技术领域
[0001] 本
发明涉及一种花生肽-锌螯合物的制备方法，属于功能性营养物质的化学合成技术领域。
背景技术
[0002] 锌被称为“生命元素”，对于维持人体正常的生命活动和生理状态起着不可替代的作用。缺锌会使人体健康受损，儿童缺锌会延缓其生长发育，成人缺锌会损伤
机体的性腺机能，同时会导致神经机能障碍以及免疫功能失调。
[0003] 目前，人体的补锌主要通过2种途径：一是利用富锌食物进行补锌；二是通过服用补锌剂进行补锌。补锌剂主要有4种形式：以无机锌盐作配体合成的补锌剂、以有机弱酸作配体合成的补锌剂、以
氨基酸作配体合成的补锌剂和以肽作配体合成的补锌剂。
[0004] 研究发现，食物衍生肽由于其锌螯合能
力可以作为膳食锌载体，并且相对于无机锌盐而言，肽锌螯合物中的锌能被胃肠更好的吸收。本领域技术人员曾经分别从谷朊粉蛋白，芝麻蛋白和榛子蛋白等蛋白中提取锌螯合肽，并制备相应肽锌螯合物。
[0005] 目前以食源性蛋白肽-锌螯合物为原料的补锌制剂在国内还未得到充分的开发，因此，本领域希望能够开发一种新的食源性蛋白肽-锌螯合物及其制备方法。
发明内容
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明一方面提供了一种花生肽-锌螯合物的制备方法，其中，
[0007] 该制备方法包括以下步骤：
[0008] 步骤1)，配制花生蛋白肽溶液；
[0009] 步骤2)，螯合反应：将步骤1)配制的花生蛋白肽溶液与无机锌混合，再将混合溶液的pH值调至4.0-7.0，在
温度40℃-80℃的
水浴条件下进行螯合反应20分钟以上，获得螯合反应产物的溶液；
[0010] 所述无机锌为
硫酸锌、氯化锌或
氧化锌中的任意一种或几种的混合物；
[0011] 所述花生蛋白肽溶液中所含花生蛋白肽与所述无机锌中所含锌离子的重量比为1:1-6:1；
[0012] 步骤3)，分离纯化：采用孔径为0.2～0.5μm过滤膜对步骤2)所获得的螯合反应产物的溶液进行过滤；取滤液，采用无水
乙醇进行分离纯化，获得花生肽-锌螯合物。
[0013] 优选的，所述步骤1)的花生蛋白肽溶液是通过以下步骤制备获得：
[0014] 步骤1a)，花生蛋白的预处理：用去离子水配成浓度20～80g/L的花生蛋白溶液，于温度70-100℃水浴处理5-15分钟，冷却至室温；
[0015] 步骤1b)，酶解：向上述步骤1a)获得的花生蛋白溶液中加入胰蛋白酶，以所述花生蛋白溶液中的花生蛋白干重为基准，每1g所述花生蛋白干重加入2000～6000U所述胰蛋白酶，所述胰蛋白酶的比活力单位大于等于240U/mg，调节pH值至6.5，在45℃温度下，酶解3小时以上；再高温灭活所述胰蛋白酶，获得酶解液；
[0016] 步骤1c)，分离干燥：将步骤1b)获得的酶解液在转速3000～5000r/min条件下离心至少10分钟，取上清液，
冷冻干燥，获得花生蛋白肽；
[0017] 步骤1d)，将步骤1c)获得的花生蛋白肽用去离子水配制成花生蛋白肽溶液。
[0018] 优选的，所述步骤3)中，将所述滤液与3倍体积的无水乙醇混合，再在转速3000-4000r/min条件下离心至少10分钟；取离心后获得的沉淀物，用无水乙醇洗涤，再进行干燥，获得所述花生肽-锌螯合物。
[0019] 本发明首次建立了制备花生肽-锌螯合物的制备工艺技术，本发明的制备方法采用特定的工艺参数，最后获得的螯合物的螯合率能达到50％以上；并且操作简单；花生肽-锌螯合物作为一种新型的
生物活性肽锌营养强化剂，
水溶性好，易于人体吸收，既补充人体所需的锌元素，又补充了花生肽的营养成分，是一种前景良好的补锌产品。
附图说明
[0020] 图1为本发明的
实施例1的花生肽-锌螯合物的紫外吸收
光谱；
[0021] 图2为本发明的实施例1的花生肽-锌螯合物的傅里叶变换红外光谱图；
[0022] 图3为本发明的实施例1的花生肽-锌螯合物的
X射线衍射光谱图；
[0023] 图1-3中的虚线是花生肽标准品的结果，实线是实施例1的花生肽-锌螯合物的结果。
具体实施方式
[0024] 以下通过实施例对本发明作进一步的说明，但本发明并不限于这些具体实施方式。
[0025] 实施例1制备花生肽-锌螯合物
[0026] 步骤1)，配制浓度为10g/L的花生蛋白肽溶液；
[0027] 其中，步骤1)的花生蛋白肽溶液是通过以下步骤制备获得：
[0028] 步骤1a)，花生蛋白的预处理：用去离子水配成浓度50g/L的花生蛋白溶液，于温度90℃水浴处理10分钟，冷却至室温；
[0029] 步骤1b)，酶解：向上述步骤1a)获得的花生蛋白溶液中加入胰蛋白酶，以花生蛋白溶液中花生蛋白干重为基准，每1g花生蛋白干重加入5000U胰蛋白酶(购自诺维信公司)，调节pH值至6.5，在45℃温度下，酶解3小时以上；再高温(温度100℃沸水浴处理10分钟)灭活胰蛋白酶，获得酶解液；
[0030] 步骤1c)，分离干燥：将步骤1b)获得的酶解液在转速4000r/min条件下离心20分钟，取上清液，冷冻干燥，获得花生蛋白肽；
[0031] 步骤1d)，将步骤1c)获得的花生蛋白肽用去离子水配成浓度为10g/L的花生蛋白肽溶液；
[0032] 步骤2)，螯合反应：将步骤1)配制的花生蛋白肽溶液与无机锌(硫酸锌，购自天津市科密欧化学
试剂有限公司)混合，再将混合溶液的pH值调至6.0左右，在温度50℃的水浴条件下进行螯合反应40分钟获得螯合反应产物溶液；
[0033] 花生蛋白肽溶液中所含花生蛋白肽与硫酸锌中所含锌离子的重量比为4:1；
[0034] 步骤3)，分离纯化：采用0.45μm过滤膜对步骤2)所获得的螯合反应产物溶液进行过滤；取滤液，与3倍体积的无水乙醇混合，再在转速3500r/min条件下离心15分钟；取离心后获得的沉淀物，用无水乙醇洗涤，再置于温度60℃热
风下干燥，获得花生肽-锌螯合物。
[0035] 产物的鉴定
[0036] 实施例1所得花生肽-锌螯合物的紫外扫描光谱图见图1，其中花生肽标准品作为对照。
[0037] 参见图1，相对于花生肽标准品的紫外吸收光谱，实施例1所获得的花生肽-锌螯合物的吸光度显着降低。花生肽标准品在207nm和279nm处表现出显著的吸收，然而，花生肽与锌离子螯合后，吸收峰分别移动至205nm和274nm处，并且螯合物在274nm处的吸收峰显著减小。花生肽的最大吸收峰在207nm左右，这是由肽键上的羰基(C＝O)n→π*
电子跃迁引起的；然而，花生肽与锌离子螯合后，Zn2+与肽中的N和O形成配合键，影响了肽键上羰基(C＝O)n→π*电子跃迁，从而使其发生蓝移。此外，当花生肽与锌离子螯合后，花生肽在279nm处的较弱吸收峰蓝移至274nm，这是配体(N-C-O)中π→π*电子跃迁所致，由此可知，本实施例1获得的产物中，花生肽与Zn2+之间发生了螯合作用，生成了花生肽-锌螯合物。
[0038] 实施例1所得花生肽-锌螯合物的傅里叶变换红外光谱图见图2。参见图2，-13292.75cm 处为配位体花生肽的红外光谱的特征谱带，属于肽基团的-NH-伸缩振动带。花生肽-锌螯合物的吸收峰位移3451.96cm-1，且比花生肽的稍宽，其透射率明显降低，可能是Zn
原子替代了H原子所致。花生肽在2962.13cm-1处的吸收峰在与锌螯合后，移至2946.05cm-1，这是烷基伸缩振动带。花生肽在1666.20cm-1处的吸收峰在其螯合物中转移至1658.48cm-1，为-C＝O的伸缩振动或-COO-反对称振动。在花生肽-锌螯合物中，配位花生肽在
1029.80cm-1处的吸收峰移至1110.80cm-1，为-C＝O振动或-CNC-伸缩振动。从上述结果可以看出，红外光谱的变化主要发生在酰胺带区域和-CNC-键或-C＝O键的振动带中，表明锌离子和氨基酸残基上的氨基或者羧基存在一定的键合作用，从而生成花生肽-锌螯合物。
[0039] 实施例1所得的花生肽-锌螯合物的X射线衍射光谱图见图3。参见图3，由于花生蛋白酶解多肽比较复杂，所得的多肽是一种非晶体型物质，所以多肽的X射线衍射图谱没有出现尖锐的衍射峰，仅在2θ为20.34°处有吸收,且吸收峰本底较大，花生肽-锌螯合物的X射线衍射图谱能明显看到2θ为20.34°处的吸收峰消失了，在衍射图谱其他
位置有强烈的吸收峰出现，且所得螯合物射线粉末衍射图谱本底小，衍射峰高而尖锐，同时也存在着几个弱的弥散型衍射峰，晶型较好。这表明，花生肽在螯合锌离子后，自身的结构发生了较大的改变，为结晶结构和无定型结构的混合物，结晶度有大幅提高。说明花生肽与锌发生了反应，生成了花生肽-锌螯合物。
[0040] 该实施例1所获得的花生肽-锌螯合物中花生肽与锌的螯合率达到57.04％。具体的检测方法是，参照GB 5009.14-2017《食品中锌的测定》中火焰原子吸收法(AAS)。
[0041] 总锌含量测定前处理：取步骤3)经0.45μm过滤
膜过滤获得的滤液5mL，去离子水定容至50mL，采用AAS测定锌含量，定义为“总锌含量”；
[0042] 花生肽-锌螯合物中锌含量测定：取步骤3)经0.45μm过滤膜过滤获得的滤液5mL，加入15mL(三倍体积)无水乙醇，混合均匀并离心(3500r/min，15min)，将沉淀定容至50mL，采用AAS测定锌含量，定义为“螯合物锌含量”；
[0043] 将“螯合物锌含量”除以“总锌含量”的百分数，即为“螯合率”。
[0044] 实施例2
[0045] 实施例2的制备过程与实施例1的，不同之处仅在于，上述步骤2)螯合反应的pH值调至7.0左右，步骤2)螯合反应中的花生蛋白肽溶液中所含花生蛋白肽与硫酸锌中所含锌离子的重量比为3:1，其它操作步骤同实施例1。
[0046] 实施例2所得花生肽-锌螯合物中花生肽与锌的螯合率达到54.04％。
[0047] 实施例3
[0048] 实施例3的制备过程与实施例1的，不同之处仅在于，上述步骤2)螯合反应的pH值调至5.0左右，步骤2)螯合反应中的水浴温度为70℃，其它操作步骤同实施例1。
[0049] 实施例3所得花生肽-锌螯合物中花生肽与锌的螯合率达到51.35％。
[0050] 应当理解，虽然本
说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施方式中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
[0051] 上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本发明的保护范围之内。
