一种用于检测降钙素原的光电化学免疫传感器的制备方法
专利汇可以提供一种用于检测降钙素原的光电化学免疫传感器的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种用于检测降 钙 素原的光电化学免疫 传感器 的制备方法。本发明采用构建拼合式光电化学传感器的方式，将免疫识别分析与无机 半导体 材料光电响应测试分析分开，实现光电测试不破坏 生物 分子的免疫识别过程的目的。以硫化镉 纳米材料 修饰的 锡 酸铋纳米材料作为基底材料提供 基础 的光电响应，二者带隙结构匹配，能够很好的提高可见光利用效率。其次在96微孔板中进行 抗原 与 抗体 的特异性免疫识别过程，乙酰胆 碱 酯酶通过胺化合 醛 基化的 二 氧 化 硅 材料与降钙素原二抗牢固结合，以此复合物作为标记物标记的降钙素原二抗，当96微孔板中滴入碘化乙酰硫代胆碱后，乙酰胆碱酯酶与之发生催化反应，得到的产物硫代胆碱作为 电子 供体，捕获材料受 光激发 产生的空穴，在不同程度上提高光 电流 ，实现对降钙素原的灵敏检测。其 检测限 为0.20 pg/mL。，下面是一种用于检测降钙素原的光电化学免疫传感器的制备方法专利的具体信息内容。
1.基于一种用于检测降钙素原的光电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）锡酸铋材料的制备
取0.8 1.0 g五水合四氯化锡溶解于10 30 mL超纯水中，用3 5 M.的氢氧化钠~ ~ ~
水溶液将上述溶液调pH至4 6，搅拌10 20分钟，后离心得到白色沉淀；将得到的沉淀溶~ ~
于30 50 mL含有1.8 2.0 g五水合硝酸铋的超纯水中，用3 5 M.的氢氧化钠水溶液~ ~ ~
调节pH至11 13，继续搅拌10 20分钟后将此溶液转入高压反应釜，于160 200 °C反~ ~ ~
应12 24小时，反应结束后自然冷却至室温，之后产品用无水乙醇和超纯水各洗涤3次，最~
后产品于40 60 °C下干燥过夜，得到锡酸铋材料；
~
（2）硫化镉材料的制备
取0.4 0.5 g九水合硫化钠溶解于20 40 mL水中，搅拌5 10分钟，此溶液作为溶~ ~ ~
液A；取0.5 0.6 g乙酸镉溶解于20 40 mL水中，搅拌5 10分钟，此溶液作为溶液B；将~ ~ ~
溶液A和溶液B混合，室温下搅拌1 2小时后将混合溶液转入高压反应釜，于160 180 °C~ ~
反应20 24小时，反应结束后自然冷却至室温，之后产品用无水乙醇和超纯水各洗涤3次，~
最后产品于40 60 °C下干燥过夜，得到硫化镉产品；
~
（3）二氧化硅纳米材料的制备
取70 80 mL无水乙醇和3 5 mL超纯水混合，搅拌均匀，向该溶液加入6 8 mL正~ ~ ~
硅酸四乙酯溶液，搅拌5 10分钟后，将15 20 mL质量分数为25 %的氨水溶液以1 3 ~ ~ ~
mL/min的速率滴入上述溶液，于40 °C下搅拌3 5小时，之后离心除去溶剂，并用乙醇和超~
纯水洗涤至中性，最后产品于40 60 °C下干燥10 16小时，得到二氧化硅纳米材料；
~ ~
（4）二氧化硅的胺化
取2 4 mL APTES（3-氨丙基三乙氧基硅烷）和1 2 g制备的二氧化硅加入100 ~ ~ ~
200 mL无水甲苯中，溶液超声20 30分钟后，将该溶液置于80 100 °C下搅拌20 24小~ ~ ~
时，然后用乙醇和超纯水离心洗涤至中性，最后产品于40 60 °C下干燥过夜，得到胺化的~
二氧化硅粉末；
（5）PBS缓冲溶液的配置
取7.0980 g十二水合磷酸氢二钠定容于500 mL的容量瓶中配置成浓度为0.1 M.的水溶液，作为甲液；取6.8045 g 无水磷酸二氢钾定容于500 mL的容量瓶中配置成浓度为0.1 M.的水溶液，作为乙液；将甲液和乙液按比例混合，配置成一系列pH在5.0 8.0的PBS缓冲~
溶液；
（6）乙酰胆碱酯酶-胺化二氧化硅-降钙素原二抗的制备
取1 2 mL的5 mg/mL胺化的二氧化硅加入到0.5 1.0 mL质量分数为2.5 %的戊二~ ~
醛中，室温下搅拌6小时，离心后用pH为7.4的PBS洗涤除去戊二醛，然后将离心后的产品溶于1 mL、pH为7.4的PBS中并加入200 400 μg/mL的降钙素原二抗和200 400 μL浓度为1 ~ ~
5 mg/mL的乙酰胆碱酯酶，将溶液于37 °C下剧烈震荡1小时，并离心洗涤，将洗涤后得到~
的产品分散于2 mL、pH为7.4的PBS溶液中，同时加入50 80 μL质量分数为1 3 %的BSA~ ~
溶液（pH为7.4的PBS缓冲液配置），以此来封闭非特异性活性位点，然后在室温下剧烈振荡1小时，离心并洗涤，最后将离心后得到的产品分散于5 mL、pH为7.4的PBS溶液中，并于4 °C下保存；
（7）光电化学传感器的制备
1）将导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗，在70 °C烘箱中烘干140分钟；
2）取8 10 µL、2 6 mg/mL的锡酸铋水溶液滴加到ITO导电玻璃的导电面，红外灯下~ ~
晾干；
3）在修饰的电极表面继续滴加8 10 µL、2 6 mg/mL的硫化镉水溶液，电极于室温~ ~
下自然晾干；
4）取50 µL浓度为5 20 μg/mL的降钙素原捕获抗体滴入96微孔板中，于4 °C条件下~
放置10 14小时以保证抗体与96微孔板牢固结合，抗体孵化结束后，吸出未结合的降钙素~
原抗体，用PBS缓冲溶液小心清洗96微孔板；
5）取25 µL用PBS配制的质量分数在1 3 %的牛血清白蛋白滴于96微孔板中，于室温~
下孵化1小时，之后吸出未结合的牛血清白蛋白，用PBS清洗96微孔板；
6）取50 µL浓度为0.0005 100 ng/mL的降钙素原抗原滴于96微孔板中，在室温下孵~
化1小时，之后用PBS缓冲溶液清洗96微孔板；
7）取50 µL二氧化硅与降钙素原二抗和乙酰胆碱酯酶连接复合物滴于96微孔板中，室温下孵化1 小时后，用PBS缓冲溶液冲洗96微孔板；
8）取50 µL用PBS缓冲溶液配制的浓度为1 5mg/mL的碘化乙酰硫代胆碱滴入96微孔~
板中，作用10 30 分钟；
~
9）将96微孔板中的溶液吸出，注入10 mL的pH为7.4的PBS缓冲溶液中作为光电测试的电解质溶液，将修饰的硫化镉/锡酸铋/导电玻璃电极浸入该电解质溶液中，制得一种检测降钙素原的光电化学传感器。
2.如权利要求1所述制备的光电化学传感器的检测方法，其特征在于，步骤如下：
（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂电极为辅助电极，制备的ITO修饰电极为工作电极，在含有从96微孔板吸出的溶液的pH为5.0 8.0~
的PBS缓冲溶液中进行测试；
（2）将所修饰的电极浸入含有从96微孔板中吸出的不同的溶液的PBS缓冲溶液中，利用时间-电流法进行测试，设置电压为-0.1 0.1 V，运行时间120 s，光源波长为小于750 nm~
的白光；
（3）电极放置好之后，每隔10 s开灯持续照射10 s，记录光电流，绘制工作曲线；
（4）将待测的降钙素原样品溶液代替降钙素原标准溶液进行检测。
一种用于检测降钙素原的光电化学免疫传感器的制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
（1）锡酸铋材料的制备
取0.8 1.0 g五水合四氯化锡溶解于10 30 mL超纯水中，用3 5 M.的氢氧化钠~ ~ ~
水溶液将上述溶液调pH至4 6，搅拌10 20分钟，后离心得到白色沉淀；将得到的沉淀溶~ ~
于30 50 mL含有1.8 2.0 g五水硝酸铋超纯水中，用3 5 M.的氢氧化钠水溶液调节~ ~ ~
pH至11 13，继续搅拌10 20分钟后将此溶液转入高压反应釜，于160 200 °C反应12 ~ ~ ~
24小时，反应结束后自然冷却至室温，之后产品用无水乙醇和超纯水各洗涤3次，最后产~
品于 40 60 °C下干燥过夜，得到锡酸铋材料；
~
（2）硫化镉材料的制备
取0.4 0.5 g九水和硫化钠溶解于20 40 mL水中，搅拌5 10分钟，此溶液作为溶~ ~ ~
液A；取0.5 0.6 g乙酸镉溶解于20 40 mL水中，搅拌5 10分钟，此溶液作为溶液B；将~ ~ ~
溶液A和溶液B混合，室温下搅拌1 2小时后将溶液转入高压反应釜，于160 180 °C反应~ ~
20 24小时，反应结束后自然冷却至室温，之后产品用无水乙醇和超纯水各洗涤3次，最后~
产品于40 60 °C下干燥过夜，得到硫化镉产品；
~
（3）二氧化硅纳米材料的制备
取70 80 mL无水乙醇和3 5 mL超纯水混合，搅拌均匀，向该溶液加入6 8 mL正~ ~ ~
硅酸四乙酯溶液，搅拌5 10分钟后，将15 20 mL质量分数为25 %的氨水溶液以1 3 ~ ~ ~
mL/min的速率滴入上述溶液，于40 °C下搅拌3 5小时，之后离心除去溶剂，并用乙醇和超~
纯水洗涤至中性，最后产品于40 60 °C下干燥10 16小时，得到二氧化硅纳米材料；
~ ~
（4）二氧化硅的胺化
取2 4 mL APTES（3-氨丙基三乙氧基硅烷）和1 2 g制备的二氧化硅加入100 ~ ~ ~
200 mL无水甲苯中，溶液超声20 30分钟后，将该溶液置于80 100 °C下搅拌20 24小~ ~ ~
时，然后用乙醇和超纯水离心洗涤至中性，最后产品于40 60 °C下干燥过夜，得到胺化的~
二氧化硅粉末；
（5）PBS缓冲溶液的配置
取7.0980 g十二水合磷酸氢二钠定容于500 mL的容量瓶中配置成浓度为0.1 M.的水溶液，作为甲液；取6.8045 g无水磷酸二氢钾定容于500 mL的容量瓶中配置成浓度为0.1 M.的水溶液，作为乙液；将甲液和乙液按比例混合，配置成一系列pH在5.0 8.0的PBS缓冲~
溶液；
（6）乙酰胆碱酯酶-胺化二氧化硅-降钙素原二抗的制备
取1 2 mL的5 mg/mL胺化的二氧化硅加入到0.5 1.0 mL质量分数为2.5 %的戊二~ ~
醛中，室温下搅拌6小时，离心后用pH为7.4的PBS洗涤除去戊二醛，然后将离心后的产品溶于1 mL、pH为7.4的PBS中并加入200 400 μg/mL的降钙素原二抗和200 400 μL浓度为1 ~ ~
5 mg/mL的乙酰胆碱酯酶，将溶液于37 °C下剧烈震荡1小时，并离心洗涤，将洗涤后得到~
的产品分散于2 mL、pH为7.4的PBS溶液中，同时加入50 80 μL质量分数为1 3 %的BSA~ ~
溶液，以此来封闭非特异性活性位点，然后在室温下剧烈振荡1小时，离心并洗涤，最后将离心后得到的产品分散于5 mL、pH为7.4的PBS溶液中，并于4 °C下保存；
（7）光电化学传感器的制备
1）将导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗，在70 °C烘箱中烘干140分钟；
2）取8 10 µL、2 6 mg/mL的锡酸铋水溶液滴加到ITO导电玻璃的导电面，红外灯下~ ~
晾干；
3）在修饰的电极表面继续滴加8 10 µL、2 6 mg/mL的硫化镉水溶液，电极于室温~ ~
下自然晾干；
4）取50 µL浓度为5 20 μg/mL的降钙素原捕获抗体滴入96微孔板中，于4 °C条件下~
放置10 14 小时以保证抗体与96微孔板牢固结合，抗体孵化结束后，吸出未结合的降钙~
素原抗体，用PBS缓冲溶液小心清洗96微孔板；
5）取25 µL用PBS配制的质量分数在1 3 %的牛血清白蛋白滴于96微孔板中，于室温~
下孵化1小时，之后吸出未结合的牛血清白蛋白，用PBS清洗96微孔板；
6）取50 µL浓度为0.0005 200 ng/mL的降钙素原抗原滴于96微孔板中，在室温下孵~
化1小时，之后用PBS缓冲溶液清洗96微孔板；
7）取50 µL浓度为5 20 μg/mL二氧化硅与降钙素原二抗和乙酰胆碱酯酶连接复合物~
滴于96微孔板中，室温下孵化1小时后，用PBS缓冲溶液冲洗96微孔板；
8）取50 µL用PBS缓冲溶液配制的浓度为1 5mg/mL的碘化乙酰硫代胆碱滴入96微孔~
板中，作用10 30分钟；
~
9）将96微孔板中的溶液吸出，注入10 mL的PBS缓冲溶液中作为光电测试的电解质溶液，将修饰的硫化镉/锡酸铋/导电玻璃电极浸入该电解质溶液中，制得一种检测降钙素原的光电化学传感器。
的PBS缓冲溶液中进行测试；
（2）将所修饰的电极浸入含有从96微孔板中吸出的不同的溶液的PBS缓冲溶液中，利用时间-电流法进行测试，设置电压为-0.1 0.1 V，运行时间120 s，光源波长为小于750 nm~
的白光；
（3）电极放置好之后，每隔10 s开灯持续照射10 s，记录光电流，绘制工作曲线；
（4）将待测的降钙素原样品溶液代替降钙素原标准溶液进行检测；
合成材料所需要的化学试剂均为当地试剂店购得，没有经过再处理。
（2）硫化镉材料的制备
取0.4 g硫化钠溶解于20 mL水中，搅拌5分钟，此溶液作为溶液A；取0.5 g乙酸镉溶解于20 mL水中，搅拌5分钟，此溶液作为溶液B；将溶液A和溶液B混合，室温下搅拌1小时后将溶液转入高压反应釜，于160 °C反应20小时，反应结束后自然冷却至室温，之后产品用无水乙醇和超纯水各洗涤3次，最后产品于40 °C下干燥过夜，得到硫化镉产品；
（3）二氧化硅纳米材料的制备
取70 mL无水乙醇和3 mL超纯水混合，搅拌均匀，向该溶液加入6 mL正硅酸四乙酯溶液，搅拌5分钟后，将15 mL质量分数为25 %的氨水溶液以1 mL/min的速率滴入该溶液，于40 °C下搅拌3小时，之后于离心除去溶剂，并用无水乙醇和超纯水洗涤至中性，最后产品于40 °C下干燥过夜，得到二氧化硅纳米材料；
（4）二氧化硅的胺化
取2 mL APTES（3-氨丙基三乙氧基硅烷）和1.0 g制备的二氧化硅加入到100 mL无水甲苯中，将溶液超声20分钟后，将该溶液置于80 °C搅拌20小时，然后用无水乙醇和超纯水洗涤至中性，最后产品于40 °C下干燥过夜，得到胺化的二氧化硅粉末；
（5）PBS缓冲溶液的配置
取7.0980 g十二水合磷酸氢二钠定容于500 mL的容量瓶中配置成浓度为0.1 M.的水溶液，作为甲液；取6.8045 g无水磷酸二氢钾定容于500 mL的容量瓶中配置成浓度为0.1 M.的水溶液，作为乙液；将甲液和乙液按比例混合，配置成pH为5.0的PBS缓冲溶液；
（6）乙酰胆碱酯酶-胺化二氧化硅-降钙素原二抗的制备
取1 mL的5 mg/mL胺化的二氧化硅加入到0.5 mL质量分数为2.5 %的戊二醛中，室温下搅拌6小时，离心后用pH为5.0的PBS洗涤除去戊二醛，然后将离心后的产品溶于1 mL、pH为
5.0的PBS中并加入400 μg/mL的降钙素原二抗和400 μL的1 mg/mL的乙酰胆碱酯酶，将溶液于37 °C下剧烈震荡1小时，并离心洗涤，将洗涤后得到的产品分散于2 mL、pH为5.0的PBS溶液中，同时加入80 μL质量分数为1 %的BSA溶液，以此来封闭乙酰胆碱酯酶的非特异性活性位点，然后在室温下剧烈振荡1小时，离心并洗涤，最后将离心后得到的产品分散于5 mL、pH为5.0的PBS溶液中，并于4 °C下保存；
（7）光电化学传感器的制备
1）将导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗，在70 °C烘箱中烘干140分钟；
2）取8 µL、2 mg/mL的锡酸铋水溶液滴加到ITO导电玻璃的导电面，红外灯下晾干；
3）在修饰的电极表面继续滴加8 µL、2 mg/mL的硫化镉水溶液，电极于室温下自然晾干；
4）取50 µL浓度为5 μg/mL的降钙素原捕获抗体滴入96微孔板中，于4 °C条件下放置10小时以保证抗体与96微孔板牢固结合，抗体孵化结束后，吸出未结合的降钙素原抗体，用PBS缓冲溶液小心清洗96微孔板；
5）取25 µL用PBS配制的质量分数在2 %的牛血清白蛋白滴于96微孔板中，于室温下孵化1小时，之后吸出未结合的牛血清白蛋白，用PBS清洗96微孔板；
6）取50 µL浓度为0.0005 ng/mL的降钙素原抗原滴于96微孔板中，在室温下孵化1 小时，之后用PBS缓冲溶液清洗96微孔板；
7）取50 µL浓度为5 μg/mL二氧化硅与降钙素原二抗和乙酰胆碱酯酶连接复合物滴于
96微孔板中，室温下孵化1小时后，用PBS缓冲溶液冲洗96微孔板；
8）取50 µL用PBS缓冲溶液配制的浓度为1.0 mg/mL的碘化乙酰硫代胆碱滴入96微孔板中，作用10分钟；
9）将96微孔板中的溶液吸出，注入10 mL的PBS缓冲溶液中作为光电测试的电解质溶液，将修饰的硫化镉/锡酸铋/导电玻璃电极浸入该电解质溶液中，制得一种检测降钙素原的光电化学传感器。
取0.9 g五水四氯化锡溶解于20 mL超纯水中，用4 M.的氢氧化钠水溶液将溶液调pH至
4，搅拌十分钟后，离心得到白色沉淀；将得到的沉淀溶于含有1.94 g五水硝酸铋的40 mL超纯水中，再将此溶液用4 M.氢氧化钠水溶液调pH至12，继续搅拌15分钟后将此溶液转入高压反应釜，于180 °C反应24小时，反应结束后自然冷却至室温，之后产品用无水乙醇和超纯水各洗涤3次，最后产品于 60 °C下干燥过夜，得到锡酸铋材料；
（2）硫化镉材料的制备
取0.48 g硫化钠溶解于20 mL水中，搅拌5分钟，此溶液作为溶液A；取0.53 g乙酸镉溶解于20 mL水中，搅拌5分钟，此溶液作为溶液B；将溶液A和溶液B混合，室温下搅拌1.5小时后将溶液转入高压反应釜，于180 °C反应24小时，反应结束后自然冷却至室温，之后产品用无水乙醇和超纯水各洗涤3次，最后产品于60 °C下干燥过夜，得到硫化镉产品；
（3）二氧化硅纳米材料的制备
取75 mL无水乙醇和3 mL超纯水混合，搅拌均匀，向该溶液加入7 mL正硅酸四乙酯溶液，搅拌5分钟后将20 mL质量分数为25 %的氨水溶液以2 mL/min的速率滴入上诉溶液，于
40 °C下搅拌4小时，之后用乙醇和超纯水离心洗涤至中性，最后产品于60 °C下干燥12小时，得到二氧化硅纳米材料；
（4）二氧化硅的胺化
取2 mL APTES（3-氨丙基三乙氧基硅烷）和1.0 g制备的二氧化硅加入到200 mL无水甲苯中，将溶液超声30分钟后将该溶液置于90 °C搅拌24小时，用无水乙醇和超纯水离心洗涤至中性，最后产品于60 °C下干燥过夜，得到胺化的二氧化硅粉末；
（5）PBS缓冲溶液的配置
取7.0980 g十二水合磷酸氢二钠定容于500 mL的容量瓶中配置成浓度为0.1 M.的水溶液，作为甲液；取6.8045 g无水磷酸二氢钾定容于500 mL的容量瓶中配置成浓度为0.1 M.的水溶液，作为乙液；将甲液和乙液按比例混合，配置成pH在7.4的PBS缓冲溶液；
（6）乙酰胆碱酯酶-胺化二氧化硅-降钙素原二抗的制备
取2 mL的5 mg/mL胺化的二氧化硅加入到0.5 mL质量分数为2.5 %的戊二醛中，室温下搅拌6小时，离心后用pH为7.4的PBS洗涤除去戊二醛，然后将离心后的产品溶于1 mL、pH为
7.4的PBS中并加入400 μg/mL的降钙素原二抗和400 μL浓度为1 mg/mL的乙酰胆碱酯酶，将溶液于37 °C下剧烈震荡1小时，并离心洗涤，将洗涤后得到的产品分散于2 mL、pH为7.4的PBS溶液中，同时加入80 μL质量分数为1 %的BSA溶液，以此来封闭乙酰胆碱酯酶的非特异性活性位点，然后在室温下剧烈振荡1小时，离心并洗涤，最后将离心后得到的产品分散于5 mL、pH为7.4的PBS溶液中，并于4 °C下保存；
（7）光电化学传感器的制备
1）将导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗，在70 °C烘箱中烘干140分钟；
2）取10 µL、2 mg/mL的锡酸铋水溶液滴加到ITO导电玻璃的导电面，红外灯下晾干；
3）在修饰的电极表面继续滴加10 µL、2 mg/mL的硫化镉水溶液，电极于室温下自然晾干；
4）取50 µL浓度为5 μg/mL的降钙素原捕获抗体滴入96微孔板中，于4 °C条件下放置10小时以保证抗体与96微孔板牢固结合，抗体孵化结束后，吸出未结合的降钙素原抗体，用PBS缓冲溶液小心清洗96微孔板；
5）取25 µL用PBS配制的质量分数在1 %的牛血清白蛋白滴于96微孔板中，于室温下孵化1小时，之后吸出未结合的牛血清白蛋白，用PBS清洗96微孔板；
6）取50 µL浓度为0.05 ng/mL的降钙素原抗原滴于96微孔板中，在室温下孵化1小时，之后用PBS缓冲溶液清洗96微孔板；
7）取50 µL浓度为5 μg/mL二氧化硅与降钙素原二抗和乙酰胆碱酯酶连接复合物滴于
96微孔板中，室温下孵化1小时后，用PBS缓冲溶液冲洗96微孔板；
8）取50 µL用PBS缓冲溶液配制的浓度为2 mg/mL的碘化乙酰硫代胆碱滴入96微孔板中，作用25分钟；
9）将96微孔板中的溶液吸出，注入10 mL的PBS缓冲溶液中作为光电测试的电解质溶液，将修饰的硫化镉/锡酸铋/导电玻璃电极浸入该电解质溶液中，制得一种检测降钙素原的光电化学传感器。
取1.0 g五水四氯化锡溶解于30 mL超纯水中，用5 M.的氢氧化钠溶液将上诉溶液调节pH至6，搅拌20分钟后离心得到白色沉淀；将得到的沉淀溶于含有2.0 g五水硝酸铋50 mL超纯水中，再将此溶液用5 M.氢氧化钠水溶液调节pH至13，继续搅拌20分钟后将此溶液转入高压反应釜，于200 °C反应24小时，反应结束后自然冷却至室温，产品用无水乙醇和超纯水各洗涤3次，最后产品于60 °C下干燥过夜，得到锡酸铋材料；
（2）硫化镉材料的制备
取0.50 g硫化钠溶解于30 mL水中，搅拌10分钟，此溶液作为溶液A；取0.60 g乙酸镉溶解于30 mL水中，搅拌10分钟，此溶液作为溶液B；将溶液A和溶液B混合，室温下搅拌2小时后将溶液转入高压反应釜，于180 °C反应24小时，反应结束后自然冷却至室温，之后产品用无水乙醇和超纯水各洗涤3次，最后产品于60 °C下干燥过夜，得到硫化镉产品；
（3）二氧化硅纳米材料的制备
取80 mL无水乙醇和5 mL超纯水混合，搅拌均匀，向该溶液加入8 mL正硅酸四乙酯溶液，搅拌10分钟，后将20 mL质量分数为25 %的氨水溶液以2 mL/min的速率滴入上诉溶液，于40 °C下搅拌5小时，并用乙醇和超纯水离心洗涤至中性，最后产品于60 °C下干燥14小时，得到二氧化硅纳米材料；
（4）二氧化硅的胺化
取4 mL APTES（3-氨丙基三乙氧基硅烷）和2 g制备的二氧化硅加入到200 mL无水甲苯中，将溶液超声30分钟，之后将该溶液置于90 °C下搅拌22小时，用乙醇和超纯水离心洗涤至中性，最后产品于60 °C下干燥过夜，得到胺化的二氧化硅粉末；
（5）PBS缓冲溶液的配置
取7.0980 g十二水合磷酸氢二钠定容于500 mL的容量瓶中配置成浓度为0.1 M.的水溶液，作为甲液；取6.8045 g无水磷酸二氢钾定容于500 mL的容量瓶中配置成浓度为0.1 M.的水溶液，作为乙液；将甲液和乙液按比例混合，配置成pH在8.0的PBS缓冲溶液；
（6）乙酰胆碱酯酶-胺化二氧化硅-降钙素原二抗的制备
取2 mL的5 mg/mL胺化的二氧化硅加入到0.5 mL质量分数为2.5 %的戊二醛中，室温下搅拌6小时，离心后用pH为8.0的PBS洗涤除去戊二醛，然后将离心后的产品溶于1 mL、pH为
8.0的PBS中并加入400 μg/mL的降钙素原二抗和400 μL的5 mg/mL的乙酰胆碱酯酶，将溶液于37 °C下剧烈震荡1小时，并离心洗涤，将洗涤后得到的产品分散于2 mL、pH为8.0的PBS溶液中，同时加入80 μL质量分数为3 %的BSA溶液，以此来封闭乙酰胆碱酯酶的非特异性活性位点，然后在室温下剧烈振荡1小时，离心并洗涤，最后将离心后得到的产品分散于5 mL、pH为8.0的PBS溶液中，并于4 °C下保存；
（7）光电化学传感器的制备
1）将导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗，在70 °C烘箱中烘干140分钟；
2）取9 µL、2 mg/mL的锡酸铋水溶液滴加到ITO导电玻璃的导电面，红外灯下晾干；
3）在修饰的电极表面继续滴加9 µL、2 mg/mL的硫化镉水溶液，电极于室温下自然晾干；
4）取50 µL浓度为10 μg/mL的降钙素原捕获抗体滴入96微孔板中，于4 °C条件下放置
10小时以保证抗体与96微孔板牢固结合，抗体孵化结束后，吸出未结合的降钙素原抗体，用PBS缓冲溶液小心清洗96微孔板；
5）取25 µL用PBS配制的质量分数在3 %的牛血清白蛋白滴于96微孔板中，于室温下孵化1小时，之后吸出未结合的牛血清白蛋白，用PBS清洗96微孔板；
6）取50 µL浓度为50 ng/mL的降钙素原抗原滴于96微孔板中，在室温下孵化1小时，之后用PBS缓冲溶液清洗96微孔板；
7）取50 µL浓度为5 μg/mL二氧化硅与降钙素原二抗和乙酰胆碱酯酶连接复合物滴于
96微孔板中，室温下孵化1小时后，用PBS缓冲溶液冲洗96微孔板；
8）取50 µL用PBS缓冲溶液配制的浓度为5 mg/mL的碘化乙酰硫代胆碱滴入96微孔板中，作用25分钟；
9）将96微孔板中的溶液吸出，注入10 mL的PBS缓冲溶液中作为光电测试的电解质溶液，将修饰的硫化镉/锡酸铋/导电玻璃电极浸入该电解质溶液中，制得一种检测降钙素原的光电化学传感器。
（2）将所修饰的电极浸入含有从96微孔板中吸出不同的溶液的PBS缓冲溶液中，利用时间-电流法进行测试，设置电压为-0.1 V，运行时间120 s，光源波长为小于750 nm的白光；
（3）电极放置好之后，每隔10 s开灯持续照射10 s，记录光电流，绘制工作曲线；
（4）将待测的降钙素原样品溶液代替降钙素原标准溶液进行检测。
（2）将所修饰的电极浸入含有从96微孔板中吸出不同的溶液的PBS缓冲溶液中，利用时间-电流法进行测试，设置电压为0 V，运行时间120 s，光源波长为小于750 nm的白光；
（3）电极放置好之后，每隔10 s开灯持续照射10 s，记录光电流，绘制工作曲线；
（4）将待测的降钙素原样品溶液代替降钙素原标准溶液进行检测。
（2）将所修饰的电极浸入含有从96微孔板中吸出不同的溶液的PBS缓冲溶液中，利用时间-电流法进行测试，设置电压为0.1 V，运行时间120 s，光源波长为小于750 nm的白光；
（3）电极放置好之后，每隔10 s开灯持续照射10 s，记录光电流，绘制工作曲线；
（4）将待测的降钙素原样品溶液代替降钙素原标准溶液进行检测。
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