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肾癌的检测方法

阅读：557发布：2020-05-08

专利汇可以提供肾癌的检测方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供高灵敏度且高特异度的肾癌的检测方法。根据本发明，例如提供一种在对象中检测肾癌的方法，其包括将由所述对象得到的尿样稀释至规定倍率的步骤和评价线虫对稀释后的尿样是否显示引诱行为的步骤，所述规定倍率为200以上的倍率。，下面是肾癌的检测方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种在对象中检测肾癌的方法，
其包括：
将由所述对象得到的尿样稀释至规定倍率的步骤；以及
评价线虫对稀释后的尿样是否显示引诱行为的步骤，
所述规定倍率为200以上的倍率。
2.如权利要求1所述的方法，其中，对象为疑似患癌的对象。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中，对象为肾病患者。
4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，所述规定倍率为500以上或1000以上的倍率。
5.如权利要求4所述的方法，其中，所述规定倍率为1000～20000范围的倍率。
6.如权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，在线虫对稀释后的尿样显示出引诱行为的情况下，表明作为尿样的来源的对象具有或可能具有癌，在显示出回避行为的情况下，表明作为尿样的来源的对象不具有或可能不具有癌。
7.一种包含线虫的肾癌的诊断试剂盒，其在肾癌的诊断方法中使用，
所述诊断方法包括将由对象得到的尿样稀释至规定倍率的步骤以及评价线虫对稀释后的尿样是否显示引诱行为的步骤，
所述规定倍率为200以上的倍率。
8.由对象得到的尿样用于在对象中检测肾癌的应用，其中，
该应用包括将所述尿样稀释至规定倍率的步骤以及评价线虫对稀释后的尿样是否显示引诱行为的步骤，
所述规定倍率为200以上的倍率。
9.一种在对象中检测癌的方法，
其包括：
将由所述对象得到的尿样稀释至第一规定倍率的步骤；
将由所述对象得到的尿样稀释至第二规定倍率的步骤；以及
评价线虫对稀释后的尿样是否显示引诱行为的步骤，
所述第一规定倍率为5～100范围的倍率，所述第二规定倍率为200以上的倍率。
10.如权利要求9所述的方法，其中，在线虫对以第二规定倍率稀释后的样品显示出引诱行为、线虫对以第一规定倍率稀释后的样品显示出回避行为的情况下，表明作为该尿样的来源的对象具有或可能具有肾癌。
11.如权利要求9所述的方法，其中，在线虫对以第一规定倍率稀释后的样品显示出引诱行为、线虫对以第二规定倍率稀释后的样品显示出回避行为的情况下，表明作为该尿样的来源的对象具有或可能具有肾癌以外的任意一种癌。
12.一种在线虫对由对象得到的尿样的趋性行为的评价系统中提高肾癌的检测灵敏度或特异度的方法，其中，包括将由所述对象得到的尿样稀释至规定倍率以上的步骤。
13.一种线虫对由对象得到的尿样的趋性行为的评价系统，其包含由疑似为肾癌的对象或肾癌患者得到的稀释尿样和线虫，所述稀释尿样的规定倍率为200以上的倍率。
14.如权利要求1～6中任一项所述的方法、权利要求7所述的诊断试剂盒、权利要求8所述的应用、权利要求9～11中任一项所述的方法、权利要求12所述的方法或权利要求13所述的评价系统，其中，癌为早期癌。
15.如权利要求1～6中任一项所述的方法、权利要求7所述的诊断试剂盒、权利要求8所述的应用、权利要求9～11中任一项所述的方法、权利要求12所述的方法或权利要求13所述的评价系统，其中，对象为人工透析患者。

说明书全文

肾癌的检测方法

技术领域

[0001] 本发明提供肾癌的检测方法。

背景技术

[0002] 已明确线虫对癌患者的尿样显示出引诱行为、对健康人的尿样显示出回避行为，已开发出基于线虫的趋性行为的癌的诊断方法(专利文献1)。在该评价系统中，将尿样稀释至约10倍，在线虫对稀释后的样品显示出引诱行为的情况下，可以评价为作为该样品的来源的对象具有癌。另外，在稀释倍率高的情况下，评价的精度当然大幅降低(专利文献1)。

[0003] 现有技术文献

[0004] 专利文献

[0005] 专利文献1：WO2015/088039

发明内容

[0006] 本发明人认为需要能够以高灵敏度、高特异度检测肾癌的方法、或者在被认为肾癌的发病率高的透析患者中能够以高灵敏度、高特异度检测肾癌的方法。

[0007] 本发明提供肾癌的检测方法。

[0008] 根据上述专利文献1(WO2015/088039)，线虫对由癌患者得到的尿样显示出引诱行为，另一方面，对由健康人得到的尿样显示出回避行为。特别是在将尿样利用水稀释至10倍的情况下，能够实现高灵敏度和高特异度，但其稀释倍率增高时(例如100以上的稀释倍率时)，灵敏度和特异度降低。

[0009] 本发明人发现，利用使用线虫的引诱行为的评价系统，将来自肾癌患者的尿以上述稀释倍率进行稀释后进行评价时，与其他癌相比，灵敏度、特异度低。另一方面，本发明人发现，上述评价系统中，将来自肾癌患者的尿样以高倍率(例如，200以上、300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上或1000以上的稀释倍率)进行稀释时，肾癌的检测的灵敏度和特异度飞跃性地提高。另外，本发明人发现，利用上述评价系统对以上述的高稀释倍率处理后的尿样进行评价时，可以从肾病患者中鉴别癌患者。本发明以这样的见解为基础。

[0010] 即，根据本发明，提供例如以下的发明。

[0011] (1)一种在对象中检测肾癌的方法，

[0012] 其包括：

[0013] 将由上述对象得到的尿样稀释至规定倍率的步骤；以及

[0014] 评价线虫对稀释后的尿样是否显示引诱行为的步骤，

[0015] 上述规定倍率为200以上(或者300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上或1000以上)的倍率。

[0016] (2)如上述(1)所述的方法，其中，对象为疑似患癌的对象。

[0017] (3)如上述(1)或(2)所述的方法，其中，对象为肾病患者。

[0018] (4)如上述(1)～(3)中任一项所述的方法，其中，上述规定倍率为500以上或1000以上的倍率。

[0019] (5)如上述(4)所述的方法，其中，上述规定倍率为1000～20000范围的倍率。

[0020] (6)如上述(1)～(5)中任一项所述的方法，其中，在线虫对稀释后的尿样显示出引诱行为的情况下，表明作为尿样的来源的对象具有或可能具有癌，在显示出回避行为的情况下，表明作为尿样的来源的对象不具有或可能不具有癌。

[0021] (7)一种包含线虫的肾癌的诊断试剂盒，其在肾癌的诊断方法中使用，[0022] 所述诊断方法包括将由对象得到的尿样稀释至规定倍率的步骤以及评价线虫对稀释后的尿样是否显示引诱行为的步骤，

[0023] 上述规定倍率为200以上(或者300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上或1000以上)的倍率。

[0024] (8)由对象得到的尿样用于在对象中检测肾癌的应用，其中，

[0025] 该应用包括将上述尿样稀释至规定倍率的步骤以及评价线虫对稀释后的尿样是否显示引诱行为的步骤，

[0026] 上述规定倍率为200以上(或者300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上或1000以上)的倍率。

[0027] (9)一种在对象中检测癌的方法，

[0028] 其包括：

[0029] 将由上述对象得到的尿样稀释至第一规定倍率的步骤；

[0030] 将由上述对象得到的尿样稀释至第二规定倍率的步骤；以及

[0031] 评价线虫对稀释后的尿样是否显示引诱行为的步骤，

[0032] 上述第一规定倍率为5～100范围的倍率，上述第二规定倍率为200以上(或者300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上或1000以上)的倍率。

[0033] (10)如上述(9)所述的方法，其中，

[0034] 在线虫对以第二规定倍率稀释后的样品显示出引诱行为、线虫对以第一规定倍率稀释后的样品显示出回避行为的情况下，表明作为该尿样的来源的对象具有或可能具有肾癌。

[0035] (11)如上述(9)所述的方法，其中，

[0036] 在线虫对以第一规定倍率稀释后的样品显示出引诱行为、线虫对以第二规定倍率稀释后的样品显示出回避行为的情况下，表明作为该尿样的来源的对象具有或可能具有肾癌以外的任意一种癌。

[0037] (12)一种在线虫对由对象得到的尿样的趋性行为的评价系统中提高肾癌的检测灵敏度或特异度的方法，其中，

[0038] 包括将由上述对象得到的尿样稀释至规定倍率以上、例如200倍以上(或者300倍以上、400倍以上、500倍以上、600倍以上、700倍以上、800倍以上、900倍以上或1000倍以上)的步骤。

[0039] (13)一种线虫对由对象得到的尿样的趋性行为的评价系统，其包含由疑似为肾癌的对象或肾癌患者得到的稀释尿样和线虫，所述稀释尿样的规定倍率为200以上(或者300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上或1000以上)的倍率。

[0040] (14)如上述(1)～(6)中任一项所述的方法、上述(7)所述的诊断试剂盒、上述(8)所述的应用、上述(9)～(11)中任一项所述的方法、上述(12)所述的方法或上述(13)所述的评价系统，其中，癌为早期癌。

[0041] (15)如上述(1)～(6)中任一项所述的方法、上述(7)所述的诊断试剂盒、上述(8)所述的应用、上述(9)～(11)中任一项所述的方法、上述(12)所述的方法或上述(13)所述的评价系统，其中，对象为人工透析患者。附图说明

[0042] 图1示出实施例1中实施的使用线虫的引诱行为的评价系统的示意图。该评价系统中，在包含琼脂培养基的培养皿上对线虫对尿样的趋性行为进行评价。

[0043] 图2A示出使用将由肾癌患者得到的尿样进行100倍稀释而得到的稀释尿样的线虫的行为评价结果。图2A中，纵轴表示趋性指数，横轴表示样品编号。从图的左端起样品编号1～19依次排列。

[0044] 图2B示出使用将由肾癌患者得到的尿样进行10倍稀释而得到的稀释尿样的线虫的行为评价结果。图2B中，纵轴表示趋性指数，横轴表示样品编号。从图的左端起样品编号1～19依次排列。

[0045] 图3A示出使用将由肾癌患者得到的尿样进行1000倍稀释而得到的稀释尿样的线虫的行为评价结果。图3A中，纵轴表示趋性指数，横轴表示样品编号。从图的左端起样品编号1～19依次排列。

[0046] 图3B示出使用将由肾癌患者得到的尿样进行10000倍稀释而得到的稀释尿样的线虫的行为评价结果。图3B中，纵轴表示趋性指数，横轴表示样品编号。从图的左端起样品编号1～19依次排列。

具体实施方式

[0047] 本说明书中，“线虫”是指秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)。线虫是在生物研究中作为模型生物在世界范围内被广泛饲养、研究的常见生物，具有容易饲养、嗅觉优良的特征。

[0048] 本说明书中，“癌”是指肾癌、胃癌、子宫癌、肝癌、乳腺癌、直肠结肠癌、食道癌、胰腺癌、前列腺癌、胆管癌、肺癌、血癌、白血病、淋巴瘤等癌种。

[0049] 本说明书中，“肾癌”是指在肾脏产生的癌，包含肾细胞癌和肾盂癌。

[0050] 肾细胞癌可以基于表1-1所示的TNM分期来判断病程分期。

[0051] [表1-1]

[0052] 表1-1：肾细胞癌的分期(TNM分期)

[0053]分期基准
T1a 肾细胞癌的直径为4cm以下，并且局限于肾脏
T1b 肾细胞癌的直径为4～7cm，并且局限于肾脏
T2a 肾细胞癌的直径为7～10cm，并且局限于肾脏
T2b 肾细胞癌的直径大于10cm，并且局限于肾脏
T3a 肾细胞癌侵及肾静脉或周围的脂肪组织，但没有超过杰氏筋膜※
T3b 肾细胞癌侵及膈肌下方的腔静脉内
T3b 肾细胞癌侵及膈肌上的腔静脉，或者侵及腔静脉壁
T4 肾细胞癌超过杰氏筋膜，或者到达肾上腺
N0 未向区域淋巴结转移
N1 1个区域淋巴结有转移
N2 2个以上区域淋巴结有转移
M0 未转移到其他脏器
M1 转移到其他脏器

[0054] ※杰氏筋膜：包覆肾脏的膜

[0055] 此外，肾癌的分期可以基于下述表1-2来判定。

[0056] [表1-2]

[0057] 表1-2：肾细胞癌的分期

[0058] N0且M0 N1且M0 N2或M1
T1 I期 III期 IV期
T2 II期 III期 IV期
T3 III期 III期 IV期
T4 IV期 IV期 IV期

[0059] 肾盂/输尿管癌可以基于日本泌尿器科学会、日本病理学会、日本医学放射线学会编“泌尿器科、病理放射线科肾盂/输尿管/膀胱癌处理规程2011年4月(第一版)”(金原出版)等来确定分期(I期、II期、III期和IV期中的某一期)。

[0060] 本说明书中，“肾病”是指基于肾脏的功能低下的疾病或状态。肾病主要由于肾脏的肾小球、肾小管被侵袭而产生。

[0061] 肾脏的功能大多一旦受损就不会恢复，形成被称为慢性肾病或慢性肾功能衰竭的病态。

[0062] 慢性肾病例如可以以下述(1)或(2)或其两者持续3个月以上的状态来定义：

[0063] (1)利用尿检查、图像诊断、血液检查、病理等明确有肾损害的存在，特别是观察到0.15g/gCr以上的蛋白尿(30mg/gCr以上的白蛋白尿)；

[0064] (2)推算肾小球滤过率(eGFR)降低至小于60(mL/分钟/1.73m2)。

[0065] 男性的eGFR可以基于以下的计算式来算出：

[0066] eGFR(mL/分钟/1.73m2)＝194×血清肌酸酐值(mg/dL)-1.094×年龄(岁)-0.287[0067] {女性的eGFR通过将男性的eGFR乘以0.739倍来求出}。

[0068] 关于肾病，可以进一步利用推算肾小球滤过率对重症程度进行评价。

[0069] [表2]

[0070] 表2：慢性肾病的重症程度(CDK分期)

[0071]重症程度(CDK分期) 基准
1期(正常) eGFR值为90以上
2期(正常或轻度的功能低下) eGFR值为60以上且小于90
3a期(轻度～中度的功能低下) eGFR值为45以上且小于60
3b期(中度～重度的功能低下) eGFR值为30以上且小于45
4期(重度的功能低下) eGFR值为15以上且小于30
5期(末期肾功能衰竭) eGFR值小于15

[0072] 本说明书中，“对象”是指哺乳动物、例如人。在对象为人的情况下，对象有时也被称为患者。对象可以是具有癌的对象或者疑似具有癌的对象(以下有时仅称为“疑似为癌的对象”)。

[0073] 本说明书中，“约”是指包含其后所接续的数值的上下10％以内的数值或者上下5％以内的数值。

[0074] 本说明书中，“趋性行为”是指引诱行为或回避行为。引诱行为是指缩小与某种物质的物理距离的行为，回避行为是指扩大与某种物质的物理距离的行为。将诱发引诱行为的物质称为引诱物质，将诱发回避行为的物质称为回避物质。

[0075] 线虫(C.elegans)具有通过嗅觉被引诱物质引诱、并避开回避物质的性质。将被引诱物质引诱的行为称为引诱行为，将避开回避物质的行为称为回避行为。另外，将引诱行为和回避行为合称为趋性行为。线虫对癌患者的尿样显示出引诱行为，另一方面，对健康人的尿样显示出回避行为。

[0076] 本说明书中，“检测癌的方法”或类似的表述可以理解为“得到与癌的有无相关的初步信息的方法”、“得到用于癌的诊断的初步信息的方法”、“癌的诊断的初步方法”、“检测癌的可能性的方法”或“检测癌细胞的方法”。本说明书中，检测癌的方法可以是在产业上可利用的方法。

[0077] [1]根据本发明，提供一种在对象中检测肾癌的方法，其包括：

[0078] (1)将由上述对象得到的尿样稀释至规定倍率的步骤、和

[0079] (2)评价线虫对稀释后的尿样是否显示引诱行为的步骤，

[0080] 上述规定倍率为200以上(或者300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上或1000以上)的倍率。

[0081] 本发明中，对象可以设定为人对象。本发明中，对象可以是罹患肾病(例如慢性肾病)的患者。本发明中，对象可以是例如疑似为癌的对象，或者可以是具有癌(例如肾癌以外的癌或肾癌)的对象。本发明的某一方式中，对象可以是具有肾病的对象。本发明的某一方式中，对象可以是具有肾病并且疑似为癌的对象。本发明的某一方式中，对象可以是具有肾癌以外的癌并且具有肾病的对象。本发明的某一方式中，对象可以是具有肾癌并且具有肾病的对象。本发明的某一方式中，对象可以是接受人工透析的对象。本发明的某一方式中，对象可以是具有选自由CDK分期为1期、2期、3a期、3b期、4期和5期组成的组中的分期的慢性肾病患者。本发明中，在具有任一CDK分期的慢性肾病患者中均能够检测肾癌。

[0082] 本发明中，被检测的肾癌是选自I期、II期、III期和IV期中的任意一期的癌。本发明的方法适用于I期、II期、III期和IV期中的任意一期的癌的检测，适用于早期癌(即，I期的癌和II期的癌)、例如I期的肾癌的检测。

[0083] 本发明中，规定倍率例如为超过100的倍率，例如，可以为200以上、300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上、1000以上、2000以上、3000以上、4000以上、5000以上、6000以上、7000以上、8000以上、9000以上或10000以上的倍率。本发明中，另外，规定倍率没有特别限定，例如，可以为100000以下的倍率、50000以下的倍率、40000以下的倍率、30000以下的倍率、20000以下的倍率、19000以下的倍率、18000以下的倍率、17000以下的倍率、16000以下的倍率、15000以下的倍率、14000以下的倍率、13000以下的倍率、12000以下的倍率、11000以下的倍率或10000以下的倍率。本发明中，规定倍率没有特别限定，例如，可以为200～50000范围的倍率、200～40000范围的倍率、200～30000范围的倍率、
200～20000范围的倍率、500～20000范围的倍率、500～15000范围的倍率、5000～15000范围的倍率、500～30000范围的倍率、500～50000范围的倍率、2000～50000范围的倍率、3000～50000范围的倍率、4000～50000范围的倍率、5000～50000范围的倍率、5000～30000范围的倍率或1000～10000范围的倍率。某一特定的方式中，规定倍率例如可以为约1000、约
2000、约3000、约4000、约5000、约6000、约7000、约8000、约9000、约10000、约11000、约
12000、约13000、约14000、约15000、约16000、约17000、约18000、约19000或约20000的倍率。

[0084] 本发明的某一方式中，规定倍率可以设定为例如上述规定倍率的范围中包含的多个规定倍率(例如，可以在上述[1](1)中制作稀释系列)。稀释系列可以设定为自多个规定倍率中的任一个倍率开始的稀释系列、例如2～20倍的稀释系列、例如5倍～10倍范围的稀释系列、10倍的稀释系列。

[0085] 本发明中，尿样的稀释例如可以利用水、例如蒸馏水或灭菌水等溶剂进行。

[0086] 线虫对尿样是否显示引诱行为可以通过观察线虫对于与线虫相隔一定距离(例如1cm～5cm)地配置的尿样是接近还是远离来进行评价。在一部分线虫接近尿样、一部分线虫远离尿样的情况下，当接近尿样的线虫的比例高于远离尿样的线虫的比例时，可以评价为线虫对被测试样显示出引诱行为。另外，当接近尿样的线虫的比例低于远离尿样的线虫的比例时，可以评价为线虫对尿样显示出回避行为。

[0087] 另外，可以通过例如下式求出趋性指数来评价线虫是显示出引诱行为、还是显示出回避行为。

[0088] 趋性指数

[0089] (趋性指数)＝{(接近尿样的线虫个体数)-(远离尿样的线虫个体数)}/全部线虫个体数

[0090] 趋性指数取-1～+1之间的数值，在显示出引诱行为的情况下取正值，在显示出回避行为的情况下取负值。并且，数值的绝对值越大，可以解释为越强地表现出趋性行为。

[0091] 某一方式中，本发明的方法可以进一步包括如下步骤：

[0092] (3)基于线虫对被测试样显示出的趋性行为，评价尿样是引诱物质或是回避物质。

[0093] 本发明的方法中，在线虫对尿样显示出引诱行为的情况下，表明对象具有或可能具有肾癌。本发明的方法中，例如，在线虫对尿样显示出回避行为的情况下，表明对象不具有或可能不具有肾癌。

[0094] 本发明中，可以评价线虫对以多个规定倍率稀释后的样品的趋性行为。即，根据本发明，提供一种在对象中检测癌的方法，其包括：将由上述对象得到的尿样稀释至第一规定倍率的步骤、将由上述对象得到的尿样稀释至第二规定倍率的步骤和评价线虫对稀释后的尿样是否显示引诱行为的步骤，上述第一规定倍率为5～100范围的倍率，上述第二规定倍率为200以上(或者300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上或1000以上)的倍率。

[0095] 根据专利文献1，肾癌以外的癌可广泛地利用线虫的趋性行为来检测。线虫的趋性行为可以通过将尿样以5～100倍、优选约10倍进行稀释而以最高的灵敏度和最高的特异度进行评价。另一方面，根据本发明，作为生产尿的器官的肾脏的癌可以通过以200倍以上(或者300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上或1000以上)的规定倍率进行稀释而以高灵敏度和高特异度进行评价。因此，准备来源于特定对象的尿的以第一规定倍率稀释后的样品和来源于该对象的尿的以第二规定倍率稀释后的样品，对它们分别评价线虫的趋性行为，由此，显示出对象具有肾癌或对象具有非肾癌(即肾癌以外的癌)。

[0096] 另外，第二规定倍率与上述[1]的规定倍率同样，例如为超过100的倍率，例如，可以为200以上、300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上、1000以上、2000以上、3000以上、4000以上、5000以上、6000以上、7000以上、8000以上、9000以上或
10000以上的倍率。本发明中，另外，规定倍率没有特别限定，例如，可以为50000以下的倍率、40000以下的倍率、30000以下的倍率、20000以下的倍率、19000以下的倍率、18000以下的倍率、17000以下的倍率、16000以下的倍率、15000以下的倍率、14000以下的倍率、13000以下的倍率、12000以下的倍率、11000以下的倍率或10000以下的倍率。本发明中，规定倍率没有特别限定，例如，可以为200～50000范围的倍率、200～40000范围的倍率、200～30000范围的倍率、200～20000范围的倍率、500～20000范围的倍率、500～15000范围的倍率、500～30000范围的倍率、500～50000范围的倍率、2000～50000范围的倍率、3000～50000范围的倍率、4000～50000范围的倍率、5000～50000范围的倍率、5000～30000范围的倍率或
1000～10000范围的倍率。某一特定的方式中，规定倍率例如可以为约1000、约2000、约
3000、约4000、约5000、约6000、约7000、约8000、约9000、约10000、约11000、约12000、约
13000、约14000、约15000、约16000、约17000、约18000、约19000或约20000的倍率。如上所述，可以制作稀释系列来实施。

[0097] 例如，在线虫对来源于特定对象的尿的以第一规定倍率稀释后的样品显示出引诱行为的情况下，可以表明该对象具有或可能具有非肾癌。另外，例如，在线虫对来源于特定对象的尿的以第二规定倍率稀释后的样品显示出引诱行为的情况下，可以表明该对象具有或可能具有肾癌。例如，在线虫对来源于特定对象的尿的以第一规定倍率稀释后的样品显示出引诱行为、并且线虫对以第二规定倍率稀释后的样品显示出回避行为的情况下，可以表明该对象具有或可能具有非肾癌。例如，在线虫对来源于特定对象的尿的以第二规定倍率稀释后的样品显示出引诱行为、并且线虫对以第一规定倍率稀释后的样品显示出回避行为的情况下，可以表明该对象具有或可能具有肾癌。对象、稀释溶剂、趋性行为的评价方法、癌的检测方法与上述同样。

[0098] 根据本发明，提供一种包含线虫的、肾癌的诊断试剂盒，其在肾癌的诊断方法中使用，所述诊断方法包含将由对象得到的尿样稀释至规定倍率的步骤和评价线虫对稀释后的尿样是否显示引诱行为的步骤，上述规定倍率为200以上(或者300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上或1000以上)的倍率。对象、稀释溶剂、趋性行为的评价方法、癌的检测方法与上述同样。另外，规定倍率可以与上述[1]的规定倍率或上述第二规定倍率同样地设定。

[0099] 根据本发明，提供一种包含线虫的、肾癌的诊断试剂盒，其在本发明的肾癌的检测方法中使用。对象、稀释溶剂、趋性行为的评价方法、癌的检测方法与上述同样。

[0100] 根据本发明，提供由对象得到的尿样用于在对象中检测肾癌的应用，其中，该应用包括将上述尿样稀释至规定倍率的步骤和评价线虫对稀释后的尿样是否显示引诱行为的步骤，上述规定倍率为200以上(或者300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上或1000以上)的倍率。对象、稀释溶剂、趋性行为的评价方法、癌的检测方法与上述同样。另外，规定倍率可以与上述[1]的规定倍率或上述第二规定倍率同样地设定。

[0101] 根据本发明，提供一种在线虫对由对象得到的尿样的趋性行为的评价系统中提高肾癌的检测灵敏度或特异度的方法，其中，包括将由上述对象得到的尿样稀释至200倍以上(或者300倍以上、400倍以上、500倍以上、600倍以上、700倍以上、800倍以上、900倍以上或1000倍以上)的步骤。对象、稀释溶剂、趋性行为的评价方法、癌的检测方法与上述同样。另外，稀释倍率可以与上述[1]的规定倍率或上述第二规定倍率同样地设定。

[0102] 另外，本发明中，提供一种线虫对由对象得到的尿样的趋性行为的评价系统，其包含由疑似为肾癌的对象或肾癌患者得到的稀释尿样和线虫，所述稀释尿样的稀释倍率为200以上(或者300以上、400以上、500以上、600以上、700以上、800以上、900以上或1000以上)的倍率。对象、稀释溶剂、趋性行为的评价方法、癌的检测方法与上述同样。另外，稀释倍率可以与上述[1]的规定倍率或上述第二规定倍率同样地设定。

[0103] 本说明书中，“检测癌的方法”可以进一步包括通过适当的癌疗法对癌进行治疗的步骤。因此，根据本发明，提供一种治疗肾癌的方法，其包括利用本发明的检测方法检测肾癌的步骤、和在检测到肾癌的对象中治疗肾癌的步骤。肾癌的治疗可以通过适合于肾癌的癌疗法(例如，针对肾癌的抗癌剂的给药、放射疗法、免疫疗法或外科切除)来进行。

[0104] 以下，通过实施例对本发明进行说明，但实施例为例示，并不作为限定发明范围的示例来进行解释。

[0105] [实施例]

[0106] 实施例1：具有肾癌或肾病的患者的使用线虫的尿检查

[0107] 对于肾病患者而言，尿的量少，另外，尿有时存在异常。另外，由于肾病而接受透析的患者中，癌的发病率增高。本实施例中，尝试了进行基于线虫的嗅觉的癌的检测、与肾病的鉴别诊断。

[0108] 首先，从19名肾病患者(其中，肾癌患者10名、透析患者2名和嗜酸性腺瘤1名)得到尿样本。肾癌患者均是由医生诊断为肾癌的患者，样本的肿瘤尺寸均在TNM分期中为pT1a(原发肿瘤中为4cm以下)，为I期的肾癌。患者的详细情况如下述表3所示。

[0109] 表3：被测患者的CDK分期和肿瘤尺寸

[0110] CDK 1期、肿瘤尺寸pT1：2例

[0111] CDK 2期、肿瘤尺寸pT1：3例

[0112] CDK 3a期、肿瘤尺寸pT1：3例

[0113] CDK 3b期、肿瘤尺寸pT1：1例

[0114] CDK 3b期、嗜酸性腺瘤：1例

[0115] CDK 3b期、未检测到肿瘤：1例

[0116] CDK 4期、肿瘤尺寸pT1：1例

[0117] CDK 4期、未检测到肿瘤：2例

[0118] CDK 5期、未检测到肿瘤：3例

[0119] 透析患者、未检测到肿瘤：2例

[0120] 如图1所示，将尿样用灭菌水稀释至100倍，涂布到表面平坦的琼脂平板10上的边缘部11，将线虫涂布到上述琼脂平板的中央部12，观察线虫对尿样是显示引诱行为还是显示回避行为。关于线虫是显示出引诱行为还是显示出回避行为，利用下述趋性指数进行评价。

[0121] 趋性指数

[0122] (趋性指数)＝{(区域13的线虫个体数)-(区域14的线虫个体数)}/全部线虫个体数

[0123] (式中，区域13是用双点划线将琼脂平板10分为3个区域时尿样侧的区域，区域14是上述3个区域中的远离尿样的区域。)

[0124] 结果如图2A和2B所示。

[0125] 如图2A所示，稀释100倍的尿样中，线虫对来自几个癌患者的尿显示出引诱行为，能够检测癌。另一方面，线虫对来自仅有肾病的患者的尿均显示出回避行为。另一方面，如图2B所示，稀释10倍的尿样中，线虫只不过对来自几个癌患者的尿显示出弱的引诱行为。如图2A所示，在稀释100倍的尿样中，明显存在无法对线虫诱发引诱行为的样品。

[0126] 接着，将尿样的稀释倍率进行各种改变，进行与上述同样的尿检查。图3A和3B中示出利用稀释1000倍后的尿和稀释10000倍后的尿得到的尿检查结果。

[0127] 如图3A所示，使用稀释1000倍后的尿的尿检查中，线虫对来自多数癌患者的尿样显示出引诱行为。如图3B所示，使用稀释10000倍后的尿的尿检查中，线虫对来自更多的癌患者的尿样显示出引诱行为。如图3B所示，使用稀释10000倍后的尿的尿检查中，能够在多个样品中稳定地较强地检测出引诱行为。另外，如图3A和3B所示，在多个样品中也能够稳定地较强地检测出对来自肾病患者的尿的回避行为。

[0128] 另外，根据表3，包含了多种慢性肾病(CKD)分期的患者作为本次检查的对象，但如图3A和3B所示，没有观察到肾癌的诊断受到检查对象的CKD分期的影响的情况。需要说明的是，图3B中，从左起第4个样品来源于CDK 2期的患者，从左起第10个样品来源于CDK 3b期的患者。

[0129] 通过本实施例可知，通过增加稀释倍率(即，通过使尿样变稀)，癌的检测灵敏度和特异度提高。另外还可知，在该稀释倍率的条件下，对于肾病患者的尿，在多个样品中稳定地较强地显示出回避行为。可见，在使用线虫的趋性行为的癌的评价系统中，通过高倍率的稀释，能够以高灵敏度和高特异度检测出肾癌患者。另外，在使用线虫的趋性行为的癌的评价系统中，能够将肾癌患者(例如No.18)与肾病患者鉴别开。另外，嗜酸性腺瘤(No.9)在本发明的评价系统中也可以与癌鉴别开。

[0130] 另外已知，透析患者相对于非透析患者，癌的发病率高。由本次结果启示，能够在透析患者的癌发病的监测中利用使用线虫的尿检查。另外，能够对pT1a或I期的肾癌进行诊断，因此可知，本发明的方法对肾癌的早期诊断有用。特别是，存在透析患者中癌的诱发率高这样的报道，开拓了在这样的透析患者中利用尿检查进行肾癌的早期诊断的道路。

[0131] 对于线虫而言，在气味过强时，有时对引诱物质显示回避行为(例如，参考Yoshida et al.,Nature Communication,2012和Taniguchi et al.,Science Signaling,2014)。作为可能性，考虑到肾癌患者的尿中来源于癌的成分的浓度高、在低稀释倍率下容易引起回避行为的可能性。另外考察到，在与通常(10～100倍稀释)相比为高稀释倍率(例如1000倍～10000倍)时，能够良好地进行检测。

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