技术领域
[0001] 本
发明属于
生物技术领域，具体涉及一种苹果组培苗瓶外嫁接生根的微嫁接方法。
背景技术
[0002] 组织培养微嫁接技术由Murashige创立，是一种组织培养与嫁接相结合，将不同品种的
砧木与
接穗组培苗在组织培养条件下进行嫁接的技术。由于其具有所需试材少、节约土地、研究方便等优点，已被广泛地应用于多种果树的研究与生产。但组培苗在无菌条件下、专用培养基中多次转接培养，生产成本高，且操作较难，速度相对较慢，制约着组培嫁接苗的规模化、产业化生产。
发明内容
[0003] 为解决上述技术问题，本发明提供了一种苹果组培苗瓶外嫁接生根的微嫁接方法。本发明模拟成熟果树嫁接过程，使接穗与砧木充分结合，在较封闭的、湿度大的基质中生根嫁接，后逐步撤去塑料膜，直接进入基质栽培阶段。
[0004] 为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
[0005] 本发明提供了一种苹果组培苗瓶外嫁接生根的微嫁接方法，所述微嫁接生根方法包括以下步骤：
[0006] 1)苹果组培苗继代：无菌条件下，将苹果组培苗的茎切成0.5-1cm，径向插入继代培养基，继代培养；
[0007] 2)生根准备：将生根基质与
水混合，将湿度调整到60％的生根基质填入生根容器内，基质厚度与生根容器高度相同；
[0008] 3)苹果苗生根：选择继代培养生长旺盛的苹果组培苗，去掉愈伤组织和底部
叶片，将其茎插入所述生根基质，插入结束后喷洒水，将容器密封；
[0009] 4)生根期管理：定期检查基质湿度，保持湿度为50％-70％，进行生根培养；
[0010] 5)苹果苗嫁接：挑选生根的苹果苗作为砧木，切掉顶端叶片，保留根部向上长度为2.5cm-3cm的茎，从切口处径向切开，接穗削成楔形，插入砧木，
铝箔纸缠绕固定；喷洒水于表面，密封；
[0011] 6)嫁接培养期管理：定期检查基质，保持湿度为50％-60％，嫁接培养获得嫁接生根的苹果组培苗。
[0012] 进一步的：所述步骤1)中继代培养基由终浓度为0.5mg/L的6-BA、0.2mg/L的IAA、MS培养基、
凝固剂、
蔗糖和水组成，调整培养基pH至5.8。
[0013] 进一步的：所述凝固剂为琼脂，所述凝固剂在其所在的培养基中的终浓度均为7.5g/L。
[0014] 进一步的：所述步骤1)中继代培养的条件为24℃、光周期为16/8h，继代培养40天。
[0015] 进一步的：所述步骤2)中生根基质为草炭:蛭石:珍珠岩＝6:2:2配比组成的混合物。
[0016] 进一步的：所述步骤4)中生根培养的条件为光周期为光照/黑暗12h/12h、
温度为22℃、光强为2000lx，培养40天。
[0017] 进一步的：所述步骤5)中嫁接方式为：从切口处径向切开0.4-0.5cm；挑选生长旺盛且一致的接穗，保留其顶端1.5-2cm茎和部分叶片，将其基部削成楔形，接穗末端插入砧木，用铝箔纸将
接口部位绑紧。
[0018] 进一步的：所述步骤6)中嫁接培养的条件为24℃、光周期为16/8h培养45天，光照强度2000lx，培养45天。
[0019] 与
现有技术相比，本发明的优先和技术效果是：本发明模拟成熟果树嫁接过程，使接穗与砧木充分结合，在较封闭的、湿度大的基质中生根嫁接，后逐步撤去塑料膜，直接进入基质栽培阶段。该方法实现了苹果组培苗瓶外嫁接，使嫁接苗
稳定性高，节省了大量人
力物力，简化了生产环节，降低了生产成本。本技术方法简单，生产成本低，成功率高，在生产上体现为直接的经济效益。
附图说明
[0020] 图1为
实施例1-3中嫁接操作完成后的苹果苗长势图一，其中图1左侧为实施例2嫁接操作完成后的苹果苗；中间为实施例3嫁接培养45天后的苹果苗；右侧为实施例1生根培养40天后嫁接操作完成的苹果苗。
[0021] 图2为实施例1-3中嫁接操作完成后的苹果苗长势图二，其中图2左侧为实施例2生根嫁接培养45天后的嫁接苹果生根苗；中间为是实施例3生根培养45天后的嫁接苹果生根苗；右侧为实施例1嫁接培养45天后的嫁接生根苹果苗。
具体实施方式
[0022] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、
试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0023] 实施例1
[0024] 本实施例所述的苹果组培苗瓶外先生根后嫁接的方法包括苹果组培苗继代、生根准备、苹果苗生根、生根期管理、苹果苗嫁接、嫁接培养期管理六个步骤，具体步骤如下：
[0025] 1、苹果组培苗继代：无菌条件下，将培养了30-35天的苹果组培苗的茎切成0.5-1cm，径向插入继代培养基，在温度24℃、光周期为16/8h下继代培养40天；
[0026] 所述继代培养基由终浓度为0.5mg/L的6-BA、0.2mg/L的IAA、MS培养基、凝固剂、蔗糖和水组成，调整培养基pH至5.8。所述凝固剂为琼脂，所述凝固剂在其所在的培养基中的终浓度均为7.5g/L。
[0027] 2、生根准备：选择大小方便搬运的平底托盘容器,平底托盘容器高6cm，平底托盘容器内放驯化生根容器(4cm×4cm，6×12，共包括72个)，生根基质(生根基质为草炭:蛭石:珍珠岩＝6:2:2配比组成的混合物)与水混合，调节其湿度为60％，将湿生根基质填入生根容器内，基质厚度与生根容器高度相同。
[0028] 3、苹果苗生根：选择继代培养的生长旺盛的苹果组培苗，去掉愈伤和底部叶片，将其茎插入所述生根基质，摁实周围基质，整盘插入结束后喷水，盖盖密封容器，使其保持湿度65％。
[0029] 4、生根期管理：定期检查基质，保持湿度为50％-70％，生根培养40天。生根培养的条件为光周期为光照/黑暗12h/12h、温度为22℃、光强为2000lx。
[0030] 5、苹果苗嫁接：挑选生根苹果苗(平邑甜茶)作为砧木，切掉顶端叶片，保留根部向上长度为2.5-3cm的茎，从切口处径向切开0.4-0.5cm；挑选生长旺盛且一致的嘎啦作为接穗，保留其顶端1.5-2cm茎和部分叶片，将其基部削成楔形，接穗末端插入砧木，用铝箔纸将接口部位绑紧。喷洒水于表面，盖盖密封。
[0031] 6、嫁接培养期管理：定期检查基质，保持湿度为50％-70％。嫁接培养的条件为24℃、光周期为16/8h培养45天，光照强度2000lx。
[0032] 实施例2
[0033] 本实施例所述的苹果组培苗瓶外嫁接和生根同时的方法包括苹果组培苗继代、嫁接生根准备、苹果苗嫁接生根、嫁接生根期管理四个步骤，具体步骤如下：
[0034] 1、苹果组培苗继代：无菌条件下，将培养了30-35天的苹果组培苗茎切成0.5-1cm，径向插入继代培养基，继代培养40天；
[0035] 2、嫁接生根准备：选择大小方便搬运的平底托盘容器,平底托盘容器高6cm，平底托盘容器内放驯化生根容器(4cm×4cm，6×12，共包括72个)，生根基质(同实施例1)与水混合，将湿生根基质填入生根容器内，基质厚度与生根容器高度相同。
[0036] 3、苹果苗嫁接生根：挑选生根苹果苗(平邑甜茶)作为砧木，切掉顶端叶片，保留根部向上长度为2.5-3cm的茎，从切口处径向切开0.4-0.5cm；挑选生长旺盛且一致的嘎啦作为接穗，保留其顶端1.5-2cm茎和部分叶片，将其基部削成楔形，接穗末端插入砧木，用铝箔纸将接口部位绑紧。喷洒水于表面，盖盖密封。
[0037] 4、嫁接生根培养期管理：定期检查基质，保持湿度为50％-70％，培养45天。
[0038] 实施例3
[0039] 本实施例所述的苹果组培苗瓶外先嫁接后生根的方法包括苹果组培苗继代、苹果苗嫁接、嫁接培养期管理、嫁接苗生根准备、嫁接苗生根、生根培养期管理六个步骤，具体步骤如下：
[0040] 1、苹果组培苗继代：无菌条件下，将培养了30-35天的苹果组培苗茎切成0.5-1cm，径向插入继代培养基，继代培养40天；
[0041] 2、苹果苗嫁接：挑选生根苹果苗(平邑甜茶)作为砧木，切掉顶端叶片，保留根部向上长度为2cm的茎，从切口处径向切开0.4-0.5cm；挑选生长旺盛且一致的嘎啦作为接穗，保留其顶端1.5cm茎和部分叶片，将其基部削成楔形，接穗末端插入砧木，用铝箔纸将接口部位绑紧。
[0042] 3、嫁接培养期管理：嫁接苗培养于嫁接培养基中。所述嫁接培养基为MS、BA1.0mg/L、NAA0.05mg/L、凝固剂、蔗糖，所述凝固剂为琼脂，所述凝固剂在其所在的培养基中的终浓度均为7.5g/L，所述蔗糖浓度为30g/L。嫁接培养的条件为24℃、光周期为16/8h培养45天，光照强度2000lx。
[0043] 4、嫁接苗生根准备：选择大小方便搬运的平底托盘容器,平底托盘容器高6cm，平底托盘容器内放驯化生根容器(4cm×4cm，6×12，共包括72个)，生根基质(丹麦PINDSTRUP)与水混合，将湿生根基质填入生根容器内，基质厚度与生根容器高度相同；
[0044] 5、嫁接苗生根：选择一生长旺盛的嫁接苹果苗，去掉愈伤和底部部分叶片，将其茎插入基质生根基质(同实施例1)，摁实周围基质，整盘插入结束后喷水，盖盖密封容器，使其保持一定湿度。
[0045] 6、生根期管理：定期检查基质，防止其干燥。生根培养40天。MS培养基组份如下所示：
[0046] 大量元素 培养基中终浓度(g·L-1)NH4NO3 1.65
KH2PO4 1.9
MgSO4.7H2O 0.170.37
微量元素 培养基中浓度(mg·L-1)
FeSO4.7H2O 27.8
Na2EDTA 37.3
MnSO4.4H2O 22.3
ZnSO4.4H2O 8.6
H3BO3 6.2
KI 0.83
Na2MoO4.2H2O 0.25
CuSO4.5H2O 0.025
CoCl2.6H2O 0.025
有机成分 培养基中浓度(mg·L-1)
甘
氨酸 2.0
盐酸硫胺素 0.4
盐酸吡哆素 0.5
烟酸 0.5
肌 100
[0047] 实验结果如下：
[0048] 表1：实施例1-3不同处理对苹果嫁接苗成活率、根系长度及生根数的影响[0049] 处理数 重复次数 成活率/％ 根系长度/cm 生根数实施例1 50 3 73.3 5.34±1.34 5.73±2.08
实施例2 50 3 13.8 2.34±0.42 2.47±1.93
实施例3 50 3 76.5 4.87±0.83 5.28±1.86
[0050] 表2：实施例1-3不同处理对苹果嫁接苗根重、叶重及周期的影响[0051] 处理数 重复次数 根重/g 叶重/g实施例1 50 3 17.37±5.32 29.15±4.06
实施例2 50 3 6.82±2.61 18.43±1.58
实施例3 50 3 11.96±2.74 20.87±1.65
[0052] 注：周期指从苹果组培苗继代至嫁接成活所用的时间。
[0053] 表3：实施例1-3不同处理对苹果嫁接苗光合速率和叶绿素SPAD的影响[0054] 处理数 重复次数 光合速率/μmol·m 叶绿素SPAD实施例1 50 3 13.28±2.47 43.79±3.57
实施例2 50 3 7.02±1.73 31.04±2.86
实施例3 50 3 8.21±1.94 30.85±2.93
[0055] 表4：不同培养介质对苹果嫁接苗成活率、根系长度及生根数的影响[0056]培养基质 处理数 重复次数 成活率/％ 根系长度/cm 生根数
沙子 50 3 37.3 1.63±1.05 2.75±2.19
黏土 50 3 15.6 0.19±0.03 1.21±0.74
育苗基质 50 3 86.2 5.64±1.58 5.37±3.61
[0057] 如表1-表4和图1-2实验结果所示，实施例1中先生根后嫁接的方式成活率较其它两种方式成活率都高，生根后的苹果苗抗逆性更强，容易适应生根及嫁接的变化，且先生根后嫁接的方式在平均生根长度和平均单株生根数两方面都具有优势。实施例2中嫁接生根同时操作的方式成活率低，且在平均生根长度、平均单株生根数、根重、叶重、光合速率等方面都最少，将苹果苗从培养基移到基质中，多数为砧木先枯，导致接穗营养与水分供应不足，随后死亡。实施例3中先嫁接后生根的方式成活率与实施例1相差不大，但是其在平均生根长度、平均单株生根数、根重、叶重等方面都弱于实施例1，且实施例3的嫁接操作由于在无菌条件下进行，难度较实施例1的嫁接操作大，效率低。不同的培养介质对苹果嫁接苗的影响不同，其中黏土最不建议采用，其培养的苹果嫁接苗成活率、根系长度、生根数均为最低水平。相比之下，育苗基质是最有利于苹果嫁接苗生长的培养介质。因此，以育苗基质为培养介质先生根后嫁接的方式更适合农业生产。
[0058] 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，仍然可以对前述实施例记载的技术方案进行
修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
