隆抗体
[0582] 单克隆抗体可以使用本领域中已知的多种技术(包括使用杂交瘤、重组体和噬菌体展示技术或其组合)来制备。例如，可以使用杂交瘤技术产生单克隆抗体，所述杂交瘤技术包括本领域中已知的并且例如在以下中教导的那些：Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,第二版,(Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,1988)；Hammerling等人,In MonoclonalAntibodies and T-Cell Hybridomas,(Elsevier,N.Y.,1981)。还应注意，如本文所用的术语“单克隆抗体”并不限于通过杂交瘤技术产生的抗体。术语“单克隆抗体”是指源自单一克隆的抗体，包括任何真核生物、原核生物或噬菌体克隆，而不是指产生所述抗体的方法。
[0583] 产生单克隆抗体的方法以及由所述方法产生的抗体可以包括培养分泌抗体的杂交瘤细胞，其中杂交瘤优选通过以下方式产生：将从用GFAP免疫的动物，例如大鼠或小鼠分离的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，然后筛选由融合产生的杂交瘤中分泌能够结合多肽的抗体的杂交瘤克隆。简而言之，可以用GFAP抗原免疫大鼠。在优选的实施方式中，将GFAP抗原与佐剂一起施用以刺激免疫应答。此类佐剂包括完全或不完全弗氏佐剂、RIBI(胞壁酰二肽)或ISCOM(免疫刺激复合物)。此类佐剂可以通过将多肽隔离在局部储库中来保护多肽免于快速分散，或者它们可以含有刺激宿主分泌对巨噬细胞和免疫系统的其它组分具有趋化性的因子的物质。优选地，如果正在施用多肽，则免疫程序将涉及多肽的两次或更多次施用，散布于数周内；然而，也可以使用多肽的单次施用。
[0584] 在用GFAP抗原免疫动物后，可以从动物获得抗体和/或产生抗体的细胞。通过将动物放血或处死，从动物获得含有抗GFAP抗体的血清。可以按从动物获得的原样使用血清，可以从血清中获得免疫球蛋白部分，或者可以从血清中纯化抗GFAP抗体。以这种方式获得的血清或免疫球蛋白是多克隆的，因此具有异质的一系列特性。
[0585] 一旦检测到免疫应答，例如，在大鼠血清中检测到对抗原GFAP具有特异性的抗体，就收获大鼠脾并且分离脾细胞。然后通过熟知的技术使脾细胞与任何适合骨髓瘤细胞(例如来自可从American Type Culture Collection(ATCC,Manassas,Va.,US)获得的细胞系SP20的细胞)融合。通过限制稀释法选择和克隆杂交瘤。然后通过本领域中已知的方法测定杂交瘤克隆中分泌能够结合GFAP的抗体的细胞。可以通过用阳性杂交瘤克隆免疫大鼠来产生通常含有高水平抗体的腹水。
[0586] 在另一个实施方式中，产生抗体的永生化杂交瘤可以从免疫化动物制备。在免疫之后，将动物处死并且将脾B细胞按本领域熟知的那样融合至永生化骨髓瘤细胞。参见例如Harlow和Lane，同上。在优选的实施方式中，骨髓瘤细胞不分泌免疫球蛋白多肽(非分泌性细胞系)。在融合和抗生素选择后，使用GFAP或其部分或表达GFAP的细胞筛选杂交瘤。在优选的实施方式中，使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)或放射免疫测定法(RIA)，优选ELISA进行初始筛选。PCT公开号WO 00/37504中提供了ELISA筛选的实例。
[0587] 选择产生抗GFAP抗体的杂交瘤、将其克隆并且进一步针对所需特征，包括稳健的杂交瘤生长、高抗体产生和所需的抗体特征进行筛选。杂交瘤可以在同系动物、缺乏免疫系统的动物(例如裸鼠)中体内培养和扩增，或者在细胞培养物中体外培养和扩增。选择、克隆和扩增杂交瘤的方法是本领域普通技术人员所熟知的。
[0588] 在优选的实施方式中，杂交瘤是大鼠杂交瘤。在另一个实施方式中，杂交瘤在非人、非大鼠物种，诸如小鼠、绵羊、猪、山羊、牛或马中产生。在又另一个优选的实施方式中，杂交瘤是人杂交瘤，其中人非分泌性骨髓瘤与表达抗GFAP抗体的人细胞融合。
[0589] 可通过已知技术产生识别特定表位的抗体片段。例如，可以通过使用酶(诸如木瓜蛋白酶(以产生两个相同的Fab片段)或胃蛋白酶(以产生F(ab')2片段))对免疫球蛋白分子进行蛋白水解裂解来产生Fab和F(ab')2片段。IgG分子的F(ab')2片段保留了较大(“亲本”)IgG分子的两个抗原结合位点，包括轻链(含有可变轻链区和恒定轻链区)、重链的CH1结构域、和亲本IgG分子的形成二硫键的铰链区。因此，F(ab')2片段仍然能够交联抗原分子，如亲本IgG分子。
[0590] (2)使用SLAM的抗GFAP单克隆抗体
[0591] 在另一个方面，使用本领域中称为选择的淋巴细胞抗体方法(SLAM)的方法，从单个分离的淋巴细胞产生重组抗体，如美国专利号5,627,052；PCT公开号WO 92/02551；和Babcook等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93:7843-7848(1996)中所述。在该方法中，使用抗原特异性溶血空斑测定法筛选分泌感兴趣抗体的单细胞，例如源自任何一只免疫动物的淋巴细胞，其中使用接头(诸如生物素)将抗原GFAP、GFAP的亚基或其片段与绵羊红细胞偶联，并且用于鉴定分泌对GFAP具有特异性的抗体的单细胞。在鉴定感兴趣抗体分泌细胞后，通过逆转录酶-PCR(RT-PCR)从细胞中挽救重链和轻链可变区cDNA，然后这些可变区可以在哺乳动物宿主细胞，诸如COS或CHO细胞中、在适当的免疫球蛋白恒定区(例如人恒定区)的背景下表达。用源自体内选择的淋巴细胞的扩增的免疫球蛋白序列转染的宿主细胞然后可以在体外进行进一步的分析和选择，例如，通过淘选转染的细胞以分离表达针对GFAP的抗体的细胞。扩增的免疫球蛋白序列可以进一步在体外操纵，诸如通过体外亲和力成熟方法。参见例如，PCT公开号WO 97/29131和PCT公开号WO 00/56772。
[0592] (3)使用转基因动物的抗GFAP单克隆抗体
[0593] 在另一个实施方式中，通过用GFAP抗原免疫包含一些或全部人免疫球蛋白基因座的非人动物来产生抗体。在一个实施方式中，非人动物是 转基因小鼠，一种包含人免疫球蛋白基因座的较大片段且缺乏小鼠抗体产生的工程化小鼠品系。参见例如Green等人,Nature Genetics,7:13-21(1994)和美国专利号5,916,771、5,939,598、5,
985,615、5,998,209、6,075,181、6,091,001、6,114,598和6,130,364。还参见PCT公开号WO
91/10741、WO94/02602、WO 96/34096、WO 96/33735、WO 98/16654、WO 98/24893、WO98/
50433、WO 99/45031、WO 99/53049、WO 00/09560和WO 00/37504。 转基
因小鼠产生完全人抗体的成人样人谱系，并且产生抗原特异性人单克隆抗体。
转基因小鼠通过引入人重链基因座和x轻链基因座的兆碱基大小的种
系构型YAC片段而含有约80％的人抗体谱系。参见Mendez等人,Nature Genetics,15:146-
156(1997)；Green和Jakobovits,J.Exp.Med.,188:483-495(1998)，其公开在此通过引用并入。
985,615、5,998,209、6,075,181、6,091,001、6,114,598和6,130,364。还参见PCT公开号WO
91/10741、WO94/02602、WO 96/34096、WO 96/33735、WO 98/16654、WO 98/24893、WO98/
50433、WO 99/45031、WO 99/53049、WO 00/09560和WO 00/37504。 转基
因小鼠产生完全人抗体的成人样人谱系，并且产生抗原特异性人单克隆抗体。
转基因小鼠通过引入人重链基因座和x轻链基因座的兆碱基大小的种
系构型YAC片段而含有约80％的人抗体谱系。参见Mendez等人,Nature Genetics,15:146-
156(1997)；Green和Jakobovits,J.Exp.Med.,188:483-495(1998)，其公开在此通过引用并入。
[0594] (4)使用重组抗体文库的抗GFAP单克隆抗体
[0595] 体外方法也可用于制备抗体，其中筛选抗体文库以鉴定具有所需的GFAP结合特异性的抗体。关于重组抗体文库的这种筛选的方法在本领域中是熟知的，且包括在以下中描述的方法：例如美国专利号5,223,409(Ladner等人)；PCT公开号WO 92/18619(Kang等人)；PCT公开号WO 91/17271(Dower等人)；PCT公开号WO 92/20791(Winter等人)；PCT公开号WO
92/15679(Markland等人)；PCT公开号WO 93/01288(Breitling等人)；PCT公开号WO 92/
01047(McCafferty等人)；PCT公开号WO 92/09690(Garrard等人)；Fuchs等人,Bio/
Technology,9:1369-1372(1991)；Hay等人,Hum.Antibod Hybridomas,3:81-85(1992)；
Huse等人.,Science,246:1275-1281(1989)；McCafferty等人,Nature,348:552-554
(1990)；Griffiths等人.,EMBO J.,12:725-734(1993)；Hawkins等人.,J.Mol.Biol.,226:
889-896(1992)；Clackson等人.,Nature,352:624-628(1991)；Gram等人.,
Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:3576-3580(1992)；Garrard等人.,Bio/Technology,9:1373-
1377(1991)；Hoogenboom等人.,Nucl.Acids Res.,19:4133-4137(1991)；Barbas等人.,Proc.Natl.Acad Sci.USA,88:7978-7982(1991)；美国专利申请公开号2003/0186374；和PCT公开号WO 97/29131，其各自内容通过引用并入本文。
92/15679(Markland等人)；PCT公开号WO 93/01288(Breitling等人)；PCT公开号WO 92/
01047(McCafferty等人)；PCT公开号WO 92/09690(Garrard等人)；Fuchs等人,Bio/
Technology,9:1369-1372(1991)；Hay等人,Hum.Antibod Hybridomas,3:81-85(1992)；
Huse等人.,Science,246:1275-1281(1989)；McCafferty等人,Nature,348:552-554
(1990)；Griffiths等人.,EMBO J.,12:725-734(1993)；Hawkins等人.,J.Mol.Biol.,226:
889-896(1992)；Clackson等人.,Nature,352:624-628(1991)；Gram等人.,
Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:3576-3580(1992)；Garrard等人.,Bio/Technology,9:1373-
1377(1991)；Hoogenboom等人.,Nucl.Acids Res.,19:4133-4137(1991)；Barbas等人.,Proc.Natl.Acad Sci.USA,88:7978-7982(1991)；美国专利申请公开号2003/0186374；和PCT公开号WO 97/29131，其各自内容通过引用并入本文。
[0596] 重组抗体文库可来自用GFAP或GFAP的一部分免疫的受试者。另选地，重组抗体文库可来自初试受试者，即尚未用GFAP免疫的受试者，诸如来自尚未用人GFAP免疫的人受试者的人抗体文库。通过用包括人GFAP的肽筛选重组抗体文库以由此选择识别GFAP的那些抗体来选择抗体。用于进行这种筛选和选择的方法在本领域中是熟知的，诸如先前段落中的参考文献中所述。为选择对GFAP具有特定结合亲和力的抗体，诸如以特定Koff速率常数自人GFAP解离的抗体，可使用本领域中已知的表面等离子体共振方法来选择具有所需Koff速率常数的抗体。为选择对hGFAP具有特定中和活性的抗体，诸如具有特定IC50的抗体，可使用本领域中已知用于评估对GFAP活性的抑制的标准方法。
[0597] 在一个方面，本公开涉及一种结合人GFAP的分离的抗体、或其抗原结合部分。优选地，抗体是中和抗体。在各种实施方式中，抗体是重组抗体或单克隆抗体。
[0598] 例如，也可使用本领域中已知的各种噬菌体展示方法来产生抗体。在噬菌体展示方法中，将功能性抗体结构域展示于携带编码它们的多核苷酸序列的噬菌体颗粒的表面上。这种噬菌体可用于展示自谱系或组合抗体文库(例如人或鼠类)表达的抗原结合结构域。可用抗原，例如使用标记的抗原或结合于或捕获于固体表面或珠粒的抗原来选择或鉴定表达结合感兴趣抗原的抗原结合结构域的噬菌体。这些方法中使用的噬菌体通常是丝状噬菌体，其包括fd和M13结合结构域，由具有重组融合至噬菌体基因III或基因VIII蛋白质的Fab、Fv或二硫键稳定的Fv抗体结构域的噬菌体表达。可用于制备抗体的噬菌体展示方法的实例包括在以下中公开的方法：Brinkmann等人,J.Immunol.Methods,182:41-50(1995)；Ames等人,J.Immunol.Methods,184:177-186(1995)；Kettleborough等人,Eur.J.Immunol,
24:952-958(1994)；Persic等人,Gene,187:9-18(1997)；Burton等人,Advances in Immunology,57:191-280(1994)；PCT公开号WO 92/01047；PCT公开号WO 90/02809；WO 91/
10737；WO 92/01047；WO 92/18619；WO93/11236；WO 95/15982；WO 95/20401；和美国专利号
5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,
698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743和5,969,108。
24:952-958(1994)；Persic等人,Gene,187:9-18(1997)；Burton等人,Advances in Immunology,57:191-280(1994)；PCT公开号WO 92/01047；PCT公开号WO 90/02809；WO 91/
10737；WO 92/01047；WO 92/18619；WO93/11236；WO 95/15982；WO 95/20401；和美国专利号
5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,
698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743和5,969,108。
[0599] 如上述参考文献中所述，在噬菌体选择后，可从噬菌体分离抗体编码区并用于产生完整抗体，包括人抗体，或任何其它所需的抗原结合片段，并且在任何所需宿主中表达，所述宿主包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母和细菌，例如如下文所述。例如，也可使用本领域中已知的方法来采用用于重组产生Fab、Fab'和F(ab')2片段的技术，诸如以下中所公开的技术：PCT公开号WO 92/22324；Mullinax等人,BioTechniques,12(6):864-869(1992)；Sawai等人,Am.J.Reprod.Immunol,34:26-34(1995)；和Better等人,Science,
240:1041-1043(1988)。可用于产生单链Fv和抗体的技术的实例包括美国专利号4,946,778和5,258,498；Huston等人,Methods in Enzymology,203:46-88(1991)；Shu等人,
Proc.Natl.Acad,Sci.USA,90:7995-7999(1993)；和Skerra等人,Science,240:1038-1041(1988)中所述的技术。
240:1041-1043(1988)。可用于产生单链Fv和抗体的技术的实例包括美国专利号4,946,778和5,258,498；Huston等人,Methods in Enzymology,203:46-88(1991)；Shu等人,
Proc.Natl.Acad,Sci.USA,90:7995-7999(1993)；和Skerra等人,Science,240:1038-1041(1988)中所述的技术。
[0600] 作为通过噬菌体展示来筛选重组抗体文库的替代方案，本领域中已知用于筛选大型组合文库的其它方法可应用于鉴定抗体。如PCT公开号WO 98/31700(Szostak和Roberts)和Roberts和Szostak,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94:12297-12302(1997)中所述，一类替代性表达系统是重组抗体文库表达为RNA-蛋白质融合物的表达系统。在这个系统中，通过在体外翻译于3'末端处带有嘌呤霉素(一种肽基受体抗生素)的合成mRNA来在mRNA与其编码的肽或蛋白质之间产生共价融合物。因此，可基于所编码的肽或蛋白质(例如抗体或其部分)的特性(诸如抗体或其部分与双重特异性抗原的结合)，自mRNA的复杂混合物(例如组合文库)富集特异性mRNA。可通过如上所述的重组方式(例如在哺乳动物宿主细胞中)表达从筛选此类文库所回收的编码抗体或其部分的核酸序列，并且另外可通过对突变已引入到最初选择的序列中的mRNA-肽融合物进行更多轮筛选或通过如上所述的用于重组抗体的体外亲和力成熟的其它方法来经受进一步亲和力成熟。该方法的优选实例是PROfusion展示技术。
[0601] 在另一种途径中，抗体也可使用本领域中已知的酵母展示方法来产生。在酵母展示方法中，使用遗传方法将抗体结构域系栓至酵母细胞壁并且使它们展示于酵母表面上。具体来说，这种酵母可用于展示从谱系或组合抗体文库(例如人或鼠类)表达的抗原结合结构域。可用于制备抗体的酵母展示方法的实例包括通过引用并入本文的美国专利号6,699,
658(Wittrup等人)中公开的方法。
658(Wittrup等人)中公开的方法。
[0602] e.重组GFAP抗体的产生
[0603] 抗体可通过本领域中已知的许多技术中的任何一个产生。例如，从宿主细胞表达，其中通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染至宿主细胞中。各种形式的术语“转染”旨在涵盖通常用于将外源DNA引入到原核或真核宿主细胞中的广泛多种技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-聚葡萄糖转染等。尽管有可能在原核或真核宿主细胞中表达抗体，但优选在真核细胞且最优选哺乳动物宿主细胞中表达抗体，因为此类真核细胞(且特别是哺乳动物细胞)相比于原核细胞更有可能组装和分泌经过正确折叠且具有免疫学活性的抗体。
[0604] 用于表达重组抗体的示例性哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)(包括Urlaub和Chasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216-4220(1980)中所述的dhfr-CHO细胞)，其与DHFR可选择标记物一起使用，例如如Kaufman和Sharp,J.Mol.Biol,159:601-621(1982)中所述；NS0骨髓瘤细胞；COS细胞和SP2细胞。当将编码抗体基因的重组表达载体引入到哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养一段足以允许抗体在宿主细胞中表达或者更优选使抗体分泌到宿主细胞所生长的培养基中的时间来产生抗体。抗体可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收。
[0605] 宿主细胞也可用于产生功能性抗体片段，诸如Fab片段或scFv分子。应当理解，可以对上述程序进行变型。例如，可能合乎需要的是用编码抗体的轻链和/或重链的功能性片段的DNA转染宿主细胞。重组DNA技术也可用于除去一些或全部编码并非结合感兴趣抗原所必需的轻链和重链中的任一个或两者的DNA。抗体也涵盖由此类截短DNA分子表达的分子。此外，可通过用标准化学交联方法使抗体与第二抗体交联来产生双功能抗体，其中一个重链和一个轻链是抗体(即结合人GFAP)且另一重链和另一轻链对非人GFAP的抗原具有特异性。
[0606] 在用于重组表达抗体、或其抗原结合部分的一个优选系统中，通过磷酸钙介导的转染法将编码抗体重链和抗体轻链两者的重组表达载体引入到dhfr-CHO细胞中。在重组表达载体内，使抗体重链和轻链基因各自可操作地连接至CMV增强子/AdMLP启动子调控元件以驱动基因高度转录。重组表达载体也带有DHFR基因，其允许使用甲氨蝶呤选择/扩增来选择已用载体转染的CHO细胞。培养所选择的转化株宿主细胞以便允许表达抗体重链和轻链并且从培养基中回收完整抗体。将标准分子生物学技术用于制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化株、培养宿主细胞，并且从培养基中回收抗体。更进一步地，本公开提供了合成重组抗体的方法，所述方法通过在适合培养基中培养宿主细胞，直到合成重组抗体进行。所述方法可以进一步包括从培养基中分离重组抗体。
[0607] (1)人源化抗体
[0608] “人源化抗体”可以是抗体或其变体、衍生物、类似物或部分，其免疫特异性地结合感兴趣抗原且包含基本上具有人抗体的氨基酸序列的框架(FR)区和基本上具有非人抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)。人源化抗体可以来自结合所需抗原的非人物种抗体，其具有一个或多个来自非人物种的互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的框架区。
[0609] 如本文所用，在CDR的背景下的术语“基本上”是指氨基酸序列与非人抗体CDR的氨基酸序列至少90％、至少95％、至少98％或至少99％相同的CDR。人源化抗体包含至少一个且通常两个可变结构域的基本上全部(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)，其中全部或基本上全部CDR区对应于非人免疫球蛋白(即供体抗体)的那些CDR区并且全部或基本上全部框架区是人免疫球蛋白共有序列的那些。根据一个方面，人源化抗体也包含免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常人免疫球蛋白的恒定区)的至少一部分。在一些实施方式中，人源化抗体含有轻链以及至少重链的可变结构域两者。抗体也可以包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。在一些实施方式中，人源化抗体仅含有人源化轻链。在一些实施方式中，人源化抗体仅含有人源化重链。在特定实施方式中，人源化抗体仅含有轻链和/或重链的人源化可变结构域。
[0610] 人源化抗体可以选自免疫球蛋白的任何类别，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何同种型，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。人源化抗体可以包含来自多于一种类别或同种型的序列，并且可以使用本领域中熟知的技术选择特定的恒定结构域以优化所需的效应子功能。
[0611] 人源化抗体的框架区和CDR区无需精确对应于亲本序列，例如可以通过取代、插入或/或缺失至少一个氨基酸残基来对供体抗体CDR或共有框架进行诱变以使该位点处的CDR或框架残基不对应于供体抗体或共有框架。然而，在一个实施方式中，此类突变将不是广泛的。通常，至少90％、至少95％、至少98％、或至少99％的人源化抗体残基将对应于亲本FR和CDR序列的那些。如本文所用，术语“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。如本文所用，术语“共有免疫球蛋白序列”是指由相关免疫球蛋白序列家族中最常出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如Winnaker,From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany 1987))。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的每个位置由家族中最常出现在那个位置的氨基酸占据。如果两个氨基酸同等频繁地出现，那么共有序列中可包括任一者。
[0612] 可以设计人源化抗体以使对啮齿动物抗人抗体的不想要的免疫应答最小化，这限制了那些部分在人类接受者中的治疗应用的持续时间和有效性。人源化抗体可以具有从非人来源引入其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人残基常常被称为“输入”残基，其通常取自可变结构域。可以通过用高变区序列取代人抗体的相应序列来进行人源化。因此，此类“人源化”抗体是嵌合抗体，其中显著小于完整的人可变结构域已被来自非人物种的相应序列取代。例如，参见美国专利号4,816,567，其内容通过引用并入本文。人源化抗体可以是人抗体，其中一些高变区残基和可能的一些FR残基被来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代。可以使用任何已知方法进行对本发明抗体的人源化或工程化，诸如但不限于美国专利号5,723,323、5,976,862、5,824,514、5,817,483、5,814,476、5,763,192、5,723,323、5,766,886、5,714,352、6,204,023、6,180,370、5,693,762、5,530,101、5,585,089、5,225,539和4,816,567中所述的方法。
[0613] 人源化抗体可以保留对GFAP的高亲和力和其它有利的生物特性。可以使用亲本序列和人源化序列的三维模型，通过亲本序列和各种概念性人源化的产物的分析方法制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是可获得的。说明和展示所选候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构的计算机程序是可获得的。这些展示的检查允许对残基在候选免疫球蛋白序列的功能方面的可能作用进行分析，即对影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基进行分析。以这种方式，可从接受者和输入序列中选择和合并FR残基，从而实现所需的抗体特征，诸如增加的对GFAP的亲和力。一般来讲，高变区残基可能直接且最实质性地涉及影响抗原结合。
[0614] 作为人源化的替代方案，可以产生人抗体(在本文中也称为“完全人抗体”)。例如，可以经由PROfusion和/或酵母相关技术从文库中分离人抗体。还可以产生转基因动物(例如，小鼠)，所述转基因动物能够在免疫后在不存在内源性免疫球蛋白产生的情况下产生人抗体的全谱系。例如，在嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合子缺失导致完全抑制内源性抗体产生。人种系免疫球蛋白基因阵列在这种种系突变小鼠中的转移将导致在抗原激发后产生人抗体。人源化或完全人抗体可以根据美国专利号5,770,429、5,833,985、5,837,243、5,922,845、6,017,517、6,096,311、6,111,166、6,270,765、6,303,
755、6,365,116、6,410,690、6,682,928和6,984,720中所述的方法来制备，其各自内容通过引用并入本文。
755、6,365,116、6,410,690、6,682,928和6,984,720中所述的方法来制备，其各自内容通过引用并入本文。
[0615] 10.方法的变型
[0616] 所公开的确定样品中存在的感兴趣分析物(UCH-L1和GFAP)的存在或量的方法可以如本文所述。所述方法还可以根据用于分析分析物的其它方法进行调整。熟知的变型的实例包括但不限于免疫测定法，诸如夹心免疫测定法(例如，单克隆-单克隆夹心免疫测定法、单克隆-多克隆夹心免疫测定法，包括酶检测(酶免疫测定法(EIA)或酶联免疫吸附测定法)(ELISA)，竞争性抑制免疫测定法(例如正向和反向)、酶扩大免疫测定技术(EMIT)、竞争性结合测定法、生物发光共振能量转移(BRET)、一步抗体检测测定法、均质测定法、异质测定法、即时捕获测定法、单分子检测测定法等。
[0617] a.免疫测定法
[0618] 可以在免疫测定法中使用UCH-L1和GFAP抗体分析感兴趣分析物和其肽或片段(例如UCH-L1和GFAP，和其肽或片段，即UCH-L1和GFAP片段)。可以使用抗体并且检测与分析物(例如UCH-L1和GFAP)的特异性结合来确定分析物(例如UCH-L1和GFAP)的存在或量。例如，抗体或其抗体片段可以特异性结合分析物(例如UCH-L1和/或GFAP)。如果需要，可以将一种或多种抗体与一种或多种可商购获得的单克隆/多克隆抗体组合使用。此类抗体可从诸如R&D Systems,Inc.(Minneapolis,MN)和Enzo Life Sciences International,Inc.(Plymouth Meeting,PA)的公司获得。
[0619] 体内样品中存在的分析物(例如UCH-L1和GFAP)的存在或量可以使用免疫测定法容易地确定，诸如夹心免疫测定法(例如单克隆-单克隆夹心免疫测定法、单克隆-多克隆夹心免疫测定法，包括放射性同位素检测(放射免疫测定法(RIA))和酶检测(酶免疫测定法(EIA)或酶联免疫吸附测定法(ELISA)(例如，Quantikine ELISA assays,R&D Systems,Minneapolis,MN))。可以使用的即时设备的实例是 (Abbott,Laboratories,Abbott Park,IL)。可以使用的其它方法例如包括化学发光微粒免疫测定法，特别是采用自动分析仪(Abbott Laboratories，Abbott Park，IL)的方法。其它方法
包括例如质谱法和免疫组织化学法(例如用来自组织活检的切片)，使用抗分析物(例如抗UCH-L1和抗GFAP)抗体(单克隆、多克隆、嵌合、人源化、人的等)或其针对分析物(例如UCH-L1和GFAP)的抗体片段。其它检测方法包括例如美国专利号6,143,576、6,113,855、6,019,
944、5,985,579、5,947,124、5,939,272、5,922,615、5,885,527、5,851,776、5,824,799、5,
679,526、5,525,524和5,480,792中描述的那些，其各自通过引用整体并入本文。抗体与分析物(例如UCH-L1或GFAP)的特异性免疫结合可以经由附接至抗体的直接标记，诸如荧光或发光标签、金属和放射性核素，或经由间接标记，诸如碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶来检测。
包括例如质谱法和免疫组织化学法(例如用来自组织活检的切片)，使用抗分析物(例如抗UCH-L1和抗GFAP)抗体(单克隆、多克隆、嵌合、人源化、人的等)或其针对分析物(例如UCH-L1和GFAP)的抗体片段。其它检测方法包括例如美国专利号6,143,576、6,113,855、6,019,
944、5,985,579、5,947,124、5,939,272、5,922,615、5,885,527、5,851,776、5,824,799、5,
679,526、5,525,524和5,480,792中描述的那些，其各自通过引用整体并入本文。抗体与分析物(例如UCH-L1或GFAP)的特异性免疫结合可以经由附接至抗体的直接标记，诸如荧光或发光标签、金属和放射性核素，或经由间接标记，诸如碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶来检测。
[0620] 固定化抗体或其抗体片段的使用可以结合到免疫测定法中。可以将抗体固定化在多种支持物上，诸如磁性或色谱基质颗粒、测定板(诸如微量滴定孔)的表面、固体基质材料片等。可以通过将抗体或多种抗体以阵列方式涂布在固体支持物上来制备测定条。然后可以将这种条浸入到测试样品中并通过洗涤和检测步骤迅速处理以产生可测量信号，诸如显色的点。
[0621] 可以使用均质形式。例如，在从受试者获得测试样品之后制备混合物。混合物含有要评估分析物(例如UCH-L1和GFAP)的测试样品、第一特异性结合配偶体和第二特异性结合配偶体。添加测试样品、第一特异性结合配偶体和第二特异性结合配偶体以形成混合物的顺序并不关键。使测试样品同时与第一特异性结合配偶体和第二特异性结合配偶体接触。在一些实施方式中，第一特异性结合配偶体和测试样品中含有的任何UCH-L1或GFAP可以形成第一特异性结合配偶体-分析物(例如UCH-L1或GFAP)-抗原复合物并且第二特异性结合配偶体形成第一特异性结合配偶体-感兴趣分析物(例如UCH-L1或GFAP)-第二特异性结合配偶体复合物。在一些实施方式中，第二特异性结合配偶体和测试样品中含有的任何UCH-L1和/或GFAP可以形成第二特异性结合配偶体-分析物(例如UCH-L1)-抗原复合物并且第一特异性结合配偶体形成第一特异性结合配偶体-感兴趣分析物(例如UCH-L1或GFAP)-第二特异性结合配偶体复合物。第一特异性结合配偶体可以是抗分析物抗体(例如抗UCH-L1抗体，其结合具有包含至少三个连续(3)SEQ ID NO：1的氨基酸的表位；或抗GFAP抗体，其结合具有包含至少三个连续(3)SEQ ID NO：2的氨基酸的表位)。第二特异性结合配偶体可以是抗分析物抗体(例如，抗UCH-L1抗体，其结合具有包含至少三个连续(3)SEQ ID NO：1的氨基酸的表位；或抗GFAP抗体，其结合具有包含至少三个连续(3)SEQ ID NO：2的氨基酸的表位)。此外，第二特异性结合配偶体用如上所述的可检测标记来标记或含有所述可检测标记。
[0622] 可以使用异质形式。例如，在从受试者获得测试样品之后制备第一混合物。所述混合物含有要评估分析物(例如UCH-L1和GFAP)的测试样品和第一特异性结合配偶体，其中第一特异性结合配偶体和测试样品中含有的任何UCH-L1或GFAP形成第一特异性结合配偶体-分析物(例如UCH-L1或GFAP)-抗原复合物。第一特异性结合配偶体可以是抗分析物抗体(例如抗UCH-L1抗体，其结合具有包含至少三个连续(3)SEQ ID NO：1的氨基酸的表位；或抗GFAP抗体，其结合具有包含至少三个连续(3)SEQ ID NO：2的氨基酸的表位)。添加测试样品和第一特异性结合配偶体以形成混合物的顺序并不关键。
[0623] 第一特异性结合配偶体可以固定化在固相上。用于免疫测定法(针对第一特异性结合配偶体和任选的第二特异性结合配偶体)中的固相可为在本领域中已知的任何固相，诸如但不限于磁性颗粒、珠粒、试管、微量滴定板、比色管、膜、支架分子、薄膜、滤纸、盘片和芯片。在固相是珠粒的那些实施方式中，珠粒可以是磁性珠粒或磁性颗粒。磁性珠粒/颗粒可以是铁磁性的、亚铁磁性的、顺磁性的、超顺磁性的或铁磁流体的。示例性铁磁材料包括Fe、Co、Ni、Gd、Dy、CrO2、MnAs、MnBi、EuO以及NiO/Fe。亚铁磁材料的实例包括NiFe2O4、CoFe2O4、Fe3O4(或FeO·Fe2O3)。珠粒可以具有磁性的实心核心部分并且被一个或多个非磁性层包围。另选地，磁性部分可以是围绕非磁性核心的层。其上固定化有第一特异性结合成员的固体支持物可以以干燥形式或以液体储存。磁性珠粒在与其上固定化有第一特异性结合成员的磁性珠粒接触之前或之后可以经受磁场。
[0624] 在形成含有第一特异性结合配偶体-分析物(例如UCH-L1或GFAP)抗原复合物的混合物之后，使用在本领域中已知的任何技术从复合物除去任何未结合的分析物(例如UCH-L1或GFAP)。例如，未结合的分析物(例如UCH-L1或GFAP)可通过洗涤除去。然而，合乎需要的是第一特异性结合配偶体以超过测试样品中所存在的任何分析物(例如UCH-L1或GFAP)的量存在，以使得存在于测试样品中的所有分析物(例如UCH-L1或GFAP)都被第一特异性结合配偶体结合。
[0625] 在除去任何未结合的分析物(例如UCH-L1或GFAP)之后，将第二特异性结合配偶体添加至混合物中以形成第一特异性结合配偶体-感兴趣分析物(例如UCH-L1或GFAP)-第二特异性结合配偶体复合物。第二特异性结合配偶体可以是抗分析物抗体(例如，抗UCH-L1抗体，其结合具有包含至少三个连续(3)SEQ ID NO：1的氨基酸的表位；或抗GFAP抗体，其结合具有包含至少三个连续(3)SEQ ID NO：2的氨基酸的表位)。此外，第二特异性结合配偶体用如上所述的可检测标记来标记或含有所述可检测标记。
[0626] 固定化抗体或其抗体片段的使用可以结合到免疫测定法中。可以将抗体固定化在多种支持物上，诸如磁性或色谱基质颗粒(诸如磁性珠粒)、胶乳颗粒或表面改性的胶乳颗粒、聚合物或聚合物薄膜、塑料或塑料薄膜、平面基材、测定板(诸如微量滴定孔)的表面、固体基质材料片等。可以通过将抗体或多种抗体以阵列方式涂布在固体支持物上来制备测定条。然后可以将这种条浸入到测试样品中并通过洗涤和检测步骤迅速处理以产生可测量信号，诸如显色的点。
[0627] (1)夹心免疫测定法
[0628] 夹心免疫测定法测量两层抗体(即至少一种捕获抗体)和检测抗体(即至少一种检测抗体)之间的抗原量。捕获抗体和检测抗体结合抗原，例如感兴趣分析物(诸如UCH-L1或GFAP)上的不同表位。理想地，捕获抗体与表位的结合不会干扰检测抗体与表位的结合。单克隆或多克隆抗体均可用作夹心免疫测定法中的捕获抗体和检测抗体。
[0629] 通常，采用至少两种抗体来分离和定量测试样品中的分析物(例如UCH-L1或GFAP)。更具体地，至少两种抗体结合分析物(例如UCH-L1或GFAP)的某些表位，使得形成免疫复合物，其被称为“夹心”。可将一种或多种抗体用于捕获测试样品中的分析物(例如UCH-L1和GFAP)(这些抗体常称为一种或多种“捕获”抗体)并且可将一种或多种抗体用于使可检测(即可定量)标记结合夹心(这些抗体常称为一种或多种“检测抗体”)。在夹心测定法中，抗体与其表位的结合理想地不会因测定中任何其它抗体与其对应表位的结合而减弱。选择抗体以使得与疑似含有分析物(例如UCH-L1和GFAP)的测试样品接触的一种或多种第一抗体不与第二或后续抗体所识别的表位的全部或部分结合，从而干扰一种或多种第二检测抗体结合分析物(例如UCH-L1或GFAP)的能力。
[0630] 抗体可以在所述免疫测定法中用作第一抗体。抗体免疫特异性结合分析物上的表位(例如UCH-L1或GFAP)。除了本公开的抗体之外，所述免疫测定法可以包括第二抗体，其免疫特异性结合未被第一抗体识别或结合的表位。
[0631] 疑似含有分析物(例如UCH-L1和GFAP)的测试样品可以同时或依次地与至少一种第一捕获抗体(或多种第一捕获抗体)和至少一种第二检测抗体接触。在夹心测定形式中，首先在允许形成第一抗体-分析物(例如UCH-L1和GFAP)抗原复合物的条件下使疑似含有分析物(例如UCH-L1或GFAP)的测试样品与至少一种特异性结合特定表位的第一捕获抗体接触。如果使用多于一种捕获抗体，则形成第一多种捕获抗体-UCH-L1或GFAP抗原复合物。在夹心测定法中，抗体，优选至少一种捕获抗体，以相对于测试样品中预期的分析物(例如UCH-L1或GFAP)的最大量的摩尔过量量使用。例如，每ml微粒涂布缓冲液可使用约5μg/ml至约1mg/ml抗体。
[0632] i.抗UCH-L1和/或GFAP捕获抗体
[0633] 任选地，在使测试样品与至少一种第一捕获抗体接触之前，至少一种第一捕获抗体可结合至固体支持物，所述固体支持物有利于从测试样品分离第一抗体-分析物(例如UCH-L1和/或GFAP)复合物。可以使用本领域中已知的任何固体支持物，包括但不限于由聚合物材料制成、呈孔、管或珠粒(例如微粒)形式的固体支持物。一种(或多种)抗体可以通过吸附、通过使用化学偶联剂的共价键合或通过本领域中已知的其它手段与固体支持物结合，前提条件是这种结合不会干扰抗体结合分析物(例如UCH-L1和/或GFAP)的能力。此外，如果需要，可以将固体支持物衍生化以允许与抗体上的各种官能团反应。这种衍生化需要使用某些偶联剂，诸如但不限于顺丁烯二酸酐、N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺。
[0634] 此后将疑似含有分析物(例如UCH-L1和/或GFAP)的测试样品孵育以允许形成第一捕获抗体(或多种捕获抗体)-分析物(例如UCH-L1和/或GFAP)复合物。孵育可在约4.5至约10.0的pH下，在约2℃至约45℃的温度下，并且持续至少约一(1)分钟至约十八(18)小时、约
2-6分钟、约7-12分钟、约5-15分钟或约3-4分钟的时段来进行。
2-6分钟、约7-12分钟、约5-15分钟或约3-4分钟的时段来进行。
[0635] ii.检测抗体
[0636] 在形成第一/多种捕获抗体-分析物(例如UCH-L1和/或GFAP)复合物后，然后使复合物与至少一种第二检测抗体接触(在允许形成第一/多种抗体-分析物(例如UCH-L1或GFAP)抗原-第二抗体复合物的条件下)。在一些实施方式中，使测试样品与捕获抗体同时地与检测抗体接触。如果第一抗体-分析物(例如UCH-L1或GFAP)复合物与多于一种的检测抗体接触，则形成第一/多种捕获抗体-分析物(例如UCH-L1或GFAP)-多种抗体检测复合物。与第一抗体一样，当使至少第二(和后续)抗体与第一抗体-分析物(例如UCH-L1或GFAP)复合物接触时，在与上述的那些类似的条件下孵育一段时间是形成第一/多种抗体-分析物(例如UCH-L1或GFAP)-第二/多种抗体复合物所需的。优选地，至少一种第二抗体含有可检测标记。在形成第一/多种抗体-分析物(例如UCH-L1或GFAP)-第二/多种抗体复合物之前、同时或之后，可检测标记可以与至少一种第二抗体结合。可使用本领域中已知的任何可检测标记。
[0637] 化学发光测定法可以根据Adamczyk等人,Anal.Chim.Acta 579(1):61-67(2006)中所述的方法进行。虽然可使用任何适合测定法形式，但微板化学发光计(Mithras LB-940,Berthold Technologies U.S.A.,LLC,Oak Ridge,TN)使得能够快速测定多个小体积样品。使用96孔黑色聚苯乙烯微孔板(Costar#3792)时，化学发光计可以配备有多个试剂注射器。可以将每个样品添加至单独的孔中，然后同时/依次添加如由所采用的测定类型所确定的其它试剂。理想地，避免采用吖啶芳基酯的中性或碱性溶液中的假碱形成，例如通过酸化。然后逐孔记录化学发光应答。就这一点而言，记录化学发光应答的时间部分地取决于添加试剂和所采用的特定吖啶之间的延迟。
[0638] 添加测试样品和一种或多种特异性结合配偶体以形成用于化学发光测定法的混合物的顺序并不关键。如果第一特异性结合配偶体用吖啶化合物可检测地标记，则形成可检测地标记的第一特异性结合配偶体-抗原(例如UCH-L1或GFAP)复合物。另选地，如果使用第二特异性结合配偶体并且第二特异性结合配偶体用吖啶化合物可检测地标记，则形成可检测地标记的第一特异性结合配偶体-分析物(例如UCH-L1或GFAP)-第二特异性结合配偶体复合物。任何未结合的特异性结合配偶体(无论标记或未标记的)都可使用本领域中已知的任何技术(诸如洗涤)从混合物中除去。
[0639] 过氧化氢可以在混合物中原位产生，或者在添加上述吖啶化合物之前、同时或之后提供或供应至混合物。过氧化氢可以许多方式(诸如将为本领域技术人员所显而易见的方式)原位产生。
[0640] 另选地，可以简单地将过氧化氢源添加至混合物。例如，过氧化氢源可以是已知含有过氧化氢的一种或多种缓冲液或其它溶液。就这一点而言，可以简单地添加过氧化氢溶液。
[0641] 在向样品中添加至少一种碱性溶液的同时或之后，产生指示分析物(例如UCH-L1或GFAP)存在的可检测信号，即化学发光信号。碱性溶液含有至少一种碱并且具有大于或等于10、优选大于或等于12的pH。碱性溶液的实例包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铵、氢氧化镁、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钙、碳酸钙和碳酸氢钙。添加至样品中的碱性溶液的量取决于碱性溶液的浓度。基于所用碱性溶液的浓度，本领域技术人员可容易地确定添加至样品中的碱性溶液的量。可以采用除化学发光标记以外的其它标记。例如，可以采用酶标记(包括但不限于碱性磷酸酶)。
[0642] 可以使用本领域技术人员已知的常规技术检测产生的化学发光信号或其它信号。基于产生信号的强度，可定量样品中的感兴趣分析物(例如UCH-L1和GFAP)的量。具体地，样品中的分析物(例如UCH-L1和GFAP)的量与产生信号的强度成比例。存在的分析物(例如UCH-L1和GFAP)的量可通过将所产生光的量与分析物(例如UCH-L1或GFAP)的标准曲线比较或通过与参考标准比较来定量。可通过质谱、重量分析方法和本领域中已知的其它技术使用分析物(例如UCH-L1或GFAP)的已知浓度的连续稀释液或溶液来生成标准曲线。同样在科学文献中已经描述了用于组测定(panel assay)以及用于多重测定的定量法，并且是本领域技术人员已知的。
[0643] (2)正向竞争性抑制测定法
[0644] 在正向竞争形式中，使用已知浓度的标记的感兴趣分析物(例如具有荧光标记(一种用可裂解接头附接的标签)等的分析物(例如UCH-L1和GFAP))的等分试样与测试样品中感兴趣分析物(例如UCH-L1和GFAP)竞争结合感兴趣分析物抗体(例如UCH-L1或GFAP抗体)。
[0645] 在正向竞争测定中，固定化的特异性结合配偶体(诸如抗体)可以依次或同时与测试样品和标记的感兴趣分析物、其感兴趣分析物片段或感兴趣分析物变体接触。感兴趣分析物肽、感兴趣分析物片段或感兴趣分析物变体可以用任何可检测标记标记，包括由用可裂解接头附接的标签组成的可检测标记。在该测定中，可以将抗体固定化在固体支持物上。另选地，可以将抗体与固定化在固体支持物(诸如微粒或平面基材)上的抗体，诸如抗物种抗体偶联。
[0646] 将标记的感兴趣分析物、测试样品和抗体在与上文结合夹心测定形式所述的那些类似的条件下孵育。然后可以产生两种不同种类的抗体-感兴趣分析物复合物。具体地，产生的抗体-感兴趣分析物复合物之一含有可检测标记(例如荧光标记等)，而另一种抗体-感兴趣分析物不含可检测标记。抗体-感兴趣分析物复合物可以但不必在定量可检测标记之前与测试样品的其余部分分离。无论抗体-感兴趣分析物复合物是否与测试样品的其余部分分离，然后都定量抗体-感兴趣分析物复合物中可检测标记物的量。然后可以确定测试样品中感兴趣分析物(诸如膜相关的感兴趣分析物、可溶性感兴趣分析物、可溶性感兴趣分析物的片段、感兴趣分析物的变体(膜相关的或可溶性感兴趣分析物)或其任何组合)的浓度，例如，如上所述的。
[0647] (3)反向竞争性抑制测定法
[0648] 在反向竞争测定法中，固定化的感兴趣分析物(例如UCH-L1和/或GFAP)可以依次或同时地与测试样品和至少一种标记抗体接触。
[0649] 感兴趣分析物可以与固体支持物，诸如上文结合夹心测定形式讨论的固体支持物结合。
[0650] 将固定化的感兴趣分析物、测试样品和至少一种标记的抗体在与上文结合夹心测定形式所述的那些类似的条件下孵育。然后产生两种不同种类的感兴趣分析物-抗体复合物。具体地，产生的感兴趣分析物-抗体复合物之一被固定化并且含有可检测标记(例如荧光标记等)，而另一种感兴趣分析物-抗体没有被固定化且不含可检测标记。通过本领域已知的技术，诸如洗涤，从固定化的感兴趣分析物-抗体复合物的存在中除去未固定化的感兴趣分析物-抗体复合物和测试样品的其余部分。一旦除去未固定化的感兴趣分析物抗体复合物则在裂解标签后定量固定化的感兴趣分析物-抗体复合物分析物中可检测标记的量。然后可以通过比较如上所述的可检测标记的数量来确定测试样品中感兴趣分析物的浓度。
[0651] (4)一步免疫测定法或“即时捕获”测定法
[0652] 在即时捕获免疫测定法中，将固体基质预先涂布有固定剂。将捕获剂、分析物(例如UCH-L1或GFAP)和检测剂一起添加至固体基质，之后是洗涤步骤，然后检测。捕获剂可以结合分析物(例如UCH-L1或GFAP)并且包含针对固定剂的配体。捕获剂和检测剂可以是抗体或如本文所述或本领域中已知的能够捕获或检测的任何其它部分。配体可以包含肽标签并且固定剂可以包含抗肽标签抗体。另选地，配体和固定剂可以是能够结合在一起，以便用于即时捕获测定法的任何试剂对(例如特异性结合对，以及如本领域中已知的其它试剂对)。可以测量多于一种的分析物。在一些实施方式中，可以用抗原涂布固体基质，并且待分析的分析物是抗体。
[0653] 在某些其它实施方式中，在一步免疫测定法或“即时捕获”中，使用了预先涂布有固定剂(诸如生物素、链霉抗生物素蛋白等)的固体支持物(诸如微粒)和至少第一特异性结合成员和第二特异性结合成员(分别用作捕获试剂和检测试剂)。第一特异性结合成员包含针对固定剂的配体(例如，如果固体支持物上的固定剂是链霉抗生物素蛋白，则第一特异性结合成员上的配体可以是生物素)并且还结合感兴趣分析物(例如UCH-L1或GFAP)。第二特异性结合成员包含可检测标记并且结合感兴趣分析物(例如UCH-L1或GFAP)。可以将固体支持物和第一和第二特异性结合成员(依次或同时地)添加到测试样品中。第一特异性结合成员上的配体与固体支持物上的固定剂结合，形成固体支持物/第一特异性结合成员复合物。存在于样品中的任何感兴趣分析物与固体支持物/第一特异性结合成员复合物结合以形成固体支持物/第一特异性结合成员/分析物复合物。第二特异性结合成员与固体支持物/第一特异性结合成员/分析物复合物结合，并且检测到可检测标记。在检测之前可以采用任选的洗涤步骤。在某些实施方式中，在一步测定法中，可以测量多于一种的分析物。在某些其它实施方式中，可以采用多于两种的特异性结合成员。在某些其它实施方式中，可以添加多种可检测标记。在某些其它实施方式中，可以检测到多种感兴趣分析物，或者测量、确定或评估它们的量、水平或浓度。
[0654] 即时捕获测定法的使用可以以如本文所述的多种形式进行，并且在本领域中是已知的。例如，所述形式可以是如上所述的夹心测定法，但另选地可以是竞争测定法，可以采用单一特异性结合成员、或使用诸如已知的其它变型。
[0655] (5)单分子检测测定法
[0656] 单分子检测测定法和方法也可以使用，例如使用纳米孔装置或纳米井装置。纳米孔装置的实例在国际专利公开号WO 2016/161402中描述，其通过引用整体并入本文。纳米井装置的实例在国际专利公开号WO 2016/161400中描述，其通过引用整体并入本文。单分子检测的其他装置和方法也可以采用适用。
[0657] 11.其它因素
[0658] 如上所述的诊断、预后和/或评估的方法可以进一步包括使用其它因素进行诊断、预后和评估。在一些实施方式中，可以使用格拉斯哥昏迷量表来诊断创伤性脑损伤或使用扩展的格拉斯哥结局量表(GOSE)预测创伤性脑损伤的预后。也可单独使用或与格拉斯哥昏迷量表组合使用其它测试、量表或指数。一个实例是瑞秋洛斯阿米哥斯量表(Ranchos Los Amigos Scale)。瑞秋洛斯阿米哥斯量表测量意识、认知、行为和与环境的互动的水平。瑞秋洛斯阿米哥斯量表包括：I级：无反应；II级：总体反应；III级：局部反应；IV级：困惑-躁动；V级：困惑-不适当反应；VI级：困惑-适当反应；VII级：自动-适当反应；和VIII级：有目的-适当反应。
[0659] 基于CT扫描结果的其他分类系统(例如本领域已知的任何分类系统)可用于预测患者的预后。一个实例是创伤性脑损伤的马歇尔分类法，根据对大脑的非对比CT扫描发现，该方法将患者划分入严重程度增加的六类(I至VI)之一。较高的类别具有较差的预后和生存率。马歇尔分类法(Marshall classification)主要涉及以下两个特征：1)肿胀程度，由基底池的中线移位和/或受压所决定；2)挫伤/出血的存在和大小(称为“高密度或混合密度病变”)。另一个实例是鹿特丹评分(Rotterdam score)，该评分包含了其他变量(例如蛛网膜下腔出血)，并试图解决马歇尔系统的一些公认局限性，例如努力对遭受多种类型伤害的患者进行分类。鹿特丹分类包括四个独立评分的元素。与马歇尔系统类似，鹿特丹的分类包括1)基底池压缩程度和2)中线偏移程度。但是，鹿特丹不包括挫伤，而是将肿块限制在3)硬膜外血肿，并增加4)脑室内和/或蛛网膜下腔血。这些项中的每项会被评一个评分，将这些评分相加总和加1。评分越高，预后和生存率越差。
[0660] 12.样品
[0661] 在一些实施方式中，在人类受试者遭受由身体摇动、导致闭合性或开放性头部创伤的外部机械力或其它力产生的钝性冲击、一次或多次跌倒、爆炸或冲击波或其它类型的钝力创伤引起的对头部的损伤之后获得样品。在一些实施方式中，在人类受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得样品。此类化学物质和/或毒素的实例包括火、霉菌、石棉、杀虫剂和杀昆虫剂、有机溶剂、油漆、胶水、气体(诸如一氧化碳、硫化氢和氰化物)、有机金属(诸如甲基汞、四乙基铅和有机锡)和/或一种或多种滥用药物。在一些实施方式中，样品从罹患自身免疫疾病、代谢紊乱、脑肿瘤、缺氧、一种或多种病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的人类受试者获得。
[0662] 在又另一个实施方式中，本文所述的方法使用的样品还可以用于通过使用下文所述的抗UCH-L1和抗GFAP抗体或其抗体片段测定受试者中的UCH-L1和GFAP水平来确定受试者是否患有轻度创伤性脑损伤或处于罹患轻度创伤性脑损伤的风险中。因此，在特定实施方式中，本公开还提供了一种用于确定患有创伤性脑损伤或处于创伤性脑损伤的风险中的受试者是否是用于疗法或治疗的候选者的方法。一般来讲，受试者是以下中的至少一者：(i)经历过对头部的损伤；(ii)摄入和/或暴露于一种或多种化学物质和/或毒素；(iii)罹患自身免疫疾病、代谢紊乱、脑肿瘤、缺氧、一种或多种病毒、脑膜炎、脑积水或罹患其任何组合；或(iv)(i)-(iii)的任何组合；或者，实际上已被诊断患有TBI或处于TBI的风险下(诸如罹患自身免疫疾病、代谢紊乱、脑肿瘤、缺氧、一种或多种病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者)和/或展现出不利的(即临床上不希望的)UCH-L1或GFAP或UCH-L1或GFAP片段的浓度或量，如本文所述的。
[0663] b.测试或生物样品
[0664] 如本文所用，“样品”、“测试样品”、“生物样品”是指含有或疑似含有UCH-L1和GFAP的流体样品。样品可以源自任何合适的来源。在一些情况下，样品可以包括液体、流动的微粒固体或固体颗粒的流体悬浮液。在一些情况下，可以在本文描述的分析之前处理样品。例如，可以在分析之前将样品从其来源分离或纯化；然而，在某些实施方式中，可以直接测定含有UCH-L1和GFAP的未处理样品。在一个具体实例中，UCH-L1和GFAP的来源是人体物质(例如体液、血液(诸如全血、血清、血浆)、尿液、唾液、汗液、痰液、精液、粘液、泪液、淋巴液、羊水、间质液、肺灌洗液、脑脊髓液、粪便、组织、器官等)。组织可包括但不限于骨骼肌组织、肝组织、肺组织、肾组织、心肌组织、脑组织、骨髓、子宫颈组织、皮肤等。样品可为液体样品或固体样品的液体提取物。在某些情况下，样品的来源可以是器官或组织，诸如活检样品，其可以通过组织分解/细胞裂解而溶解。
[0665] 可以分析广泛范围体积的流体样品。在一些示例性实施方式中，样品体积可以是约0.5nL、约1nL、约3nL、约0.01μL、约0.1μL、约1μL、约5μL、约10μL、约100μL、约1mL、约5mL、约10mL等。在一些情况下，流体样品的体积在约0.01μL与约10mL之间、在约0.01μL与约1mL之间、在约0.01μL与约100μL之间、或在约0.1μL与约10μL之间。
[0666] 在一些情况下，流体样品可以在用于测定中之前进行稀释。例如，在UCH-L1和GFAP的来源为人体液(例如血液、血清)的实施方式中，流体可以用适当的溶剂(例如缓冲液，诸如PBS缓冲液)进行稀释。在使用之前可以将流体样品稀释约1倍、约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约6倍、约10倍、约100倍或更多。在其它情况下，流体样品在用于测定中之前不进行稀释。
[0667] 在一些情况下，样品可以经历分析前处理。分析前处理可以提供额外的功能性，诸如非特异性蛋白质去除和/或有效但可廉价实现的混合功能性。分析前处理的一般方法可以包括使用电动力捕获、AC电动力学、表面声波、等速电泳、介电电泳、电泳或本领域已知的其它预浓缩技术。在一些情况下，流体样品可以在用于测定中之前进行浓缩。例如，在UCH-L1和GFAP的来源为人体液(例如血液、血清)的实施方式中，可以通过沉淀、蒸发、过滤、离心或其组合来浓缩流体。在使用之前可以将流体样品浓缩约1倍、约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约6倍、约10倍、约100倍或更多。
[0668] b.对照
[0669] 可能希望包括对照(例如阳性和/或阴性对照，其在本领域中已众所周知)。对照样品可以与如上所述的来自受试者的样品同时分析。可以将从受试者样品获得的结果与从对照样品获得的结果或信息进行比较。可以提供标准曲线，可以将样品的测定结果与其进行比较。如果使用荧光标记，则此类标准曲线呈现作为测定单位(即荧光信号强度的函数的标记物水平)。使用取自多个供体的样品，可以提供针对正常健康受试者中UCH-L1和GFAP的参考水平，以及针对获自可能具有以上阐述的一个或多个特征的供体的组织中UCH-L1和GFAP的“有风险”水平的标准曲线。在某些情况下，对照可能涉及(例如，基于)从遭受了骨科损伤但无明显TBI的受试者获取的样品或信息(“骨科对照”)，或从健康受试者获得的没有明显伤害(“健康对照”)的信息或样本。在一些实施方案中，该方法可以在任何受试者上进行而无需考虑以下因素：受试者的临床状况，受试者的实验室值，受试者患有轻度、中度、重度或中度至重度创伤性脑损伤的分类，以及上述受试者可能遭受骨伤的任何事件的发生时间。
[0670] 因此，鉴于上文，提供了一种用于确定测试样品中UCH-L1和GFAP的存在、量或浓度的方法。所述方法包括通过免疫测定法测定测试样品的UCH-L1和GFAP，所述免疫测定法例如采用至少一种结合UCH-L1或GFAP上的表位的捕获抗体和至少一种结合UCH-L1或GFAP上的不同于捕获抗体表位的表位并且任选地包括可检测标记的检测抗体，并且包括将作为测试样品中UCH-L1或GFAP的存在、量或浓度的直接或间接指示的由可检测标记生成的信号与作为校准物中UCH-L1或GFAP的存在、量或浓度的直接或间接指示的生成信号进行比较。校准物任选地、且优选地是一系列校准物的一部分，其中每种校准物与系列中的其它校准物的不同之处在于UCH-L1或GFAP浓度。
[0671] 13.试剂盒
[0672] 本文提供了一种试剂盒，所述试剂盒可以用于在本文描述的方法中测定或评估测试样品的UCH-L1和GFAP或UCH-L1和GFAP片段。试剂盒包括至少一种用于测定测试样品的UCH-L1和GFAP的组分、用于测定测试样品的UCH-L1和GFAP的说明书。例如，试剂盒可以包括用于通过免疫测定法，例如化学发光微粒免疫测定法测定测试样品的UCH-L1和GFAP的说明书。试剂盒中所包括的说明书可粘贴于包装材料上、可作为包装说明书包括在内、或可以从特定网站查看或下载，该网站作为试剂盒包装或插入材料的一部分列举。虽然说明书通常是书写或印刷的材料，但它们不限于此类。本公开涵盖了能够存储此类说明并将其传达给最终使用者的任何介质。此类介质包括但不限于电子存储介质(例如磁盘、磁带、磁片盒、芯片)、光学介质(例如CD ROM)等。如本文所用，术语“说明书”可以包括提供说明书的互联网网站的地址。
[0673] 至少一种组分可以包括至少一种组合物，其包含特异性结合UCH-L1或GFAP的一种或多种分离的抗体或其抗体片段。抗体可以是UCH-L1或GFAP捕获抗体和/或UCH-L1或GFAP检测抗体。
[0674] 另选地或另外，试剂盒可以包括用于进行测定法的校准物或对照，例如纯化的且任选冻干的UCH-L1或GFAP、和/或至少一个容器(例如管、微量滴定板或条，其可已用抗UCH-L1或GFAP单克隆抗体涂布)和/或缓冲液，诸如测定缓冲液或洗涤缓冲液，其中任一者都可提供为浓缩溶液、可检测标记(例如酶标记)的底物溶液、或终止液。优选地，试剂盒包括进行测定法所必需的所有组分，即试剂、标准物、缓冲液、稀释剂等。说明书还可以包括用于生成标准曲线的说明书。
[0675] 试剂盒可以进一步包括用于定量UCH-L1和GFAP的参考标准物。可以采用参考标准物来建立用于内插和/或外推UCH-L1和GFAP浓度的标准曲线。参考标准物可以包含高UCH-L1和GFAP浓度水平，例如约100000pg/mL、约125000pg/mL、约150000pg/mL、约175000pg/mL、约200000pg/mL、约225000pg/mL、约250000pg/mL、约275000pg/mL、或约300000pg/mL；中等UCH-L1和GFAP浓度水平，例如约25000pg/mL、约40000pg/mL、约45000pg/mL、约50000pg/mL、约55000pg/mL、约60000pg/mL、约75000pg/mL或约100000pg/mL；和低UCH-L1和GFAP浓度水平，例如约1pg/mL、约5pg/mL、约10pg/mL、约12.5pg/mL、约15pg/mL、约20pg/mL、约25pg/mL、约30pg/mL、约35pg/mL、约40pg/mL、约45pg/mL、约50pg/mL、约55pg/mL、约60pg/mL、约65pg/mL、约70pg/mL、约75pg/mL、约80pg/mL、约85pg/mL、约90pg/mL、约95pg/mL或约100pg/mL。
[0676] 试剂盒中提供的任何抗体，诸如对UCH-L1或GFAP具有特异性的重组抗体，可以掺入可检测标记，诸如荧光团、放射性部分、酶、生物素/抗生物素蛋白标记、发色团、化学发光标记等，或者试剂盒可以包括用于标记抗体的试剂或用于检测抗体的试剂(例如检测抗体)和/或用于标记分析物(例如UCH-L1和GFAP)的试剂或用于检测分析物(例如UCH-L1和GFAP)的试剂。抗体、校准物和/或对照可提供于独立容器中或预分配至适当测定形式中，例如预分配至微量滴定板中。
[0677] 任选地，试剂盒包括质量控制组分(例如敏感性组、校准物和阳性对照)。质量控制试剂的制备为本领域中所熟知且描述于各种免疫诊断产品的插页上。敏感性组成员任选地用于确立测定法性能特征，并且进一步任选地是免疫测定试剂盒试剂的完整性和测定法的标准化的可用指标。
[0678] 试剂盒也可任选地包括进行诊断测定法或有利于质量控制评价所需的其它试剂，诸如缓冲液、盐、酶、酶辅因子、底物、检测试剂等。用于分离和/或处理测试样品的其它组分(诸如缓冲液和溶液)(例如预处理试剂)也可包括于试剂盒中。试剂盒可另外包括一个或多个其它对照。试剂盒的一种或多种组分可被冻干，在所述情况下试剂盒可进一步包括适于复原冻干组分的试剂。
[0679] 试剂盒的各种组分任选地根据需要提供于适合容器，例如微量滴定板中。试剂盒可进一步包括用于容纳或存储样品的容器(例如用于尿液、全血、血浆或血清样品的容器或盒)。适当时，试剂盒任选也可含有反应器皿、混合器皿和有利于制备试剂或测试样品的其它组件。试剂盒也可包括用于帮助获得测试样品的一种或多种仪器，诸如注射器、移液管、钳子、测量匙等。
[0680] 如果可检测标记是至少一种吖啶化合物，则试剂盒可包括至少一种吖啶-9-甲酰胺、至少一种吖啶-9-羧酸芳基酯或其任何组合。如果可检测标记是至少一种吖啶化合物，则试剂盒也可包括过氧化氢来源，诸如缓冲液、溶液和/或至少一种碱性溶液。如果需要，试剂盒可含有固相，诸如磁性颗粒、珠粒、试管、微量滴定板、比色管、膜、支架分子、薄膜、滤纸、盘片或芯片。
[0681] 如果需要，试剂盒可以进一步包括用于测定测试样品中的另一种分析物的一种或多种组分，单独地或与说明书进一步组合，所述另一种分析物可以是生物标记物，诸如创伤性脑损伤或病症的生物标记物。
[0682] a.试剂盒和方法的适应性
[0683] 试剂盒(或其组件)，以及用于通过本文所述的免疫测定法评估或测定测试样品中UCH-L1和GFAP的浓度的方法可以适用于多种自动化和半自动化系统(包括其中固相包括微粒的那些)，例如美国专利号5,063,081、美国专利申请公开号2003/0170881、2004/0018577、2005/0054078和2006/0160164中所述的和例如由Abbott Laboratories(Abbott Park,IL)作为Abbott即时设备( 或i-STAT Alinity,Abbott Laboratories)商业
市售的，以及美国专利号5,089,424和5,006,309中所述的那些和例如由Abbott
Laboratories(Abbott Park,IL)作为 或Abbott Alinity装置系列商业市
售的。
市售的，以及美国专利号5,089,424和5,006,309中所述的那些和例如由Abbott
Laboratories(Abbott Park,IL)作为 或Abbott Alinity装置系列商业市
售的。
[0684] 自动化或半自动化系统与非自动化系统(例如ELISA)之间的一些差异包括第一特异性结合配偶体(例如分析物抗体或捕获抗体)所附接的底物(其可影响夹心形成和分析物反应性)，以及捕获、检测和/或任何任选洗涤步骤的长度和时间。自动化或半自动化形式(例如 和任何后继平台，AbbottLaboratories)可具有相对较短的孵育时间(例如对于 为大约18分钟)，而非自动化形式(诸如ELISA)关于样品和捕
获试剂可能需要相对较长的孵育时间(例如约2小时)。类似地，自动化或半自动化形式(例如 和任何后继平台)可具有相对较短的孵育时间(例如对于
和任何后继平台为大约4分钟)，而非自动化形式(诸如ELISA)可能以相对
较长孵育时间(例如约2小时)孵育检测抗体(诸如缀合试剂)。
获试剂可能需要相对较长的孵育时间(例如约2小时)。类似地，自动化或半自动化形式(例如 和任何后继平台)可具有相对较短的孵育时间(例如对于
和任何后继平台为大约4分钟)，而非自动化形式(诸如ELISA)可能以相对
较长孵育时间(例如约2小时)孵育检测抗体(诸如缀合试剂)。
[0685] 可从Abbott Laboratories获得的其它平台包括但不限于 (参见例如美国专利号5,294,404，其据此以引用的方式整体并入)、 EIA(珠粒)和
QuantumTMΠ以及其它平台。另外，测定法、试剂盒和试剂盒组件可以在其它形式中，例如在电化学或其它手持型或即时型测定系统上采用。如先前所提及的，本公开例如适用于进行夹心免疫测定法的商业Abbott即时( Abbott Laboratories)电化学免疫测定系
统。免疫传感器及其制造方法和在单次使用测试装置中操作的方法描述于例如美国专利号
5,063,081、美国专利申请公开号2003/0170881、2004/0018577、2005/0054078和2006/
0160164中，其关于此方面的教导均通过引用整体并入。
QuantumTMΠ以及其它平台。另外，测定法、试剂盒和试剂盒组件可以在其它形式中，例如在电化学或其它手持型或即时型测定系统上采用。如先前所提及的，本公开例如适用于进行夹心免疫测定法的商业Abbott即时( Abbott Laboratories)电化学免疫测定系
统。免疫传感器及其制造方法和在单次使用测试装置中操作的方法描述于例如美国专利号
5,063,081、美国专利申请公开号2003/0170881、2004/0018577、2005/0054078和2006/
0160164中，其关于此方面的教导均通过引用整体并入。
[0686] 具体地，关于测定法对 系统的适应性，优选以下配置。将微制作的硅芯片制造有一对金安培计工作电极和银-氯化银参考电极。在一个工作电极上，将具有固定化的捕获抗体的聚苯乙烯珠粒(直径0.2mm)粘附到电极上的图案化聚乙烯醇的聚合物涂层上。将该芯片组装成具有适于免疫测定法的流体形式的 盒。在硅芯片的一部分
上，存在UCH-L1或GFAP的特异性结合配偶体，诸如一种或多种UCH-L1或GFAP抗体(一种或多种可以结合UCH-L1或GFAP的单克隆/多克隆抗体或其片段、其变体、或其变体的片段)或一种或多种抗UCH-L1和/或GFAP DVD-Ig(或可以结合UCH-L1或GFAP的其片段、其变体、或其变体的片段)的变体，其中任何一种都可以被可检测地标记。在盒的流体袋内是包括对氨基苯酚磷酸盐的含水试剂。
上，存在UCH-L1或GFAP的特异性结合配偶体，诸如一种或多种UCH-L1或GFAP抗体(一种或多种可以结合UCH-L1或GFAP的单克隆/多克隆抗体或其片段、其变体、或其变体的片段)或一种或多种抗UCH-L1和/或GFAP DVD-Ig(或可以结合UCH-L1或GFAP的其片段、其变体、或其变体的片段)的变体，其中任何一种都可以被可检测地标记。在盒的流体袋内是包括对氨基苯酚磷酸盐的含水试剂。
[0687] 在操作中，将来自疑似患有TBI的受试者的样品添加到测试盒的保持室中，并且将盒插入到 读取器中。盒内的泵元件将样品推入到含有芯片的管道中。使样品与传感器接触，从而使酶缀合物溶解到样品中。将样品在传感器上振荡，以促进大约2-12分钟的夹层形成。在测定法的倒数第二步中，将样品推入到废物室中并且使用含有针对碱性磷酸酶的底物的洗涤流体来洗涤过量的酶缀合物并从传感器芯片上取样。在测定的最后步骤中，碱性磷酸酶标记与对氨基苯酚磷酸酯反应以裂解磷酸酯基团并允许释放的对氨基苯酚在工作电极处被电化学氧化。基于所测量的电流，读取器能够通过嵌入算法和制造厂确定的校准曲线计算样品中UCH-L1和/或GFAP的量。在专利文献中，例如在美国专利第6,438,
498号中，已经描述了诸如i-Stat之类的用于多用途的测试盒的适应性，该文献的内容在此引入作为参考。
498号中，已经描述了诸如i-Stat之类的用于多用途的测试盒的适应性，该文献的内容在此引入作为参考。
[0688] 如本文所述的方法和试剂盒必然涵盖用于进行免疫测定法的其它试剂和方法。例如，涵盖各种缓冲液，诸如本领域中已知和/或可易于制备或优化以例如用于洗涤、用作缀合物稀释剂、微粒稀释剂和/或用作校准物稀释剂的缓冲液。示例性缀合物稀释剂是在某些试剂盒(Abbott Laboratories,Abbott Park,IL)中所采用且含有2-(N-吗啉基)乙烷磺酸(MES)、盐、蛋白质封闭剂、抗微生物剂和洗涤剂的 缀合物稀释剂。示例性校准物稀释剂是在某些试剂盒(Abbott Laboratories,Abbott Park,IL)中所采用的
人校准物稀释剂，其包括含有MES、其它盐、蛋白质封闭剂和抗微生物剂的
缓冲液。另外，如2008年12月31日提交的美国专利申请号61/142,048中所述，可例如在盒形式中，使用与信号抗体连接的核酸序列作为信号放大剂获得改善的信号产
生。
人校准物稀释剂，其包括含有MES、其它盐、蛋白质封闭剂和抗微生物剂的
缓冲液。另外，如2008年12月31日提交的美国专利申请号61/142,048中所述，可例如在盒形式中，使用与信号抗体连接的核酸序列作为信号放大剂获得改善的信号产
生。
[0689] 虽然本文的某些实施方式在用于评估疾病(诸如创伤性脑损伤)时是有利的，但是测定法和试剂盒也可任选地用于在适当的情况下评估其它疾病、病症和病状中的UCH-L1和GFAP。
[0690] 测定方法也可用于鉴定改善疾病，诸如创伤性脑损伤的化合物。例如，可使表达UCH-L1或GFAP的细胞与候选化合物接触。可使用本文所述的测定方法将与化合物接触的细胞中的UCH-L1或GFAP的表达水平与对照细胞中的表达水平进行比较。本申请在此引用了2017年12月X日提交的标题为“Methods for Aiding in the Diagnosis and
Determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using glial fibrillary acidic protein(GFAP)and/or ubiquitin carboxy-terminal hydrolase L1(UCH-L1)”的美国申请XX/XXX,XXX。
Determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using glial fibrillary acidic protein(GFAP)and/or ubiquitin carboxy-terminal hydrolase L1(UCH-L1)”的美国申请XX/XXX,XXX。
[0691] 本公开具有多个方面，所述多个方面通过以下非限制性实施例说明。
[0692] 实施例1
[0693] 实施例中使用的测定
[0694] UCH-L1测定。 UCH-L1测定用于TBI患者人群研究。使用单克隆抗体对，例如抗体A作为捕获单克隆抗体，抗体B和C作为检测单克隆抗体。抗体A是在雅培实验室(Abbott Park，IL)内部开发的示例性抗UCH-L1抗体。抗体B和C识别UCH-L1的不同表位并增强了样品中抗原的检测，其由Banyan Biomarkers(Alachua,Florida)开发。当一起使用时，抗体的组合提供了协同作用，并且与使用未组合的抗体相比提供增强的信号。在雅培实验室(Abbott Park，IL)内部开发的其他抗体或其他市售抗体，当作为捕获抗体或检测抗体一起使用时，也以各种组合形式显示或预期显示类似的信号增强。针对关键性能特征对UCH-L1测定设计进行了评估。测试盒(cartridge)配置为抗体配置：抗体A(捕获抗体)/抗体B+C(检测抗体)；试剂条件：固体含量为0.8％，Fab碱性磷酸酶簇缀合物为125μg/mL。并且样品入口打印：UCH-L1标准。测定时间为10-15分钟(样品捕获时间为7-12分钟)。
[0695] GFAP测定。 GFAP测定用于TBI患者人群研究。使用了单克隆抗体对，例如抗体A作为捕获单克隆抗体，抗体B作为检测单克隆抗体。抗体A和抗体B是在雅培实验室(Abbott Park，IL)内部开发的示例性抗GFAP抗体。抗体A和抗体B都与同一GFAP分解产物(BDP)中的表位结合。当一起使用时，抗体的组合提供了协同作用，并且与使用未组合的抗体相比提供了增强的信号。针对关键性能特征对GFAP分析设计进行了评估。测试盒(cartridge)配置为抗体配置：抗体A(捕获抗体)/抗体B(检测抗体)；试剂条件：固体含量为
0.8％，Fab碱性磷酸酶簇缀合物为250μg/mL；和样品入口打印：GFAP特异性。测定时间为10-
15分钟(样品捕获时间为7-12分钟)。
0.8％，Fab碱性磷酸酶簇缀合物为250μg/mL；和样品入口打印：GFAP特异性。测定时间为10-
15分钟(样品捕获时间为7-12分钟)。
[0696] 实施例2
[0697] TBI人群研究(TRACK-TBI)
[0698] 创伤性脑损伤的转化研究和临床知识(TRACK-TBI)研究是一个大型而复杂的项目。其机构和公私合作伙伴关系包括11个临床基地，7个核心，共计近50个合作机构、公司和慈善机构。较早的TRACK-TBI预备研究(pilot study)基于三个临床基地的临床数据，其有助于完善TBI通用数据元素(Common Data Elements)，并为TRACK-TBI研究创建了TBI信息共享的雏形。
[0699] 受试者组：在3个临床组中平均招募了2,700至3000名TBI患者，按临床护理路径进行区分：1.患者在急诊室接受评估并出院(ED)；2.入院但未入住ICU的患者(ADM)；和3.入住ICU的患者(ICU)。每个临床组(n＝300)另外纳入100名颅外外伤患者(无TBI)作为对照，共纳入3000名患者。该分层计划有助于比较有效性研究(CER)分析，并且不受传统区分为“轻度/中度/重度”TBI的限制。数据收集取决于临床护理路径(ED，ADM，ICU)和每个目标的要求。每组中的患者分为3个队列，其定义了要收集的数据范围。
[0700] 对照是符合以下标准的成人骨科创伤患者(“骨科对照”)：1.肢体和/或骨盆损伤和/或肋骨骨折的损伤评分≤4(不威胁生命)；2.除了不适用因疑似头部损伤而在ED中接受CT或MRI的标准之外，满足与TBI受试者相同的入选和排除标准。通过采访有关意识丧失(LOG)、意识障碍和创伤后遗忘症(PTA)/RA的潜在对照，将TBI排除在当前损伤之外；3.为每个基地提供了根据来自TBI队列的年龄和性别分布确定要针对的对照数量的计划；以及4.将对照纳入CA-MRI队列以进行随访，如果无法完成MRI访视，则在2周时降至综合评估(CA)。
[0701] 受试者资格：根据美国康复医学会(ACRM)标准，纳入了登记到急诊科(ED)并有急性TBI病史的所有年龄段的成年患者，其中患者遭受了创伤性诱发的脑功能生理破坏，表现为≥下列情况之一：任何意识丧失(LOG)时期；在事件(例如健忘症)发生之前或之后对事件的任何记忆丧失；事故发生时精神状态的任何改变(感到晕眩、迷失方向和/或感到困惑)；和/或可能是或可能不是永久性的局灶性神经功能缺损。创伤性诱发包括头部受到撞击、头部撞击物体或大脑进行加速/减速运动(例如，挥鞭样损伤)，而头部没有直接的外部创伤。
[0702] 表2列出了所使用的包含/排除标准。
[0703] 表2
[0704]
[0705]
[0706] 对于3个临床组中的每一个(即ED、ADM和ICU)，将受试者进一步置于三个不同的评估队列之一：简要评估(BA)队列、压缩评估(CA)队列、或综合评估+MRI(CA+MRI)队列。随访率80％的里程碑计划见表3。
[0707] 表3
[0708]
[0709] 简要评估(BA)包括1200名受试者的队列，其中ED、ADM和ICU组各有400名受试者。为该BA队列收集了以下数据：人口统计学和完整的临床过程数据；第1天(损伤后<24小时)抽取血液用于检测血清、血浆、DNA和RNA；在第1天基线收集后的3-6小时内重复抽血用于检测血清(对于包含该成分的部位可选)；从第1天开始就进行临床脑部CT扫描，这是医院过程的一部分；以及在NINDS CDE网站上发布的，使用NIH TBI-CDE v.2.0核心结果指标在2周，
3、6和12个月通过结构化电话访谈收集的结果数据。
3、6和12个月通过结构化电话访谈收集的结果数据。
[0710] 压缩评估(CA)队列包括1200名受试者，其中ED、ADM和ICU组各300名受试者+100名对照。为CA队列收集了以下数据：人口统计学和完整的临床过程数据；ADM和ICU组的高密度每日临床数据；第1天(损伤后<24小时)抽取血液用于检测血清、血浆、RNA和DNA；在第1天基线收集后的3-6小时内重复抽取血液用于检测血清(对于包含该成分的部位可选)；第3天(48-72小时)和第5天(96-120小时)的ADM和ICU抽取血液用于检测血清、血浆和RNA；在第1至5天收集脑脊液(对于包含该成分的部位可选)；所有的临床脑部CT扫描都是医院过程的一部分；在第2周和第6个月抽血以检测血清、血浆和RNA；并且结果数据是在第2周、第6个月、第12个月通过结构化面对面访谈以及在第3个月使用NIH TBI-CDE v.2.0核心、基础和补充结果测量通过结构化电话访谈收集的。
[0711] 综合评估+MRI(CA+MRI)队列包括600名受试者，其中ED、ADM和ICU组各200名。为CA+MRI队列收集了以下数据：人口统计学和完整的临床过程数据；ADM和ICU组的高密度每日临床数据；第1天(损伤后<24小时)抽取血液用于检测血清、血浆、RNA和DNA；在第1天基线收集后的3-6小时内重复抽取血液用于检测血清(对于包含该成分的部位可选)；在ADM和ICU的第3天(48-72小时)和第5天(96-120小时)抽取血液用于检测血清、血浆和RNA；在第1至5天收集脑脊液(对于包含该成分的部位可选)；所有临床头部CT扫描都是作为医院过程的一部分而获得的；在第2周和第6个月时抽血以获取血清、血浆和RNA；在第2周和第6个月时获得3T研究MRI；以及在第2周、第6个月、第12个月通过结构化面对面访谈以及在第3个月使用NIHTBI-CDE v.2.0核心、基础和补充结果测量通过结构化电话访谈收集的。
[0712] 入选后，医院开始收集数据。对于CA+MRI患者，从损伤之日起14天±4天完成第2周的MRI。对应的第2周的结果在该第2周的MRI±3天完成。对于CA和BA患者，从损伤之日起14天±4天完成了第2周的结果。从损伤之日起90天±7天内完成了第3个月的结果。对于CA+MRI患者，从损伤之日起180天±14天完成第6个月的MRI，相应的第6个月的结果在第6个月MRI±14天完成。对于CA和BA患者，从损伤之日起180天±14天完成第6个月的结果。BTACT应该在结果±7天完成(但不能在同一天，并且不超过损伤后的201天)。在第12个月的结果在从损伤之日算起的360天±30天完成。
[0713] 以i-STAT测定形式在59例TRACK TBI患者的少量样品中测量了UCH-L1和GFAP(表4)。
[0714] 表4通过CT扫描和MRI结果得到的受试者特征
[0715]
[0716] a 24位受试者接受MRI。
[0717] 连续变量以中位数[25-75％，四分位数间距]表示，并使用Wilcoxon秩和检验进行比较或者以均值表示(+/-SD)并基于数据分布使用t检验进行比较。
[0718] 分类变量以数字/总数(百分比)表示，并使用卡方或Fisher精确检验进行比较。
[0719] 除了在颅脑损伤后24小时内抽血外，每位患者均进行了广泛的医学评估，包括头部CT、神经精神科检查、格拉斯哥昏迷评分(GCS)、并且许多患者在损伤2周内也接受了MRI随访。按照严格的标准化采血规程和处理流程，将血浆样品等分以在-80℃下储存，随后解冻并测试。每个样品一式两份运行，列出的结果是两次运行的平均值。在示例性受试者亚组中，在损伤后的前24小时(大约2-23小时)内，UCH-L1水平和GFAP水平与损伤相关(数据未显示)。表4显示乙醇(ETOH)水平与生物标志物水平不相关(皮尔森相关性＝0.023，p值＝0.89)，因为ETOH的消耗经常与TBI特别是严重的TBI有关。
[0720] 对于数据集中存在的各种条件(表5)，测量了GFAP和UCH-L1水平，并计算了平均值、最小值、最大值、第5百分位数和第95百分位数。除了评估头部损伤(或疑似损伤)后48小时内的总体GFAP和UCH-L1水平，在损伤后这48小时内的不同时间段也进行了分析。如下所示，测量了GFAP(表6)和UCH-L1(表7)的水平，并且从0-4小时、从4-8小时、从8-12小时、从12-16小时、从16-20小时、从20-24小时和从24-48小时计算了平均值、最小值、最大值、第5百分位数和第95百分位数。
[0721] 表5TRACK TBI数据的临床分析-受试者特征
[0722]
[0723] *格拉斯哥昏迷评分>＝13
[0724] **格拉斯哥昏迷评分<＝12
[0725] 表6TRACK TBI数据的临床分析-按时间段划分的GFAP水平
[0726]
[0727] *格拉斯哥昏迷评分>＝13
[0728] **格拉斯哥昏迷评分<＝12
[0729] 表7TRACK TBI数据的临床分析-按时间段划分的UCH-L1水平
[0730]
[0731] *格拉斯哥昏迷评分>＝13
[0732] **格拉斯哥昏迷评分<＝12
[0733] 图1A-1B包括描绘了中度/重度TBI、轻度TBI以及轻度和中度/重度TBI组在损伤后48小时内各个时间点的平均GFAP(图1A)和UCH-L1(图1B)水平的代表性示意图。在中度/重度TBI组中，损伤后0-4小时之间GFAP和UCH-L1的水平最高。
[0734] 从健康对照者(无创伤)和骨科对照(有骨科损伤，但无TBI)获得相似的数据。图2A-2B包括描绘了轻度TBI、健康对照组和骨科对照组在损伤后48小时内的各个时间点的平均GFAP(图2A)和UCH-L1(图2B)水平的代表性示意图。与健康对照和正常对照相比，轻度TBI组损伤后0-48小时的GFAP和UCH-L1水平均升高。与健康对照组相比，普通对照组的UCH-L1水平也升高。
[0735] 还基于临床结果(GCS评分、CT扫描结果或MRI扫描结果)进行了数据分析，以将损伤后48小时内各个时间点的中位GFAP和UCH-L1水平与TBI诊断相关联。图3A-3D包括在指定的GCS评分的受试者按时间点的中值GFAP水平(13-15＝轻度TBI；9-12＝中度TBI；小于或等于8＝重度TBI)(图3A和3B)以及基于成像结果(图3C中的CT扫描结果；图3D中的MRI结果)的代表性图。图4A-4D包括在指定的GCS评分的受试者中按时间点的中值GFAP水平(13-15＝轻度TBI；9-12＝中度TBI；小于或等于8＝重度TBI)(图4A和4B)以及基于成像结果(图4C中的CT扫描结果；图4D中的MRI结果)的代表性图。总之，这些数据表明，损伤后48小时内各个时间点的GFAP和UCH-L1水平升高与临床预后良好相关，表明存在TBI(例如“阳性”)，包括轻度TBI和中度/重度TBI。
[0736] 进一步进行了数据分析，以将GFAP和UCH-L1水平与GOSE评分相关联。图5A-5B包括在根据GOSE评分分组的受试者中的GFAP(图5A)和UCH-L1(图5B)水平的代表性箱线图。如图所示，与GOSE评分接近8(恢复/健康)的受试者相比，GOS评分接近1(死亡/TBI)的受试者的GFAP和UCH-L1水平均升高。
[0737] 除了用TBI的各种临床指标分别评估GFAP和UCH-L1水平之间的相关性之外，来自本公开的数据还解决了GFAP和UCH-L1的参考水平的组合在确定受试者是否已遭受TBI的预测诊断价值。分析是基于同时使用GFAP和UCH-L1的参考值或临界值进行的。如果受试者中测得或检测到的GFAP水平或UCH-L1水平大于相应的GFAP或UCH-L1参考值，则可预测一个或多个临床结果为阳性，或表明该受试者已遭受TBI。如果受试者中测得或检测到的GFAP水平和UCH-L1水平均小于相应的GFAP或UCH-L1参考值，则预测一个或多个临床结果为阴性，或表明受试者患有没有持续遭受TBI(健康受试者)。
[0738] 根据CT扫描结果，被诊断为患有TBI的受试者的GFAP和UCH-L1水平。图6是代表性图，其比较了基于CT扫描结果(CT阳性)诊断为TBI的受试者(CT阳性)和健康对照受试者(CT阴性)对各种GFAP和UCH-L1水平的测定灵敏度和特异度。每个数据点(用“+”号表示)代表与来自基于CT扫描诊断为TBI的受试者或健康受试者的GFAP水平和UCH-L1水平相关的灵敏度和特异度(CT阴性)。如图6所示，GFAP和UCH-L1的参考水平的组合可以与一种或多种临床结果例如CT扫描结果相关联，以确定受试者是否患有TBI。
[0740] 表8基于CT结果、GCS评分和MRI的针对GFAP/UCH-L1组合的生物标志物临界值(参考水平)
[0741]
[0742]
[0743] 对于一些时间点，与单独基于GFAP的参考水平的分析灵敏度和特异度相比，组合使用GFAP和UCH-L1的参考水平可提高分析灵敏度和特异度，如下表9所示。
[0744] 表9与单独GFAP相比的GFAP/UCH-L1组合的生物标志物临界值(参考水平)(基于CT扫描结果)
[0745]
[0746]
[0747] 根据GCS评分诊断为TBI的受试者的GFAP和UCH-L1水平。图7是比较各种试剂盒的测定灵敏度和特异度的代表性图。分配GCS评分的受试者的GFAP和UCH-L1水平；GCS评分<12的受试者为阳性(中度或重度TBI)，而GCS评分12>的受试者为阴性(轻度TBI或健康对照)。每个数据点(用“+”号表示)代表与基于分配的GCS评分被诊断为患有TBI的受试者的GFAP水平和UCH-L1水平相关的灵敏度和特异度。如图7所示，GFAP和UCH-L1的参考水平的组合可以与一种或多种临床结果例如GCS评分相关联，以确定受试者是否患有TBI。
[0748] 例如，除了上面讨论的CT扫描结果之外，表6还包括数据摘要，这些数据将GFAP和UCH-L1的参考水平与基于损伤后48小时不同时间点的测定灵敏度和特异度范围相关联在GSC评分上。在一些时间点上，与单独基于GFAP的参考水平的分析灵敏度和特异度相比，使用GFAP和UCH-L1的参考水平的组合可提高分析灵敏度和特异度，如下表10所示。
[0749] 表10与单独GFAP相比的GFAP/UCH-L1组合的生物标志物临界值(参考水平)(基于GCS评分)
[0750]
[0751]
[0752] 根据MSI扫描结果诊断为TBI的受试者的GFAP和UCH-L1水平。图8是针对基于MRI结果被诊断为患有TBI的受试者(阳性MRI)和健康对照受试者(阴性MRI)的各种GFAP和UCH-L1水平比较测定的灵敏度和特异度的代表性图。每个数据点(用“+”号表示)代表与基于MRI扫描诊断为患有TBI的受试者的GFAP水平和UCH-L1水平相关的灵敏度和特异度。如图8所示，GFAP和UCH-L1两者的参考水平的组合可以与一种或多种临床结果例如MRI扫描结果相关联，以确定受试者是否患有TBI。
[0753] 根据GOSE评分诊断为TBI的受试者的GFAP和UCH-L1水平。图9是针对基于GOSE评分(1＝TBI/死亡)诊断为患有TBI的受试者和健康对照受试者(8＝健康/康复)的各种GFAP和UCH-L1水平比较测定的灵敏度和特异度。每个数据点(用“+”号表示)代表与基于来自GOSE评分8的被诊断患有TBI的受试者的GFAP水平和UCH-L1水平相关的灵敏度和特异度。如图9所示，GFAP和UCH-L1两者的参考水平的组合可以与一种或多种临床结果(例如GOSE评分)相关以预测已经患有TBI的受试者的恢复。
[0754] 表现为患有TBI的受试者的GFAP和UCH-L1水平。下表11显示，在不同时间点(即4-8小时、8-12小时和12-16小时)，与基于单独GFAP的参考水平的检测灵敏度和特异度相比，使用GFAP和UCH-L1的参考水平的组合提高了测定的灵敏度和特异度。
[0755] 表11与单独GFAP相比的GFAP/UCH-L1组合的生物标志物临界值(参考水平)(疑似TBI)
[0756]
[0757]
[0758] 被诊断为患有TBI的患者与骨科对照组的GFAP和UCH-L1水平。除了使用健康的对照单独评估TBI的各种临床指标与GFAP和UCH-L1水平之间的相关性外，来自本公开的数据还解决了GFAP和UCH-L1的参考水平的组合在确定遭受了骨伤的人是否遭受了TBI的受试者中的预测诊断价值。分析是基于同时使用GFAP和UCH-L1的参考值或临界值进行的。
[0759] 下表12是在损伤后48小时的各个时间点将GFAP和UCH-L1的参考水平与测定灵敏度和特异度范围相关的数据的摘要。
[0760] 表12基于CT结果、GCS评分以及MRI的GFAP/UCH-L1组合的生物标志物临界值(参考水平)(骨科对照)
[0761]
[0762]
[0763] 另外，表12包括了基于GCS评分在损伤后48小时内各个时间点将GFAP和UCH-L1的参考水平与测定灵敏度和特异度范围相关联的数据摘要。图10是比较在基于MRI结果(阳性MRI)被诊断为患有TBI的受试者和正常对照受试者(阴性MRI)中对于各种GFAP和UCH-L1水平的测定灵敏度和特异度的代表性图。每个数据点(用“+”号表示)代表与基于MRI扫描诊断为患有TBI的受试者的GFAP水平和UCH-L1水平相关的灵敏度和特异度。如图10所示，GFAP和UCH-L1的参考水平的组合可以与一种或多种临床结果(例如MRI扫描结果)相关联，以确定受试者是否患有TBI。
[0764] 图11是比较了基于GOSE评分(1＝TBI/死亡)诊断为患有TBI的受试者和正常对照受试者(8＝健康/康复)对各种GFAP和UCH-L1水平的测定灵敏度和特异度的代表性图。每个数据点(用“+”号表示)代表与基于来自GOSE评分8的被诊断患有TBI的受试者的GFAP水平和UCH-L1水平相关的灵敏度和特异度。如图11所示，GFAP和UCH-L1的参考水平的组合可以与一种或多种临床结果(例如GOSE评分)相关用以预测患有TBI的受试者的恢复。
[0766] 对所公开的实施例的各种改变和修改对本领域技术人员将是显而易见的。可以进行这样的改变和修改，包括但不限于与化学结构、取代基、衍生物、中间体、合成、组合物、制剂或使用方法有关的那些，而不会脱离其精神和范围。
[0767] 为完整起见，各个方面由以下编号的项目列出：
[0768] 项目1.一种辅助诊断或确定已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者是否患有中度至重度创伤性脑损伤(TBI)的方法，该方法包括：
[0769] 在实际或疑似损伤后约48小时内对从受试者获得的样品进行测定，以测量或检测样品中的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平和泛素羧末端水解酶L1(UCH-L1)水平；并且[0770] (a)当样品中GFAP的水平低于约105pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平低于约110pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者未遭受中度、重度或中度至重度的TBI；或者
[0771] (b)当样品中GFAP的水平等于约105pg/mL至约890pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平等于约110pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定受试者未遭受中度、重度或中度至重度TBI；或者
[0772] (c)当样品中GFAP的水平高于约890pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平高于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者更可能遭受中度、重度或中度至重度的TBI。
[0773] 项目2.根据项目1所述的方法，其中在进行所述测定之前或之后，所述受试者已经接受了格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分，并且其中基于所述GCS评分怀疑所述受试者患有中度至重度TBI。
[0774] 项目3.根据项目2所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与基于GCS评分小于或等于12的已遭受中度至重度TBI的受试者相关。
[0775] 项目4.根据项目1-3中任何一项所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平是通过灵敏度等于或大于约79％、特异度等于或大于约33％的测定法确定的。
[0776] 项目5.根据项目1-4中任一项所述的方法，其中所述样品在实际或疑似损伤后约8小时至约16小时内从受试者获得。
[0777] 项目6.根据项目1-5中任一项所述的方法，其中与分别测量或检测GFAP或UCH-L1的测定法相比，所述测定法具有至少高2％的灵敏度和至少高3％的特异度。
[0778] 项目7.根据项目1-6中任一项所述的方法，其中所述样品是在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时内从受试者获得的；并且其中，GFAP的参考水平为约240pg/mL，UCH-L1的参考水平为约860pg/mL。并且其中所述测定法具有等于或大于97％的灵敏度和等于或大于51％的特异度。
[0779] 项目8.根据项目1-6中任一项所述的方法，其中所述样品是在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时内从受试者获得的；并且其中GFAP的参考水平为约10 5pg/mL，UCH-L1的参考水平为约840pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于97.5％的灵敏度和等于或大于36％的特异度。
[0780] 项目9.根据项目1-6中任一项所述的方法，其中所述样品是在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时内从受试者获得的；并且其中GFAP的参考水平为约890pg/mL，UCH-L1的参考水平为约920pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于79％的特异度。
[0781] 项目10.根据项目1-6中任一项所述的方法，其中所述样品是在实际或怀疑损伤后约12小时至约16小时内从受试者获得的；并且其中GFAP的参考水平为约505pg/mL，UCH-L1的参考水平为约1580pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于66％的特异度。
[0782] 项目11.一种辅助确定是否对已遭受或疑似已遭受头部损伤的人类受试者进行头部计算机断层(CT)扫描的方法，所述方法包括：
[0783] 在实际或疑似损伤后约48小时内对从受试者获得的样品进行测定，以测量或检测在样品中神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)水平和泛素羧末端水解酶L1(UCH-L1)水平的组合；并且
[0784] (a)当样品中GFAP的水平低于约50pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平低于约90pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者不需要进行CT扫描；或者[0785] (b)当样品中GFAP的水平等于约50pg/mL至约975pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平等于约90pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者不需要CT扫描；或者
[0786] (c)当样品中GFAP的水平高于约975pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平高于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定受试者更可能需要CT扫描。
[0787] 项目12.根据项目11所述的方法，其中受试者在进行测定之前或之后已接受CT扫描，并且其中根据该CT扫描结果疑似该受试者患有FBI。
[0788] 项目13.根据项目12所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与阴性CT扫描结果相关。
[0789] 项目14.根据项目11-13中任一项所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平是通过灵敏度等于或大于约54％、特异度等于或大于约32％的测定法确定的。
[0790] 项目15.根据项目11-14中任一项所述的方法，其中所述样品是在实际或疑似损伤后约4小时至约16小时内从受试者获得的。
[0791] 项目16.根据项目11-15中任一项所述的方法，其中与分别测量或检测GFAP或UCH-L1的测定法相比，该测定法具有至少高2％的灵敏度和至少高4％的特异度。
[0792] 项目17.根据项目11-16中任一项所述的方法，其中所述样品是在实际或疑似损伤后约4小时至约8小时内从受试者获得的；并且其中GFAP的参考水平约为110pg/mL，UCH-L1的参考水平约为2000pg/mL：并且其中该测定法的灵敏度等于或大于95％，特异度等于或大于62％。
[0793] 项目18.根据项目11-16中任一项所述的方法，其中所述样品是在实际或怀疑损伤后约8小时至约12小时内从受试者获得的；并且其中GFAP的参考水平为约240pg/mL，UCH-L1的参考水平为约300pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于91.5％的灵敏度和等于或大于52％的特异度。
[0794] 项目19.根据项目11-16中任一项所述的方法，其中所述样品是在实际或怀疑损伤后约12小时至约16小时内从受试者获得的；并且其中GFAP的参考水平为约190pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约90pg/mL。并且其中所述测定法具有等于或大于99％的灵敏度和等于或大于36％的特异度。
[0795] 项目20.一种辅助确定遭受头部损伤的人类受试者是否已遭受创伤性脑损伤(TBI)的方法，该方法包括：
[0796] 在损伤后约48小时内对从受试者获得的样品进行测定，以测量或检测在该样品中的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH)水平的组合-L1)的水平；并且
[0797] (a)当样品中GFAP的水平低于约15pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平低于约70pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者未患有TBI；或者
[0798] (b)当样品中GFAP的水平等于约15pg/mL至约40pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平等于约70pg/mL至约150pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者未患有TBI；或者
[0799] (c)当样品中GFAP的水平高于约40pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平高于约150pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者更可能患有TBI。
[0800] 项目21.根据项目20所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平是通过灵敏度等于或大于约90％、特异度等于或大于约35％的测定法确定的。
[0801] 项目22.根据项目20或21所述的方法，其中样品在损伤后约4小时至约16小时内从受试者获得。
[0802] 项目23.根据项目20-21中任一项所述的方法，其中与分别测量或检测GFAP或UCH-L1的测定法相比，该测定法具有至少高3％的灵敏度和至少高17％的特异度。
[0803] 项目24.根据20-23中任一项所述的方法，其中所述样品是在损伤后约8小时至约12小时内从受试者获得的；并且其中GFAP的参考水平为约30pg/mL，而UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于92％的灵敏度和等于或大于99％的特异度。
[0804] 项目25.根据项目20-23中任一项所述的方法，其中所述样品是在损伤后约12小时至约16小时内从受试者获得的；并且其中，GFAP的参考水平为约30pg/mL，UCH-L1的参考水平为约110pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于99％的特异度。
[0805] 项目26.根据项目20-23中任一项所述的方法，其中所述样品在损伤后约4小时至约8小时内从受试者获得；并且其中，GFAP的参考水平为约40pg/mL，UCH-L1的参考水平为约100pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于94％的特异度。
[0806] 项目27.根据项目20-23中任一项所述的方法，其中所述样品是在损伤后约8小时至约12小时内从受试者获得的；并且其中，GFAP的参考水平为约15pg/mL，UCH-L1的参考水平为约150pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于82％的特异度。
[0807] 项目28.根据项目20-23中任一项所述的方法，其中所述样品是在损伤后约12小时至约16小时内从受试者获得的；并且其中，GFAP的参考水平为约20pg/mL，UCH-L1的参考水平为约60pg/mL。并且其中所述测定法具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于65％的特异度。
[0808] 项目29.一种辅助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者进行头部磁共振成像(MRI)程序的方法，该方法包括：
[0809] 在实际或疑似损伤后约48小时内对从受试者获得的样品进行测定，以测量或检测在该样品中的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH)水平的组合-L1)的水平；并且
[0810] (a)当样品中GFAP的水平低于约15pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平低于约50pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者不需要MRI程序；或者
[0811] (b)当样品中GFAP的水平等于约15pg/mL至约1000pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平等于约50pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者更可能需要MRI程序；或者
[0812] (c)当样品中GFAP的水平高于约1000pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平高于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者更可能需要MRI程序。
[0813] 项目30.根据项目29所述的方法，其中所述受试者在进行所述测定之后已接受过MRI，并且其中基于所述MRI结果所述受试者疑似患有TBI。
[0814] 项目31.根据项目30所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与阴性MRI结果相关。
[0815] 项目32.根据项目29-31中任一项所述的方法，其中所述GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平通过具有约80％至约98％的灵敏度和约30％至约85％的特异度的测定法确定。
[0816] 项目33.根据项目29-32中的任一项所述的方法，其中所述受试者在进行所述测定之前已接受过阴性的CT扫描结果。
[0817] 项目34.一种辅助确定是否对已遭受或可能以遭受头部损伤的人类受试者进行头部磁共振成像(MRI)程序的方法，该方法包括：
[0818] 在实际或疑似损伤后约48小时内对从受试者获得的样品进行测定，以测量或检测在该样品中的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH)水平的组合-L1)的水平；并且
[0819] (a)当样品中GFAP的水平等于约0pg/mL至约68pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平等于约0pg/mL至约99pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者不需要MRI程序；或者
[0820] (b)当样品中GFAP的水平高于约68pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平高于约99pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者更可能需要MRI程序。
[0821] 项目35.根据项目34所述的方法，其中，所述受试者在进行所述测定之后已接受过MRI，并且其中，基于所述MRI结果所述受试者疑似患有TBI。
[0822] 项目36.根据项目34所述的方法，其中GFAP的参考水平或UCH-L1的参考水平与阴性MRI结果相关。
[0823] 项目37.根据项目34-36中的任一项所述的方法，其中通过具有约90％至约95％的灵敏度和约31％至约46％的特异度的测定法确定所述GFAP的参考水平。
[0824] 项目38.根据项目34-36中的任一项所述的方法，其中通过具有约81％至约84％的灵敏度和约31％至约34％的特异度的测定法确定所述UCH-L1的参考水平。
[0825] 项目39.根据项目34-36中的任一项的方法，其中所述受试者在进行所述测定之前已经接受过阴性的CT扫描结果。
[0826] 项目40.一种用于预测已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者的预后的方法，该方法包括：
[0827] 在实际或疑似损伤后约48小时内对从受试者获得的样品进行测定，以测量或检测在该样品中的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH)水平的组合-L1)的水平；并且
[0828] (a)当样品中GFAP的水平低于约80pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平低于约130pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者具有有利的预后；或者
[0829] (b)当样品中GFAP的水平等于约80pg/mL至约2000pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平等于约130pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者更可能具有不利的预后；或者
[0830] (c)当样品中GFAP的水平高于约2000pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平高于约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者更可能具有不利的预后。
[0831] 项目41.根据项目40所述的方法，其中所述受试者在进行所述测定之后已接受过扩展的格拉斯哥预后量表(GOSE)评分，并且其中基于所述GOSE评分疑似所述受试者具有较差的预后。
[0832] 项目42.根据项目41所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与基于GOSE评分为1的不利的预后相关。
[0833] 项目43.根据项目40-42中任一项所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平通过具有约80％至约97％的灵敏度和约30％至约95％的特异度的测定法确定。
[0834] 项目44.根据项目1-43中任何一项所述的方法，其中GFAP和UCH-L1使用免疫测定法或临床化学测定法进行测量或检测。
[0835] 项目45.根据项目1-43中的任何一项所述的方法，其中使用单分子检测测定法测量或检测GFAP和UCH-L1的水平。
[0836] 项目46.根据项目1-43中的任一项所述的方法，其中，测量GFAP的水平包括：
[0837] (a)使样品以任何顺序同时或依次接触：
[0838] (1)至少一种GFAP捕获抗体，其与GFAP或GFAP片段上的表位结合形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原复合物，和
[0839] (2)至少一种GFAP检测抗体，其包括可检测标记并与GFAP上未与GFAP捕获抗体结合的表位结合，形成GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物，由此形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物；并且
[0840] (b)基于至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物中由可检测标记产生的信号，测量样品中GFAP的量或浓度。
[0841] 项目47.根据项目1-43和46中任一项所述的方法，其中，测量UCH-L1的水平包括：
[0842] (a)使样品以任何顺序同时或依次接触：
[0843] (1)至少一种UCH-L1捕获抗体，其与UCH-L1或UCH-L1片段上的表位结合形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原复合物，和
[0844] (2)至少一种UCH-L1检测抗体，其包含可检测标记并与UCH-L1上未与至少一种UCH-L1捕获抗体结合的表位结合，形成UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物，由此形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物；并且
[0845] (b)基于至少一种UCH-L1捕获抗体-UCFI-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物中的可检测标记产生的信号，测量样品中UCH-L1的量或浓度。
[0846] 项目48.根据项目1-47中的任一项所述的方法，其中所述样品选自全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品。
[0847] 项目49.根据项目1-48中任一项所述的方法，其中所述样品是在所述受试者因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得。
[0848] 项目50.根据项目1-48中任一项所述的方法，其中样品是在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得的。
[0849] 项目51.根据项目1-48中任一项所述的方法，其中所述样品获自患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑肿瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者。
[0850] 项目52.根据项目1-51中任一项所述的方法，其中，所述方法可以在任何受试者上进行，而无需考虑选自由所述受试者的临床状况，所述受试者的实验室值，所述受试者的遭受轻度、中度、重度创伤性脑损伤的分类，所述受试者表现出的低水平或高水平的UCH-L1，以及其中所述受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间所组成的组的因素。
[0851] 项目53.根据项目1-52中的任一项所述的方法，进一步包括用创伤性脑损伤疗法治疗所述受试者。
[0852] 项目54.根据项目1-53中任一项所述的方法，还包括监测所述受试者。
[0853] 项目55.根据项目1-52中的任一项所述的方法，其中所述样品是在所述受试者遭受了骨科损伤后获得的。
[0854] 项目57.根据项目1-52中的任一项所述的方法，其中，所述样品是全血样品。
[0855] 项目58.根据项目1-46中任一项所述的方法，其中，所述样品是血清样品。
[0856] 项目59.根据项目1-46中任一项所述的方法，其中，所述样品是血浆样品。
[0857] 项目60.根据项目57-59中任一项所述的方法，其中，所述测定是免疫测定。
[0858] 项目61.根据项目57-59中任一项所述的方法，其中，所述测定是临床化学测定。
[0859] 项目62.根据项目57-59中的任一项所述的方法，其中，所述测定是单分子检测测定。
[0860] 项目63.一种辅助诊断或确定已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者是否患有中度至重度创伤性脑损伤(TBI)的方法，该方法包括：
[0861] 在实际或疑似损伤后约48小时内对从受试者获得的样品进行测定，以测量在样品中神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平；和[0862] 当样品中的GFAP水平等于约105pg/mL至约890pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平等于约110pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定受试者未患有中度、重度或中度至重度TBI。
[0863] 项目64.根据项目63所述的方法，其中，受试者在进行测定之前或之后已经接受过格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分，并且其中，基于GCS评分，该受试者疑似患有中度、重度或中度至重度TBI。
[0864] 项目65.根据项目64所述的方法，基于GCS评分为3-12，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与患有中度至重度TBI的受试者相关。
[0865] 项目66.根据项目63-65中任一项所述的方法，其中样品是从受试者获得的：在实际或疑似损伤后约0至约4小时之内、在实际或疑似损伤约4小时至约8小时之内、在实际或疑似损伤后8小时至约12小时、在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时内、在实际或疑似损伤后约16小时至约20小时内、在实际或疑似损伤后20小时至约24小时内、在实际或疑似损伤后约24小时至约28小时内、在实际或疑似损伤后约24小时至约48小时内、在实际或疑似损伤后约28小时至约32小时内、在实际或疑似损伤后约32小时至约36小时内、在实际或疑似损伤后约36小时至约40小时内、在实际或疑似损伤后约40小时至约44小时内、或在实际或疑似损伤后的44到48小时内。
[0866] 项目67.根据项目63-66中任一项所述的方法，其中：(a)GFAP的参考水平约为105pg/mL，UCH-L1的参考水平约为840pg/mL；(b)GFAP的参考水平约为150pg/mL，UCH-L1的参考水平约为2000pg/mL；(c)GFAP的参考水平约为240pg/mL，UCH-L1的参考水平约为
860pg/mL；(d)GFAP的参考水平约为265pg/ml，UCH-L1的参考水平约为860pg/mL；(e)GFAP的参考水平约为370pg/mL，UCH-L1的参考水平约为110pg/mL；(f)GFAP的参考水平约为505pg/mL，UCH-L1的参考水平约为1580pg/mL；(g)GFAP的参考水平约为695pg/mL，UCH-L1的参考水平约为1570pg/mL；(h)GFAP的参考水平约为890pg/mL，UCH-L1的参考水平约为920pg/mL。
860pg/mL；(d)GFAP的参考水平约为265pg/ml，UCH-L1的参考水平约为860pg/mL；(e)GFAP的参考水平约为370pg/mL，UCH-L1的参考水平约为110pg/mL；(f)GFAP的参考水平约为505pg/mL，UCH-L1的参考水平约为1580pg/mL；(g)GFAP的参考水平约为695pg/mL，UCH-L1的参考水平约为1570pg/mL；(h)GFAP的参考水平约为890pg/mL，UCH-L1的参考水平约为920pg/mL。
[0867] 项目68.根据项目63-66中任一项所述的方法，其中所述样品是在以下情况下从受试者获得的：(a)在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时之内，并且GFAP的水平为约240pg/mL，并且级别的UCH-L1约为860pg/mL；(b)在实际或疑似伤害后约8小时至约12小时，并且GFAP的水平约为265pg/mL，UCH-L1的水平约为860pg/mL；(c)在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时，并且GFAP的水平约为890pg/mL，UCH-L1的水平约为920pg/mL；(d)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，并且GFAP的水平约为105pg/mL，UCH-L1的水平约为
840pg/mL；(e)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，并且GFAP的水平约为370pg/mL，UCH-L1的水平约为110pg/mL；(f)在实际或疑似损伤损伤后约12小时至约16小时，并且GFAP的水平约为370pg/mL，UCH-L1的水平约为110pg/mL；(g)在实际或疑似损伤后约12小时至约
16小时，并且GFAP的水平约为505pg/mL，UCH-L1的水平约为1590pg/mL；(h)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，并且GFAP的水平约为695pg/mL，UCH-L1的水平约为1570pg/mL；
或(i)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，且GFAP的水平约为150pg/mL，UCF1-L1的水平约为2000pg/mL。
840pg/mL；(e)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，并且GFAP的水平约为370pg/mL，UCH-L1的水平约为110pg/mL；(f)在实际或疑似损伤损伤后约12小时至约16小时，并且GFAP的水平约为370pg/mL，UCH-L1的水平约为110pg/mL；(g)在实际或疑似损伤后约12小时至约
16小时，并且GFAP的水平约为505pg/mL，UCH-L1的水平约为1590pg/mL；(h)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，并且GFAP的水平约为695pg/mL，UCH-L1的水平约为1570pg/mL；
或(i)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，且GFAP的水平约为150pg/mL，UCF1-L1的水平约为2000pg/mL。
[0868] 项目69.根据项目63-68中任一项所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平通过灵敏度等于或大于约79％且特异度等于或大于约33％的测定法确定。
[0869] 项目70.根据项目63-69中任一项所述的方法，其中所述样品是在实际疑似损伤后约8小时至约16小时内从受试者获得的。
[0870] 项目71.根据项目63-70中任一项所述的方法，其中与分别测量或检测GFAP或UCH-L1的测定法相比，该测定法具有至少高2％的灵敏度和至少高3％的特异度。
[0871] 项目72.根据项目63-71中任一项所述的方法，其中所述样品是从以下受试者中获得的：
[0872] (a)在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时：其中GFAP的参考水平约为240pg/mL，而UCH-L1的参考水平约为860pg/mL：并且其中所述测定法具有等于或大于97％的灵敏度和等于或大于51％的特异度；
[0873] (b)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时；其中GFAP的参考水平为约105pg/mL，UCH-L1的参考水平为约840pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于97.5％的灵敏度和等于或大于36％的特异度；
[0874] (c)在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时；其中GFAP的参考水平为约890pg/mL，UCH-L1的参考水平为约920pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于79％的特异度；或者
[0875] (d)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时；其中GFAP的参考水平为约505pg/mL，UCH-L1的参考水平为约1580pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于66％的特异度。
[0876] 项目73.一种辅助辅助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者进行头部计算机断层扫描(CT)扫描的方法，该方法包括：
[0877] 对在实际或疑似损伤后约48小时内从受试者获得的样品进行分析以测量样品中神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)水平的组合；和[0878] 当样品中的GFAP水平等于约50pg/mL至约975pg/mL的GFAP的参考水平并且UCH-L1的水平等于约90pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定受试者不需要进行CT扫描。
[0879] 项目74.根据项目73所述的方法，其中所述受试者在进行所述测定之前或之后已经接受过CT扫描，并且其中基于所述CT扫描结果，所述受试者疑似患有TBI。
[0880] 项目75.根据项目74所述的方法，其中，GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与阴性CT扫描结果相关。
[0881] 项目76.根据项目73-75中任一项所述的方法，其中所述样品获自如下受试者：在实际或疑似损伤后约0至约4小时之内、在实际或疑似损伤约4小时至约8小时之内、在实际或疑似损伤后8小时至约12小时、在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时内、在实际或疑似损伤后约16小时至约20小时内、在实际或疑似损伤后20小时至约24小时内、在实际或疑似损伤后约24小时至约28小时内、在实际或疑似损伤后约24小时至约48小时内、在实际或疑似损伤后约28小时至约32小时内、在实际或疑似损伤后约32小时至约36小时内、在实际或疑似损伤后约36小时至约40小时内、在实际或疑似损伤后约40小时至约44小时内、或在实际或疑似损伤后的44到48小时内实际或疑似损伤。
[0882] 项目77.根据项目73-76中任一项所述的方法，其中(a)GFAP的参考水平约为50pg/mL，UCH-L1的参考水平约为2000pg/mL；(b)GFAP的参考水平约为95pg/mL，UCH-L1的参考水平约为2000pg/mL；(c)GFAP的参考水平约为110pg/mL，UCH-L1的参考水平约为2000pg/mL；(d)GFAP的参考水平约为115pg/mL，UCH-L1的参考水平约为110pg/mL；(e)GFAP的参考水平约为140pg/mL，UCH-L1的参考水平约为2000pg/mL；(f)GFAP的参考水平约为150pg/mL，UCH-L1的参考水平约为190pg/mL；(g)GFAP的参考水平约为190pg/mL，UCH-L1的参考水平约为
90pg/mL；(h)GFAP的参考水平约为240pg/mL，UCH-L1的参考水平约为300pg/mL；(i)GFAP的参考水平约为285pg/mL，UCH-L1的参考水平约为190pg/mL。(j)GFAP的参考水平约为500pg/mL，IJCH-L1的参考水平约为1450pg/mL；(k)GFAP的参考水平约为555pg/mL，UCH-L1的参考水平约为810pg/mL；(1)GFAP的参考水平约为800pg/mL，UCH-L1的参考水平约为900pg/mL；
(m)GFAP的参考水平约为840pg/mL，UCH-L1的参考水平约为2000pg/mL；(n)GFAP的参考水平约为880pg/mL，UCH-L1的参考水平约为810pg/mL；或(o)GFAP的参考水平约为975pg/mL，UCH-L1的参考水平约为1580pg/mL。
90pg/mL；(h)GFAP的参考水平约为240pg/mL，UCH-L1的参考水平约为300pg/mL；(i)GFAP的参考水平约为285pg/mL，UCH-L1的参考水平约为190pg/mL。(j)GFAP的参考水平约为500pg/mL，IJCH-L1的参考水平约为1450pg/mL；(k)GFAP的参考水平约为555pg/mL，UCH-L1的参考水平约为810pg/mL；(1)GFAP的参考水平约为800pg/mL，UCH-L1的参考水平约为900pg/mL；
(m)GFAP的参考水平约为840pg/mL，UCH-L1的参考水平约为2000pg/mL；(n)GFAP的参考水平约为880pg/mL，UCH-L1的参考水平约为810pg/mL；或(o)GFAP的参考水平约为975pg/mL，UCH-L1的参考水平约为1580pg/mL。
[0883] 项目78.根据项目73-76中任一项所述的方法，其中所述样品是在以下情况下从受试者获得的：(a)在实际或疑似损伤后约4小时至约8小时内，且GFAP的水平为约50pg/mL，UCH-L1水平约为2000pg/mL；(b)在实际或疑似损伤后约4小时至约8小时，且GFAP的水平约为110pg/mL，UCH-L1的水平约为2000pg/mL；(c)在实际或疑似损伤后约4小时至约8小时，且GFAP的水平约为140pg/mL，UCH-L1的水平约为2000pg/mL。(d)在实际或疑似损伤后约4小时至约8小时，且GFAP的水平为约500pg/mL，而UCH-L1的水平为约1450pg/mL；(e)在实际或疑似损伤后约4小时至约8小时，且GFAP的水平为约890pg/mL，IJCH-L1的水平为约920pg/mL；(i)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，且GFAP的水平为约105pg/mL，而UCH-L1的水平为约840pg/mL；(g)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，且GFAP的水平约为370pg/ml，UCH-L1的水平约为110pg/mL；(h)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，GFAP的水平约为505pg/mL，UCH-L1的水平约为1580pg/mL；(i)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，且GFAP的水平约为695pg/mL，UCH-L1的水平约为1570pg/mL；或(j)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，且GFAP的水平约为150pg/mL，UCH-L1的水平约为2000pg/mL。
[0884] 项目79.根据项目73-78中任何一项所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平是通过灵敏度等于或大于约54％且特异度等于或大于约32％的测定法确定的。
[0885] 项目80.根据项目73-79中任一项所述的方法，其中所述样品在实际或疑似损伤后约4小时至约16小时内从受试者获得。
[0886] 项目81.根据项目73-80中任一项所述的方法，其中与单独测量或检测GFAP或UCH-L1的测定法相比，该测定法具有至少高2％的灵敏度和至少高4％的特异度。
[0887] 项目82.根据项目73-81中任一项所述的方法，其中所述样品是从以下受试者中获得的：
[0888] (a)在实际或疑似损伤后约4小时至约8小时；其中GFAP的参考水平约为110pg/mL，而UCH-L1的参考水平约为2000pg/mL；并且具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于62％的特异度；
[0889] (b)在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时；其中GFAP的参考水平为约240pg/mL，UCH-L1的参考水平为约300pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于91.5％的灵敏度和等于或大于52％的特异度；要么
[0890] (c)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时；其中GFAP的参考水平为约190pg/mL，UCH-L1的参考水平为约90pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于99％的灵敏度和等于或大于36％的特异度。
[0891] 项目83.一种辅助确定遭受头部损伤的人类受试者是否遭受创伤性脑损伤(TBI)的方法，该方法包括：
[0892] 在实际或疑似损害发生后约48小时内，对从受试者获得的样品进行测定以测量在该样品中神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；
[0893] 当样品中的GFAP水平等于约15pg/mL至约40pg/mL的GFAP的参考水平且样品中的UCH-L1水平等于约70pg/mL至约150pg/mL的UCH-L1的参考水平时，受试者更有可能患有TBI。
[0894] 项目84.根据项目83中任一项所述的方法，其中，所述样品是从在以下时间从受试者获得的：在损伤后约0至约4小时内、在损伤后约4小时至约8小时内、在损伤后约8小时至约12小时内、在损伤后约12小时至约16小时内、在损伤后约16小时至约20小时内、在损伤后约20小时至约24小时内、在损伤后约24小时至约28小时内、在损伤后约24小时至约48小时内、在损伤后约28小时至约32小时内、在损伤后约32小时至约36小时内、在损伤后约36小时至约40小时内、在损伤后约40小时至约44小时内、或在损伤后44至48小时内。
[0895] 项目85.根据项目83或84所述的方法，其中(a)GFAP的参考水平约为10pg/mL，UCH-L1的参考水平约为60pg/mL；(b)GFAP的参考水平约为15pg/mL，UCH-L1的参考水平约为70pg/mL；(c)GFAP的参考水平约为15pg/mL，UCH-L1的参考水平约为90pg/mL；(d)GFAP的参考水平约为15pg/mL，UCH-L1的参考水平约为150pg/mL；(e)GFAP的参考水平约为20pg/mL，UCH-L1的参考水平约为60pg/mL；(f)GFAP的参考水平约为30pg/mL，UCH-L1的参考水平约为
70pg/mL；(g)GFAP的参考水平约为30pg/mL，UCH-L1的参考水平约为110pg/mL。
70pg/mL；(g)GFAP的参考水平约为30pg/mL，UCH-L1的参考水平约为110pg/mL。
[0896] 项目86.根据项目83或84所述的方法，其中样品是在以下情况下从受试者获得的：(a)在实际或疑似损伤后约4小时至约8小时内，且GFAP的水平约为15pg/mL，UCH-L1的水平约为70pg/mL；(b)在实际或疑似损伤后约4小时至约8小时，且GFAP的水平约为30pg/mL，UCH-L1的水平约为70pg/mL；(c)在实际或疑似损伤后约4小时至约8小时，且GFAP的水平约为40pg/mL，UCH-L1的水平约为100pg/mL；(d)在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时，且GFAP的水平约为15pg/mL，UCH-L1的水平约为90pg/mL；(e)在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时，且GFAP的水平约为15pg/mL，UCH-L1的水平约为150pg/mL；(f)在实际或疑似损伤后约8小时至约12小时，且GFAP的水平约为30pg/mL，UCH-L1的水平约为110pg/mL；(g)实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，且GFAP的水平约为10pg/mL，UCH-L1的水平约为60pg/mL；(h)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，且GFAP的水平约为20pg/mL，UCH-L1的水平约为60pg/mL；或(i)在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时，且GFAP的水平约为30pg/mL，UCH-L1的水平约为110pg/mL。
[0897] 项目87.根据项目83-86中任一项所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平是通过灵敏度等于或大于约90％且特异度等于或大于约35％的测定法确定的。
[0898] 项目88.根据项目83-87中任一项所述的方法，其中所述样品在损伤后约4小时至约16小时内从受试者获得。
[0899] 项目89.根据项目83-88中任一项所述的方法，其中与单独测量或检测GFAP或UCH-L1的测定法相比，该测定法具有至少高3％的灵敏度和高至少17％的特异度。
[0900] 项目90.根据项目83-89中任一项所述的方法，其中所述样品是从以下受试者中获得的：
[0901] (a)损伤后约8小时至约12小时；其中GFAP的参考水平约为30pg/mL，UCH-L1的参考水平约为110pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于92％的灵敏度和等于或大于99％的特异度；
[0902] (b)损伤后约12小时至约16小时；其中GFAP的参考水平约为30pg/mL，UCH-L1的参考水平约为110pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于99％的特异度；
[0903] (c)损伤后约4小时至约8小时；其中GFAP的参考水平约为40pg/mL，UCH-L1的参考水平约为100pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于90％的灵敏度和等于或大于94％的特异度；
[0904] (d)损伤后约8小时至约12小时；其中GFAP的参考水平约为15pg/mL，UCH-L1的参考水平约为150pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于82％的特异度；或者
[0905] (e)损伤后约12小时至约16小时；其中GFAP的参考水平约为20pg/mL，UCH-L1的参考水平约为60pg/mL；并且其中所述测定法具有等于或大于95％的灵敏度和等于或大于65％的特异度。
[0906] 项目91.一种辅助辅助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者进行头部磁共振成像(MRI)程序的方法，该方法包括：
[0907] 对在实际或疑似损伤后约48小时内从受试者获得的样品进行测定以测量在样品中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的水平和泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的水平的组合；并且
[0908] (a)当样品中的GFAP水平小于约15pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中的UCH-L1水平小于约50pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定该受试者不需要受试者进行MRI程序；或者
[0909] (b)当样品中GFAP水平等于约15pg/mL至约1000pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1水平等于约50pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，确定受试者更有可能需要MRI程序；或者
[0910] (c)当样品中GFAP水平大于约1000pg/mL的GFAP的参考水平以及样品中UCH-L1的水平大于约2000pg/L的UCH-L1的参考水平时，确定受试者更有可能需要MRI程序。
[0911] 项目92.根据项目91所述的方法，其中所述受试者在进行所述测定后已接受MRI，并且其中基于所述MRI结果所述受试者疑似患有TBI。
[0912] 项目93.根据项目91所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与MRI阴性结果相关。
[0913] 项目94.根据项目91-93中任一项所述的方法，其中样品是在如下时间从受试者获得的：在实际或疑似损伤后约0至约4小时内、在实际或疑似损伤后约4小时至约8小时内、在实际或疑似损伤后8小时至约12小时、在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时内、在实际或疑似损伤后约16小时至约20小时内、在实际或疑似损伤后20个小时至约24小时内、在实际或疑似损伤后约24小时至约28小时内、在实际或疑似损伤后约24小时至约48小时内、在实际或疑似损伤后约28小时至约32小时内、在实际或疑似损伤后约32小时至约36小时内、在实际或疑似损伤后约36小时至约40小时内、在实际或疑似损伤后约40小时至约44小时内损伤、或在实际或疑似损伤后的44至48小时内。
[0914] 项目95.根据项目91-94中任一项的方法，其中所述GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平是通过具有约80％至约98％的灵敏度和约30％至约85％的特异度的测定法确定的。
[0915] 项目96.根据项目91-95中的任一项的方法，其中所述受试者在进行所述测定之前已经接受过阴性的CT扫描结果。
[0916] 项目97.一种辅助预测已遭受或可能已遭受头部损伤的人类受试者的预后的方法，该方法包括：
[0917] 对在实际或疑似遭受损伤后的约48小时内从所述受试者获得的样品进行测定以测量或检测在该样品中的神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)水平和泛素水平的组合羧基末端水解酶L1(UCH-L1)；并且
[0918] 当样品中GFAP的水平等于约80pg/mL至约2000pg/mL的GFAP的参考水平并且样品中UCH-L1的水平等于约130pg/mL至约2000pg/mL的UCH-L1的参考水平时，预测所述受试者更可能具有不利的预后。
[0919] 项目98.根据项目97所述的方法，其中所述受试者在进行所述测定后已接受过格拉斯哥预后扩展量表(GOSE)评分，并且其中基于所述GOSE评分该受试者疑似预后较差。
[0920] 项目99.根据项目97所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平与基于GOSE评分为1的较差预后相关。
[0921] 项目100.根据项目97-99中任一项所述的方法，其中所述样品在以下时间从受试者获得：在实际或疑似损伤后约0至约4小时之内、在实际或疑似损伤约4小时至约8小时之内、在实际或疑似损伤后8小时至约12小时、在实际或疑似损伤后约12小时至约16小时内、在实际或疑似损伤后约16小时至约20小时内、在实际或疑似损伤后20小时至约24小时内、在实际或疑似损伤后约24小时至约28小时内、在实际或疑似损伤后约24小时至约48小时内、在实际或疑似损伤后约28小时至约32小时内、在实际或疑似损伤后约32小时至约36小时内、在实际或疑似损伤后约36小时至约40小时内、在实际或疑似损伤后约40小时至约44小时内、或在实际或疑似损伤后的44到48小时内。
[0922] 项目101.根据项目97-100中的任一项所述的方法，其中GFAP的参考水平和UCH-L1的参考水平通过具有约80％至约97％的灵敏度和约30％至约95％的特异度的测定来确定。
[0923] 项目102.根据项目63-101中任一项所述的方法，其中，测量GFAP的水平包括：
[0924] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0925] (1)至少一种GFAP捕获抗体，其与GFAP或GFAP片段上的表位结合形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原复合物，和
[0926] (2)至少一种GFAP检测抗体，其包括可检测标记并与GFAP上的未与所述GFAP捕获抗体结合的表位结合，以形成GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物，由此形成至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物；并且
[0927] (b)基于至少一种GFAP捕获抗体-GFAP抗原-至少一种GFAP检测抗体复合物中由可检测标记产生的信号，测量样品中GFAP的量或浓度。
[0928] 项目103.根据项目63-102中任一项所述的方法，其中，测量UCH-L1的水平包括：
[0929] (a)以任何顺序同时或依次使所述样品接触：
[0930] (1)至少一种UCH-L1捕获抗体，其与UCH-L1或UCH-L1片段上的表位结合形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原复合物，和
[0931] (2)至少一种UCH-L1检测抗体，其包含可检测标记并与UCH-L1上的未与所述至少一种UCH-L1捕获抗体结合的表位结合，以形成UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物，由此形成至少一种UCH-L1捕获抗体-UCH-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物；并且
[0932] (b)基于至少一种UCH-L1捕获抗体-UCFI-L1抗原-至少一种UCH-L1检测抗体复合物中的可检测标记产生的信号，测量样品中UCH-L1的量或浓度。
[0933] 项目104.根据项目63-103中的任一项所述的方法，其中所述样品选自全血样品、血清样品、脑脊髓液样品和血浆样品。
[0934] 项目105.根据项目63-104中任一项所述的方法，其中获得以下样品：
[0935] (a)在受试者遭受因物理震动、由外部机械力或其他力而导致闭合式或开放式的头部创伤的钝性撞击、一次或多次跌落、爆炸或冲击波或其他类型的钝力创伤之后获得；
[0936] (b)在受试者摄入或暴露于化学物质、毒素或化学物质和毒素的组合之后获得；或者
[0937] (c)从患有自身免疫性疾病、代谢紊乱、脑瘤、缺氧、病毒、脑膜炎、脑积水或其组合的受试者获得。
[0938] 项目106.根据根据项目63-105中的任一项所述的方法，其中，所述方法可以在任何受试者上进行，而无需考虑选自由所述受试者的临床状况，所述受试者的实验室值，所述受试者的遭受轻度、中度、重度创伤性脑损伤的分类，所述受试者表现出的低水平或高水平的UCH-L1，以及其中所述受试者可能已遭受头部损伤的任何事件的时间所组成的组的因素。
[0939] 项目107.根据项目63-106中任一项所述的方法，进一步包括用创伤性脑损伤治疗法治疗受试者。
[0940] 项目108.根据项目63-107中任一项所述的方法，还包括监测所述受试者。
[0941] 项目109.根据项目63-107中任一项所述的方法，所述样品是在所述受试者遭受了骨科损伤后获得的。
[0942] 项目110.根据项目63-109中任一项所述的方法，其中所述样品是：(a)全血样品；(b)血清样品；或(c)血浆样品。
[0943] 项目111.根据项目63-110中任一项所述的方法，其中所述测定是：(a)免疫测定；(b)临床化学测定；或(c)单分子检测测定。
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