球毛壳菌素A作为柑橘致腐菌药剂上的应用
阅读：209发布：2020-05-17
专利汇可以提供球毛壳菌素A作为柑橘致腐菌药剂上的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了球毛壳菌素A在对柑橘致腐菌上的应用，具体为球毛壳菌素A对橘青霉抑制作用的应用。球毛壳菌素A分离提取自本实验室从三峡河岸带疏花 水 柏枝中分离得到的 内生菌 —球毛壳菌QY-1菌株。本发明以球毛壳菌素A为原料，针对柑橘致腐菌的活性进行研究。主要使用平板对峙法和 牛 津杯法进行抑菌实验，结果发现球毛壳菌QY-1可以抑制柑橘致腐菌活性，其 次级代谢产物 球毛壳菌素A对柑橘致腐菌也具有很好的抑菌作用，因此可用于制备柑橘保鲜剂，为开发新型的柑橘保鲜剂提供了选择，具有很高的研究价值以及良好的经济和社会效益。，下面是球毛壳菌素A作为柑橘致腐菌药剂上的应用专利的具体信息内容。
球毛壳菌素A作为柑橘致腐菌药剂上的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及球毛壳菌素A对柑橘致腐菌的应用，主要应用于保鲜剂的研究以及开发利用。
背景技术
[0002] 本研究柑橘致腐菌使用的是橘青霉。橘青霉是青霉属(Penicillium)菌株。青霉是一类杂食性真菌，孢子耐热性较强，菌体繁殖温度较低，可生长在任何含有机物的基质上，比较喜爱苹果酸、柠檬酸等碳源，可引起柑橘、香蕉类、茄科、苹果、等100多种植物发病，严重影响农作物的产量，降低农产品和饲料品质，造成巨大的经济损失。
[0003] 本发明从QY-1菌株中分离得到一纯物质球毛壳菌素A，已知其具有广谱拮抗性和抗逆性，对多种杭物病害具有良好的防治效果，对肿瘤细胞强烈的细胞毒性、抗细菌和真菌活性(稻瘟病，立枯丝核菌和腐霉菌等植物病原菌)。但是，至今没有人报道过关于球毛壳菌素A对橘青霉的抑制活性，因此，球毛壳菌素A可用于制备柑橘保鲜剂，为开发新型的柑橘保鲜剂提供了选择，具有很高的研究价值以及良好的经济和社会效益。
[0004] 以前使用冷藏、气调、打蜡等工艺进行柑橘的防腐保鲜，但这些方法成本较高或者保鲜效果不太好。化学保鲜法虽然能用于控制柑橘的采后病害，但存在处理后容易变味，糖分降低等问题，还可能诱发病原菌的抗药性，面临食品安全问题。而球毛壳菌素A制作的柑橘保鲜剂则克服了以上的问题。
发明内容
[0006] 本发明的目的之一是提供一种菌剂——球毛壳菌素A对柑橘致腐菌具有良好的抑制作用，可用于制备保鲜剂，为开发新型的保鲜剂提供了新选择。
[0007] 本发明目的是用于保鲜剂的研究，其活性成分为球毛壳菌素A。本发明将球毛壳菌素A作为柑橘致腐菌药剂上的应用，所述的球毛壳菌素A自疏花水柏枝中分离得到的内生真菌—球毛壳菌QY-1菌株。
[0008] 球毛壳菌(Chaetomium globosum)QY-1，于2016年4月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为，CCTCC NO：M 2016178，保藏地址：中国，武汉，武汉大学。
[0009] 所述的球毛壳菌素A作为橘青霉抑制剂上的应用。
[0011] 本发明的菌中球毛壳菌素A的含量非常高，达到379.76mg/L。对橘青霉的抑菌的工艺表明，球毛壳菌和橘青霉的菌株拮抗实验抑菌圈约2cm左右，球毛壳菌次级代谢产物球毛壳菌素A对橘青霉的拮抗实验抑菌圈也在2cm左右。因而，本发明还包括含有球毛壳菌素A的生物制剂。附图说明
[0012] 图1为：平板对峙法检测球毛壳菌素A对橘青霉的菌株拮抗效果，其中，A QY-1 菌株对峙，B百可得千倍液，C水，D空白对照。
[0013] 图2为：牛津杯法检测球毛壳菌素A对橘青霉的拮抗效果，其中，A CheA 1mg/mL，B CheA0.1mg/mL，C CheA 10μg/mL D CheA 1μg/mL，E CheA 0.1μg/mL，F CheA 0.01μg/mL，G甲醇，H百可得。
[0014] 图3为：用40倍镜镜检观察孢子形态的结果，其中，注：A空白对照(正常生长)，B正对照(百可得千倍液)，C QY-1菌株对峙，D CheA 1mg/mL。
具体实施方式
[0015] 实施例1：球毛壳菌对橘青霉的菌株拮抗实验结果
[0016] 菌株的培养：用PDA固体培养基活化保藏的橘青霉菌株，待其长出单菌落之后备用。
[0017] 平板对峙法检测菌体对柑橘橘青霉菌抑菌活性：将活化好的橘青霉菌接种于 PDA固体斜面培养基上，于恒温28℃培养箱培养4d即可。事先在超净工作台内在试管中加9ml灭菌的蒸馏水，在酒精灯火焰边用接种环刮下一环孢子，放入加有灭菌的蒸馏水的试管中，摇晃均匀即制得桔青霉的孢子悬浮液，然后用移液枪取200μl柑橘橘青霉菌孢子悬液于PDA固体培养基的平板上，用涂布棒涂布均匀，然后使用打孔器打孔之后再将球毛壳菌QY-1菌饼置于平板的孔上，其作为实验组；使用百可得千倍液(按照使用说明书配置)作为正对照，水为负对照，还有一组空白对照(即不加任何东西，自然生长的桔青霉)，均在恒温28℃的培养箱培养4d，记录实验结果。
[0018] 实施例2：球毛壳菌素A对橘青霉的拮抗实验结果
[0019] 菌株的培养：用PDA固体培养基活化保藏的橘青霉菌株，待其长出单菌落之后备用。
[0020] 牛津杯法检测CheA(球毛壳菌A)对柑橘橘青霉菌抑菌活性：使用与实施例一中同样的方法培养橘青霉菌株，同样的方法其制得孢子的悬浮液。吸取200 μl橘青霉菌的孢子悬液于PDA固体培养基的平板上，用涂布棒均匀涂布后，将牛津杯垂直放到涂布好的平板上，然后在每个牛津杯里面加入150μl的不同浓度的样品溶液，作为实验组；使用百可得千倍液作为正对照，水为负对照，还有一组空白对照，均在恒温28℃的培养箱培养4d，记录实验结果。
[0021] 注：每个平板里三个牛津杯或者三个菌饼作为对照，做两个平板作为每组的平行实验；样品使用甲醇溶解，加一组甲醇对照；样品的浓度根据实验需要确定；每个牛津杯加样量均为150μl。
[0022] 表1球毛壳菌对橘青霉的菌株拮抗实验抑菌圈结果
[0023]
[0024] 表2球毛壳菌素A对橘青霉的拮抗实验抑菌圈结果
[0025]
[0026] 用甲醇(色谱级)将CheA(球毛壳菌A)溶解成不同浓度梯度的溶液，用分离制备时相同的液相条件进行分析，记录不同浓度的CheA(球毛壳菌A)溶液的峰面积，制作标准曲线。之后用甲醇溶解少量粗提取物，也是用分离制备时相同的液相条件进行分析，记录液相主峰位置的峰面积，然后将峰面积带入到标准曲线的公式算出粗提物中主物质CheA的含量即可。
[0027] 粗提物中物质的含量结果如下表(表3)所示：
[0028] 表3物质的含量结果
[0029]
[0030] 结果表明若培养条件适宜，QY-1菌株产主物质CheA的量可以达到 379.76±37.49mg/L，是目前文献报道的QY-1菌株产CheA的量53.71mg/L七倍左右。
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