热词 | 培养 cgmcc1 农药 丙烯 沉积物 发酵 丙烯酸钠 生物 球菌 光引发剂 | ||
专利类型 | 发明公开 | 法律事件 | 公开; 实质审查; 撤回; |
专利有效性 | 无效专利 | 当前状态 | 撤回 |
申请号 | CN202011102299.3 | 申请日 | 2020-10-15 |
公开(公告)号 | CN112219843A | 公开(公告)日 | 2021-01-15 |
申请人 | 徐牛盅; | 申请人类型 | 其他 |
发明人 | 不公告发明人; | 第一发明人 | 不公告发明人 |
权利人 | 徐牛盅 | 权利人类型 | 其他 |
当前权利人 | 徐牛盅 | 当前权利人类型 | 其他 |
省份 | 当前专利权人所在省份:江西省 | 城市 | 当前专利权人所在城市:江西省南昌市 |
具体地址 | 当前专利权人所在详细地址:江西省南昌市南昌县蒋巷镇养鱼场68号 | 邮编 | 当前专利权人邮编:330224 |
主IPC国际分类 | A01N25/10 | 所有IPC国际分类 | A01N25/10 ; A01N63/20 ; A01N65/00 ; A01N43/50 ; A01P3/00 |
专利引用数量 | 0 | 专利被引用数量 | 0 |
专利权利要求数量 | 9 | 专利文献类型 | A |
专利代理机构 | 专利代理人 | ||
摘要 | 本 发明 涉及 沉积物 副球菌CGMCC1.12681在制备 生物 农药 中的应用,首次将沉积物副球菌(Paracoccus sediminis)CGMCC1.12681制成 生物农药 ,其可有效抑制致病菌的生长繁殖,促进 植物 生长。其中的有效成分沉积物副球菌CGMCC1.12681,一方面与致病菌具有竞争作用,另一方面产生抑制致病菌的代谢产物,实现微生态调控,有效防治病害,促进植物生长。 | ||
权利要求 | 1.沉积物副球菌CGMCC1.12681在制备生物农药中的应用。 |
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说明书全文 | 沉积物副球菌CGMCC1.12681在制备生物农药中的应用技术领域背景技术[0002] 植物病害是威胁农作物生产的自然灾害之一,生产上超过80%的植物病害是由真菌侵染引起的,这种病害严重发生时,可造成农作物大幅度减产和品质的严重下降,甚至引起人畜中毒,严重影响国民经济和人民的生活。 [0003] 化学农药给生态造成很大破坏,化学农药不易降解,存在农药残留问题,严重威胁着人们的健康。农产品和土壤中的农药残留量越来越高,使农产品质量严重下降;有益生物的密度下降,自然群落遭到了严重破坏;病原菌和害虫的抗药性普遍提高,导致化学农药的超量使用,提高了农产品的生产成本,并加剧了对环境的破坏,形成了恶性循环。 [0004] 随着生活水平的提高和环保意识的增强,人们越来越重视食品安全问题,生物农药因其不污染环境、对人和动植物安全、选择性强、病原菌和害虫难以产生耐药性等诸多优点受到各国的高度重视,是今后农药发展的主要方向。 [0005] 生物农药与化学农药相比,其有效成分来源,工业化生产途径,产品的杀虫防病机理和作用方式等诸多方面,有着许多本质的区别。生物农药更适合于扩大在未来有害生物综合治理策略中的应用比重。概括起来生物农药主要具有以下几方面的优点。 [0006] 1、选择性强,对人畜安全 [0007] 市场开发并大范围应用成功的生物农药产品,它们只对病虫害有作用,一般对人、畜及各种有益生物(包括动物天敌、昆虫天敌、蜜蜂、传粉昆虫及鱼、虾等水生生物)比较安全,对非靶标生物的影响也比较小。 [0008] 2、对生态环境影响小 [0009] 生物农药控制有害生物的作用,主要是利用某些特殊微生物或微生物的代谢产物所具有的杀虫、防病、促生功能。其有效活性成分完全存在和来源于自然生态系统,它的最大特点是极易被日光、植物或各种土壤微生物分解,是一种来于自然,归于自然正常的物质循环方式。因此,可以认为它们对自然生态环境安全、无污染。 [0010] 3、诱发害虫患病 [0011] 一些生物农药品种(昆虫病原真菌、昆虫病毒、昆虫微孢子虫、昆虫病原线虫等),具有在害虫群体中的水平或经卵垂直传播能力,在野外一定的条件之下,具有定殖、扩散和发展流行的能力。不但可以对当年当代的有害生物发挥控制作用,而且对后代或者翌年的有害生物种群起到一定的抑制,具有明显的后效作用。 [0012] 但是市场上现有的生物农药通常只对特定害虫或病菌等起作用,对温湿度要求较高,微生物源农药使用的适宜温度在15~30℃;对紫外线敏感,紫外线对微生物源农药有致命的杀伤作用;药效较慢,用药后病虫害不会立即见效,施药时间应较化学农药提前2~3天等。 发明内容[0013] 有鉴于此,本发明的目的在于提供沉积物副球菌CGMCC1.12681在制备生物农药中的应用。 [0014] 为达到上述目的,本发明提供如下技术方案: [0015] 1、沉积物副球菌(Paracoccus sediminis)CGMCC1.12681在制备生物农药中的应用,其中,沉积物副球菌CGMCC1.12681是由浙江大学于2013年9月4日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。 [0016] 优选的,所述生物农药可用于防治水稻稻瘟病、苹果轮纹病或小麦赤霉病。 [0017] 2、一种生物农药,其有效成分为沉积物副球菌(Paracoccus sediminis)CGMCC1.12681。 [0018] 3、上述一种生物农药的制备方法,具体步骤如下: [0021] (3)接着向预混液中加入交联剂和光引发剂混合均匀,紫外照射反应,过滤,洗涤,干燥,得到干凝胶; [0022] (4)最后将干凝胶加入1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中,静置2~3小时,过滤,即得所述生物农药。 [0023] 优选的,步骤(1)的具体方法为:先将沉积物副球菌CGMCC1.12681接种于PDA培养基中,接种量为3~4%(体积),培养4~6天后,分别于200~220r/min摇床培养,培养条件为:培养温度为27~29℃,培养时间为40~45小时,得到发酵液。 [0024] 进一步优选,以重量份计,所述PDA培养基包括:土豆195~200份、葡萄糖10~12份、琼脂18~20份,Na2HPO4 4~6份和1000份去离子水,pH为7.0~7.6。 [0025] 优选的,步骤(1)中,后处理的具体方法为:先利用磷酸氢二钠和氯化钙絮凝发酵液,两者的加入量分别为发酵液质量的1~2%和0.5~0.8%;然后采用板框压滤,接着45~50℃干燥至含水量20~30%,旋风分离后利用粉碎机粉碎,过30目筛,即得所述菌粉。 [0026] 优选的,步骤(2)中,粉末、菌粉、丙烯酰胺、丙烯酸钠和水的质量比为1:0.2~0.3:4~5:25~35:60~80。 [0027] 优选的,步骤(3)中,所述交联剂和光引发剂的用量分别为预混液重量的0.3~0.5%、0.1~0.2%;其中,所述交联剂为N,N’-亚甲基双丙烯酰胺,光引发剂为安息香二甲醚,安息香二甲醚是溶解于N-甲基吡咯烷酮中配制成质量浓度2.5%的溶液使用。 [0028] 优选的,步骤(3)中,紫外照射反应的工艺条件为:波长365nm、功率400W的紫外光辐照反应5~7小时。 [0029] 优选的,步骤(3)中,利用去离子水洗涤3~5次,以清洗残留的反应试剂(丙烯酸钠等)。 [0031] 优选的,步骤(4)中,1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的用量为干凝胶重量的3~4倍。 [0032] 本发明的有益效果在于: [0033] 本发明首次将沉积物副球菌(Paracoccus sediminis)CGMCC1.12681制成生物农药,其可用于防治水稻稻瘟病、苹果轮纹病或小麦赤霉病等,促进植物生长。 [0034] 在制备该生物农药时,先将沉积物副球菌CGMCC1.12681进行接种培养得到发酵液,后处理,制成菌粉;然后将废弃猴头菇菌棒粉碎成100~200目的粉末,接着将粉末、步骤(1)所得菌粉、丙烯酰胺和丙烯酸钠加入水中,得到预混液;接着向预混液中加入交联剂和光引发剂混合均匀,紫外照射反应制成干凝胶;最后将干凝胶加入1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中,静置浸渍,过滤即得。其中的有效成分沉积物副球菌CGMCC1.12681,一方面与致病菌具有竞争作用,另一方面产生抑制致病菌的代谢产物,实现微生态调控,有效防治病害,促进生长。 [0035] 本发明实现了废弃猴头菇菌棒循环利用,废弃猴头菇菌棒中多孔隙,且残留部分营养物质,有利于植物生长,最重要的是,残留少量具有杀菌作用的氨基酸、多糖,可以对多种致病菌起到杀灭作用。 [0036] 本发明除了有效成分沉积物副球菌CGMCC1.12681,还引入了载体部分,先通过丙烯酰胺、丙烯酸钠的交联反应形成凝胶结构,在凝胶形成的过程中,将粉末、菌粉包裹其中,经一系列处理制成干凝胶,再将干凝胶利用1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐进行浸渍处理,使得干凝胶表面分布有阴阳离子,进而对致病菌表面的正负电荷进行调整,破坏细胞膜,实现对致病菌的杀灭作用。 具体实施方式[0037] 下面将对本发明的优选实施例进行详细的描述。 [0038] 实施例1: [0039] 一种生物农药的制备方法,具体步骤如下: [0040] (1)先将沉积物副球菌CGMCC1.12681进行接种培养得到发酵液,后处理,制成菌粉; [0041] (2)然后将废弃猴头菇菌棒粉碎成100目的粉末,接着将粉末、步骤(1)所得菌粉、丙烯酰胺和丙烯酸钠加入水中,超声波振荡均匀,得到预混液; [0042] (3)接着向预混液中加入交联剂和光引发剂混合均匀,紫外照射反应,过滤,洗涤,干燥,得到干凝胶; [0043] (4)最后将干凝胶加入1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中,静置3小时,过滤,即得所述生物农药。 [0044] 步骤(1)的具体方法为:先将沉积物副球菌CGMCC1.12681接种于PDA培养基中,接种量为3%(体积),培养6天后,分别于200r/min摇床培养,培养条件为:培养温度为29℃,培养时间为40小时,得到发酵液。 [0045] 所述PDA培养基包括:土豆200g、葡萄糖10g、琼脂20g,Na2HPO4 4g和1000g去离子水,pH为7.6。 [0046] 步骤(1)中,后处理的具体方法为:先利用磷酸氢二钠和氯化钙絮凝发酵液,两者的加入量分别为发酵液质量的1%和0.8%;然后采用板框压滤,接着45℃干燥至含水量30%,旋风分离后利用粉碎机粉碎,过30目筛,即得所述菌粉。 [0047] 步骤(2)中,粉末、菌粉、丙烯酰胺、丙烯酸钠和水的质量比为1:0.2:5:25:80。 [0048] 步骤(3)中,所述交联剂和光引发剂的用量分别为预混液重量的0.3%、0.2%;其中,所述交联剂为N,N’-亚甲基双丙烯酰胺,光引发剂为安息香二甲醚,安息香二甲醚是溶解于N-甲基吡咯烷酮中配制成质量浓度2.5%的溶液使用。 [0049] 步骤(3)中,紫外照射反应的工艺条件为:波长365nm、功率400W的紫外光辐照反应5小时。 [0050] 步骤(3)中,利用去离子水洗涤5次,以清洗残留的反应试剂(丙烯酸钠等)。 [0051] 步骤(3)中,采用二氧化碳超临界流体干燥,具体工艺条件为:压力6MPa,温度50℃,时间8小时。 [0052] 步骤(4)中,1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的用量为干凝胶重量的4倍。 [0053] 实施例2: [0054] 一种生物农药的制备方法,具体步骤如下: [0055] (1)先将沉积物副球菌CGMCC1.12681进行接种培养得到发酵液,后处理,制成菌粉; [0056] (2)然后将废弃猴头菇菌棒粉碎成200目的粉末,接着将粉末、步骤(1)所得菌粉、丙烯酰胺和丙烯酸钠加入水中,超声波振荡均匀,得到预混液; [0057] (3)接着向预混液中加入交联剂和光引发剂混合均匀,紫外照射反应,过滤,洗涤,干燥,得到干凝胶; [0058] (4)最后将干凝胶加入1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中,静置2小时,过滤,即得所述生物农药。 [0059] 步骤(1)的具体方法为:先将沉积物副球菌CGMCC1.12681接种于PDA培养基中,接种量为4%(体积),培养4天后,分别于220r/min摇床培养,培养条件为:培养温度为27℃,培养时间为45小时,得到发酵液。 [0060] 所述PDA培养基包括:土豆195g、葡萄糖12g、琼脂18g,Na2HPO4 6g和1000g去离子水,pH为7.0。 [0061] 步骤(1)中,后处理的具体方法为:先利用磷酸氢二钠和氯化钙絮凝发酵液,两者的加入量分别为发酵液质量的2%和0.5%;然后采用板框压滤,接着50℃干燥至含水量20%,旋风分离后利用粉碎机粉碎,过30目筛,即得所述菌粉。 [0062] 步骤(2)中,粉末、菌粉、丙烯酰胺、丙烯酸钠和水的质量比为1:0.3:4:35:60。 [0063] 步骤(3)中,所述交联剂和光引发剂的用量分别为预混液重量的0.5%、0.1%;其中,所述交联剂为N,N’-亚甲基双丙烯酰胺,光引发剂为安息香二甲醚,安息香二甲醚是溶解于N-甲基吡咯烷酮中配制成质量浓度2.5%的溶液使用。 [0064] 步骤(3)中,紫外照射反应的工艺条件为:波长365nm、功率400W的紫外光辐照反应7小时。 [0065] 步骤(3)中,利用去离子水洗涤3次,以清洗残留的反应试剂(丙烯酸钠等)。 [0066] 步骤(3)中,采用二氧化碳超临界流体干燥,具体工艺条件为:压力8MPa,温度45℃,时间10小时。 [0067] 步骤(4)中,1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的用量为干凝胶重量的3倍。 [0068] 实施例3: [0069] 一种生物农药的制备方法,具体步骤如下: [0070] (1)先将沉积物副球菌CGMCC1.12681进行接种培养得到发酵液,后处理,制成菌粉; [0071] (2)然后将废弃猴头菇菌棒粉碎成200目的粉末,接着将粉末、步骤(1)所得菌粉、丙烯酰胺和丙烯酸钠加入水中,超声波振荡均匀,得到预混液; [0072] (3)接着向预混液中加入交联剂和光引发剂混合均匀,紫外照射反应,过滤,洗涤,干燥,得到干凝胶; [0073] (4)最后将干凝胶加入1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中,静置2小时,过滤,即得所述生物农药。 [0074] 步骤(1)的具体方法为:先将沉积物副球菌CGMCC1.12681接种于PDA培养基中,接种量为3.5%(体积),培养5天后,分别于210r/min摇床培养,培养条件为:培养温度为28℃,培养时间为42小时,得到发酵液。 [0075] 所述PDA培养基包括:土豆198g、葡萄糖11g、琼脂19g,Na2HPO4 5g和1000g去离子水,pH为7.3。 [0076] 步骤(1)中,后处理的具体方法为:先利用磷酸氢二钠和氯化钙絮凝发酵液,两者的加入量分别为发酵液质量的1.5%和0.6%;然后采用板框压滤,接着48℃干燥至含水量25%,旋风分离后利用粉碎机粉碎,过30目筛,即得所述菌粉。 [0077] 步骤(2)中,粉末、菌粉、丙烯酰胺、丙烯酸钠和水的质量比为1:0.25:4.5:30:70。 [0078] 步骤(3)中,所述交联剂和光引发剂的用量分别为预混液重量的0.4%、0.15%;其中,所述交联剂为N,N’-亚甲基双丙烯酰胺,光引发剂为安息香二甲醚,安息香二甲醚是溶解于N-甲基吡咯烷酮中配制成质量浓度2.5%的溶液使用。 [0079] 步骤(3)中,紫外照射反应的工艺条件为:波长365nm、功率400W的紫外光辐照反应6小时。 [0080] 步骤(3)中,利用去离子水洗涤4次,以清洗残留的反应试剂(丙烯酸钠等)。 [0081] 步骤(3)中,采用二氧化碳超临界流体干燥,具体工艺条件为:压力7MPa,温度48℃,时间9小时。 [0082] 步骤(4)中,1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的用量为干凝胶重量的3.5倍。 [0083] 对比例1 [0084] 一种生物农药的制备方法,具体步骤如下: [0085] (1)先将沉积物泛养副球菌ATCC35512(购自上海沪峥生物科技有限公司)进行接种培养得到发酵液,后处理,制成菌粉; [0086] (2)然后将废弃猴头菇菌棒粉碎成100目的粉末,接着将粉末、步骤(1)所得菌粉、丙烯酰胺和丙烯酸钠加入水中,超声波振荡均匀,得到预混液; [0087] (3)接着向预混液中加入交联剂和光引发剂混合均匀,紫外照射反应,过滤,洗涤,干燥,得到干凝胶; [0088] (4)最后将干凝胶加入1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中,静置3小时,过滤,即得所述生物农药。 [0089] 步骤(1)的具体方法为:先将泛养副球菌ATCC35512接种于PDA培养基中,接种量为3%(体积),培养6天后,分别于200r/min摇床培养,培养条件为:培养温度为29℃,培养时间为40小时,得到发酵液。 [0090] 所述PDA培养基包括:土豆200g、葡萄糖10g、琼脂20g,Na2HPO4 4g和1000g去离子水,pH为7.6。 [0091] 步骤(1)中,后处理的具体方法为:先利用磷酸氢二钠和氯化钙絮凝发酵液,两者的加入量分别为发酵液质量的1%和0.8%;然后采用板框压滤,接着45℃干燥至含水量30%,旋风分离后利用粉碎机粉碎,过30目筛,即得所述菌粉。 [0092] 步骤(2)中,粉末、菌粉、丙烯酰胺、丙烯酸钠和水的质量比为1:0.2:5:25:80。 [0093] 步骤(3)中,所述交联剂和光引发剂的用量分别为预混液重量的0.3%、0.2%;其中,所述交联剂为N,N’-亚甲基双丙烯酰胺,光引发剂为安息香二甲醚,安息香二甲醚是溶解于N-甲基吡咯烷酮中配制成质量浓度2.5%的溶液使用。 [0094] 步骤(3)中,紫外照射反应的工艺条件为:波长365nm、功率400W的紫外光辐照反应5小时。 [0095] 步骤(3)中,利用去离子水洗涤5次,以清洗残留的反应试剂(丙烯酸钠等)。 [0096] 步骤(3)中,采用二氧化碳超临界流体干燥,具体工艺条件为:压力6MPa,温度50℃,时间8小时。 [0097] 步骤(4)中,1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的用量为干凝胶重量的4倍。 [0098] 对比例2 [0099] 一种生物农药的制备方法,具体步骤如下: [0100] (1)先将沉积物副球菌CGMCC1.12681进行接种培养得到发酵液,后处理,制成菌粉; [0101] (2)然后将步骤(1)所得菌粉、丙烯酰胺和丙烯酸钠加入水中,超声波振荡均匀,得到预混液; [0102] (3)接着向预混液中加入交联剂和光引发剂混合均匀,紫外照射反应,过滤,洗涤,干燥,得到干凝胶; [0103] (4)最后将干凝胶加入1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中,静置3小时,过滤,即得所述生物农药。 [0104] 步骤(1)的具体方法为:先将沉积物副球菌CGMCC1.12681接种于PDA培养基中,接种量为3%(体积),培养6天后,分别于200r/min摇床培养,培养条件为:培养温度为29℃,培养时间为40小时,得到发酵液。 [0105] 所述PDA培养基包括:土豆200g、葡萄糖10g、琼脂20g,Na2HPO4 4g和1000g去离子水,pH为7.6。 [0106] 步骤(1)中,后处理的具体方法为:先利用磷酸氢二钠和氯化钙絮凝发酵液,两者的加入量分别为发酵液质量的1%和0.8%;然后采用板框压滤,接着45℃干燥至含水量30%,旋风分离后利用粉碎机粉碎,过30目筛,即得所述菌粉。 [0107] 步骤(2)中,菌粉、丙烯酰胺、丙烯酸钠和水的质量比为0.2:5:25:80。 [0108] 步骤(3)中,所述交联剂和光引发剂的用量分别为预混液重量的0.3%、0.2%;其中,所述交联剂为N,N’-亚甲基双丙烯酰胺,光引发剂为安息香二甲醚,安息香二甲醚是溶解于N-甲基吡咯烷酮中配制成质量浓度2.5%的溶液使用。 [0109] 步骤(3)中,紫外照射反应的工艺条件为:波长365nm、功率400W的紫外光辐照反应5小时。 [0110] 步骤(3)中,利用去离子水洗涤5次,以清洗残留的反应试剂(丙烯酸钠等)。 [0111] 步骤(3)中,采用二氧化碳超临界流体干燥,具体工艺条件为:压力6MPa,温度50℃,时间8小时。 [0112] 步骤(4)中,1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的用量为干凝胶重量的4倍。 [0113] 对比例3 [0114] 一种生物农药的制备方法,具体步骤如下: [0115] (1)先将沉积物副球菌CGMCC1.12681进行接种培养得到发酵液,后处理,制成菌粉; [0116] (2)然后将废弃猴头菇菌棒粉碎成100目的粉末,接着将粉末、步骤(1)所得菌粉、丙烯酰胺和丙烯酸钠加入水中,超声波振荡均匀,得到预混液; [0117] (3)接着向预混液中加入交联剂和光引发剂混合均匀,紫外照射反应,过滤,洗涤,干燥,得到干凝胶,即得所述生物农药。 [0118] 步骤(1)的具体方法为:先将沉积物副球菌CGMCC1.12681接种于PDA培养基中,接种量为3%(体积),培养6天后,分别于200r/min摇床培养,培养条件为:培养温度为29℃,培养时间为40小时,得到发酵液。 [0119] 所述PDA培养基包括:土豆200g、葡萄糖10g、琼脂20g,Na2HPO4 4g和1000g去离子水,pH为7.6。 [0120] 步骤(1)中,后处理的具体方法为:先利用磷酸氢二钠和氯化钙絮凝发酵液,两者的加入量分别为发酵液质量的1%和0.8%;然后采用板框压滤,接着45℃干燥至含水量30%,旋风分离后利用粉碎机粉碎,过30目筛,即得所述菌粉。 [0121] 步骤(2)中,粉末、菌粉、丙烯酰胺、丙烯酸钠和水的质量比为1:0.2:5:25:80。 [0122] 步骤(3)中,所述交联剂和光引发剂的用量分别为预混液重量的0.3%、0.2%;其中,所述交联剂为N,N’-亚甲基双丙烯酰胺,光引发剂为安息香二甲醚,安息香二甲醚是溶解于N-甲基吡咯烷酮中配制成质量浓度2.5%的溶液使用。 [0123] 步骤(3)中,紫外照射反应的工艺条件为:波长365nm、功率400W的紫外光辐照反应5小时。 [0124] 步骤(3)中,利用去离子水洗涤5次,以清洗残留的反应试剂(丙烯酸钠等)。 [0125] 步骤(3)中,采用二氧化碳超临界流体干燥,具体工艺条件为:压力6MPa,温度50℃,时间8小时。 [0126] 试验例 [0127] 1、本发明沉积物副球菌CGMCC1.12681发酵液的活性检测,其具有广泛的抑菌谱,用管碟法检测其抑菌活性。 [0128] 供试菌株来源:水稻稻瘟病菌,购自上海谷研实业有限公司;苹果轮纹病菌,购自宁波明舟生物科技有限公司;小麦赤霉病菌,购自北纳生物。 [0129] 采用管碟法测定抑菌直径:牛津杯(直径为7mm)内加入发酵上清液300μL,以抑菌圈直径表示抑菌活性的大小,结果见表1。 [0130] 其中,发酵上清液的制备方法如下:先将沉积物副球菌CGMCC1.12681接种于PDA培养基中,接种量为3%(体积),培养6天后,分别于200r/min摇床培养,培养条件为:培养温度为29℃,培养时间为40小时,离心,得到发酵上清液;所述PDA培养基包括:土豆200g、葡萄糖10g、琼脂20g,Na2HPO4 4g和1000g去离子水,pH为7.6。 [0131] 表1.抑菌圈直径比较 [0132] 抑菌圈直径(mm) 水稻稻瘟病菌 28.32 苹果轮纹病菌 31.51 小麦赤霉病菌 29.99 [0133] 由表1可知,沉积物副球菌CGMCC1.12681具有广泛的抑菌谱,对水稻稻瘟病菌、苹果轮纹病菌、小麦赤霉病菌等具有较强抑制作用。 [0134] 2、苹果轮纹病防治实例 [0135] 时间:2019年4月中旬 [0136] 地点:山东省烟台市牟平区观水镇 [0137] 试验品种:红富士,树龄8年 [0138] 随机选取2018年轮纹病发病果树140株,随机分为7组,其中一组作为对照组,不进行任何处理,剩余6组作为处理组,分别利用实施例1~3或对比例1~3所得生物农药进行处理,处理方法为:在4月份果树开花期,将生物农药加入100倍重量的水中,搅拌混匀,然后涂抹于树干粗皮表面,涂抹量为0.4mL/cm2。苹果成熟后统计采收期病果率(表面有病斑),以及防治效果,并选择好果(表面无病斑)常温贮藏15天,统计15天后病果率(表面有病斑),以及防治效果,结果见表2。 [0139] 病果率=病果/果实总数×100%; [0140] 防治效果=(对照组病果率-处理组病果率)/对照组病果率×100%。 [0141] 表2.防治效果比较 [0142] [0143] 由表2可知,与对照组相比,实施例1~3所得生物农药在采收期和贮藏期的防治效果均为100%,株产量高。 [0144] 对比例1将沉积物副球菌CGMCC1.12681替换为泛养副球菌ATCC35512(购自上海沪峥生物科技有限公司),虽然二者同属于副球菌,但是替换之后对苹果轮纹病防治效果明显变差,说明本发明的菌株对苹果轮纹病具有更好的防治效果。 [0145] 对比例2在步骤(2)中略去废弃猴头菇菌棒,防治效果略差,说明废弃猴头菇菌棒有利于苹果轮纹病防治。 [0146] 对比例3略去步骤(4),没有表面电荷调整,也不利于苹果轮纹病防治。 [0147] 最后说明的是,以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述,但本领域技术人员应当理解,可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变,而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。 |