一种合成培养基及其制备方法和用途
阅读：207发布：2020-05-13
专利汇可以提供一种合成培养基及其制备方法和用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种合成培养基及其制备和用途，其特征在于，所述合成培养基包含如下成分及其 质量 浓度： 葡萄糖 ·H2O 10～30g/L、木糖0.2～1.0g/L、 硫酸 铵3～10g/L、 硝酸 钠2～5g/L、氯化 钾 0.2～0.8g/L、 磷酸 二氢钾1.0～3.0g/L、硫酸亚 铁 0.02～0.08g/L、 硫酸镁 0.03～0.06g/L、氯化钴0.005～0.02g/L、 碳 酸 钙 2～10g/L、苯丙 氨 酸0.01～0.05g/L、维生素VB12 0.001～0.01g/L、维生素VB3 0.001～0.02g/L、 生物 素0.001～0.03g/L、甜菜 碱 0.01～0.1g/L，剩余余量为 水 。采用本发明的新型培养基培养小单胞菌，对小单胞菌 发酵 合成 次级代谢产物 的机理研究及工业化生产庆大霉素C1a具有重要意义。，下面是一种合成培养基及其制备方法和用途专利的具体信息内容。
1.一种合成培养基，其特征在于，所述合成培养基包含如下成分及其质量浓度：
葡萄糖·H2O 10～30g/L、木糖0.2～1.0g/L、硫酸铵3～10g/L、硝酸钠2～5g/L、氯化钾
0.2～0.8g/L、磷酸二氢钾1.0～3.0g/L、硫酸亚铁0.02～0.08g/L、硫酸镁0.03～0.06g/L、氯化钴0.005～0.02g/L、碳酸钙2～10g/L、苯丙氨酸0.01～0.05g/L、维生素VB12 0.001～
0.01g/L、维生素VB3 0.001～0.02g/L、生物素0.001～0.03g/L、甜菜碱0.01～0.1g/L，剩余余量为水。
2.如权利要求1所述的一种合成培养基，其特征在于，所述合成培养基包含如下成分及其质量浓度：
葡萄糖·H2O 20～28g/L、木糖0.4～0.8g/L、硫酸铵3～5g/L、硝酸钠2～3g/L、氯化钾
0.4～0.6g/L、磷酸二氢钾1.5～2.5g/L、硫酸亚铁0.04～0.06g/L、硫酸镁0.04～0.05g/L、氯化钴0.01～0.015g/L、碳酸钙4～8g/L、苯丙氨酸0.03～0.05g/L、维生素VB12 0.005～
0.008g/L、维生素VB3 0.005～0.008g/L、生物素0.01～0.02g/L、甜菜碱0.03～0.08g/L，剩余余量为水。
3.如权利要求2所述的一种合成培养基，其特征在于，所述合成培养基包含如下成分及其质量浓度：
葡萄糖·H2O 28g/L、木糖0.5g/L、硫酸铵3g/L、硝酸钠2.3g/L、氯化钾0.5g/L、磷酸二氢钾2.2g/L、硫酸亚铁0.05g/L、硫酸镁0.045g/L、氯化钴0.012g/L、碳酸钙4g/L、苯丙氨酸
0.05g/L、维生素VB12 0.006g/L、维生素VB3 0.0055g/L、生物素0.015g/L、甜菜碱0.05g/L，剩余余量为水。
4.一种合成培养基的制备方法包含如权利要求1～3中任意一项所述的一种合成培养基，其特征在于，所述制备方法包括：
将木糖、硫酸铵、硝酸钠、氯化钾、磷酸二氢钾、硫酸亚铁、硫酸镁、氯化钴、苯丙氨酸、维生素VB12、维生素VB3、生物素、甜菜碱加入水中混合后，将溶液pH值调至7.2-7.5；
在上述溶液中添加碳酸钙混匀后灭菌并加入灭菌后的葡萄糖·H2O得到合成培养基。
5.如权利要求4所述的一种合成培养基的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
所述的在上述溶液中添加碳酸钙混匀后灭菌的灭菌温度为121℃，灭菌时间为20～
30min。
6.如权利要求4所述的一种合成培养基的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
所述的灭菌后的葡萄糖·H2O的灭菌条件为115℃，灭菌时间为20～30min。
7.一种合成培养基的用途包含如权利要求4～6中任意一项所述的合成培养基的制备方法制备所得的培养基，其特征在于；
利用小单胞菌发酵生产庆大霉素C1a。
8.如权利要求7所述的一种合成培养基的用途，其特征在于：
所述小单胞菌为绛红小单胞菌或棘孢小单孢菌。
一种合成培养基及其制备方法和用途
技术领域
背景技术
[0002] 庆大霉素C1a是国内首创、具备独立知识产权Ⅰ类的半合成新药衣替米星的母核前体。传统制备C1a的方法是采用树脂分离技术从多组分庆大霉素中提取C1a单组份，由于各组分之间结构类似，物理化学性质相近，导致了提取成本居高不下，市场上高纯度C1a售价居高不下。庆大霉素C1a作为庆大霉素多组分中的一种，工业发酵过程中采用大量的有机氮源、碳源等复合物进而导致其产物合成机理与发酵条件之间关系无法准确判定。
[0003] 尽管国内外文献中针对庆大霉素合成培养进行一些报道，但是，直接用于庆大霉素C1a发酵其产物合成含量非常低。
[0004] 因此，需要开发出一种适用于庆大霉素C1a的专属合成培养基提高庆大霉素C1a发酵其产物合成含量。
[0005] 培养基一般包括复合培养基、半合成培养基和合成培养基。复合培养基的优点是营养成分丰富，培养效果较好，但其缺点是成分复杂，原料质量稳定性较差，造成生产产品质量稳定性也较差。目前本领域中，庆大霉素C1a生产用的都是复合培养基，虽然产量基本符合要求，但是目前本领域中尚没有应用合成培养基生产庆大霉素C1a的报道。
[0006] 因此，为了研究发酵条件与产物合成代谢机理的关系，开发一种适用于庆大霉素C1a的专属合成培养基具有重要的现实意义。
发明内容
[0007] 为了解决上述现有技术中庆大霉素C1a发酵其产物合成含量非常低的问题，本发明提供了一种适用于培养绛红小单胞菌或棘孢小单胞菌，使之高效生产庆大霉素C1a的合成培养基配方。本发明的培养基，适合于小单胞菌的生长，且可大大地提高庆大霉素C1a的产量。
[0008] 本发明提供的一种合成培养基包含如下成分及其质量浓度：葡萄糖·H2O 10～30g/L、木糖0.2～1.0g/L、硫酸铵3～10g/L、硝酸钠2～5g/L、氯化钾0.2～0.8g/L、磷酸二氢钾1.0～3.0g/L、硫酸亚铁0.02～0.08g/L、硫酸镁0.03～0.06g/L、氯化钴0.005～0.02g/L、碳酸钙2～10g/L、苯丙氨酸0.01～0.05g/L、维生素VB120.001～0.01g/L、维生素VB3[0009] 0.001～0.02g/L、生物素0.001～0.03g/L、甜菜碱0.01～0.1g/L，剩余余量为水。
[0010] 进一步地，所述合成培养基的成分的质量浓度优选为：葡萄糖·H2O20～28g/L、木糖0.4～0.8g/L、硫酸铵3～5g/L、硝酸钠2～3g/L、氯化钾0.4～0.6g/L、磷酸二氢钾1.5～2.5g/L、硫酸亚铁0.04～0.06g/L、硫酸镁0.04～0.05g/L、氯化钴0.01～0.015g/L、碳酸钙4～8g/L、苯丙氨酸0.03～0.05g/L、维生素VB120.005～0.008g/L、维生素VB30.005～
0.008g/L、生物素0.01～0.02g/L、甜菜碱0.03～0.08g/L，剩余余量为水。
0.008g/L、生物素0.01～0.02g/L、甜菜碱0.03～0.08g/L，剩余余量为水。
[0011] 再进一步地，所述合成培养基的成分的质量浓度最佳值为：葡萄糖·H2O 28g/L、木糖0.5g/L、硫酸铵3g/L、硝酸钠2.3g/L、氯化钾0.5g/L、磷酸二氢钾2.2g/L、硫酸亚铁0.05g/L、硫酸镁0.045g/L、氯化钴0.012g/L、碳酸钙4g/L、苯丙氨酸0.05g/L、维生素VB120.006g/L、维生素VB30.0055g/L、生物素0.015g/L、甜菜碱0.05g/L，剩余余量为水。
[0012] 本发明的培养基的应用的组分均为常用化学产品，价格比较低，制备简单，与现有技术的培养基相比，本发明的新型培养基能显著促进小单胞菌发酵生产庆大霉素C1a，庆大霉素C1a的产量得到显著提高，有利于研究代谢机理和庆大霉素C1a的生产。以甜菜碱作为甲基供体，以合适的比例添加到培养基中，对于发酵的产物合成具有积极作用。VB3和生物素是发酵过程中作用具有非常重要的影响因素。
[0013] 本发明还提供了一种合成培养基的制备方法，所述方法包括：
[0014] 将木糖、硫酸铵、硝酸钠、氯化钾、磷酸二氢钾、硫酸亚铁、硫酸镁、氯化钴、苯丙氨酸、维生素VB12、维生素VB3、生物素、甜菜碱加入水中混合后，将溶液pH值调至7.2-7.5；
[0015] 在上述溶液中添加碳酸钙混匀后灭菌并加入灭菌后的葡萄糖·H2O得到合成培养基。
[0016] 优选地，所述方法包括：
[0017] 所述的在上述溶液中添加碳酸钙混匀后灭菌的灭菌温度为121℃，灭菌时间为20～30min。
[0018] 进一步，优选地，所述的灭菌后的葡萄糖·H2O的灭菌条件为115℃，灭菌时间为20～30min。
[0019] 本发明还提供了一种合成培养基的用途为利用小单胞菌发酵生产庆大霉素C1a。
[0020] 进一步，优选地，所述小单胞菌为绛红小单胞菌或棘孢小单孢菌。
[0021] 有益效果
[0022] 由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优势：
[0023] 1、本发明的新型培养基成分包括葡萄糖·H2O、硫酸铵、硝酸钠、氯化钾、磷酸二氢钾、七水合硫酸亚铁、碳酸钙、硫酸镁、氯化钴、VB3、苯丙氨酸、生物素、甜菜碱和木糖，均为常见试剂，原料易得，用量少，成本低，制备方法简单，有利于大规模工业化生产。
[0024] 2、采用本发明的新型培养基培养小单胞菌(更佳地是绛红或棘孢小单胞菌)，该菌株在该新型培养基中获得庆大霉素C1a的产量有显著提高，合成庆大霉素C1a的量为284μg/mL，比优化前的47μg/mL单位提高了6倍。对小单胞菌发酵合成次级代谢产物的机理研究及工业化生产庆大霉素C1a具有重要意义。附图说明
[0025] 图1为应用本发明优化前的原始合成培养基以及优化合成培养基实施例1进行发酵生产庆大霉素C1a，发酵过程随着发酵时间的变化，发酵液中的庆大霉素C1a的产量曲线。
[0026] 图2为应用本发明优化前的原始合成培养基以及优化合成培养基实施例1进行发酵生产庆大霉素C1a，发酵过程随着发酵时间的变化，发酵液中的菌体的干重曲线。
[0027] 图3为应用实施例2～5的合成培养基进行发酵生产庆大霉素C1a，发酵过程随着发酵时间的变化，发酵液中的庆大霉素C1a的产量曲线。
具体实施方式
[0028] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0029] 下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等编著，分子克隆实验指南，第三版，科学出版社，2002中所述的条件或按照制造厂商所建议的条件。
[0030] 实施例1
[0031] 本具体实施例提供了一种合成培养基，其成分及其质量浓度如下：
[0032] 葡萄糖·H2O 28g/L、木糖0.5g/L、硫酸铵3g/L、硝酸钠2.3g/L、氯化钾0.5g/L、磷酸二氢钾2.2g/L、硫酸亚铁0.05g/L、硫酸镁0.045g/L、氯化钴0.012g/L、碳酸钙4g/L、苯丙氨酸0.05g/L、维生素VB120.006g/L、维生素VB30.0055g/L、生物素0.015g/L、甜菜碱0.05g/L，剩余余量为水。
[0033] 合成培养基的制备方法为：
[0034] 将木糖、硫酸铵、硝酸钠、氯化钾、磷酸二氢钾、硫酸亚铁、硫酸镁、氯化钴、苯丙氨酸、维生素VB12、维生素VB3、生物素、甜菜碱加入水中混合后，将溶液pH值调至7.2-7.5；
[0035] 在上述溶液中添加碳酸钙混匀后在121℃下灭菌25min后在无菌操作台中加入灭完菌的葡萄糖·H2O，得到合成培养基。
[0036] 葡萄糖·H2O的灭菌条件为115℃，灭菌时间为20～30min。
[0037] 发酵培养方法：
[0038] 将培养好的绛红小单胞菌种子液6ml接入装有60mL合成培养基的500mL摇瓶中，在35.5±0.5℃的培养温度、260rpm的转速、40％-60％的湿度下培养96h，在发酵结束后测定菌体干重和产物浓度，结果如图1、图2所示。
[0039] 对照组
[0040] 本对照组提供了一种原始合成培养基配方，配方如下：
[0041] 葡萄糖·H2O 20g/L、硫酸铵3g/L、硝酸钠2g/L、氯化钾0.5g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、七水合硫酸亚铁0.05g/L、硫酸镁0.05g/L、氯化钴0.01g/L加入水中混合后，用氢氧化钠(1mol/L)调节pH至7.8±0.2范围内，后加入碳酸钙4g/L混合后118℃灭菌25min，35℃恒温摇床培养96h用于发酵培养庆大霉素C1a。
[0043] 具体实施是采用24孔板培养内添加0.01-0.02％浓度的不同物质，孔板摇床转速220rpm,培养温度35.5±0.5℃培养96h，测定单位菌体干重(W)和庆大霉素C1a含量并在此基础上计算单位菌体的产物含量，与对照组比较提高10％以上作为下一步实验考察对象。
[0044] 表1.单因素添加实验结果
[0045]
[0046]
[0047]
[0048] 由表1可知，Phe、glu、gln、Leu、Tyr、Asn、甜菜碱、鸟嘌呤、胞苷、VB3、生物素、2-dox、木糖等为根据单因素实施结果筛选提高10％以上的物质，表明这些物质对庆大霉素C1a含量具有促进作用。
[0049] 将上述根据单因素实施结果筛选提高10％以上的物质作为候选物进行PB试验，利用Minitab软件，设计24组实验，其中高水平是低水平的1.5倍，PB实验表及结果如下表所示。以单位菌体效价为响应参数，利用软件进行计算以单位菌体效价为响应值，由P值可知模型显著，同时模型给出了庆大霉素C1a与各组分之间的关系：
[0050] Y(mg/g)＝3.711-0.239phe+0.363gly-0.356ile-0.657gln-0.548glu-0.153asp+0.345tyr-0.029leu-0.695vb3+0.668vb12-1.352生物素-0.261腺嘌呤+0.987尿嘧啶-
0.060胞苷-0.490鸟嘌呤+2.289甜菜碱-0.049尿苷+0.153mo+0.0072-dox-1.507木糖。
0.060胞苷-0.490鸟嘌呤+2.289甜菜碱-0.049尿苷+0.153mo+0.0072-dox-1.507木糖。
[0051] 表2Plackett-Burman设计因子水平及编码
[0052]
[0053]
[0054] 由表2可知，木糖、甜菜碱和生物素对培养基的单位效价影响最为显著，综合其他实验数据最终确定合成培养的成分和浓度为：葡萄糖·H2O28g/L，木糖0.5g/L，硫酸铵3g/L，硝酸钠2.3g/L，氯化钾0.5g/L，磷酸二氢钾2.2g/L，硫酸亚铁0.05g/L，硫酸镁0.045g/L，氯化钴0.012g/L，碳酸钙4g/L，苯丙氨酸0.05g/L，维生素VB120.006g/L，维生素VB30.0055g/L，生物素0.015g/L，甜菜碱0.05g/L。
[0055] 在5L发酵罐中原始合成培养基即对照组与优化后合成培养基即实施例1在庆大霉素C1a产物合成及菌生生长的比较：
[0056] 1、发酵方法
[0057] (1)斜面培养
[0058] 将放于80℃冰箱甘油管保的棘孢小单胞菌(敲除genK，获自武汉大学)的菌种取出，吸取200μl均匀涂布于装液量50mL的茄子瓶斜面。斜面培养基组成：淀粉10g/L，KNO31g/L，K2HPO4·3H2O 0.3g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，NaCl 0.5g/L，L-天冬酰胺0.02g/L，CaCO31g/L，麸皮17g/L，琼脂粉14g/L，pH7.8，121℃高压湿热灭菌30min。沙土孢子铺茄子瓶，35±0.5℃培养8天孢子成熟后放4℃冰箱保存待用。
[0059] 种子培养基：玉米粉15g/L，淀粉10g/L，葡萄糖1g/L，低温豆粉10g/L，蛋白胨2g/L，KNO30.5g/L，CaCO35g/L，121℃高压湿热灭菌30min。挖宽1cm×2cm的带有孢子的琼脂快介入装液量60mL/500mL的摇瓶中培养温度35±1℃摇床转速220rpm，培养周期46±3h。
[0060] 发酵培养：将培养好的种子60mL接入3000mL/5000mL的5L发酵罐(发酵罐带搅拌、pH、溶氧、称重等)，转速300rpm，培养温度35.5±0.5℃培养96h，中间每隔12h取样测定菌体干重和产物浓度。
[0062] 产物液相测定：配制0.3636g/L的庚烷磺酸钠250mL为水相。按照甲醇：水相：乙酸＝730，225，45的体积比制备1L的流动相，将配置好的流动相通过孔径为0.22μm的有机相滤膜超滤，超声波脱气10min，待用。
[0063] 衍生剂OPA的配制：OPA溶液配制。称量邻苯二甲醛0.5g溶解于2.5mL甲醇中，加入pH为10.4的0.4mol/L硼酸47.5mL，混合均匀，加入3-巯基丙酸1mL，将混合均匀的溶液用45％NaOH调至10.4，放入棕色广口瓶中，避光保存。
[0064] 标品预处理：使用移液枪吸取1000U/mL的庆大霉素C1a标品0.25mL，依次加入3.75mL超纯水，1mLOPA衍生剂和5mL异丙醇，混合均匀。放入60℃水浴锅中，水浴15min，放入室温中冷却。用2mL的注射器取1mL衍生后的标品，通过0.22μm的过滤头过滤，将样品浓度稀释为200U/mL,400U/mL,600U/mL,800U/mL,1000U/mL，分别加入进样品中，待用。
[0065] 高效液相色谱检测：设置进液量为20μl，检测波长为330nm，检测周期为10min，温度为40℃，流速为1.2mL/min。将使用90％甲醇水的流动相，通过高效液相色谱仪器的C18强粒子交换柱ZORBAX SB-C18(型号4.6×150mm，5μm)，稳定柱压。
[0066] 由图1可知，优化后合成培养基即实施例1的细胞干重的重量在任意周期内的重量都大于原始合成培养基即对照组，所以实施例1所制备的合成培养基有利于小单胞菌的培养发酵。
[0067] 由图2可知，用优化后合成培养基即实施例1培养小单胞菌合成庆大霉素C1a的量为284μg/mL，比优化前即对照组的47μg/mL单位提高了6倍。
[0068] 实施例2
[0069] 本具体实施例提供了一种合成培养基的另一种实施方式，其成分及其质量浓度如下：
[0070] 葡萄糖·H2O 10g/L、木糖0.2g/L、硫酸铵3g/L、硝酸钠2g/L、氯化钾0.2g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸亚铁0.02g/L、硫酸镁0.03g/L、氯化钴0.005g/L、碳酸钙2g/L、苯丙氨酸0.01g/L、维生素VB120.001g/L、维生素VB30.001g/L、生物素0.001g/L、甜菜碱0.01g/L，剩余余量为水。
[0071] 合成培养基的制备方法为：
[0072] 将木糖、硫酸铵、硝酸钠、氯化钾、磷酸二氢钾、硫酸亚铁、硫酸镁、氯化钴、苯丙氨酸、维生素VB12、维生素VB3、生物素、甜菜碱加入水中混合后，将溶液pH值调至7.2-7.5；
[0073] 在上述溶液中添加碳酸钙混匀后在121℃下灭菌25min后在无菌操作台中加入灭完菌的葡萄糖·H2O，得到合成培养基。
[0074] 葡萄糖·H2O的灭菌条件为115℃，灭菌时间为20～30min。
[0075] 发酵培养方法：
[0076] 将培养好的绛红小单胞菌种子液6ml接入装有60mL合成培养基的500mL摇瓶中，在35.5±0.5℃的培养温度、260rpm的转速、40％-60％的湿度下培养96h，在发酵结束后测定产物浓度，结果如图3所示。
[0077] 实施例3
[0078] 本具体实施例提供了一种合成培养基的再一种实施方式，其成分及其质量浓度如下：
[0079] 葡萄糖·H2O 30g/L、木糖1g/L、硫酸铵10g/L、硝酸钠5g/L、氯化钾0.8g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸亚铁0.08g/L、硫酸镁0.06g/L、氯化钴0.02g/L、碳酸钙10g/L、苯丙氨酸0.05g/L、维生素VB120.01g/L、维生素VB30.02g/L、生物素0.03g/L、甜菜碱0.1g/L，剩余余量为水。
[0080] 合成培养基的制备方法为：
[0081] 将木糖、硫酸铵、硝酸钠、氯化钾、磷酸二氢钾、硫酸亚铁、硫酸镁、氯化钴、苯丙氨酸、维生素VB12、维生素VB3、生物素、甜菜碱加入水中混合后，将溶液pH值调至7.2-7.5；
[0082] 在上述溶液中添加碳酸钙混匀后在121℃下灭菌25min后在无菌操作台中加入灭完菌的葡萄糖·H2O，得到合成培养基。
[0083] 葡萄糖·H2O的灭菌条件为115℃，灭菌时间为20～30min。
[0084] 发酵培养方法：
[0085] 将培养好的绛红小单胞菌种子液6ml接入装有60mL合成培养基的500mL摇瓶中，在35.5±0.5℃的培养温度、260rpm的转速、40％-60％的湿度下培养96h，在发酵结束后测定产物浓度，结果如图3所示。
[0086] 实施例4
[0087] 本具体实施例提供了一种合成培养基的又一种实施方式，其成分及其质量浓度如下：
[0088] 葡萄糖·H2O 20g/L、木糖0.4g/L、硫酸铵4g/L、硝酸钠2g/L、氯化钾0.4g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、硫酸亚铁0.04g/L、硫酸镁0.04g/L、氯化钴0.01g/L、碳酸钙4g/L、苯丙氨酸0.03g/L、维生素VB120.05g/L、维生素VB30.05g/L、生物素0.01g/L、甜菜碱0.03g/L，剩余余量为水。
[0089] 合成培养基的制备方法为：
[0090] 将木糖、硫酸铵、硝酸钠、氯化钾、磷酸二氢钾、硫酸亚铁、硫酸镁、氯化钴、苯丙氨酸、维生素VB12、维生素VB3、生物素、甜菜碱加入水中混合后，将溶液pH值调至7.2-7.5；
[0091] 在上述溶液中添加碳酸钙混匀后在121℃下灭菌25min后在无菌操作台中加入灭完菌的葡萄糖·H2O，得到合成培养基。
[0092] 葡萄糖·H2O的灭菌条件为115℃，灭菌时间为20～30min。
[0093] 发酵培养方法：
[0094] 将培养好的绛红小单胞菌种子液6ml接入装有60mL合成培养基的500mL摇瓶中，在35.5±0.5℃的培养温度、260rpm的转速、40％-60％的湿度下培养96h，在发酵结束后测定产物浓度，结果如图3所示。
[0095] 实施例5
[0096] 本具体实施例提供了一种合成培养基的又一种实施方式，其成分及其质量浓度如下：
[0097] 葡萄糖·H2O 28g/L、木糖0.8g/L、硫酸铵6g/L、硝酸钠3g/L、氯化钾0.6g/L、磷酸二氢钾2.5g/L、硫酸亚铁0.06g/L、硫酸镁0.05g/L、氯化钴0.015g/L、碳酸钙8g/L、苯丙氨酸0.05g/L、维生素VB120.08g/L、维生素VB30.08g/L、生物素0.02g/L、甜菜碱0.08g/L，剩余余量为水。
[0098] 合成培养基的制备方法为：
[0099] 将木糖、硫酸铵、硝酸钠、氯化钾、磷酸二氢钾、硫酸亚铁、硫酸镁、氯化钴、苯丙氨酸、维生素VB12、维生素VB3、生物素、甜菜碱加入水中混合后，将溶液pH值调至7.2-7.5；
[0100] 在上述溶液中添加碳酸钙混匀后在121℃下灭菌25min后在无菌操作台中加入灭完菌的葡萄糖·H2O，得到合成培养基。
[0101] 葡萄糖·H2O的灭菌条件为115℃，灭菌时间为20～30min。
[0102] 发酵培养方法：
[0103] 将培养好的绛红小单胞菌种子液6ml接入装有60mL合成培养基的500mL摇瓶中，在35.5±0.5℃的培养温度、260rpm的转速、40％-60％的湿度下培养96h，在发酵结束后测定产物浓度，结果如图3所示。
[0104] 图3为应用实施例2～5的合成培养基进行发酵生产庆大霉素C1a，发酵过程随着发酵时间的变化，发酵液中的庆大霉素C1a的产量曲线。
[0105] 由图3所示，优化后合成培养基即实施例2～5的细胞干重的重量在任意周期内的重量都在较高范围内，所以实施例2～5所制备的合成培养基有利于小单胞菌的培养发酵。
[0106] 综合以上内容，本发明提供了一种用于庆大霉素C1a生产的合成培养基。采用本合成培养基更有利于对庆大霉素C1a的合成和代谢调控机理进行分析，为进一步提高庆大霉素C1a的工业产量奠定了基础。
[0107] 应当说明的是，上述实施例均可根据需要自由组合。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
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